技术领域本发明涉及赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸冻干制剂，尤其涉及储存稳定的L-赖氨酸-D-脯氨酸-L-苏氨酸冻干制剂；本发明还涉及一种制备所述冻干制剂的方法。此外，本发明涉及包含所述冻干制剂的药物组合物和化妆品组合物，所述组合物可用于哺乳动物疼痛相关疾病、瘙痒相关的疾病、炎性疾病和/或其它疾病的治疗性和/或预防性处理、诊断和/或治疗。
背景技术：
三肽赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸(KPT,KdPT)具有下列通式所示的化学结构：由于其可有效治疗炎性疾病(WO02/064131)，该类化合物在本领域是已知的。例如，在EP0335662A1中描述了赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸及其盐的制备方法，该专利在此通过引用的方式并入本文。此外，赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸是可以商购的。然而，赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸高度吸湿，且在形成赖氨酸-脯氨酸二酮哌嗪的情况下容易降解。此外，赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸在溶液中，尤其是在水溶液中稳定性降低，在室温条件下，最多稳定一周。这些事实不仅导致该类化合物本身的储存稳定性显著降低，而且还会导致含有该类化合物的药物的储存稳定性显著降低。最终，人们对于含有赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸作为活性成分的药物的安全性和有效性产生了显著关注。因此，需要提供储存稳定性增加的赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸。尤其需要提供适于以一段较长时间内保持安全和有效性的药物的形式给药的赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸。
技术实现要素：
因此，本发明的目的是提供储存稳定的赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸和包含所述赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸的药物，所述药物在一段较长的时间内可保持安全性和有效性。令人惊讶的是，根据所附权利要求书的描述，本发明的目的已经解决。尤其是，本发明人出乎意料地发现，与单独的赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸(例如，非冻干形式或冻干形式)相比，冻干制剂(例如，作为冻干物(lyophilisate))中的赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸显示出增强的储存稳定性。这一发现是出乎意料的，由于冻干物(由于冻干，冻干物主要含有非结晶形式的活性成分赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸)比至少部分以结晶形式存在的单独的赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸更稳定。因为在冻干制剂中的赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸具有明显更大的表面积，使得本领域技术人员实际上会预期储存稳定性降低，所以这种增加的储存稳定性更令人惊讶。