本发明涉及医药技术领域，特别涉及平贝酮在制备预防和/或治疗人疱疹病毒感染药物中的应用。
背景技术：
单纯疱疹病毒(herpes simplex virus，HSV)属于疱疹病毒α亚科，其血清型有两种人疱疹病毒1型(HSV-1)和人疱疹病毒2型(HSV-2)。HSV-1感染人体后主要引起唇疱疹、咽炎、角膜炎，甚至能引起散发性脑炎等严重疾病；HSV-2主要通过破损皮肤及粘膜感染引起生殖器疱疹。HSV感染是人类一种常见的传染病，并且这两种单纯疱疹病毒感染后均可在体内引起长期潜伏感染。临床使用的抗疱疹病毒药物主要为核苷类似物，如阿昔洛韦、更昔洛韦等。但是这些药物抗病毒谱窄，易产生耐药性，副作用大且价格昂贵，使其临床应用受到很大限制。近年来，越来越多的国内外科研工作者开始从中草药中筛选出一些高效抗疱疹病毒的药物，中草药具有来源广泛、不良反应少等优点。
平贝母为百合科植物平贝母Fritillaria ussuriensis Maxim.的干燥鳞茎。平贝母又名坪贝、贝母、平贝，有清热润肺、止咳化痰的作用，为一种常用中药，与川贝母、浙贝母同属贝母属，但在药用上有一定差别。平贝酮(Pingbeinone)，结构如式I所示，是从平贝母中提取的生物碱类成分，药理研究表明平贝酮具有抗溃疡、祛痰、降血压及中枢抑制等多种作用。
目前未见平贝酮在制备预防和/或治疗人疱疹病毒疾病药物中应用的报道。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明提供了平贝酮在制备预防和/或治疗人疱疹病毒感染药物中的应用。研究结果表明平贝酮可有效预防和/或治疗由人疱疹病毒感染引起的疾病。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了平贝酮在制备预防和/或治疗人疱疹病毒感染的药物中的应用。
在本发明提供的实施例中，人疱疹病毒包括人疱疹病毒1型和/或人疱疹病毒2型。
在本发明提供的实施例中，人疱疹病毒1型感染所致疾病为唇疱疹、咽炎、角膜炎或散发性脑炎。
在本发明提供的实施例中，人疱疹病毒2型感染所致疾病为生殖器疱疹。
在本发明提供的实施例中，生殖器疱疹为人疱疹病毒2型引起的阴道炎。
作为优选，平贝酮的活性剂量为20～200mg/kg/d。
优选地，平贝酮的活性剂量为30～80mg/kg/d。
在本发明中，预防和/或治疗人疱疹病毒感染的药物包括平贝酮和药学上可接受的载体。
在本发明中，药学上可接受的载体包括淀粉、低取代羟丙基纤维素、微粉硅胶、硬脂酸镁、淀粉浆、蔗糖、糊精、羧甲基淀粉钠、滑石粉、聚山梨酯、聚乙二醇、注射用大豆磷脂和注射用甘油中的一种或几种。但本发明并非限定于此，本领域技术人员认为可行的载体种类均在本发明的保护范围之内。
在本发明中，预防和/或治疗人疱疹病毒感染的药物的剂型为任意一种临床可接受的口服给药剂型、注射给药剂型或外用给药剂型。
作为优选，口服给药剂型中平贝酮的质量分数为17.5％～88％。
优选地，口服给药剂型中平贝酮的质量分数为20％～80％。
更优选地，口服给药剂型中平贝酮的质量分数为25％～75％。
作为优选，注射给药剂型中，平贝酮的质量分数为50％～90％。
作为优选，外用给药剂型中，平贝酮的质量分数为15％～80％。
作为优选，预防和/或治疗人疱疹病毒感染的药物的剂型为口服给药剂型，其每天的口服剂量为3.6～36mg平贝酮/kg人体体重。
作为优选，预防和/或治疗人疱疹病毒感染的药物的剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、注射剂、煎膏剂、悬浮剂、分散剂、糖浆剂、栓剂、凝胶剂、气雾剂或贴剂。
