本发明涉及一种柿蒂提取物及其用途，属于天然产物化学领域。
背景技术：
柿蒂是柿树科植物柿(Diospyros kaki)的干燥宿萼，主产于河北、河南、山东、福建等地，是一种传统中药。其昧苦、性温，有降气、止呃之功能，常用于胃寒气滞的呃逆。《本草纲目》记载：“古方单用柿蒂煮汁饮之，取其苦温能降逆气也。《济生》柿蒂散加以丁香、生姜之辛热，以开痰散郁，盖从治之法，而昔人常用之收效矣。”现代药理学研究表明柿蒂提取物还有镇静、抗心率失常和一定的抗生育作用。现代研究表明，柿蒂含有多种活性成分和营养物质，其中三萜类、黄酮类为其主要化学成分。但是，目前尚未见有关于柿蒂在美容护肤方面，尤其是抗衰老和美白方面的研究和应用。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种柿蒂提取物及其用途，旨在将柿蒂中的活性提取物应用于皮肤外用剂中，以起到美容护肤的作用。
本发明柿蒂提取物，是以柿蒂为原料提取后获得的，包括如下步骤：
1、将柿蒂原料浸渍入有机溶剂中，室温下超声提取后过滤，减压浓缩后获得柿蒂粗提物；
2、将所述柿蒂粗提物经过吸附树脂吸附和有机溶剂洗脱，干燥后获得柿蒂活性富集提取物，即为柿蒂提取物。
将提取所得柿蒂粗提物和柿蒂提取物分别进行抗衰老作用和美白作用的实验研究。
步骤1和步骤2中所述有机溶剂是指含有羟基或羰基等极性基团的有机溶剂，例如但不限于：水、甲酰胺、二甲基甲酰胺、三乙胺、三丁胺、乙腈、甲酸甲酯、乙酸乙酯、碳酸二甲酯、二甲亚砜、丙酮、甲乙酮、二氧六环、吡啶、四氢呋喃、甲醇、乙醇溶液、醋酸纤维、三氯甲烷、丙三醇、丙二醇、丙烯二醇、异丙醇、正丁醇、乙醚中的一种或几种，其中优选乙醇溶液。
所述乙醇溶液的体积浓度为0-95％，优选为60％。
步骤1中柿蒂原料与有机溶剂的料液比为1g:5-20mL，优选为1g:12mL。
所述吸附树脂即大孔吸附树脂，优先选择弱极性或中等极性的吸附树脂，例如：X-5、AB-8、D101、XDA-6、LX-21、NK-9、D3520、WLD等，其中优选D101树脂，D101为D-101型大孔吸附树脂是苯乙烯型非极性共聚体，适用范围比较广谱，对于不带极性或弱极性的有机化合物，普遍吸附能力强，特别对皂甙类、黄酮类分离，纯化效果尤佳，例如：人参皂甙、三七皂甙、薯蓣皂甙、银杏黄酮等。
本发明柿蒂提取物中总黄酮含量为0.3-62.8％。
本发明柿蒂提取物在美白和抗衰老方面都具有很好的功效，可以作为活性成分添加到化妆品配方中，这里所指的活性成分在某些情况下可以提供一种或一种以上的功效。
本发明柿蒂提取物可应用于皮肤外用剂、保健食品和医药，尤其是可应用于化妆品中，根据制剂的不同类型添加不同的用量。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1：提取溶剂(乙醇)的浓度选取
1、取柿蒂茎叶干燥粉碎后的粉末10g，室温下以纯水100ml浸渍并超声提取2次，每次60min(500W)，过滤后合并滤液，减压回收溶剂至干，获得柿蒂粗提物；取所得柿蒂粗提物配制成0.05mg/ml的溶液备用。
2、取柿蒂茎叶干燥粉碎后的粉末10g，室温下以体积浓度30％的乙醇溶液100ml浸渍并超声提取2次，每次60min(500W)，过滤后合并滤液，减压回收溶剂至干，获得柿蒂粗提物；取所得柿蒂粗提物配制成0.05mg/ml的溶液备用。