换句话说，具有更大表面积的赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸非结晶形式不容易降解为赖氨酸-脯氨酸二酮哌嗪，并且因此而比赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸的晶体形式具有更高的存储稳定性，这在现有技术中是完全预料不到的。因此，本发明的主题是含有赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸或者其药学上可接受的盐的冻干制剂。进一步，根据本发明，所述冻干制剂可作为药物使用；优选地，可用于哺乳动物疼痛相关疾病、瘙痒相关的疾病、炎性疾病和/或其它疾病的治疗性和/或预防性处理、诊断和/或治疗。更进一步，本发明的主题涉及制备所述冻干制剂的方法以及通过所述方法获得的冻干制剂，其中所述方法包括下列步骤：(a)混合下列组分(以任何适当的顺序)：赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸或者其药学上可接受的盐；水性载体；可选地，一种或多种填充剂；可选地，一种或多种缓冲试剂；和可选地，一种或多种pH调节剂；以提供pH范围在3.0～5.0的水性制剂，其中基于所述水性制剂，赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸的游离碱浓度为0.1～175mg/g；(b)冻干所述水性制剂，以提供固体形式的冻干制剂。在一个优选的实施例中，本发明涉及制备冻干制剂的方法以及通过所述方法获得的冻干制剂，其中所述方法包括下列步骤：(a)将水性载体和一种或多种缓冲剂混合；(b)加入赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸或者其药学上可接受的盐；(c)加入一种或多种填充剂；(d)可选地，加入一种或多种pH调节剂；以提供pH范围在3.0～5.0的水性制剂，其中基于所述水性制剂，赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸的游离碱浓度为0.1～175mg/g；(e)冻干所述水性制剂，以提供固体形式的冻干制剂。所述水性制剂可以是悬浊液/分散体系或者溶液。更优选地，优选实施例的步骤(a)到(d)是在成分溶解的条件下进行，以便最终的水性制剂是水溶液。所述冻干步骤(e)可以在小瓶、铝塑(blister)或者任意其他较大的容器(例如，不锈钢托盘或罐子，即所谓的“大块冷冻干燥(bulklyophilisation)”)中进行。此外，本发明涉及一种药物或者化妆品组合物，所述组合物包含所述冻干制剂和一种或者多种药物或者化妆品赋形剂。最后，本发明涉及所述冻干制剂作为化妆品的非治疗性用途，尤其是用于哺乳动物的皮肤和/或粘膜的美容治疗。在本发明中，术语“赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸”是由赖氨酸(Lys)，脯氨酸(Pro)和苏氨酸(Thr)按照顺序组成的三肽，也称为KPT或KdPT(例如，来自WO02/064131或EP0335662)。其包括：(L)赖氨酸-(D)脯氨酸-(L)苏氨酸，(L)赖氨酸-(L)脯氨酸-(D)苏氨酸，(L)赖氨酸-(D)脯氨酸-(D)苏氨酸，(L)赖氨酸-(L)脯氨酸-(L)苏氨酸，(D)赖氨酸-(D)脯氨酸-(L)苏氨酸，(D)赖氨酸-(D)脯氨酸-(D)苏氨酸，(D)赖氨酸-(L)脯氨酸-(L)苏氨酸，(D)赖氨酸-(L)脯氨酸-(D)苏氨酸，或它们的任意混合物。优选是(L)赖氨酸-(D)脯氨酸-(L)苏氨酸。