本发明涉及水产养殖领域，尤其涉及一种无抗水产免疫增强剂的制备方法。
背景技术：
近年来，随着水产养殖业快速发展、高密度集约化程度增大，养殖环境恶化、种质资源退化及疾病感染等问题逐年增加，提高水产养殖动物自身免疫能力是抗病的途径之一。
目前的提高水产养殖动物免疫力的主要途径是在水产饲料中添加抗生素类药物。但是近年来抗生素等药物滥用情况严重，不仅鱼、虾、蟹类曾经都发生过大面积死亡，而且致使部分水产品中的药物残留量增加或严重超标，严重威胁食品安全。加之欧美日本等主要水产品进口国对水产品的检验日趋严格，也影响了水产品的出口，给我国水产养殖业造成了巨大经济损失。同时药物在水中的积累会对养殖环境造成污染，进一步破坏养殖生态环境，形成恶性循环。因此，从某种意义上讲，增强水产养殖动物自身的免疫力，提高机体的生长性能，减少或停止使用抗生素类药物，提高饲料效率，提高养殖对象品质，已成为水产养殖业的可持续发展的重要瓶颈。
技术实现要素：
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种无抗水产免疫增强剂的制备方法。本发明制得的无抗水产免疫增强剂选用纯天然绿色原料，不含抗生素药物，能够有效提高水产养殖动物的免疫能力，且不会对养殖环境造成污染，绿色环保。
本发明的具体技术方案为：一种无抗水产免疫增强剂的制备方法，包括以下步骤：
1）、将80-120份水产多肽、40-60份油茶籽粕改性提取物、10-30份虾青素、10-30份岩藻黄质、10-20份珍珠粉、40-80份海藻提取物、300-500份水混合均匀，制得组分A。
2）、将20-30份氯化钙溶解于500-700份水中，制得组分B。
3）、将所述组分A装入注射器中以0.5-1.5mL/s的速率滴加到组分B中，生产微溶于水的固体沉淀；过滤取固体沉淀，干燥后得到无抗水产免疫增强剂。
将组分A滴加到组分B中后，会交联反应生成球状的固体沉淀，从而将水产多肽、油茶籽粕改性提取物、虾青素、岩藻黄质、珍珠粉等免疫活性成分进行包埋，防止这些免疫活性成分用于饲料添加到水中后溶解流失。
本发明选用水产鱼类的多肽作为主要的免疫成分，再配以油茶籽粕改性提取物、虾青素、岩藻黄质、珍珠粉等物质，复配成免疫增强剂，添加到水产饲料中被水产养殖动物食用后，能够有效提高水产养殖动物的免疫能力。并且本发明的免疫增强剂纯天然，不添加任何抗生素，不仅不会造成动物体内药物残留，并且不会污染水体，绿色环保。
作为优选，所述水产多肽选自分子量在1600-4000Da区间的安康鱼多肽、分子量在200-800Da区间的鳕鱼多肽、分子量在600-1000Da区间的金枪鱼多肽。
不同鱼类的不同分子量的多肽免疫活性不同，经过本发明人的长期研究，发现上述分子量区间的多肽免疫活性较好。
作为优选，所述水产多肽的制备方法如下：
a、原料解冻清洗：对鱼皮进行流水解冻，解冻时间为2-5h；完全解冻后将鱼皮洗净。
b、原料预处理：将鱼皮添加到5-10倍浓度为3-5wt%的氢氧化钠溶液中，在20-30℃下脱脂4-6h，然后取鱼皮用水洗净。
c、蒸煮熬胶：将鱼皮在90-100℃下进行蒸煮熬胶8-12h，取生成的鱼皮胶，并对鱼皮胶通过离心处理与油脂分离，离心速率为1000r/min。
