本发明属于中药制剂领域，具体涉及一种退热止痛的中药组合物及其制备方法。
背景技术：
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感冒，俗称伤风，是呼吸道常见疾病，临床主要表现为呼吸道症状，常伴有头痛、发热等症状。一般临床以风寒、风热感冒多见。风寒感冒症状表现为恶寒重、发热轻、无汗、头痛身痛、鼻塞流清涕、咳嗽吐稀白痰、口不渴或渴喜热饮、苔薄白。感冒虽被大多数人视为小病，但却是临床的常见病和多发病，极大地影响患者的正常学习和工作，可引发其它疾病，甚至严重的还威胁生命。目前，以非甾体类抗炎药(NSAID)为代表的退热止痛药是临床应用最多、最广泛的一类药物。但是，长期使用存在很多不良反应，如胃肠道、心血管、肝脏、肾脏、中枢神经系统等损害。因而，探寻疗效好且副作用少的退热止痛药已成为新的研究方向。
技术实现要素：
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本发明的第一个目的是提供一种退热止痛的中药组合物。
一种退热止痛的中药组合物，其特征在于，包括以下重量份的原料药：北柴胡200～300份、羌活130～200份、桂枝65～90份和茵陈300～450份。
优选，包括以下重量份的原料药：北柴胡250份、羌活166.7份、桂枝83.3份和茵陈333.3份。
一种含有上述的退热止痛的中药组合物的软胶囊。优选，所述的软胶囊包括囊内物和囊壳，所述的囊内物包括上述的退热止痛的中药组合物。
一种上述的软胶囊的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：按所需重量份分别称取北柴胡、羌活、桂枝和茵陈，经净制、粉碎后，采用超临界CO2流体萃取得到萃取物，将萃取物用β-环糊精进行包埋得到包合物，萃取物与β-环糊精的质量比为1:8，将包合物与大豆油按质量比1:1.5进行混合，再加入大豆磷脂，其添加量占囊内物总质量的1％，混合研匀得到囊内物，装药制囊，制得软胶囊。
优选，所述的萃取物先经过分子蒸馏得到蒸出物后，再将蒸出物用β-环糊精进行包埋得到包合物，蒸出物与β-环糊精的质量比为1:8。
优选，所述的经净制、粉碎后，采用超临界CO2流体萃取得到萃取物是将经净制、粉碎后的原料药，在萃取压力25Mpa、萃取温度45℃、解析压力6.7Mpa、解析温度50℃，CO2流速为300kg/h条件下，恒温恒压萃取3.5h，得到萃取物。
所述的萃取物先经过分子蒸馏得到蒸出物是将萃取物水溶加热溶化后，在温度100℃、真空度100Pa、刮膜蒸馏转速260～280r·min-1，进样速度1.5mL·min-1条件下，进行分子蒸馏，得到蒸出物。
本发明的退热止痛的中药组合物的原料廉价易得，无毒副作用，且具有显著的解热止痛药效，可为退热止痛的中药组合物的临床疗效提供药理学依据，为中药复方的二次开发提供新的研究思路，同时也为该退热止痛的中药组合物的新药开发打下基础。
附图说明：
图1是退热止痛的中药组合物对LPS所致发热大鼠体温的影响。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：
本实施例的退热止痛的中药组合物，包括以下原料药：北柴胡2500g、羌活1667g、桂枝833g和茵陈3333g。
本实施例的退热止痛的中药组合物的软胶囊的制备方法，包括以下步骤：
a、称取上述4味原料药，经净制、粉碎后，过30目筛，将过筛后的原料药投入超临界萃取釜中，在萃取压力25MPa、萃取温度45℃、解析压力6.7MPa、解析温度50℃，CO2流速为300kg/h条件下，恒温恒压萃取3.5h出料，得到萃取物，置加盖广口瓶中，4℃冰箱保存备用；
