本发明涉及烟草香料技术领域，特别是涉及一种柠檬发酵型烟用香料及其制备方法和应用。
背景技术：
柠檬是一种具有很高营养价值的水果，其含有丰富的维生素c，研究表明吸烟的人需要的维生素c是不吸烟者的二倍，另外抽烟者容易生痰，而柠檬可袪痰，且袪痰功效比橙和柑还要强，因此选择柠檬作为原料，开发一种新型的烟用发酵香料。
当前，中式卷烟调香香料主要采用传统的有机溶剂萃取技术获得，此方法获得的香料存在很多不足，已经不能完全满足当前卷烟调香高品质的需求，而利用生物技术处理后得到的香料除自然香韵外，还能增加浓厚的酿香香韵，给予抽吸卷烟特殊的口感。本发明从广西梧州产的六堡茶中筛选出一株优势菌株，经鉴定为塔宾曲霉。该塔宾曲霉菌株能分泌多种生物酶，在发酵过程中可以增加柠檬发酵的香气，赋予其特别的抽吸口感。
现有技术中，有以柠檬为原料，制备果汁、发酵酒的方法，但是还没有塔宾曲霉发酵柠檬烟用香料出现，更没有将其添加到卷烟滤棒中进行卷烟调香的应用报道。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种柠檬发酵型烟用香料及其制备方法和应用。
本发明利用微生物发酵技术处理柠檬，通过一系列的分解、合成、转化等生化反应，增加更丰富的酿香香味成分，从而丰富烟香，改善卷烟抽吸口感，开发出一种新型烟用发酵香料；本发明同时提供了所述烟用发酵香料的制备方法及所述烟用发酵香料在卷烟调香中的应用。
本发明提供的一种柠檬发酵型烟用香料的制备方法，包括以下步骤：
以柠檬为原料，用菌株塔宾曲霉aspergillustubingensisgyc501发酵，接种比例为培养基质量的1％，在培养温度为25℃的培养箱中发酵8d，发酵结束后对其进行真空抽滤、离心分离以及用0.2微米的双层滤膜过滤提纯，即得到所需的发酵香料；对其发酵后的香料进行真空抽滤、离心分离以及双层滤膜过滤三个步骤进行。
所述菌株塔宾曲霉aspergillustubingensisgyc501已于2014年9月17日保藏在位于中国武汉市武昌珞珈山武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏号为cctccno：m2014425。
本发明提供的一种柠檬发酵型烟用香料的制备方法，优选技术方案为：
1.培养基配制：将柠檬洗净，室温晾干，利用豆浆机将柠檬打浆，向柠檬浆中添加10％的蔗糖，制得培养基；
2.培养基灭菌：将培养基在120℃下灭菌20min，冷却；
3.接种：在无菌条件下，将菌株塔宾曲霉aspergillustubingensisgyc501接种于培养基中，接种比例为培养基质量的0.5％～2.0％；
4.发酵：在培养温度为25℃的培养箱中发酵4～12d；
5.加热回流：取发酵好的物料加入75％的乙醇，加热回流提取2h，真空抽滤，向滤渣中继续加入75％的乙醇，重复上述操作2次，合并3次滤液，静置48h，取上层清液；
6.减压浓缩：将抽滤后的柠檬发酵沉降液减压浓缩，得到烟用柠檬浸膏，其中浓缩温度为65℃，浓缩压力为0.01个大气压；
7.回溶：将其浸膏用无水乙醇充分回溶；
8.分离纯化：将其回溶液在10000转/分的转速下超声6分钟，取其清液，用两层0.2微米滤膜过滤，得到澄清透明的柠檬发酵香料。
本发明同时提供了所述烟用发酵香料应用方法：上述柠檬发酵香料，用于烟用香精的调配，或者直接进行烟草加香。具体是将所述的柠檬发酵香料用丙二醇稀释到(2-6)wt％，然后添加(0.2-1)μl到香烟中，采用的是微型注射器对香烟进行滤棒注射进样。
本发明中使用微生物菌株为塔宾曲霉aspergillustubingensisgyc501，其通过如下途径获得：将茶叶(约0.5g)剪碎放入装有200ml2％蔗糖察氏液体培养基的三角瓶中，在培养温度为30℃，转速为180rpm的摇床中，培养42h后可得到中央为棕色的白色菌丝球。
本发明的有益效果：本发明利用塔宾曲霉aspergillustubingensisgyc501生产发酵型烟用香料，所制备的发酵型烟用香料其不仅具有柠檬特有的天然香韵，而且还有浓厚的酿香香韵；将该香料进行卷烟嘴棒加香试验，结果表明，该香原料能够丰富烟香，抽吸时口感舒适、余味好，而且烟气变得柔和细腻。本发明应用微生物发酵技术生产发酵型烟用香料，为新型香原料的开发提供了一条新途径。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的有关技术问题作进一步详细的描述。