d、酶解：将鱼皮胶添加到含有中性蛋白酶的酶解液中进行酶解；其中中性蛋白酶的浓度为0.05-0.25wt%，酶解液质量为鱼皮胶质量的2-4倍，酶解温度为30-45℃，酶解液pH至控制在6-8，酶解时间为30-60min。
e、炭脱、板框过滤：向酶解液中添加质量为酶解液1-2wt%的活性炭，并将酶解液加热到70-80℃，脱色30-50min；将脱色后的酶解液转移至板框过滤池内进行过滤，取澄清液。
f、分离纯化：将澄清液转移至泡沫分离柱中进行鼓气起泡，并收集泡沫液，，在鼓气的同时向泡沫分离柱中注水；鼓气速率为3-5L/min，注水速率为0.1-0.3L/min，泡沫分离柱中液体的装载高度与泡沫分离柱内径比为8-10:1，澄清液温度保持在25-35℃；待收集的泡沫液灭泡后，用离子交换器对泡沫液进行重金属分离；向重金属分离后的泡沫液中添加质量为泡沫液1-2%的磁性亲和微球并分散均匀，静置亲和吸附50-70min后利用磁场使磁性亲和微球聚集；分离出磁性亲和微球后，用pH值为7.2的Tris-HCl缓冲液对磁性亲和微球进行洗脱，再次利用磁场分离出磁性亲和微球后，得到洗脱液，将洗脱液在75-85℃下储存备用。
板框过滤后澄清液中的不溶性杂质基本分离完毕，基本只存在溶解性杂质以及重金属离子等。对澄清液进行泡沫分离纯化，由于蛋白物质具有一定的表面活性，能够在液体气泡后聚集在泡沫表面，收集泡沫液，能够将蛋白物质与其他物质进行分离。在泡沫分离过程中，由于泡沫分离柱中水分的不断变少，使得液体中蛋白物质的浓度升高，导致浓度超过临界胶束浓度， 从而容易将其他可溶性杂质附带在泡沫表面，影响分离效果，进行注水能够有效维持液体中蛋白浓度。用离子交换器能够对泡沫液中的一同附着的重金属进行分离，再用磁性亲和微球对泡沫液中的目标蛋白物质进行亲和吸附，使得胶原蛋白肽的纯度更高。
g、浓缩：将洗脱液先后输入双效浓缩锅和四效浓缩锅中进行浓缩，制得浓缩液，所述浓缩液的折光度控制在5-6，浓缩后浓缩液在50-60℃下储存。
h、膜过滤：将浓缩液通过二级0.22微米膜过滤器进行除杂除菌；其中膜过滤温度小于45℃，一级过滤压力小于0.25MPa，二级过滤压力小于0.4MPa。
i、多肽分级：采用超滤膜或纳滤膜对膜过滤后的浓缩液按分子量进行分离，得到目标分子量的水产多肽；
j、喷雾干燥：对水产多肽进行喷雾干燥；喷雾温度为80-90℃，喷雾干燥后水产多肽的含水率小于等于5wt%。
本发明制备的水产多肽，纯度高，得率高，分子量分布区间小，在目标分子量区间内的多肽含量高。
作为优选，所述磁性亲和微球由以下方法制得：将海藻酸钠、聚乙二醇、壳聚糖、正庚烷、乙酸、水按质量比2-3:1:2:0.5:3-5:100混合溶解，搅拌均匀后制得混合液A；向混合液A中添加混合液A质量4-6%的四氧化三铁磁粉并分散均匀，得到混合液B；对混合液B进行超声波分散，同时向混合液B中匀速滴加混合液B质量40-60%的乳化液，得到混合液C；先后向混合液C中添加混合液C质量0.1-0.2%的98wt%的戊二醛和混合液C质量0.5-1倍的2.5-3.5wt%的氯化钙溶液，充分搅拌，静置1-2h，生成磁性微球；利用磁场对液体中磁性微球进行聚集，取出磁性微球后进行清洗、干燥；将磁性微球浸泡在水中溶胀15-25min，然后取出磁性微球并添加到活化液中在35-45℃下活化40-80min，磁性微球与活化液的固液比为0.5-1.0g/mL；活化后取出磁性微球并洗净，将磁性微球与肝素按质量比1.5-2.5:1进行混合，得到悬浮液，将悬浮液pH值调节至4-5，然后向悬浮液中添加悬浮液体积1.5-2.5倍的3wt%的1-乙基-3-二甲氨丙基-碳二亚胺，在4℃下静置12-18h;生成磁性亲和微球，最后从悬浮液中取出磁性亲和微球，洗净、干燥，备用。
