一种具有调血脂功能的中药复方制剂的制作方法

本发明属于医药领域，特别涉及一种由药用功能性红曲、药用绞股蓝总甙为活性成分的复方制剂，主要用于血脂的调解和非酒精性脂肪肝的治疗。

背景技术：

高血脂又称高脂血症，表现为血脂异常，是一种以脂质紊乱为特点的常见的代谢综合症，其特点包括高胆固醇血症、高甘油三酯血症以及家族性混合型高脂血症，它会引发一些其他代谢类疾病，如动脉粥样硬化、非酒精性脂肪肝、心血管疾病、糖尿病、胰岛素抵抗和肥胖症等。由血脂异常所引起的动脉粥样硬化会引起冠状动脉疾病和脑卒中，这是引起中老年人死亡的主要原因之一。近十年来，随着中国人生活方式以及饮食搭配的变化，心血管疾病已经成为头等杀手。据现代医学疾病监控的数据显示，全世界每天死于高血脂症引起的心脑血管疾病的人数近4000人之多，我国每年因高血脂症引起的心肌梗死、糖尿病、中风、偏瘫、脑梗死、致残、致死人数呈逐年上升趋势，我国血脂异常症患者已高达1.6亿，而且每天仍以万人的速度递增。有关统计资料表明，正常人群高血脂的发病率为20-40%，而且趋近低龄化。

目前用于治疗高血脂症的药物主要有烟酸类、酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制药、胆酸结合树脂、贝特类和他汀类等。贝特类是一类过氧化酶体增殖激活受体α（PPAR-α）的配体，是降TG的首选药，同时也具有很强的升高HDL-C的作用；他汀类药物也叫HMG-CoA还原酶抑制剂，能够有效抑制胆固醇生物合成中的关键酶HMG-CoA还原酶的活性，从而降低TC、LDL-C，起到调节人体异常血脂的作用，据资料显示他汀类药物大剂量应用时对一些患者会出现肌痛、胃肠道反应、头痛等暂时性反应；而胆酸结合树脂类药物应用剂量大，又有特殊臭味和一定的刺激性，用药后可能有恶心、便秘、腹胀、食欲不振等不良反应，一般两周后才可逐渐消失；贝特类药物和烟酸的应用会产生胃肠道不适、造成肝肾损伤。

非酒精性脂肪肝（NAFLD）是指在无酒精滥用的情况下由多种原因引起的肝脏脂肪代谢功能发生障碍，脂类物质动态平衡失调，致使肝脏简单的脂肪变性和肝脏中过多脂质（主要为甘油三酯）的堆积，病情如果进一步恶化会成为脂肪性肝炎、肝硬化或肝坏死。一般长期高血脂患者都伴有不同程度的脂肪肝病，心血管系统疾病的发病率也比正常人高。

传统中药或中药提取物具有药物来源丰富，安全性高，副作用小，价格低廉且适合长期治疗。因此研发具有降血脂功能的中药复方制剂具有很好的临床应用价值。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种具有调血脂功能的中药复方制剂。

本发明基于发明人对传统中医理论长期研究，认为高血脂和（或）非酒精性脂肪肝的病理实质是血中伏痰，而痰浊之成则因于脏腑功能失调。即痰瘀互结是高脂血症或非酒精性脂肪肝发展的必然结果，经脉受累是高脂血症变证的枢纽。因此，提出以理气化痰祛瘀为主，配合合理调养的综合治疗高血脂症原则。

红曲，别名：红曲霉、紫红曲霉、红大米、红糟。来源于曲霉科真菌紫色红曲霉寄生在粳米上而成的红曲米，以菌丝体及孢子入药。药用功能性红曲是以优质无污染非转基因大米为主要原料，利用现代生物发酵工程技术精制而成的一种纯天然的高科技发酵产品，其性甘味温，入肝、脾、大肠经，具有消食和胃，活血止痛，健脾，燥胃之功效。用于饮食停滞，胸膈满闷，消化不良等症。