实施例1
1.培养基配制：将柠檬洗净，室温晾干，利用豆浆机将其分别打浆，向柠檬浆中添加10％的蔗糖，制得培养基；
2.培养基灭菌：将培养基在120℃下灭菌20min，冷却；
3.接种：在无菌条件下，将菌株塔宾曲霉aspergillustubingensisgyc501接种于培养基中，接种比例为培养基质量的0.5％；
4.发酵：在培养温度为25℃的培养箱中发酵4d；
5.加热回流：取发酵好的物料加入75％的乙醇，加热回流提取2h，真空抽滤，向滤渣中继续加入75％的乙醇，重复上述操作2次，合并3次滤液，静置48h，取上层清液；
6.减压浓缩：将抽滤后的柠檬发酵沉降液减压浓缩，得到烟用柠檬浸膏，其中浓缩温度为65℃，浓缩压力为0.01个大气压。
7.回溶：将其浸膏用无水乙醇充分回溶
8.分离纯化：将其回溶液在10000转/分的转速下超声6分钟，取其清液，用两层0.2微米滤膜过滤，得到澄清透明的柠檬发酵香料，嗅香发现柠檬天然果香味香气突出，而酿香风味不足。
实施例2
1.培养基配制：将柠檬洗净，室温晾干，利用豆浆机将其分别打浆，向柠檬浆中添加10％的蔗糖，制得培养基；
2.培养基灭菌：将培养基在120℃下灭菌20min，冷却；
3.接种：在无菌条件下，将菌株塔宾曲霉aspergillustubingensisgyc501接种于培养基中，接种比例为培养基质量的1％；
4.发酵：在培养温度为25℃的培养箱中发酵8d，；
5.加热回流：取发酵好的物料加入75％的乙醇，加热回流提取2h，真空抽滤，向滤渣中继续加入75％的乙醇，重复上述操作2次，合并3次滤液，静置48h，取上层清液；
6.减压浓缩：将抽滤后的柠檬发酵沉降液减压浓缩，得到烟用柠檬浸膏，其中浓缩温度为65℃，浓缩压力为0.01个大气压；
7.回溶：将其浸膏用无水乙醇充分回溶；
8.分离纯化：将其回溶液在10000转/分的转速下超声6分钟，取其清液，用两层0.2微米滤膜过滤，得到澄清透明的柠檬发酵香料，嗅香发现不仅柠檬天然果香味突出，而且酿香风味也明显爆发，两种香味相得益彰。
实施例3
1.培养基配制：将柠檬洗净，室温晾干，利用豆浆机将其分别打浆，向柠檬浆中添加10％的蔗糖，制得培养基；
2.培养基灭菌：将培养基在120℃下灭菌20min，冷却；
3.接种：在无菌条件下，将菌株塔宾曲霉aspergillustubingensisgyc501接种于培养基中，接种比例为培养基质量的2％；
4.发酵：在培养温度为25℃的培养箱中发酵12d；
5.加热回流：取发酵好的物料加入75％的乙醇，加热回流提取2h，真空抽滤，向滤渣中继续加入75％的乙醇，重复上述操作2次，合并3次滤液，静置48h，取上层清液；
6.减压浓缩：将抽滤后的柠檬发酵沉降液减压浓缩，得到烟用柠檬浸膏，其中浓缩温度为65℃，浓缩压力为0.01个大气压；
7.回溶：将其浸膏用无水乙醇充分回溶；
8.分离纯化：将其回溶液在10000转/分的转速下超声6分钟，取其清液，用两层0.2微米滤膜过滤，得到澄清透明的柠檬发酵香料，嗅香发现酿香风味显著，但是少了天然的香气。
实施例4
塔宾曲霉aspergillustubingensisgyc501获得：将茶叶(约0.5g)剪碎放入装有200ml2％蔗糖察氏液体培养基的三角瓶中，在培养温度为30℃，转速为180rpm的摇床中，培养42h后可得到中央为棕色的白色菌丝球。
实施例5
以实施例2中所制备的发酵型烟用香料为例，进行在卷烟中应用研究的说明。将柠檬发酵型烟用香料用95％乙醇稀释到3％，静置两天；然后用微型注射器对空白香烟嘴棒进行注射进样0.5μl95％乙醇，标注为a0组；对空白香烟嘴棒进行注射进样0.5μl发酵香料，标注为a1组。进样后的香烟放在密封袋，室温保存一周，待感官评吸。
6人组成评吸小组，评吸结果表明，发酵型烟用香料其不仅具有柠檬特有的天然香韵，而且还有浓厚的酿香香韵；将该香料进行卷烟加香试验，结果表明，该香原料能够丰富烟香，烟气变得柔和细腻，抽吸时口感舒适，降低了口腔刺辣感，改善了卷烟吸味。