上述方法制得的磁性微球，以四氧化三铁磁粉为磁核，以海藻酸钠、聚乙二醇、壳聚糖为磁核的主要包衣材料，以正庚烷为致孔剂，添加戊二醛和氯化钙溶液后，交联成型，具有多孔性，比表面积大，吸附容量大，分散性佳，粒径均一性好。
作为优选，所述乳化液为体积占比为30-40%的司盘-80无水乙醇混合液，乳化液在10-20min内滴加完毕。
作为优选，所述活化液由1mol/L的氢氧化钠溶液、二甲基亚砜和环氧氯丙烷按体积比4-6:1:0.5-0.7组成。
作为优选，所述油茶籽粕改性提取物的制备方法如下：取榨油后的油茶籽粕，研磨成粉，按液固比16-20mL/g将油茶籽粕添加到浓度为70-80wt%的乙醇溶液中并搅拌均匀，将乙醇溶液转移至微波提取器中进行加热提取，提取温度为60-70℃，提取时间为2-4min，微波功率为800-1000W；提取后得到粗提液，将粗提液过滤，取过滤液，向过滤液中添加过滤液体积0.02-0.04倍的30wt%双氧水溶液，在50-60℃下加热10-20min，然后向溶液中添加溶液质量0.4-0.6%壳聚糖，在室温下静置10-20h，离心、过滤得到精提液，将精提液真空干燥后制得油茶籽粕提取物；将油茶籽粕提取物溶于酸性溶液中配得浓度为4-6wt%、pH为3-4的油茶籽粕提取物酸性溶液，在2-4h内向油茶籽粕提取物酸性溶液中匀速滴加质量为油茶籽粕提取物0.4-0.6倍的亚硒酸钠进行反应，反应温度为60-80℃；反应结束后经过浓缩、真空干燥制得油茶籽粕改性提取物。
对油茶籽粕进行提取，能够得到天然的糖苷类化合物，基本结构主要由皂苷元、糖体、有机酸三部分组成，经过研究发现，这类物质具有较强的抗氧化能力，能够提高生物体的免疫力。该物质的糖体结构上含有部分的羟基和羧基等基团，本发明利用这些基团对其进行硒化改性，进一步增强油茶籽粕提取物的免疫活性。
作为优选，所述海藻提取物的制备方法如下：将切碎的海藻碎末与水混合，打浆后制得浓度为10-30wt%的海藻浆料；向海藻浆料中添加等体积的柠檬酸钠溶液，制得pH值为4-6的混合浆料，将混合浆料在60-80℃下提取2-4h，提取后过滤得到海藻粗提液，将海藻粗提液转移至高压灭菌锅内进行熟化灭菌；然后继续对海藻粗提液通过微滤膜去除大分子杂蛋白，最后冷冻干燥后制得海藻提取物。
上述方法制得的海藻提取物，含有大量的海藻多糖类物质，溶于水后能够与氯化钙反应生成微溶于水的固体物质。在本发明的免疫增强剂的制备过程中，将水产多肽、油茶籽粕改性提取物、虾青素、岩藻黄质、珍珠粉、海藻提取物混合，将混合物滴加到氯化钙水溶液中，能够交联生成微溶于水的固体物质，从而将水产多肽、油茶籽粕改性提取物、虾青素、岩藻黄质、珍珠粉等免疫活性成分进行包埋，防止这些免疫活性成分用于饲料添加到水中后溶解流失。此外，海藻多糖自身也具有出色的抗氧化性，具有免疫活性。
