%LP; 5wt % SCN; 30wt % 葡萄糖
[0355] -LPS2:0 · 75wt %G0D; I · 25wt % LP; I · 7wt % SCN; 20wt % 葡萄糖
[0356] -LPS3:1.7wt%G0D;0.04wt%LP; 1.7wt%SCN;0wt%葡萄糖
[0357] 在7°C下8小时以后，在55°C下巴氏杀菌全液体蛋I分钟、3分钟、和5分钟，并在冰水 中冷却。在热处理之后立即分析样品。
[0358] -LPSl :0ppm(=对照）、300ppm
[0359] -1^52:(^111(=对照）、30(^口111
[0360] -LPS3:0ppm(=对照）、300ppm [0361 ]-全液体蛋
[0362] -首先存储8小时/7°C，然后巴氏杀菌:55°C，1分钟、3分钟、5分钟
[0363] -肠炎沙门氏菌(LMG 10395)和鼠伤寒沙门氏菌(LMG 10396)
[0364] 莖里
[0365] 表23和图13总结了，对于不同的测试条件，乳酸菌的细胞计数(对数cfu/ml)。结果 表明，在其中添加 LPS的蛋样品中，相比于在没有LPS的蛋样品中，沙门氏菌属的抑制是更有 效的。
[0366] 表23:在7°C下存储8小时，然后在55°C下巴氏杀菌的全液体蛋中，LPS对沙门氏菌 属的细胞计数(对数cfu/ml)的影响。
[0368] 结果说明，当在巴氏杀菌以前施加时，在液体全蛋中，LPS会增加沙门氏菌属的热 失活。当相比于在相同温度下的更短的巴氏杀菌时间时，借助于LPSl和在55°C下巴氏杀菌5 分钟以后，效应是最显着的。
[0369] 实施例11:在鱼糜色拉中LPS的抗微生物活性 [0370] 实验设计
[0371] 将自制鱼糜色拉分为更小的部分并以1000Cfu/g的接种水平接种有乳酸菌的混合 物。以不同浓度((^口111、15(^口111、30(^口111)将1^3加入鱼糜色拉并在7°(3下和在空气条件下将鱼 糜色拉储存6周。在第0天、第1周、第2周、第3周、第4周、第5周和第6周分析样品。
[0372] -LPS:0ppm(=对照）、150ppm、300ppm
[0373] -自制鱼糜色拉
[0374] -乳酸菌:植物乳杆菌(FF595，分离自鲑鱼色拉）
[0375] 短乳杆菌(FF662,分离自肉色拉）
[0376] 乳酸乳球菌乳亚种2 (FF649,分离自蛋-韭菜色拉）
[0377] -7°C(6 周）
[0378] 莖里
[0379] 表24-26和图14-16分别总结了，对于不同的测试条件，总有氧嗜冷（在22°C下培 养)细胞计数（log cfu/g)，总厌氧嗜冷(在22°C下培养)细胞计数（log cfu/g)以及乳酸菌 (在22°C下培养）的细胞计数(log cfu/g)。结果表明，在对照(Oppm)中的生长立即开始并在 5周以后达到大约71og cfu/g。在具有150ppm LPS的样品中，观测到更为有限的细菌的生长 (大约4.51og cfu/g)，而在具有300ppm LPS的样品中则观测到在储存期间细菌的失活。 [0380]表24:在储存在7°C下的接种有乳酸菌的鱼糜色拉中，LPS对总有氧嗜冷细胞计数 (log cfu/ml;在22°C下培养)的影响。
[0382]表25:在储存在7°C下的接种有乳酸菌的鱼糜色拉中，LPS对总厌氧嗜冷细胞计数 (log cfu/ml;在22°C下培养)的影响。
[0384]表26:在储存在7°C下的接种有乳酸菌的鱼糜色拉中，LPS对乳酸菌（在22°C下培 养）的细胞计数（log cfu/ml)的影响。
[0386] 结果清楚地表明，在基于调味汁的色拉中，LPS抑制乳酸菌的生长的潜力。150ppm 的LPS预防乳酸菌的向外生长，而300ppm的LPS则甚至抑制在7°C下储存期间的乳酸菌。
