本发明属于中医药制剂技术领域，具体涉及一种治疗真菌感染的复方外用制剂及其制备方法和应用。
背景技术：
浅部真菌病是由皮肤癣菌、病原酵母菌等致病真菌或条件致病真菌感染人体皮肤、毛发和甲板等浅表组织而引起的一组疾病，占皮肤感染性疾病之首。随着广谱抗生素、糖皮质激素的广泛应用，以及人员流动、环境变化，浅部真菌病发病率呈日益上升的趋势，且复发率可达15％，严重影响人类健康及生活。
外用抗真菌药物主要为以特比萘芬、布替萘芬为代表的丙烯胺类和以克霉唑、酮康唑、硝酸益康唑为代表的唑类药物。近年来由抗真菌药物与糖皮质激素组合制成的复方外用制剂在皮肤科领域面世，具有快速止痒及控制局部红斑丘疹等促进炎症反应改善的特点，主要针对伴有明显炎症反应的急性浅部真菌感染，也适用于继发真菌感染的皮炎湿疹类疾病，代表性药物为曲安奈德益康唑乳膏、复方克霉唑乳膏。该软膏剂易造成涂布不均，污染衣物，凝胶剂具有使用方便、清洁卫生、皮肤吸收好、稳定均一、剂型美观的特点。
技术实现要素：
特比萘芬能抑制单一的真菌酶——角鲨烯环氧酶，从而对真菌发挥抑杀效应，药效学研究结果表明国产和进口的特比萘芬抑菌作用相当，均优于酮康唑。特比萘芬通过广泛的肝脏代谢并主要从尿中清除(约80％)，总的血浆清除率为75％/h，血浆清除半衰期是11至16小时，其药代动力学在老年人和年轻人中相同。糠酸莫米为局部使用的糖皮质激素，具有抗炎、抗过敏等作用，其特点表现在作用强度增加而副作用不成比例地增加。盐酸特比萘芬和糠酸莫米松联合应用，制备的复方外用制剂，能很快穿透角质层，发挥抗菌、消炎作用，且不会造成皮肤和全身不良反应，应用较安全，值得临床推广使用。
本发明的目的在于公开了一种治疗真菌感染的复方外用制剂。
本发明的另一个目的在于公开了一种治疗真菌感染的复方外用制剂在制备治疗真菌感染药物中的应用。
本发明的第三个目的在于公开了一种治疗真菌感染的复方外用制剂的制备方法。
本发明第四个目的在于公开了上述制备方法制得的复方外用制剂在制备治疗真菌感染药物中的应用。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种治疗真菌感染的复方外用制剂，其中，所述复方外用制剂中由下列重量份的物质组成：盐酸特比萘芬50～150份、糠酸莫米松2.5～15份、卡波姆940NF 120～150份、三乙醇胺50～80份、乙醇2850～3050份、聚乙二醇-400 950～1050份、丙二醇1950～2050份、聚山梨酯80 300～400份、二甲基亚砜450～600份、乙二胺四乙酸二钠5～15份，蒸馏水2600～2800份。
根据上述技术方案所述的一种治疗真菌感染的复方外用制剂，其中，所述复方外用制剂中由下列重量的物质组成：盐酸特比萘芬100g、糠酸莫米松5g、卡波姆940NF 150g、三乙醇胺80g、乙醇3000g、聚乙二醇-400 1000g、丙二醇2025g、聚山梨酯80 400g、二甲基亚砜500g、乙二胺四乙酸二钠10g和蒸馏水2730g。
根据上述技术方案所述的一种治疗真菌感染的复方外用制剂的在制备治疗真菌感染药物中的应用。
一种治疗真菌感染的复方外用制剂的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：
(1)、称取上述技术方案所述的原料；
(2)、将聚乙二醇-400、丙二醇依次加入到卡波姆940NF中，搅匀；
(3)、将聚山梨酯80溶于2400ml蒸馏水中，混匀，并加至步骤(2)得到的液体中，搅拌均匀，溶胀过夜；