与现有技术对比，本发明的有益效果是：本发明的无抗水产免疫增强剂选用纯天然绿色原料，不含抗生素药物，能够有效提高水产养殖动物的免疫能力，且不会对养殖环境造成污染，绿色环保。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述。
实施例1
一种无抗水产免疫增强剂的制备方法，包括以下步骤：
1）、将100份水产多肽、50份油茶籽粕改性提取物、20份虾青素、20份岩藻黄质、15份珍珠粉、60份海藻提取物、400份水混合均匀，制得组分A。所述水产多肽为分子量在1600-4000Da区间的安康鱼多肽。
2）、将25份氯化钙溶解于600份水中，制得组分B。
3）、将所述组分A装入注射器中以1mL/s的速率滴加到组分B中，生产微溶于水的固体沉淀；过滤取固体沉淀，干燥后得到无抗水产免疫增强剂。
其中，所述水产多肽的制备方法如下：
a、原料解冻清洗：对鱼皮进行流水解冻，解冻时间为3.5h；完全解冻后将鱼皮洗净。
b、原料预处理：将鱼皮添加到7.5倍浓度为4wt%的氢氧化钠溶液中，在25℃下脱脂5h，然后取鱼皮用水洗净。
c、蒸煮熬胶：将鱼皮在95℃下进行蒸煮熬胶10h，取生成的鱼皮胶，并对鱼皮胶通过离心处理与油脂分离，离心速率为1000r/min。
d、酶解：将鱼皮胶添加到含有中性蛋白酶的酶解液中进行酶解；其中中性蛋白酶的浓度为0.15wt%，酶解液质量为鱼皮胶质量的3倍，酶解温度为38℃，酶解液pH至控制在6-8，酶解时间为45min。
e、炭脱、板框过滤：向酶解液中添加质量为酶解液1.5wt%的活性炭，并将酶解液加热到75℃，脱色40min；将脱色后的酶解液转移至板框过滤池内进行过滤，取澄清液。
f、分离纯化：将澄清液转移至泡沫分离柱中进行鼓气起泡，并收集泡沫液，，在鼓气的同时向泡沫分离柱中注水；鼓气速率为4L/min，注水速率为0.2L/min，泡沫分离柱中液体的装载高度与泡沫分离柱内径比为9:1，澄清液温度保持在30℃；待收集的泡沫液灭泡后，用离子交换器对泡沫液进行重金属分离；向重金属分离后的泡沫液中添加质量为泡沫液1.5%的磁性亲和微球并分散均匀，静置亲和吸附60min后利用磁场使磁性亲和微球聚集；分离出磁性亲和微球后，用pH值为7.2的Tris-HCl缓冲液对磁性亲和微球进行洗脱，再次利用磁场分离出磁性亲和微球后，得到洗脱液，将洗脱液在80℃下储存备用。
所述磁性亲和微球由以下方法制得：将海藻酸钠、聚乙二醇、壳聚糖、正庚烷、乙酸、水按质量比2.5:1:2:0.5:4:100混合溶解，搅拌均匀后制得混合液A；向混合液A中添加混合液A质量5%的四氧化三铁磁粉并分散均匀，得到混合液B；对混合液B进行超声波分散，同时在15min内向混合液B中匀速滴加混合液B质量50%的乳化液，所述乳化液为体积占比为35%的司盘-80无水乙醇混合液，得到混合液C；先后向混合液C中添加混合液C质量0.15%的98wt%的戊二醛和混合液C质量0.75倍的3wt%的氯化钙溶液，充分搅拌，静置1.5h，生成磁性微球；利用磁场对液体中磁性微球进行聚集，取出磁性微球后进行清洗、干燥；将磁性微球浸泡在水中溶胀20min，然后取出磁性微球并添加到活化液中在40℃下活化60min，所述活化液由1mol/L的氢氧化钠溶液、二甲基亚砜和环氧氯丙烷按体积比5:1:0.6组成。磁性微球与活化液的固液比为0.75g/mL；活化后取出磁性微球并洗净，将磁性微球与肝素按质量比2:1进行混合，得到悬浮液，将悬浮液pH值调节至4-5，然后向悬浮液中添加悬浮液体积2倍的3wt%的1-乙基-3-二甲氨丙基-碳二亚胺，在4℃下静置15h;生成磁性亲和微球，最后从悬浮液中取出磁性亲和微球，洗净、干燥，备用。