根据本发明，赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸可以作为游离碱存在或者以其药学上/美容方面可接受的盐的形式存在。根据本发明，所述化合物的合适的药学上可接受的盐和/或美容上可接受的盐，例如，选自由以下物质构成的组：氯化物、溴化物、碘化物、盐酸盐、氢溴酸盐、磺酸盐、甲基磺酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、戊二酸盐、顺丁烯二酸盐、丙二酸盐、苹果酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、草酸盐、延胡索酸盐、苯甲酸盐、对甲基苯磺酸盐和/或氨基酸盐(优选地，蛋白质氨基酸盐)。优选为琥珀酸盐、酒石酸盐、草酸盐、延胡索酸盐和乙酸盐。最优选为乙酸盐。根据本发明，所述化合物的溶剂化物和/或水合物也是合适的。基于总重量100mg的所述冻干制剂，赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸或其盐在所述冻干制剂中的含量相当于0.1～50mg游离碱。基于总重量100mg的所述冻干制剂，优选地，赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸或其盐在所述冻干制剂中的含量相当于0.4～45mg游离碱；更优选地，相当于0.4～40mg游离碱；更为优选地，相当于1～30mg游离碱；甚至更优选地，相当于1～25mg游离碱。根据本发明，所使用的术语“冻干制剂/冻干物”通常表示通过本领域已知的任何冻干方法和/或冷冻干燥方法所获得的制剂。该术语涵盖了包含赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸或其盐的制剂以及其它合适的赋形剂的制剂。由于本发明所述的制剂被冻干，赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸或其盐主要以非晶体(无定形)形式存在。可以根据本领域已知的方法，例如，X-射线单晶衍射或差示扫描量热法(DSC)确定其结晶度。本发明所述的赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸或其盐的储存稳定性可以通过测定赖氨酸-脯氨酸二酮哌嗪(DKP)(为赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸的主要降解产物)的含量进行确定。通常，在所述冻干制剂或在所述药物/化妆品组合物中赖氨酸-脯氨酸二酮哌嗪的含量随时间增加的速率可以表示赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸的储存稳定性。DKP的含量越高，赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸和/或含其的制剂的稳定性越低。赖氨酸-脯氨酸二酮哌嗪的含量可以通过常用的方法进行确定，例如，通过高效液相色谱法(HPLC)(尤其是反相高效液相色谱法)。优选地，本发明所述冻干制剂包括，作为进一步的合适的赋形剂的一种或者多种填充剂和/或一种或者多种缓冲剂，以及，可选地，一种或者多种pH调节剂。填充剂和/或缓冲剂的存在进一步增加了赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸在所述冻干制剂中的储存稳定性。另外，可选的pH调节剂能够在特定的pH范围内调节所述制剂的pH值，优选地，pH范围为3～5。这导致储存稳定性进一步增加。优选地，本发明所述的填充剂选自由下列物质构成的组：甘露醇、蔗糖、甘氨酸、明胶、羟丙基淀粉、碳酸钙、海藻糖，及其它们的混合物。