(4)、将三乙醇胺及乙二胺四乙酸二钠溶于330ml蒸馏水中加入步骤(3)得到的液体，搅匀，即得凝胶基质，备用；
(5)、称取乙醇重量份的30％的乙醇；将盐酸特比萘芬溶于重量为30％的乙醇中，逐渐加入步骤(4)得到的凝胶基质中，搅匀；
(6)、称取乙醇重量份的70％的乙醇；将糠酸莫米松溶于重量为70％的乙醇和二甲基亚砜中，逐渐加入步骤(5)得到的产物中搅匀，即得一种治疗真菌感染的复方外用制剂。
根据上述技术方案所述的制备方法制得的复方外用制剂在制备治疗真菌感染药物中的应用。
使用方法：局部外用，取本品适量涂敷于患处及其周围，一日2次。体、股癣连续使用2-4周；手癣、足癣、花斑癣连续用药4-6周。
本发明具有以下有益效果：
1、本发明的复方盐酸特比萘芬凝胶为抗真菌药物与糖皮质激素组合制成的复方外用制剂，能很快穿透角质层，发挥抗菌、消炎作用，具有快速止痒及控制局部红斑丘疹等促进炎症反应改善的特点，主要针对伴有明显炎症反应的急性浅部真菌感染，也适用于继发真菌感染的皮炎湿疹类疾病，且不会造成皮肤和全身不良反应，应用较安全，解决了临床联合用药的问题。
2、本发明的复方盐酸特比萘芬凝胶为水溶性凝胶，形态为透明至半透明状的半固体状制剂，能迅速作用于病灶，具有透皮吸收好，清洁卫生等优点，解决了市售该类复方乳膏制剂不宜涂抹均匀、污染衣物等问题。
具体实施方式：
为使本发明的技术方案便于理解，以下结合具体实施例对本发明一种治疗真菌感染的复方外用制剂(以下称：复方盐酸特比萘芬凝胶)的制备方法作进一步的说明。
实施例1：一种治疗真菌感染的复方外用制剂的制备：
(1)、称取下列重量的原料药，其中：盐酸特比萘芬100g、糠酸莫米松5g、卡波姆940NF 150g、三乙醇胺80g、乙醇3000g、聚乙二醇-400 1000g、丙二醇2025g、聚山梨酯80 400g、二甲基亚砜500g、乙二胺四乙酸二钠10g，蒸馏水2730g；
(2)、将聚乙二醇-400(PEG-400)、丙二醇(PG)依次加入到卡波姆940NF中，搅匀；
(3)、将聚山梨酯80(Tween-80)溶于2400ml蒸馏水中，混匀，并加至步骤(2)得到的液体中，搅拌均匀，溶胀过夜；
(4)、将三乙醇胺(TEOA)及乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)溶于330ml蒸馏水中加入步骤(3)得到的液体，搅匀，即得凝胶基质，备用；
(5)、从3000g乙醇中称取900g乙醇；将盐酸特比萘芬溶于900g乙醇中，逐渐加入步骤(4)得到的凝胶基质中，搅匀；
(6)、从3000g乙醇中称取2100g；将糠酸莫米松溶于2100g乙醇和二甲基亚砜(DMSO)中，逐渐加入步骤(5)得到的产物中搅匀；即得一种治疗真菌感染的复方外用制剂，重量为10000g。
本发明复方盐酸特比萘芬凝胶使用时将实施例1制备所得的复方外用制剂用铝管灌装1000支，即可使用。
实施例2：复方制剂中两种原料药最佳的组成比例的确定：
步骤(一)、盐酸特比萘芬(TBNF)组份比例不变，考察糠酸莫米松(MF)不同的组份比例，对疗效的影响。
据文献及市售类似药品，盐酸特比萘芬在不同剂型中的组份比例均为1％，故先暂定盐酸特比萘芬的组份比例为1％，考察复方凝胶制剂中糠酸莫米松的组份比例。为了确定糠酸莫米松在制剂中的组份比例及作用，同时增设盐酸特比萘芬凝胶组。其各组主要含糠酸莫米松的组份比例为0.125％、0.1％、0.05％、0.025％、0％，用于治疗须癣毛癣菌感染的豚鼠皮肤真菌病，结果见表1。
表1不同组份比例糠酸莫米松的复方盐酸特比萘芬凝胶治疗须癣毛癣菌感染动物的疗效评价(n＝9)