绞股蓝，别名七叶胆、小苦药、公罗锅底、落地生、遍地生根。为葫芦科植物绞股蓝的全草。味苦、微甘，性凉。归肺；脾；肾经。功效：益气健脾，化痰止咳，清热解毒。临床主要用于老年人高脂血症、病毒性肝炎、慢性胃肠炎、慢性气管炎的治疗。绞股蓝主要有效成份是绞股蓝皂甙、绞股蓝糖甙(多糖)、水溶性氨基酸、黄酮类、多种维生素、微量元素、矿物质等。从绞股蓝全草中可提取的80多种皂甙被称为绞股蓝总甙，均具有四环三萜的达玛烷型结构，糖基均为低聚糖，其中四种与人参皂甙—Rb₁、—Rb₃、—R₄、—F₂完全相同，是一种很有价值的高级中药材。

本发明以除湿祛痰、活血化瘀、性温的红曲与可益气活血、祛痰化淤、性凉的绞股蓝进行组方，使二者的活性产生协同，加强其调和、理气、化痰、祛瘀的功效，从而强化其降血脂的效果。

为了进一步提高中药复方制剂的药效，本发明可选用经发酵的药用功能性红曲和绞股蓝总甙进行组方，二者按1.8:1～16.8:1的重量比进行配料，采用药学上可接受的辅料制备成内服制剂（如颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、口服液）。

下面通过经动物试验对本发明红曲绞股蓝总甙复方制剂对高脂饮食诱导的高脂血症合并非酒精性脂肪肝SD大鼠模型的治疗效果进行说明。

1、实验材料

（1）动物：SD雄性大鼠，清洁级，体重（200±10）g，由兰州大学医学实验中心提供；

（2）主要试剂和药物：功能性红曲粉购自浙江三禾生物工程有限公司，批号：2014012301，绞股蓝总甙购自安康正大制药有限公司，批号：20130704，脂必妥片购自成都地奥九泓制药厂，批号：1310005，绞股蓝总甙片购自广州白云山和记黄埔中药有限公司，批号：G3A001；基础饲料和高脂饲料（75%基础饲料+9%猪油+5.5%蛋黄粉+7.5%蔗糖+2.5%胆固醇+0.3%胆酸钠+0.2%丙基硫氧嘧啶）购自北京科澳协力饲料有限公司；TC、TG、LDL-C、HDL-C测定试剂盒均购自四川迈克生物股份有限公司，批号分别为：1213051、1213061、1013051、0913071，RT-PCR试剂盒及引物均购自宝生物工程（大连）有限公司。RNAiso Plus(Total RNA提取试剂)批号：AK9502，Prime Script^TMRT Master Mix (Perfect Real Time反转录试剂)批号：AK3002，SYBR Premix Ex Taq^TMⅡ(TliRNaseH Plus PCR试剂)批号：AK5702。

2、实验方法

（1）选取40只同一环境饲养的同龄SD雄性清洁级大鼠，体重（200±10）g，大鼠的饲养环境温度为23±1℃, 相对湿度55%±5%, 并且进行一个12h的光/暗循环。所有大鼠在基础饲料喂养一周后随机分为2组，分别为正常对照组（8只）和模型组（32只），正常对照组继续给予基础饲料且模型组给予高脂饲料30天后，所有大鼠通过乙醚麻醉后经眼眶采血，测定血清脂质；从第31天开始，模型组被随机分为4组（每组8只），分别为模型对照组，脂必妥片治疗组，绞股蓝总甙片治疗组，复方制剂治疗组。四组大鼠继续喂养高脂饲料，三个给药组药物均以相应浓度5ml/kg灌胃给予同一水平，同一剂量（脂必妥片治疗组187.5mg/kg和复方制剂治疗组93.9mg/kg给予的有效红曲剂量相同，绞股蓝总甙片治疗组156.7mg/kg和复方制剂治疗组93.9mg/kg给予的有效绞股蓝总甙剂量相同）的对应的药物，正常对照组和模型对照组给予相应剂量蒸馏水。给药37天后，禁食不禁水12h，取静脉血，测定血清脂质，10%水合氯醛腹腔麻醉，取肝脏。

