芳香硝基乙烯类化合物的用途的制作方法

本申请涉及医药领域和生物领域。具体地，本申请涉及芳香硝基乙烯类化合物的用途。本申请还涉及如式i所示化合物的用途。本申请还涉及如式i所示化合物用于制备预防或治疗与核受体rxrα相关的疾病(如白血病，尤其是急性早幼粒细胞白血病)的药物中的用途。

背景技术：

急性早幼粒细胞白血病(acutepromyelocyticleukemia，apl)是髓细胞白血病的一种亚型，为急性髓细胞白血病m3型，约占急性髓细胞白血病的15％。该类白血病临床表现凶险，发病和治疗过程中容易出现大出血而导致死亡。apl主要是由染色体易位所引起的一种白血病。世界卫生组织要求诊断apl必须确定存在t(15；17)(q22；q21)pml/rarα；t(11；17)(q23；q21)plzf/rarα；t(11；17)(q13；q21)numa/rarα；t(5；17)(q35；q21)npm/rarα等的一种染色体的转位异常。因此，apl的发生主要是源于一些基因同视黄酸受体rarα(retinoicacidreceptoralpha)基因的融合。目前已确定与rarα融合的基因至少有5种不同的基因，分别是pml、plzf、npm、numa、stat5b。其中pml/rarα在所有导致apl的融合基因中占到了95％以上的比例。

在apl中，位于15号染色体的pml基因和位于17号染色体的rarα基因通过染色体转位形成pml/rarα融合基因。其对应的pml/rarα融合蛋白的产生既影响了pml蛋白的功能，也影响了rarα蛋白的功能。在体内pml/rarα的表达显著地增强了髓系祖细胞的自我更新能力，这主要是通过其竞争性结合rarα的dna响应元件，进而抑制rarα所诱导的分化基因的转录。除了可以改变细胞内诸多rarα依赖的基因转录活性，pml/rarα还可以通过介入pml调控的信号通路发挥凋亡抑制作用。另外，pml/rarα通过与pml形成异源二聚体导致pml核小体形成紊乱。因此，激活pml-rarα的转录活性和/或清除pml-rarα蛋白是可行而有效的治疗apl的手段。

目前临床上用于治疗apl的靶向药物主要为atra(all-transretinoidacid)和三氧化二砷(arsenic)。atra是维生素a的衍生物和rarα的转录激活型配体。atra治疗apl的机制主要是诱导apl细胞的终末分化。它通过与pml-rarα融合蛋白的rarα区域结合，一方面可以诱使pml-rarα上调具有分化功能的基因转录，另一方面可以降解pml-rarα融合蛋白，破坏pml-rarα复合物，进而诱导apl细胞的分化成熟。另外，atra联合化疗药的应用，可以使患者的完全缓解率(cr)达到90％。而arsenic能同pml-rarα融合蛋白的pml区域结合，进而诱导pml-rarα融合蛋白的降解。同时，arsenic能够激活细胞中的一些凋亡通路进而诱导apl细胞凋亡。目前，arsenic被认为是比atra更有效的治疗apl的药物，与atra不同，arsenic对apl细胞的诱导分化效应十分有限，其主要诱导apl细胞的凋亡。另外arsenic联合atra的治疗效果更佳。

虽然atra和arsenic能够对大部分的apl病人产生良好的治疗作用，但是它们在治疗apl中仍然存在着显著的局限性。其中一方面体现在atra和arsenic在临床治疗中所存在的严重的毒副作用，另一方面体现在临床上存在atra和arsenic抵抗的apl病人。研发新的具有不同治疗机制的抗apl的药物对于提高apl的治疗效果具有重要的价值。

类视黄醇x受体(retinoidxreceptor，rxr)，是核受体超家族中的重要成员，属非类固醇核受体，其参与了人体代谢、生长、发育、分化、死亡和免疫等几乎所有的生理调控，而其表达或功能异常与人体的许多疾病有关，比如肿瘤、代谢综合症、银屑病等。在正常机体中，rarα与rxrα形成异源二聚体，结合在其dna响应元件上，在生理浓度的rarα配体的刺激下启动分化基因的转录。apl中产生的pml/rarα，会自己形成同源二聚体，再与rxrα结合形成四聚体。这个四聚体也能结合到rarα的dna响应元件上，然后募集一些共抑制因子，生理浓度的rarα配体不足以刺激它启动分化基因的转录，一定程度上阻断了细胞的分化功能。此外，这个新的复合物还可以跟许多rarα-rxrα异源二聚不能有效识别的位点结合，发挥转录抑制作用。

z-10系列化合物是发明人团队发现的rxrα的一类芳香硝基乙烯类配体。在本申请中，发明人惊奇地发现其还具有抗apl的功效。

技术实现要素：

在本申请中，发明人通过大量的研究发现，如式i所示的化合物、其异构体、或药学上可接受的盐可调节rxrα的活性(例如转录活性)；此类化合物可抑制pml-rarα与rxrα的相互作用；此类化合物可选择性诱导pml-rarα融合蛋白的降解；此类化合物可诱导apl细胞的凋亡。因而本申请的化合物可用于治疗由t(15；17)(q22；q21)pml/rarα染色体易位引起的急性早幼粒细胞白血病。

因此，在一个方面，本申请涉及式i所示化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐的用途，其用于调节核受体rxrα的活性(例如转录活性)，或者用于制备调节核受体rxrα的活性(例如转录活性)的药物：

其中，

r1、r2、r3、r4、r5、r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c40直链或直链烷基、c1-c40烷氧基、c1-c40烷氨基、c3-c40环烷基、c6-c50芳基、c3-c50杂环烷基或c5-c50杂芳基；或者，

r3、r4、r5、r6和r7中任意相邻的两个取代基形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c40直链或直链烷基、c1-c40烷氧基、c1-c40烷氨基、c3-c40环烷基、c6-c50芳基、c3-c50杂环烷基和c5-c50杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r1和r2均为h。

在本申请的某些优选实施方案中，r5为h。

在本申请的某些优选实施方案中，r3和r4与相连的碳原子形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基、c1-c10烷氨基、c3-c8环烷基、c6-c14芳基、c3-c8杂环烷基和c5-c14杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r3和r4与相连的碳原子形成苯环，其中，所述苯环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c6直链或直链烷基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷氨基、c3-c6环烷基、c6-c14芳基、c3-c6杂环烷基和c5-c14杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r3和r4与相连的碳原子形成苯环。

在本申请的某些优选实施方案中，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基或c1-c10烷氨基；或者，

r6和r7与相连的碳原子形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基、c1-c10烷氨基、c3-c8环烷基、c6-c14芳基、c3-c8杂环烷基和c5-c14杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c6直链或直链烷基、c1-c6烷氧基或c1-c6烷氨基。

在本申请的某些优选实施方案中，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c4直链或直链烷基或c1-c4烷氧基。

在本申请的某些优选实施方案中，所述化合物选自：

在本申请的某些优选实施方案中，所述化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐用于在体内、体外或离体抑制rxrα的活性(例如转录活性)。

在本申请的某些优选实施方案中，所述化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐用于抑制rxrα在细胞中的活性(例如转录活性)。

在本申请的某些优选实施方案中，所述细胞表达rxrα和pml-rarα。

在本申请的某些优选实施方案中，所述细胞为存在t(15；17)(q22；q21)pml/rarα染色体易位的早幼粒细胞(例如白血病细胞，例如急性早幼粒细胞白血病细胞)。

