本发明属于活性物质及其制品研究开发领域，涉及一种中药药物物质，特别涉及一种具有降血脂降血糖活性的中药药物物质组合物及其制备方法与应用。
背景技术：
高脂血症是指血脂水平过高，可直接引起一些严重危害人体健康的疾病，如动脉粥样硬化、冠心病、胰腺炎等，包括原发性和继发性两类。目前上市的大多数药物对在治疗高血脂症的同时存在一定的副作用；糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病。高血糖则是由于胰岛素分泌缺陷或其生物作用受损，或两者兼有引起。糖尿病时长期存在的高血糖，导致各种组织，特别是眼、肾、心脏、血管、神经的慢性损害、功能障碍，目前呈现多发趋势。然而市场药物以化药为主，并有一定副作用。中药复方凭借其多成分、多靶点的优势，更具有发展前景。
本中药复方由甜叶菊、三七、山楂、荷叶等药味组成，其中药药物物质化学组成架构涉及：酚类、萜类、生物碱类、氨基酸类等。在研究中将本中药复方进行提取与大孔吸附树脂富集，并进行制备物优化组合，经药效考察，其组合物显示出显著降血脂降血糖作用，具有进一步进行创新药物及其健康产品研发的重要价值。
技术实现要素：
本发明的第一个目的在于提供一种具有显著降血脂、降血糖活性的中药药物物质组合物；本发明的第二个目的在于提供其制备方法；本发明的第三个目的在于提供其质量检测及控制方法；本发明的第四个目的在于提供本活性物质的中药方原组合，由三七、荷叶、山楂、甜叶菊等药味组成；本发明的第五个目的在于为药品或健康品等应用。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的：
本发明中药药物物质组合主要由酚类、生物碱类、萜类、氨基酸类等组成，可由化学合成、制备，天然药物提取制备组合制成；本发明中药药物物质组合可由如下4组药用植物及其代用品种，包括其药用部位及非药用部位，药材及其饮片组合制成。
组1甜叶菊同属植物及其炮制品：例如甜叶菊等，以及其他含酚酸类植物及其炮制品：例如菊花、金银花、山银花，等等。
组2荷叶同属植物及其炮制品：例如莲、黄叶莲等；荷叶、荷叶炭，等等。
组3山楂同属植物及其炮制品：例如阿尔泰山楂、橘红山楂、黄果山楂、绿肉山楂、中甸山楂、野山楂、光叶山楂、山东山楂、湖北山楂、甘肃山楂、钝裂叶山楂、毛山楂、滇西山楂、锐刺山楂、山楂、裂叶山楂、辽宁山楂、云南山楂、山东山楂、陕西山楂、准噶尔山楂、多浆山楂、华中山楂等；山楂、炒山楂、焦山楂、山楂炭，等等。
组4三七同属植物及其炮制品：例如人参、竹节参、三七、假人参、西洋参、屏边三七、姜状三七等；三七、三七粉、熟三七、三七片，等等。
本发明中药药物组合优选为以下原料药制成：
甜叶菊 10-600重量份 荷叶 10-600重量份
山楂 10-400重量份 三七 10-300重量份
本发明中药药物物质组合物制备方法包括如下步骤：
步骤1：选取上述原料药；
步骤2：醇或水提取；
步骤3：大孔吸附树脂纯化
上述步骤2中，将原料药用水或5％～90％乙醇回流提取1～4次，每次提取0.5～3小时，合并提取液，回收溶剂，减压干燥，即得提取物。
上述步骤3中，将步骤2所得提取物加水分散，使水分散液浓度为0.01～0.20g/mL，或提取液适当回收溶剂的水溶液通过弱极性或非极性大孔吸附树脂，吸附流速为0.1～9BV/h，树脂柱径高比为1∶1～10，上样液浓度为0.01～0.20g/mL，收集上样流出液，然后水洗脱1～10倍树脂体积，洗脱流速为0.1～10BV/h，收集洗脱液，合并上样流出液与水洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得富集物I；5～50％乙醇洗脱1～15倍树脂体积，洗脱流速为0.1～10BV/h，收集洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得富集物II；50％～95％乙醇洗脱1～10BV，洗脱流速为0.1～10BV/h，收集洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得富集物III。
以上所述的制备物按优化比例配制即得组合物，其质量控制为：总氨基酸含量达1～30％、总酚类含量达10～50％、总萜含量达1～40％、总生物碱含量达0.1％～10％、异绿原酸C含量达0.1～20％、金丝桃苷含量达0.1～20％、人参皂苷Rb1含量达0.01～10％、甜菊苷含量达1～30％、荷叶碱含量达0.01～5％。
将以上所得制备物组合物混合后，加入常规辅料，按常规的制剂工艺制成药剂学可接受的任意常规剂型，包括胶囊剂、片剂、颗粒剂、凝胶剂、缓释剂、口服液等。
以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实验例1本发明降血脂作用
(一)实验材料
1.实验动物
昆明小鼠，雄雌各半，体重18～22g。由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。
2.药品与试剂
受试药：本中药药物物质组合物(简称组合物)。试剂：辛伐他汀片(批号：L026625)，杭州默沙东制药有限公司；生理盐水(批号：C13040602)，山东华鲁制药有限公司；小鼠甘油三酯酶联试剂盒(货号：E03T0018)，Bluegene公司；小鼠总胆固醇试剂盒(货号：E03C0745)，Bluegene公司；小鼠低密度脂蛋白酶联试剂盒(货号：E03L0020)，Bluegene公司；小鼠高密度脂蛋白酶联试剂盒(货号：E03H0211)，Bluegene公司。
