脑膜炎奈瑟球菌组合物及其方法与流程

相关申请的交叉引用

本申请要求于2015年2月19日提交的美国临时专利申请62/118,457以及于2016年1月19日提交的美国临时专利申请62/280,212的权益。所有上述申请通过引用整体并入本文。

发明领域

本发明涉及脑膜炎奈瑟球菌(neisseriameningitidis)组合物及其方法。

发明背景

脑膜炎奈瑟球菌是革兰氏阴性包膜细菌，可引起脓毒症、脑膜炎和死亡。基于化学上和抗原上明显不同的多糖荚膜，脑膜炎奈瑟球菌可以分类为至少12个血清群(包括血清群a、b、c、29e、h、i、k、l、w-135、x、y和z)。具有这些血清群中五个血清群(a、b、c、y和w135)的菌株导致大多数疾病。

脑膜炎球菌性脑膜炎是一种破坏性疾病，尽管有抗生素仍可在数小时内杀死儿童和年轻人。需要改善针对脑膜炎球菌血清群a、b、c、y和w135和/或x的免疫原性组合物。

目前，有效针对广泛的mnb分离物的交叉保护性疫苗或组合物尚未商业化。例如，至少在青少年中，迄今为止公开的涉及许可的用于保护免受血清群b疾病侵害的多组分组合物的结果尚未证明针对表达异源lp2086(fhbp)变体的多种菌株的直接杀菌免疫应答。迄今为止公开的涉及用于保护免受血清群b疾病侵害的多组分组合物的结果似乎至多显示针对该多组分组合物中与lp2086(fhbp)变体同源的lp2086(fhbp)变体的免疫原性。因此，需要有效针对一组不同的mnb分离物的交叉保护性疫苗或组合物，如针对不同或异源脑膜炎球菌菌株(例如代表不同的地理区域)确定真实疫苗覆盖度。

发明概述

一方面，本发明涉及包含约120μg/ml的包含seqidno：1所示氨基酸序列的第一脂化多肽，120μg/ml的包含seqidno：2所示氨基酸序列的第二脂化多肽，聚山梨酯80与第一多肽的摩尔比为约2.8，聚山梨酯80与第二多肽的摩尔比为约2.8，约0.5mg/ml铝，约10mm组氨酸和约150mm氯化钠的组合物。在一个实施方案中，第一剂量总体积为约0.5ml。在一个实施方案中，该组合物诱导针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的杀菌免疫应答。在一个实施方案中，该组合物可诱导脑膜炎奈瑟球菌血清群a、c、29e、h、i、k、l、w-135、x、y或z的杀菌免疫应答。在一个实施方案中，该组合物没有进一步包括与seqidno：1具有小于100％序列同一性的多肽。在一个实施方案中，该组合物没有进一步包括与seqidno：2具有小于100％序列同一性的多肽。在一个实施方案中，第一多肽总共具有258个氨基酸。在一个实施方案中，第二多肽总共具有261个氨基酸。在一个实施方案中，该组合物诱导针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的杀菌效价，其中在接受第一剂量后在人中针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的杀菌效价比在接受第一剂量之前在人中针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的杀菌效价至少高2倍，其中在使用人补体的血清杀菌测定中的相同条件下测量杀菌效价的增加。在一个实施方案中，第一脂化多肽由seqidno：1所示的氨基酸序列组成。在一个实施方案中，第二脂化多肽由seqidno：2所示的氨基酸序列组成。

