糖的制备方法为: (1) 华山抓多糖的制备: A:取含水率为3%的华山抓干品,粉碎后过筛,取过筛后粒径为100微米的华山抓粉末用 80°C热水浸提3次,每次化,然后先后经过离屯、、抽滤、合并滤液,再将滤液真空浓缩至原有 体积的1/6,加入乙醇调节滤液的含醇量为80%后收集沉淀,最后真空干燥即得华山抓粗多 糖; B:将步骤A得到的华山抓粗多糖加蒸馈水复溶后经过氯仿:正下醇体积比为5:1的试 剂除蛋白,萃取4次,得到华山抓粗多糖溶液; C:将步骤B得到的华山抓粗多糖溶液加入3倍95%乙醇,然后使用无水乙醇、丙酬及乙酸 反复洗涂,再经抽滤、干燥后得到华山抓精制多糖; (2) 取含水率均为4%的何首乌、丹参、山植、草决明和构杞子干品分别粉碎后过300筛, 备用; (3) 取含水率均为3%的绞股蓝、菊花干品分别粉碎后过150筛,备用; (4) 将步骤(1)备用的华山抓精制多糖和步骤(2)、步骤(3)过筛后备用的原料进行混合 均匀,即可。
[0036] 实施例4: 一种兼具降血脂、抗氧化作用的组合物,该组合物按照重量份数比计包括W下原料:华 山抓多糖5份,何首乌5份,丹参5份,山植5份,绞股蓝5份,草决明8份,菊花15份和构杞子15 份。
[0037] 将上述组合物按照常规工艺制成丸剂。
[0038] 其中,华山抓多糖的制备方法与实施例2相同。
[0039] 实施例5: 一种兼具降血脂、抗氧化作用的组合物,该组合物按照重量份数比计包括W下原料:华 山抓多糖10份,何首乌10份,丹参10份,山植10份,绞股蓝10份,草决明15份,菊花25份和构 杞子25份。
[0040] 将上述组合物按照常规工艺制成注射剂。
[0041] 其中,华山抓多糖的制备方法与实施例3相同。
[0042] 实施例6: 一、对华山抓多糖的降血脂活性的评价 1.材料与仪器 1.1动物:SPF级昆明小鼠,雌雄各半,体质量18-22 g,由广西医科大学实验动物中屯、提 供,生产许可证号:SCXK(桂)2003-0003。
[0043] 1.2华山抓多糖的提取和纯化:取华山抓干品,用粉碎机粉碎并过40目筛,取过筛 后的华山抓粉末放90 °C热水浸提3次每次2 h,然后先后经过离屯、、抽滤、合并滤液,将滤液 真空浓缩至原有体积的1/6,调节含醇量为80%溶液静置过夜,收集沉淀,真空干燥即得华山 抓粗多糖;华山抓粗多糖加蒸馈水复溶后经过Sevag试剂(氯仿:正下醇=5: 1)除蛋白,连 续操作多次,直到完全脱除蛋白为止;将脱蛋白后的华山抓多糖溶液中加入3倍95%乙醇,用 无水乙醇、丙酬及乙酸反复洗涂沉淀,最后经抽滤、干燥后得到华山抓精制多糖。
[0044] 1.3 试剂 辛伐他汀;胆固醇;丙基硫氧喀晚;吐溫-80;总胆固醇(TC)测定试剂盒;甘油S醋(TG) 测定试剂盒;低密度脂蛋白胆固醇化DL-C)测定试剂盒;高密度脂蛋白胆固醇(HDkC)测定 试剂盒;丙二醒(MDA)测定试剂盒;超氧化物歧化酶(SOD)测试盒。
[0045] 1.4 仪器 紫外可见分光光度计(美国Agilent公司);电子分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公 司);多歧管冷冻干燥机(北京博医康实验仪器有限公司);电子恒溫水浴锅(北京泰克仪器 有限公司)。
[0046] 2.方法 2.1高脂肪乳剂的配制 取猪油22.0 g置烧杯中,在电炉上加热融化,将12.0 g胆固醇充分研磨后加入猪油中 溶化,再取丙基硫氧喀晚1 g研细加入,再加入吐溫-80 5 mL,充分均匀研磨,最后加热水 20 mL,均匀研磨即成。冰箱保存,使用时于37 °C水浴中融化。