注：与C组相比，△表示两组疗效评分比较，具有显著性差异，P<0.05；△△表示两组疗效评分比较，具有极显著性差异，P<0.01。
结论：不同组份比例糠酸莫米松的复方盐酸特比萘芬凝胶对豚鼠局部感染须癣毛癣菌治疗结果表明，1％：0.05％组与1％：0.1％组疗效优于其他组，且两组间无显著性差异，考虑到糖皮质激素长期应用的安全性，优选1％：0.05％组。
步骤(二)、由上述实验确定糠酸莫米松组份比例为0.05％，进一步考察盐酸特比萘芬不同组份比例对疗效的影响。其各组主要含盐酸特比萘芬的组份比例为1.5％、1％、0.5％，用于治疗须癣毛癣菌感染的豚鼠皮肤真菌病，结果见表2。
表2不同组份比例盐酸特比萘芬的复方盐酸特比萘芬凝胶治疗须癣毛癣菌感染动物的疗效评价(n＝9)
注：与C组相比，△表示两组疗效评分比较，具有显著性差异，P<0.05；△△表示两组疗效评分比较，具有极显著性差异，P<0.01。
结论：不同组份比例盐酸特比萘芬的复方盐酸特比萘芬凝胶对豚鼠局部感染须癣毛癣菌治疗结果表明，E组(1.5％：0.05％)与C组(1％：0.05％)疗效评分比较无显著性差异，考虑到抗真菌药的副作用，优选1％：0.05％组。
由上述试验确定本品原料药的最佳组成比例为：每克含盐酸特比萘芬10mg，糠酸莫米松0.5mg。
实施例3：制备工艺的确定：
(一)、主药的溶剂工艺选择
我院研制的盐酸特比萘芬凝胶按中国药典2015年版四部通则(0114)凝胶剂项下属于水性均一型半固体制剂，我院根据该处方及制剂类型，又根据盐酸特比萘芬在乙醇中易溶，在水中微溶，在乙醚中几乎不溶，糠酸莫米松在二氯甲烷、丙酮中溶解，在乙醇中微溶，在水中不溶的特性，判定处方中增添二甲基亚砜作为盐酸特比萘芬和糠酸莫米松的溶剂，在工艺研究过程中，处方量的乙醇和二甲基亚砜可以满足处方量盐酸特比萘芬、糠酸莫米松的溶解，故选择乙醇和二甲基亚砜作为药物的溶剂。
(二)、主药加入方式选择
本发明在制备过程中发现，如果将主药的乙醇溶液先加入卡波姆，再用三乙醇胺调节pH值时，主药有时会出现析出现象，可能是因为加入三乙醇胺(中强度碱)调节pH值时可能与主药间发生一定反应；但如果采用先用三乙醇胺调节pH值后加入主药的乙醇溶液，仍出现主药析出的现象，可能是因为糠酸莫米松微溶于乙醇的缘故，因此本发明采用将糠酸莫米松溶于处方量的二甲基亚砜和70％处方量的乙醇中、盐酸特比萘芬溶于30％处方量的乙醇中，依次缓慢的加入凝胶基质中的方式，以制备复方盐酸特比萘芬凝胶。
经过影响因素试验、加速、长期试验结果表明：本品按照空军总医院的处方及按我院的工艺生产的样品稳定，与我院的盐酸特比萘芬凝胶样性状基本相同。
参考中国药典2015年版四部的规定，对本品进行加速试验和长期试验，以便为药品的生产、包装、贮存、运输条件提供依据，同时通过试验确定药品的有效期。
(三)、加速试验：
将上述包装好的样品，置于40℃±2℃、相对湿度75％±5％条件下放置6个月。分别于第0、1、2、3、6月末取样进行各项检查。
结果：本品三批放大样品经加速试验考察6个月，样品的外观性状、均匀性、有关物质和含量等均无明显变化，微生物限度检查均符合规定，见表3。加速试验和长期试验说明本品稳定性良好。
检测项目：性状、有关物质、含量测定和微生物限度。
表3加速试验结果
(四)、长期试验：
将上述包装好的样品，置于25℃±2℃、相对湿度60％±10％条件下放置36个月。于第0、3、6、9、12、18、24、36个月末取样进行各项检查。结果：本品三批放大样品经长期试验考察24个月，样品的外观性状、均匀性、有关物质和含量等均无明显变化，微生物限度检查均符合规定。说明本品稳定性良好。结果见表4。
