取代的吲哚-5-酚衍生物及其治疗应用的制作方法
本申请要求美国临时专利申请61/722,537(2012年11月5日提交)和61/852,309(2013年3月15日提交)的权益，将它们二者以其整体通过引用结合于此。
发明领域
本发明总体上涉及化合物治疗各种各样的紊乱、疾病和病症(pathologic conditions)的用途，并且更具体地涉及取代的吲哚-5-酚衍生物调节蛋白激酶以及用于治疗蛋白激酶介导的疾病的用途。
发明背景
蛋白激酶构成一大家族结构上相关的酶，其负责控制细胞内各种信号转导过程。蛋白激酶，其含有类似的250-300个氨基酸催化结构域，催化靶蛋白底物的磷酸化。
激酶可以通过磷酸化中的底物归类入家族(例如，蛋白质-酪氨酸，蛋白质-丝氨酸/苏氨酸，脂质等)。酪氨酸磷酸化是各种生物学过程如细胞增殖、迁移、分化和存活的调节中的中心事件。多个家族的受体和非受体酪氨酸激酶通过催化磷酸从ATP至特定细胞蛋白靶标的酪氨酸残基的转移而控制这些事件。已经鉴别了通常对应于这些激酶家族中的每一个的序列模体[Hanks等，FASEB J.，(1995)，9，576-596；Knighton等，Science，(1991)，253，407-414；Garcia-Bustos等，EMBO J.，(1994)，13：2352-2361)。该蛋白激酶家族中的激酶的实例包括，但不限于，abl，Akt，bcr-abl，Blk，Brk，Btk，c-kit，c-Met，c-src，c-fms，CDK1，CDK2，CDK3，CDK4，CDK5，CDK6，CDK7，CDK8，CDK9，CDK10，cRaf1，CSF1R，CSK，EGFR，ErbB2，ErbB3，ErbB4，Erk，Fak，fes，FGFR1，FGFR2，FGFR3，FGFR4，FGFR5，Fgr，flt-1，Fps，Frk，Fyn，Hck，IGF-1R，INS-R，Jak，KDR，Lck，Lyn，MEK，p38，PDGFR，PIK，PKC，PYK2，ros，Tie，Tie-2，TRK，Yes，和Zap70。
研究表明，蛋白激酶在宽泛的各种细胞过程和细胞功能的调节和维持中起主要作用。例如，激酶活性充当调节细胞增殖、活化和/或分化的分子开关。已经在许多疾病状态中观察到不受控制的或过度的激酶活性，所述疾病状态包括良性和恶性增殖紊乱以及由于免疫系统的不当激活(自身免疫紊乱)、同种异体移植物排斥(allograft rejection)和移植物宿主病(graft vs host disease)导致的疾病。
据报道，许多疾病与由蛋白激酶介导的事件触发的异常细胞反应相关。这些疾病包括自身免疫疾病(autoimmune diseases)，炎性疾病(inflammatory diseases)，骨病(bone diseases)，代谢疾病(metabolic diseases)，神经和神经变性疾病((neurological and neurodegenerative diseases)，癌症，心血管疾病(cardiovascular diseases)，变态反应(allergies)和哮喘(asthma)，阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease)和激素相关疾病(hormone-related diseases)。此外，内皮细胞特异性受体PTK，如VEGF-2和Tie-2，介导血管形成过程并且涉及支持癌症和其他涉及不受控制的血管形成的疾病的进展。因此，在药物化学中已经进行了大量工作以找到作为治疗剂有效的蛋白激酶抑制剂。
许多癌症的特征在于破坏细胞传导通路，这导致癌细胞的不受控生长和增殖。受体酪氨酸激酶(RTK)在这些信号传导通路中起关键作用，将细胞外的分子信号传输到细胞的细胞质和/或细胞核中。RTK是跨膜蛋白，其通常包括胞外配体-结合结构域、跨膜结构域和催化胞质酪氨酸激酶结构域。配体与胞外部分(potion)的结合被认为促进二聚化，导致胞内酪氨酸激酶结构域的转磷酸作用(trans-phosphorylation)和活化(Schlessinger等Neuron 1992；9：383-391)。
考虑到对于大多数与蛋白激酶相关的病症缺少当前可用的治疗选项，对于抑制这些蛋白靶标的新型治疗剂仍然存在极大需求。
技术实现要素：
因此，本发明的一个目的是提供包含如式(I)中所述的取代的吲哚-5-酚衍生物的抗肿瘤剂，其药用制剂，用于制备新型化合物的方法和使用所述化合物的组合物。式(I)的化合物和包含所述化合物的组合物在治疗各种疾病中具有功效。
本文描述的联合治疗可以通过如下方式提供：作为单独药物制剂制备式(I)的取代的吲哚-5-酚衍生物和另一治疗剂，接着将其同时地、半同时地、单独地或在规定间隔时间内给药给患者。
本发明提供使用某些化学化合物如激酶抑制剂用于治疗各种疾病、紊乱和病理的方法，所述疾病、紊乱和病理例如，癌症，和血管病症，如心肌梗死(myocardial infarction)(MI)，卒中(stroke)或缺血(ischemia)。除了阻断其他受体和非受体激酶的活性之外，本发明中描述的三嗪化合物还可以阻断Aurora激酶家族的一些或许多成员的酶活性。这些化合物对于治疗以下疾病可以是有益的：其中病症影响细胞运动性、粘附和细胞周期进展的疾病，并且此外，具有相关缺氧病症的疾病，骨质疏松症(osteoporosis)以及这样的病症，其由于或涉及血管通透性增加、炎症或呼吸窘迫、肿瘤生长、侵入、血管生成、转移和细胞凋亡。
附图简述
图1示出了NTW-3475针对来自宽范围疾病的宽范围激酶的激酶抑制活性。
图2示出了NTW-3475对于宽范围的突变型激酶(mutant kinase)的激酶抑制活性。
图3示出了NTW-3475的体外抗增殖活性。
图4示出了在用NTW-3475治疗急性髓性白血病(Acute Myleogenous Leukemia)(AML)的异种移植物研究中的动物体重变化(体重变化是总体毒性的标志)。
图5示出了在AML研究对于NTW-3475的肿瘤尺寸曲线，显示抗肿瘤活性。
图6示出了在用NTW-3475治疗的动物中的肿瘤的尺寸/仅给予暴露于阴性对照剂的AML肿瘤的尺寸方面，NTW-3475的相对抗肿瘤活性。
图7示出了在NTW-3475在治疗慢性髓性白血病(CML)的功效的异种移植物研究中的动物体重变化。
图8示出了在胰腺癌的异种移植物研究中，对于NTW-3475治疗的小鼠和对照小鼠的相对于时间的肿瘤曲线。
图9示出了在利用NTW-3475的异种移植物中的动物体重变化(用于总体毒性的标志)。
图10示出了在用NTW-3475治疗的动物中的肿瘤尺寸/或对照剂的肿瘤尺寸方面，NTW-3475的相对抗增殖活性。
图11示出了在用NTW-3475治疗的动物中的肿瘤尺寸/用对照剂的肿瘤尺寸方面，NTW-3475的相对抗增殖活性。
图12示出了对于NTW-3475在其用于甲状腺癌的研究中的重量曲线。
图13示出了在甲状腺研究中，在上午接种疫苗的对于NTW-3475治疗的肿瘤尺寸对时间曲线，显示抗肿瘤活性。
图14示出了使用异种移植物模型的子宫内膜癌的研究中，在经历用NTW-3475单独地或联合纳米颗粒白蛋白结合的紫杉醇进行治疗的同时，含有异种移植物的动物重量。
图15示出了在该子宫内膜癌研究中在有或没有下对于NTW-3475的肿瘤尺寸曲线。
图16示出了在来自该子宫内膜癌模型的研究的治疗动物的肿瘤尺寸/给予对照剂的小鼠中的肿瘤尺寸方面，NTW-3475和)的相对抗增殖活性。
图17示出了在经历使用异种移植物模型的胰腺癌的-NTW-3475联合治疗的同时对动物重量(用于总体毒性的标志)的影响。
图18示出了使用异种移植物模型的胰腺癌，对于NTW-3475和纳米颗粒白蛋白结合的紫杉醇的肿瘤尺寸曲线。
图19示出了在使用胰腺癌的异种移植物模型的联合治疗中，对于NTW-3475和的％T/C。
图20概括了NTW-3475的体外活性。
图21概括了NTW-3475的体内(异种移植物)药理学。
图22示出了NTW-3456针对宽范围癌症中的宽范围激酶的激酶抑制活性。
图23示出了NTW-3475针对宽范围的突变激酶的激酶抑制活性。
图24示出了NTW-3456针对突变abl激酶的激酶抑制活性。
图25示出了NTW-3456的体外抗增殖活性。
图26示出了对于NTW-34-56的示例性抗增殖和磷酸化抑制活性。
图27示出了在经历NTW-3456的同时对于含有AML异种移植物的动物重量(用于总体毒性的标志)的重量时间进程。
图28示出了在AML模型系统中，NTW-3456治疗动物的肿瘤尺寸曲线，显示抗肿瘤活性。
图29示出了在经治疗的肿瘤尺寸/未经治疗的肿瘤尺寸方面，NTW-3456的抗肿瘤活性。
图30示出了在经历NTW-3456的同时，对于含有AML异种移植物的动物重量(用于总体毒性的标志)的重量时间进程。
图31示出了在AML模型系统中，对于NTW-3456治疗的动物的肿瘤尺寸曲线，显示抗肿瘤活性。
图32示出了在经治疗的肿瘤尺寸/未经治疗的肿瘤尺寸方面，NTW-3456的肿瘤活性(图27-29和30-32是单独的实验)。
图33显示在单次经口给药50mg/kg NTW-3456后在带有MV4-11人急性髓细胞样白血病(human acute myeloid leukemia)的SCID小鼠中，在pFlt3的PK和抑制之间的相关性。
图34示出了在CML模型系统中，对于NTW-3456治疗的动物的肿瘤尺寸曲线，显示抗肿瘤活性。
图35.示出了在CML模型系统中经治疗的肿瘤尺寸/未经治疗的肿瘤尺寸方面，NTW-3456的抗肿瘤活性。
图36示出了在甲状腺癌模型系统中在经历NTW-3456的同时动物重量(用于总体毒性的标志)的重量时间进程。
图37示出了在甲状腺癌模型系统中，对于NTW-3456治疗的动物的肿瘤尺寸曲线，显示抗肿瘤活性。
图38示出了在甲状腺癌模型系统中在经治疗动物的肿瘤尺寸/未经治疗动物的肿瘤尺寸方面，NTW-3456的肿瘤活性。
图39示出了在子宫内膜癌模型系统中在经历NTW-3456的同时对于动物重量(用于总体毒性的标志)的重量时间进程。
图40示出了在子宫内膜模型系统中，对于NTW-3456治疗的动物的肿瘤尺寸曲线，显示抗肿瘤活性。
图41示出了在子宫内膜癌模型系统中经治疗动物的肿瘤尺寸/未经治疗动物的肿瘤尺寸方面，NTW-3456的肿瘤活性。
图42示出了在胰腺癌模型系统中在经历NTW-3456的同时对于动物重量(用于总体毒性的标志)的重量时间进程。
图43示出了在胰腺癌模型系统中，对于NTW-3456治疗的动物的肿瘤尺寸曲线，显示抗肿瘤活性。
图44示出了在胰腺癌模型系统中在经治疗动物的肿瘤尺寸/未经治疗动物的肿瘤尺寸方面，NTW-3456的肿瘤活性。
图45示出了在MiaPaCa-2胰腺癌模型系统中在经历NTW-3456单一或联合的双重药剂治疗的同时对于含有的动物重量(用于总体毒性的标志)的重量时间进程。
图46示出了在MiaPaCa-2胰腺癌模型系统中，对于NTW-3456单一或联合Abraxane的双重药剂疗法治疗的动物的肿瘤尺寸曲线，显示抗肿瘤活性。
图47示出了在MiaPaCa-2胰腺癌模型系统中在经治疗动物的肿瘤尺寸/未经治疗动物的肿瘤尺寸方面，NTW-3456单独地或联合的抗肿瘤活性。
图48示出了在Panc-1胰腺癌模型系统中在经历NTW-3456单一或联合的双重药剂治疗的同时，对于含有的动物重量(用于总体毒性的标志)的重量时间进程。
图49示出了在Panc-1胰腺癌模型系统中，对于NTW-3456单一或联合的双重药剂疗法治疗的动物的肿瘤尺寸曲线。
图50概括了NTW-3456的体内药理学。
图51显示NTW-3456对MiaPaCa-2细胞和BxPC3细胞的信号转导作用。
图52显示NTW-3475在MiaPaCa-2细胞个BxPC3细胞中的信号转导作用。
图53概括了NTW-3456和NTW-3475的抑制活性。
图54示出了NTW-3456对于K562细胞的生长的抑制活性。
图55示出了NTW-3456对于K562细胞中的pCrl抑制的抑制活性。
图56示出了NTW-3456对于K562细胞中的半胱天冬酶3/7诱导的抑制活性。
图57概括了NTW-3456的抑制活性。
图58显示对于BaF3细胞中的FGFR1-FGFR-4的抑制的NTW-3456剂量响应曲线。
图59概括了NTW-3456对于成纤维细胞生长因子受体的抑制活性。
发明详述
半本发明涉及具有通式(I)的化合物
或其药用盐，其中：
Z1，Z2，Z3和Z4独立地是N或如以下所述；
R选自：
(i)氢，氨基，烷基氨基；
(ii)C1-C6烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基；
(iii)K-Ar。
Ar表示杂芳基或芳基，其每一个被0至4个独立地选自以下各项的取代基取代：
(1)卤素，羟基，氨基，酰胺，氰基，-COOH，-SO2NH2，氧代，硝基和烷氧基羰基；和
(2)C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，C3-C10环烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基，C2-C6烷酰基，C1-C6卤代烷基，C1-C6卤代烷氧基，单-和二-(C1-C6烷基)氨基，C1-C6烷基磺酰基，单-和二-(C1-C6烷基)亚磺酰氨基和单-和二-(C1-C6烷基)氨基羰基；苯基C0-C4烷基和(4至7元杂环)C0-C4烷基，其每一个被0至4个独立地选自以下各项的第二取代基取代：卤素，羟基，氰基，氧代，亚氨基，C1-C4烷基，C1-C4烷基和C1-C4卤代烷基。
K选自
a)O，S，SO，SO2；
b)(CH2)m，m＝0-3，-O(CH2)p，p＝1-3，-S(CH2)p，p＝1-3，-N(CH2)p，p＝1-3，-(CH2)pO，p＝1-3；
c)NR1
R1表示氢，烷基，环烷基，烯基，炔基，烷硫基，芳基，芳烷基，
(iv)式(Ia)的基团：
其中：
R2表示氢，C1-C4烷基，氧代；
X是CH，条件是R3是氢；或X-R3是O；或X是N，R3表示以下基团：氢，C1-C6烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基，C3-C10芳基或杂芳基，(C3-C7环烷基)C1-C4烷基，C1-C6卤代烷基，C1-C6烷氧基，C1-C6烷硫基，C2-C6烷酰基，C1-C6烷氧基羰基，C2-C6烷酰基氧基，单-和二-(C3-C8环烷基)氨基C0-C4烷基，(4至7元杂环)C0-C4烷基，C1-C6烷基磺酰基，单-和二-(C1-C6烷基)亚磺酰氨基，和单-和二-(C1-C6烷基)氨基羰基，其每一个被0至4个独立地选自以下各项的取代基取代：卤素，羟基，氰基，氨基，-COOH和氧代。
R11和R12独立地选自：氢，F，Cl，Br，CN，C1-C4烷基，C1-C6烷氧基。
R13，R14和R15独立地选自氢，C1-C4烷基，C2-C6烯基，CF3，CF2H，CFH2，C2-C6炔基，C3-C10芳基或杂芳基，C1-C6烷氧基，C1-C6烷硫基，C2-C6烷酰基，C1-C6烷氧基羰基，C2-C6烷酰基氧基。
环A选自由以下各项组成的组：
Rx和Ry-独立地选自T-R4，或Rx和-Ry连同它们介于中间的原子一起形成稠合的，不饱和的或部分不饱和的，5-7元具有0-3个选自氧、硫或氮的环杂原子的环，其中在由Rx和Ry形成的所述稠合环上的任何可取代的碳被氧代或T-R4取代，并且在由Rx和Ry形成的所述环上的任何可取代的氮被R5取代；
T是价键或C1-4亚烷基链；
R4选自-R6，-卤代，-OR6，-C(＝O)R6，-CO2R6，-COCOR6，-COCH2COR6，-NO2，-CN，-S(O)R6，-S(O)2R6，-SR6，-N(R5)2，-CON(R7)2，-SO2N(R7)2，-OC(＝O)R6，-N(R7)COR6，-N(R7)CO2(任选取代的C1-6脂肪族)，-N(R5)N(R5)2，-C＝NN(R5)2，-C＝N-OR6，-N(R7)CON(R7)2，-N(R7)SO2N(R7)2，-N(R4)SO2R6，或-OC(＝O)N(R7)2；
每个R6独立地选自氢或任选取代的基团，所述基团选自C1-6脂肪族，C6-10芳基，具有5-10个环原子的杂芳基，或具有5-10个环原子的杂环基；
每个R5独立地选自-R7，-COR7，-CO2(C1-6脂肪族)，-CON(R7)2，或-SO2R7，或同一个氮上的两个R5一起形成5-8元杂环基或杂芳基环；
每个R7独立地选自氢或任选取代的C1-6脂肪族基团，或同一个氮上的两个R7连同该氮一起形成5-8元杂环基或杂芳基环；
R8选自-R6，halo，-OR6，-C(＝O)R6，-CO2R6，-COCOR6，-NO2，-CN，-S(O)R6，-SO2R6，-SR6，-N(R4)2，-CON(R5)2，-SO2N(R5)2，-OC(＝O)R6，-N(R5)COR6，-N-(R5)CO2(任选取代的C1-6脂肪族)，-N(R5)N(R5)2，-C＝NN(R5)2，-C＝N-OR6，-N(R5)CON(R5)2，-N(R5)SO2N(R5)2，-N(R5)SO2R6，或-OC(＝O)N(R5)2。
Rx和Ry(分别在位置Z3和Z4处)可以一起形成稠合环，提供含有环A的双环体系。备选地，R和Z2也可以一起形成稠合环，提供含有环A的双环体系。优选的Rx/Ry和R/Z2环包括具有0-2个杂原子的5-，6-或7-元不饱和或部分不饱和环，其中所述Rx/Ry和R/Z2环任选被取代。环A体系的实例通过化合物I-1至I-26在以下显示，其中Z1至Z4是氮或C(R8)。
优选的双环环A体系包括I-1，I-2，I-3，I-4，I-5，I-6，I-7，I-8，I-14，I-15I-16，I-17，I-19，I-23和I-24，更优选地I-1，I-2，I-3，I-5，I-8，I-14，I-15I-16，I-17，I-19，I-23和I-24，并且最优选地I-1，I-14，I-16和I-19。
在单环环A体系中，当存在时，优选的Rx基团包括氢，烷基-或二烷基氨基，乙酰氨基，或C1-4脂肪族基团如甲基，乙基，环丙基，异丙基或叔丁基。当存在时，优选的Ry基团包括T-R4，其中T是价键或亚甲基，并且R4是-R6，-N(R5)2，或-OR6。优选的Ry的实例包括2-吡啶基，4-吡啶基，哌啶基，甲基，乙基，环丙基，异丙基，叔丁基，烷基-或二烷基氨基，乙酰氨基，任选取代的苯基如苯基或卤素-取代的苯基，和甲氧基甲基。
在双环环A体系中，当Rx和Ry一起时形成的环可以是取代的或未取代的。合适的取代基包括-R6，卤代，-OR6，-C(＝O)R6，-CO2R6，-COCOR6，-NO2，-CN，-S(O)R6，-SO2R6，-SR6，-N(R5)2，-CON(R5)2，-SO2N(R5)2，-OC(＝O)R6，-N(R4)COR6，-N(R5)CO2(任选取代的C1-6脂肪族)，-N(R5)N(R5)2，-C＝NN(R5)2，-C＝N-OR6，-N(R5)CON(R5)2，-N(R5)SO2N(R5)2，-N(R5)SO2R6或-OC(＝O)N(R5)2，其中R和R5如上所定义。优选的Rx/Ry环取代基包括-卤代，-R6，-OR6，-COR6，-CO2R6，-CON(R5)2，-CN，或-N(R5)2，其中R6是氢或任选取代的C1-6脂肪族基团。
特别可用于治疗激酶介导的疾病的一个实施方案涉及式IIa、IIb和IIc的化合物：
或其药用衍生物或前药，其中；
R选自：
(i)氢，氨基，烷基氨基；
(ii)C1-C6烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基；
(iii)K-Ar.