在本申请的某些优选实施方案中，所述细胞选自nb4、nb4-lr1和nb4-lr2。

在另一个方面，本申请涉及式i所示化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐的用途，其用于抑制pml-rarα与rxrα相互作用，或者用于制备抑制pml-rarα与rxrα相互作用的药物：

其中，

r1、r2、r3、r4、r5、r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c40直链或直链烷基、c1-c40烷氧基、c1-c40烷氨基、c3-c40环烷基、c6-c50芳基、c3-c50杂环烷基或c5-c50杂芳基；或者，

r3、r4、r5、r6和r7中任意相邻的两个取代基形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c40直链或直链烷基、c1-c40烷氧基、c1-c40烷氨基、c3-c40环烷基、c6-c50芳基、c3-c50杂环烷基和c5-c50杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r1和r2均为h。

在本申请的某些优选实施方案中，r5为h。

在本申请的某些优选实施方案中，r3和r4与相连的碳原子形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基、c1-c10烷氨基、c3-c8环烷基、c6-c14芳基、c3-c8杂环烷基和c5-c14杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r3和r4与相连的碳原子形成苯环，其中，所述苯环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c6直链或直链烷基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷氨基、c3-c6环烷基、c6-c14芳基、c3-c6杂环烷基和c5-c14杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r3和r4与相连的碳原子形成苯环。

在本申请的某些优选实施方案中，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基或c1-c10烷氨基；或者，

r6和r7与相连的碳原子形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基、c1-c10烷氨基、c3-c8环烷基、c6-c14芳基、c3-c8杂环烷基和c5-c14杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c6直链或直链烷基、c1-c6烷氧基或c1-c6烷氨基。

在本申请的某些优选实施方案中，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c4直链或直链烷基或c1-c4烷氧基。

在本申请的某些优选实施方案中，所述化合物选自：

在本申请的某些优选实施方案中，所述化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐在体内、体外或离体抑制pml-rarα与rxrα相互作用。

在本申请的某些优选实施方案中，所述化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐抑制细胞中pml-rarα与rxrα的相互作用。

在本申请的某些优选实施方案中，所述细胞表达rxrα和pml-rarα。

在本申请的某些优选实施方案中，所述细胞为存在t(15；17)(q22；q21)pml/rarα染色体易位的早幼粒细胞(例如白血病细胞，例如急性早幼粒细胞白血病细胞)。

在本申请的某些优选实施方案中，所述细胞选自nb4、nb4-lr1和nb4-lr2。

在另一个方面，本申请涉及式i所示化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐的用途，其用于诱导pml-rarα的降解，或者用于制备诱导pml-rarα降解的药物：

其中，

r1、r2、r3、r4、r5、r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c40直链或直链烷基、c1-c40烷氧基、c1-c40烷氨基、c3-c40环烷基、c6-c50芳基、c3-c50杂环烷基或c5-c50杂芳基；或者，

r3、r4、r5、r6和r7中任意相邻的两个取代基形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c40直链或直链烷基、c1-c40烷氧基、c1-c40烷氨基、c3-c40环烷基、c6-c50芳基、c3-c50杂环烷基和c5-c50杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r1和r2均为h。

在本申请的某些优选实施方案中，r5为h。

在本申请的某些优选实施方案中，r3和r4与相连的碳原子形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基、c1-c10烷氨基、c3-c8环烷基、c6-c14芳基、c3-c8杂环烷基和c5-c14杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r3和r4与相连的碳原子形成苯环，其中，所述苯环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c6直链或直链烷基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷氨基、c3-c6环烷基、c6-c14芳基、c3-c6杂环烷基和c5-c14杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r3和r4与相连的碳原子形成苯环。

在本申请的某些优选实施方案中，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基或c1-c10烷氨基；或者，

r6和r7与相连的碳原子形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基、c1-c10烷氨基、c3-c8环烷基、c6-c14芳基、c3-c8杂环烷基和c5-c14杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c6直链或直链烷基、c1-c6烷氧基或c1-c6烷氨基。

在本申请的某些优选实施方案中，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c4直链或直链烷基或c1-c4烷氧基。

在本申请的某些优选实施方案中，所述化合物选自：

在本申请的某些优选实施方案中，所述化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐用于在体内、体外或离体诱导pml-rarα降解。

在本申请的某些优选实施方案中，所述化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐诱导细胞中pml-rarα降解。

在本申请的某些优选实施方案中，所述细胞表达rxrα和pml-rarα。

在本申请的某些优选实施方案中，所述细胞为存在t(15；17)(q22；q21)pml/rarα染色体易位的早幼粒细胞(例如白血病细胞，例如急性早幼粒细胞白血病细胞)。

在本申请的某些优选实施方案中，所述细胞选自nb4、nb4-lr1和nb4-lr2。

在另一个方面，本申请涉及式i所示化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐的用途，其用于诱导白血病细胞凋亡，或用于制备诱导白血病细胞凋亡的试剂：

其中，

r1、r2、r3、r4、r5、r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c40直链或直链烷基、c1-c40烷氧基、c1-c40烷氨基、c3-c40环烷基、c6-c50芳基、c3-c50杂环烷基或c5-c50杂芳基；或者，

r3、r4、r5、r6和r7中任意相邻的两个取代基形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c40直链或直链烷基、c1-c40烷氧基、c1-c40烷氨基、c3-c40环烷基、c6-c50芳基、c3-c50杂环烷基和c5-c50杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r1和r2均为h。

在本申请的某些优选实施方案中，r5为h。

在本申请的某些优选实施方案中，r3和r4与相连的碳原子形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基、c1-c10烷氨基、c3-c8环烷基、c6-c14芳基、c3-c8杂环烷基和c5-c14杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r3和r4与相连的碳原子形成苯环，其中，所述苯环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c6直链或直链烷基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷氨基、c3-c6环烷基、c6-c14芳基、c3-c6杂环烷基和c5-c14杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r3和r4与相连的碳原子形成苯环。

在本申请的某些优选实施方案中，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基或c1-c10烷氨基；或者，

r6和r7与相连的碳原子形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基、c1-c10烷氨基、c3-c8环烷基、c6-c14芳基、c3-c8杂环烷基和c5-c14杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c6直链或直链烷基、c1-c6烷氧基或c1-c6烷氨基。

在本申请的某些优选实施方案中，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c4直链或直链烷基或c1-c4烷氧基。

在本申请的某些优选实施方案中，所述化合物选自：

在本申请的某些优选实施方案中，所述白血病细胞为急性早幼粒细胞白血病细胞。

在本申请的某些优选实施方案中，所述急性早幼粒细胞白血病细胞为存在t(15；17)(q22；q21)pml/rarα染色体易位的急性早幼粒细胞白血病细胞。

在本申请的某些优选实施方案中，所述白血病细胞选自nb4、nb4-lr1和nb4-lr2。

在另一个方面，本申请涉及式i所示化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐在制备预防或治疗与rxrα相关的疾病的药物中的用途：

其中，

r1、r2、r3、r4、r5、r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c40直链或直链烷基、c1-c40烷氧基、c1-c40烷氨基、c3-c40环烷基、c6-c50芳基、c3-c50杂环烷基或c5-c50杂芳基；或者，

r3、r4、r5、r6和r7中任意相邻的两个取代基形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c40直链或直链烷基、c1-c40烷氧基、c1-c40烷氨基、c3-c40环烷基、c6-c50芳基、c3-c50杂环烷基和c5-c50杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r1和r2均为h。