(二)实验方法与结果
1.分组及给药方式
小鼠适应性喂养一周后，随即分成4组，每组8只，雌雄各半，即分别为空白组、模型组、阳性药组、组合物试药组；空白组和模型组给生理盐水，阳性药组给辛伐他汀片，菊荷方组合物试药组给菊荷方中剂量组合物。辛伐他汀制成浓度0.328mg/mL，按照5.25mg/kg灌胃给药，蛋黄用生理盐水制成75％蛋黄乳液，按照0.5mL/只腹腔注射给药，造成高血脂模型。
2.高血脂模型试验
空白组和模型组灌胃蒸馏水，给药组分别灌胃各组药物，共7天，在第6天给药后，模型组和给药组分别腹腔注射75％蛋黄乳液造高血脂模型，除空白组外，各组腹腔注射75％蛋黄乳液，同时，禁食不禁水，12h即末次给药，1h后摘眼球取血，将血液样品离心(4℃，3500r/min，离心15min)，分离血清，测定血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C含量。
3.统计方法
使用SPSS17.0统计软件进行分析，实验结果以均数±标准误表示。采用两样本t检验和非参数检验(Mann-Whitney Test)进行两两比较，采用单因素方差分析(ANOVA)进行多组间比较，组间差异采用LSD(方差齐)或者Games-Howell法(方差不齐)。
4.实验结果
表1菊荷方高血脂模型药效结果
(注：数据为均值±标准偏差；**表示与模型组比较，P＜0.01，有极显著性差异；*表示与模型组比较，P＜0.05，有显著性差异；#表示和空白组比较，P＞0.05，没有显著差异)。
(三)结论
由表1可知：模型对照组小鼠HDL、LDL、TG、TC与空白对照组有极显著性差异(P＜0.01)，说明用75％蛋黄乳液腹腔注射给药造高血脂模型成功；阳性药组指标HDL和模型组比较，P＜0.05，有显著性差异，阳性药组指标LDL、TG、TC和模型组比较，P＜0.01，有极显著性差异，并且阳性药组四项指标和空白组比较，P＞0.05，没有显著差异，说明阳性药对高血脂有良好的治疗作用；组合物组指标LDL、TG、TC和模型组比较，P＜0.01，有极显著性差异，指标HDL和模型组比较P＜0.05，有显著性差异，并且组合物组四项指标和空白组比较P＞0.05没有显著差异，说明组合物对高血脂有良好治疗作用。
综合实验数据分析可知：组合物可起到显著治疗高血脂的作用，药效优于本次实验所用阳性药。
实验例2本发明降血糖作用
(一)实验材料
1.实验动物
ICR小鼠，雄雌各半，体重18-22g。由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。
3.药品与试剂
受试药：组合物。试剂：四氧嘧啶(批号：2041558501；sigma-aldrich西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司)；盐酸二甲双胍片(批号1409054；华润双鹤药业股份有限公司)；生理盐水(批号：C13040602，山东华鲁制药有限公司)。
(二)实验方法与结果
1.分组及给药方式
小鼠适应性喂养一周后，随即分成4组，每组8只，雌雄各半，即分别为空白组、模型组、阳性药组、组合物试药组；空白组和模型组给生理盐水，阳性药组给盐酸二甲双胍片，组合物试药组给菊荷方高剂量组合物试药。盐酸二甲双胍片配成浓度14.063mg/mL，按照225mg/kg灌胃给药，四氧嘧啶溶液浓度4.375mg/mL，按照70mg/kg小鼠尾部静脉注射给药，造成高血糖模型。
2.高血糖模型试验
模型组及各给药组按照70mg/kg小鼠尾部静脉注射给药，造成高血糖模型，空白组和模型组灌胃蒸馏水，给药组分别灌胃各组药物，共21天，给药第21天，禁食不禁水6～12h，取血测定血糖作为服糖前的血糖值，立即灌胃葡萄糖2.5g/kg，测定给糖后1小时，2小时及3小时的血糖值。
3.统计方法
使用SPSS17.0统计软件进行分析，实验结果以均数±标准误表示。采用两样本t检验和非参数检验(Mann-Whitney Test)进行两两比较，采用单因素方差分析(ANOVA)进行多组间比较，组间差异采用LSD(方差齐)或者Games-Howell法(方差不齐)。
4.实验结果
表2菊荷方降血糖药效结果
(注：数据为均值±标准差；**表示与模型组比较P＜0.01，有极显著性差异；*表示与模型组比较P＜0.05，有显著性差异；#表示和空白组比较，P＞0.05没有显著差异)。
(三)结论
由表2可知：模型对照组小鼠空腹血糖值、给糖1h血糖值、给糖2h血糖值、给糖3h血糖值与正常对照组有极显著性差异(P＜0.01)，说明尾部静脉注射四氧嘧啶造成高血糖模型成功；阳性药组空腹血糖值、给糖2h血糖值、给糖3h血糖值指标和模型组比较，P＜0.01，有极显著性差异，并且和空白组比较，P＞0.05没有显著差异，给糖1h血糖值指标和模型组比较，P＜0.01，有极显著性差异，和空白组比较，P＜0.01，有极显著差异，说明阳性药对高血糖有治疗作用；菊荷方组合物试药组空腹血糖值、给糖1h血糖值、给糖2h血糖值、给糖3h血糖值指标和模型组比较，P＜0.01，有极显著性差异，并且和空白组及阳性药组比较P＞0.05，均没有显著差异，并且经药效反应后组合物试药组和阳性药组均值接近，即经组合物高剂量治疗后可基本恢复到正常，说明组合物对高血糖有良好的治疗作用。