b、取萃取物470g，水溶加热溶化后，按照温度100℃、真空度100Pa、刮膜蒸馏转速260～280r·min-1的条件下，以1.5mL·min-1恒定的进样速度进样，进行分子蒸馏，得到蒸出物a约200mL，馏出物b约l200mL；再将馏出物b从进料口加入，打开恒温加热器加热至70℃，使之熔成液体，按照温度200℃、真空度100Pa、刮膜蒸馏转速300r·min-1，流速为1mL·min-1条件下充分蒸馏，得蒸出物a1约50mL，馏出物b1约800mL，将馏出物b1舍弃，得到蒸出物a为210g，得率为1.4％；蒸出物a1为48g，得率为0.32％；
c、囊内物的制备：将蒸出物a(或蒸出物a与蒸出物a1的混合物)的无水乙醇溶液(蒸出物a与无水乙醇的质量体积比为1g:2mL)缓慢滴加到β-环糊精的饱和水溶液中(饱和水溶液法)，于磁力加热搅拌器上40℃，搅拌2h进行包埋，冷却，置于冰箱内冷藏24h，减压抽滤，沉淀物依次用少量蒸馏水和乙酸乙酯液洗涤至无气味，40℃真空干燥24h，研碎，得到包合物(蒸出物a与β-环糊精的质量比为1:8)；将包合物与大豆油按质量比为1:1.5进行混合，再加入大豆磷脂，其添加量占囊内物总质量的1％，混合研匀，即得囊内物；
d、胶液的制备：将甘油、水、羟苯甲酸甲酯(其添加量占胶液总质量的0.2％)、二氧化钛(其添加量占胶液总质量的0.03％)置溶胶罐中，搅拌均匀使溶解，加热至80℃，加入明胶搅拌混合30min(甘油、明胶和水的质量比为0.4:1:1)，超声脱气30min，60℃保温，备用；
e、软胶囊的制备：将上述制得的囊内物和胶液置于软胶囊机中，按工作参数(胶盒温度50℃，喷体温度40℃，转速1r/min，胶皮厚度0.6～0.02mm)装药制囊，在温度20℃，相对湿度20％～30％转笼中干燥48h，并用95％乙醇清洗后烘干，制得规格为0.5g软胶囊1000粒。
实施例2：
本实施例的退热止痛的中药组合物，包括以下原料药：北柴胡2000g、羌活2000g、桂枝900g和茵陈3000g。
本实施例的退热止痛的中药组合物的软胶囊的制备方法，包括以下步骤：
a、称取上述4味原料药，经净制、粉碎后，过30目筛，将过筛后的原料药投入超临界萃取釜中，在萃取压力20MPa、萃取温度40℃、解析压力7.1MPa、解析温度30℃，CO2流速为300kg/h条件下，恒温恒压萃取3.5h出料，得到萃取物，置加盖广口瓶中，4℃冰箱保存备用；
b、取萃取物，水溶加热溶化后，按照温度100℃、真空度100Pa、刮膜蒸馏转速260～280r·min-1的条件下，以1.5mL·min-1恒定的进样速度进样，进行分子蒸馏，得到蒸出物；
c、囊内物的制备：将蒸出物的无水乙醇溶液(蒸出物与无水乙醇的质量体积比为1g:2mL)缓慢滴加到β-环糊精的饱和水溶液中(饱和水溶液法)，于磁力加热搅拌器上40℃，搅拌2h进行包埋，冷却，置于冰箱内冷藏24h，减压抽滤，沉淀物依次用少量蒸馏水和乙酸乙酯液洗涤至无气味，40℃真空干燥24h，研碎，得到包合物(蒸出物与β-环糊精的质量比为1:8)；将包合物与大豆油按质量比为1:1.5进行混合，再加入大豆磷脂，其添加量占囊内物总质量的1％，混合研匀，即得囊内物；
d、胶液的制备：将甘油、水、羟苯甲酸甲酯(其添加量占胶液总质量的0.2％)、二氧化钛(其添加量占胶液总质量的0.03％)置溶胶罐中，搅拌均匀使溶解，加热至80℃，加入明胶搅拌混合30min(甘油、明胶和水的质量比为0.4:1:1)，超声脱气30min，60℃保温，备用；