在本申请的某些优选实施方案中，r5为h。

在本申请的某些优选实施方案中，r3和r4与相连的碳原子形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基、c1-c10烷氨基、c3-c8环烷基、c6-c14芳基、c3-c8杂环烷基和c5-c14杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r3和r4与相连的碳原子形成苯环，其中，所述苯环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c6直链或直链烷基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷氨基、c3-c6环烷基、c6-c14芳基、c3-c6杂环烷基和c5-c14杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r3和r4与相连的碳原子形成苯环。

在本申请的某些优选实施方案中，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基或c1-c10烷氨基；或者，

r6和r7与相连的碳原子形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基、c1-c10烷氨基、c3-c8环烷基、c6-c14芳基、c3-c8杂环烷基和c5-c14杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c6直链或直链烷基、c1-c6烷氧基或c1-c6烷氨基。

在本申请的某些优选实施方案中，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c4直链或直链烷基或c1-c4烷氧基。

在本申请的某些优选实施方案中，所述化合物选自：

在本申请的某些优选实施方案中，所述与rxrα相关的疾病为白血病。

在本申请的某些优选实施方案中，所述白血病为急性早幼粒细胞白血病。

在本申请的某些优选实施方案中，所述白血病为由t(15；17)(q22；q21)pml/rarα染色体易位引起的急性早幼粒细胞白血病。

在另一个方面，本申请涉及一种调节细胞中核受体rxrα活性(例如转录活性)的方法，其包括，给有此需要的细胞施用有效量的式i所示化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐：

其中，

r1、r2、r3、r4、r5、r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c40直链或直链烷基、c1-c40烷氧基、c1-c40烷氨基、c3-c40环烷基、c6-c50芳基、c3-c50杂环烷基或c5-c50杂芳基；或者，

r3、r4、r5、r6和r7中任意相邻的两个取代基形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c40直链或直链烷基、c1-c40烷氧基、c1-c40烷氨基、c3-c40环烷基、c6-c50芳基、c3-c50杂环烷基和c5-c50杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r1和r2均为h。

在本申请的某些优选实施方案中，r5为h。

在本申请的某些优选实施方案中，r3和r4与相连的碳原子形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基、c1-c10烷氨基、c3-c8环烷基、c6-c14芳基、c3-c8杂环烷基和c5-c14杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r3和r4与相连的碳原子形成苯环，其中，所述苯环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c6直链或直链烷基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷氨基、c3-c6环烷基、c6-c14芳基、c3-c6杂环烷基和c5-c14杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r3和r4与相连的碳原子形成苯环。

在本申请的某些优选实施方案中，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基或c1-c10烷氨基；或者，

r6和r7与相连的碳原子形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基、c1-c10烷氨基、c3-c8环烷基、c6-c14芳基、c3-c8杂环烷基和c5-c14杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c6直链或直链烷基、c1-c6烷氧基或c1-c6烷氨基。

在本申请的某些优选实施方案中，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c4直链或直链烷基或c1-c4烷氧基。

在本申请的某些优选实施方案中，所述化合物选自：

在本申请的某些优选实施方案中，所述方法用于在体内、体外或离体抑制rxrα在细胞中的转录活性。

在本申请的某些优选实施方案中，所述细胞表达rxrα和pml-rarα。

在本申请的某些优选实施方案中，所述细胞为存在t(15；17)(q22；q21)pml/rarα染色体易位的早幼粒细胞(例如白血病细胞，例如急性早幼粒白血病细胞)。

在本申请的某些优选实施方案中，所述细胞选自nb4、nb4-lr1和nb4-lr2。

在另一个方面，本申请一种抑制细胞中pml-rarα与rxrα相互作用的方法，其包括，给有此需要的细胞施用有效量的式i所示化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐：

其中，

r1、r2、r3、r4、r5、r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c40直链或直链烷基、c1-c40烷氧基、c1-c40烷氨基、c3-c40环烷基、c6-c50芳基、c3-c50杂环烷基或c5-c50杂芳基；或者，

r3、r4、r5、r6和r7中任意相邻的两个取代基形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c40直链或直链烷基、c1-c40烷氧基、c1-c40烷氨基、c3-c40环烷基、c6-c50芳基、c3-c50杂环烷基和c5-c50杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r1和r2均为h。

在本申请的某些优选实施方案中，r5为h。

在本申请的某些优选实施方案中，r3和r4与相连的碳原子形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基、c1-c10烷氨基、c3-c8环烷基、c6-c14芳基、c3-c8杂环烷基和c5-c14杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r3和r4与相连的碳原子形成苯环，其中，所述苯环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c6直链或直链烷基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷氨基、c3-c6环烷基、c6-c14芳基、c3-c6杂环烷基和c5-c14杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r3和r4与相连的碳原子形成苯环。

在本申请的某些优选实施方案中，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基或c1-c10烷氨基；或者，

r6和r7与相连的碳原子形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基、c1-c10烷氨基、c3-c8环烷基、c6-c14芳基、c3-c8杂环烷基和c5-c14杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c6直链或直链烷基、c1-c6烷氧基或c1-c6烷氨基。

在本申请的某些优选实施方案中，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c4直链或直链烷基或c1-c4烷氧基。

在本申请的某些优选实施方案中，所述化合物选自：

在本申请的某些优选实施方案中，所述方法在体内、体外或离体抑制细胞中pml-rarα与rxrα相互作用。

在本申请的某些优选实施方案中，所述细胞表达rxrα和pml-rarα。

在本申请的某些优选实施方案中，所述细胞为存在t(15；17)(q22；q21)pml/rarα染色体易位的早幼粒细胞(例如白血病细胞，例如急性早幼粒细胞白血病细胞)。

在本申请的某些优选实施方案中，所述细胞选自nb4、nb4-lr1和nb4-lr2。

在另一方面，本申请涉及一种诱导细胞中pml-rarα降解的方法，其包括，给有此需要的细胞施用有效量的式i所示化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐：

其中，

r1、r2、r3、r4、r5、r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c40直链或直链烷基、c1-c40烷氧基、c1-c40烷氨基、c3-c40环烷基、c6-c50芳基、c3-c50杂环烷基或c5-c50杂芳基；或者，

r3、r4、r5、r6和r7中任意相邻的两个取代基形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c40直链或直链烷基、c1-c40烷氧基、c1-c40烷氨基、c3-c40环烷基、c6-c50芳基、c3-c50杂环烷基和c5-c50杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r1和r2均为h。

在本申请的某些优选实施方案中，r5为h。

在本申请的某些优选实施方案中，r3和r4与相连的碳原子形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基、c1-c10烷氨基、c3-c8环烷基、c6-c14芳基、c3-c8杂环烷基和c5-c14杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r3和r4与相连的碳原子形成苯环，其中，所述苯环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c6直链或直链烷基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷氨基、c3-c6环烷基、c6-c14芳基、c3-c6杂环烷基和c5-c14杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r3和r4与相连的碳原子形成苯环。

在本申请的某些优选实施方案中，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基或c1-c10烷氨基；或者，

r6和r7与相连的碳原子形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基、c1-c10烷氨基、c3-c8环烷基、c6-c14芳基、c3-c8杂环烷基和c5-c14杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c6直链或直链烷基、c1-c6烷氧基或c1-c6烷氨基。