Ar表示杂芳基或芳基，其每一个被0至4个独立地选自以下各项的取代基取代：
(1)卤素，羟基，氨基，酰胺，氰基，-COOH，-SO2NH2，氧代，硝基和烷氧基羰基；和
(2)C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，C3-C10环烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基，C2-C6烷酰基，C1-C6卤代烷基，C1-C6卤代烷氧基，单-和二-(C1-C6烷基)氨基，C1-C6烷基磺酰基，单-和二-(C1-C6烷基)亚磺酰氨基和单-和二-(C1-C6烷基)氨基羰基；苯基C0-C4烷基和(4至7元杂环)C0-C4烷基，其每一个被0至4个独立地选自以下各项的第二取代基取代：卤素，羟基，氰基，氧代，亚氨基，C1-C4烷基，C1-C4烷基和C1-C4卤代烷基。
K选自
a)O，S，SO，SO2；
b)(CH2)m，m＝0-3，-O(CH2)p，p＝1-3，-S(CH2)p，p＝1-3，-N(CH2)p，p＝1-3，-(CH2)pO，p＝1-3；
c)NR1
R1表示氢，烷基，环烷基，烯基，炔基，烷硫基，芳基，芳烷基。
(iv)式(Ia)的基团：
其中：
R2表示氢，C1-C4烷基，氧代；
X是CH，条件是R3是氢；或X-R3是O；或X是N，R3表示以下基团：氢，C1-C6烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基，C3-C10芳基或杂芳基，(C3-C7环烷基)C1-C4烷基，C1-C6卤代烷基，C1-C6烷氧基，C1-C6烷硫基，C2-C6烷酰基，C1-C6烷氧基羰基，C2-C6烷酰基氧基，单-和二-(C3-C8环烷基)氨基C0-C4烷基，(4至7元杂环)C0-C4烷基，C1-C6烷基磺酰基，单-和二-(C1-C6烷基)亚磺酰氨基，和单-和二-(C1-C6烷基)氨基羰基，其每一个被0至4个独立地选自以下各项的取代基取代：卤素，羟基，氰基，氨基，-COOH和氧代。
Het选自任何杂环，其被0至4个独立地选自以下各项的取代基取代：
(i)C1-C6烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基；
(ii)卤素，羟基，氨基，酰胺，氰基，-COOH，-SO2NH2，氧代，硝基和烷氧基羰基，
(iii)芳基。
吲哚上的取代基为如下：
R11和R12独立地选自：氢，F，Cl，Br，CN，C1-C4烷基，C1-C6烷氧基。
R13，R14和R15独立地选自氢，C1-C4烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基，C3-C10芳基或杂芳基，C1-C6烷氧基，C1-C6烷硫基，C2-C6烷酰基，C1-C6烷氧基羰基，C2-C6烷酰基氧基。
式(I)的优选R基团在以下列出：
式(II)的优选Het基团在以下列出，其中取代基可以是如这里所定义的具体取代基或者可以是如上所定义的一个或多个取代基：
R’选自
(i)氢；
(ii)C1-C6烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基；
(iii)芳基，其可以具有1-4个任选的取代基；
(iii)-C(＝O)R6，(R6在以下描述)
式(I)的优选取代吲哚基团在以下列出：
本发明的实施方案包括：
在另一个实施方案中，提供了一种制备本发明的化合物的方法。本发明的化合物通常可以使用4，6-二氯-2-甲基磺酰基嘧啶或2，4，6-三氯嘧啶，或4，6-二氯-2-(甲硫基)嘧啶作为起始原料制备。化合物(I)可以含有各种立体异构体、几何异构体、互变异构体等。所有可能的异构体及其混合物都包括在本发明中，并且对混合比没有特别限制。
在本发明中，式(IIa，IIb和IIc)的嘧啶衍生物化合物可以使用已有方案从商购获得的前体合成。例如，可以使用与以下方案中任一个类似的合成路线，以及合成有机化学领域中已知的合成方法，或由本领域技术人员理解的对它们的变型。以下方案中的每个变量是指与本文提供的化合物的描述一致的任何基团。
在以下的方案中，术语″还原″是指将硝基官能度还原至氨基官能度的过程，或者将酯官能度转化为醇的过程。硝基基团的还原可以以有机合成领域的技术人员熟知的大量方式进行，这包括但不限于催化氢化，利用SnCI2的还原和利用二氯化钛的还原。在以下的方案中，术语″水解″是指底物或反应物与水的反应。更具体地，″水解″是指酯或亚硝酸酯(nitrite)官能度到羧酸的转换。该过程通过有机合成领域的技术人员熟知的各种酸或碱催化。
式(IIa，IIb和IIc)的化合物可以通过使用已知的化学反应和程序制备。提供以下一般制备方法以有助于本领域技术人员合成所述抑制剂，其中在描述工作实施例的实验部分提供更详细的实施例。
如式(III)中定义的丙烯基-吡唑胺不能商购获得。其可以通过如早期描述的多种方法(参见，例如，美国临时申请号61/555,738)制备。
如式(IV)中定义的取代的吲哚-5-酚的前体可以购自供应商，或使用已有方案合成自商购获得的前体。(WO 2004/009542，P33-38；Journal of Medicinal Chemistry(医药化学杂志)，2006，Vol 49，No.7，P2143-2146；Org.Lett.Vol 10，No 12，2008，P 2369-2372；WO 00/47212，P245-250；WO 2009036055 A1，P57)。
尤其是，如式(IVa)中定义的前体4-7-二(d-)氟吲哚-5-酚在之前没有报道并且可以用同样的方式制备。
例如，如方案1例示的，前体(IV)可以经由多个步骤制备自商购获得的起始原料。而且可以利用各种合成路线来制备所述化合物。
方案1
本发明中式(IIa，IIb和IIc)的化合物的制备可以通过本领域已知的方法进行。
如方案2所显示的，嘧啶衍生物(IIa)可以通过以下方式合成，使2，4，6-三氯嘧啶或4，6-二氯-2-(甲基磺酰基)嘧啶与一系列取代的吲哚(idole)-5-酚反应，得到化合物b的二氯嘧啶中间体，其可以与WH反应产生化合物c的高级一氯中间体。最后的氯被RH的置换可以通过升高温度实现，得到最终的化合物(IIa)。反应可以分步或一锅法进行。备选的次序也可以用来制备嘧啶衍生物。以相同方式，也可以合成化合物IIb和IIc。
方案2
反应优选在惰性溶剂存在下进行。对于要采用的溶剂的性质没有特别限制，只要它对所涉及的反应或试剂没有不利影响并且它可以溶解所述试剂(至少在一定程度上)。合适的溶剂的实例包括：脂肪族烃，如己烷，庚烷，轻石油(ligroin)和石油醚；芳族烃，如苯，甲苯和二甲苯；卤代烃，尤其芳族和脂肪族烃，如二氯甲烷，氯仿，四氯化碳，二氯乙烷，氯苯和二氯苯；酯，如甲酸乙酯，乙酸乙酯，乙酸丙酯，乙酸丁酯和碳酸二乙酯；醚，如二乙醚，二异丙基醚，四氢呋喃，二烷，二甲氧基乙烷和二甘醇二甲醚；酮，如丙酮，甲乙酮，甲基异丁基酮，异佛尔酮和环己酮；硝基化合物，其可以是硝基烷烃或硝基芳烃(nitroaranes)，如硝基乙烷和硝基苯；腈，如乙腈和异丁腈；酰胺，其可以是脂肪酸酰胺，如甲酰胺，二甲基甲酰胺，二甲基乙酰胺和六甲基磷酰三胺；和亚砜，如二甲亚砜和环丁砜。
反应可以在宽范围的温度下发生，并且精确的反应温度对于本发明不是关键。通常，我们发现在-50℃至100℃的温度下方便地实现所述反应。
本发明提供作为一种或多种活性药物和药用载体的制剂的物质的组合物。在这方面，本发明提供用于给药给哺乳动物对象的组合物，其可以包含式I的化合物，或它的药用盐。
本发明的化合物的药用盐包括衍生自药用无机和有机酸和碱的那些盐。合适的酸盐的实例包括乙酸盐，己二酸盐，藻酸盐，天冬氨酸盐，苯甲酸盐，苯磺酸盐，硫酸氢盐，丁酸盐，柠檬酸盐，樟脑酸盐，樟脑磺酸盐，环戊烷丙酸盐，二葡糖酸盐，十二烷基硫酸盐，乙磺酸盐，甲酸盐，富马酸盐，葡庚糖酸盐，甘油磷酸盐，乙醇酸盐，半硫酸盐，庚酸盐，己酸盐，盐酸盐，氢溴酸盐，氢碘酸盐，2-羟基，乙磺酸盐，乳酸盐，马来酸盐，丙二酸盐，甲磺酸盐，2-萘磺酸盐，烟酸盐，硝酸盐，草酸盐，棕榈酸盐，果胶酸盐，过硫酸盐，3-苯基丙酸盐，磷酸盐，苦味酸盐，新戊酸盐，丙酸盐，水杨酸盐，琥珀酸盐，硫酸盐，酒石酸盐，硫氰酸盐，甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。其他酸，如草酸，虽然以其自身不是药用的，但是可以在制备可用作在获得本发明的化合物及其药用酸加成盐中的中间体的盐中采用。
衍生自合适碱的盐包括碱金属(例如，钠和钾)，碱土金属(例如，镁)，铵和N+(C1-4烷基)4盐。本发明还设计了本文公开的化合物的任何碱性含氮基团的季铵化。水或油溶性或可分散产物可以通过这样的季铵化获得。
本发明的组合物可以经口、胃肠外、吸入喷雾、局部、直肠、经鼻、含服、阴道或经由植入的储药器给药。如本文使用的，术语“胃肠外”包括皮下、静脉内、肌肉内、动脉内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或灌注技术。优选地，组合物经口、腹膜内或静脉内给药。
本发明的药用组合物可以以任何经口可接受的剂型经口给药，这包括但不限于胶囊、片剂、含片、酏剂、混悬剂、糖浆、薄片、口香糖、水混悬剂或溶液。
口服组合物可以含有另外的成分如：粘合剂如微晶纤维素，黄蓍胶或明胶；赋形剂如淀粉或乳糖，崩解剂如褐藻酸，玉米淀粉等；润滑剂如硬脂酸镁；助流剂如胶体二氧化硅；和甜味剂如蔗糖或糖精或增香剂如薄荷，水杨酸甲酯或橘子香精(orange flavoring)。当剂量单位形式是胶囊时，它可以另外地含有液体载体如脂肪油。其他剂量单位形式可以含有改变剂量单位的物理形式的其他各种材料，如，例如，包衣。因此，片剂或丸剂可以用糖、虫胶或其他肠包衣剂进行包衣。除了活性成分之外，糖浆可以含有蔗糖作为甜味剂和某些防腐剂、染料以及着色剂和香料。在制备这些各种组合物中使用的材料在使用的量上应该是药学或兽医学纯的并且无毒的。
用于肠胃外治疗给药的目的，活性成分可以结合到溶液或混悬液中。所述溶液或混悬液还可以包括以下组分：无菌稀释剂如注射用水，盐水溶液，固定油，聚乙二醇，甘油，丙二醇或其他合成溶剂；抗菌剂如苄醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂如乙二胺四乙酸；缓冲剂如乙酸盐，柠檬酸盐或磷酸盐和用于调节张性的试剂如氯化钠或右旋糖。肠胃外制剂可以封装在胶囊、一次性注射器或由玻璃或塑料制成的多剂量瓶中。
适合于注射使用的药物形式包括无菌溶液，分散液，乳液和无菌粉末。最终形式应当在制造和储存的条件下是稳定的。此外，最终药物形式应当针对污染被保护并且因此应当能够抑制微生物如细菌或真菌的生长。可以给药单个静脉内或腹膜内剂量。备选地，可以利用缓慢的长期灌注或多个短期每日灌注，典型地持续1至8天。也可以利用隔天用药或每几天用药一次。
无菌的注射液可以通过将所需量的化合物结合到一种或多种恰当溶剂中制备，可以根据需要向该溶剂中添加以上列出的或本领域技术人员已知的其他成分。无菌注射液可以通过将所需量的化合物与根据需要的各种其他成分结合到恰当溶剂中而制备。然后可以进行消毒程序如过滤。典型地，分散液可以通过通过将化合物结合到无菌媒介物中制备，该媒介物还含有分散介质和如上所示的所需的其他成分。在无菌粉末的情况下，优选方法包括真空干燥或冷冻干燥，向其中添加任何所需成分。
合适的药物载体包括无菌水；盐水，右旋糖；在水或盐水中的右旋糖；蓖麻油和环氧乙烷(每摩尔蓖麻油混合约30至约35摩尔的环氧乙烷)的缩合产物；液体酸；低级链烷醇；油如玉米油；花生油，芝麻油等，具有乳化剂如脂肪酸的单-或二-甘油酯，或磷脂，例如，卵磷脂等；二醇；聚亚烷基二醇；在悬浮剂例如羧甲基纤维素钠存在下的水性介质；藻酸钠；聚(乙烯基吡咯烷酮)；等等，单独地或与合适分散剂如卵磷脂一起；聚氧乙烯硬脂酸酯；等等。所述载体还可以含有佐剂如防腐剂，稳定剂，润湿剂，乳化剂等连同渗透促进剂。在所有情况下，如说明的，最终形式必须是无菌的并且还应当能够易于通过注射装置如中空针头。合适的粘度可以通过溶剂或赋形剂的正确选择而获得并维持。此外，可以利用分子或颗粒包衣如卵磷脂的使用、分散体粒度的正确选择或具有表面活性剂性能的材料的使用。
根据本发明，提供了含有三嗪衍生物的组合物和可用于体内递送纳米粒子形式的三嗪衍生物的方法，它们适合于任何前述的给药途径。
美国专利号5,916,596,6,506,405和6,537,579教导了从生物相容性聚合物如白蛋白制备纳米粒子。因此，根据本发明，提供了用于形成本发明的纳米粒子的方法，所述方法从在高剪切力(例如，超声处理，高压均化等)条件下制备的水包油乳液通过溶剂蒸发技术进行。
备选地，本发明的药用组合物可以以用于直肠给药的栓剂形式给药。这些可以通过将药剂与合适的非刺激性赋形剂混合而制备，所述赋形剂在室温下为固体但在直肠温度为液体，并因此将在直肠中熔化而释放药物。这样的材料包括可可油，蜂蜡和聚乙二醇。
本发明的药用组合物还可以局部地给药，特别是在治疗靶标包括通过局部施加容易接近的区域或器官时，包括眼部、皮肤和下方肠道的疾病。合适的局部制剂对于这些区域或器官的每一个都容易制备。
用于下方肠道的局部施加可以以直肠栓剂制剂(见上文)或以合适灌肠剂制剂实现。也可以使用局部-透皮贴剂。
对于局部施加，药用组合物可以以含有悬浮或溶解在一种或多种载体中的活性组分的合适软膏剂配制。用于本发明化合物的局部给药的载体包括，但不限于，矿物油，液体矿脂，白矿脂，丙二醇，聚氧乙烯，聚氧丙烯化合物，乳化石蜡和水。备选地，药用组合物可以以含有悬浮或溶解在一种或多种药用载体中的活性组分的合适洗剂或霜剂配制。合适载体包括，但不限于，矿物油，失水山梨醇单硬脂酸酯，聚山梨醇酯60，十六烷基酯蜡，鲸蜡硬脂醇，2-辛基十二烷醇，苄醇和水。
对于眼科使用，药用组合物可以配制为在等张的、pH调节的无菌盐水中的微粉化混悬剂，或者，优选地，配制为在等张的、pH调节的误解盐水中的溶液，有或没有防腐剂如苯扎氯铵(benzylalkonium chloride)。备选地，对于眼科使用，药用组合物可以以软膏剂如矿脂配制。
本发明的药用组合物也可以通过经鼻气溶胶或吸入给药。采用苄醇或其他合适防腐剂、吸收促进剂以增强生物利用度、氟碳和/或其他常规增溶剂或分散剂，这样的组合物根据药物制剂领域熟知的技术制备并且可以作为在盐水中的溶液制备。
最优选地，本发明的药用组合物被配制用于经口给药。