表4长期稳定性试验
加速试验表明本品在上市包装条件下，于40℃、相对湿度75％条件下放置6个月，各项指标均符合质量标准。长期试验表明，本品在长期试验条件下放置24个月，各项指标基本不变。
以下通过本发明实施例1制备所得的一种治疗真菌感染的复方外用制剂的药效学实验来说明本发明所具有的有益效果：
实验例1：药效试验数据：
综上试验结果，优选复方盐酸特比萘芬凝胶组份为每克含盐酸特比萘芬10mg，含糠酸莫米松0.5mg。分别用复方盐酸特比萘芬凝胶、盐酸特比萘芬凝胶、曲安奈德益康唑乳膏、糠酸莫米松凝胶治疗皮肤癣菌感染豚鼠模型，每感染区用药量0.2g，2次/天，连续3周。每日观察皮损，并在治疗第0、8、14、18、21天进行评估。评估内容分为皮肤病变和真菌学检查，取皮肤组织做病理检测及培养。停药一周计算复发率。
表5复方盐酸特比萘芬凝胶对豚鼠皮肤感染须癣毛癣菌和犬小孢子菌真菌学治愈率
表6复方盐酸特比萘芬凝胶对治疗须癣毛癣菌感染动物的疗效评价(n＝9)
注：H组为复方盐酸特比萘芬凝胶，K组为曲安奈德益康唑乳膏，L组为盐酸特比萘芬凝胶，M组0.05％糠酸莫米松凝胶，N组为赋形剂组，O组为空白对照组
表6中与H组相比，△表示两组疗效评分比较，具有显著性差异，P<0.05；△△表示两组疗效评分比较，具有极显著性差异，P<0.01。与N组相比，#表示P>0.05。
由表5和表6可知，在治疗须癣毛癣菌感染豚鼠的皮肤真菌病方面，复方盐酸特比萘芬的疗效优于盐酸特比萘芬凝胶(P<0.05)、曲安奈德益康唑乳膏(P<0.01)。
表7复方盐酸特比萘芬凝胶对治疗犬小孢子菌感染动物的疗效评价(n＝9)
注：(P)为复方盐酸特比萘芬凝胶组，(Q)为盐酸特比萘芬凝胶，(R)为曲安奈德益康唑乳膏，(S)0.05％糠酸莫米松凝胶
表7中与P组相比，△表示两组疗效评分比较，具有显著性差异，P<0.05；△△表示两组疗效评分比较，具有极显著性差异，P<0.01。与Q组相比，▼表示P<0.05。
由表7可知，在治疗犬小孢子菌感染豚鼠的皮肤真菌病方面，复方盐酸特比萘芬的疗效最优。
小结：复方盐酸特比萘芬凝胶对豚鼠皮肤局部感染须癣毛癣菌、犬小孢子菌治疗结果表明，其1-3周疗效明显优于曲安奈德益康唑乳膏、糠酸莫米松凝胶(P<0.01)，且停药一周复发率低。
复方盐酸特比萘芬凝胶组与盐酸特比萘芬凝胶组相比，在表观疗效评价方面，复方盐酸特比萘芬凝胶在治疗须癣毛癣菌感染豚鼠皮肤真菌病时，在8-18天疗效较优(P<0.05)，在治疗犬小孢子菌感染豚鼠皮肤真菌病时，在14天及18天疗效较优(P<0.05)。在病理疗效评价方面，结果见表8、表9。
表8豚鼠皮肤感染须癣毛癣菌给药3周病理结果
表9豚鼠皮肤感染须癣毛癣菌给药3周病理结果
综上所述：在治疗须癣毛癣菌和犬小孢子菌局部感染豚鼠真菌病上，复方盐酸特比萘芬凝胶的疗效明显优于盐酸特比萘芬凝胶。
结论：复方盐酸特比萘芬凝胶在治疗须癣毛癣菌和犬小孢子菌局部感染豚鼠真菌病上，疗效最佳。
以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何形式上和实质上的限制，凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用以上所揭示的技术内容，而作出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对以上实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围内。