在本申请的某些优选实施方案中，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c4直链或直链烷基或c1-c4烷氧基。

在本申请的某些优选实施方案中，所述化合物选自：

在本申请的某些优选实施方案中，所述方法在体内、体外或离体诱导细胞中pml-rarα的降解。

在本申请的某些优选实施方案中，所述细胞表达rxrα和pml-rarα。

在本申请的某些优选实施方案中，所述细胞为存在t(15；17)(q22；q21)pml/rarα染色体易位的早幼粒细胞(例如白血病细胞，例如急性早幼粒细胞白血病细胞)。

在本申请的某些优选实施方案中，所述细胞选自nb4、nb4-lr1和nb4-lr2。

在另一个方面，本申请一种诱导白血病细胞凋亡的方法，其包括，给有此需要的细胞施用有效量的式i所示化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐：

其中，

r1、r2、r3、r4、r5、r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c40直链或直链烷基、c1-c40烷氧基、c1-c40烷氨基、c3-c40环烷基、c6-c50芳基、c3-c50杂环烷基或c5-c50杂芳基；或者，

r3、r4、r5、r6和r7中任意相邻的两个取代基形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c40直链或直链烷基、c1-c40烷氧基、c1-c40烷氨基、c3-c40环烷基、c6-c50芳基、c3-c50杂环烷基和c5-c50杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r1和r2均为h。

在本申请的某些优选实施方案中，r5为h。

在本申请的某些优选实施方案中，r3和r4与相连的碳原子形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基、c1-c10烷氨基、c3-c8环烷基、c6-c14芳基、c3-c8杂环烷基和c5-c14杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r3和r4与相连的碳原子形成苯环，其中，所述苯环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c6直链或直链烷基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷氨基、c3-c6环烷基、c6-c14芳基、c3-c6杂环烷基和c5-c14杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r3和r4与相连的碳原子形成苯环。

在本申请的某些优选实施方案中，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基或c1-c10烷氨基；或者，

r6和r7与相连的碳原子形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基、c1-c10烷氨基、c3-c8环烷基、c6-c14芳基、c3-c8杂环烷基和c5-c14杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c6直链或直链烷基、c1-c6烷氧基或c1-c6烷氨基。

在本申请的某些优选实施方案中，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c4直链或直链烷基或c1-c4烷氧基。

在本申请的某些优选实施方案中，所述化合物选自：

在本申请的某些优选实施方案中，所述白血病细胞为急性早幼粒细胞白血病细胞。

在本申请的某些优选实施方案中，所述急性早幼粒细胞白血病细胞为存在t(15；17)(q22；q21)pml/rarα染色体易位的急性早幼粒细胞白血病细胞。

在本申请的某些优选实施方案中，所述白血病细胞选自nb4、nb4-lr1和nb4-lr2。

在另一方面，本申请涉及一种预防或治疗与rxrα相关的疾病的方法，其包括，给有此需要的受试者施用有效量的式i所示的化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐：

其中，

r1、r2、r3、r4、r5、r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c40直链或直链烷基、c1-c40烷氧基、c1-c40烷氨基、c3-c40环烷基、c6-c50芳基、c3-c50杂环烷基或c5-c50杂芳基；或者，

r3、r4、r5、r6和r7中任意相邻的两个取代基形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c40直链或直链烷基、c1-c40烷氧基、c1-c40烷氨基、c3-c40环烷基、c6-c50芳基、c3-c50杂环烷基和c5-c50杂芳基。

在本申请的某些优选实施方案中，r1和r2均为h。

在本申请的某些优选实施方案中，r5为h。

在本申请的某些优选实施方案中，r3和r4与相连的碳原子形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基、c1-c10烷氨基、c3-c8环烷基、c6-c14芳基、c3-c8杂环烷基和c5-c14杂芳基；

进一步优选地，r3和r4与相连的碳原子形成苯环，其中，所述苯环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c6直链或直链烷基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷氨基、c3-c6环烷基、c6-c14芳基、c3-c6杂环烷基和c5-c14杂芳基；

进一步优选地，r3和r4与相连的碳原子形成苯环。

在本申请的某些优选实施方案中，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基或c1-c10烷氨基；或者，

r6和r7与相连的碳原子形成苯环或5-6元杂芳环，其中，所述苯环或5-6元杂芳环未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代：卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c10直链或直链烷基、c1-c10烷氧基、c1-c10烷氨基、c3-c8环烷基、c6-c14芳基、c3-c8杂环烷基和c5-c14杂芳基；

进一步优选地，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c6直链或直链烷基、c1-c6烷氧基或c1-c6烷氨基；

进一步优选地，r6和r7各自独立地为h、卤素、硝基、氨基、羧基、羟基、c1-c4直链或直链烷基或c1-c4烷氧基。

在本申请的某些优选实施方案中，所述化合物选自：

在本申请的某些优选实施方案中，所述与rxrα相关的疾病为白血病。

在本申请的某些优选实施方案中，所述白血病为急性早幼粒细胞白血病。

在本申请的某些优选实施方案中，所述白血病为由t(15；17)(q22；q21)pml/rarα染色体易位引起的急性早幼粒细胞白血病。

在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的细胞学、生物化学、分子生物学、蛋白质化学、核酸化学、化学生物学、免疫学实验操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。

本文中所用术语“立体异构体”包括构象异构体和构型异构体，其中所述构型异构体主要包括顺反异构体和旋光异构体。本申请所述化合物可以以立体异构体的形式存在，并因此涵盖所有可能的立体异构体形式，及其任何组合或任何混合物。例如单一对映异构体，单一非对映异构体或以上的混合物。当本申请所述的化合物含有烯烃双键时，除非特别说明，否则其包括顺式异构体和反式异构体，以及其任何组合。

本文中所用术语“药学上可接受的盐”是指，(1)本申请化合物中存在的酸性官能团(例如-cooh、-oh、-so3h等)与适当的无机或者有机阳离子(碱)形成的盐，例如本申请化合物与碱金属或碱土金属形成的盐、本申请化合物的铵盐，和本申请化合物与含氮有机碱形成的盐；以及(2)本申请化合物中存在的碱性官能团(例如-nh2等)与适当的无机或者有机阴离子(酸)形成的盐，例如本申请化合物与无机酸或有机羧酸形成的盐。

因此，本申请化合物的“药学上可接受的盐”包括但不限于，碱金属盐，如钠盐、钾盐、锂盐等；碱土金属盐，如钙盐、镁盐等；其他金属盐，如铝盐、铁盐、锌盐、铜盐、镍盐、钴盐等；无机碱盐，如铵盐；有机碱盐，如叔辛基胺盐、二苄基胺盐、吗啉盐、葡糖胺盐、苯基甘氨酸烷基酯盐、乙二胺盐、n-甲基葡糖胺盐、胍盐、二乙胺盐、三乙胺盐、二环己基胺盐、n,n’-二苄基乙二胺盐、氯普鲁卡因盐、普鲁卡因盐、二乙醇胺盐、n-苄基-苯乙基胺盐、哌嗪盐、四甲基胺盐、三(羟甲基)氨基甲烷盐；氢卤酸盐，如氢氟酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐等；无机酸盐，如硝酸盐、高氯酸盐、硫酸盐、磷酸盐等；低级烷磺酸盐，如甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐、乙磺酸盐等；芳基磺酸盐，如苯磺酸盐、对苯磺酸盐等；有机酸盐，如醋酸盐、苹果酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、草酸盐、马来酸盐等；氨基酸盐，如甘氨酸盐、三甲基甘氨酸盐、精氨酸盐、鸟氨酸盐、谷氨酸盐、天冬氨酸盐等。