本发明提供了平贝酮在制备预防和/或治疗人疱疹病毒感染的药物中的应用。本发明具有如下有益效果：
本发明采用了比色法测定了平贝酮对人疱疹病毒HSV-1和HSV-2的抑制活性，结果表明，平贝酮在体外对人疱疹病毒HSV-1和HSV-2感染，EC50分别为10.96μmol/L、13.45μmol/L，SI分别为8.7、7.0，结果表明平贝酮对疱疹病毒诱导的细胞病变有抑制作用，能提高病毒感染细胞的存活率，抗病毒活性明显；
本发明分别以灌胃(口服)和外用(皮肤)给药的方式测定了平贝酮对人疱疹病毒HSV-1所致豚鼠皮肤感染的治疗效果，结果表明，平贝酮能够明显减缓豚鼠皮肤感染症状，缩短痊愈时间；
本发明还分别以灌胃(口服)和粘膜(阴道)给药的方式测定了平贝酮对人疱疹病毒HSV-2引起的小鼠阴道炎的治疗作用，结果表明，平贝酮对小鼠阴道炎具有明显的治疗作用，并可明显提高小鼠的存活率和平均存活日，延长生命率。
由上述试验结果可知，平贝酮可以抑制HSV病毒的复制，缓解HSV病毒引起的症状，减轻HSV病毒感染导致的死亡，提高小鼠的存活率和平均存活日，延长生命率，呈剂量依赖关系。表明平贝酮可有效预防和/或治疗由人疱疹病毒感染引起的疾病。
具体实施方式
本发明公开了平贝酮在制备预防和/或治疗人疱疹病毒感染药物中的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明提供的平贝酮在制备预防和/或治疗人疱疹病毒感染药物中的应用中所用生物材料、试剂或仪器均可由市场购得。
本发明所采用的平贝酮优选为平贝酮单体和/或平贝酮提取物。所述平贝酮提取物中，单体平贝酮的含量优选在90％以上。本发明可按照常规方法从含有平贝酮的中药材或者中药饮片中提取得到，如平贝母，也可购买平贝酮的市售商品。具体的，在本发明的实施例中，可采用中国药品生物制品检定所提供的平贝酮。
本发明以外用(皮肤)给药的方式进行了平贝酮对人疱疹病毒HSV-1所致豚鼠皮肤感染的疗效测试，结果表明，平贝酮在剂量20/40/80mg/kg/day时皮肤给药5天，与涂抹溶剂的皮区相比，涂抹平贝酮的皮区的HSV-1感染的计分和痊愈天数均显著降低，呈现剂量依赖关系。
本发明以灌胃(口服)给药的方式进行了平贝酮对人疱疹病毒HSV-1所致豚鼠皮肤感染的疗效测试，结果表明，平贝酮在剂量25/50/100mg/kg/day时灌胃给药5天，与安慰剂组的皮区相比，口服平贝酮组的HSV-1感染的计分和痊愈天数均显著降低，呈现剂量依赖关系。
本发明以粘膜(阴道)给药的方式进行了平贝酮对人疱疹病毒HSV-2所致豚鼠皮肤感染的疗效测试，结果表明，平贝酮在剂量38/75/150mg/kg/day时阴道给药10天，小鼠阴道接种感染HSV-2病毒后，与对照组相比，涂抹平贝酮对小鼠阴道感染HSV-2病毒引起的阴道炎均有治疗作用，且呈剂量依赖关系。
本发明以灌胃(口服)给药的方式进行了平贝酮对人疱疹病毒HSV-2所致豚鼠皮肤感染的疗效测试，结果表明，平贝酮在剂量50/100/200mg/kg/day时灌胃给药10天，与对照组相比，口服平贝酮对小鼠阴道感染HSV-2病毒引起的阴道炎均有治疗作用，且呈剂量依赖关系。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1平贝酮对HSV-1和HSV-2感染细胞病变的保护作用
1、实验材料
细胞与病毒：非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)，购于美国ATCC细胞库，由江苏康缘现代中药研究院保存。疱疹病毒1型(HSV-1)SM44株，疱疹病毒2型(HSV-2)Sav株，由中国科学院武汉病毒研究所提供，由江苏康缘现代中药研究院保存，在Vero细胞培养内传代，-80℃保存。