g、浓缩：将洗脱液先后输入双效浓缩锅和四效浓缩锅中进行浓缩，制得浓缩液，所述浓缩液的折光度控制在5-6，浓缩后浓缩液在55℃下储存。
h、膜过滤：将浓缩液通过二级0.22微米膜过滤器进行除杂除菌；其中膜过滤温度小于45℃，一级过滤压力小于0.25MPa，二级过滤压力小于0.4MPa。
i、多肽分级：采用超滤膜或纳滤膜对膜过滤后的浓缩液按分子量进行分离，得到目标分子量的水产多肽。
j、喷雾干燥：对水产多肽进行喷雾干燥；喷雾温度为85℃，喷雾干燥后水产多肽的含水率小于等于5wt%。
所述油茶籽粕改性提取物的制备方法如下：取榨油后的油茶籽粕，研磨成粉，按液固比18mL/g将油茶籽粕添加到浓度为75wt%的乙醇溶液中并搅拌均匀，将乙醇溶液转移至微波提取器中进行加热提取，提取温度为65℃，提取时间为3min，微波功率为900W；提取后得到粗提液，将粗提液过滤，取过滤液，向过滤液中添加过滤液体积0.03倍的30wt%双氧水溶液，在55℃下加热15min，然后向溶液中添加溶液质量0.5%壳聚糖，在室温下静置15h，离心、过滤得到精提液，将精提液真空干燥后制得油茶籽粕提取物；将油茶籽粕提取物溶于酸性溶液中配得浓度为5wt%、pH为3-4的油茶籽粕提取物酸性溶液，在3h内向油茶籽粕提取物酸性溶液中匀速滴加质量为油茶籽粕提取物0.5倍的亚硒酸钠进行反应，反应温度为65℃；反应结束后经过浓缩、真空干燥制得油茶籽粕改性提取物。
所述海藻提取物的制备方法如下：将切碎的海藻碎末与水混合，打浆后制得浓度为20wt%的海藻浆料；向海藻浆料中添加等体积的柠檬酸钠溶液，制得pH值为4-6的混合浆料，将混合浆料在65℃下提取3h，提取后过滤得到海藻粗提液，将海藻粗提液转移至高压灭菌锅内进行熟化灭菌；然后继续对海藻粗提液通过微滤膜去除大分子杂蛋白，最后冷冻干燥后制得海藻提取物。
实施例2
一种无抗水产免疫增强剂的制备方法，包括以下步骤：
1）、将80份水产多肽、40份油茶籽粕改性提取物、10份虾青素、10份岩藻黄质、10份珍珠粉、40份海藻提取物、300份水混合均匀，制得组分A。所述水产多肽为分子量在200-800Da区间的鳕鱼多肽。
2）、将20份氯化钙溶解于500份水中，制得组分B。
3）、将所述组分A装入注射器中以0.5mL/s的速率滴加到组分B中，生产微溶于水的固体沉淀；过滤取固体沉淀，干燥后得到无抗水产免疫增强剂。
其中，所述水产多肽的制备方法如下：
a、原料解冻清洗：对鱼皮进行流水解冻，解冻时间为2h；完全解冻后将鱼皮洗净。
b、原料预处理：将鱼皮添加到5倍浓度为5wt%的氢氧化钠溶液中，在20℃下脱脂6h，然后取鱼皮用水洗净。
c、蒸煮熬胶：将鱼皮在90℃下进行蒸煮熬胶12h，取生成的鱼皮胶，并对鱼皮胶通过离心处理与油脂分离，离心速率为1000r/min。