本文中所用术语“c1-c40直链或支链烷基”是指具有1-40个碳原子的直链或支链烷基，其与“c1-c40烷基”具有相同含义，例如c1-c20烷基、c1-c10烷基、c1-c6烷基、c1-c4烷基等。具体的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基等。

本文中所用术语“c1-c40烷氧基”是指以c1-c40烷基-o-方式形成的基团，其中“c1-c40烷基”的定义如前文所述。

本文中所用术语“c1-c40烷氨基”是指以c1-c40烷基-nh-方式形成的基团，其中“c1-c40烷基”的定义如前文所述。

本文中所用术语“c3-c40环烷基”是指含有3-40个环成员的单环饱和烷基，例如c3-c20环烷基、c3-c15环烷基、c3-c10环烷基、c3-c8环烷基、c3-c6环烷基等。具体的实例包括但不限于：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基等。

本文中所用术语“c6-c50芳基”是指含有6-50个环成员的单环、双环或多环芳香族基团，例如c6-c20芳基、c6-c14芳基等。具体的实例包括但不限于苯、萘、蒽、菲等。

本文中所用术语“c3-c50杂环烷基”是指含有3-50个环成员的环烷基，且1-10个(例如1、2、3或4个)环成员为选自n、o和s的杂原子，例如c3-c20杂环烷基、c3-c15杂环烷基、c3-c8杂环烷基、c3-c6杂环烷基、c3-c5杂环烷基等。具体的实例包括但不限于：环氧乙基、氧代环丁基、吡咯烷基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫吗啉基等。

本文中所用术语“c5-c50杂芳基”是指含有5-50个环成员的单环、双环或多环芳香族基团，且1-10个环成员(例如1、2、3或4个)为选自n、o和s的杂原子，例如c5-c20杂芳基、c5-c14杂芳基、c5-c10杂芳基、c5-c6杂芳基等。具体的实例包括但不限于呋喃基、噻吩基、吡咯基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、噁唑基、异噁唑基、咪唑基、吡唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、吡啶基、2-吡啶酮基、4-吡啶酮基、嘧啶基、2h-1,2-噁嗪基、4h-1,2-噁嗪基、6h-1,2-噁嗪基、4h-1,3-噁嗪基、6h-1,3-噁嗪基、4h-1,4-噁嗪基、哒嗪基、吡嗪基、1,2,3-三嗪基、1,3,5-三嗪基、1,2,4,5-四嗪基、氮杂环庚三烯基、1,3-二氮杂环庚三烯基、苯并呋喃基、苯并异呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、异吲哚、苯并噁唑基、苯并咪唑基、吲唑基、苯并三唑基、喹啉基、2-喹啉酮、4-喹啉酮、1-异喹啉酮、异喹啉基、吖啶基、菲啶基、苯并哒嗪基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、酚嗪基、喋啶基、嘌呤基、萘啶基、吩嗪、吩噻嗪等。

本文中所用术语“5-6元杂芳环”含有5个或6个环成员芳香杂环。具体的实例包括但不限于呋喃环、噻吩环、吡咯环、噻唑环、异噻唑环、噻二唑环、噁唑环、异噁唑环、咪唑环、吡唑环、1,2,3-三唑环、1,2,4-三唑环、1,2,3-噁二唑环、1,2,4-噁二唑环、1,2,5-噁二唑环、1,3,4-噁二唑环、吡啶环、2-吡啶酮环、4-吡啶酮环、嘧啶环、2h-1,2-噁嗪环、4h-1,2-噁嗪环、6h-1,2-噁嗪环、4h-1,3-噁嗪环、6h-1,3-噁嗪环、4h-1,4-噁嗪环、哒嗪环、吡嗪环、1,2,3-三嗪环、1,3,5-三嗪环、1,2,4,5-四嗪环等。

本文中所述pml-rarα质粒是指编码pml-rarα的质粒。

本文中所述myc-rxrα质粒是指编码带有myc标签的rxrα的质粒。

本文中所述ha-rxrα质粒是指编码带有ha标签的rxrα的质粒。

本文中所述myc-rarα质粒是指编码带有myc标签的rxrα的质粒。

本文中所述nb4细胞为一种pml/rar阳性的apl细胞。

本文中所述nb4-lr1和nb4-lr2细胞为atra抵抗的apl细胞。

发明的有益效果

本申请的发明人首次发现，如式i所示的化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐能够调节核受体rxrα的活性(例如转录活性)；此类化合物可抑制pml-rarα与rxrα的相互作用；此类化合物可诱导pml-rarα融合蛋白的降解；此类化合物可诱导apl细胞的凋亡。因而，本申请的化合物可用于治疗由t(15；17)(q22；q21)pml/rarα染色体易位引起的急性早幼粒细胞白血病。

附图说明

图1a显示本申请所述硝基乙烯类化合物的结构。

图1b显示流式细胞术测得的nb4细胞分化情况，图中红色曲线为dmso对照组，绿色曲线为化合物处理组；其中，nb4细胞分别经dmso，atra(1μm)，arsenic(1μm)和z-10(3μm)处理，抗cd11b的抗体标记。

图1c显示流式细胞术测得的nb4细胞凋亡情况；其中，nb4细胞分别经atra(1μm)，arsenic(1μm)或z-10(1μm、2μm或3μm)处理36小时，annexinv-fitc和propidiumiodide(pi)双染色标记。

图2a显示westernblot方法测得的nb4细胞中pml-rarα的表达情况；其中，nb4细胞分别经z-10(5μm)处理2h、4h或8h，抗rarα的抗体标记。

图2b显示westernblot方法测得的nb4细胞中pml-rarα的表达情况；其中，nb4细胞分别经2μm、4μm或8μm的z-10处理，抗rarα的抗体标记。

图2c显示westernblot方法测得的nb4细胞中pml-rarα的表达情况；其中，nb4细胞经cycloheximide(5μm)处理4h同时用z-10(5μm)处理2h或4h，抗rarα的抗体标记。

图2d显示westernblot方法测得的nb4细胞中pml-rarα的表达情况；其中，nb4细胞经z-10(5μm)和蛋白酶体抑制剂mg132(20μm)或caspase抑制剂z-vad-fmk共同处理4h，抗rarα的抗体标记。

图2e显示westernblot方法测得的nb4细胞中pml-rarα的表达情况；其中，nb4细胞分别经z-10(5μm)或z-11(5μm)处理4h，抗rarα的抗体标记。

图2f显示westernblot方法测得的nb4细胞中pml-rarα的表达情况；其中，nb4细胞分别经5μm的z-10、sr11237、lg100754、danthron、uvi3003或k-8003处理4h，抗rarα的抗体标记。

图3a显示westernblot方法测得的nb4细胞中pml-rarα、rarα、以及rxrα的表达情况；其中，nb4细胞经shrxrα慢病毒感染三天。

图3b显示免疫共沉淀法测得的cos7细胞中rxrα和pml-rarα的相互作用；其中，cos7细胞分别转染pml-rarα或myc-rxrα的表达质粒，24h后用z-10(5μm)处理4h。