e、软胶囊的制备：将上述制得的囊内物和胶液置于软胶囊机中，按工作参数(胶盒温度50℃，喷体温度40℃，转速1r/min，胶皮厚度0.6～0.02mm)装药制囊，在温度20℃，相对湿度20％～30％转笼中干燥48h，并用95％乙醇清洗后烘干，制得规格为0.5g软胶囊。
经镇痛实验(冰醋酸扭体法)和解热实验证明，本实施例的退热止痛的中药组合物能够显著提高小鼠痛阈和降低大鼠体温，具有显著的解热镇痛作用。
实施例3：
本实施例的退热止痛的中药组合物，包括以下原料药：北柴胡3000g、羌活1300g、桂枝650g和茵陈3000g。
本实施例的退热止痛的中药组合物的软胶囊的制备方法，包括以下步骤：
a、称取上述4味原料药，经净制、粉碎后，过30目筛，将过筛后的原料药投入超临界萃取釜中，在萃取压力30MPa、萃取温度35℃、解析压力6.3MPa、解析温度40℃，CO2流速为300kg/h条件下，恒温恒压萃取3.5h出料，得到萃取物，置加盖广口瓶中，4℃冰箱保存备用；
b、取萃取物，水溶加热溶化后，按照温度100℃、真空度100Pa、刮膜蒸馏转速260～280r·min-1的条件下，以1.5mL·min-1恒定的进样速度进样，进行分子蒸馏，得到蒸出物；
c、囊内物的制备：将蒸出物的无水乙醇溶液(蒸出物与无水乙醇的质量体积比为1g:2mL)缓慢滴加到β-环糊精的饱和水溶液中(饱和水溶液法)，于磁力加热搅拌器上40℃，搅拌2h进行包埋，冷却，置于冰箱内冷藏24h，减压抽滤，沉淀物依次用少量蒸馏水和乙酸乙酯液洗涤至无气味，40℃真空干燥24h，研碎，得到包合物(蒸出物与β-环糊精的质量比为1:8)；将包合物与大豆油按质量比为1:1.5进行混合，再加入大豆磷脂，其添加量占囊内物总质量的1％，混合研匀，即得囊内物；
d、胶液的制备：将甘油、水、羟苯甲酸甲酯(其添加量占胶液总质量的0.2％)、二氧化钛(其添加量占胶液总质量的0.03％)置溶胶罐中，搅拌均匀使溶解，加热至80℃，加入明胶搅拌混合30min(甘油、明胶和水的质量比为0.4:1:1)，超声脱气30min，60℃保温，备用；
e、软胶囊的制备：将囊内物和胶液置于软胶囊机中，按工作参数(胶盒温度50℃，喷体温度40℃，转速1r/min，胶皮厚度0.6～0.02mm)装药制囊，在温度20℃，相对湿度20％～30％转笼中干燥48h，并用95％乙醇清洗后烘干，制得规格为0.5g软胶囊。
经镇痛实验(冰醋酸扭体法)和解热实验证明，本实施例的退热止痛的中药组合物能够显著提高小鼠痛阈和降低大鼠体温，具有显著的解热镇痛作用。
实施例4：
本实施例的退热止痛的中药组合物，包括以下原料药：北柴胡2800g、羌活1850g、桂枝850g和茵陈4000g。
本实施例的退热止痛的中药组合物的软胶囊的制备方法，包括以下步骤：
a、称取上述4味原料药，经净制、粉碎后，过30目筛，将过筛后的原料药投入超临界萃取釜中，在萃取压力20MPa、萃取温度35℃、解析压力6.3MPa、解析温度40℃，CO2流速为300kg/h条件下，恒温恒压萃取3.5h出料，得到萃取物，置加盖广口瓶中，4℃冰箱保存备用；
b、取萃取物，水溶加热溶化后，按照温度100℃、真空度100Pa、刮膜蒸馏转速260～280r·min-1的条件下，以1.5mL·min-1恒定的进样速度进样，进行分子蒸馏，得到蒸出物；
c、囊内物的制备：将蒸出物的无水乙醇溶液(蒸出物与无水乙醇的质量体积比为1g:2mL)缓慢滴加到β-环糊精的饱和水溶液中(饱和水溶液法)，于磁力加热搅拌器上40℃，搅拌2h进行包埋，冷却，置于冰箱内冷藏24h，减压抽滤，沉淀物依次用少量蒸馏水和乙酸乙酯液洗涤至无气味，40℃真空干燥24h，研碎，得到包合物(蒸出物与β-环糊精的质量比为1:8)；将包合物与大豆油按质量比为1:1.5的进行混合，再加入大豆磷脂，其添加量占囊内物总质量的1％，混合研匀，即得囊内物；