根据本发明，根据本发明，本发明的化合物可以用于治疗与细胞增殖或过度增殖相关的疾病，如癌症，其包括但不限于鼻腔、鼻旁窦、鼻咽部、口腔、口咽部、喉部、下咽部、唾液腺和副神经节瘤的肿瘤。本发明的化合物也可以用于治疗肝和胆道系统的癌症(特别是肝细胞癌(hepatocellular carcinoma))，肠癌，特别是结直肠癌(colorectal cancer)，卵巢癌(ovarian cancer)，小细胞和非小细胞肺癌(small cell and non-small cell lung cancer)，乳腺癌(breast cancer)，肉瘤(sarcomas)(包括纤维肉瘤(fibrosarcoma)，恶性纤维组织细胞瘤(malignant fibrous histiocytoma)，胚胎横纹肌肉瘤(embryonal rhabdomysocarcoma)，平滑肌肉瘤(leiomysosarcoma)，神经纤维肉瘤(neuro-fibrosarcoma)，骨肉瘤(osteosarcoma)，滑膜肉瘤(synovial sarcoma)，脂肪肉瘤(liposarcoma)和齿槽软部分肉瘤(alveolar soft part sarcoma))，中枢神经系统的赘生物(特别是脑癌(brain cancer))，和淋巴瘤(包括霍奇金淋巴瘤(Hodgkin′s lymphoma)，淋巴浆细胞样淋巴瘤(lymphoplasmacytoid lymphoma)，滤泡性淋巴瘤(follicular lymphoma)，粘膜相关的淋巴样组织淋巴瘤(mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma)，套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma)，B-谱系大细胞淋巴瘤(B-lineage large cell lymphoma)，伯基特淋巴瘤(Burkitt′s lymphoma)和T-细胞渐变性大细胞淋巴瘤(anaplastic large cell lymphoma))。
本发明的化合物和方法，无论是在单独给药还是联合其他药剂(例如，以下描述的化疗剂或蛋白治疗剂)给药时，都可用于治疗各种病症，包括但不限于，例如：卒中(stroke)，心血管疾病(cardiovascular disease)，心肌梗死(myocardial infarction)，充血性心力衰竭(congestive heart failure)，心肌病(cardiomyopathy)，心肌炎(myocarditis)，缺血性心脏病(ischemic heart disease)，冠状动脉疾病(coronary artery disease)，心源性休克(cardiogenic shock)，血管性休克(vascular shock)，肺动脉高压(pulmonary hypertension)，肺水肿(pulmonary edema)(包括心源性肺水肿(cardiogenic pulmonary edema))，胸腔积液(pleural effusions)，类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis)，糖尿病视网膜病(diabetic retinopathy)，色素性视网膜炎(retinitis pigmentosa)，和视网膜病(retinopathies)，包括糖尿病视网膜病(diabetic retinopathy)和早产儿视网膜病(retinopathy of prematurity)，炎性疾病(inflammatory diseases)，再狭窄(restenosis)，哮喘(asthma)，急性或成人型呼吸窘迫综合征(adult respiratory distress syndrome)(ARDS)，狼疮(lupus)，血管渗漏(vascular leakage)，保护免于缺血性或再灌注损伤如在器官移植、移植耐受性诱导期间发生的缺血性或再灌注损伤；在血管成形术后的缺血性或再灌注损伤；关节炎(如类风湿性关节炎，银屑病关节炎(psoriatic arthritis)或骨关节炎(osteoarthritis))；多发性硬化(multiple sclerosis)；炎性肠病(inflammatory bowel disease)，包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis)和克劳恩病(Crohn′s disease)；狼疮(全身性狼疮发作(systemic lupus crythematosis))；移植物宿主病(graft vs.host diseases)；T-细胞介导的过敏疾病(T-cell mediated hypersensitivity diseases)，包括接触性过敏反应(contact hypersensitivity)，延迟型过敏反应(delayed-type hypersensitivity)和谷蛋白敏感肠病(gluten-sensitive enteropathy)(脂泻病(Celiac disease))；1型糖尿病(Type 1diabetes)；银屑病(psoriasis)；接触性皮炎(contact dermatitis)(包括由于毒葛(poison ivy)所致的接触性皮炎)；桥本甲状腺炎(Hashimoto′s thyroiditis)；舍格伦综合征(Sjogren′s syndrome)；自身免疫性甲状腺机能亢进(Autoimmune Hyperthyroidism)，如格雷夫斯病(Graves′disease)；艾迪生病(Addison′s disease)(肾上腺的自身免疫病)；自身免疫性多腺性疾病(autoimmune polyglandular disease)(也称为自身免疫性多腺性综合征(autoimmune polyglandular syndrome))；自身免疫性脱发症(autoimmune alopecia)；恶性贫血(pernicious anemia)；白斑(vitiligo)；自身免疫性垂体功能减退症(autoimmune hypopituatarism)；吉兰-巴雷综合征(Guillain-Barre syndrome)；其他自身免疫疾病；癌症，包括其中激酶(kineses)如Src-家族激酶(Src-family kineses)被活化或过表达的那些，如结肠癌(colon carcinoma)和胸腺瘤(thymoma)，或其中激酶活性促进肿瘤生长或存活的癌症；血管球性肾炎(glomerulonephritis)，血清病(serum sickness)；uticaria；变态反应疾病(allergic diseases)如呼吸道变态反应(respiratory allergies)(哮喘，花粉症(hayfever)，变应性鼻炎(allergic rhinitis))或皮肤变态反应(skin allergies)；蕈样霉菌病(mycosis fungoides)；急性炎性反应(acute inflammatory responses)(如急性或成人型呼吸窘迫综合征和缺血性再灌注损伤)；皮肌炎；斑秃(alopecia areata)；慢性光化性皮炎(chronic actinic dermatitis)；湿疹(eczema)；贝赫切特病(Behcet′s disease)；掌拓脓包病(Pustulosis palmoplanteris)；坏疽性脓皮病(Pyoderma gangrenum)；赛塞利综合征(Sezary′s syndrome)；特应性皮炎(atopic dermatitis)；系统性硬化病(systemic schlerosis)；硬斑病(morphea)；外周肢体缺血(peripheral limb ischemia)和缺血性肢体病(ischemic limb disease)；骨病(bone disease)如骨质疏松症(osteoporosis)，软骨病(osteomalacia)，甲状旁腺功能亢进(hyperparathyroidism)，佩吉特病(Paget′s disease)，和肾性骨营养不良(renal osteodystrophy)；血管泄漏综合征(vascular leak syndromes)，包括由化疗或免疫调节剂如IL-2诱发的血管泄漏综合征；脊髓和脑损伤或创伤；青光眼(glaucoma)；视网膜疾病(retinal diseases)，包括黄斑变性(macular degeneration)；玻璃体视网膜病(vitreoretinal disease)；胰腺炎(pancreatitis)；脉管炎病(vasculatides)，包括血管炎(vasculitis)，川崎病(Kawasaki disease)，血栓闭塞性脉管炎(thromboangiitis obliterans)，韦格纳肉芽肿病(Wegener s granulomatosis)，和贝赫切特病(Behcet′s disease)；硬皮病(scleroderma)；先兆子痫(preeclampsia)；地中海贫血症(thalassemia)；卡波西肉瘤(Kaposi′s sarcoma)；希佩尔-林道病(von Hippel Lindau disease)；等等。
根据本发明，本发明的化合物可以用于治疗与不期望的细胞增殖或过度增殖相关的疾病，包括鉴别受所述疾病或病症侵袭的哺乳动物并向所述受侵袭的哺乳动物给药包含式1的化合物的组合物，其中所述疾病或病症与激酶相关。
根据本发明，本发明的化合物可以用于治疗与不期望的细胞增殖或过度增殖相关的疾病，包括鉴别受所述疾病或病症侵袭的哺乳动物并向所述受侵袭的哺乳动物给药包含式1的化合物的组合物，其中所述疾病或病症与酪氨酸激酶相关。
根据本发明，本发明的化合物可以用于治疗与不期望的细胞增殖或过度增殖相关的疾病，包括鉴别受所述疾病或病症侵袭的哺乳动物并向所述受侵袭的哺乳动物给药包含式1的化合物的组合物，其中所述疾病或病症与是丝氨酸激酶或苏氨酸激酶的激酶相关。
根据本发明，本发明的化合物可以用于治疗与不期望的细胞增殖或过度增殖相关的疾病，包括鉴别受所述疾病或病症侵袭的哺乳动物并向所述受侵袭的哺乳动物给药包含式1的化合物的组合物，其中所述疾病或病症与是Src家族激酶的激酶相关。
本发明还提供治疗受上述疾病和病症侵袭的哺乳动物的方法。可以联合载体材料以产生单个剂型的组合物的本发明的化合物的量将取决于所治疗的宿主、具体给药方式而变化。优选地，所述组合物应被配制成使得可以向接收这些组合物的患者给药0.01-100mg/kg体重/天的抑制剂的剂量。
在一个方面，本发明化合物联合化疗剂、抗炎剂、抗组织胺剂、化疗剂、免疫调节剂、治疗性抗体或蛋白激酶抑制剂(例如酪氨酸激酶抑制剂)给药给需要这样的治疗的受试者。
所述方法包括向受侵袭哺乳动物给药一种或多种本发明化合物。所述方法可以还包括给药第二活性剂，如细胞毒性剂，包括烷基化剂，肿瘤坏死因子，嵌入剂(intercalators)，微管蛋白抑制剂和拓扑异构酶抑制剂。第二活性剂可以在同一组合物中或在第二组合物中共同给药。合适的第二活性剂的实例包括，但不限于，细胞毒性药物如阿西维辛(Acivicin)；阿柔比星(Aclarubicin)；阿考达唑(Acodazole)盐酸盐；AcrQnine；阿多来新(Adozelesin)；阿地白介素(Aldesleukin)；六甲蜜胺(Altretamine)；安波霉素(Ambomycin)；阿美蒽醌(Ametantrone)乙酸盐；氨基苯乙哌啶酮(Aminoglutethimide)；安吖啶(Amsacrine)；阿那曲唑(Anastrozole)；安曲霉素(Anthramycin)；天冬酰胺酶(Asparaginase)；曲林菌素(Asperlin)；阿扎胞苷(Azacitidine)；阿扎替派(Azetepa)；阿佐霉素(Azotomycin)；巴马司他(Batimastat)；苯佐替派(Benzodepa)；比卡鲁胺(Bicalutamide)；比生群(Bisantrene)盐酸盐；双奈法德(Bisnafide)二甲磺酸盐；比折来新(Bizelesin)；博来霉素(Bleomycin)硫酸盐；布喹那钠(Brequinar Sodium)；溴匹立明(Bropirimine)；白消安(Busulfan)；放线菌素c(Cactinomycin)；卡普睾酮(Calusterone)；卡醋胺(Caracemide)；卡贝替姆(Carbetimer)；卡铂(Carboplatin)；卡莫司汀(Carmustine)；卡柔比星(Carubicin)盐酸盐；卡折来新(Carzelesin)；西地芬戈(Cedefingol)；苯丁酸氮芥(Chlorambucil)；西罗霉素(Cirolemycin)；顺铂(Cisplatin)；克拉屈滨(Cladribine)；克立那托(Crisnatol)甲磺酸盐；环磷酰胺(Cyclophosphamide)；阿糖胞苷(Cytarabine)；氮烯唑胺(Dacarbazine)；放线菌素D(Dactinomycin)；柔红霉素(Daunorubicin)盐酸盐；地西他滨(Decitabine)；右奥马铂(Dexormaplatin)；地扎胍宁(Dezaguanine)；地扎胍宁(Dezaguanine)甲磺酸盐；地吖醌(Diaziquone)；多西他赛(Docetaxel)；多柔比星(Doxorubicin)；多柔比星(Doxorubicin)盐酸盐；屈洛昔芬(Droloxifene)；屈洛昔芬(Droloxifene)柠檬酸盐；屈他雄酮(Dromostanolone)丙酸盐；达佐霉素(Duazomycin)；依达曲沙(Edatrexate)；依氟鸟氨酸(Eflomithine)盐酸盐；依沙芦星(Elsamitrucin)；恩洛铂(Enloplatin)；恩普氨酯(Enpromate)；依匹哌啶(Epipropidine)；表阿霉素(Epirubicin)盐酸盐；厄布洛唑(Erbulozole)；依索比星(Esorubicin)盐酸盐；阿雌莫司汀(Estramustine)；阿雌莫司磷酸钠(Estramustine Phosphate Sodium)；依他硝唑(Etanidazole)；乙碘油131(Ethiodized Oil 131)；依托泊苷(Etoposide)；依托泊苷(Etoposide)磷酸盐；氯苯氨啶(Etoprine)；法倔唑(Fadrozole)盐酸盐；法扎拉滨(Fazarabine)；4-羟基苯基维甲酰胺(Fenretinide)；氟尿苷(Floxuridine)；氟达拉滨(Fludarabine)磷酸盐；氟尿嘧啶(Fluorouracil)；氟西他滨(Flurocitabine)；磷喹酮(Fosquidone)；福司曲星钠(Fostriecin Sodium)；吉西他滨(Gemcitabine)；吉西他滨(Gemcitabine)盐酸盐；金Au 198；羟基脲(Hydroxyurea)；伊达比星(Idarubicin)盐酸盐；异环磷酰胺(Ifosfamide)；伊莫福新(Ilmofosine)；干扰素α-2a(Interferon Alfa-2a)；干扰素α-2b；Interferon