综上，菊荷方组合物试药组对高血糖有良好的治疗作用，优于该实验用的阳性药药效。下述实施例均能实现上述实验例的效果。
实施例1：胶囊剂
甜叶菊 300g 荷叶 300g
山楂 200g 三七 100g
按上述比例取原料药饮片0.9kg，10倍量70％乙醇回流提取3次，每次提取3小时，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使水溶液浓度为0.08g/mL，水溶液通过弱极性或非极性大孔吸附树脂，吸附流速为3.5BV/h，树脂柱径高比为1∶8，上样液浓度为0.09g/mL，收集上样流出液，然后水洗脱4BV，洗脱流速为6BV/h，收集洗脱液，合并上样流出液与水洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得富集物I；20％乙醇洗脱3BV，洗脱流速为3.5BV/h，收集洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得富集物II；75％乙醇洗脱9BV，洗脱流速为4.5BV/h，收集洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得富集物III。将制备物按比例配制即得组合物，加入常规辅料，按照常规工艺制成胶囊剂；
总酚的含量测定方法：
对照品溶液的制备
取异绿原酸C对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1mL含75.2μg的溶液，即得。
标准曲线的制备
精密量取对照品溶液0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL、1.4mL、1.6mL，分别置于25mL棕色量瓶中，加50％甲醇至5mL，加入0.3％十二烷基硫酸钠溶液1.4mL，摇匀，加入新配置的0.6％三氯化铁-0.9％铁氰化钾(1∶1)混合液4.0mL，在暗处放置5min，用0.1％的盐酸定容至25ml，摇匀后于暗处静置30min，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(中国药典附录VA)，在766nm的波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，对照品量为横坐标，绘制标准曲线。
测定法
取样品适量，精密称定，加50％甲醇溶解，转移至100mL棕色量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀既得供试品溶液，精密量取供试品溶液1mL，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下方法，自“加50％甲醇至5mL”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中异绿原酸C重量，计算，即得。
总生物碱含量测定方法：
对照品溶液的制备
取荷叶碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含398μg的溶液，即得。
标准曲线的制备
精密量取对照品品溶液10μL、60μL、110μL、160μL、290μL，分别置于磨口圆底烧瓶中，60℃下减压蒸干，依次加入pH2.2邻苯二甲酸氢钾缓冲液1mL，溴甲酚绿溶液1mL，再精密加入5mL二氯甲烷，密塞，剧烈震摇2min，转移至分液漏斗中，静置萃取2h，以相应的试剂为空白，接收二氯甲烷层，照紫外-可见分光光度法(中国药典附录VA)在412nm的波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，对照品量为横坐标，绘制标准曲线。
测定法
取样品适量，精密称定，加50％甲醇溶解，转移至100mL棕色量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。精密量取5mL，置于磨口圆底烧瓶中，照标准曲线制备项下方法，自“60℃下减压蒸干”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中荷叶碱重量，计算，即得。
总萜含量测定方法：
对照品溶液的制备
取人参皂苷Rb1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含136.8μg的溶液，即得。
标准曲线的制备
精密量取人参皂苷Rb1对照品溶液0.2mL、0.6mL、1.0mL、1.4mL、1.8mL、2.2mL、2.6mL，分别置于西林瓶中，沸水浴蒸干，冷却至室温，先加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.3mL，然后再加入高氯酸0.8mL，密塞，置于60℃水浴加热15min，取出，置于冰水中冷却3min，加入冰醋酸5mL，摇匀，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(中国药典附录VA)在552nm的波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，对照品量为横坐标，绘制标准曲线。