另一方面，本发明涉及诱导在人中针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的免疫应答的方法。该方法包括向人施用有效量的第一剂量和第二剂量的组合物，所述组合物包含120μg/ml的包含seqidno：1所示氨基酸序列的第一脂化多肽，120μg/ml的包括seqidno：2所示的氨基酸序列的第二脂化多肽，聚山梨酯80与第一多肽的摩尔比为2.8，聚山梨酯80与第二多肽的摩尔比为2.8，0.5mg/ml铝，10mm组氨酸和150mm氯化钠。在一个实施方案中，一个剂量组合物具有0.5ml的总体积。在一个实施方案中，最多向人施用两个剂量的组合物。在一个实施方案中，不再向人进一步施用加强剂量的组合物。在一个实施方案中，向人施用第三剂量的组合物。在一个实施方案中，在第三剂量之后，不再向人进一步施用加强剂量的组合物。在一个实施方案中，不再向人进一步施用第四剂量的组合物。在一个实施方案中，在第一剂量后约6个月的时间段内向人施用第三剂量。在一个实施方案中，在第一剂量后至少30天施用第二剂量。在一个实施方案中，所述方法还包括施用第三剂量的组合物，其中在第二剂量后至少90天施用第三剂量。在一个实施方案中，当在使用人补体的血清杀菌测定中的相同条件下测量时，该组合物诱导针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的杀菌效价，其中在接受第一剂量后在人中针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的杀菌效价比在接受第一剂量之前在人中针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的杀菌效价至少高2倍。在一个实施方案中，免疫应答是针对对于表达a05的脑膜炎奈瑟球菌是异源的脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科a菌株的杀菌。在一个实施方案中，免疫应答是针对对于表达b01的脑膜炎奈瑟球菌是异源的脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科b菌株的杀菌。在一个实施方案中，免疫应答是针对脑膜炎奈瑟球菌m98250771是异源的脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科a菌株的杀菌。在一个实施方案中，免疫应答是针对脑膜炎奈瑟球菌cdc1127是异源的脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科b菌株的杀菌。在优选的实施方案中，免免疫应答是针对脑膜炎奈瑟球菌cdc1573是异源的脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科b菌株的杀菌。在一个实施方案中，第一多肽具有总共258个氨基酸。在一个实施方案中，第二多肽具有总共261个氨基酸。在一个实施方案中，第一脂化多肽由seqidno：1所示的氨基酸序列组成。在一个实施方案中，第二脂化多肽由seqidno：2所示的氨基酸序列组成。

另一方面，本发明涉及一种组合物，其包含60μg的包含seqidno：1所示氨基酸序列的第一脂化多肽，60μg的包含seqidno：2所示氨基酸序列的第二脂化多肽，聚山梨酯80与第一多肽的摩尔比为2.8，聚山梨酯80与第二多肽的摩尔比为2.8，0.5mg/ml铝，10mm组氨酸和150mm氯化钠，其中该组合物具有约0.5ml的总体积。在一个实施方案中，该组合物诱导针对对于表达a05的脑膜炎奈瑟球菌是异源的脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科a菌株的杀菌免疫应答。在一个实施方案中，该组合物诱导针对对于表达b01的脑膜炎奈瑟球菌是异源的脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科b菌株的杀菌免疫应答。在一个实施方案中，当在使用人补体的血清杀菌测定中的相同条件下测量时，该组合物诱导针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的杀菌效价，其中在接受第一剂量后在人中针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的杀菌效价比在接受第一剂量之前在人中针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的杀菌效价至少高2倍。在一个实施方案中，组合物没有进一步包括与seqidno：1具有小于100％序列同一性的多肽。在一个实施方案中，该组合物没有进一步包括与seqidno：2具有小于100％序列同一性的多肽。在一个实施方案中，第一多肽总共具有258个氨基酸。在一个实施方案中，第二多肽总共具有261个氨基酸。在一个实施方案中，第一脂化多肽由seqidno：1所示的氨基酸序列组成。在一个实施方案中，第二脂化多肽由seqidno：2所示的氨基酸序列组成。