d、酶解：将鱼皮胶添加到含有中性蛋白酶的酶解液中进行酶解；其中中性蛋白酶的浓度为0.05wt%，酶解液质量为鱼皮胶质量的4倍，酶解温度为30℃，酶解液pH至控制在6-8，酶解时间为60min。
e、炭脱、板框过滤：向酶解液中添加质量为酶解液1wt%的活性炭，并将酶解液加热到70℃，脱色50min；将脱色后的酶解液转移至板框过滤池内进行过滤，取澄清液。
f、分离纯化：将澄清液转移至泡沫分离柱中进行鼓气起泡，并收集泡沫液，，在鼓气的同时向泡沫分离柱中注水；鼓气速率为3L/min，注水速率为0.1L/min，泡沫分离柱中液体的装载高度与泡沫分离柱内径比为8:1，澄清液温度保持在25℃；待收集的泡沫液灭泡后，用离子交换器对泡沫液进行重金属分离；向重金属分离后的泡沫液中添加质量为泡沫液1%的磁性亲和微球并分散均匀，静置亲和吸附50min后利用磁场使磁性亲和微球聚集；分离出磁性亲和微球后，用pH值为7.2的Tris-HCl缓冲液对磁性亲和微球进行洗脱，再次利用磁场分离出磁性亲和微球后，得到洗脱液，将洗脱液在75℃下储存备用。
所述磁性亲和微球由以下方法制得：将海藻酸钠、聚乙二醇、壳聚糖、正庚烷、乙酸、水按质量比2:1:2:0.5:3:100混合溶解，搅拌均匀后制得混合液A；向混合液A中添加混合液A质量4%的四氧化三铁磁粉并分散均匀，得到混合液B；对混合液B进行超声波分散，同时在10min内向混合液B中匀速滴加混合液B质量40%的乳化液，所述乳化液为体积占比为30%的司盘-80无水乙醇混合液，得到混合液C；先后向混合液C中添加混合液C质量0.1%的98wt%的戊二醛和混合液C质量0.5倍的3.5wt%的氯化钙溶液，充分搅拌，静置1h，生成磁性微球；利用磁场对液体中磁性微球进行聚集，取出磁性微球后进行清洗、干燥；将磁性微球浸泡在水中溶胀15min，然后取出磁性微球并添加到活化液中在35℃下活化80min，所述活化液由1mol/L的氢氧化钠溶液、二甲基亚砜和环氧氯丙烷按体积比4:1:0.5组成。磁性微球与活化液的固液比为0.5g/mL；活化后取出磁性微球并洗净，将磁性微球与肝素按质量比1.5:1进行混合，得到悬浮液，将悬浮液pH值调节至4-5，然后向悬浮液中添加悬浮液体积1.5倍的3wt%的1-乙基-3-二甲氨丙基-碳二亚胺，在4℃下静置12h;生成磁性亲和微球，最后从悬浮液中取出磁性亲和微球，洗净、干燥，备用。
g、浓缩：将洗脱液先后输入双效浓缩锅和四效浓缩锅中进行浓缩，制得浓缩液，所述浓缩液的折光度控制在5-6，浓缩后浓缩液在50℃下储存。
h、膜过滤：将浓缩液通过二级0.22微米膜过滤器进行除杂除菌；其中膜过滤温度小于45℃，一级过滤压力小于0.25MPa，二级过滤压力小于0.4MPa。
i、多肽分级：采用超滤膜或纳滤膜对膜过滤后的浓缩液按分子量进行分离，得到目标分子量的水产多肽。
j、喷雾干燥：对水产多肽进行喷雾干燥；喷雾温度为80℃，喷雾干燥后水产多肽的含水率小于等于5wt%。