[0047] 2.2动物分组及给药 取90只(体质量18-22 g,雌雄兼用)健康小鼠随机分成6组,每组15只,A组为空白对 照组,B组为高血脂模型组,C为阳性对照组(辛伐他汀片20 mg/kg),D、E、F组依次为华山 抓多糖高剂量组(300mg/kg)、中剂量组(200mg/kg)、低剂量组(lOOmg/kg),每天早上空白 对照组和高血脂模型组ig生理盐水0.2血/lOg,,其余给药组ig相应药物,下午空白对照 组继续ig生理盐水0.2mL/10g,其余各组ig高脂肪乳剂(0.2mL/10g),连续给药14d。 (ig表示是灌胃,W下同) 2.3指标检测 末次给药后1 h,小鼠眼眶后静脉丛取血,静置后,3500 r/min离屯、,取血清,按总胆固 醇、甘油=醋、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、超氧化物歧化酶、丙二醒测定试 剂盒说明分别测定血清中总胆固醇、甘油=醋、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、超氧化物歧 化酶、丙二醒含量。
[004引 2.4统计学分析 各组数据用# 表示,组间均值比较采用t检验。
[0049] 3.结果 3.1对高脂血症小鼠血脂的影响见表1。
[0050] 表1华山抓多糖对各组小鼠血脂的影响
(注:与模型组比较,冲<0.05,*冲<0.01) 由表1、图1可见,模型组与空白组比较,模型组小鼠血清的^^6、0)心(:浓度均显著 高于空白组(P<〇.〇5或P<0.01),皿kC显著降低(P<0.05),说明高脂血症小鼠模型造模成 功。与模型组比较,华山抓多糖高、中、低剂量组小鼠血清TC、TG、LDレC水平显著降低(P< 0.05或口<0.01),表明,华山抓多糖能有效降低高脂血症小鼠血清中1'(:^6、0)心(:含量;华山 抓多糖高、中、低剂量组小鼠血清中皿kc水平显著升高(P<0.05),说明华山抓多糖可促进 皿心(:将血中胆固醇运到肝脏,促进转化和排泄,从而使血中胆固醇降低,减少冠屯、病和动 脉粥样硬化的危险。
[0051 ] 3.2对高脂血症小鼠抗氧化作用的影响见表2。
[0化2] 表2华山抓多糖对各组小鼠 SOD活性和MDA含量的影响
(注:与模型组比较,冲<0.05,*冲<0.01) 由表2、图2可见,与空白对照组比较,模型组小鼠 SOD活性明显降低(P<0.01),MDA含量 明显增加(P<〇.01),表明模型组小鼠抗氧化能力明显低于正常对照组。与模型组比较,辛伐 他汀组、华山抓多糖组小鼠 SOD活性显著升高(P<0.01),MDA含量明显降低(P<0.01),表明 华山抓多糖能改善高血脂小鼠自由基代谢异常,对预防高血脂并发症发生具有益处。
[0053]二、对本申请的组合物制备成的药剂的降血脂活性的评价 4. 将实施例1制成的片剂、实施例2制成的颗粒剂、实施例3制成的胶囊剂、实施例4制成 的丸剂、实施例5制成的注射剂也按照对华山抓多糖的降血脂活性的评价的流程,动物选 取、试剂及试剂配制、仪器、指标检测等都相同;不同点为动物分组及给药(剂量300mg/kg、 200 mg/kg、100 mg/kg表示的是本发明组合物的有效成分含量): 取120只(体质量18-22 g,雌雄兼用)健康小鼠随机分成8组,每组15只,A组为空白 对照组,B组为高血脂模型组,C为阳性对照组(辛伐他汀片20 mg/kg),D、E、F、G、H组依次 为实施例1制成的片剂组、实施例2制成的颗粒剂组、实施例3制成的胶囊剂组、实施例4制成 的丸剂组、实施例5制成的注射剂组,每天早上空白对照组和高血脂模型组ig生理盐水 0.21111710肖,,其余给药组1肖相应药物,下午空白对照组继续1肖生理盐水0.2血/10肖,其 余各组ig高脂肪乳剂(0.2mL/10g),连续给药14cL(ig表示是灌胃,