试剂：阿昔洛韦，购自湖北科益药业股份有限公司。DMEM培养基，购自南京凯基生物科技发展有限公司，批号：20141024，细胞生长液中含10％胎牛血清、1×105U/L青霉素、100mg/L链霉素。细胞维持液中除含2％胎牛血清外，其它同细胞生长液。
2、实验方法：
(1)平贝酮对Vero细胞的毒性测定
Vero细胞用含2％胎牛血清的DMEM培养基按5×104个/mL浓度接种96孔培养板，每孔100μL，置37℃5％CO2培养箱中培养过夜形成细胞单层。弃生长液，每孔加入100μL系列递比稀释浓度的平贝酮(25、50、100、200、400μM)及阳性对照药物阿昔洛韦(25、50、100、200、400μM)的维持液，每个稀释度设4个复孔，同时设立正常细胞对照。置37℃、5％CO2，每天观察细胞病变，3d后每孔加入20μL MTS，于37℃培养箱中培养2h，酶标仪测490nm处的OD值。按下式计算不同浓度药物对细胞的存活率，确定药物的最大无毒浓度和半数毒性浓度CC50。
细胞存活率(％)＝(实验孔OD值/对照孔OD值)×100％
(2)平贝酮对人疱疹病毒HSV-1和HSV-2的抑制作用
Vero细胞用含2％胎牛血清的DMEM培养基按5×104个/mL浓度接种96孔培养板，每孔100μL，置37℃、5％CO2培养箱中培养过夜形成细胞单层。弃上清后，用PBS将细胞洗涤1次，以洗去残留的胎牛血清，加入不含胎牛血清的DMEM培养基稀释至100TCID50HSV-1/HSV-2病毒，每孔100μL，35℃孵育2h后，弃去病毒液。用2％胎牛血清的DMEM培养基将平贝酮和阳性对照药物阿昔洛韦配制成不同浓度，分别加入单层Vero细胞中，设3个复孔，Vero细胞于37℃、5％CO2培养箱中培养48h，每日观察细胞病变现象。48h后，弃上清后，加入100μL 10％甲醛固定1h，0.1％(w/v)结晶紫染色15min，酶标仪570nm测定吸光度。计算病毒抑制率，并计算平贝酮对两种病毒的EC50(半数有效浓度)、SI(选择指数)。
病毒抑制率(％)＝[试验孔(药物+病毒)平均A570值-病毒对照孔平均A570值]/(细胞对照孔平均A570值-病毒对照孔平均A570值)×100％
SI＝CC50/EC50
试验结果见表1：
表1药物对HSV-1/HSV-2的抗病毒活性
表1结果显示：平贝酮在体外对人疱疹病毒HSV-1和HSV-2所致细胞病变具有明显抑制作用，其EC50分别为10.96μM、13.45μM，SI分别为8.7、7；具备应用于抗人疱疹病毒HSV-1和HSV-2感染治疗的体外药效学基础。
实施例2平贝酮外用给药对豚鼠皮肤人疱疹病毒1型感染的治疗作用
1、实验材料
试剂：阿昔洛韦乳膏，由江苏亚邦强生药业有限公司生产。
动物：Dunkin-Harthey白毛豚鼠，购自卫生部武汉生物制品研究所
病毒：疱疹病毒1型(HSV-1)SM44株，由中国科学院武汉病毒研究所提供，由江苏康缘现代中药研究院保存，在Vero细胞培养内传代，-80℃保存。
2、实验方法
