本发明涉及柏子仁有效部位的制备和应用，特别涉及柏子仁有效部位在预防或治疗老年性痴呆药物、保健品中的应用，属医药领域范畴。
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：老年性痴呆主要包括阿尔茨海默病(ad)和血管性痴呆(vd)，阿尔茨海默病约占60～70％，血管性痴呆约占20～30％。阿尔茨海默病（alzheimer’sdisease,ad）是一种以进行性痴呆为主的中枢神经系统的退行性疾病。其临床特征为记忆及其他认知功能障碍，早期临床症状包括运动、感觉或协调功能缺陷。ad患者的主要的病理改变为细胞外淀粉样蛋白沉淀形成老年斑、神经元纤维缠结以及广泛神经元突触的缺失、炎症、氧化甚至是坏死。随着社会的发展和人口的老龄化，阿尔茨海默病的发病随年龄的增长而增加。根据世界卫生组织（who）和国际阿尔茨海默病协会（adi）统计，目前全球患有痴呆的患者估计在4700万左右，其中阿尔茨海默病患者大约占60%-70%。这个数字预计每20年增长1倍，即每4秒钟地球的某个角落就出现一例新的痴呆病例。痴呆的患病率和巨大耗费给社会和科研以巨大挑战，然而到目前为止，还没有一种药物可以从根本上治疗阿尔茨海默病，科研工作者们十多年来屡战屡败，屡败屡战。ad发病机制复杂，目前国内外尚没有能根本治疗ad的药物，因此早期治疗至关重要。目前已上市的治疗药物主要分为两种，一种为胆碱酯酶抑制剂，如盐酸多奈哌齐、加兰他敏、酒石酸卡巴拉汀、石杉碱甲等；另一种为兴奋性氨基酸受体拮抗剂，如盐酸美金刚。另有抗炎、抗氧化、抗胆固醇、抗β淀粉样蛋白类药物用于ad的辅助治疗。上述药物能短期改善ad患者的症状，但不能缓解疾病的发展，且易形成耐药，不良反应明显；而中医药在防治轻度认知障碍和老年性痴呆具有较好的临床效果，有多途径、多环节整体调节的特点，且使用天然药物的毒副作用小。因此，中药单体或其有效组分的提取应用于ad的防治具有十分重要的意义。柏子仁（arboruitaeseed），又称柏实，为裸子植物柏科侧柏的干燥成熟种仁。它性平味甘，入心、肝、肾、大肠经，具有宁心安神，敛汗生津，润肠通便之功效，为常用中药材，应用历史悠久，始载于《神农本草经》，列为上品。《本草纲目》记载：柏子仁具“养心气，润肾燥，安魂定魄，益智宁神；泽头发，治疥癣。”功效，用于惊悸怔忡，失眠健忘，盗汗，肠燥便秘等症。现代药理研究表明，柏子仁在诸多方面都有较好的疗效，多以组方形式广泛用于临床。目前药理研究发现柏子仁水及其醇提物对东茛菪碱所致的学习记忆获得、巩固障碍、电惊厥所致的记忆巩固障碍、乙醇导致的学习再现障碍等均有改善作用，且柏子仁可使深睡时间明显延长，柏子仁石油醚提取物对鸡胚背根神经节突起的生长有轻度促生长作用。本发明人进一步研究发现一种柏子仁有效部位能显著改善ad大鼠认知功能障碍，其对防治老年痴呆意义重大。技术实现要素：本发明使用柏子仁，对其进行提取加工，以柏子仁有效部位为主要的药用组份，加入适宜辅料，制备成适宜的制剂用阿尔茨海默症、血管性痴呆等各种老年痴呆症的预防和治疗。本发明所述的柏子仁有效部位是按照以下的制备工艺制备而成，其工艺步骤是（1）取柏子仁药材清洗，干燥，粉碎成粗粉；（2）柏子仁粗粉用10～15倍量的乙醇，50℃～65℃回流提取2～4次，每次2～6h，过滤，合并两次滤液，滤液浓缩得浸膏；（3）将所得浸膏加4倍量水溶解后用大孔树脂柱吸附，然后用去离子水洗至流出液无色再用乙醇溶液洗脱；（4）合并大孔树脂纯化后的洗脱液，用旋转蒸发器浓缩，55～65℃下真空蒸干得到柏子仁有效部位。