d、胶液的制备：将甘油、水、羟苯甲酸甲酯(其添加量占胶液总质量的0.2％)、二氧化钛(其添加量占胶液总质量的0.03％)置溶胶罐中，搅拌均匀使溶解，加热至80℃，加入明胶搅拌混合30min(甘油、明胶和水的质量比为0.4:1:1)，超声脱气30min，60℃保温，备用；
e、软胶囊的制备：将囊内物和胶液置于软胶囊机中，按工作参数(胶盒温度50℃，喷体温度40℃，转速1r/min，胶皮厚度0.6～0.02mm)装药制囊，在温度20℃，相对湿度20％～30％转笼中干燥48h，并用95％乙醇清洗后烘干，制得规格为0.5g软胶囊。
经镇痛实验(冰醋酸扭体法)和解热实验证明，本实施例的退热止痛的中药组合物能够显著提高小鼠痛阈和降低大鼠体温，具有显著的解热镇痛作用。
实施例5：
本实施例的退热止痛的中药组合物，包括以下原料药：北柴胡2800g、羌活1667g、桂枝700g和茵陈4500g。
本实施例的退热止痛的中药组合物的软胶囊的制备方法，包括以下步骤：
a、称取上述4味原料药，经净制、粉碎后，过30目筛，将过筛后的原料药投入超临界萃取釜中，在萃取压力20MPa、萃取温度35℃、解析压力6.3MPa、解析温度30℃，CO2流速为300kg/h条件下，恒温恒压萃取3.5h出料，得到萃取物，置加盖广口瓶中，4℃冰箱保存备用；
b、取萃取物，水溶加热溶化后，在温度100℃、真空度100Pa、刮膜蒸馏转速260～280r·min-1条件下，以1.5mL·min-1恒定的进样速度进样，进行分子蒸馏，得到蒸出物；
c、囊内物的制备：将蒸出物的无水乙醇溶液(蒸出物与无水乙醇的质量体积比为1g:2mL)缓慢滴加到β-环糊精的饱和水溶液中(饱和水溶液法)，于磁力加热搅拌器上40℃，搅拌2h进行包埋，冷却，置于冰箱内冷藏24h，减压抽滤，沉淀物依次用少量蒸馏水和乙酸乙酯液洗涤至无气味，40℃真空干燥24h，研碎，得到包合物(蒸出物与β-环糊精的质量比为1:8)；将包合物与大豆油按质量比为1:1.5的比例进行混合，再加入大豆磷脂，其添加量占囊内物总质量的1％，混合研匀，即得囊内物；
d、胶液的制备：将甘油、水、羟苯甲酸甲酯(其添加量占胶液总质量的0.2％)、二氧化钛(其添加量占胶液总质量的0.03％)置溶胶罐中，搅拌均匀使溶解，加热至80℃，加入明胶搅拌混合30min(甘油、明胶和水的质量比为0.4:1:1)，超声脱气30min，60℃保温，备用；
e、软胶囊的制备：将囊内物和胶液置于软胶囊机中，按工作参数(胶盒温度50℃，喷体温度40℃，转速1r/min，胶皮厚度0.6～0.02mm)装药制囊，在温度20℃，相对湿度20％～30％转笼中干燥48h，并用95％乙醇清洗后烘干，制得规格为0.5g软胶囊。
经镇痛实验(冰醋酸扭体法)和解热实验证明，本实施例的退热止痛的中药组合物能够显著提高小鼠痛阈和降低大鼠体温，具有显著的解热镇痛作用。
实施例6：退热止痛的中药组合物的解热镇痛药效试验
1材料
1.1仪器
M D-S80型M D装置(广州汉维冷气机电有限公司)；YLS-6A型智能热板仪(山东省医学科学院设备供应站)。
1.2试药
实施例1制得的蒸出物a和蒸出物a1；吐温-60(广州化学试剂玻璃仪器批发部)；1％颅痛定(广东博罗先锋药业集团有限公司，批号：021001)；其余试剂均为分析纯。
1.3动物
NIH小鼠120只，♀♂兼有，体重18～22g，由南方医科大学动物实验中心提供(动物生产合格证号：2005A067)。
2方法与结果
2.1镇痛药效实验