又一方面，本发明涉及一种在人中诱导针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科a菌株和脑膜炎奈瑟球菌b亚科b菌株的杀菌免疫应答的方法。所述方法包括向人施用有效量的脑膜炎奈瑟球菌rlp2086组合物，所述组合物包含a)包含seqidno：1所示氨基酸序列的第一脂化多肽，和b)包含seqidno：2所示氨基酸序列的第二脂化多肽，其中所述方法进一步包括在针对抗脑膜炎奈瑟球菌血清群b施用所述组合物的24小时内向人施用以下免疫原性组合物中至少一种：(i)针对脑膜炎奈瑟球菌血清群a菌株，脑膜炎奈瑟球菌血清群c菌株，脑膜炎奈瑟球菌血清群y菌株和/或脑膜炎奈瑟球菌血清群w135菌株的免疫原性组合物；(ii)针对白喉、破伤风和百日咳的免疫原性组合物；(iii)针对甲型肝炎病毒的免疫原性组合物；(iv)针对人乳头瘤病毒的免疫原性组合物；(v)针对白喉、破伤风、百日咳和脊髓灰质炎的免疫原性组合物；或(vi)其任何组合。“免疫原性”是指诱导免疫应答的能力。

一方面，本发明涉及一种在人中诱导针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科a菌株和脑膜炎奈瑟球菌b亚科b菌株的杀菌免疫应答的方法。该方法包括向人施用有效量的脑膜炎奈瑟球菌rlp2086组合物，所述组合物包含a)包含seqidno：1所示氨基酸序列的第一脂化多肽，和b)包含seqidno：2所示氨基酸序列的第二脂化多肽，其中所述方法进一步包括伴随地向人施用以下额外的免疫原性组合物中的至少一种：(i)针对脑膜炎奈瑟球菌血清群a菌株，脑膜炎奈瑟球菌血清群c菌株，脑膜炎奈瑟球菌血清群y菌株和/或脑膜炎奈瑟球菌血清群w135菌株的免疫原性组合物；(ii)针对白喉、破伤风和百日咳的免疫原性组合物；(iii)针对甲型肝炎病毒的免疫原性组合物；(iv)针对人乳头瘤病毒的免疫原性组合物；(v)针对白喉、破伤风、百日咳和脊髓灰质炎的免疫原性组合物；或(vi)其任何组合。

另一方面，本发明涉及有效量的脑膜炎奈瑟球菌rlp2086组合物和伴随至少一种额外的免疫原性组合物用于在人中诱导针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科a菌株和针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科b菌株的杀菌免疫应答的用途，其中所述脑膜炎奈瑟球菌rlp2086组合物包含a)包含seqidno：1所示氨基酸序列的第一脂化多肽，和b)包含seqidno：2所示氨基酸序列的第二脂化多肽，其中所述至少一种额外的免疫原性组合物是：(i)针对脑膜炎奈瑟球菌血清群a菌株、脑膜炎奈瑟球菌血清群c菌株、脑膜炎奈瑟球菌血清群y菌株和/或脑膜炎奈瑟球菌血清群w135株的免疫原性组合物；(ii)针对白喉、破伤风和百日咳的免疫原性组合物；(iii)针对甲型肝炎病毒的免疫原性组合物；(iv)针对人乳头瘤病毒的免疫原性组合物；(v)针对白喉、破伤风、百日咳和脊髓灰质炎的免疫原性组合物；或(vi)其任何组合。

在一个实施方案中，脑膜炎奈瑟球菌rlp2086组合物还包括聚山梨酯80。在一个实施方案中，脑膜炎奈瑟球菌rlp2086组合物还包括铝。在一个实施方案中，脑膜炎奈瑟球菌rlp2086组合物还包括组氨酸缓冲剂。在一个实施方案中，脑膜炎奈瑟球菌rlp2086组合物还包括氯化钠。在一个实施方案中，脑膜炎奈瑟球菌rlp2086组合物包含约120μg/ml的第一多肽；约120μg/ml的第二多肽；摩尔比为约2.8的聚山梨酯80；约0.5mg/ml铝；约10mm组氨酸；和约150mm氯化钠。在一个实施方案中，脑膜炎奈瑟球菌rlp2086组合物包含约60μg的第一多肽；约60μg的第二多肽；约18μg聚山梨酯80；约250μg铝；约780μg组氨酸；和约4380μg氯化钠。