Alfa-n1；干扰素α-n3；干扰素β-□a；干扰素γ-Ib；异丙铂(Iproplatin)；伊立替康(Irinotecan)盐酸盐；兰瑞肽(Lanreotide)乙酸盐；来曲唑(Letrozole)；亮丙瑞林(Leuprolide)乙酸盐；利阿唑(Liarozole)盐酸盐；洛美曲索钠(Lometrexol Sodium)；洛莫司汀(Lomustine)；洛索蒽醌(Losoxantrone)盐酸盐；马索罗酚(Masoprocol)；美坦辛(Maytansine)；氮芥(Mechlorethamine)盐酸盐；甲地孕酮(Megestrol)乙酸盐；美仑孕酮(Melengestrol)乙酸盐；美法仑(Melphalan)；美诺立尔(Menogaril)；巯嘌呤(Mercaptopurine)；甲氨蝶呤(Methotrexate)；甲氨蝶呤钠(Methotrexate Sodium)；氯苯氨啶(Metoprine)；美妥替哌(Meturedepa)；米丁度胺(Mitindomide)；米托卡星(Mitocarcin)；丝裂红素(Mitocromin)；米托洁林(Mitogillin)；米托马星(Mitomalcin)；丝裂霉素(Mitomycin)；米托司培(Mitosper)；米托坦(Mitotane)；米托蒽醌(Mitoxantrone)盐酸盐；霉酚酸(Mycophenolic Acid)；诺考达唑(Nocodazole)；诺拉霉素(Nogalamycin)；右奥马铂(Ormaplatin)；奥昔舒仑(Oxisuran)；紫杉醇(Paclitaxel)；培门冬酶(Pegaspargase)；培利霉素(Peliomycin)；戊氮芥(Pentamustine)；培洛霉素(Peplomycin)硫酸盐；培磷酰胺(Perfosfamide)；哌泊溴烷(Pipobroman)；哌泊舒凡(Piposulfan)；吡罗蒽醌(Piroxantrone)盐酸盐；普卡霉素(Plicamycin)；普洛美坦(Plomestane)；卟吩姆钠(Porfimer Sodium)；泊非霉素(Porfiromycin)；泼尼莫司汀(Prednimustine)；丙卡巴肼(Procarbazine)盐酸盐；嘌罗霉素(Puromycin)；嘌罗霉素(Puromycin)盐酸盐；吡唑呋喃菌素(Pyrazofurin)；利波腺苷(Riboprine)；罗谷亚胺(Rogletimide)；沙芬戈(Safmgol)；沙芬戈(Safingol)盐酸盐；司莫司汀(Semustine)；辛曲秦(Simtrazene)；磷乙酰天冬氨酸钠(Sparfosate Sodium)；司帕霉素(Sparsomycin)；锗螺胺(Spirogermanium)盐酸盐；螺莫司汀(Spiromustine)；螺铂(Spiroplatin)；链黑霉素(Streptonigrin)；链佐星(Streptozocin)；氯化锶Sr 89；磺氯苯脲(Sulofenur)；他利霉素(Talisomycin)；轮烷(Taxane)；紫杉烷(Taxoid)；替可加兰钠(Tecogalan Sodium)；替加氟(Tegafur)；替洛蒽醌(Teloxantrone)盐酸盐；替莫泊芬(Temoporfin)；替尼泊苷(Teniposide)；替罗昔隆(Teroxirone)；睾内酯(Testolactone)；硫咪嘌呤(Thiamiprine)；硫鸟嘌呤(Thioguanine)；噻替派(Thiotepa)；噻唑羧胺核苷(Tiazofurin)；替拉扎明(Tirapazamine)；托泊替康(Topotecan)盐酸盐；托瑞米芬(Toremifene)柠檬酸盐；曲托龙(Trestolone)乙酸盐；曲西立滨(Triciribine)磷酸盐；三甲曲沙(Trimetrexate)；三甲曲沙(Trimetrexate)葡糖醛酸盐；曲普瑞林(Triptorelin)；妥布氯唑(Tubulozole)盐酸盐；尿嘧啶氮芥(Uracil Mustard)；乌瑞替派(Uredepa)；伐普肽(Vapreotide)；维替泊芬(Verteporfin)；长春花碱(Vinblastine)硫酸盐；长春新碱(Vincristine)硫酸盐；长春地辛(Vindesine)；长春地辛(Vindesine)硫酸盐；长春匹定(Vinepidine)硫酸盐；长春甘酯(Vinglycinate)硫酸盐；长春罗新(Vinleurosine)硫酸盐；长春瑞滨(Vinorelbine)酒石酸盐；长春罗定(Vinrosidine)硫酸盐；长春利定(Vinzolidine)硫酸盐；伏氯唑的(Vorozole)；折尼铂(Zeniplatin)；净司他丁(Zinostatin)；和佐柔比星(Zorubicin)盐酸盐。
根据本发明，所述化合物和组合物可以联合其他药剂以细胞毒性以下水平使用以在非肿瘤性病症如心脏疾病、卒中和神经变性疾病的治疗中实现高度选择性活性(Whitesell等，Curr Cancer Drug Targets(2003)，3(5)，349-58)。
可以联合本发明化合物给药的示例性治疗剂包括EGFR抑制剂，如吉非替尼(gefitinib)，厄洛替尼(erlotinib)和西妥昔单抗(cetuximab)。Her2抑制剂包括canertinib，EKB-569和GW-572016。还包括Src抑制剂，dasatinib，以及Casodex(比卡鲁胺(bicalutamide))，他莫昔芬(Tamoxifen)，MEK-1激酶抑制剂，MARK激酶抑制剂，PI3抑制剂，和PDGF抑制剂，如伊马替尼(imatinib)，Hsp90抑制剂，如17-AAG和17-DMAG。还包括抗生成血管和抗脉管剂，其通过中断至实体肿瘤的血流而通过剥夺癌细胞的营养而使它们休眠。也可以利用阉割，其也使得雄性激素依赖性癌瘤为非增生性的。还包括IGF1R抑制剂，非受体和受体酪氨酸激酶的抑制剂，和整联蛋白的抑制剂。
本发明的药物组合物和方法还可以组合其他蛋白治疗剂如细胞因子，免疫调节剂和抗体。如本文使用的，术语″细胞因子″涵盖趋化因子，白介素，淋巴因子，单核因子，集落刺激因子，和受体相关蛋白，及其功能性片段。如本文使用的，术语″功能性片段″是指具有通过定义的功能测定鉴别的生物学功能或活性的多肽或肽。细胞因子包括内皮单核细胞活化多肽II(EMAP-II)，粒细胞-巨噬细胞-CSF(GM-CSF)，粒细胞-CSF(G-CSF)，巨噬细胞-CSF(M-CSF)，IL-1，IL-2，IL-3，IL-4，IL-5，IL-6，IL-12，和IL-13，干扰素等，并且其与细胞或细胞机制中的特定生物学、形态学或表型改变相关。
用于联合治疗的其他治疗剂包括环孢菌素(例如，环孢菌素A)，CTLA4-Ig，抗体如ICAM-3，抗-IL-2受体(抗-Tac)，抗-CD45RB，抗-CD2，抗-CD3(OKT-3)，抗-CD4，抗-CD80，抗-CD86，阻断CD40和gp39之间的相互作用的试剂，如对于CD40和对于gpn39(即CD154)特异性的抗体，构建自CD40和gp39的融合蛋白(CD40Ig和CD8gp39)，NF-κB功能的抑制剂，如核转位抑制剂，如脱氧精胍菌素(deoxyspergualin)(DSG)，胆固醇生物合成抑制剂如HM：G CoA还原酶抑制剂(洛伐他汀(lovastatin)和辛伐他汀(simvastatin))，非甾类抗炎药物(non-steroidal antiinflammatory drugs)(NSAIDs)如布洛芬(ibuprofen)和环加氧酶抑制剂如罗非昔布(rofecoxib)，甾类如泼尼松(prednisone)或地塞米松(dexamethasone)，金化合物，抗增殖剂(antiproliferative agents)如甲氨蝶呤(methotrexate)，FK506(他罗利姆(tacrolimus)，普乐可复(Prograf))，吗替麦考酚酯(mycophenolate mofetil)，细胞毒性药物如硫唑嘌呤(azathioprine)和环磷酰胺(cyclophosphamide)，TNF-a抑制剂如替尼达普(tenidap)，抗-TNF抗体或可溶性TNF受体，和雷帕霉素(rapamycin)(西罗莫司(sirolimus)或雷帕鸣(Rapamune))或其衍生物。
当其他治疗剂联合本发明的化合物使用时，它们可以例如以Physician Desk Reference(PDR)中提及的量或者如由本领域普通技术人员以其他方式确定的量给药。
本发明还涵盖药物组合物，其包含本文公开的化合物中的任意一种或多种，并且所述化合物为其药用盐、水合物、溶剂化物、晶型和单个立体异构体(例如，非对映异构体，对映异构体)的形式，以及作为在具有药用载体的组合物的形式。这些包括，但不限于，其中本发明的化合物以中性或盐形式配制到组合物中。
“药用盐”包括酸加成盐(与蛋白质的游离氨基基团形成)，其与无机酸如，例如，盐酸或磷酸形成，或如有机酸如乙酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等形成。与游离羧基基团形成的盐也可以衍生自无机碱如，例如，氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙或氢氧化铁，并且这样的无机碱如异丙基胺、三甲胺、组氨酸和普鲁卡因等。
“盐”是两种可电离组分(例如，当溶解在水中时)的化学组合，相对于彼此一种酸性而另一种碱性。如果以盐形式，则药物可以是酸性组分或碱性组分。
“药用盐”包括化合物的任何盐形式，其中所述盐对于动物摄取是安全的(例如，当经口服用时对人无毒)。可以根据本发明使用的示例性的这样的盐包括，但不限于，2-羟基，乙磺酸盐，2-萘磺酸盐，3-羟基，-2-萘甲酸盐，3-苯基丙酸盐，乙酸盐，己二酸盐，藻酸盐，氨芪磺酸盐，天冬氨酸盐，苯磺酸盐，苯甲酸盐，苯磺酸盐，碳酸氢盐，硫酸氢盐，酒石酸氢盐，硼酸盐，丁酸盐，乙二胺四乙酸钙，樟脑酸盐，樟脑磺酸盐，右旋樟脑磺酸盐，碳酸盐，柠檬酸盐，克拉维酸盐，环丙烷丙酸盐，二葡糖酸盐，十二烷基硫酸盐，乙二胺四乙酸盐，乙二磺酸盐，丙酸酯十二烷硫酸盐，乙磺酸盐，乙磺酸盐，finnarate，葡庚酸盐，葡糖庚酸盐，葡糖酸盐，谷氨酸盐，甘油磷酸盐，乙醇酰阿散酸盐，半硫酸盐，庚酸盐，六氟磷酸盐，己酸盐，己基间苯二甲酸盐，海巴明(hydrabamine)，氢溴酸盐，盐酸盐，氢碘酸盐，羟基，萘甲酸盐，碘化物，异硫代硫酸盐，乳酸盐，乳糖醛酸盐，月桂酸盐，月桂基磺酸盐，苹果酸盐，马来酸盐，扁桃酸盐，甲磺酸盐，甲磺酸盐，甲基溴，甲基硝酸盐，甲基硫酸盐，粘酸盐，萘酸盐，萘磺酸盐，烟酸盐，硝酸盐，N-甲基葡糖胺铵盐，油酸盐，草酸盐，棕榈酸盐，扑酸盐，泛酸盐，果胶酸盐，过硫酸盐，磷酸盐，磷酸盐二磷酸盐，苦味酸盐，新戊酸盐，聚半乳糖醛酸盐，丙酸盐，对甲苯磺酸盐，糖酸盐，水杨酸盐，硬脂酸盐，碱式乙酸盐，琥珀酸盐，硫酸盐，磺基水杨酸盐，suramate，单宁酸盐，酒石酸盐，8-氯茶碱盐，硫氰酸盐，甲苯磺酸盐，三乙基碘，十一烷酸盐，和戊酸盐等(还参见S.M.Berge等，Pharmaceutical Salts，J.Pharm.Scis.，1977，66：1-18；P.L.Gould，Salt selection for basic drugs，Int′l J.Pharms.1986，33：201-17.)
“溶剂化物”是这样的组合物，其在化合物从溶液结晶的过程期间，将那个溶剂的分子俘获在形成晶格中。
“水合物”是其中溶剂为水的溶剂化物。
“晶”型是这样的固体组合物，其中构成该组合物的分子堆叠在重复晶格结构中。当多于一种的晶格模式对于相同分子构成的组合物是可能的时，不同的组合物被称为“多晶型”。
“非对映异构体”是这样的立体异构体，其不涉及作为物体和镜像，但在关于一个四面体、sp3-杂化碳的三-二维空间中在排列上仍然是不同的。
“对映异构体”是彼此为镜像但不可重合(不相同)的两个立体异构体中的一个。
“药用载体”是任何赋形剂，其是无毒的并且有助于药物功能(还参见，Rowe RC等，Handbook of Pharmaceutical Excipients(药物赋形剂手册)，5th ed.，2006)。
实施例
本发明还涵盖药物组合物，其包含本文公开的化合物中的任意一种或多种，并且所述化合物为其药用盐、水合物、溶剂化物、晶型和单个立体异构体(例如，非对映异构体，对映异构体)的形式，以及作为在具有药用载体的组合物的形式。这些包括，但不限于，其中本发明的化合物以中性或盐形式配制到组合物中。
“药用盐”包括酸加成盐(与蛋白质的游离氨基基团形成)，其与无机酸如，例如，盐酸或磷酸形成，或如有机酸如乙酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等形成。与游离羧基基团形成的盐也可以衍生自无机碱如，例如，氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙或氢氧化铁，并且这样的无机碱如异丙基胺、三甲胺、组氨酸和普鲁卡因等。
“盐”是两种可电离组分(例如，当溶解在水中时)的化学组合，相对于彼此一种酸性而另一种碱性。如果以盐形式，则药物可以是酸性组分或碱性组分。
“药用盐”包括化合物的任何盐形式，其中所述盐对于动物摄取是安全的(例如，当经口服用时对人无毒)。可以根据本发明使用的示例性的这样的盐包括，但不限于，2-羟基，乙磺酸盐，2-萘磺酸盐，3-羟基，-2-萘甲酸盐，3-苯基丙酸盐，乙酸盐，己二酸盐，藻酸盐，氨芪磺酸盐，天冬氨酸盐，苯磺酸盐，苯甲酸盐，苯磺酸盐，碳酸氢盐，硫酸氢盐，酒石酸氢盐，硼酸盐，丁酸盐，乙二胺四乙酸钙，樟脑酸盐，樟脑磺酸盐，右旋樟脑磺酸盐，碳酸盐，柠檬酸盐，克拉维酸盐，环丙烷丙酸盐，二葡糖酸盐，十二烷基硫酸盐，乙二胺四乙酸盐，乙二磺酸盐，丙酸酯十二烷硫酸盐，乙磺酸盐，乙磺酸盐，finnarate，葡庚酸盐，葡糖庚酸盐，葡糖酸盐，谷氨酸盐，甘油磷酸盐，乙醇酰阿散酸盐，半硫酸盐，庚酸盐，六氟磷酸盐，己酸盐，己基间苯二甲酸盐，海巴明(hydrabamine)，氢溴酸盐，盐酸盐，氢碘酸盐，羟基，萘甲酸盐，碘化物，异硫代硫酸盐，乳酸盐，乳糖醛酸盐，月桂酸盐，月桂基磺酸盐，苹果酸盐，马来酸盐，扁桃酸盐，甲磺酸盐，甲磺酸盐，甲基溴，甲基硝酸盐，甲基硫酸盐，粘酸盐，萘酸盐，萘磺酸盐，烟酸盐，硝酸盐，N-甲基葡糖胺铵盐，油酸盐，草酸盐，棕榈酸盐，扑酸盐，泛酸盐，果胶酸盐，过硫酸盐，磷酸盐，磷酸盐二磷酸盐，苦味酸盐，新戊酸盐，聚半乳糖醛酸盐，丙酸盐，对甲苯磺酸盐，糖酸盐，水杨酸盐，硬脂酸盐，碱式乙酸盐，琥珀酸盐，硫酸盐，磺基水杨酸盐，suramate，单宁酸盐，酒石酸盐，8-氯茶碱盐，硫氰酸盐，甲苯磺酸盐，三乙基碘，十一烷酸盐，和戊酸盐等(还参见S.M.Berge等，Pharmaceutical Salts，J.Pharm.Scis.，1977，66：1-18；P.L.Gould，Salt selection for basic drugs，Int′l J.Pharms.1986，33：201-17.)