（2）所有大鼠在取得肝脏后，肝脏中叶生理盐水漂洗后，立即浸泡入pH=7.4的PBS缓冲液配制的10%的福尔马林里，4℃放置一周后，石蜡包埋进行组织切片，HE染色后检查肝脏组织病理变化。

（3）所有大鼠剩余的肝脏不用漂洗，立即放入已经通过0.1%DEPC水处理过的且高压灭菌的15ml的离心管里，-80℃储存，30天之内将储存的肝脏组织做实时定量PCR（RT-PCR），按试剂盒说明操作，检测大鼠肝脏中有关脂质合成和代谢的酶所对应的mRNA的相对表达，用β-actin做内参，羟甲戊二酰基辅酶A还原酶（HMGR）、脂肪酸合成酶（FAS）、乙酰辅酶A羧化酶1（ACC-1）、固醇响应原件结合蛋白1c（SREBP-1c）、过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPAR-α）和肉毒碱棕榈酰基转移酶1（CPT-1）的合成引物序列如表1所示。

（4）数据统计及作图用spss16.0软件包；计量资料以表示，进行单因素方差分析和组间两两比较。

3、实验结果

3.1血清脂质的测定结果

给药前4组模型组与正常对照组相比血清TG、LDL-C和TC浓度显著升高（P<0.01），HDL-C浓度显著降低（P<0.01），说明4组模型组高血脂模型建模成功；给药后三组给药组与模型对照组相比治疗效果非常显著（P<0.01）；复方制剂治疗组和其他两组给药组相比治疗效果更显著（P<0.05，P<0.01），见表2。

3.2肝脏组织病理学分析

对5组大鼠肝脏切片HE染色后显示如图1，模型对照组与正常对照组，有大量的圆形脂肪空泡，说明非酒精性脂肪肝模型建造成功，而三个给药组也有不同程度的脂肪滴病变（有少量圆形脂肪空泡），复方制剂组肝脏组织更趋近于正常对照组（圆形脂肪空泡的量非常少），提示复方制剂组对大鼠非酒精性脂肪肝有预防或治疗作用。

3.3肝脏有关脂质合成和代谢mRNA的表达

每个mRNA都将正常对照组（NC）的表达相对设为1，其他组的高低变化以此为基础。图2显示模型对照组（MC）与正常对照组（NC）相比，有关脂质合成的mRNA——羟甲戊二酰基辅酶A还原酶（HMGR）、脂肪酸合成酶（FAS）、乙酰辅酶A羧化酶1（ACC-1）和固醇响应原件结合蛋白1c（SREBP-1c）的表达都明显升高（P<0.01），有关脂质代谢的mRNA——过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPAR-α）和肉毒碱棕榈酰基转移酶1（CPT-1）的表达都明显降低（P<0.01），提示大鼠在给予高脂饲料后脂质的合成酶被激活有所上调，代谢酶被抑制明显下调。三个给药组mRNA的表达与模型组相比有关脂质合成的mRNA表达都显著降低（P<0.01），有关脂质代谢的mRNA表达显著升高（P<0.01）；与绞股蓝总甙片治疗组（JT）相比，复方制剂组（HG）对HMGR和ACC-1下调及对 CPT-1的上调作用更加显著（P<0.01）；与脂必妥片组（ZT）相比，复方制剂组（HG）对FAS、ACC-1和SREBP-1c下调及对PPAR-α和CPT-1的上调作用更显著（P<0.01）。提示与绞股蓝总甙片和脂必妥片相比，复方制剂对一些有关脂质合成或代谢的酶有更强的靶向调节作用。