测定法
取样品适量，加甲醇溶解，转移至25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取1mL，置于西林瓶中，照标准曲线制备项下方法，自“沸水浴蒸干”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Rb1重量，计算，即得。
总氨基酸含量测定方法：
对照品溶液的制备
取三七素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含159.6μg的溶液，即得。
标准曲线的制备
精密量取对照品0.9mL、1.2mL、1.5mL、1.8mL、2.1mL、2.4mL、2.7mL、3.0mL，分别置于25mL棕色量瓶中，加水至6mL，再加入pH值为7的KH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液1mL，2％茚三酮乙醇溶液2mL，摇匀，置于沸水浴中20min，迅速冷却至室温，用水定容至25mL，摇匀，以相应的溶剂为空白，照紫外-可见分光光度法(中国药典附录VA)在568nm的波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，对照品量为横坐标，绘制标准曲线。
测定法
取样品适量，精密称定，加水溶解，转移至50mL棕色量瓶中，加水至刻度，摇匀，既得供试品溶液。精密量取供试品溶液5mL，置于25mL棕色量瓶中，照标准曲线制备项下方法，自“加水至6mL”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中三七素重量，计算，即得。
指标性成分含量测定方法(1)：
对照品：异绿原酸C、金丝桃苷、甜菊苷、人参皂苷Rb1
色谱条件
Waters X-bridge TM shield C18色谱柱(4.6*250mm，5μm)，流动相为乙腈(A)-0.2％磷酸水(B)梯度洗脱(梯度条件见下表)，流速1.0mL/min，柱温30℃，检测波长203nm、254nm、327nm。
对照品溶液的制备
取异绿原酸C、金丝桃苷、甜菊苷、人参皂苷Rb1对照品适量，加50％甲醇制成每1mL含异绿原酸C24μg、金丝桃苷29μg、甜菊苷23μg、人参皂苷Rb113μg的混合溶液。
供试品溶液的制备
取本品100mg，精密称定，50％甲醇溶解，转移至10mL茶色量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
测定法
分别精密吸取对照品溶液50μL和供试品溶液50μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
指标性成分含量测定方法(2)：
对照品：荷叶碱
色谱条件
Waters X-bridge TM shield C18色谱柱(4.6*250mm，5μm)，流动相为乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(26.5∶71.1∶1.6∶0.8)等度洗脱，流速1.0mL/min，柱温30℃，检测波长270nm。
对照品溶液的制备
取荷叶碱对照品适量，加50％甲醇制成每1mL含荷叶碱16μg的混合溶液。
供试品溶液的制备
取本品40mg，精密称定，50％甲醇溶解，转移至10mL茶色量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
测定法
分别精密吸取对照品溶液50μL和供试品溶液50μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
实施例2：片剂
甜叶菊 100g 荷叶 100g
山楂 60g 三七 30g
按上述比例取原料药饮片0.29kg，10倍量60％乙醇回流提取3次，每次提取1.5小时，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使水溶液浓度为0.07g/mL，水溶液通过弱极性或非极性大孔吸附树脂，吸附流速为5BV/h，树脂柱径高比为1∶6，上样液浓度为0.08g/mL，收集上样流出液，然后水洗脱5BV，洗脱流速为4BV/h，收集洗脱液，合并上样流出液与水洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得富集物I；25％乙醇洗脱7BV，洗脱流速为3.5BV/h，收集洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得富集物II；70％乙醇洗脱6BV，洗脱流速为3BV/h，收集洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得富集物III。将制备物按比例配制即得组合物，加入常规辅料，按照常规工艺制成片剂；
总酚的含量测定方法：
对照品溶液的制备
取异绿原酸C对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1mL含75.2μg的溶液，即得。
标准曲线的制备