“溶剂化物”是这样的组合物，其在化合物从溶液结晶的过程期间，将那个溶剂的分子俘获在形成晶格中。
“水合物”是其中溶剂为水的溶剂化物。
“晶”型是这样的固体组合物，其中构成该组合物的分子堆叠在重复晶格结构中。当多于一种的晶格模式对于相同分子构成的组合物是可能的时，不同的组合物被称为“多晶型”。
“非对映异构体”是这样的立体异构体，其不涉及作为物体和镜像，但在关于一个四面体、sp3-杂化碳的三-二维空间中在排列上仍然是不同的。
“对映异构体”是彼此为镜像但不可重合(不相同)的两个立体异构体中的一个。
“药用载体”是任何赋形剂，其是无毒的并且有助于药物功能(还参见，Rowe RC等，Handbook of Pharmaceutical Excipients(药物赋形剂手册)，5th ed.，2006)。
提供以下实施例以进一步举例说明书本发明，但是当然不应以任何方式解释为限制其范围。
除非另有说明，所有实验在无水条件(即干燥溶剂)下在氩气氛中使用烘箱干燥的设备并且采用在处理空气敏感物料中的标准技术进行。碳酸氢钠(NaHCO3)和氯化钠(盐水)的水溶液是饱和的。
分析用薄层色谱(TLC)在Merck Kiesel凝胶60F254板上进行，其中通过紫外光和/或茴香醛、高锰酸钾或磷钼酸浸渍而可视化。
NMR谱图：1H核磁共振谱在400MHz记录。数据提供如下：化学位移，多样性(s＝单峰，d＝双重峰，t＝三重峰，q＝四重峰，qn＝五重峰，dd＝双峰的双重峰，m＝多重峰，bs＝宽的单峰)，偶合常数(J/Hz)和积分。偶合常数直接从光谱取得和计算并且未经校正。
低分辨率质谱：使用电喷射(ES+)离子化。引述了质子化的母离子(M+H)或母钠离子(M+Na)或最高质量的片段。除非另有说明，分析梯度由在水中的10％ACN在5分钟内升至100％ACN组成。
高效液相色谱(HPLC)用来分析三嗪衍生物的纯度。HPLC在Phenomenex Synergi Polar-RP，4u，80A，150x4.6mm柱上进行，使用装配有SPD-M10A Phosphodiode阵列检测器的vShimadzusystem。流动相A为水并且流动相B为乙腈，其中梯度为在60分钟内从20％至80％B，并在A/B(80∶20)再平衡10分钟。UV检测在220和54nm。
实施例1
250mL烧瓶中装入叔丁醇钾(5.75g，51.26mmol)和四氢呋喃(50mL)。将所得悬浮液冷却至5-10℃，然后加入乙酰乙酸乙酯(6.67g，51.26mmol)。控制添加速率以使反应器的内部温度不超过15℃。所得混合物变为均质并且颜色为浅黄色。在添加完成后，将反应混合物冷却至0℃然后加入在四氢呋喃(20mL)中的2，3，4，6-四氟硝基苯(5.00g，25.63mol)。在添加完成后，将所得褐色反应混合物在约0℃(冰浴)搅拌30分钟。缓慢加入1N HCl并且该褐色溶液最终变为亮黄色溶液。水相的pH为pH6。混合物用乙酸乙酯(3x)萃取并且合并的有机萃取物用盐水(50mL)洗涤并在真空浓缩，得到橙色油状物。
将以上获得的油状物装入250L圆底烧瓶中并溶解在冰醋酸(25mL)中。然后加入硫酸(浓，15mL)并且除了轻微放热之外，观察到剧烈气体逸出。启动搅拌并将反应混合物在70℃加热7小时，此后TLC分析指示100％转化。将反应混合物冷却至15℃至20℃之间并加入乙酸乙酯(200mL)，接着加入水(100mL)。缓慢加入饱和NaOH水溶液以调节pH～7。将混合物用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水洗涤。将褐色有机萃取物在减压下浓缩，得到粗制化合物，为褐色油状物。
粗产物通过柱色谱(硅胶，0-30％乙酸乙酯，在己烷中)纯化，得到所需化合物3.00g(，50％收率，1)。另一种组分是异构体(较少的产物，1.00g，16％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.01(ddd，J＝17.3Hz，J＝10.4Hz，J＝6.7Hz，1H)，4.15(d，J＝1.7Hz，2H)，2.24(s，3H)。
实施例2
将化合物1(2.82g，12.10mmol)和碳酸钾(1.83g，13.30mmol)在甲醇(50mL)中的混合物在35℃加热1.5小时。检查TLC并且起始原料被消耗。然后冷却反应混合物并在真空浓缩以除去大多数甲醇。剩余物用乙酸乙酯(100mL)和水稀释。混合物用2N HCl中和至PH 4～5。混合物用乙酸乙酯/己烷(95/5，3X100ml)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩，得到黄色固体(2)2.90g(98％收率)，其未经纯化直接用于下一步骤反应。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.47(dd，J＝12.7Hz，J＝7.4Hz，1H)，4.07(d，J＝1.96Hz，2H)，3.95(s，3H)，2.20(s，3H)。
实施例3
方法1：将来自之前步骤的1-(25-二氟-3-甲氧基-6-硝基苯基)-丙-2-酮(化合物2)和氯化吡啶(5当量)的混合物在175℃搅拌120分钟。将反应物冷却至室温，用IN HCl和乙酸乙酯稀释并过滤。滤液用盐水(2x)洗涤，干燥并真空浓缩，得到化合物3，1-(2-氟-3-羟基-6硝基苯基)-丙-2-酮，为粉红色固体，其未经进一步纯化用于下一步骤。
方法2：将化合物1(33.0g，141.5mmol)，NaOAc(134.8g，7.5eq)和二甲基甲酰胺(450mL)的混合物在65℃搅拌12h。在减压下蒸发溶剂。粗制剩余物溶解在水(800mL)和EtOAc(200mL)中。混合物用EtOAc(2x400mL)萃取。有机层进一步用盐水(1x150mL)洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩，得到化合物3(40g)。粗制剩余物未经进一步纯化用于下一步骤。
实施例4
在室温，向连二亚硫酸钠(15.91g，91.36mmol)在水(150mL)中的溶液中逐滴加入化合物2(2.80g，11.42mmol)在二烷(17ml)中的溶液。在添加后，将混合物在室温搅拌直至TLC分析指示没有剩余的起始材料(过夜)。在完成后，通过过滤收集形成的白色固体并用水(3x15ml)洗涤。固体在真空下干燥过夜，得到所需产物4，为白色固体(820mg，36％收率)。该化合物未经纯化直接用于下一步骤反应。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.41(br，1H)，6.82(dd，J＝12.1Hz，J＝6.2Hz，1H)，6.17(s，1H)，3.77(s，3H)，2.34(s，3H)；ESI-MS：对于(C10H9F2NO)计算197，实测198(MH+).
实施例5
方法1：在-78℃，向化合物4(350mg，1.78mmol)在二氯甲烷(25ml)中的冷溶液中加入三溴化硼的溶液(1N，在DCM中，6.00mL，6.00mmol)。将混合物缓慢温热至室温并搅拌约1小时。TLC分析指示反应完成。将混合物倒入冰中，加入饱和NaHCO3。混合物用DCM(3X)萃取。有机物用盐水洗涤，干燥(Na25O4)并浓缩，得到褐色固体5(281mg，86％收率)，其未经纯化直接用于下一步骤反应。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.25(s，1H)，9.05(s，1H)，6.47(dd，J＝11.7Hz，J＝6.4Hz，1H)，6.10(s，1H)，2.32(s，3H)。
方法2：将化合物3(9.09g，39.33mmol)加入到圆底烧瓶中。加入水(200mL)，并将黄色悬浮液在室温搅拌。将连二亚硫酸钠(53g，304.42mmol)以多个部分加入并将混合物在室温搅拌直至TLC分析指示没有剩余的起始原料。在完成后，将反应混合物冷却至0℃并且黄褐色固体产物通过真空过滤收集。湿产物在高真空下干燥，得到化合物5，4，7-二氟-2-甲基-1H-吲哚-5-酚(3.80g)，将其通过如方法1中的1H NMR进行表征。
实施例6
在室温，向4，4-二氯-2-甲基磺酰基嘧啶(5.0g，25.6mmol)在DMF(20.0mL)中的溶液中加入3-氨基-5-环丙基吡唑(3.5g，28.2mmol)和DIPEA(4.9mL，28.2mmol)在DMF(5.0mL)中的溶液。加入碘化钠(4.2g，28.2mmol)并且将反应物在60℃搅拌过夜。然后加入水并且通过过滤收集固体。滤液用EtOAc萃取两次。合并的有机溶剂用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。剩余物提供化合物10，为浅黄色固体(6.2mg，96％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.14(bs，1H，NH)，10.16(bs，1H，NH)，3.31(s，1H)，2.46(s，3H，CH3)，1.88-1.84(m，1H，CH)，0.92-0.64(m，4H，Ar-H)。
实施例7
在0℃，向6-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-胺(6.0g，23.8mmol)在MeOH(160.0mL)中的溶液中在20分钟内分批加入过一硫酸氢钾(oxone)(33.7g，54.8mmol)在水(140.0mL)中的溶液。将反应物在该温度搅拌30分钟在室温搅拌过夜。然后过滤混合物并将固体再悬浮在饱和NaHCO3水溶液中。混合物过滤并且固体用水、二乙醚洗涤。固体提供化合物11，为浅黄色固体(5.6g，75％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.33(bs，1H，NH)，10.93(bs，1H，NH)，3.34(s，3H，CH3)，1.93-1.89(m，1H，CH)，0.96-0.68(m，4H，Ar-H)。
实施例8
将4，6-二氯-2-甲基磺酰基嘧啶(6.87g，30.27mmol)和2-甲基-4-氟-1-H-吲哚-5-酚(5.00g，30.27mmol)在THF(100mL)中的溶液利用干冰/异丙醇(isopropal)冷却至-70℃。将叔丁醇钾(4.25g，37.84mmole)在THF(50mL)中的悬浮液逐滴加入到反应混合物中。控制混合物的温度低于-50℃。在添加后，将反应物在-70℃搅拌1.5小时，然后在1.5小时时间内温热至室温。检查TLC并且两种起始原料被消耗。加入饱和氯化铵水溶液并且混合物用乙酸乙酯/己烷(80/20)萃取三次。合并的有机物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并浓缩。粗产物通过硅胶垫，用在己烷中的20％乙酸乙酯洗脱。浓缩收集的级分，得到所需产物，为浅黄色固体(QW660)(7.51g，79％收率)。该固体未经进一步纯化直接用于下一步骤反应。
实施例9
方法1：(从7开始)：在室温，向6-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-4-胺(0.8g，2.55mmol)在tBuOH(50mL)中的溶液中加入4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-酚(0.46g，2.80mmol)和KOtBu(0.32g，2.20mmol)。将反应物在50℃搅拌过夜。在冷却后，将反应物用DCM稀释并用饱和NaHCO3洗涤。水相用DCM/异丙醇(4∶1)萃取两次。合并的有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩。所得粗产物通过使用CH2Cl2/MeOH，在二氯甲烷中的0至5％的甲醇，通过Teledyne-Isco急骤系统纯化，提供化合物12，为浅黄色固体(0.86g，85％)。
方法2：(从8开始)：
实施例10
将6-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-2-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-4-胺(100mg，0.25mmol)和1-甲基哌嗪(0.70mL，6.25mmol)在异丙醇(2mL)中的溶液在密封管中加热至90℃过夜。在冷却后，反应混合物用二氯甲烷稀释并用饱和NaHCO3洗涤。水相用二氯甲烷/异丙醇混合物(4∶1)萃取。合并的有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩。所得粗产物通过使用CH2Cl2/MeOH，在二氯甲烷中的0至10％的甲醇，通过Teledyne-Isco急骤系统纯化，提供化合物10，为浅黄色固体(63mg，54％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.73(bs，1H，NH)，11.21(bs，H，NH)，9.21(bs，1H，NH)，7.09-6.08(m，4H，Ar-H)，5.25(bs，1H，Ar-H)，3.42(m，4H，2CH2)，2.39(s，3H，CH3)，2.35(m，4H，2CH2)，2.20(s，3H，CH3)，1.49(m，1H，CH)，0.69-0.13(m，4H，Ar-H)；ESI-MS：对于(C24H27FN8O)计算462，实测463[M-H]+。HPLC：保留时间：13.47分钟。纯度：100％。
实施例11-45
依照如实施例10中的相同程序，化合物11-45还制备自化合物9并通过LC-MS进行了表征。
实施例45
向N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-2-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-4-胺(50mg，0.11mmol)在异丙醇(1mL)中的溶液中加入1-氟-2-碘乙烷(0.02mL，0.22mmol)和K2CO3(76mg，055mmol)并在密封管中加热至75℃过夜。在冷却后，反应混合物用二氯甲烷稀释并用饱和NaHCO3洗涤。水相用二氯甲烷萃取。合并的有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩。所得粗产物通过使用CH2Cl2/MeOH，在二氯甲烷中的0至10％的甲醇，通过Teledyne-Isco急骤系统纯化，提供化合物45，为浅黄色固体(20mg，36％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.72(bs，1H，NH)，11.21(bs，H，NH)，9.21(bs，1H，NH)，7.10-6.04(m，4H，Ar-H)，5.25(bs，1H，Ar-H)，4.63-2.38(m，15H)，1.51(m，1H，CH)，0.69-0.11(m，4H，Ar-H)；ESI-MS：对于(C25H28F2N8O)计算494，实测495[M+H]+.HPLC：保留时间：15.02分钟。纯度：86％。
实施例46
在氩气下向6-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-2-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-4-胺(0.100g，0.143mmol)，1-N-boc-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3，6-二氢-2H-吡啶(0.058g，0.188mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(0.026g，0.025mmol)在二甲氧基乙烷(2mL)中的溶液中加入2M Na2CO3水溶液(0.276mL，0.552mmol)。混合物用氩气流脱气3分钟，然后将其在密封管中加热至90℃达24小时。冷却的混合物用1N NaOH猝灭并用二氯甲烷/异丙醇(8∶2)萃取。合并的有机层用无水Na2SO4干燥并在真空浓缩。剩余物利用CH2Cl2∶MeOH(9∶1)在硅胶上通过急骤色谱纯化，得到化合物46(0.036g，53％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d)：δ11.85(bs，1H)，11.24(s，1H)，9.92(bs，1H)，7.10(d，1H，J＝8.4Hz)，6.86(m，1H)，6.76(bs，1H)，6.53(bs，1H)，6.18(s，1H)，5.25(bs，1H)，4.02(m，2H)，3.50(m，2H)，2.38(bs，5H)，1.41(bs，10H)，0.65(m，2H)，-0.02(m，2H)。MS(ESI)：对于C29H32FN7O3：计算545，实测546(M+H)
实施例47
将化合物46(0.035g，0.062mmol)用在二氯甲烷中的20％三氟甲基乙酸(5mL)溶解并搅拌3小时。然后混合物用1N NaOH水溶液中和并用二氯甲烷/异丙醇(8∶2)混合物萃取。合并的有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到47(0.038g，59％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d)：δ11.84(bs，1H)，11.23(s，1H)，9.84(bs，1H)，7.09(d，1H，J＝8.4Hz)，6.86(m，1H)，6.80(bs，1H)，6.51(bs，1H)，6.18(s，1H)，5.27(bs，1H)，3.37(m，2H)，2.87(m，2H)，2.38(s，3H)，2.24(m，2H)，1.44(m，1H)，1.22(m，1H)，1.02(d，1H，J＝6.0Hz)，0.65(m，2H)，0.01(m，2H)。MS(ESI)：对于C24H24FN7O：计算445，实测446(M+H)
实施例48
将N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-2-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)-6-(1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-4-胺(0.040g，0.090mmol)，1-溴-2-氟乙烷(0.031g，0.180mmol)和K2CO3(0.062g，0.449mmol)用THF/CH3CN(4mL/4mL)溶剂混合物溶解。密封的管在75℃搅拌20小时并且在冷却后，除去溶剂至最低。将粗制物在DCM/异丙醇(8∶2)和水之间分配。有机层用饱和NaHCO3洗涤，用无水Na2SO4干燥并在真空浓缩。剩余物利用CH2Cl2∶MeOH(9∶1)在硅胶上通过急骤色谱纯化，得到化合物48(0.036g，83％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d)：δ11.83(bs，1H)，11.24(s，1H)，9.87(bs，1H)，7.10(d，1H，J＝8.4Hz)，6.86(m，1H)，6.75(bs，1H)，6.18(s，1H)，5.24(bs，1H)，4.63(m，1H)，4.53(m，1H)，3.46(m，1H)，3.40(m，1H)，3.21(m，2H)，2.78(m，1H)，2.71(m，3H)，2.37(m，5H)，1.43(m，1H)，0.65(m，2H)，-0.03(m，2H)。MS(ESI)：对于C26H27F2N7O：计算491，实测492(M+H)
实施例49
向N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-2-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)-6-(1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-4-胺(0.025g，0.056mmol)在四氢呋喃(10mL)中的溶液中加入甲醛(37％在水中，0.911g，0.112mmol)并搅拌10分钟。然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.024g，0.112mmol)并继续20小时。混合物用饱和NaHCO3猝灭并用二氯甲烷/异丙醇(8∶2)混合物萃取。合并的有机层用无水Na2SO4干燥并在真空浓缩。剩余物利用CH2Cl2∶MeOH(8∶2)在硅胶上通过急骤色谱纯化，得到化合物50(0.025g，96％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d)：δ11.82(bs，1H)，11.23(s，1H)，9.85(bs，1H)，7.09(d，1H，J＝8.4Hz)，6.84(m，1H)，6.75(m，1H)，6.18(s，1H)，5.23(m，1H)，4.06(m，1H)，3.15(m，3H)，3.05(m，2H)，2.55(m 2H)，2.37(m，5H)，2.27(s，3H)。MS(ESI)：对于C25H26FN7O：计算459，实测460(M+H)。
实施例50
