柏花草胶囊在制备抗肿瘤药物中的新用途的制作方法

本发明涉及药学领域，尤其是柏花草胶囊在制备抗肿瘤药物中的新用途。

背景技术：

柏花草胶囊是一种中成药，主要成分包括黄柏、灵芝、仙鹤草、红花及百合,具有清热利湿、活血消肿止痛的作用，被用于Ⅰ，II期内痔湿热下注证，痔见便血、肛门肿痛、肛门潮湿、坠胀，舌红苔黄、脉弦细数。黄柏含有生物碱、黄酮、萜类及甾体、鞣质等，黄柏中所分离出来的小檗碱、β-谷甾醇、豆甾醇对胃癌、宫颈癌细胞增殖有较好的抑制活性。

技术实现要素：

本发明的目的是：发现了柏花草胶囊的有效成分在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明是这样实现的：柏花草胶囊在制备抗肿瘤药物中的新用途。

将柏花草胶囊的有效成分制备成片剂、注射剂、口服液或滴丸剂。

由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，发明人发现已知的中成药柏花草胶囊对多种肿瘤细胞具有良好的抑制作用，为老药的新用途提供理论基础，为开发柏花草胶囊的抗癌作用提供了新思路。而且柏花草胶囊是已上市的成品药，应用于人体的概率更大，具有很好的临床开发前景。本发明材料来源广泛，成本低廉，使用效果理想。

附图说明

附图1为50μg/mL的柏花草胶囊对PC3、WM9、K562和HEL细胞生长的抑制作用；

附图2为不同浓度梯度的柏花草胶囊(200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL、12.5μg/mL)对PC3、WM9、K562和HEL细胞生长的抑制作用。

具体实施方式

本发明的实施例：

柏花草胶囊MTT法抗癌活性检测

细胞及其它试剂

前列腺癌细胞株PC3、白血病细胞株K562、黑色素瘤细胞株WM9、人红白细胞白血病细胞HEL均为贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室保存。DMEM培养基及胰酶购于Hyclone公司，胎牛血清(FBS)购于浙江天杭生物科技有限公司，四甲基偶氮哩盐(MTT)购于Solarbio Life Science公司，二甲基亚飒(DMSO)及青链霉素混合液购于北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司。

体外抗肿瘤活性检测

MTT溶液配制：称取MTT粉末0.2g，加入灭菌的PBS 40ml,60℃溶解，0.22μm过滤膜过滤除菌，4℃保存备用。

从液氮罐取出前列腺癌细胞株PC3、白血病细胞株K562、黑色素瘤细胞株WM9、人红白细胞白血病细胞株HEL复苏培养。

分别取对数生长期的细胞，将细胞浓度调整成5000个/孔，接种于96孔板中(190种升/孔)，在37℃，5％二氧化碳的培养箱中培养24个小时。每种细胞设置3个复孔，并设同等数量的对照孔。首先检测50μg/mL的柏花草胶囊对四种癌细胞生长的抑制作用。每孔加药10μL,37℃、5％CO₂培养箱中培养72h，加MTT溶液20μL(避光操作)，置入CO₂培养箱中继续培养4h，离心(1500rpm，8min)，弃去上清液，每孔加150μL DMSO，放入摇床摇晃(10min，180rpm，25℃)，用酶标仪波长490nm下测OD值，根基以下公式计算药物的抑制率。

Inhibitory activity＝[(OD_control-OD_sample)/OD_control]×100％

根据初筛的结果检测不同浓度的柏花草胶囊(200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL、12.5μg/mL)对WM9、PC3、K562、HEL四种细胞生长的抑制作用，每个细胞每组3个平行。研究结果表明，柏花草胶囊对WM9，HEL，K562细胞的生长均有很好的抑制作用，50μg/mL时其抑制率分别为61.39％，61.16％和54.34％。对PC3细胞的生长也有较好的抑制作用，其抑制率为34.42％(图1)。

进一步通过浓度梯度的形式研究柏花草胶囊对各细胞生长的抑制作用。由图2可看出，柏花草胶囊对PC3、WM9、K562、HEL四种细胞的生长均有很好的抑制作用，且随药物浓度的增加抑制作用增强，200μg/mL时其抑制率分别为77％，89％，83％，77％，其IC50值分别为99μg/mL，62μg/mL，49μg/mL，49μg/mL。由以上数据可看出，柏花草胶囊可作为抗前列腺癌、黑色素瘤及白血病的潜在药物。

表1

表1为附图2中不同浓度梯度的柏花草胶囊(200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL、12.5μg/mL)对PC3、WM9、K562和HEL细胞生长的抑制率及IC50值。