上述动物实验结果表明，本发明复方制剂能显著降低模型大鼠血清TC、TG和LDL-C，显著升高血清HDL-C，能有效地预防和治疗模型大鼠的肝脏脂滴的沉积，上述作用都显著的优于单独使用含相同红曲剂量的脂必妥片（成都地奥九泓制药厂）或单独使用含相同剂量绞股蓝总甙的绞股蓝总甙片（广州白云山和记黄埔中药有限公司），因而有很好的协同作用。实验还表明，本发明中药复方制剂对肝脏中一些有关脂质合成和代谢的酶也有较好的调节作用，能有效的促进血脂恢复正常，逆转肝脏脂滴的沉积，使病变肝脏组织恢复正常，因此可用于治疗和预防高脂血症、非酒精性脂肪肝或各种慢性肝病肝损伤等。另外，本发明中药复方制剂未见毒副作用，耐受性好，价格低廉，适合长期治疗使用。

附图说明

图1 为SD大鼠肝组织病理观察结果（HE染色×400），其中NC:正常对照组，MC:模型对照组，ZT:脂必妥片治疗组，JT:绞股蓝总甙片治疗组，HG:复方红曲绞股蓝总甙制剂治疗组，RFV:圆形脂肪空洞（Round Fat Void）

图2为SD大鼠肝脏组织中有关脂肪代谢与合成酶的mRNA相对表达量的统计图，其中NC:正常对照组，MC:模型对照组，ZT:脂必妥片治疗组，JT:绞股蓝总甙片治疗组，HG:复方红曲绞股蓝总甙制剂治疗组。^**P<0.01，其他组vs正常对照组（n=8）；^##P<0.01，给药组vs模型对照组（n=8）；^▲P<0.05，^▲▲P<0.01，脂必妥片治疗组，绞股蓝总甙片治疗组vs复方制剂治疗组（n=8）。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明中药复方制剂的制备和用法、用量进行说明。

实施例1、颗粒剂药物的制备

按1.8:1的重量比称取取功能性红曲粉和绞股蓝总甙，以药剂学制备颗粒剂的常规工艺和辅料制备而成；规格：5g/袋；

用法用量：每天3次，每次服5-10g；90天为一疗程，根据个人具体情况服用2-3个疗程。

实施例2、胶囊剂药物的制备

按5:1的重量比称取取功能性红曲粉和绞股蓝总甙，以药剂学制备胶囊剂的常规工艺和辅料制备而成；规格：200mg/粒；

用法用量：每天3次，每次服2-3粒；90天为一疗程，根据个人具体情况服用2-3个疗程。

实施例3、片剂药物的制备

按10:1的重量比称取取功能性红曲粉和绞股蓝总甙，以药剂学制备片剂的常规工艺和辅料制备而成；规格：350mg/片；

用法用量：每天2次，每次服350-700mg；90天为一疗程，根据个人具体情况服用2-3个疗程。

实施例4、丸剂药物的制备

按15:1的重量比称取取功能性红曲粉和绞股蓝总甙，以药剂学制备颗粒剂的常规工艺和辅料制备而成；规格：200mg/粒；

用法用量：每天3次，每次服2-3粒；90天为一疗程，根据个人具体情况服用2-3个疗程。

实施例5、口服液的制备

制备工艺：按药剂学制备口服液的常规工艺和辅料制备而成；规格：每瓶10ml；

按18:1的重量比称取取功能性红曲粉和绞股蓝总甙，以药剂学制备颗粒剂的常规工艺和辅料制备而成；规格：10ml/瓶；

用法用量：每天3次，每次服10-20ml；90天为一疗程，根据个人具体情况服用2-3个疗程。

上述实施例中，功能性红曲可通过红曲酶发酵制得或商业采购得到；绞股蓝总甙可由七叶或五叶绞股蓝全草或地上部分提取得到或商业购得。