在室温，向4，6-二氯-2-甲基硫烷基-嘧啶(390m g，2.00mmol)在DMF(3.0mL)中的悬浮液中加入(E)-5-(丙-1-烯-1-基)-1H-吡唑-3-胺(271mg，2.20mmol)和DIPEA(0.42mL，2.40mmol)在DMF(2.0mL)中的溶液，接着加入碘化钠(330mg，2.20mmol)。在添加后，混合物在50℃搅拌过夜。检查TLC并且起始原料被消耗。将混合物倒入水(～50mL)中并固体通过过滤收集，用水、己烷洗涤。在真空管线(vac line)上干燥后，获得所需产物(50)，为黄色固体(286mg，51％收率)。该产物未经纯化直接用于下一步反应。
实施例51
在0℃，向化合物50(280m g，1.00mmol)在甲醇(6mL)中的溶液中加入烷(1500mg，2.44mmol)的悬浮液。在添加后，将混合物在0℃℃搅拌0.5小时，然后室温搅拌1小时。检查TLC并且起始原料被消耗。将水加入到反应混合物中。混合物用乙酸乙酯萃取三次。合并的有机物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并浓缩。粗产物在柱(在DCM中的0-5％甲醇)上纯化。浓缩收集的级分，得到所需产物，为灰白色固体(51)(30mg，9.5％收率)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.55(br，1H)，10.98(br，1H)，8.00-6.00(m，4H)，3.38(s，3H)，1.90(br，3H)；ESI-MS：对于(C11H12ClN5O2S)计算313，实测314(MH+)。
实施例52
方法1：在室温，向6-氯-N-(5丙烯基-1H-吡唑-3-基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-4-胺(51)(200m g，0.63mmol)和2-甲基-4-氟-1-H-吲哚-5-酚(110mg，0.67mmol)在t-BuOH(15.0mL)中的悬浮液中加入t-BuOK(79mg，0.70mmol)。在添加后，混合物在55℃搅拌16小时。检查TLC并且起始原料被消耗。将水加入到反应混合物中。混合物用DCM/异丙醇(90/10)萃取三次。合并的有机物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并浓缩。粗产物在柱(在DCM中的0-10％甲醇)上纯化。浓缩收集的级分，得到所需产物，为粉红色固体(52)(163mg，64％收率)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.15(br，1H)，11.35(br，1H)，10.35(br，1H)，7.14(d，J＝8.8Hz，1H)，6.90(t，J＝8.0Hz，1H)，6.40(br，1H)，6.22(s，1H)，5.70-5.10(m，3H)，2.40(s，3H)，1.78(br，3H)；ESI-MS：对于(C19H16ClFN6O)计算398，实测399(MH+)。
方法2：将化合物8(5.00g，16.02mmol)，(E)-5-(丙-1-烯-1-基)-1H-吡唑-3-胺(3.45g，28.03mmol)，碘化钠(3.60g，24.03mmol)和DIPEA(4.20ml，24.03mmol)在DMF(50mL)中的溶液在65℃搅拌48小时。检查TLC并且起始原料被消耗。将混合物倒入水(500ml)中并用冰冷却。固体通过过滤收集，通过水和己烷洗涤。将固体(slides)溶解到二氯甲烷/甲醇中。将溶液浓缩至最少量的溶剂。固体通过过滤收集，通过甲醇洗涤，得到黄色固体(52)(3.88g，61％收率))。回收母液。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.15(br，1H)，11.35(br，1H)，10.35(br，1H)，7.14(d，J＝8.8Hz，1H)，6.90(t，J＝8.0Hz，1H)，6.40(br，1H)，6.22(s，1H)，5.70-5.10(m，3H)，2.40(s，3H)，1.78(br，3H)；ESI-MS：对于(C19H16ClFN6O)计算398，实测399(MH+)。
实施例53
将化合物52(1.50g，3.76mmol)，1-甲基哌嗪(2.83g，28.21mmol)和DIPEA(1.64ml，9.40mmol)在异丙醇(iso-propal)(20.0mL)和乙腈(5.0mL)中的溶液在85℃搅拌2天。检查TLC并且起始原料被消耗。浓缩反应混合物并加入水。混合物用DCM/异丙醇(isopropal)(10/1)萃取三次。合并的有机物用碳酸氢钠、盐水洗涤，用硫酸钠干燥并浓缩。粗产物从MeOH(～10mL)结晶纯化。通过过滤收集浅黄色固体，用冷MeOH(1x)洗涤，得到化合物53(1.10g，63％收率)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.80(br，1H)，11.19(br，1H)，9.30(br，1H)，7.03(d，J＝8.8Hz，1H)，6.78(t，J＝8.0Hz，1H)，6.14(s，1H)，5.80-5.60(m，2H)，5.47(s，1H)，5.20(br，1H)，3.40(br，4H)，2.43(3H，观察到溶剂峰)，2.34(s，3H)，2.27(br，4H)，1.65(d，J＝6.0Hz，3H)；ESI-MS：对于(C24H27FN8O)计算462，实测463(MH+)。
实施例54-73
依照如实施例53中的相同程序，化合物54-73还制备自化合物52并通过LC-MS进行了表征。
实施例74
将化合物68(50mg，0.11mmol)，1-氟-2-碘乙烷(40.72mg，0.23mmol)和碳酸钾(77mg，0.56mmol)在乙腈/THF(3.0mL/3.0mL)中的溶液在75℃搅拌3天。检查TLC并且起始原料被消耗。除去溶剂并加入水。混合物用DCM/异丙醇(isopropal)(9/1)萃取三次。合并的有机物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并浓缩。粗产物在柱(在DCM中的0-10％甲醇)上纯化。浓缩收集的级分，得到所需产物，为灰白色固体(74)(25mg，45％收率)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.80(br，1H)，11.24(br，1H)，9.30(br，1H)，7.09(d，J＝8.8Hz，1H)，6.83(t，J＝8.0Hz，1H)，6.19(s，1H)，5.80-5.00(m，4H)，4.49(m，2H)，3.40(br，4H)，2.69(m，2H)，2.38(m，4H)，1.68(d，J＝6.8Hz，3H)，1.10(s，3H)；ESI-MS：对于(C25H28F2N8O)计算494，实测495(MH+)。
实施例75
在氩气下，向(E)-6-氯-2-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)-N-(5-(丙-1-烯-1-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(0.075g，0.188mmol)，1-N-boc-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3，6-二氢-2H-吡啶(0.093g，0.301mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(0.019g，0.019mmol)在二甲氧基乙烷(4mL)中的溶液加入2M Na2CO3水溶液(0.206mL，0.414mmol)。混合物用氩气流脱气3分钟，然后在密封管中将其加热至90℃达24小时。冷却的混合物用1N NaOH猝灭并用二氯甲烷/异丙醇(8∶2)萃取。合并的有机层用无水Na2SO4干燥并在真空浓缩。剩余物然后用在二氯甲烷中的20％三氟甲基乙酸(5mL)溶解并搅拌3小时。反应物用1N NaOH水溶液中和并用二氯甲烷/异丙醇(8∶2)混合物萃取。合并的有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到75(0.036g，44％)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d)：δ12.02(bs，1H)，11.29(s，1H)，9.98(bs，1H)，7.11(d，1H，J＝8.4Hz)，6.87(m，1H)，6.83(bs，1H)，6.52(bs，1H)，6.20(s，1H)，5.66(m，1H)，5.56(bs，1H)，5.25(m，1H)，3.50(s，1H)，3.43(m，2H)，2.92(m，2H)，2.41(s，3H)，2.28(m，2H)，1.69(dd，3H，J＝5.2，1.2Hz)。MS(ESI)：对于C24H24FN7O：计算445，实测446(M+H)。
实施例76
将5-((4，6-二氯嘧啶-2-基)氧基)-4-氟-2-甲基-1H-吲哚(0.5g，1.60mmol)，5-甲基噻唑-2-胺(0.22g，1.92mmol)，碘化钠(0.29g，1.92mmol)和DIPEA(0.39mL，1.92mmol)在DMF(16.0mL)中的溶液在70℃搅拌过夜。将混合物缓慢加入到冰-水(10.0mL)中。混合物通过冰浴冷却并固体通过过滤收集，用水和己烷洗涤，提供化合物77，为白色固体(0.59g，95％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.34(bs，1H)，9.81(bs，H)，8.70(bs，1H)，7.22(m，1H)，7.14(m，1H)，6.97(m，1H)，6.25(m，1H)，2.40(s，3H)，2.02(s，3H)；ESI-MS：对于(C17H13ClFN5OS)计算389，实测390[M-H]+。
实施例77
将N-(6-氯-2-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-4-基)-5-甲基噻唑-2-胺(0.1g，0.26mmol)，1-甲基哌嗪(32mg，1.25mmol)，Pd(OAc)2(8.2mg，0.036mmol)和K2CO3(0.57g，4.10mmol)在THF(1.5mL)和DMF(1.0mL)中的混合物在微波中在60℃加热1.5小时。将反应混合物冷却并加入水。所得混合物用EtOAc萃取并且合并的萃取物用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥然后在减压下浓缩。所得粗产物通过使用CH2Cl2/MeOH，在二氯甲烷中的0至20％的甲醇，通过Teledyne-Isco急骤系统纯化，提供化合物77，为浅褐色固体(20mg，17％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.27(bs，1H)，9.48(bs，H)，7.35(bs，1H)，7.15-7.00(m，2H)，6.85(m，1H)，6.22(m，1H)，3.45(m，4H)，2.41(s，3H)，2.32(m，4H)，2.18(s，3H)，1.95(s，3H)；MS(ESI)：对于C22H24FN7OS：计算453，实测454(M-H)+
实施例78
依照如在实施例77中的相同程序，化合物78还制备自化合物76并通过如下进行了表征：LC-MS 441(M-H)+。
实施例79
将4，6-二氯-2-甲基磺酰基嘧啶(3.72g，16.38mmol)和2-甲基-4，7-二氟-1-H-吲哚-5-酚(3.00g，16.38mmol)在THF(100mL)中的溶液用干冰/丙酮冷却至-78℃。将叔丁醇钾(2.30g，20.47mmole)在THF(50mL)中的悬浮液逐滴加入到反应混合物中。控制混合物的温度低于-50℃。在添加完成后，反应在-78℃搅拌1小时，然后在1小时时间内温热至室温。检查TLC并且两种起始原料被消耗。加入饱和的氯化铵水溶液并且混合物用乙酸乙酯/己烷(80/20)萃取三次。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并浓缩。粗产物通过利用在己烷中的15％乙酸乙酯洗脱的硅胶垫。浓缩收集的级分，得到所需产物，为浅黄色固体(79)(4.20g，78％收率)。该固体未经进一步纯化直接用于下一步反应。
实施例80
在室温，向6-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-4-胺(0.7g，2.23mmol)在tBuOH(50mL)中的溶液中加入4，7-二氟-2-甲基-1H-吲哚-5-酚(0.45g，2.45mmol)和KOtBu(0.28g，2.45mmol)。将反应物在50℃搅拌两天。在冷却后，反应物用DCM稀释并用饱和NaHCO3洗涤。水相用DCM/异丙醇(4∶1)萃取两次。合并的有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩。所得粗产物通过使用CH2Cl2/MeOH，在二氯甲烷中的0至5％的甲醇，通过Teledyne-Isco急骤系统纯化，提供化合物80，为浅黄色固体(0.49g，53％)。
利用如在实验53(方法2)中描述的相同程序，通过化合物79与3-环丙基-1H-吡唑-5-胺反应，还可以制备化合物80。
实施例81
将6-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-2-((4，7-二氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-4-胺(80mg，0.20mmol)和1-甲基哌嗪(0.56mL，5.00mmol)在异丙醇(1mL)中的溶液在密封管中加热至90℃过夜。在冷却后，反应混合物用二氯甲烷稀释并用饱和NaHCO3洗涤。水相用二氯甲烷/异丙醇混合物(4∶1)萃取。合并的有机层用无水Na2SO4并真空浓缩。所得粗产物通过使用CH2Cl2/MeOH，在二氯甲烷中的0至10％的甲醇，通过Teledyne-Isco急骤系统纯化，提供化合物81，为浅黄色固体(33mg，36％).％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.76(bs，1H，NH)，11.70(bs，H，NH)，9.26(bs，1H，NH)，6.86-5.97(m，3H，Ar-H)，5.26(bs，1H，Ar-H)，3.43(m，4H，2CH2)，2.40(s，3H，CH3)，2.35(m，4H，2CH2)，2.20(s，3H，CH3)，1.49(m，1H，CH)，0.71-0.09(m，4H，Ar-H)；ESI-MS：对于(C24H26F2N8O)计算480，实测481[M-H]+.HPLC：保留时间：14.84分钟.纯度：100％。
实施例82-85
依照如实施例81中的相同程序，化合物82-85还制备自化合物80并通过LC-MS进行了表征。
实施例86
将化合物79(4.20g，12.72mmol)，(E)-5-(丙-1-烯-1-基)-1H-吡唑-3-胺(2.82g，22.90mmol)，碘化钠(2.86g，19.08mmol)和DIPEA(3.33ml，19.08mmol)在DMF(35mL)中的溶液在65℃搅拌48小时。检查TLC并且起始原料被消耗。混合物用冰冷却并且固体通过过滤收集，用水和己烷洗涤。将固体溶解到二氯甲烷/甲醇中。将溶液浓缩至最少量的溶剂。固体通过过滤收集，通过甲醇洗涤，得到黄色固体(1.90g)。母液通过柱纯化。收集所需的部分，浓缩并过滤，得到浅黄色固体(0.82g)。合并的固体(86)用于下一步反应(2.72g，51％)1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.15(br，1H)，11.80(br，1H)，10.40(br，1H)，6.95(dd，J＝10.8Hz，J＝5.6Hz，1H)，6.40(br，1H)，6.22(s，1H)，5.70-5.10(m，3H)，2.40(s，3H)，1.78(br，3H)；ESI-MS：对于(C19H15ClF2N6O)计算416，实测417(MH+)。
备选地，化合物86也可以利用如较早描述的相同方案由6-氯-N-(5丙烯基-1H-吡唑-3-基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-4-胺和2-甲基-4，7-二氟-1-H-吲哚-5-酚的反应制备。
实施例87
将86(45mg，0.11mmol)，1-甲基哌嗪(270mg，2.70mmol)和DIPEA(0.10ml，0.54mmol)在异丙醇(3.0mL)和乙腈(1.0mL)中的溶液在85℃搅拌3天。检查TLC并且起始原料被消耗。加入稀碳酸氢钠并且混合物用DCM萃取三次。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并浓缩。粗产物在柱(在DCM中的0-15％甲醇)上纯化。浓缩收集的级分，得到所需产物，为灰白色固体(87)(33mg，66％收率)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.90(br，1H)，11.71(br，1H)，9.30(br，1H)，6.85(dd，J＝10.8Hz，J＝5.6Hz，1H)，6.29(s，1H)，5.80-5.00(m，4H)，3.40(br，4H)，2.40(m，7H)，2.18(s，3H)，1.68(d，J＝6.8Hz，3H)；ESI-MS：对于(C24H26F2N8O)计算480，实测481(MH+)。
实施例88-99
依照如在实施例87中的相同程序，化合物88-99还制备自化合物86并通过LC-MS进行了表征。
实施例100
在氩气下，向(E)-6-氯-2-((4，7-二氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)-N-(5-(丙-1-烯-1-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(0.075g，0.179mmol)，1-N-boc-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3，6-二氢-2H-吡啶(0.089g，0.287mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(0.018g，0.018mmol)在二甲氧基乙烷(4mL)中的溶液中加入2M Na2CO3水溶液(0.197mL，0.396mmol)。混合物用氩气流脱气3分钟，然后在密封管中将其加热至90℃达24小时。冷却的混合物用1N NaOH猝灭并用二氯甲烷/异丙醇(8∶2)萃取。合并的有机层用无水Na2SO4干燥并在真空浓缩。剩余物然后用在二氯甲烷中的20％三氟甲基乙酸(5mL)溶解并搅拌3小时。反应物用1N NaOH水溶液中和并用二氯甲烷/异丙醇(8∶2)混合物萃取。合并的有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到100(0.041g，49％)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d)：δ12.08(bs，1H)，11.77(s，1H)，10.04(bs，1H)，6.89(q，1H，J＝5.6Hz)，6.84(m，1H)，6.52(bs，1H)，6.32(s，1H)，5.70(m，1H)，5.59(bs，1H)，5.26(m，1H)，3.49(s，1H)，3.45(m，2H)，2.94(m，2H)，2.42(s，3H)，2.30(m，2H)，1.71(dd，3H，J＝5.2，1.2Hz)。MS(ESI)：对于C24H23F2N7O：计算463，实测464(M+H)。
实施例101
向(E)-2-((4，7-二氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)-N-(5-(丙-1-烯-1-基)-1H-吡唑-3-基)-6-(1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-4-胺(0.022g，0.048mmol)在四氢呋喃(10mL)中的溶液中加入甲醛(37％，在水中，0.012g，0.142mmol)并搅拌10分钟。然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.030g，0.142mmol)并持续20小时。混合物用饱和NaHCO3猝灭并用二氯甲烷/异丙醇(8∶2)混合物萃取。合并的有机层用无水Na2SO4干燥并在真空浓缩。剩余物利用CH2Cl2∶MeOH(8∶2)在硅胶上通过急骤色谱纯化，得到101(0.020g，87％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d)：δ12.08(bs，1H)，11.77(s，1H)，10.03(bs，1H)，7.09(m，1H)，6.79(m，1H)，6.52(m，1H)，6.32(s，1H)，5.67(m，1H)，5.57(m，1H)，5.24(m，1H)，3.06(m，2H)，2.56(m，2H)，2.42(s，3H)，2.40(m，2H0，2.28(s，3H)，1.71(dd，3H，J＝6.8，1.2Hz)。MS(ESI)：对于C25H25F2N7O：计算477，实测478(M+H)。