图3c显示westernblot方法测得的cos7细胞中pml-rarα和rxrα的表达情况；其中，cos7细胞中分别转染pml-rarα或myc-rxrα的表达质粒，24h后分别用2μm、4μm、6μm、8μm和10μm的z-10处理4h。

图4a显示westernblot方法测得的nb4细胞中pml-rarα和rarα的表达情况；其中，nb4细胞分别经atra(1μm)、arsenic(1μm)或z-10(1μm或2μm)处理48小时。

图4b显示westernblot方法测得的cos7细胞中pml-rarα和rarα的表达情况；其中，cos7细胞分别用pml-rarα和ha-rxrα或myc-rarα和ha-rxrα表达质粒转染，24h后细胞经z-10(5μm)和sr11237(5μm)分别处理6h。

图4c显示免疫共沉淀方法测得的cos7细胞中pml-rarα和rxrα的相互作用；其中，cos7细胞分别用rarα和ha-rxrα或pml-rarα和ha-rxrα表达质粒转染，24h后细胞经z-10(5μm)处理4h。

图5a显示流式细胞术测得的nb4、nb4-lr1和nb4-lr2细胞的分化情况；其中，nb4、nb4-lr1和nb4-lr2细胞分别经atra(1μm)或1μm、2μm或3μm的z-10处理2天，经抗cd11b的抗体标记。

图5b显示westernblot方法测得的nb4和nb4-lr2细胞中pml-rarα的表达情况；其中，nb4和nb4-lr2细胞分别经z-10(1μm)或atra(1μm)处理48h。

图5c显示westernblot方法测得的nb4-lr1细胞和nb4-lr2细胞中pml-rarα的表达情况；其中，nb4-lr1细胞和nb4-lr2细胞分别经2μm、4μm、6μm、8μm和10μm的z-10处理4h。

图5d显示westernblot方法测得的nb4-lr1细胞和nb4-lr2细胞中pml-rarα的表达情况；其中，nb4-lr1细胞和nb4-lr2细胞经z-10(5μm)分别处理2h、4h和8h。

图5e显示westernblot方法测得的nb4-lr1细胞中pml-rarα和rarα的表达情况；其中，nb4-lr1细胞分别经atra(1μm)、arsenic(1μm)或z-10(1μm、2μm或3μm)处理48h。

图5f显示流式细胞术测得的nb4-lr1细胞和nb4-lr2细胞凋亡情况；其中，nb4-lr1细胞和nb4-lr2细胞分别经1μm、2μm或3μm的z-10处理36h，然后经annexinv-fitc和propidiumiodide(pi)双染色。

图6a显示westernblot方法测得的nb4细胞中pml-rarα的表达情况；其中，nb4细胞分别经5μm的z-10、z-36、z-37或z-38处理4h。

图6b显示流式细胞术测得的nb4细胞和nb4-lr1细胞凋亡情况；其中，nb4细胞和nb4-lr1细胞分别经1μm的z-10、z-36、z-37或z-38处理36h，然后经annexinv-fitc和propidiumiodide(pi)双染色。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。

除非特别指明，本发明中所使用的分子生物学实验方法和免疫检测法，基本上参照j.sambrook等人，分子克隆：实验室手册，第2版，冷泉港实验室出版社，1989，以及f.m.ausubel等人，精编分子生物学实验指南，第3版，johnwiley&sons,inc.，1995中所述的方法进行；限制性内切酶的使用依照产品制造商推荐的条件。本领域技术人员知晓，实施例以举例方式描述本发明，且不意欲限制本发明所要求保护的范围。

本申请中用到的部分细胞、质粒或试剂的来源如下所述：

急性早幼粒细胞白血病细胞株nb4、nb4-lr1和nb4-lr2来源于上海交通大学陈国强教授实验室；

非洲绿猴肾细胞株cos-7来源于美国atcc(americantypeculturecollection)；

大肠杆菌top10，购自碧云天公司；

芳香硝基乙烯类化合物来源于厦门大学药学院癌症中心化合物库；

pml-rarα质粒由上海交通大学朱军教授实验室赠予；

myc-rxrα，myc-rxrα-c432s，ha-rxrα，myc-rarα质粒由本实验室构建保存；

其他主要试剂来源如下：

实施例1.z-10诱导apl细胞分化和凋亡

1.nb4细胞(一种apl细胞)经dmso，atra(1μm)，arsenic(1μm)或z-10(3μm)分别处理两天，然后经抗cd11b的抗体标记，流式细胞仪计数，结果如图1b所示，图中红色曲线为dmso对照组，绿色曲线为化合物处理组。

图1b显示化合物atra、arsenic和z-10均能够诱导nb4细胞的分化。

2.nb4细胞分别经atra(1μm)，arsenic(1μm)或z-10(1μm、2μm或3μm)处理36小时，然后经annexinv-fitc和propidiumiodide(pi)双染色，通过流式细胞术进行分析，结果如图1c所示。

图1c显示：

(1)dmso组早期凋亡细胞以及晚期凋亡细胞的比例分别为2.82％和1.39％，相较之下，当化合物浓度为1μm时，atra组、arsenic组和z-10组早期凋亡细胞以及晚期凋亡细胞的比例分别为3.52％、1.24％；4.79％、2.59％；4.41％、3.66％。

以上数据说明，atra、arsenic和z-10均能诱导nb4细胞的凋亡，且z-10具有更为显著的诱导能力。

(2)当z-10为1μm时，z-10诱导细胞早期凋亡以及晚期凋亡的比例分别为4.41％、3.66％；

当z-10为2μm时，z-10诱导细胞早期凋亡以及晚期凋亡的比例分别为7.47％、7.24％；

当z-10为3μm时，z-10诱导细胞早期凋亡以及晚期凋亡的比例分别为17.95％、22.64％；

以上数据说明，z-10能够浓度依赖性的诱导nb4细胞的凋亡。

据此表明芳香硝基乙烯类化合物z-10能够诱导apl细胞的分化和凋亡。

实施例2.z-10能够诱导pml-rarα蛋白的切割和降解

1.nb4细胞经z-10(5μm)分别处理2h、4h或8h后，收集细胞裂解液并用抗rarα的抗体进行westernblot检测以确定pml-rarα的表达，结果如2a所示。

图2a显示nb4细胞经z-10处理后，随着时间的延长，pml-rarα的条带变浅，而pml-rarα切割片段的条带加深。由此说明z-10能够时间依赖的诱导pml-rarα的切割和降解。

2.nb4细胞分别经2μm、4μm或8μm的z-10处理4h后，收集细胞裂解液并用抗rarα的抗体进行westernblot检测以确定pml-rarα的表达，结果如2b所示。

图2b显示nb4细胞经z-10处理后，z-10浓度越大，pml-rarα的条带越浅，而pml-rarα切割片段的条带越深。由此说明z-10能够浓度依赖的诱导pml-rarα的切割和降解。

3.nb4细胞经cycloheximide(简写为chx)(5μm)处理4h同时用z-10(5μm)处理2h或4h后，收集细胞裂解液并用抗rarα的抗体进行westernblot检测以确定pml-rarα的表达，结果如图2c所示。

图2c显示经chx处理后，nb4细胞停止了蛋白的合成，而随着时间的延长，pml-rarα的条带变浅，pml-rarα切割片段的条带变深。由此说明z-10诱导pml-rarα降解主要通过pml-rarα翻译后的切割和降解途径。