[0387] 实施例12:对有和没有LPS的饮用酸奶的味道测试
[0388] 实验设计
[0389] 在三角测试中，比较具有300ppm LPS的饮用酸奶(60%水、40%酸奶(脱脂天然酸 奶)和1 %盐)与没有LPS的饮用酸奶(对照）。将LPS溶液加入饮用酸奶，将相同量的无菌水加 入对照。将两种样品均储存在l〇°C下3周。在第0天(在混合以后1小时）、第2周和第3周测试 样品。
[0390] 题
[0391] 第0天：小组由10人组成。在这些10人当中，仅3人在两种产品之间做出正确的区 分。没有显著的感官感知差异。小组成员发现所有样品可接受的并且没有显著偏好。
[0392] 第2周：小组由11人组成。在这些11人当中8人在两种产品之间做出正确的区分，这 是0.01的显著水平。小组的两名成员具有对LPS样品的偏好。
[0393] 第3周：小组由14人组成。在这些14人当中9人在两种产品之间做出正确的区分，这 是0.05的显著水平。小组的四名成员具有对LPS样品的偏好。
[0394] 这些结果表明，随着时间的推移，越来越多的人倾向于区分有或没有LPS的产品。 虽然在第〇天没有给出对有或没有LPS的产品的偏好，但在两周以后，以及(更是如此)在三 周以后，更多人养成了对含有LPS的产品的偏好。
[0395] 实施例13:对有和没有LPS的新鲜半脱脂的味道测试
[0396] 实验设计
[0397] 在三角测试中，比较含有300ppm LPS的新鲜的半脱脂奶酪与没有LPS的新鲜的半 脱脂奶酪(对照）。将LPS溶液加入新鲜的半脱脂奶酪，将相同量的无菌水加入对照。将两种 样品均储存在I 〇°C下14天。在第0天(在混合以后2小时）、第7天和第14天测试样品。
[0398] 莖里
[0399] 第0天:小组由15人组成。在这些15人当中7人在两种产品之间做出正确的区分。小 组成员发现所有样品可接受的并且没有显著偏好。
[0400] 第7天:小组由15人组成。在这些15人当中6人在两种产品之间做出正确的区分。小 组人一名成员具有对含有LPS的样品的偏好。
[0401 ] 第14天：小组由15人组成。在这些15人当中6人在两种产品之间做出正确的区分。 小组的两名成员具有对含有LPS的样品的偏好。
[0402]这些结果表明，虽然没有给出在第0天对有或没有LPS的产品的偏好，但在两周以 后，以及(更是如此)在三周以后，更多人养成了对含有LPS的产品的偏好。
[0403]实施例14:用不同的LPS组合物处理的全液体蛋的感官评估 [0404] 实验设计
[0405] 对巴氏杀菌的液体全蛋，其用三种不同的LPS组合物(各自为300ppm)加以处理，进 行感觉分析（三角测试；IS0-4120: 2004)。分析颜色和气味并相比于未经处理的样品（空 白）。
[0406] -1^51:2.5￥七％600/1.25￥七％1^/7.5￥七％501以及3(^七％葡萄糖（未依照本发明）
[0407] -LPS2:0 · 75wt %G0D/1 · 25wt % LP/1 · 7wt % SCN，以及20wt % 葡萄糖（依照本发明）
[0408] -1^>33:1.7￥1:%600/0.06￥1:%]^：)/1.7￥1:%3〇1^，以及〇￥1:%葡萄糖（依照本发明） [0409]将样品储存在10°C下长达14天并在此期间间歇性地评估。
[0410] 结果
[0411] 第0天：10人的小组，2人在不同处理的产品之间正确区分;没有显著的感觉差异归 于不同处理的产品之间。
[0412] 第7天：10人的小组：
[0413]-空白与LPSl: 10人正确区分空白与LPSl;相比于空白，LPSl被感觉为具有更淡的 颜色和强烈氧化气味。