2.1.1实验药物的配制：取上述的蒸出物a和蒸出物a1，加吐温-60适量，以小鼠的2个生物等效量为低剂量，4个生物等效量为高剂量，即蒸出物a高、低剂量组分别为46.67、23.33mg·kg-1。蒸出物a1高、低剂量组分别为10.67、5.33mg·kg-1。1％的颅痛定(6mg·kg-1)为阳性对照组，含有吐温-60的生理盐水为空白对照组。
2.1.2热板镇痛实验：取♀NIH小鼠60只，用YLS-6A型智能热板仪测定小鼠给药前痛阈值，剔除痛阈值大于60s和痛阈值小于5s的小鼠。按上述药物分为6组，即空白对照组、颅痛定组、蒸出物a高、低剂量组及蒸出物a1高、低剂量组。小鼠以0.2mL/10g体重连续灌胃(ig)2d，以适应实验室条件，第3天调节热板仪温度为55℃，按0.2mL/10g体重灌胃(ig)给药，分别于给药前和给药后30、60、90min测定小鼠痛阈值。热板法测定蒸出物对小鼠的镇痛作用见表1。
表1热板法测定蒸出物对小鼠的镇痛作用(χ±S,n＝10)
注：与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01
2.1.3扭体实验：NIH小鼠60只，♀♂各半，分组、给药同2.1.2项，于末次给药后1h，小鼠腹腔注射(ip)0.6％冰醋酸溶液(0.1mL/10g体重)，然后观察20min小鼠扭体次数。计算镇痛百分率：镇痛百分率＝(空白对照组平均扭体次数—实验组平均扭体次数)/空白对照组平均扭体次数。扭体法测定蒸出物对小鼠的镇痛作用见表2。
表2扭体法测定蒸出物对小鼠的镇痛作用
注：与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01
由表1、表2镇痛实验数据可知，蒸出物a的镇痛效果比蒸出物a1好，该蒸出物a具有很好的解热镇痛效果，从而表明本发明的退热止痛的中药组合物的临床疗效具有明确的药效基础，同时也为基于该退热止痛的中药组合物的新药研发打下了基础。
实施例7：
取实施例1得到的蒸出物a进行进一步的解热镇痛药效评价
1材料与仪器
1.1药物与试剂：实施例1制得的蒸出物a约250mL，罗痛定(硫酸罗痛定注射液，广东省博罗先锋药业集团有限公司，批号070802)；纯化LPS脂多糖(Sigma分装)；阿司匹林(武汉远大制药集团有限公司，每片含乙酰水杨酸220mg、非那西丁150mg、咖啡因35mg，生产批号：070304)；吐温-80(Sigma公司分装，编号P1754)；冰醋酸，国产分析纯。
1.2实验仪器：YLS-6B智能热板仪(出厂编号004060042，山东省医学科学院)；BL-2000S电子天平(Setra公司)；KD-204数字式电子体温计(德国宝丽康公司)。
1.3实验动物：SPF级NIH小鼠，体质量18～22g，SPF级SD大鼠，体质量180～220g，均购于南方医科大学实验动物中心，合格证号：SCXK(粤)2006-0015。实验动物均分笼饲养，标准颗粒饲料，自由摄食饮水，室温20℃±2℃，相对湿度55％～60％。
2方法
2.1药物配制及分组：镇痛实验，选择人：小鼠＝1:12倍比关系进行配制，该退热止痛的中药组合物临床用量为成人50g/d，选用临床剂量的1、2、4倍比关系，将蒸出物a配制成低、中、高3个生物等效剂量，加适量吐温-80做增溶剂，即140mg/kg(相当于生药10.27g/kg)、280mg/kg(相当于生药20.54g/kg)、560mg/kg(相当于生药41.08g/kg)。阳性对照组为2％罗痛定(12mg/kg)，空白对照组为生理盐水。解热实验，选择人：大鼠＝1:6配制药物，方法同上，即14mg/kg(相当于生药1.027g/kg)、28mg/kg(相当于生药2.054g/kg)、56mg/kg(相当于生药4.108g/kg)，阳性对照组为阿司匹林200mg/kg，空白对照组为生理盐水。LPS稀释于无菌生理盐水中配制成20μg/mL的溶液，-20℃冰箱保存备用。