4.nb4细胞经z-10(5μm)和蛋白酶体抑制剂mg132(20μm)或caspase抑制剂z-vad-fmk(20μm)共同处理4h后，收集细胞裂解液并进行westernblot检测以确定pml-rarα的表达，结果如图2d所示。

图2d显示，经mg132和z-10处理后，nb4细胞中pml-rarα以及pml-rarα切割片段的表达水平与只经z-10处理组相比无明显变化；而经z-vad-fmk和z-10处理后，nb4细胞中pml-rarα以及pml-rarα切割片段的表达水平相较于只经z-10处理组明显升高。由此说明，z-10诱导的pml-rarα切割和降解主要通过caspase介导的途径。

5.nb4细胞分别经z-10(5μm)或z-11(5μm)处理4h后，收集细胞裂解液并进行westernblot检测以确定pml-rarα的表达，结果如图2e所示。

图2e显示，与未经处理的nb4细胞相比，经z-10处理的nb4细胞中pml-rarα表达水平明显降低，而经z-1处理的nb4细胞中pml-rarα表达水平无明显变化。由此说明z-10的同分立体异构体z-11不具备诱导pml-rarα切割和降解的功能。

6.nb4细胞分别经5μm的z-10、sr11237(sr)、lg10075(lg)、danthron(da)、uvi3003(uvi)或k-8003(k3)处理4h后，收集细胞裂解液并进行westernblot检测以确定pml-rarα的表达，结果如图2f所示。

图2f显示，与未经处理的nb4细胞相比，经z-10处理的nb4细胞中pml-rarα表达水平明显降低，而经sr、lg、da、uvi或k3处理的nb4细胞中pml-rarα表达水平无明显变化或变化很小。由此说明，在同样的条件下，z-10诱导pml-rarα降解的能力高于rxrα的其他配体。

实施例1-2的结果说明，pml-rarα的降解会导致apl细胞的分化或凋亡。z-10能够诱导pml-rarα的显著性切割和降解，进而诱导apl细胞的分化和凋亡。同时z-10诱导pml-rarα的切割和降解在rxrα的配体中具有独特性。

实施例3.rxrα稳定pml-rarα，而z-10通过抑制rxrα和pml-rarα的相互作用诱导pml-rarα降解

1.nb4细胞经shrxrα慢病毒感染三天后，通过westernblot检测以确定各蛋白的表达，结果如图3a所示。

图3a显示，与对照组相比，当nb4细胞中rxrα的表达经shrxrα抑制后，pml-rarα和rarα的表达水平均明显降低。由此说明，rxrα能够稳定pml-rarα。

2.在cos7细胞中分别转染pml-rarα或pml-rarα和myc-rxrα的表达质粒，24h后用z-10(5μm)处理4h，然后收集细胞裂解液并用抗myc抗体免疫共沉淀检测以确定rxrα和pml-rarα的相互作用，结果如图3b所示。

图3b显示，在共转染pml-rarα和myc-rxrα的测试组中，沉淀复合物中同时检测到了pml-rarα和myc-rxrα，由此说明，rxrα和pml-rarα有很强的相互作用；而加入了z-10的测试组中，沉淀复合物中只检测到了myc-rxrα，由此说明，z-10可抑制pml-rarα和rxrα的相互作用。

由此说明，z-10通过抑制pml-rarα和rxrα的相互作用来降低pml-rarα的稳定性，从而诱导其降解。

3.在cos7细胞中分别转染pml-rarα或pml-rarα和myc-rxrα的表达质粒，24h后分别用2μm、4μm、6μm、8μm和10μm的z-10处理4h。然后收集细胞裂解液并用westernblot检测以确定蛋白的表达，结果如图3c所示。

图3c显示，当cos7细胞中未转染myc-rxrα的表达质粒，pml-rarα的表达量随着z-10浓度的增加而减少，而当转染myc-rxrα的表达质粒后，pml-rarα的表达量随z-10浓度增加而减少的程度有所降低。由此表明，在cos7细胞中增加rxrα的表达量能够部分挽救z-10诱导的pml-rarα降解。

综上，rxrα在nb4细胞中具有稳定pml-rarα的功能，芳香硝基乙烯化合物z-10能够破坏rxrα和pml-rarα的相互作用达到诱导pml-rarα降解的作用。

实施例4.z-10诱导pml-rarα降解但不影响rarα的稳定性

1.nb4细胞分别经atra(1μm)、arsenic(1μm)或z-10(1μm或2μm)处理48小时，然后收集细胞裂解液并用westernblot检测以确定pml-rarα和rarα的表达，结果如图4a所示。

图4a显示：

(1)与对照组相比，经atra处理的nb4细胞中，pml-rarα和rarα的表达量均有不同程度的减少；但是经arsenic和z-10处理的nb4细胞中pml-rarα的表达量降低明显，而rarα的表达量无明显变化。

(2)当z-10浓度为2μm时，nb4细胞中pml-rarα的表达量降低程度高于z-10浓度为1μm时。

由此说明，在nb4细胞中，atra诱导pml-rarα降解的同时，也诱导rarα的降解。但是z-10能够选择性的诱导pml-rarα的降解，对rarα的稳定性没有影响，且呈现浓度依赖特性。

2.分别用pml-rarα和ha-rxrα或myc-rarα和ha-rxrα表达质粒转染cos7细胞，24h后细胞经z-10(5μm)和sr11237(5μm)分别处理6h，然后收集细胞裂解液并用westernblot检测以确定pml-rarα和rarα的表达，结果如图4b所示。

图4b显示，在转染了pml-rarα和ha-rxrα的cos7细胞中，加入z-10可明显降低细胞中pml-rarα的表达量；而在转染了myc-rarα和ha-rxrα的cos7细胞中，加入z-10并不能明显降低细胞中rarα的表达量。由此说明，同样在cos7细胞中，z-10能够选择性的诱导过表达的pml-rarα但不是rarα的降解。

3.分别用rarα和ha-rxrα或pml-rarα和ha-rxrα表达质粒转染cos7细胞，24h后细胞经z-10(5μm)处理4h，然后收集细胞裂解液并用抗rxrα抗体免疫共沉淀检测以确定pml-rarα和rxrα的相互作用，结果如图4c所示。

图4c显示，共转染rarα和ha-rxrα，未加z-10的测试组中，免疫沉淀复合物中同时检测到了rarα和rxrα；加入z-10的测试组中，免疫沉淀复合物中同样能够检测到上述两种蛋白的存在；

共转染pml-rarα和ha-rxrα，未加z-10的测试组中，免疫沉淀复合物中同时检测到了pml-rarα和rxrα；加入z-10的测试组中，免疫沉淀复合物中pml-rarα的表达量明显减少；

由此说明，z-10可对pml-rarα选择性降解，这种机制在于z-10抑制pml-rarα同rxrα的相互作用，而对rarα和rxrα的相互作用没有抑制作用。

综上，与atra不同，z-10能够鉴别pml-rarα和rarα，并选择性的诱导pml-rarα降解。这表明z-10可能克服atra所引起的一些由于激活和降解rarα所导致的毒副作用。