在一个实施方案中，脑膜炎奈瑟球菌rlp2086组合物诱导针对脑膜炎奈瑟球菌血清群ba22，a56，b24，b44菌株或其任何组合中的至少一种的杀菌免疫应答。在一个实施方案中，脑膜炎奈瑟球菌rlp2086组合物诱导针对脑膜炎奈瑟球菌血清群ba22的杀菌免疫应答。在一个实施方案中，脑膜炎奈瑟球菌rlp2086组合物诱导针对脑膜炎奈瑟球菌血清群bb24的杀菌免疫应答。在一个实施方案中，脑膜炎奈瑟球菌rlp2086组合物诱导针对脑膜炎奈瑟球菌血清群bb24，b16，b44，a22，b03，b09，a12，a19，a05，a07，b153菌株或其任何组合的杀菌免疫应答。

在一个实施方案中，所述方法还包括诱导针对脑膜炎奈瑟球菌血清群a菌株，脑膜炎奈瑟球菌血清群c菌株，脑膜炎奈瑟球菌血清群y菌株和/或脑膜炎奈瑟球菌血清群w135菌株或其任何组合中的至少一种的免疫应答。

在一个实施方案中，所述方法包括向人施用额外的免疫原性组合物，其包括四种不同和分别制备的蛋白质-荚膜多糖缀合物的混合物，其中第一缀合物包括与载体蛋白缀合的纯化的血清群w-135的脑膜炎奈瑟球菌荚膜多糖，第二缀合物包括与载体蛋白缀合的纯化的血清群y的脑膜炎奈瑟球菌荚膜多糖，第三缀合物包括与纯化的载体蛋白缀合的纯化的血清群a的脑膜炎奈瑟球菌荚膜多糖，第四缀合物包括与载体蛋白缀合的纯化的血清群c的脑膜炎奈瑟球菌荚膜多糖，其中载体蛋白选自白喉类毒素，crm197和破伤风类毒素。在一个实施方案中，载体蛋白是白喉类毒素。

在一个实施方案中，该免疫原性组合物是液体组合物。

在一个实施方案中，该免疫原性组合物未被冻干。

在一个实施方案中，所述方法还包括诱导针对6型、10型、16型、18型人乳头瘤病毒或其任何组合中的至少一种的免疫应答。在一个实施方案中，该方法还包括在人中诱导针对白喉、破伤风、百日咳，脊髓灰质炎或其任何组合中的至少一种的免疫应答。

在一个实施方案中，有效量的脑膜炎奈瑟球菌rlp2086组合物包括一个剂量。在一个实施方案中，有效量的脑膜炎奈瑟球菌rlp2086组合物包括两个剂量。在一个实施方案中，有效量的脑膜炎奈瑟球菌rlp2086组合物还包括加强剂量。在一个实施方案中，有效量的脑膜炎奈瑟球菌rlp2086组合物包括至多三个剂量。

在一个实施方案中，脑膜炎奈瑟球菌rlp2086组合物在施用额外的组合物的24小时内施用。在一个实施方案中，将脑膜炎奈瑟球菌rlp2086组合物与额外的组合物同时施用。在一个实施方案中，第一剂量的脑膜炎奈瑟球菌rlp2086组合物与额外的组合物伴随施用。在一个实施方案中，第一剂量的脑膜炎奈瑟球菌rlp2086组合物与额外的组合物同时施用。