[0414]-空白与LPS2:3人正确区分空白与LPS2;没有发现显着性差异;发现所有感官特性 是可接受的。
[0415] -空白与LPS3:2人正确区分空白与LPS2;没有发现显着性差异;发现所有感官特性 是可接受的。
[0416] 第14天：10人的小组
[0417] 空白与LPSl:和第7天相同的结果，但更明显，发现LPSl是完全不可接受的。
[0418] -空白与LPS2:4人正确区分空白与LPS2，2人具有对LPS2处理的样品的偏好，发现 所有感官特性是可接受的。
[0419] -空白与LPS3:和第7天相同的结果
[0420] 这些结果表明，未依照本发明的LPS组合物，如具有较高GOD或SCN浓度的LPS组合 物，随着时间的推移，不利地影响感官特性，直到这样的时候:处理过的食品被感觉具有不 可接受的感官特性。
[0421] 实施例15: LP活性的确定
[0422] 试剂
[0423] 柠檬酸钠缓冲液，50mM，pH5.0
[0424] 氯化钠 0.9wt/vol%
[0425] 过氧化氢 0.3vol/vol%
[0426] 底物溶液:ABTS ImM(在100μΙ 0.3vol/vol%过氧化氢中，其补充以柠檬酸钠缓冲 液至100ml)
[0427] 步骤
[0428] 将 25mg LP(Amano)溶解于 IOml 0.9wt/vol%NaCl;用0.9wt/vol%NaCl 稀释 100μΙ 至100ml;在比色杯(d=10mm)中添加 100μΙ至2ml预热（37°C)底物溶液。在30秒(Abs30)以后 以及在90秒(Abs90)以后读吸光度。
[0429] 计算活性(U/mg):
[0430] LP活性(U/mg) = ((Abs90-Abs30)x稀释系数x25)/(2 · 1x0 · 1x2 · 5x重量（以毫克为 单位））=47619x(Abs90-Abs30)/重量（以毫克为单位）
[0431] 实施例16:G0D活性的确定 [0432] 试剂
[0433] A.氨基安替比林溶液(4mg/ml，在去离子水中）
[0434] B.Triton X-100溶液（50mg/ml，在去离子水中）
[0435] C.苯酚溶液(50mg/ml，在去离子溶液中）
[0436] D.过氧化物酶溶液(过氧化物酶(LP，Amano)的250红橘酚单位，在IOml去离子水 中）
[0437] E.磷酸盐缓冲液0.1M(KH2P〇4_NaOH，pH 7.0)
[0438] F.苯酚缓冲溶液(0·1Μ KH2PO4,含有3ml苯酚溶液和3ml Triton X-100溶液/100ml 最终溶液，并用Na OH调节至pH 7.0)。
[0439] G.底物溶液(2.5g D-葡萄糖/25ml，在去离子水中）
[0440] H.酶溶液，大约50mg GOD(Amano)，在0.1磷酸盐缓冲液E中以致Δ OD/分钟的值是 0.030+/-0.005。
[0441 ] 步骤
[0442] 结合2.0ml F+0.5ml G+0.5ml D+O.lml A，然后在比色杯（d = 10mm)中预热至37°C
[0443] 添加0.1ml H，混合并维持在37°C下，或对于空白。添加0.1ml E
[0444] 在2和5分钟以后，在500nm处测量吸光度
[0445] 计算活性(U/mg)
[0446] GOD 活性（U/mg) = ((A5-A2)-(Ab5-Ab2)/3)x(l/(12.88xl/2))x3.2x(Dm/0.1) xl.339,其中
[0447] A5和A2 =分别在5和2分钟以后含有GOD的反应的吸光度。Ab5和Ab2 =分别在5和2 分钟以后空白反应的吸光度。Dm =溶液H(酶溶液)的稀释倍数。
【主权项】