步骤（2）中所述柏子仁的有效部位制备方法，其特征在于用10倍量的75～95%乙醇在60℃下回流提取4次，每次提取4h。步骤（3）中所述柏子仁的有效部位制备方法，其特征在于大孔树脂型号可选用d101、d4020、d3520、d4006hpd-500、hp-20、h103、nka-9、nka-2、x-5、xad-4等。步骤（3）中所述柏子仁的有效部位制备方法，其特征在于大孔树脂型号优选d101。步骤（3）中所述柏子仁的有效部位制备方法，其特征在于大孔树脂吸附后乙醇洗脱浓度为50%～95%。步骤（3）中所述柏子仁的有效部位制备方法，其特征在于大孔树脂吸附后乙醇洗脱浓度优选为95%。步骤（4）中所述真空干燥温度优选60℃。本发明所述的柏子仁的有效部位其主要含有柏子仁皂苷，其有效部位含量大于60%。本发明所述柏子仁的有效部位在制备防治老年性痴呆的药物、保健品中的用途。本发明所述老年性痴呆为阿尔茨海默病、血管性痴呆、阿尔茨海默病和血管性痴呆并存的混合性痴呆一种或几种。本发明所述老年性痴呆主要为阿尔茨海默病。本发明所述防治老年痴呆的药物或保健品的制备方法，其特征在于：其剂型为丸剂、颗粒剂、片剂、糖浆剂、合剂、胶囊剂、酊剂、茶剂、注射剂。本发明提供的柏子仁的有效部位还可以用于制备保健食品添加剂和/或保健食品，可以制备成保健食品的各种剂型，例如片剂、胶囊剂、口服液、保健饮料、保健茶等；也可以作为食品添加剂，应用于食物（如面包、面条等）、保健茶、保健饮料等。具体实施方式下面通过具体实施例对该发明作进一步的描述。实施例1：柏子仁有效部位制备工艺（1）取1000g柏子仁药材清洗，干燥，粉碎后过60目筛，得到粗粉；（2）柏子仁粗粉用10倍量的75%乙醇，60℃回流提取4次，每次4h，过滤，合并两次滤液，滤液浓缩得浸膏；（3）将所得浸膏加4倍量水溶解后用d101大孔树脂柱吸附，然后用去离子水洗至流出液无色再用95%乙醇溶液洗脱；（4）合并大孔树脂纯化后的洗脱液，用旋转蒸发器浓缩，60℃下真空蒸干得到柏子仁有效部位。实施例2：在体研究证明柏子仁有效部位对app/ps1双转基因痴呆小鼠具有治疗作用1材料1.1实验动物5月龄app/ps1双转基因小鼠48只，雄性，体重25±2g，spf级，相同遗传背景c57bl/6j小鼠8只为正常对照。1.2实验药物及试剂阳性对照药物选用盐酸多奈哌齐(商品名称：安理申)，5mg/片，使用前将片剂研成粉末，以双蒸水配制成灌胃药液0.65mg/kg·d-1；石杉碱甲胶囊用双蒸水配制成灌胃药液，配制浓度为0.026mg/kg·d-1。乙酰胆碱酯酶(ache)试剂盒、胆碱乙酰转移酶(chat)试剂盒、sod活性试剂盒、mda含量试剂盒、gsh含量试剂盒。柏子仁有效部位按实施例1制备所得。1.3主要仪器dms-2型morris水迷宫仪数据自动采集及处理系统，bh-2型生物显微镜，dpxviewpro型计算机彩色图像处理系统，石蜡切片装置，全自动封闭式组织脱水机，包埋机，病理组织漂烘仪，image-proplus图像分析系统，高速冷冻低温离心机。2方法2.1分组与给药按体重一致原则，随机将app/ps1双转基因小鼠分为模型组、柏子仁有效部位低剂量组(30mg/kg/d)、柏子仁有效部位中剂量组(60mg/kg/d)、柏子仁有效部位高剂量组(120mg/kg/d)、盐酸多奈哌齐组(0.65mg/kg/d)和石杉碱甲组（0.026mg/kg·d），每组8只；相同遗传背景的同月龄c57bl/6j小鼠8只作为正常对照组。正常组和模型组给以等体积蒸馏水灌胃，每日1次。