实施例102
在室温，向6-氯-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-4-胺(700m g，2.43mmol)和2-甲基-4，7-二氟-1-H-吲哚-5-酚(499mg，2.72mmol)在t-BuOH(50.0mL)中的悬浮液中加入t-BuOK(33mg，2.92mmol)。在添加后，将混合物在55℃搅拌16小时。检查TLC并且起始原料被消耗。将水加入到反应混合物中。混合物用DCM/异丙醇(90/10)萃取三次。合并的有机物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并浓缩。粗产物在柱(在DCM中的0-10％甲醇)上纯化。浓缩收集的级分，得到所需产物，为粉红色固体(102)(435mg，46％收率)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.80(br，1H)，11.77(br，1H)，10.30(br，1H)，6.95(dd，J＝10.8Hz，J＝5.6Hz，1H)，6.40(br，1H)，6.32(s，1H)，5.25(br，1H)，2.40(s，3H)，1.78(s，3H)；ESI-MS：对于(C17H13ClF2N6O)计算390，实测391(MH+)。
实施例103
将化合物102(50m g，0.13mmol)，1-乙基哌嗪(365mg，3.20mmol)和DIPEA(0.11ml，0.64mmol)在异丙醇(2.5mL)中的溶液在85℃搅拌3天。检查TLC并且起始原料被消耗。加入稀碳酸氢钠并将混合物用DCM萃取三次。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并浓缩。粗产物在柱(在DCM中的0-15％甲醇)上纯化。浓缩收集的级分，得到所需产物，为灰白色固体(103)(45mg，75％收率)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.65(br，2H)，9.20(br，1H)，6.82(dd，J＝10.8Hz，J＝5.6Hz，1H)，6.27(s，1H)，6.07(br，1H)，5.35(s，1H)，3.40(br，4H)，2.31(m，9H)，1.95(s，3H)，1.00(t，J＝7.2Hz，3H)；ESI-MS：对于C23H26F2N8O)计算468，实测469(MH+)。
实施例104-109
依照如在实施例103中的相同程序，化合物104-109还制备自化合物102并通过LC-MS进行了表征。
实施例110
将4，6-二氯-2-甲基磺酰基嘧啶(938mg，4.13mmol)和2-甲基-4-氯-1-H-吲哚-5-酚(750mg，4.13mmol)在THF(20mL)中的溶液利用干冰/丙酮冷却至-78℃。将叔丁醇钾(510mg，4.54mmol)在THF(10mL)中的悬浮液逐滴加入到反应混合物中。控制混合物的温度低于-50℃。在添加完成后，将反应物在-78℃搅拌1小时，然后在1.5小时内温热至室温。检查TLC并且两种起始原料被消耗。加入饱和氯化铵水溶液并且混合物用乙酸乙酯/己烷(95/5)萃取三次。合并的有机物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并浓缩。粗产物通过利用在己烷中的20％乙酸乙酯洗脱的硅胶垫。浓缩收集的级分，得到所需产物，为浅黄色固体(110)(900mg，66％收率)。该固体未经进一步纯化直接用于下一步反应。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.42(s，1H)，7.75(s，1H)，7.30(d，J＝8.4Hz，1H)，7.00(d，J＝8.4Hz，1H)，6.21(s，1H)，2.41(s，3H)；ESI-MS：对于(C13H8Cl3N3O)计算326，实测327(MH+)。
实施例111
将5-((4，6-二氯嘧啶-2-基)氧基)-4-氯-2-甲基-1H-吲哚(0.85g，2.59mmol)，(E)-5-(丙-1-烯-1-基)-1H-吡唑-3-胺(0.48g，3.89mmol)，碘化钠(0.58g，3.89mmol)和DIPEA(0.68mL，3.89mmol)在DMF(10.0mL)中的溶液在70℃搅拌2天。将该混合物缓慢加入到水(200.0mL)水中。混合物通过冰浴冷却并通过过滤收集固体，用水和己烷洗涤。将该固体溶解在CH2Cl2/MeOH中并浓缩。所得粗制物通过使用CH2Cl2/MeOH，在二氯甲烷中的0至5％的甲醇，通过Teledyne-Isco急骤系统纯化，提供化合物111，为浅黄色固体(？g，？％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.13(bs，1H，NH)，11.42(bs，H，NH)，10.38(bs，1H，NH)，7.32-5.17(m，7H，5Ar-H，2CH)，2.44(s，3H，CH3)，1.71(d，3H，CH3)；ESI-MS：对于(C19H16Cl2N6O)计算415，实测416[M+H]+。
实施例112
将(E)-6-氯-2-((4-氯-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)-N-(5-(丙-1-烯-1-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(50mg，0.12mmol)和1-甲基哌嗪(0.067mL，0.60mmol)在异丙醇(1.0mL)中的溶液加热至85℃过夜。在冷却后，反应混合物用二氯甲烷稀释并用水洗涤。水相用二氯甲烷萃取。合并的有机层用无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过使用CH2Cl2/MeOH，在二氯甲烷中的0至10％的甲醇，通过Teledyne-Isco急骤系统纯化，提供化合物112，为白色固体(25mg，43％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.88(bs，1H，NH)，11.31(bs，H，NH)，9.32(bs，1H，NH)，7.27-5.34(m，7H，5Ar-H，2CH)，3.44(m，4H，2CH2)，2.43-2.35(m，7H，2CH2，CH3)，2.21(s，3H，CH3)，1.71(d，3H，CH3)；ESI-MS：对于(C24H27ClN8O)计算478，实测479[M+H]+.HPLC：保留时间：15.70分钟.纯度：92％。
实施例113-116
依照如在实施例112中的相同程序，化合物113-116还制备自化合物111并通过LC-MS进行了表征。
实施例117
向氢化钠(60％，1.54g，38.5mmol)在DMF(20mL)中的冷(0℃)悬浮液中缓慢加入5-((4，6-二氯嘧啶-2-基)氧基)-4-氟-2-甲基-1H-吲哚(化合物8，6.00g，19.2mmol)和碘甲烷(idomethan)(5.46g，38.5mmol)在DMF(28mL)中的溶液。反应混合物在0℃搅拌2小时。检查TLC并且起始原料被消耗。将混合物分批倒到冷水中并将容器置于冰浴。通过过滤收集白色固体，用水洗涤并用己烷研磨(trinuated)。在真空管线(vaccum line)上进一步干燥后，获得6.03g白色固体(117)(96％收率)。未进行进一步纯化。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.76(s，1H)，7.26(d，J＝8.8Hz，1H)，7.03(t，J＝8.0Hz，1H)6.34(s，1H)，3.69(s，3H)，2.41(s，3H)；ESI-MS：对于(C14H10Cl2FN3O)计算325，实测326(MH+)。
实施例118
将5-((4，6-二氯嘧啶-2-基)氧基)-4-氟-1，2-二甲基-1H-吲哚(化合物117，2.68g，8.22mmol)，(E)-5-(丙-1-烯-1-基)-1H-吡唑-3-胺(1.77g，14.38mmol)，碘化钠(1.85g，12.33mmol)和DIPEA(2.15ml，12.33mmol)在DMF(80mL)中的溶液在65℃搅拌24小时。检查TLC并且起始原料被消耗。将混合物倒入水(500ml)中并用冰冷却。固体通过过滤收集，用水和己烷洗涤。将固体溶解到二氯甲烷/甲醇中。将溶液浓缩至最少量的溶剂。固体通过过滤收集，通过甲醇洗涤，得到黄色固体(118)(2.27g，67％收率))。回收母液。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.15(br，1H)，10.35(br，1H)，7.14(m，1H)，6.90(m，1H)，6.40(br，1H)，6.22(s，1H)，5.70-5.10(m，3H)，3.80(br，3H)2.40(s，3H)，1.78(br，3H)；ESI-MS：对于(C20H18ClFN6O)计算412，实测413(MH+)。
实施例119
利用如在实施例120中描述的相同程序，在相同条件下，化合物119和3-环丙基吡唑-5-胺的反应生成产物119。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.15(br，1H)，10.35(br，1H)，7.14(m，1H)，7.00(m，1H)，6.50(br，1H)，6.22(s，1H)，5.00(br，1H)，3.80(s，3H)2.40(s，3H)，1.50(br，1H)，1.20(br，2H)，0.80(br，2H)；ESI-MS：对于(C20H18ClFN6O)计算412，实测413(MH+)。
实施例120
将化合物118(150mg，0.36mmol)，1-甲基哌嗪(181mg，1.81mmol)和DIPEA(0.13ml，0.73mmol)在DMSO(3.5mL)中的溶液在75℃搅拌3天。检查TLC并且起始原料被消耗。将反应混合物倒入稀碳酸氢钠水溶液(～1％)中并用冰浴冷却。固体通过过滤收集，通过水和己烷洗涤，得到浅褐色固体161mg。粗产物用MeOH研磨，过滤并通过MeOH洗涤，得到化合物120，为浅黄色固体(82mg，47％收率)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.92(br，1H)，9.31(br，1H)，7.20(d，J＝8.8Hz，1H)，6.92(t，J＝8.0Hz，1H)，6.28(s，1H)，5.80-5.60(m，4H)，3.70(s，3H)，3.42(br，4H)，2.42(s，3H)，2.34(m，4H)，2.19(s，3H)，1.67(d，J＝6.0Hz，3H)；ESI-MS：对于(C25H29FN8O)计算476，实测477(MH+)。
实施例121
由化合物118，利用如在实施例120中描述的相同程序，制备了化合物121。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.92(br，1H)，9.38(br，1H)，7.23(d，J＝8.8Hz，1H)，6.92(t，J＝8.0Hz，1H)，6.28(s，1H)，5.80-5.60(m，4H)，3.70(s，3H)，3.60(br，4H)，3.40(m，4H)，2.42(s，3H)，1.67(d，J＝6.0Hz，3H)；ESI-MS：对于(C24H26FN7O2)计算463，实测464(MH+)。
实施例122
由化合物119，利用如在实施例120中描述的相同程序，制备了化合物122。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.92(br，1H)，9.31(br，1H)，7.30(d，J＝8.8Hz，1H)，6.92(t，J＝8.0Hz，1H)，6.28(s，1H)，6.00(br，1H)，5.15(br，1H)，3.78(s，3H)，3.70(br，4H)，2.80(m，4H)，2.57-2.42(s，s，6H)，1.80(br，1H)，0.85(br，2H)，0.00(br，2H)；ESI-MS：对于(C25H29FN8O)计算476，实测477(MH+)。
实施例123
由化合物119，利用如在实施例120中描述的相同程序，制备了化合物123。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.92(br，1H)，9.31(br，1H)，7.22(d，J＝8.8Hz，1H)，6.92(t，J＝8.0Hz，1H)，6.27(s，1H)，5.90(br，1H)，5.15(br，1H)，3.68(s，3H)，3.60(br，4H)，3.40(m，4H)，2.39(s，3H)，1.60(br，1H)，0.85(br，2H)，0.00(br，2H)；ESI-MS：对于C24H26FN7O2)计算463，实测464(MH+)。
实施例124
在氩气氛下，向5-((4，6-二氯嘧啶-2-基)氧基)-4-氟-2-甲基-1H-吲哚(0.109g，0.349mmol)，5-环丙基-N-甲基-1H-吡唑-3-胺(0.088g，0.641mmol)和二异丙基乙胺(0.124g，0.961mmol)在无水二甲基甲酰胺(9mL)中的溶液中加入碘化钠(0.106g，0.705mmol)。混合物加热至85℃过夜(16小时)。在冷却后，通过真空除去溶剂，然后再溶解在二氯甲烷/异丙醇(8∶2)混合物(50mL)中并用饱和NaHCO3洗涤。合并的有机层用无水Na2SO4干燥并在真空浓缩。剩余物利用CH2Cl2∶MeOH(95∶5)在硅胶上通过急骤色谱纯化，得到化合物124(0.110g，77％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d)：δ12.37(bs，1H)，11.27(s，1H)，7.93(s，2H)，7.09(d，1H，J＝8.4Hz)，6.89(m，1H)，6.68(s，1H)，6.21(s，1H)，5.77(bs，1H)，3.24(s，3H)，2.37(s，3H)，1.67(m，1H)，0.83(m，2H)，0.51(m，2H)。MS(ESI)：对于C20H18ClFN6O：计算412，实测413(M+H)。
实施例125
将6-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-2-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)-N-甲基嘧啶-4-胺(0.105g，0.255mmol)，1-甲基哌嗪(0.102g，1.021mmol)和DIPEA(0.099g，0.765mmol)在异丙醇(1.0mL)中的溶液在密封管中加热至80℃达2天。冷却的混合物用二氯甲烷/异丙醇(8∶2)萃取并用饱和NaHCO3洗涤。合并的有机层用无水Na2SO4干燥并在真空浓缩。剩余物利用CH2Cl2∶MeOH(95∶5)在硅胶上通过急骤色谱纯化，得到化合物125(0.083g，68％)为灰白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d)：δ11.62(s，1H)，10.81(s，1H)，6.70(d，1H，J＝8.4Hz)，6.47(m，1H)，5.81(s，1H)，5.49 9s，1H)，5.259s，1H)，3.04(m，4H)，2.84(s，3H)，2.00(s，3H)，1.93(m，4H)，1.81(s，3H)，1.16(m，1H)，0.38(m，2H)，0.006(m，2H)。MS(ESI)：对于C25H29FN8O：计算476，实测478(M+H)。
实施例126
在氩气气氛下，向5-((4，6-二氯嘧啶-2-基)氧基)-4-氟-2-甲基-1H-吲哚(0.109g，0.349mmol)，5-环丙基-1-甲基-1H-吡唑-3-胺(0.088g，0.641mmol)和二异丙基乙胺(0.124g，0.961mmol)在无水二甲基甲酰胺(9mL)中的溶液中加入碘化钠(0.106g，0.705mmol)。混合物加热至85℃过夜(16小时)。在冷却后，通过真空除去溶剂然后再溶解在二氯甲烷/异丙醇(8∶2)混合物(50mL)中并饱和NaHCO3洗涤。合并的有机层用无水Na2SO4干燥并在真空浓缩。剩余物在利用CH2Cl2∶MeOH(9∶1)的硅胶上通过急骤色谱纯化，得到化合物126(0.255g，97％)为灰白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d)：δ11.32(s，1H)，10.31(bs，1H)，7.12(d，1H，J＝8.4Hz)，6.89(m，1H)，6.48(bs，1H)，6.20(s，1H)，5.13(bs，1H)，3.59(bs，3H)，2.39(s，3H)，1.53(m，1H)，0.61(m，2H)，-0.26(m，2H)。MS(ESI)：对于C20H18ClFN6O：计算412，实测413(M+H)。
实施例127
将6-氯-N-(5-环丙基-1-甲基-1H-吡唑-3-基)-2-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-4-胺(0.100g，0.242mmol)，1-甲基哌嗪(0.097g，0.969mmol)和DIPEA(0.094g，0.727mmol)在异丙醇(1.0mL)中的溶液在密封管中加热至80℃达2天。冷却的混合物用二氯甲烷/异丙醇(8∶2)萃取并用饱和NaHCO3洗涤。合并的有机层用无水Na2SO4干燥并在真空浓缩。剩余物利用CH2Cl2∶MeOH(95∶5)在硅胶上通过急骤色谱纯化，得到化合物127(0.106g，92％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d)：δ11.32(s，1H)，9.35(s，1H)，7.18(d，1H，J＝8.4Hz)，6.93(m，1H)，6.28(s，1H)，5.98(bs，1H)，5.27(s，1H)，3.68(s，1H)，3.52(m，4H)，3.26(dd，3H，J＝5.2，0.4Hz)，2.49(s，3H)，2.44(m，4H0，2.30(s，3H)，1.64(m，1H)，0.72(m，2H)，0.00(m，2H)。MS(ESI)：对于C25H29FN8O：计算476，实测478(M+H)。
本发明还涵盖药物组合物，其包含本文公开的化合物中的任意一种或多种，并且所述化合物为其药用盐、水合物、溶剂化物、晶型和单个立体异构体(例如，非对映异构体，对映异构体)的形式，以及作为在具有药用载体的组合物的形式。这些包括，但不限于，其中本发明的化合物以中性或盐形式配制到组合物中。
“药用盐”包括酸加成盐(与蛋白质的游离氨基基团形成)，其与无机酸如，例如，盐酸或磷酸形成，或如有机酸如乙酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等形成。与游离羧基基团形成的盐也可以衍生自无机碱如，例如，氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙或氢氧化铁，并且这样的无机碱如异丙基胺、三甲胺、组氨酸和普鲁卡因等。
“盐”是两种可电离组分(例如，当溶解在水中时)的化学组合，相对于彼此一种酸性而另一种碱性。如果以盐形式，则药物可以是酸性组分或碱性组分。
“药用盐”包括化合物的任何盐形式，其中所述盐对于动物摄取是安全的(例如，当经口服用时对人无毒)。可以根据本发明使用的示例性的这样的盐包括，但不限于，2-羟基，乙磺酸盐，2-萘磺酸盐，3-羟基，-2-萘甲酸盐，3-苯基丙酸盐，乙酸盐，己二酸盐，藻酸盐，氨芪磺酸盐，天冬氨酸盐，苯磺酸盐，苯甲酸盐，苯磺酸盐，碳酸氢盐，硫酸氢盐，酒石酸氢盐，硼酸盐，丁酸盐，乙二胺四乙酸钙，樟脑酸盐，樟脑磺酸盐，右旋樟脑磺酸盐，碳酸盐，柠檬酸盐，克拉维酸盐，环丙烷丙酸盐，二葡糖酸盐，十二烷基硫酸盐，乙二胺四乙酸盐，乙二磺酸盐，丙酸酯十二烷硫酸盐，乙磺酸盐，乙磺酸盐，finnarate，葡庚酸盐，葡糖庚酸盐，葡糖酸盐，谷氨酸盐，甘油磷酸盐，乙醇酰阿散酸盐，半硫酸盐，庚酸盐，六氟磷酸盐，己酸盐，己基间苯二甲酸盐，海巴明(hydrabamine)，氢溴酸盐，盐酸盐，氢碘酸盐，羟基，萘甲酸盐，碘化物，异硫代硫酸盐，乳酸盐，乳糖醛酸盐，月桂酸盐，月桂基磺酸盐，苹果酸盐，马来酸盐，扁桃酸盐，甲磺酸盐，甲磺酸盐，甲基溴，甲基硝酸盐，甲基硫酸盐，粘酸盐，萘酸盐，萘磺酸盐，烟酸盐，硝酸盐，N-甲基葡糖胺铵盐，油酸盐，草酸盐，棕榈酸盐，扑酸盐，泛酸盐，果胶酸盐，过硫酸盐，磷酸盐，磷酸盐二磷酸盐，苦味酸盐，新戊酸盐，聚半乳糖醛酸盐，丙酸盐，对甲苯磺酸盐，糖酸盐，水杨酸盐，硬脂酸盐，碱式乙酸盐，琥珀酸盐，硫酸盐，磺基水杨酸盐，suramate，单宁酸盐，酒石酸盐，8-氯茶碱盐，硫氰酸盐，甲苯磺酸盐，三乙基碘，十一烷酸盐，和戊酸盐等(还参见S.M.Berge等，Pharmaceutical Salts，J.Pharm.Scis.，1977，66：1-18；P.L.Gould，Salt selection for basic drugs，Int′l J.Pharms.1986，33：201-17.)