特别优选的是甘露醇、蔗糖、海藻糖，或它们的混合物，尤其是甘露醇和海藻糖的混合物。最为优选的是海藻糖(例如，以其二水合物的形式)。基于总重量100mg的所述冻干制剂，填充剂的合适含量为30～95mg，优选为40～90mg，更优选为40～75mg。优选地，本发明所述的缓冲剂选自由下列物质构成的组：柠檬酸、磷酸二氢钠、乙酸、琥珀酸、谷氨酸、三羟甲基氨基甲烷(Tris)和组氨酸，及其它们的混合物。特别优选的是柠檬酸、磷酸二氢钠和组氨酸，最为优选的是柠檬酸。基于总重量100mg的所述冻干制剂，缓冲剂的合适的含量为0.5～50mg，优选为1～20mg，更为优选为2～18mg，甚至更为优选为5～15mg。优选地，本发明所述的pH调节剂选自氢氧化钠和盐酸。pH调节剂能够保持pH在特定的值。从储存稳定性的角度来看，所述冻干制剂的pH值优选为3.0～5.0，更优选为3.5～4.5。在这些范围之外，储存稳定性显著降低。本领域技术人员容易确定用于调节上述pH值的pH调节剂的合适的含量。根据本发明，特别优选的实施例是以下组合：(L)赖氨酸-(D)脯氨酸-(L)苏氨酸(优选为醋酸盐形式)，作为填充剂的海藻糖或海藻糖和甘露醇的混合物，以及作为缓冲剂的柠檬酸。所述冻干物可以仅由这些成分构成。根据本发明，所述的化合物可以通过下列方法进行制备，所述方法包括：以任何顺序混合赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸或其药学上可接受的盐，水性载体，可选地的一种或多种填充剂，可选地的一种或多种缓冲剂，以及可选地的一种或多种pH调节剂，以提供水性制剂；接着对水性制剂进行冻干，从而提供固体形式的冻干制剂。优选地，首先将水性载体与一种或多种缓冲剂进行混合，然后加入赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸或其药学上可接受的盐，再接着加入一种或多种填充剂。在上述混合步骤所获得的水性制剂通常具有范围为3.0～5.0的pH；优选地，范围为3.5～4.5的pH；更优选地，范围为3.8～4.2的pH。如果必要的话，加入一种或多种pH调节剂，以调节pH至上述值。基于所述水性制剂，在所述水性制剂中的赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸的浓度(以游离碱进行计算)范围为0.1～175mg/g，优选为0.5～150mg/g，更优选为1～140mg/g，更加优选为2～100mg/g，更加优选为2～70mg/g，甚至更为优选为4～20mg/g。进一步，基于所述水性制剂，在所述水性制剂中的所述填充剂的浓度范围为50～175mg/g，优选为50～150mg/g，更优选为50～140mg/g，更加优选为50～95mg/g，更加优选为52～80mg/g，甚至更加优选为55～75mg/g。此外，如果存在，基于所述水性制剂，在所述水性制剂中的所述缓冲剂的浓度范围为1～100mg/g，优选为2～75mg/g，更优选为2.5～40mg/g，更加优选为2.5～20mg/g，更加优选为3～15mg/g，甚至更加优选为3.5～9.5mg/g。根据本发明，水性载体是本领域已知的那些在冻干过程中适合的水性载体。优选的水性载体为水，以及水和适合的有机溶剂(例如，醇类(例如，乙醇和/或正丙醇或异丙醇))的混合物。根据本发明，可以使用常规条件在传统的冷冻干燥机(例如，HofSonderanlagenbau,Lohra/德国冷冻干燥机)中进行冻干，或者在动态冷冻干燥机(例如，MeridionTechnologies,Mullheim/德国冷冻干燥机)中进行冻干。