3、取柿蒂茎叶干燥粉碎后的粉末10g，室温下以体积浓度60％的乙醇溶液100ml浸渍并超声提取2次，每次60min(500W)，过滤后合并滤液，减压回收溶剂至干，获得柿蒂粗提物；取所得柿蒂粗提物配制成0.05mg/ml的溶液备用。
4、取柿蒂茎叶干燥粉碎后的粉末10g，室温下以体积浓度95％的乙醇溶液100ml浸渍并超声提取2次，每次60min(500W)，过滤后合并滤液，减压回收溶剂至干，获得柿蒂粗提物；取所得柿蒂粗提物配制成0.05mg/ml的溶液备用。
将上述4种配制好的溶液分别进行自由基清除作用的试验。
试验原理：根据DPPH自由基有单电子，在517nm处有一强吸收，其醇溶液呈紫色的特性，当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受的电子数量成定量关系，因而可用分光光度计进行快速的定量研究，来检测自由基清除情况，从而判断样品是否具有抗氧化能力。
试验方法：分别将待测样品溶液2ml加入试管中，再加入2ml 76μmol/L DPPH乙醇溶液，混匀，室温下避光在黑暗处反应60min。在525nm处测定吸光度Abs。每个待测样品重复三次，取平均值作为拟合数据，以保证实验结果的准确性。
清除率I(％)＝[1-(T-T0)/(C-C0)]×100％
式中：T0：2ml水或DMSO加2mlDPPH溶液的吸光度；
T：2ml样品液加2mlDPPH溶液的吸光度；
C0：2ml水或DMSO加2ml 95％乙醇的吸光度；
C：2ml样品液加2ml 95％乙醇的吸光度。
按照上面公式计算清除率。试验结果如表1所示：
表1
由上表可见，当采用60％体积浓度的乙醇溶液为提取溶剂时，柿蒂提取物的清除自由基活性最好。
实施例2：料液比的选取
1、取柿蒂茎叶干燥粉碎后的粉末10g，室温下以体积浓度60％的乙醇溶液80ml浸渍并超声提取2次，每次60min(500W)，过滤后合并滤液，减压回收溶剂至干，获得柿蒂粗提物；取所得柿蒂粗提物配制成0.05mg/ml的溶液备用。
2、取柿蒂茎叶干燥粉碎后的粉末10g，室温下以体积浓度60％的乙醇溶液100ml浸渍并超声提取2次，每次60min(500W)，过滤后合并滤液，减压回收溶剂至干，获得柿蒂粗提物；取所得柿蒂粗提物配制成0.05mg/ml的溶液备用。
3、取柿蒂茎叶干燥粉碎后的粉末10g，室温下以体积浓度60％的乙醇溶液120ml浸渍并超声提取2次，每次60min(500W)，过滤后合并滤液，减压回收溶剂至干，获得柿蒂粗提物；取所得柿蒂粗提物配制成0.05mg/ml的溶液备用。
4、取柿蒂茎叶干燥粉碎后的粉末10g，室温下以体积浓度60％的乙醇溶液150ml浸渍并超声提取2次，每次60min(500W)，过滤后合并滤液，减压回收溶剂至干，获得柿蒂粗提物；取所得柿蒂粗提物配制成0.05mg/ml的溶液备用。
将上述4种配制好的溶液分别进行自由基清除作用的试验，试验方法同上。试验结果如表2所示：
表2
由上表可见，当采用60％体积浓度的乙醇溶液为提取溶剂且料液比为1:12时，柿蒂提取物的清除自由基活性最好。
实施例3：柿蒂提取物的制备