附图简要说明

图1-达到hsba效价≥lloq的受试者的比例。hsba＝使用人补体的血清杀菌测定；lloq＝定量下限。

图2-用rlp2086免疫后的个体人受试者达到对普林斯顿大学爆发菌株和ucsb爆发菌株的hsba效价4倍升高的个体人类受试者的百分比(研究b1971012–描述于实施例5、实施例6中)。在临床研究b1971012中用二价rlp2086免疫的9名人类受试者的血清样品在使用来自普林斯顿大学和来自ucsb的mnb爆发菌株的探索性hsba中进行了评估。参见实施例9。

序列标识

seqidno：1列出了重组脑膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086变体a05多肽抗原的氨基酸序列。

seqidno：2列出了重组脑膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086变体b01多肽抗原的氨基酸序列。

seqidno：3列出了seqidno：1和seqidno：2的1-4位的氨基酸残基。

seqidno：4列出了重组奈瑟球菌亚科alp2086多肽(rlp2086)(a05)多肽抗原的n末端的氨基酸序列。

seqidno：5列出了奈瑟亚科alp2086m98250771多肽(a05)多肽抗原的n末端的氨基酸序列。

seqidno：6列出了脑膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086变体b153的氨基酸序列。

seqidno：7列出了脑膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086变体a04的氨基酸序列。

seqidno：8列出了脑膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086变体a05的氨基酸序列

seqidno：9列出了脑膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086变体a12的氨基酸序列。

seqidno：10列出了脑膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086变体a22的氨基酸序列。

seqidno：11列出了脑膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086变体b02的氨基酸序列。

seqidno：12列出了脑膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086变体b03的氨基酸序列。

seqidno：13列出了脑膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086变体b09的氨基酸序列。

seqidno：14列出了脑膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086变体b22的氨基酸序列。

seqidno：15列出了脑膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086变体b24的氨基酸序列。

seqidno：16列出了脑膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086变体b44的氨基酸序列。

seqidno：17列出了脑膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086变体b16的氨基酸序列。

seqidno：18列出了脑膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086变体a07的氨基酸序列。

seqidno：19列出了脑膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086变体a19的氨基酸序列。

seqidno：20列出了脑膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086变体a06的氨基酸序列。

seqidno：21列出了脑膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086变体a15的氨基酸序列。

seqidno：22列出了脑膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086变体a29的氨基酸序列。

seqidno：23列出了脑膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086变体b15的氨基酸序列。

发明详述

本发明人出乎意料地发现了一种rlp2086组合物，其包括包含seqidno：1所示氨基酸序列的第一脂化多肽和包含seqidno：2所示氨基酸序列的第二脂化多肽。该组合物在人类中具有可接受的安全性概况并且该组合物令人惊讶地在人中引发针对至少两种以上不同的脑膜炎奈瑟球菌菌株的广泛的交叉反应性杀菌免疫应答。

本发明人还发现，即使在伴随施用rlp2086组合物和下列免疫原性组合物中的至少一种之后也产生针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的稳健的免疫应答：(i)针对脑膜炎奈瑟球菌血清群a菌株，脑膜炎奈瑟球菌血清群c菌株，脑膜炎奈瑟球菌血清群y菌株和/或脑膜炎奈瑟球菌血清群w135菌株的免疫原性组合物；(ii)针对白喉、破伤风和百日咳的免疫原性组合物；(iii)针对甲型肝炎病毒的免疫原性组合物；(iv)针对人乳头瘤病毒的免疫原性组合物；(v)针对白喉、破伤风、百日咳和脊髓灰质炎的免疫原性组合物；或(vi)其任何组合。

至少rlp2086组合物和脑膜炎球菌群a、c、y和w-135多糖缀合疫苗(mcv4)的伴随施用也出乎意料地产生除了针对脑膜炎球菌群b之外至少针对脑膜炎球菌群a、c、y和w-135的免疫应答。与在不存在rlp2086组合物的情况下施用mcv4组合物产生的免疫应答相比，伴随施用rlp2086组合物和mcv4组合物后，针对脑膜炎球菌群a、c、y和w-135组的免疫应答是非劣的(noninferior)。