所述油茶籽粕改性提取物的制备方法如下：取榨油后的油茶籽粕，研磨成粉，按液固比16mL/g将油茶籽粕添加到浓度为70wt%的乙醇溶液中并搅拌均匀，将乙醇溶液转移至微波提取器中进行加热提取，提取温度为60℃，提取时间为4min，微波功率为800W；提取后得到粗提液，将粗提液过滤，取过滤液，向过滤液中添加过滤液体积0.02倍的30wt%双氧水溶液，在50℃下加热20min，然后向溶液中添加溶液质量0.4%壳聚糖，在室温下静置20h，离心、过滤得到精提液，将精提液真空干燥后制得油茶籽粕提取物；将油茶籽粕提取物溶于酸性溶液中配得浓度为4wt%、pH为3-4的油茶籽粕提取物酸性溶液，在2h内向油茶籽粕提取物酸性溶液中匀速滴加质量为油茶籽粕提取物0.4倍的亚硒酸钠进行反应，反应温度为80℃；反应结束后经过浓缩、真空干燥制得油茶籽粕改性提取物。
所述海藻提取物的制备方法如下：将切碎的海藻碎末与水混合，打浆后制得浓度为10wt%的海藻浆料；向海藻浆料中添加等体积的柠檬酸钠溶液，制得pH值为4-6的混合浆料，将混合浆料在60℃下提取4h，提取后过滤得到海藻粗提液，将海藻粗提液转移至高压灭菌锅内进行熟化灭菌；然后继续对海藻粗提液通过微滤膜去除大分子杂蛋白，最后冷冻干燥后制得海藻提取物。
实施例3
一种无抗水产免疫增强剂的制备方法，包括以下步骤：
1）、将120份水产多肽、60份油茶籽粕改性提取物、30份虾青素、30份岩藻黄质、20份珍珠粉、80份海藻提取物、500份水混合均匀，制得组分A。所述水产多肽为分子量在600-1000Da区间的金枪鱼多肽。
2）、将30份氯化钙溶解于700份水中，制得组分B。
3）、将所述组分A装入注射器中以1.5mL/s的速率滴加到组分B中，生产微溶于水的固体沉淀；过滤取固体沉淀，干燥后得到无抗水产免疫增强剂。
其中，所述水产多肽的制备方法如下：
a、原料解冻清洗：对鱼皮进行流水解冻，解冻时间为5h；完全解冻后将鱼皮洗净。
b、原料预处理：将鱼皮添加到10倍浓度为3wt%的氢氧化钠溶液中，在30℃下脱脂4h，然后取鱼皮用水洗净。
c、蒸煮熬胶：将鱼皮在100℃下进行蒸煮熬胶8h，取生成的鱼皮胶，并对鱼皮胶通过离心处理与油脂分离，离心速率为1000r/min。
d、酶解：将鱼皮胶添加到含有中性蛋白酶的酶解液中进行酶解；其中中性蛋白酶的浓度为0.25wt%，酶解液质量为鱼皮胶质量的2倍，酶解温度为45℃，酶解液pH至控制在6-8，酶解时间为30min。
e、炭脱、板框过滤：向酶解液中添加质量为酶解液1-2wt%的活性炭，并将酶解液加热到80℃，脱色30min；将脱色后的酶解液转移至板框过滤池内进行过滤，取澄清液。
f、分离纯化：将澄清液转移至泡沫分离柱中进行鼓气起泡，并收集泡沫液，，在鼓气的同时向泡沫分离柱中注水；鼓气速率为5L/min，注水速率为0.3L/min，泡沫分离柱中液体的装载高度与泡沫分离柱内径比为10:1，澄清液温度保持在35℃；待收集的泡沫液灭泡后，用离子交换器对泡沫液进行重金属分离；向重金属分离后的泡沫液中添加质量为泡沫液2%的磁性亲和微球并分散均匀，静置亲和吸附70min后利用磁场使磁性亲和微球聚集；分离出磁性亲和微球后，用pH值为7.2的Tris-HCl缓冲液对磁性亲和微球进行洗脱，再次利用磁场分离出磁性亲和微球后，得到洗脱液，将洗脱液在85℃下储存备用。