所述冻干物可以通过扫描电子显微镜(SEM)进行分析，以评估其结构，而所述冻干物的总含水量可以通过比色卡尔菲舍尔滴定法(colorimetricKarl-Fischertitration)确定。纯度分析通常通过反向高效液相色谱法完成。根据本发明，所述的冻干制剂可以与水性载体重组，以形成适于作为药物或者化妆品使用的水性制剂。所获得的水性制剂可以是溶液或者悬浊液，优选为水溶液。优选地，可以通过将固体冻干制剂与水性载体混合进行重组。特别优选地，把将所得到的水性制剂向有需要的患者进行给药前立即进行重组。“重组因数”被定义为冻干制剂(冻干物)含量与水性载体含量的比值。优选地，在1:0.5～1:1000之间；更优选地，在1:5～1:100之间；最优选地，在1:10～1:60之间。用于重组的水性载体可以是水溶液，所述水溶液进一步含有常规的药学上可接受的赋形剂(例如，增香剂)、pH调节剂和/或防腐剂。对于冻干物的重组，最优选的是水。根据本发明，固体冻干物的改善的稳定性(在本文中，通过所说明的DKP的减少量指示)也导致含有减少量的DKP的水性制剂的稳定性和质量相对于现有技术的KdPT溶液有所提高。优选地，所述冻干制剂的重组在给患者给药前立即进行，也就是在给药前10秒～20分钟，优选地，在给药前1～10分钟，更为优选地，在给药前2～5分钟进行。可选地，除了重组，冻干制剂可以就这样使用，或者与一种或多种(固体)载体物质混合，或者进一步与药物赋形剂/辅助物质混合，从而提供(固体)药物组合物。根据本发明，所述冻干制剂可以被用于作为药物，优选地，可用于选自包含疼痛相关疾病、瘙痒相关疾病、炎性疾病和/或其它疾病的组或者由这些疾病组成的组的疾病的治疗性和/或预防性处理、诊断和/或治疗。根据本发明，本发明还提供了所述冻干制剂用于制备药物的用途，所述药物可用于选自包含疼痛相关疾病、瘙痒相关疾病、炎性疾病和/或其它疾病组成的组或者由这些疾病组成的组的疾病的治疗性和/或预防性处理、诊断和/或治疗。根据本发明，所冻干制剂可以单独地使用，或者与已知的用于治疗选自包含疼痛相关疾病、瘙痒相关疾病、炎性疾病和/或其它疾病的组或者由这些疾病组成的组的疾病的物质联合使用。疼痛相关疾病选自包含下列疾病的组：背部疼痛，面部疼痛，头痛，偏头痛，关节痛，肌肉痛综合症，炎性疼痛相关的疾病，神经性疼痛，外周疼痛，周围神经损伤，内脏痛，腹痛，月经症状，肾结石和胆结石疼痛，瘙痒，癌症和肿瘤的疼痛，交感神经痛，术后疼痛，创伤后疼痛，痛觉过敏和/或炎症性疼痛。炎性疾病选择包含下列疾病的组：胃肠道炎性疾病，尤其是炎性肠病(例如，克罗恩氏病和/或溃疡性结肠炎)，胆囊发炎的急性或者慢性炎性改变，炎性假息肉，深部囊性结肠炎，肠壁囊样积气，胰腺炎，阑尾炎，动脉粥样硬化导致的心血管炎症，局部缺血，再狭窄和/或血管炎，脓毒症，败血症，过敏，哮喘，干燥综合征，肺部炎症，慢性气道炎症，慢性阻塞性肺病(COPD)，肿瘤增殖，肿瘤转移，移植排斥反应，关节炎性疾病(例如，类风湿性关节炎)，外阴阴道炎(所有原因导致的)，和/或脑部、皮肤、毛囊、泌尿生殖道的炎性疾病和眼部的炎性疾病。进一步，炎性疾病包括：窦炎，腱鞘炎，滑囊炎，肌腱炎，外上髁炎，粘连性囊炎，骨髓炎，骨关节炎炎症，眼部炎症，耳炎炎症和自身免疫炎症。瘙痒(痒)是皮肤的一种常见症状，通常作为一种疼痛刺激被体验。痒的感觉引起抓挠患处的渴望。通过抓挠而损伤的皮肤进一步为传染性病原体提供了良好的营养培养基，并且皮肤抓破区域的炎症并不罕见。瘙痒的皮肤和毛发疾病选自包含下列疾病的组：瘙痒症，银屑病，银屑病关节炎，接触性皮炎，特应性湿疹，硬皮病和其他纤维化疾病，系统性红斑狼疮，荨麻疹，扁平苔藓，淋巴瘤和/或过敏性疾病或由肥大细胞参与的疾病。从本发明的角度讲，所述疾病包括还包括其它疾病，例如，低钠血症、水肿、肠梗阻、咳嗽、青光眼、MS(多发性硬化症)、帕金森病和阿尔茨海默病。