精密量取对照品溶液0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL、1.4mL、1.6mL，分别置于25mL棕色量瓶中，加50％甲醇至5mL，加入0.3％十二烷基硫酸钠溶液1.4mL，摇匀，加入新配置的0.6％三氯化铁-0.9％铁氰化钾(1∶1)混合液4.0mL，在暗处放置5min，用0.1％的盐酸定容至25ml，摇匀后于暗处静置30min，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(中国药典附录VA)，在766nm的波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，对照品量为横坐标，绘制标准曲线。
测定法
取样品适量，精密称定，加50％甲醇溶解，转移至100mL棕色量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀既得供试品溶液，精密量取供试品溶液1mL，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下方法，自“加50％甲醇至5mL”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中异绿原酸C重量，计算，即得。
总生物碱含量测定方法：
对照品溶液的制备
取荷叶碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含398μg的溶液，即得。
标准曲线的制备
精密量取对照品品溶液10μL、60μL、110μL、160μL、290μL，分别置于磨口圆底烧瓶中，60℃下减压蒸干，依次加入pH2.2邻苯二甲酸氢钾缓冲液1mL，溴甲酚绿溶液1mL，再精密加入5mL二氯甲烷，密塞，剧烈震摇2min，转移至分液漏斗中，静置萃取2h，以相应的试剂为空白，接收二氯甲烷层，照紫外-可见分光光度法(中国药典附录VA)在412nm的波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，对照品量为横坐标，绘制标准曲线。
测定法
取样品适量，精密称定，加50％甲醇溶解，转移至100mL棕色量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。精密量取5mL，置于磨口圆底烧瓶中，照标准曲线制备项下方法，自“60℃下减压蒸干”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中荷叶碱重量，计算，即得。
总萜含量测定方法：
对照品溶液的制备
取人参皂苷Rb1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含136.8μg的溶液，即得。
标准曲线的制备
精密量取人参皂苷Rb1对照品溶液0.2mL、0.6mL、1.0mL、1.4mL、1.8mL、2.2mL、2.6mL，分别置于西林瓶中，沸水浴蒸干，冷却至室温，先加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.3mL，然后再加入高氯酸0.8mL，密塞，置于60℃水浴加热15min，取出，置于冰水中冷却3min，加入冰醋酸5mL，摇匀，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(中国药典附录VA)在552nm的波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，对照品量为横坐标，绘制标准曲线。
测定法
取样品适量，加甲醇溶解，转移至25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取1mL，置于西林瓶中，照标准曲线制备项下方法，自“沸水浴蒸干”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Rb1重量，计算，即得。
总氨基酸含量测定方法：
对照品溶液的制备
取三七素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含159.6μg的溶液，即得。
标准曲线的制备
精密量取对照品0.9mL、1.2mL、1.5mL、1.8mL、2.1mL、2.4mL、2.7mL、3.0mL，分别置于25mL棕色量瓶中，加水至6mL，再加入pH值为7的KH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液1mL，2％茚三酮乙醇溶液2mL，摇匀，置于沸水浴中20min，迅速冷却至室温，用水定容至25mL，摇匀，以相应的溶剂为空白，照紫外-可见分光光度法(中国药典附录VA)在568nm的波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，对照品量为横坐标，绘制标准曲线。
测定法
取样品适量，精密称定，加水溶解，转移至50mL棕色量瓶中，加水至刻度，摇匀，既得供试品溶液。精密量取供试品溶液5mL，置于25mL棕色量瓶中，照标准曲线制备项下方法，自“加水至6mL”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中三七素重量，计算，即得。
指标性成分含量测定方法(1)：