实施例5.z-10诱导atra抵抗的apl细胞凋亡

1.nb4、nb4-lr1和nb4-lr2细胞分别经dmso、atra(1μm)或1μm、2μm或3μm的z-10处理2天，然后细胞经抗cd11b的抗体标记，并经流式细胞仪计数，结果见图5a，其中红色曲线为dmso对照组，绿色曲线为化合物处理组。

图5a显示atra只能诱导nb4细胞的分化，但是对nb4-lr1和nb4-lr2细胞没有分化诱导作用。z-10对nb4和nb4-lr2细胞具有较为明显的分化诱导作用，且呈现浓度依赖特性。

2.nb4和nb4-lr2细胞分别经z-10(1μm)或atra(1μm)处理48h，然后收集细胞裂解液并用westernblot检测以确定pml-rarα的表达，结果如图5b所示。

图5b显示，在经z-10处理的nb4或nb4-lr2细胞中，pml-rarα的表达水平均有明显下降；在经atra处理的nb4细胞中，pml-rarα的表达水平有明显下降；然而，在经atra处理的nb4-lr2细胞中，pml-rarα的表达水平无明显变化。由此说明，atra只能诱导nb4细胞中的pml-rarα降解，但是不能诱导nb4-lr1和nb4-lr2细胞中的pml-rarα降解。而z-10可对两株细胞中的pml-rarα都有降解诱导作用。

3.nb4-lr1细胞和nb4-lr2细胞分别经2μm、4μm、6μm、8μm和10μm的z-10处理4h，然后收集细胞裂解液并用westernblot检测以确定pml-rarα的表达，结果如图5c所示。

图5c显示，在经z-10处理的nb4-lr1细胞和nb4-lr2细胞中，pml-rarα的表达量随着z-10浓度的增加而降低。由此说明，z-10能够浓度依赖地诱导nb4-lr1细胞和nb4-lr2细胞中的pml-rarα切割和降解。

4.nb4-lr1细胞和nb4-lr2细胞经z-10(5μm)分别处理2h、4h和8h，然后收集细胞裂解液并用westernblot检测以确定pml-rarα的表达，结果如图5d所示。

图5d显示，在经z-10处理的nb4-lr1细胞和nb4-lr2细胞中，pml-rarα的表达量随着时间的延长而降低。由此说明，z-10能够时间依赖地诱导nb4-lr1细胞和nb4-lr2细胞中的pml-rarα降解。

5.nb4-lr1细胞分别经atra(1μm)、arsenic(1μm)或z-10(1μm、2μm或3μm)处理48h，然后收集细胞裂解液并用westernblot检测以确定pml-rarα和rarα的表达，结果如图5e所示。

图5e显示：

(1)在经atra处理的nb4-lr1细胞中，rarα的表达量明显降低，而pml-rarα的表达量无明显变化；

(2)在经arsenic处理的nb4-lr1细胞中，pml-rarα和rarα的表达量均明显减少；

(3)在经z-10处理的nb4-lr1细胞中，pml-rarα的表达量随着z-10浓度的增加而减少，而rarα的表达量无明显变化。

由此说明，atra不能显著性诱导nb4-lr1细胞中的pml-rarα降解，但是能显著性诱导rarα降解；而z-10能够显著性诱导nb4-lr1细胞中的pml-rarα降解，但是对rarα没有明显的作用。

6.nb4-lr1细胞和nb4-lr2细胞分别经1μm、2μm或3μm的z-10处理36h，细胞然后经annexinv-fitc和propidiumiodide(pi)双染色并通过流式细胞术进行分析，结果如图5f所示。

图5f显示：

(1)在nb4-lr1细胞中，dmso组早期凋亡和晚期凋亡的细胞比例分别为2.55％和1.25％；

在nb4-lr2细胞中，dmso组早期凋亡和晚期凋亡的细胞比例分别为1.99％和2.64％；

(2)在分别经1μm、2μm或3μmz-10处理的nb4-lr1细胞中，早期凋亡和晚期凋亡细胞的比例分别为，1μm组：3.46％、2.47％；2μm组：6.59％、6.56％；3μm组：11.37％、11.45％；

在分别经1μm、2μm或3μmz-10处理的nb4-lr2细胞中，早期凋亡和晚期凋亡细胞的比例分别为，1μm组：3.39％、6.95％；2μm组：7.52％、27.98％；3μm组：5.07％、70.85％；

由此说明，z-10能够显著性且浓度依赖的诱导nb4-lr1和nb4-lr2细胞凋亡。

综上，z-10能够诱导atra抵抗的nb4-lr1和nb4-lr2细胞的凋亡，具有在临床上治疗atra抵抗的apl的潜力。鉴于z-10的作用靶蛋白及其诱导pml-rarα的降解机制同三氧化二砷均不同，z-10应该具有同样诱导三氧化二砷抵抗的细胞凋亡。

实施例6.不同芳香硝基乙烯类化合物诱导apl细胞分化和凋亡活性分析

1.nb4细胞分别经5μm的z-10、z-36、z-37或z-38处理4h，然后收集细胞裂解液并用westernblot检测以确定pml-rarα的表达，结果如图6a所示。

图6a显示，经z-10、z-36、z-37或z-38处理的nb4细胞中，pml-rarα的表达量均有明显减少，其中，z-36组和z-38组减少更为明显。由此说明，在同样的条件下，z-36和z-38较z-10具有更强的诱导pml-rarα降解的能力，z-37和z-10具有相似的活性。

2.nb4细胞和nb4-lr1细胞分别经1μm的z-10、z-36、z-37或z-38处理36h，细胞然后经annexinv-fitc和propidiumiodide(pi)双染色并通过流式细胞术进行分析，结果如图6b所示。

图6b显示：

(1)在nb4细胞中，dmso组早期凋亡和晚期凋亡的细胞比例分别为3.60％和3.41％；

在nb4-lr1细胞中，dmso组早期凋亡和晚期凋亡的细胞比例分别为2.11％和1.99％；

(2)在经1μmz-10处理的nb4细胞中，早期凋亡和晚期凋亡细胞的比例分别为4.16％和5.12％；

在经1μmz-10处理的nb4-lr1细胞中，早期凋亡和晚期凋亡细胞的比例分别为2.86％和4.20％；

(3)在经1μmz-36处理的nb4细胞中，早期凋亡和晚期凋亡细胞的比例分别为14.36％和20.95％；

在经1μmz-36处理的nb4-lr1细胞中，早期凋亡和晚期凋亡细胞的比例分别为6.36％和19.21％；

(4)在经1μmz-37处理的nb4细胞中，早期凋亡和晚期凋亡细胞的比例分别为6.96％和6.94％；

在经1μmz-37处理的nb4-lr1细胞中，早期凋亡和晚期凋亡细胞的比例分别为3.11％和4.37％；

(5)在经1μmz-38处理的nb4细胞中，早期凋亡和晚期凋亡细胞的比例分别为13.61％和27.96％；

在经1μmz-38处理的nb4-lr1细胞中，早期凋亡和晚期凋亡细胞的比例分别为8.90％和27.92％；

由此说明，与诱导pml-rarα降解的能力相似，z-37和z-10在诱导nb4和nb4-lr1凋亡上具有相似性，而z-36和z-38具有更强的诱导nb4和nb4-lr1凋亡的能力。

综上，芳香硝基乙烯化合物具有治疗apl的活性，且可通过结构优化改善其性能。

尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，本领域技术人员将会理解：根据已经公开的所有教导，可以对那些细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。