涉及疼痛相关或者瘙痒相关的疾病和/或炎性疾病的器官是，尤其是所谓的屏障器官(也就是胃肠道、皮肤、肺、泌尿生殖道)；脑部；耳鼻咽喉道；牙齿；骨骼；肝和毛发。本发明特别优选的实施例涉及所述屏障器官疾病的治疗。胃肠道疾病选择包含下列疾病的组：肠易激综合症，胃部病变，胃肠道溃疡，胃肠粘膜的外源性和内源性损害，胃肠道故障，腺瘤(尤其是在肠内)和/或幼年性息肉。肺(呼吸系统疾病)的疾病包括炎性肺部疾病，阻塞性肺病(例如，慢性阻塞性肺病(COPD))，限制性肺疾病，呼吸道感染(例如，上呼吸道感染、下呼吸道感染)，恶性肿瘤和良性肿瘤，胸膜腔疾病，肺血管疾病，和新生儿疾病。泌尿生殖道疾病包括：镇痛剂肾病，膀胱癌，膀胱膨出(膀胱下垂)，终末期肾病(ESRD)，肾小球肾炎，肾小球硬化症，肺出血肾炎综合征，血尿(尿中有血)，溶血性尿毒症综合征，免疫球蛋白A(IgA的)肾病，阳萎/勃起功能障碍，间质性膀胱炎，肾细胞癌，肾结石，肾移植，男性不育，肾病综合征，神经性膀胱，阴茎硬结症，和多囊肾疾病。进一步，可以用本发明的化合物进行治疗的疾病在US2011/0212882Al中进行了描述，该专利通过引用的方式并入本文。优选地，所述冻干制剂以及包含所述冻干制剂的所述药物或化妆品组合物可以用于皮肤炎性疾病的治疗和/或预防，胃肠道炎性疾病的治疗和/或预防，(血)血管炎性疾病的治疗/或预防，自身免疫性炎症、过敏反应和/或移植排斥的治疗和/或预防。根据本发明，所述冻干制剂也可以作为化妆品使用，也就是用于哺乳动物的皮肤和/或粘膜的非治疗性/美容性治疗。根据本发明，所述冻干制剂(不管是固体形式，还是重组的形式)或者含有所述冻干制剂的组合物可以全身给药或者局部给药。优选地，根据本发明，所述冻干制剂或组合物是以固体(或者就自身，或者与一种或多种(固体)载体物质混合，或者进一步与药物赋形剂/辅助物质混合)形式或者以重组的形式进行全身给药。在本发明的上下文中，术语“预防性治疗”可以被理解为，尤其是指，本发明的冻干制剂可以在疾病症状出现或者疾病风险存在前进行给药。根据本发明，所述冻干制剂(不管是固体形式，还是重组的冻干制剂形式)优选为以水溶液或者悬浊液的形式根据常规方法给药，例如，口服给药，经皮给药，鼻内给药，经粘膜给药，肺部给药，肠内给药，口含给药，直肠给药，尿道内给药，耳部给药，通过吸入给药，通过注射的方式给药(例如，静脉注射)，肠胃外给药，腹膜内给药，皮内给药，皮下和/或肌内和/或局部(例如，在身体疼痛的区域)给药。通过口服给药和通过注射给药是特别优选的。口服给药是最优选的。根据本发明，通过与至少一种载体物质或者辅助物质一起组成合适的剂量，所述冻干制剂尤其可以用于制备药物(药物组合物)。如上所述，根据本发明，优选的形式是与水性载体的重组形式。通常合适的形式是，例如，注射液、滴液、果汁、糖浆、喷雾、悬浮液、药片、贴片、胶囊、膏药、栓剂、油膏、乳膏、洗剂、凝胶、乳剂、气雾剂或多颗粒形式(例如，以丸或者颗粒的形式)。所述冻干制剂也可以作为棒状包装或密封小袋进行使用。对于本发明所述化合物的口服给药，具有缓释性(缓释制剂)的药物剂型是进一步优选的。具有缓释性的制剂的例子是缓释骨架片、多层片剂(其涂层可被，例如，设置为耐胃液的(例如，基于虫胶的涂层))、缓释胶囊或者利用生物降解聚合物的剂型(例如，聚乳酸聚合物)。常规的生理学方面可接受的药物或者化妆品辅助物质可以被加入到所述冻干制剂(不管是固体形式，还是重组水性制剂)中，因此用于制备药物组合物和化妆品组合物，所述辅助物质优选自包含下列物质的组：载体材料、填充剂、溶剂、稀释剂、湿润剂、乳化剂、染料、防腐剂、崩解剂、润滑剂、影响渗透压的盐类、缓冲物质、芳香剂和/或粘结剂。本发明所述的冻干制剂(以及含有所述冻干制剂的药物组合物)可以被给予到所需要的患者，例如，一天一次或者多次，尤其取决于实际的药物剂型、给药方式和所要治疗的疾病。