Dunkin-Harthey白毛豚鼠，重300-350g，雄性，每天喂3次青菜及饲料。实验共用12只豚鼠，每组3只，分为4组，分组分别为：阿昔洛韦组，平贝酮高、中、低剂量组。每只根据情况选择6个皮区建模、给药。戊巴比妥钠麻醉后，将豚鼠背部按常规方法脱毛，清洁，消毒，用标记笔把豚鼠背部脱去皮毛部分分成4个皮区。在每个皮区的中心皮内注射107PFU/mL HSV-1株病毒，每次注射0.1mL。在麻醉期间，动物饲养在30℃保温箱中2h。阿昔洛韦组中4个皮区涂阿昔洛韦，另外2个皮区涂含0.1％Tween-80的PBS溶液(溶剂)；平贝酮高、中、低剂量组每组4个皮区涂不同剂量的平贝酮，另外2个皮区涂含0.1％Tween-80的PBS溶液，每次涂抹药液均为30μL阿昔洛韦，等药物干燥为止，每天抹药2次，连续给药5d。逐日观察豚鼠病变部位痊愈情况。为了定量药物的作用，按Alenius和Oberg确立的记分系统(表2)，在给豚鼠接种HSV-1病毒后，接种的区域每天按症状记分1次。疱疹发生时的记分以阿拉伯数字显示，当疱疹开始干并结痂时，记分改用罗马数字，所有记分均双盲地进行，将感染过程中所有的阿拉伯及罗马记分数字加在一起得到累积的记分。试验结果见表3。
表2豚鼠HSV感染的计分系统
表3平贝酮外用给药对豚鼠皮肤Ⅰ型人疱疹病毒感染的治疗作用
注：***P<0.001，**P<0.01，*P<0.05与模型组比较
表3结果显示，豚鼠皮肤接种感染HSV-1病毒后，与涂抹溶剂的皮区相比，涂抹平贝酮的皮区的HSV-1感染的计分和痊愈天数均显著降低，呈现剂量依赖关系，且具有统计学差异，提示平贝酮对豚鼠皮肤的HSV-1感染具有治疗作用，可以减缓感染症状，缩短痊愈时间。
实施例3平贝酮口服给药对豚鼠皮肤人疱疹病毒1型感染的治疗作用
1、实验材料
试剂：阿昔洛韦，购自湖北科益药业股份有限公司。
动物：Dunkin-Harthey白毛豚鼠，购自卫生部武汉生物制品研究所
病毒：疱疹病毒1型(HSV-1)SM44株，由中国科学院武汉病毒研究所提供，由江苏康缘现代中药研究院保存，在Vero细胞培养内传代，-80℃保存。
2、实验方法
Dunkin-Harthey白毛豚鼠，重300-350g，雄性，每天喂3次青菜及饲料。实验共用12只豚鼠，每组3只，分为4组，分组分别为阿昔洛韦组，平贝酮高、中、低剂量组，每只根据情况选择6个皮区建模、给药。戊巴比妥钠麻醉后，将豚鼠背部按常规方法脱毛，清洁，消毒，用标记笔把豚鼠背部脱去皮毛部分分成4个皮区。在每个皮区的中心皮内注射107PFU/mL HSV-1HS-1株病毒，每次注射0.1mL。在麻醉期间，动物饲养在30℃保温箱中2h。造模结束后阿昔洛韦组及平贝酮高、中、低剂量组按照表4中所述剂量进行灌胃给药，每只每次0.2mL，安慰剂组以等量的PBS溶液(含0.1％Tween-80)代替，连续给药5d。逐日观察豚鼠病变部位痊愈情况。为了定量药物的作用，按Alenius和Oberg确立的记分系统，在给豚鼠接种HSV-1病毒后，接种的区域每天按症状记分1次。疱疹发生时的记分以阿拉伯数字显示，当疱疹开始干并结痂时，记分改用罗马数字，所有记分均双盲地进行，将感染过程中所有的阿拉伯及罗马记分数字加在一起得到累积的记分。结果见表4。
表4平贝酮口服给药对豚鼠皮肤Ⅰ型人疱疹病毒感染的治疗作用
注：***P<0.001，**P<0.01，*P<0.05与模型组比较
表4结果显示，豚鼠皮肤接种感染HSV-1病毒后，与安慰剂组的皮区相比，口服阿昔洛韦组的HSV-1感染的计分和痊愈天数均显著降低；类似的，与安慰剂组的皮区相比，口服平贝酮组的HSV-1感染的计分和痊愈天数均显著降低，呈现剂量依赖关系，且具有统计学差异，提示平贝酮对豚鼠皮肤的HSV-1感染具有治疗作用，可以减缓感染症状，缩短痊愈时间。
实施例4平贝酮粘膜给药对小鼠阴道感染人疱疹病毒2型引起的阴道炎的治疗作用
1、实验材料
试剂：阿昔洛韦乳膏，由江苏亚邦强生药业有限公司生产。
动物：BALB/c小鼠，雌性，南京市江宁区青龙山动物繁殖场。