对照品：异绿原酸C、金丝桃苷、甜菊苷、人参皂苷Rb1
色谱条件
Waters X-bridge TM shield C18色谱柱(5μm，4.6*250mm)，流动相为乙腈(A)-0.2％磷酸水(B)梯度洗脱(梯度条件见下表)，流速1.0mL/min，柱温30℃，检测波长203nm、254nm、327nm。
对照品溶液的制备
取异绿原酸C、金丝桃苷、甜菊苷、人参皂苷Rb1对照品适量，加50％甲醇制成每1mL含异绿原酸C24μg、金丝桃苷29μg、甜菊苷23μg、人参皂苷Rb113μg的混合溶液。
供试品溶液的制备
取本品100mg，精密称定，50％甲醇溶解，转移至10mL茶色量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
测定法
分别精密吸取对照品溶液50μL和供试品溶液50μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
指标性成分含量测定方法(2)：
对照品：荷叶碱
色谱条件
Waters X-bridge TM shield C18色谱柱(4.6*250mm，5μm)，流动相为乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(26.5∶71.1∶1.6∶0.8)等度洗脱，流速1.0mL/min，柱温30℃，检测波长270nm。
对照品溶液的制备
取荷叶碱对照品适量，加50％甲醇制成每1mL含荷叶碱16μg的混合溶液。
供试品溶液的制备
取本品40mg，精密称定，50％甲醇溶解，转移至10mL茶色量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
测定法
分别精密吸取对照品溶液50μL和供试品溶液50μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
实施例3：丸剂
甜叶菊 300g 荷叶 200g
山楂 200g 三七 100g
按上述比例取原料药饮片0.8kg，10倍量40％乙醇回流提取3次，每次提取2小时，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使水溶液浓度为0.067g/mL，水溶液通过弱极性或非极性大孔吸附树脂，吸附流速为4BV/h，树脂柱径高比为1∶7，上样液浓度为0.067g/mL，收集上样流出液，然后水洗脱5BV，洗脱流速为4BV/h，收集洗脱液，合并上样流出液与水洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得富集物I；20％乙醇洗脱9BV，洗脱流速为3BV/h，收集洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得富集物II；70％乙醇洗脱3BV，洗脱流速为4BV/h，收集洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得富集物III。将制备物按比例配制即得组合物，加入常规辅料，按照常规工艺制成丸剂；
总酚的含量测定方法：
对照品溶液的制备
取异绿原酸C对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1mL含75.2μg的溶液，即得。
标准曲线的制备
精密量取对照品溶液0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL、1.4mL、1.6mL，分别置于25mL棕色量瓶中，加50％甲醇至5mL，加入0.3％十二烷基硫酸钠溶液1.4mL，摇匀，加入新配置的0.6％三氯化铁-0.9％铁氰化钾(1∶1)混合液4.0mL，在暗处放置5min，用0.1％的盐酸定容至25ml，摇匀后于暗处静置30min，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(中国药典附录VA)，在766nm的波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，对照品量为横坐标，绘制标准曲线。
测定法
取样品适量，精密称定，加50％甲醇溶解，转移至100mL棕色量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀既得供试品溶液，精密量取供试品溶液1mL，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下方法，自“加50％甲醇至5mL”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中异绿原酸C重量，计算，即得。
总生物碱含量测定方法：
对照品溶液的制备
取荷叶碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含398μg的溶液，即得。
标准曲线的制备
精密量取对照品品溶液10μL、60μL、110μL、160μL、290μL，分别置于磨口圆底烧瓶中，60℃下减压蒸干，依次加入pH2.2邻苯二甲酸氢钾缓冲液1mL，溴甲酚绿溶液1mL，再精密加入5mL二氯甲烷，密塞，剧烈震摇2min，转移至分液漏斗中，静置萃取2h，以相应的试剂为空白，接收二氯甲烷层，照紫外-可见分光光度法(中国药典附录VA)在412nm的波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，对照品量为横坐标，绘制标准曲线。