在下文中，通过参考具体的实施例，更为详细地描述本发明。附图说明图1显示了通过冻干分别含有4mg/g，10mg/g和20mg/gKdPT碱的水性制剂而获得的冻干物的扫描电子显微镜图像。在上一列中的三个图像是放大了100倍获得的；在下一列中的三个图像是被放大了500倍获得的。这些图像显示了具有海绵状结构的冻干物的非晶体(无定形)形式。图2显示了单独的晶体形式的KdPT-乙酸盐的光学显微镜图像。具体实施方式1.本发明冻干制剂的制备向玻璃烧杯中转移所需要的约60％的注射用水(WFI，18～22℃)。所需量的一水合物柠檬酸被转移到玻璃烧杯中，并不断搅拌使其溶解。所需量的活性成分KdPT-乙酸盐被转移到玻璃烧杯中，并不断搅拌使其溶解。所需量的二水合物海藻糖被转移到玻璃烧杯中，并不断搅拌使其溶解。测定pH值，如果必要，进行校正，用1M氢氧化钠溶液调节pH到3.8～4.2。pH值在4.2以上不校正。用注射用水填满制剂到最终的重量。检验pH值，如果必要，进行校正，用1M氢氧化钠溶液调节pH到3.8～4.2。pH在值4.2以上不校正。用0.2μm的聚四氟乙烯过滤器进行过滤。配制的水性制剂的详细组分如下：表1：20mg/gKdPT-游离碱20.0mg一水合物柠檬酸9.2mg二水合物海藻糖55.26mg氢氧化钠溶液1Mq.s.注射用水ad1000.0mg表2:10mg/gKdPT-游离碱10.0mg一水合物柠檬酸9.2mg二水合物海藻糖55.26mg氢氧化钠溶液1Mq.s.注射用水ad1000.0mg表3:4mg/gKdPT-游离碱4.0mg一水合物柠檬酸9.2mg二水合物海藻糖55.26mg氢氧化钠溶液1Mq.s.注射用水ad1000.0mg在超声波清洗器中用纯水清洗小玻璃瓶15分钟。然后，干燥小玻璃瓶，并在300℃下干热灭菌(depyrogenized)2小时。冷却后，通过移液管，用相应的上表1～3中所示的水性制剂填满小玻璃瓶，在冻干位置置入塞子(stopper)。填满的小玻璃瓶被转移到冷冻干燥器中(购自HofSonderanlagenbau)。在冻干的过程中，引入两排空的小玻璃瓶进行热屏蔽，从而最小化外部温度对填满的小玻璃瓶的影响。小玻璃瓶中的溶液被冻干。然后，用氮气将冻干腔室排气到500毫巴，并将小玻璃瓶封闭。在排气到大气压力后，盖上小玻璃瓶，并在5℃下保存。冻干的工艺数据，例如，压强和搁板温度，通过控制计算机进行记录，并在图表中被可视化。在冻干过程中，小玻璃瓶内部的热电偶监控有助于监测必要的干燥时间。在小玻璃瓶中检测所述冻干物。在开发运行中，从小玻璃瓶中取出所述冻干物，并从径向切面将其打破以检测内部。通过扫描电子显微镜分析所述冻干物，以评估其结构。通过扫描电子显微镜，可以检测到冻干物的轻微缺陷，这种缺陷对于裸眼是不可见的。打破所述冻干物，并在10-1毫巴氩气氛中，在20毫安的喷射电流下，用薄的金片喷射垂直切面30秒。样品与金源之间的距离为约8厘米。通过扫描电子显微镜放大50倍、100倍、250倍和500倍进行分析。一些结果如图1所示。2.本发明冻干制剂的稳定性测定测定由以上项目1所描述的表1～3(实施例1：20mg/g；实施例2:10mg/g；实施例3:4mg/g)的水性制剂所获得的创造性的三种冻干物的稳定性，在25℃下24个月的储存期内，通过高效液相色谱法测定其中的赖氨酸-脯氨酸二酮哌嗪(DKP)的含量。结果如表4所示。为了进行比较，用单独的固体化合物KdPT进行相同的测定。结果如表5所示。在所有样品及比较实施例中，DKP的含量与KdPT的稳定性相关，也就是DKP含量越高，则KdPT的稳定性越低。