本发明涉及一种医疗实验方法,尤其涉及一种调节免疫力,增强孩童脑细胞发展之活醣液态饮。
背景技术:
根据联合国世界卫生组织定义,65岁以上老年人口总数达全国总人口数的7%以上即属于「高龄化社会」。而民国99年底内政部统计处统计台湾65岁以上老年人口约占10.74%,因此台湾老龄人口已远超过WHO规定之比例。然而,随着生活品质的提升与医疗技术的发展,已使得现代人的平均寿命获得延长,加上全球老年人口逐年增加,「老化管理」已成为国际上的重要健康议题。
年龄的增加,各器官及组织内的正常功能逐渐减退,导致活动力、抗氧化系统的防御功能下降,体内氧化物质增加而引起与年龄相关之疾病产生,如:动脉粥状硬化、心血管疾病、糖尿病、癌症及失智症等。失智症是一群症状的组合,属于神经退化性疾病,随着年龄增长,罹患此病症的比例随之增加。根据98年经建会公布98~145年人口推估的资料表示,台湾到145年失智人口将达62万人,而失智症中以阿兹海默症为最大宗,约占失智症的60~70% 。AD主要症状为记忆力衰退,对时间、地点和人物的辨认出现问题,此症状对于照顾者、社会及医疗资源皆是一沉重负担,因此,为避免及减少家庭、经济、医疗方面之负担,如何老的健康,保持健康体态与认知能力,是未来人类共同面对的新课题。而目前老化理论指出,人会老化,与体内氧化压力产生的自由基有关,「自由基老化学说」是1954年由德罕哈门博士所提出,他认为自由基的不安定性会攻击细胞伤害细胞中主要产生能量之胞器-粒线体,是老化与疾病的主要原因。因此目前主要研究方向也着重于增加体内抗氧化酵素活性、减少体内氧化压力与自由基的产生。
亚洲地区使用中药炖补有千年的历史,灵芝在中国又被称为上药之冠,近来研究认为灵芝主要活性成分为多醣体,而研究也指出灵芝多醣具有增强免疫力、抗发炎、抗癌、降血压、抗氧化等功效;另外巴西蘑菇及纳豆均为近来热门之保健食品,其菌丝体发酵液,具有抗氧化之功效。但综合以上之菇蕈TMSN (TMSN) 制成之配方,对于抗氧化能力及延缓老化之功效尚待探讨。因此,本发明将使用TMSN探讨其对老化促进小鼠SAMP8体内氧化伤害、抗氧化酵素活性及外观老化状态之影响。
技术实现要素:
本发明的目的就在于为了解决上述问题而提供一种调节免疫力,增强孩童脑细胞发展之活醣液态饮。
本发明通过以下技术方案来实现上述目的:
本发明包括以下步骤:
(1)活动量测试:首先将小鼠置于25cm3的铝箱中央,测其局部行为活动量的情形,小鼠在环境光线微弱且寂静的环境下操作,各组小鼠进行此测试,全程录影观测小鼠平面移动的时间之活动量,每5分钟透过记录器记录,每只老鼠全程为10分钟,主要目的为了解小鼠平面步移之情形,作为其活动量评估之依据,并筛选活动异常的小鼠予以淘汰;
(2)老化指数评估:评估项目包括有行为方面:观察小鼠30秒内的探索反应及捏颈背皮肤时的逃避反应;外表方面:观察毛发的光泽度、粗糙度、毛发脱落的情形及皮肤溃疡的状况;眼睛方面:观察眼睛周围处黏膜炎或眼睑的水肿情形;以及视察和触摸脊柱前后弯的变化,每个项目各有5个等级,分别是0、1、2、3及4,依各项等级之定义给予评分,分数愈高者,则表示老化现象越严重,下表为老化指数判定标准。
(3)单次被动回避试验:经过活动量测试之后,进行单次被动回避试验,以观察其学习记忆能力,此乃使用一35 W×17 D×20 Hcm3之铝箱,分成明室及暗室,其中央有一7.5 W×6.5Dcm2之小闸门相隔并可相通,箱底设有间隔1cm平行排列的金属杆,并接上电流器,测试时,先将小白鼠放在明室,待10秒环境适应后,打开两室间的小闸门,使其自由探索,由于小白鼠有趋暗的夜行性行为,一旦小白鼠进入暗室,迅速关上小闸门,五秒钟后给于0.5微安培0.5秒之电击,每次间隔5秒连续三次,并记录其在明室中滞留的时间,即完成学习训练。此后在训练完成后分别测其24小时、48小时、72小时及7天的记忆能力,测试时采同样方法操作,但此时不再给予任何电击,每次测试时间最大期限为180秒,滞留明室的时间越长,表示小鼠记忆能力越佳;
(4) 主动回避试验:经过活动量测试后,进行主动回避试验,此乃使用一35 W×17D×20Hcm3之铝箱,分成两个箱室,其中央有一7.5W×6.5Dcm2之小闸门相隔并可相通,箱底设有间隔1cm平行排列的金属杆,并接上电流器,实验流程全由电脑程序设计控制时间、声光及电击,测试时,先将小白鼠放置一边,待适应10秒钟后,电脑随即出现10秒钟的光及声音的刺激,假如小白鼠处在CS系统下,仍然停留在同一边无任何反应,则电脑随即给予5秒钟0.3毫安的电击一次;若小白鼠在CS系统下进入另一边,即不给予电击,电脑会依老鼠的反应自动出现CS及UCS的状态,每只老鼠一次接受5回的CS及UCS的测试,然后将老鼠放回鼠笼中,间隔15-20分钟后以相同的CS及UCS的操作流程4次,连续4天,此测试求其于CS系统下回避反应的次数,判定喂食不同剂量后,对小白鼠学习记忆能力之影响。