各组小鼠灌胃8周，至7月龄时进行morris水迷宫试验。2.2脑组织样品处理小鼠于末次行为学测试后，禁食12h，进行脑组织取材。对脑组织进行病理及免疫组化染色、组织含量测定等实验。2.4统计学处理所得数据以均数±标准差表示，采用统计软件spss18.0进行统计分析，组间数据比较用单因素方差分析，采用lsd、dunnett′sc(方差不齐时)检验，以p＜0.05为差异有显著性意义。行为学morris水迷宫测定中定位航行试验采用重复测量设计的方差分析，空间探索试验采用单因素方差分析。3实验结果3.1morris水迷宫实验中柏子仁有效部位对app/ps1双转基因小鼠学习记忆能力影响结果显示，与空白对照组比较，模型组的逃避潜伏期显著延长（p＜0.01），平台停留时间显著减少（p＜0.05），穿越平台次数显著减少（p＜0.01）；与模型组比较，柏子仁有效部位中剂量组（p＜0.05）、高剂量组（p＜0.01）和阳性药盐酸多奈哌齐组（p＜0.05）逃避潜伏期显著减少，柏子仁有效部位中剂量组目标象限停留时间（p＜0.05）和穿越平台次数显著增加（p＜0.01），说明柏子仁有效部位可以提高大鼠学习记忆能力；与阳性药比较，柏子仁有效部位高剂量组潜伏期比阳性药组短，柏子仁有效部位中剂量组目标象限停留时间和穿越平台次数比阳性药组多，说明柏子仁有效部位对大鼠学习记忆能力的提高作用比阳性药好（见表1）。表1柏子仁有效部位对app/ps1双转基因小鼠空间学习记忆能力的影响组别数量逃避潜伏期(s)目标象限穿越次数平台停留时间(s)目标象限停留时间(s)穿越平台次数空白对照组818.3±1.93.4±0.31.6±0.210.3±0.83.4±0.5模型组836.4±3.6##2.7±0.30.7±0.1#7.4±0.61.6±0.1##柏子仁有效部位低剂量组831.1±3.03.5±0.31.3±0.19.6±0.91.9±0.2柏子仁有效部位中剂量组824.7±2.6*2.1±0.20.8±0.111.5±1.2*2.7±0.3**柏子仁有效部位高剂量组823.1±3.1**3.7±0.41.0±0.110.4±1.02.2±0.4*盐酸多奈哌齐组826.7±2.5*3.3±0.31.1±0.19.7±0.81.9±0.3石杉碱甲组830.2±3.44.2±0.4*1.4±0.1*11.0±1.1*2.1±0.34与空白对照组比较，#p＜0.05、##p＜0.01；与模型组比较*p＜0.05，**p＜0.013.2柏子仁有效部位对app/ps1双转基因小鼠海马内胆碱乙酰转移酶（ache）和乙酰胆碱酯酶（chat）活性的影响结果显示，与空白对照组比较，模型组的ach含量显著降低、ache活性显著增加、chat活性显著减少；与模型组比较，柏子仁有效部位高剂量组（p＜0.05）和阳性药组的ach含量显著增加，ache活性显著减少、chat活性显著增加，说明柏子仁有效部位可通过调节胆碱能神经系统增加小鼠海马乙酰胆碱含量（见表2）。表2柏子仁有效部位对app/ps1双转基因小鼠海马内ach、ache和chat含量的影响组别剂量mg/kgach（ug/ml）ache(u/g)chat(u/g)空白对照组134.51±11.06220.31±18.2942.17±4.08模型组90.32±8.22#421.53±31.08###24.18±2.84#柏子仁有效部位低剂量组30.0112.07±10.39333.57±31.2226.98±2.22柏子仁有效部位中剂量组60.0101.58±9.91359.