在下列条件下进行高效液相色谱检测：柱子：SynergiHydroRP(4μm)250x4.6mm洗脱液：A：高氯酸水溶液B：高氯酸的水/乙腈溶液梯度：得到以下结果：表4：(创造性的实施例1～3)实施例10个月3个月6个月9个月12个月18个月24个月0.40.50.50.50.50.60.8实施例20个月3个月6个月9个月12个月18个月24个月0.40.40.40.50.60.60.6实施例30个月3个月6个月9个月12个月18个月24个月0.40.40.40.50.50.60.4所获得的数据是DKP基于KdPT游离碱含量的％值。表4表明，在实施例1～3(实施例1：0.4～0.8％；实施例2：0.4-0.6％；实施例3：0.4-0.4％)中，在24个月的一段时间周期内所测得的DKP含量几乎保持不变。这些结果清楚地显示了以本发明的冻干物形式存在的KdPT的稳定性。表5：(对比实施例1)对比实施例10个月3个月6个月9个月12个月18个月24个月(％)0.71.72.12.43.93.64.5所获得的数据是DKP基于KdPT游离碱含量的％值。表5表明，在对比实施例1(对比实施例1：0.7-4.5％)中，在24个月的一段时间周期内所测得的DKP含量显著增加。此外，在12个月后，白色粉末变成淡黄色，这显示了随着KdPT的逐渐降解DKP的含量增加。该结果清楚地显示了现有技术的固体化合物KdPT的储存稳定性降低。3.直接压片(Compression)(对比实施例2)3.1工艺不进行冻干，用合适的赋形剂直接压片KdPT。为了直接压片，制备了含有KdPT、用于直接压缩的赋形剂、崩解剂、助滑剂/润滑剂(如下)的最终混合物。随后，使用直径9毫米的冲压机(凸面体)在偏心压床上压片该制剂，直至各自的重量。3.2制剂使用通常用于直接压片的不同的赋形剂进行直接压片(DC)试验。使用了以下赋形剂：MCC101(微晶纤维素)山梨醇DCGalenIQ720(益寿糖)海藻糖甘露醇200DC使用了大约为KdPT的量的3到4倍的赋形剂。此外，二氧化硅和硬脂酸镁以常规用量被加入到用于压片的最终混合物中。崩解剂(交联羧甲纤维素)被加入制剂中，以实现令人满意的崩解时间。对于所有的制剂，目标药片的质量大约为250～270mg。此外，该剂型被包衣，以增加所制备的药品中KdPT的稳定性。使用了包衣聚合物PVA(聚乙烯醇)。使用的包衣的品级是来自Colorcon的即用系统(ready-to-use-system)OpadryII白色。所施用的聚合物的含量大约为4％，这是施用的包衣的通常含量，以得到耐水蒸气层。使用实验室包衣器GlattGC300进行包衣试验，一批量大小约为1.2～1.4kg。在完成上述过程后，通过直接压片制备以下药片样品。此外，包衣作为水蒸气阻隔层施用在PVA基底(也就是即用系统OpadryII白色)上。表6：*对应用50mg游离碱KdPT在可控的气候条件下将样品包装在Alu/Alu铝塑中。3.3结果在直接压片过程中，含有MCC101、山梨醇DC和GalenIQ720(益寿糖)的制剂显示令人满意的压片特性。海藻糖不可压片(不满足可行的药片硬度)。基于山梨醇、益寿糖和MCC的所制备的药品可以被压片为片剂，抗压范围尾50～80牛顿或者甚至更高。对于所有制剂，崩解时间不超过5分钟。稳定性最高的药片是如上表6所述的使用了MCC101的药片。表7：对比实施例20个月0.5个月1个月3个月(％)0.350.490.621.19所获得的数据是DKP基于KdPT游离碱含量的％值。从表7可以明显看出，在对比实施例2(甚至在3个月以后，对比实施例2就达到了0.35～1.19％)中，在三个月的一段时间周期内所测得的DKP的含量显著增加。这些结果清楚地显示，尽管施用了包衣，非冻干的KdPT剂型的储存稳定性依然降低。4.药物组合物的制备通过加入5mL的WFI，将如上述项目1所述而获得的实施例1～3的冻干物分别重组成水溶液，例如，用于口服给药。若需要，可以进一步向水溶液，或可选地，重组前的WFI，加入常规的药学上可接受的赋形剂，例如，增香剂、pH调节剂和/或防腐剂。