测定法
取样品适量，精密称定，加50％甲醇溶解，转移至100mL棕色量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。精密量取5mL，置于磨口圆底烧瓶中，照标准曲线制备项下方法，自“60℃下减压蒸干”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中荷叶碱重量，计算，即得。
总萜含量测定方法：
对照品溶液的制备
取人参皂苷Rb1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含136.8μg的溶液，即得。
标准曲线的制备
精密量取人参皂苷Rb1对照品溶液0.2mL、0.6mL、1.0mL、1.4mL、1.8mL、2.2mL、2.6mL，分别置于西林瓶中，沸水浴蒸干，冷却至室温，先加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.3mL，然后再加入高氯酸0.8mL，密塞，置于60℃水浴加热15min，取出，置于冰水中冷却3min，加入冰醋酸5mL，摇匀，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(中国药典附录VA)在552nm的波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，对照品量为横坐标，绘制标准曲线。
测定法
取样品适量，加甲醇溶解，转移至25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取1mL，置于西林瓶中，照标准曲线制备项下方法，自“沸水浴蒸干”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Rb1重量，计算，即得。
总氨基酸含量测定方法：
对照品溶液的制备
取三七素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含159.6μg的溶液，即得。
标准曲线的制备
精密量取对照品0.9mL、1.2mL、1.5mL、1.8mL、2.1mL、2.4mL、2.7mL、3.0mL，分别置于25mL棕色量瓶中，加水至6mL，再加入pH值为7的KH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液1mL，2％茚三酮乙醇溶液2mL，摇匀，置于沸水浴中20min，迅速冷却至室温，用水定容至25mL，摇匀，以相应的溶剂为空白，照紫外-可见分光光度法(中国药典附录VA)在568nm的波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，对照品量为横坐标，绘制标准曲线。
测定法
取样品适量，精密称定，加水溶解，转移至50mL棕色量瓶中，加水至刻度，摇匀，既得供试品溶液。精密量取供试品溶液5mL，置于25mL棕色量瓶中，照标准曲线制备项下方法，自“加水至6mL”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中三七素重量，计算，即得。
指标性成分含量测定方法(1)：
对照品：异绿原酸C、金丝桃苷、甜菊苷、人参皂苷Rb1
色谱条件
Waters X-bridge TM shield C18色谱柱(5μm，4.6*250mm)，流动相为乙腈(A)-0.2％磷酸水(B)梯度洗脱(梯度条件见下表)，流速1.0mL/min，柱温30℃，检测波长203nm、254nm、327nm。
对照品溶液的制备
取异绿原酸C、金丝桃苷、甜菊苷、人参皂苷Rb1对照品适量，加50％甲醇制成每1mL含异绿原酸C24μg、金丝桃苷29μg、甜菊苷23μg、人参皂苷Rb113μg的混合溶液。
供试品溶液的制备
取本品100mg，精密称定，50％甲醇溶解，转移至10mL茶色量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
测定法
分别精密吸取对照品溶液50μL和供试品溶液50μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
指标性成分含量测定方法(2)：
对照品：荷叶碱
色谱条件：
Waters X-bridge TM shield C18色谱柱(4.6*250mm，5μm)，流动相为乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(26.5∶71.1∶1.6∶0.8)等度洗脱，流速1.0mL/min，柱温30℃，检测波长270nm。
对照品溶液的制备
取荷叶碱对照品适量，加50％甲醇制成每1mL含荷叶碱16μg的混合溶液。
供试品溶液的制备
取本品40mg，精密称定，50％甲醇溶解，转移至10mL茶色量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
测定法
分别精密吸取对照品溶液50μL和供试品溶液50μL，注入液相色谱仪，测定，即得。