1. 组合物，包含： (i) 1125-31875U/100g葡萄糖氧化酶(GOD)，优选 1500-25500U/100gGOD; (ii) 30000-1562500U/100g乳过氧化物酶(LP)，优选40000-1250000U/100gLP; (iii) 1 · 275-6 · 25wt% 的硫氰酸根(SCN)，优选 1 · 7-5 ·Owt% 的SCN;以及 (iv)0-37 · 5wt%的葡萄糖，优选0-30wt%的葡萄糖。2. 根据权利要求1所述的组合物，包含0.075-2.125wt%的GOD，优选0.1-1.7wt%的GOD 以及0 · 03-1 · 57wt% 的LP，优选 0 · 04-1 · 25wt% 的LP。3. 根据权利要求1或2所述的组合物，包含至少0.5wt%的葡萄糖。4. 根据权利要求1至3中任一项所述的组合物，所述组合物是干燥组合物，优选粉末。5. 根据权利要求1至4中任一项所述的组合物，所述组合物是食用组合物。6. 根据权利要求1至5中任一项所述的组合物用作食物防腐剂的用途。7. 根据权利要求6所述的用途，其中，所述食物选自乳制品、水果和蔬菜汁、调味汁、调 料、浆料、蛋制品、奶酪以及色拉。8. 食品，包含根据权利要求1至5中任一项所述的组合物，其中，所述食品优选选自乳制 品、水果和蔬菜汁、调味汁、调料、浆料、蛋制品、奶酪以及色拉。9. 根据权利要求8所述的食品，包含50-400ppm的根据权利要求1至5中任一项所述的组 合物，优选250_350ppm，最优选300ppm。10. 根据权利要求8或9所述的食品，每100g所述食品添加： (i) 0.056-12.75UGOD，优选0.45-7.65UGOD; (ii) 1.5-625ULP，优选 12-375ULP; (iii) 0.063-2.5mgSCN-，优选0.51-1.5mgSCN-;以及 (iv) 0-15mg葡萄糖，优选0-9mg葡萄糖。11. 根据权利要求8至10中任一项所述的食品，每lOOg所述食品添加0.0037-0.85mg GOD，优选0.03-0.51mgGOD，以及0.0015-0.625mgLP，优选0.012-0.375mgLP。12. 用于保存食品的方法，包括将50-400ppm，优选250-350ppm，最优选300ppm的根据权 利要求1至5中任一项所述的组合物加入食品或食品的成分。13. 根据权利要求12所述的方法，包括将50-400ppm，优选250-350ppm，最优选300ppm的 根据权利要求1至5中任一项所述的组合物加入食品或食品的成分，以及在1至12小时以后， 优选在4至8小时以后使所述食品或所述成分经受热处理。14. 根据权利要求13所述的方法，其中，所述热处理是巴氏杀菌。15. 根据权利要求12至14中任一项所述的方法，其中，所述食品选自乳制品、水果和蔬 菜汁、调味汁、调料、浆料、蛋制品、奶酪以及色拉。
【专利摘要】本发明涉及可以用于食品保存的抗微生物组合物。根据本发明的组合物是基于乳过氧化物酶系统(LPS)，并且包含非常低浓度的乳过氧化物酶、葡萄糖氧化酶、硫氰酸根、以及可选的葡萄糖。本发明还涉及这种组合物、尤其是与热处理协同组合用于食品保存的用途、用于食品保存的方法以及包含这些组合物的食品。
【IPC分类】A23C3/08, A23B5/18, A23B5/16, A23L3/3535, A23B5/14, A23L3/358, A23L3/3571, A23L3/3526
【公开号】CN105451573
【申请号】CN201480042100
【发明人】托尔努特 菲利普·范, 约翰·德卡泰勒
【申请人】比恩卡有限公司
【公开日】2016年3月30日
【申请日】2014年7月31日
【公告号】EP3030096A1, US20160174602, WO2015018739A1