柿蒂粗提物的制备：取柿蒂茎叶干燥粉碎后的粉末10g，室温下以体积浓度60％的乙醇溶液120ml浸渍并超声提取2次，每次60min(500W)，过滤后合并滤液，减压回收溶剂至干，获得柿蒂粗提物，用于功效研究。
柿蒂活性富集提取物的制备：取柿蒂茎叶干燥粉碎后的粉末100g，室温下以体积浓度60％的乙醇溶液1200ml浸渍并超声提取2次，每次60min(500W)，合并滤液(约2200ml)，减压回收溶剂至无醇味，过D101树脂，依次以30％乙醇，60％乙醇和90％乙醇洗脱，分别收集各流份(各约400ml)，蒸干，分别得到柿蒂30％乙醇洗脱部位(10.7g)、柿蒂60％乙醇洗脱部位(3.9g)和柿蒂90％乙醇洗脱部位(1.5g)，用于功效研究。
实施例4：柿蒂提取物的自由基清除作用研究
将实施例3制备的柿蒂的粗提物、30％乙醇洗脱部位、60％乙醇洗脱部位和90％乙醇洗脱部位分别进行自由基清除作用的试验，试验方法同上。试验结果如表3所示：
表3
由上表可见，柿蒂的各种提取物对自由基均具有很好的清除自由基的作用，尤其是60％乙醇洗脱部位对自由基的清除作用最好。
实施例5：柿蒂提取物的弹性蛋白酶抑制作用研究
试验方法按照文献(Am.J.Pharmacol.Toxicol.,2009,4,127-129)中的方法进行，步骤为：在96孔板中加入10uL样品溶液和130uL含有1.015mM反应底物Succ-Ala-Ala-Ala-p-硝基酰替苯胺的0.1M Tris-Cl缓冲溶液(PH＝8.0)，在25℃下温育5分钟，加入15uL弹性蛋白酶溶液(0.5U/ml)，继续在25℃下温育60min，然后用酶标仪测定410nm波长的吸光度。用去离子水替换样品水溶液，作为参比溶液，测定吸光度，通过与对照组的比较得到样品组的相对抑制率。试验结果见表4：
表4
由上表可见，柿蒂的各种提取物对弹性蛋白酶均具有很好的抑制作用，尤其是60％乙醇洗脱部位对弹性蛋白酶的抑制作用最好。
实施例6：柿蒂提取物的酪氨酸酶抑制作用研究
试验方法：在样品管和样品对照管中各加入1ml不同浓度的样品溶液，阳性和阴性对照管以磷酸缓冲液代替。在样品管和阳性对照管中加入0.5ml酪氨酸酶溶液(酶活单位125μ/ml)，样品对照和阴性对照管以0.5ml磷酸缓冲液(pH＝6.8)代替，振摇所有试管，使样品和酪氨酸酶充分混匀，37℃水槽孵育10分钟，加入2ml的0.03wt％酪氨酸溶液，反应10分钟，即刻在475nm处测定吸光度。
抑制率I(％)＝[1-(T-T0)/(C-C0)]×100％
式中：T0：样品溶剂对照；
T：样品对照；
C：阳性对照；
C0：阳性对照溶剂对照。
试验结果如表5所示：
表5
由上表可见，柿蒂的各种提取物对酪氨酸酶均具有很好的抑制作用，尤其是60％乙醇洗脱部位对酪氨酸酶的抑制作用最好。
实施例7：柿蒂提取物的总黄酮含量检测
移取样品和芦丁对照各1mL于10mL具塞试管中，加入1mL1％的三氯化铝/甲醇溶液，用甲醇定容，摇匀，放置15min。同法制备空白液。在200～500nm波长范围内进行扫描，记录紫外可见吸收光谱。样品最大吸收峰和芦丁最大吸收峰的重合度好，因此选择芦丁为测定时的标准品。扫描结果显示于355nm处进行总黄酮含量测定。检测结果如表6所示：
表6
由上表可见，柿蒂的各种提取物中均含有一定的总黄酮，其中60％乙醇洗脱部位中的总黄酮含量最高。