至少rlp2086组合物，脑膜炎球菌群a、c、y和w-135多糖缀合疫苗(mcv4)以及破伤风，白喉和无细胞百日咳(tdap)疫苗的伴随施用也出乎意料地产生除了针对脑膜炎球菌群a、c、y和w-135以及除了针对脑膜炎球菌群b以外至少针对破伤风，白喉和无细胞百日咳的免疫应答。与在不存在rlp2086组合物的情况下施用mcv4组合物和tdap组合物产生的免疫应答相比，伴随施用rlp2086组合物，mcv4组合物和tdap组合物后，针对tdap和脑膜炎球菌群a、c、y和w-135的免疫应答是非劣的。

此外，本发明人发现rlp2086组合物可以伴随针对甲型肝炎病毒的免疫原性组合物安全地施用于人。

本发明人进一步发现，使用疫苗异源lp2086(因子h结合蛋白(fhbp))亚科a和b，2-剂量施用方案和3-剂量施用方案出乎意料地在高比例的人受试者产生≥8的针对来自脑膜炎奈瑟球菌血清群b的测试菌株的hsba效价。当与2-剂量施用方案相比时，3-剂量施用方案可以在人中提供对各种mnb临床菌株的更广泛的保护。

本发明人还出乎意料地发现，在伴随施用rlp2086组合物和针对人乳头瘤病毒(hpv4)的四价免疫原性组合物后，产生针对人乳头瘤病毒和脑膜炎奈瑟球菌血清群b的稳健的免疫应答。例如，rlp2086组合物和hpv4组合物的伴随施用至少产生了针对表达与rlp2086组合物中的那些fhbps异源的fhbps的脑膜炎奈瑟球菌血清群b测试菌株的免疫应答。此类异源测试菌株包括表达a22fhbp，a56fhbp，b24fhbp或b44fhbp的野生型脑膜炎奈瑟球菌血清群b菌株，它们均与rlp2086组合物中的fhbp是异源的。参见其中描述了包括a22fhbp，a56fhbp，b24fhbp和b44fhbp等变体fhbp蛋白质的wo/2012/032489，wo/2013/132452，美国专利公开号us20120093852和美国专利公开号us20130243807。这些参考文献通过引用各自并入本文。伴随施用也出乎意料地产生至少针对6型，11型，16型和/或18型hpv的免疫应答。与在不存在rlp2086组合物的情况下由hpv4组合物施用产生的免疫应答相比，伴随施用rlp2086组合物和hpv4组合物后，针对hpv类型的免疫应答是非劣的。

此外，本发明人出乎意料地发现，在伴随施用rlp2086组合物和针对白喉、破伤风、百日咳和脊髓灰质炎的免疫原性组合物后，产生针对白喉、破伤风、百日咳和脊髓灰质炎以及脑膜炎奈瑟球菌血清群b的稳健的免疫应答。例如，rlp2086组合物和repevax组合物的伴随施用至少产生了针对表达与rlp2086组合物中的那些fhbp异源的fhbp的脑膜炎奈瑟球菌血清群b测试菌株的免疫应答。伴随施用还出乎意料地产生了，至少针对repevax中的以下9种抗原的免疫应答：白喉、破伤风、百日咳类毒素，百日咳丝状血凝素，百日咳粘附素，2型+3型百日咳菌毛凝集原，1型脊髓灰质炎病毒，2型脊髓灰质炎病毒，3型脊髓灰质炎病毒。与在不存在rlp2086组合物的情况下通过施用repevax组合物产生的免疫应答相比，伴随施用rlp2086组合物和repevax组合物后，针对repevax抗原的免疫应答是非劣的。

组合物与疫苗

一方面，本发明涉及针对脑膜炎奈瑟球菌的组合物。该组合物包含具有seqidno：1所示氨基酸序列的第一脂化多肽和具有seqidno：2所示氨基酸序列的第二脂化多肽。