“溶剂化物”是这样的组合物，其在化合物从溶液结晶的过程期间，将那个溶剂的分子俘获在形成晶格中。
“水合物”是其中溶剂为水的溶剂化物。
“晶”型是这样的固体组合物，其中构成该组合物的分子堆叠在重复晶格结构中。当多于一种的晶格模式对于相同分子构成的组合物是可能的时，不同的组合物被称为“多晶型”。
“非对映异构体”是这样的立体异构体，其不涉及作为物体和镜像，但在关于一个四面体、sp3-杂化碳的三-二维空间中在排列上仍然是不同的。
“对映异构体”是彼此为镜像但不可重合(不相同)的两个立体异构体中的一个。
“药用载体”是任何赋形剂，其是无毒的并且有助于药物功能(还参见，Rowe RC等，Handbook of Pharmaceutical Excipients(药物赋形剂手册)，5thed.，2006)。
实施例128
本实施例测试本发明的代表性化合物在c-Src激酶，Aurora-A激酶，Flt3激酶，Ret激酶和TrkA激酶测定(参见，Daniele Fancelli等，J.Med.Chem.，2006，49(24)，pp 7247-7251)中的抑制性能。使用激酶ProfilerTM Service Assay Protocols(Millipore)来测试来自本发明的新型化合物的激酶抑制活性。为此，缓冲组合物为：20mM MOPS，1mM EDTA，0.01％Brij-35，5％甘油，0.1％β-巯基乙醇，1mg/mL BSA。将测试化合物初始地以所需浓度溶解在DMSO中，然后系列地稀释至激酶测定缓冲液。在25μL的最终反应体积中，将Aurora-A(h)(5-10mU)用8mM MOPS pH 7.0，0.2mM EDTA，200μM LRRASLG(Kemptide)，10mM乙酸Mg和[γ33P-ATP]温育。反应通过加入MgATP混合物启动。在室温温育40分钟后，反应通过加入5μL的3％磷酸溶液停止。然后将10μL的反应物到P30 filtermat上形成斑点并在50mM磷酸中洗涤三次持续5分钟并在甲醇中洗涤一次，然后干燥并闪烁计数。含有底物但没有激酶的孔和含有磷肽对照的孔用来分别设置0％和100％磷酸化值。
Kinase HotspotSM激酶测定也用来测试化合物的IC50或％抑制(Reaction Biology Corp.)。通过在最佳激酶浓度(激酶EC50)处滴定化合物来确定抑制IC50值。
表1显示对于在1μM浓度，abl激酶，Aurora-A激酶，c-Src激酶，Flt3激酶，KDR激酶和Ret激酶通过本发明化合物的抑制的代表性数据。
表1
这些结果证实，本发明的大量实施方案对于宽范围的激酶具有优异的激酶抑制性。
实施例129
在实施例81中公开的本发明的实施方案(也称为化合物“NTW-3475”)在实施例128中显示对所有激酶的强抑制并被选取用于进一步测试。
将NCI-60 DTP人肿瘤细胞系组(Human Tumor Cell Line Panel)用于进一步评价NTW-3475的生物化学(参见Shoemaker：The NCI60 human tumour cell line anticancer drug screen(NCI60人肿瘤细胞系抗癌药物筛选)，Nature Reviews Cancer 6，813-823(2006年10月1日))。
NTW-3475对于激酶活性的作用对于宽范围的激酶进行测试并显示在表2中：
观察记录表，活性％
ATP浓度：Km
NTW-3475对于宽范围的激酶显示强激酶抑制(表2和图1-2)，所述激酶包括突变型激酶，其中测试了被认为对于分离它们的癌细胞的转化是关键的突变，和特别地，知晓没有抑制剂的突变型abl激酶(图2)。
实施例130
使用来自NCI 60癌细胞系组的细胞系组，还对NTW-3475的抗增殖潜力进行了测试。
将癌症筛选组的人肿瘤细胞系在含有5％胎牛血清和2mM L-谷氨酰胺的RPMI 1640培养基中生长。对于典型的筛选实验，取决于单个细胞系的增倍时间，将细胞以范围在5,000至40,000细胞/孔的铺板密度以100μL接种到96孔微滴定板中。在细胞接种后，将微滴定板在37℃，5％CO2，95％空气和100％相对湿度温育24小时，然后加入实验药物。
在24小时后，将每个细胞系的两个板用TCA原位固定，以代表在药物添加时(Tz)每个细胞系的细胞群体的测量。将实验药物以400-倍所需最终最大测试浓度溶解在二甲亚砜中并在使用前冷冻储存。在药物添加时，将冷冻的浓缩物的等分试样解冻并用含有50μg/ml庆大霉素的完全培养基稀释至所需最终最大测试浓度的两倍。制备另外的四、10-倍或1/2 log系列稀释液，以提供总共五个药物浓度加对照。将这些不同药物稀释液的100μl等分试样添加至已含有100μl培养基的合适微滴定孔，导致所需最终药物浓度。
在药物添加后，将所述板在37℃，5％CO2，95％空气和100％相对湿度温育另外48小时。对于粘附细胞，通过加入冷TCA终止测定。通过温和加入50μl的冷50％(w/v)TCA(最终浓度，10％TCA)将细胞原位固定并在4℃温育60分钟。抛弃上清，并将板用自来水洗涤五次并空气干燥。向每个孔中添加在1％乙酸中的0.4％(w/v)的磺基罗丹明(Sulforhodamine)B(SRB)溶液(100μl)，并将板在室温温育10分钟。在染色后，将未结合的染料通过用1％乙酸洗涤五次除去并将板空气干燥。结合的色斑随后用10mM缓血酸胺碱(trizma base)溶解，并且在515nm处在自动化板读数器上读出吸光度。对于悬浮细胞，方法相同，只是通过温和添加50μl的80％TCA(最终浓度，16％TCA)将沉淀的细胞固定在孔底部而终止测定。利用七个吸光度测量值[时间零点，(Tz)，对照生长，(C)，和在五个浓度水平的药物存在下测试生长(Ti)]，计算在每个药物浓度下的百分比生长。如下计算百分比生长抑制：
对于Ti＞/＝Tz的浓度，[(Ti-Tz)/(C-Tz)]x 100
对于Ti＜Tz的浓度，[(Ti-Tz)/Tz]x 100。
对于每种实验试剂，计算三个剂量反应参数。50％(CI50)的生长抑制从[(Ti-Tz)/(C-Tz)]x 100＝50计算，其是在药物温育期间导致对照细胞中净蛋白增加(如通过SRB染色测量)的50％减少的药物浓度。
如图3所示的，NTW-3475在在所研究的16种细胞系中的至少13种中证实强的抗增殖活性。这种抗增殖作用在一系列细胞系上观察到，所述的细胞素包括来自慢性髓性白血病、急性髓性白血病、甲状腺癌、子宫内膜癌、胃癌、乳腺癌和胰腺癌的细胞系。
实施例131
本实施例利用用于白血病的scid(锡特)小鼠异种移植物模型和子宫内膜癌、胰腺癌和甲状腺癌的裸小鼠异种移植物模型，评估了NTW-3475的抗肿瘤活性。还在鼠类异种移植物中研究了NTW-3475联合治疗。
第一个研究的目的是评价新型多激酶抑制剂NTW-3475在雌性SCID小鼠中针对人MV411人急性髓性白血病(AML)的抗肿瘤活性。
将四只或六只动物随机分配至每个研究组。将每只动物在左侧肋腹和右侧肋腹区域皮下地注射0.1ml的1.0×108个MV411细胞/mL。
将每个测试或对照动物置于赋形剂阴性对照或25，50mg/kg的NTW-3475的5天进行、两天不进行两个周期。在第一次用药前，肿瘤生长利用数字手持卡尺每周测量两次(一旦肿瘤出现)，然后每周二至三次直至安乐死。在肿瘤细胞注入前、用药前、每周二至三次肿瘤生长测量时和安乐死之前，对动物称重。
结果示于图4(随时间的肿瘤重量)、5(随时间的肿瘤尺寸)和6(在第22天的T/C)。结果表明，NTW-3475针对伴有动物体重损失的AML具有强抗肿瘤作用。
第二个研究的目的是评价新型多激酶抑制剂NTW-3475在雌性SCID小鼠中在人K562慢性髓性白血病(CML)异种移植物模型中的抗肿瘤活性。
将四至六只动物随机分配至研究组。对每只动物称重，然后在左侧和右侧肋腹区域皮下地注射0.1ml的8.0×107个K562细胞/mL。
将每只测试或对照动物置于5天进行、两天不进行的两个周期的治疗安排。在第一次用药前，肿瘤生长利用数字手持卡尺每周测量两次(一旦肿瘤出现)，然后每周二至三次直至安乐死。在肿瘤细胞注入前、用药前、每周二至三次肿瘤生长测量时和安乐死之前，对动物称重。结果示于图7和8。结果显示，NTW-3475在此模型系统中针对CML具有强抗肿瘤作用。
第三个研究的目的是评价新型多激酶抑制剂NTW-3475在无胸腺裸-Faxnl小鼠中在人MIAPaCa-2胰腺癌异种移植物中的抗肿瘤活性。
将四只动物随机分配至研究组。对每只动物称重，然后在左侧和右侧肋腹区域皮下地注射0.1ml的5.0×107个MIAPaCa-2细胞/mL。
将每只测试或对照动物置于利用阴性对照赋形剂、20mg/kg的阳性对照或25，50mg/kg的NTW-34755天进行、两天不进行的两个周期治疗安排。在第一次用药前，肿瘤生长利用数字手持卡尺每周测量两次(一旦肿瘤出现)，然后每周二至三次直至安乐死。结果示于图9，10和11，其表明，在该模型系统中，NTW-3475针对胰腺癌细胞具有强抗肿瘤作用。
在TT人甲状腺癌异种移植物中，NTW-3475类似地测试并且显示具有抗肿瘤作用(图12和13)。
在AN3人子宫内膜癌异种移植物中，NTW-3475类似地测试并且显示具有抗肿瘤作用(图14，15和16)。
在MIAPaCa-2异种移植物中，NTW-3475单独地和联合Abraxane类似地测试并且所述组合显示具有抗肿瘤作用(图17，18和19)。
总体上，激酶、增殖和异种移植物研究表明，NTW-3475显示高细胞效力和靶向(图20)并且在异种移植物模型系统中，NTW-3475针对AML、CML、甲状腺癌、子宫内膜癌和一些胰腺癌是体内活性的(图21)。
实施例132
实施例87中公开的本发明的实施方案(也称为化合物“NTW-3456”)在实施例128中证实对所有激酶的强抑制并被选取用于进一步测试。
第一个研究指定用来评估NTW-3456对激酶活性的作用。NTW-3456对于宽范围的激酶的活性示于图22-24，包括被认为在细胞肿瘤转化中起重要作用的突变型激酶(图23和24)。此外，NTW-3456抑制abl突变型中的激酶活性，对于该abl突变型，还没有被FDA批准的现有抑制剂。特别地，NTW-3456抑制2T315I突变型，对于该突变型，在NTW-3456之前还没有已知的激酶抑制剂。
实施例133
利用用来测试NTW-3475的60NCI癌细胞系的方案，测试NTW-3456对体外增殖的作用。
使用NCI-60DTP人肿瘤细胞系组来进一步评价NTW-3475的生物化学(参见Shoemaker：The NCI60 human tumour cell line anticancer drug screen(NCI60人肿瘤细胞系抗癌药物筛选)，Nature Reviews Cancer 6，813-823(2006年10月1日))。对宽范围的激酶测试NTW-3456对激酶活性的作用并且示于图25。总体地，NTW-3456抑制磷酸化和增殖二者。针对AML、CML、甲状腺癌、子宫内膜癌、胃癌、乳腺癌和一些胰腺癌细胞系，观察到来自NTW-3456的抗增殖活性(图26)。
实施例134
本实施例研究了在异种移植物模型系统中，NTW-3456对于AML、CML、甲状腺癌、子宫内膜癌、胰腺癌的抗肿瘤活性。
图27-32示出了各种浓度的NTW-3456对利用MV411细胞的AML的scid小鼠/异种移植物模型中的肿瘤生长的结果。在该模型系统中，NTW-3456显示显著的抗肿瘤活性，尤其是在较高剂量下(图29和32)。本发明的特征为这里看来是pFLT3激酶的抑制和生长控制之间的关联。
对携带已形成的MV4-11肿瘤异种移植物(肿瘤体积约150mm3)的小鼠给予50mg/kg NTW-3456的口服剂量。在用药后0，1，2，8，16，24小时，使三只安乐死。收集血样并利用离心机制备血浆用于LCMS测定。并将肿瘤收获，在溶胞缓冲液中匀化，利用抗-FLT3抗体免疫沉淀图33。
曲线(实心点)是在经口给药50mg/kg后NTW-3456的血浆浓度-时间分布的图示。上部曲线(实心三角形)显示，在指定时间，在经口给药50mg/kg NTW-3456后，NTW-3456抑制MV4-11肿瘤的FLT3磷酸化(pFLT3)。
NTW-3456抑制体内FLT3磷酸化并且它是时间依赖性的。在24小时后，NTW-3456(7nM，在血浆中)仍然抑制MV4-11肿瘤的多于60％FLT3磷酸化(phoseporylation)。
图34和35示出了各种浓度的NTW-3456对使用K562细胞的CML的scid小鼠/异种移植物模型的结果。在该模型系统中，NTW-3456显示显著的抗肿瘤活性，尤其是在较高剂量下(图34)。
图36-38示出了各种浓度的NTW-3456对甲状腺癌的裸小鼠/异种移植物TT细胞模型的结果。在该模型系统中，NTW-3456显示显著的抗肿瘤活性，尤其是在较高剂量下(图38)。
图39-41示出了各种浓度的NTW-3456对子宫内膜癌的AN3裸小鼠/异种移植物模型的结果。在该模型系统中，NTW-3456显示显著的抗肿瘤活性，尤其是在较高剂量下(图41)。
图42-44示出了各种浓度的NTW-3456对胰腺癌的裸小鼠/异种移植物MIAPaCa-2模型的结果。在该模型系统中，NTW-3456显示在该胰腺癌模型中的一些抗肿瘤活性。
图45和46示出了在有或没有Abraxane下，各种浓度的NTW-3456对胰腺癌的MiaPaCa-2模型的结果。在该模型系统中，NTW-3456显示显著的抗肿瘤活性，尤其是在联合Abraxane使用时(图47)。
图48和49示出了在有或没有Abraxane下，各种浓度的NTW-3456对胰腺癌的Panc-1模型的结果。在该模型系统中，NTW-3456显示显著的抗肿瘤活性，尤其是当联合Abraxane使用时。
图50概括了在鼠类异种移植物中NTW-3456的抗肿瘤活性。总体地，这些实施例显示利用NTW-3456观察到的高特异性活性。
实施例132
本实施例研究了NTW-3456和NTW-3475细胞的生物化学。
图51和52显示通过NTE-3456，尼洛替尼(Nilotinib)，帕纳替尼(Ponatinnib)，舒尼替尼(Suntinib)和伊马替尼(Imatinib)，对于MiaPaCa-2和BaFC3细胞中的增殖及pERK和pAKt信号传导的抑制的剂量反应曲线。图53概括了此数据。
图54显示通过NTE-3456，尼洛替尼，帕纳替尼，舒尼替尼和伊马替尼，对于K562细胞中的体外生长的抑制的剂量反应曲线。图55显示通过NTE-3456，尼洛替尼，帕纳替尼，舒尼替尼和伊马替尼，对于K562细胞中的p-Crl激酶活性的抑制的剂量反应曲线。图56显示通过NTE-3456，尼洛替尼，帕纳替尼，舒尼替尼和伊马替尼，对于K562细胞中的半胱天冬酶(Caspse)3/7活性的抑制的剂量反应曲线。图57概括了此数据。
图58显示来自FGFR1，FGFR2，FGFR3和FGFR4，通过NTW-3456对于BaF3细胞中的激酶活性的抑制的剂量反应曲线。图59提供了对于FGFR1，FGFR2，FGFR3和FGFR4驱动的BaF3细胞的NTW-3456IC50水平。总体地，通过NTW-3475(图38)和NTW-3456(图39)对于MIaPaca-2和BxPC3细胞中的增殖、pERK信号传导通路的抑制是类似的。此外，这些结果表明了生长抑制和信号传导抑制之间的关联性。
本文中引述的所有参考文献，包括出版物、专利申请和专利，通过引用结合于此，其程度如同每个参考文献个别地且具体地指明通过引用结合并以其整体在本文中提出的程度相同。
在描述本发明的内容中(尤其是在所附权利要求的内容中)，除非本文中另有指明或与上下文明确抵触，术语“一个(a)”和“一种(an)”与“所述(the)”以及“至少一个(at least one)”和类似指代对象的使用应解释为涵盖单数和复数形式二者。除非本文中另有指明或与上下文明确抵触，在一个或多个项后使用术语“至少一个”(例如，“A和B中的至少一个”)应解释为是指选自所列项(A或B)或者所列项(A和B)中的两个以上的任意组合。除非另有说明，术语“包括(comprising)”、“具有(having)”、“包含(including)”和“含有(containing)”应解释为开放式术语(即，意思是“包括，但不限于”)。除非本文另有指明，本文数值范围的列举仅意图用作单个地提及落入该范围内的每个单独的值的简写方法，并且每个单独的值结合到本说明书中，如同其单个地在本文中列举。除非本文中另有指明或与上下文明确抵触，本文中描述的所有方法可以以任何合适的顺序进行。任何和所有实例，或本文中提供的示例性语言(例如，“如”)的使用，仅意图更好地举例说明本发明而不对本发明的范围施加限制，除非另有要求。说明书中是语言都不应解释为表明任何非要求保护的要素为实施本发明所必需的。
本文中描述了本发明的优选实施方案，包括发明人所知晓的用于实现本发明的最佳方式。那些优选实施方案的变型对阅读之前的描述后的本领域普通技术人员来说会变得明显。本发明的发明人预期技术人员在合适时采用这样的变型，并且本发明的发明人意图本发明以不同于如本文具体描述的其他方式实施。因此，本发明包括如所适用法律允许的所附权利要求中列举的主题的所有更改和等同替换。此外，除非本文中另有指明或与上下文明确抵触，上述要素以其所有可能的变型的任意组合都由本发明所涵盖。
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