本发明的有益效果在于:
本发明是一种调节免疫力,增强孩童脑细胞发展之活醣液态饮,与现有技术相比,本发明所得之资料以SPSS软体系统进行统计分析,实验结果之数值皆以平均值±标准误差表示。体重、摄食量、老化指数、活动量、学习记忆、组织器官重、血液生化值、氧化状态及脑部组织病理变化是利用单因子变异数分析,以检定多组间之差异,以Duncan 多重全距检定比较组间是否有差异,有利于后期研制延缓衰老的药物制作,具有推广使用的价值。
具体实施方式
下面对本发明作进一步说明:
本发明包括以下步骤:
(1)活动量测试:首先将小鼠置于25cm3的铝箱中央,测其局部行为活动量的情形,小鼠在环境光线微弱且寂静的环境下操作,各组小鼠进行此测试,全程录影观测小鼠平面移动的时间之活动量,每5分钟透过记录器记录,每只老鼠全程为10分钟,主要目的为了解小鼠平面步移之情形,作为其活动量评估之依据,并筛选活动异常的小鼠予以淘汰;
(2)老化指数评估:评估项目包括有行为方面:观察小鼠30秒内的探索反应及捏颈背皮肤时的逃避反应;外表方面:观察毛发的光泽度、粗糙度、毛发脱落的情形及皮肤溃疡的状况;眼睛方面:观察眼睛周围处黏膜炎或眼睑的水肿情形;以及视察和触摸脊柱前后弯的变化,每个项目各有5个等级,分别是0、1、2、3及4,依各项等级之定义给予评分,分数愈高者,则表示老化现象越严重,下表为老化指数判定标准。
(3)单次被动回避试验:经过活动量测试之后,进行单次被动回避试验,以观察其学习记忆能力,此乃使用一35 W×17 D×20 Hcm3之铝箱,分成明室及暗室,其中央有一7.5 W×6.5Dcm2之小闸门相隔并可相通,箱底设有间隔1cm平行排列的金属杆,并接上电流器,测试时,先将小白鼠放在明室,待10秒环境适应后,打开两室间的小闸门,使其自由探索,由于小白鼠有趋暗的夜行性行为,一旦小白鼠进入暗室,迅速关上小闸门,五秒钟后给于0.5微安培0.5秒之电击,每次间隔5秒连续三次,并记录其在明室中滞留的时间,即完成学习训练。此后在训练完成后分别测其24小时、48小时、72小时及7天的记忆能力,测试时采同样方法操作,但此时不再给予任何电击,每次测试时间最大期限为180秒,滞留明室的时间越长,表示小鼠记忆能力越佳;
(4) 主动回避试验:经过活动量测试后,进行主动回避试验,此乃使用一35 W×17D×20Hcm3之铝箱,分成两个箱室,其中央有一7.5W×6.5Dcm2之小闸门相隔并可相通,箱底设有间隔1cm平行排列的金属杆,并接上电流器,实验流程全由电脑程序设计控制时间、声光及电击,测试时,先将小白鼠放置一边,待适应10秒钟后,电脑随即出现10秒钟的光及声音的刺激,假如小白鼠处在CS系统下,仍然停留在同一边无任何反应,则电脑随即给予5秒钟0.3毫安的电击一次;若小白鼠在CS系统下进入另一边,即不给予电击,电脑会依老鼠的反应自动出现CS及UCS的状态,每只老鼠一次接受5回的CS及UCS的测试,然后将老鼠放回鼠笼中,间隔15-20分钟后以相同的CS及UCS的操作流程4次,连续4天,此测试求其于CS系统下回避反应的次数,判定喂食不同剂量后,对小白鼠学习记忆能力之影响。
生化分析
血液:于第12周采集血液于离心管中以作分析。采血前一天小鼠禁食8小时,使用麻醉剂麻醉后,经由眼窝抽取血液样本。血液采集完毕后牺牲,于3000 rpm、4°C下离心15分钟,将上清液之血清取出分装,并进行血液生化分析,分析项目如下:白蛋白 (Albumin) 、总蛋白 (total protein)、丙酮酸转胺酶 (GPT) 、天门冬胺酸转胺酶 (GOT) 、尿素氮 (BUN) 、胆固醇 (cholesterol) 、三酸甘油酯 (Triglycerides) 。
肝脏:小鼠牺牲后取出肝脏组织,进行肝脏抗氧化分析:麸胱甘肽过氧化酶 (glutathione peroxidase; GPx) 、超氧歧化酶 (superoxide dismutase; SOD) 、丙二醛 (malondialdehyde; MDA)
脑:小鼠牺牲后摘取完整脑部置于冰上迅速分为皮质与海马回,储存于-80°C之冷冻柜,尽快进行iNOS分析。而8羟基-2’-脱氧鸟票呤核甘 (8-hydroxy-2-deoxy Guanosine; 8-OHdG) 则利用全脑测定。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解,本发明不受上述实施例的限制,上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理,在不脱离本发明精神和范围的前提下,本发明还会有各种变化和改进,这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。