所述磁性亲和微球由以下方法制得：将海藻酸钠、聚乙二醇、壳聚糖、正庚烷、乙酸、水按质量比3:1:2:0.5:5:100混合溶解，搅拌均匀后制得混合液A；向混合液A中添加混合液A质量6%的四氧化三铁磁粉并分散均匀，得到混合液B；对混合液B进行超声波分散，同时在20min内向混合液B中匀速滴加混合液B质量60%的乳化液，所述乳化液为体积占比为40%的司盘-80无水乙醇混合液，得到混合液C；先后向混合液C中添加混合液C质量0.2%的98wt%的戊二醛和混合液C质量1倍的2.5wt%的氯化钙溶液，充分搅拌，静置2h，生成磁性微球；利用磁场对液体中磁性微球进行聚集，取出磁性微球后进行清洗、干燥；将磁性微球浸泡在水中溶胀25min，然后取出磁性微球并添加到活化液中在45℃下活化40min，所述活化液由1mol/L的氢氧化钠溶液、二甲基亚砜和环氧氯丙烷按体积比4:1:0.5组成。磁性微球与活化液的固液比为0.5g/mL；活化后取出磁性微球并洗净，将磁性微球与肝素按质量比1.5:1进行混合，得到悬浮液，将悬浮液pH值调节至4-5，然后向悬浮液中添加悬浮液体积1.5倍的3wt%的1-乙基-3-二甲氨丙基-碳二亚胺，在4℃下静置18h;生成磁性亲和微球，最后从悬浮液中取出磁性亲和微球，洗净、干燥，备用。
g、浓缩：将洗脱液先后输入双效浓缩锅和四效浓缩锅中进行浓缩，制得浓缩液，所述浓缩液的折光度控制在5-6，浓缩后浓缩液在60℃下储存。
h、膜过滤：将浓缩液通过二级0.22微米膜过滤器进行除杂除菌；其中膜过滤温度小于45℃，一级过滤压力小于0.25MPa，二级过滤压力小于0.4MPa。
i、多肽分级：采用超滤膜或纳滤膜对膜过滤后的浓缩液按分子量进行分离，得到目标分子量的水产多肽。
j、喷雾干燥：对水产多肽进行喷雾干燥；喷雾温度为80℃，喷雾干燥后水产多肽的含水率小于等于5wt%。
所述油茶籽粕改性提取物的制备方法如下：取榨油后的油茶籽粕，研磨成粉，按液固比20mL/g将油茶籽粕添加到浓度为70wt%的乙醇溶液中并搅拌均匀，将乙醇溶液转移至微波提取器中进行加热提取，提取温度为70℃，提取时间为2min，微波功率为1000W；提取后得到粗提液，将粗提液过滤，取过滤液，向过滤液中添加过滤液体积0.04倍的30wt%双氧水溶液，在60℃下加热10min，然后向溶液中添加溶液质量0.6%壳聚糖，在室温下静置20h，离心、过滤得到精提液，将精提液真空干燥后制得油茶籽粕提取物；将油茶籽粕提取物溶于酸性溶液中配得浓度为6wt%、pH为3-4的油茶籽粕提取物酸性溶液，在4h内向油茶籽粕提取物酸性溶液中匀速滴加质量为油茶籽粕提取物0.6倍的亚硒酸钠进行反应，反应温度为60℃；反应结束后经过浓缩、真空干燥制得油茶籽粕改性提取物。
所述海藻提取物的制备方法如下：将切碎的海藻碎末与水混合，打浆后制得浓度为30wt%的海藻浆料；向海藻浆料中添加等体积的柠檬酸钠溶液，制得pH值为4-6的混合浆料，将混合浆料在80℃下提取2h，提取后过滤得到海藻粗提液，将海藻粗提液转移至高压灭菌锅内进行熟化灭菌；然后继续对海藻粗提液通过微滤膜去除大分子杂蛋白，最后冷冻干燥后制得海藻提取物。
本发明中所用原料、设备，若无特别说明，均为本领域的常用原料、设备；本发明中所用方法，若无特别说明，均为本领域的常规方法。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，凡是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变换，均仍属于本发明技术方案的保护范围。