病毒：疱疹病毒2型(HSV-2)Sav株，由中国科学院武汉病毒研究所提供，由江苏康缘现代中药研究院保存，在Vero细胞培养内传代，-80℃保存。
2、实验方法
BALB/c小鼠雌性50只，按体重随机分为5组，除对照组，每组小鼠用眼科镊子将吸附有病毒液0.03mL(10LD50)的明胶海绵小块送入小鼠阴道，正常对照组换用无菌PBS溶液，小鼠感染2h后各给药组分别在阴道内及外阴部涂抹阿昔洛韦乳膏或者平贝酮高、中、低剂量治疗，给药天数为10天，病毒对照组给于涂抹乳膏基质。观察小鼠死亡数、生活日数，计算小鼠存活率、平均生活日、延长生命率。试验结果见表5。
表5平贝酮粘膜给药对Balb/c小鼠HSV-2阴道炎的治疗效果(n＝10，)
注：***P<0.001，**P<0.01，*P<0.05与模型组比较
表5结果显示，小鼠阴道接种感染HSV-2病毒后，与对照组相比，涂抹平贝酮对小鼠阴道感染HSV-2病毒引起的阴道炎均有治疗作用，且呈剂量依赖关系，各剂量组均可明显提高小鼠的存活率和平均存活日，延长生命率。
实施例5平贝酮口服给药对小鼠阴道感染人疱疹病毒2型引起的阴道炎的治疗作用
1、实验材料
试剂：阿昔洛韦，购自湖北科益药业股份有限公司。
动物：BALB/c小鼠，雌性，南京市江宁区青龙山动物繁殖场。
病毒：疱疹病毒2型(HSV-2)Sav株，由中国科学院武汉病毒研究所提供，由江苏康缘现代中药研究院保存，在Vero细胞培养内传代，-80℃保存。
2、实验方法
BALB/c小鼠雌性50只，按体重平均随机分为5组，除对照组，每组小鼠用眼科镊子将吸附有病毒液0.03mL(10LD50)的明胶海绵小块送入小鼠阴道，正常对照组换用无菌PBS溶液，小鼠感染2h后各给药组分别灌胃给予阿昔洛韦及平贝酮高、中、低剂量，给药天数为10天，病毒对照组灌胃给予生理盐水。观察小鼠死亡数、生活日数，计算小鼠存活率、平均生活日、延长生命率。试验结果见表6。
表6平贝酮口服给药对Balb/c小鼠HSV-2阴道炎的治疗效果(n＝10，)
注：***P<0.001，**P<0.01，*P<0.05与模型组比较
表6结果显示，小鼠阴道接种感染HSV-2病毒后，与对照组相比，口服平贝酮对小鼠阴道感染HSV-2病毒引起的阴道炎均有治疗作用，且呈剂量依赖关系，各剂量组均可明显提高小鼠的存活率和平均存活日，延长生命率。
实施例6平贝酮在制备胶囊剂药物中的应用
将350g平贝酮和32g淀粉、6g低取代羟丙基纤维素、4.5g微粉硅胶、1.5g硬脂酸镁及适量10％淀粉浆混合，装入胶囊，得到平贝酮的胶囊制剂1000粒。每日3次，每次1粒。
实施例7平贝酮在制备颗粒剂药物中的应用
将350g平贝酮和1000g蔗糖及500g糊精混合，按照常规方法制成1000包平贝酮颗粒剂。每日3次，每次1粒。
实施例8平贝酮在制备片剂药物中的应用
将350g平贝酮和50g淀粉、7.5g羧甲基淀粉钠、0.8g滑石粉、50g糊精、0.8g硬脂酸镁及适量10％淀粉浆适混合，按照常规方法制成平贝酮片剂1000片。每日3次，每次1片。
实施例9平贝酮在制备丸剂药物中的应用
将350g平贝酮和12g聚乙二醇-6000、80.5g聚山梨酯-80、适量液状石蜡混合，按照常规方法制成平贝酮丸剂1000粒。每日3次，每次1粒。
实施例10平贝酮在制备注射剂药物中的应用
将200g平贝酮和15g注射用大豆磷脂、25g注射用甘油，注射用水定容至1000mL，按照常规方法制成平贝酮注射剂1000支。每日1次，每次1支，至少采用250mL 5％葡萄糖注射液稀释后静脉滴注。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。