2.2镇痛实验(热板法)：取雌性NIH小鼠，进行实验前的痛阈筛选，将小鼠置于55℃±0.5℃的热板仪上，记录小鼠足底接触热板至出现舔后足的反应时间(潜伏期)作为痛阈指标。筛选痛阈5～30s者为合格小鼠进行正式实验，随机分为5组，分组情况同2.1项，给药前测定痛阈2次，间隔10min取平均值作为基础痛阈。灌胃给药后30、60、90、120min各重复测定舔足潜伏期，记录痛阈值，超过60s按60s计算。
2.3镇痛实验(冰醋酸扭体法)：取NIH小鼠，雌雄各半，随机分为5组，分组情况同上，各组均灌胃给药，1次/天，连续3d。于末次给药后1h，各组小鼠腹腔注射0.6％冰醋酸0.1mL/10g，记录20min内小鼠扭体反应(腹部收缩内凹、伸展后肢、臀部抬高)次数，计算扭体反应抑制率。
反应抑制率/％＝(空白对照组平均扭体次数—实验组平均扭体次数)/空白对照组平均扭体次数×100％。
2.4解热实验：正式实验前3天将大鼠置于实验环境中模拟实验操作(包括捉拿、固定、灌胃、安放温度计)以适应实验室条件，每日测量体温(肛温)2次，单次体温超过38℃或2次体温差超过0.5℃的剔除不用，筛选出合格大鼠48只，体温为37.5℃±0.5℃，随机分为5组，分组情况同2.1项。于第4天开始正式实验，实验前6h动物禁食不禁水，使排空大便，造模前测量体温2次，间隔10min，取平均值作为基础体温。灌胃LPS(20μg/kg)复制大鼠发热模型，30min后测量体温升高，证明发热模型建立成功。然后，各组灌胃给药，每30min测量1次体温，连续测量3h，记录体温变化△T。
2.5统计学处理：实验数据均以表示，采用SPSS13.0统计软件进行分析。
3结果
3.1退热止痛的中药组合物对小鼠热板实验的影响：结果如表3所示，与用药前及对照组比较，各实验药物组均可明显延长小鼠热板舔足潜伏期。高剂量组与阳性组均在30min即开始显效(P<0.05)，在90min和120min时各剂量组均显著提高小鼠痛阈，延长舔足潜伏期(P<0.01或P<0.05)。
表3各组小鼠热板法痛阈潜伏期比较
注：与对照组比较：*P<0.05，**P<0.01
3.2退热止痛的中药组合物对冰醋酸小鼠扭体反应的影响
结果如表4所示，腹腔注射冰醋酸可诱发小鼠扭体反应，与对照组比较，退热止痛散各剂量组均可以显著减少小鼠扭体反应(P<0.01)，低、中、高剂量组的抑制率分别为48.81％、61.80％、63.91％，呈现出一定量效关系。
表4各组小鼠冰醋酸扭体反应次数比较
注：与对照组比较，**P<0.01
3.3退热止痛的中药组合物对LPS所致发热大鼠体温的影响
结果如图1所示，对照组灌胃LPS后30min大鼠体温开始升高，在120min达到高峰。大鼠体温平均升高1～1.5℃。各造模大鼠均在灌胃LPS 30min后体温升高，证明造模成功。各实验组给药后与对照组相比体温明显降低，略高于阳性对照组，在120min降至最低(P<0.01)，蒸出物a的3个剂量组均有明显的解热作用，但3个剂量组之间无明显的量效关系。
以上研究结果表明，该退热止痛的中药组合物具有良好的解热镇痛药效，但其具体作用机理还有待于进一步的研究。本实验通过对实施例1的退热止痛的中药组合物的蒸出物a进行药效学评价，可为退热止痛的中药组合物的临床疗效提供药理学依据，为中药复方的二次开发提供新的研究思路，同时也该退热止痛的中药组合物的新药开发打下基础。