88±34.6830.83±2.95柏子仁有效部位高剂量组120.0128.57±11.12*298.24±28.17*32.07±3.14*盐酸多奈哌齐组0.65141.01±12.78*287.79±25.15**36.76±4.18**石杉碱甲组0.026131.58±12.64*294.13±28.75*35.88±3.63**与空白对照组比较，#p＜0.05、###p＜0.001；与模型组比较*p＜0.05、**p＜0.013.3柏子仁有效部位对app/ps1双转基因小鼠海马中老年斑（sp）的影响结果显示，与空白对照组比较，模型组小鼠海马中sp数量显著增加（p＜0.001）；与模型组比较，柏子仁有效部位高剂量组（p＜0.01）和阳性药盐酸多奈哌齐组（p＜0.05）小鼠海马中sp数量显著减少，说明柏子仁有效部位可减少app/ps1双转基因小鼠海马中老年斑沉积（见表3）。表3柏子仁有效部位对app/ps1双转基因小鼠海马中老年斑（sp）的影响组别剂量mg/kg动物数量sp数量（个）空白对照组84.1±0.8模型组857.6±5.0###柏子仁有效部位低剂量组30.0834.7±3.8柏子仁有效部位中剂量组60.0839.4±5.7柏子仁有效部位高剂量组120.0827.8±2.6**盐酸多奈哌齐组0.65830.1±2.7*石杉碱甲组0.026833.9±3.5与空白对照组比较，###p＜0.001；与模型组比较*p＜0.05、**p＜0.013.4柏子仁有效部位对app/ps1双转基因小鼠海马sod活性、mda含量、gsh含量的结果显示与空白对照组比较，模型组的sod活性显著减少、mda含量显著增加、gsh含量显著减少；与模型组比较，柏子仁有效部位中剂量组（p＜0.05）、高剂量组（p＜0.01）和阳性药组（p＜0.01）sod活性显著增加，柏子仁有效部位高剂量组和阳性药组（p＜0.05）mda含量显著减少；说明柏子仁有效部位可以提高大鼠海马组织的抗氧化能力（见表4）表4柏子仁有效部位对双转基因小鼠海马中sod活性、mda含量、gsh含量的影响组别sod(u/mgprot)mda(nmol/mgprot)gsh(mg/gprot)空白对照组48.85±4.122.85±0.336.38±0.61模型组25.56±2.88#6.47±0.68##4.25±0.35#柏子仁有效部位低剂量组31.87±3.093.77±0.363.94±0.66柏子仁有效部位中剂量组46.51±4.55*4.18±0.405.24±0.75柏子仁有效部位高剂量组57.23±6.05**3.58±0.32*4.88±0.61盐酸多奈哌齐组56.14±5.25**3.71±0.24*5.28±0.52石杉碱甲组64.20±6.11**3.12±0.40*5.15±0.51与空白对照组比较，#p＜0.05、##p＜0.01；与模型组比较*p＜0.05、**p＜0.014结论柏子仁有效部位能改善app/ps1双转基因痴呆小鼠认知功能障碍；柏子仁有效部位可以调节胆碱能神经系统增加小鼠海马乙酰胆碱含量，减少老年斑（sp）发生；柏子仁有效部位可以提高小鼠海马组织的抗氧化能力，增加sod活性、降低mda含量、增加gsh含量。本发明采用柏子仁有效部位作为制备治疗老年性痴呆的药物，采用相关药理学试验进行柏子仁有效部位防治老年性痴呆的药效学评价，分别从改善中枢胆碱能神经系统、抑制β淀粉样蛋白(aβ)形成和沉积、神经保护方面，阐明柏子仁有效部位多途径、多靶点治疗老年性痴呆的用途。当前第1页12