本发明人出乎意料地发现了单一的脑膜炎奈瑟球菌多肽组分，其诱导针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的多种菌株的有效的广泛保护性免疫应答。因此，在一个实施方案中，组合物不包括融合蛋白。在一个实施方案中，组合物不包括嵌合蛋白。在一个实施方案中，组合物不包括杂合蛋白。在一个实施方案中，组合物没有进一步包括肽片段。在另一个实施方案中，组合物没有进一步包括不是fhbp的奈瑟球菌多肽。例如，在一个实施方案中，组合物不包括pora蛋白。在另一个实施方案中，组合物不包括nada蛋白。在另一个实施方案中，组合物不包括奈瑟球菌肝素结合抗原(nhba)。在另一个实施方案中，组合物没有进一步包括奈瑟球菌外膜囊泡(omv)。在优选的实施方案中，组合物不包括除第一多肽和第二多肽之外的抗原。

另一方面，本发明人出乎意料地发现，衍生自至多两种脑膜炎奈瑟球菌血清群b菌株的多肽抗原诱导针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的多种菌株的免疫应答。因此，在一个实施方案中，组合物没有进一步包括不是衍生自脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科am98250771菌株和/或脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科bcdc1573菌株的多肽。

在一个实施方案中，组合物没有进一步包括与seqidno：1具有小于100％序列同一性的多肽。在另一个实施方案中，组合物没有进一步包括与seqidno：2具有小于100％序列同一性的多肽。例如，组合物没有进一步包括与seqidno：1和/或seqidno：2全长具有小于100％序列同一性的多肽。

在一个实施方案中，组合物还包括聚山梨酯80，铝，组氨酸和氯化钠。在一个实施方案中，组合物包含约60μg的包含seqidno：1所示氨基酸序列的第一脂化多肽，约60μg的包含seqidno：2所示氨基酸序列的第二脂化多肽，聚山梨酯80与每种多肽的摩尔比为2.8，0.5mg铝/ml如磷酸铝，10mm组氨酸和150mm氯化钠，其中组合物的总体积优选为约0.5毫升。

另一方面，组合物包含约120μg/ml的包含seqidno：1所示的氨基酸序列的第一脂化多肽，约120μg/ml的包含seqidno：2所示氨基酸序列的第二脂化多肽，聚山梨酯80与每种多肽的摩尔比为2.8，0.5mg铝/ml如磷酸铝，10mm组氨酸和150mm氯化钠。

在另一方面，组合物包括a)60μg的包含seqidno：1所示氨基酸序列的第一脂化多肽；b)60μg的包含seqidno：2所示氨基酸序列的第二脂化多肽；c)18μg聚山梨酯80；d)250μg铝；e)780μg组氨酸，以及f)4380μg氯化钠。

在一个示例性实施方案中，组合物包含约60μg的由seqidno：1所示氨基酸序列组成的第一脂化多肽，约60μg的由seqidno：2所示氨基酸序列组成的第二脂化多肽，聚山梨酯80与第一脂化多肽和与第二脂化多肽的摩尔比为2.8，0.5mg/ml磷酸铝，10mm组氨酸和150mm氯化钠的，其中组合物的总体积为约0.5ml。在该示例性实施方案中，组合物是无菌等渗缓冲的液体悬浮剂。在该示例性实施方案中，组合物具有ph6.0。在该示例性实施方案中，第一多肽和第二多肽被吸附到铝上。

在一个实施方案中，组合物的总体积为约0.5ml。在一个实施方案中，第一剂量的组合物具有约0.5ml的总体积。“第一剂量”是指在第0天施用的组合物的剂量。“第二剂量”或“第三剂量”是指在第一剂量之后施用的组合物的剂量，其可与第一剂量相同或可不与第一剂量相同。

在向人施用第一剂量后该组合物是免疫原性的。在一个实施方案中，第一剂量为总体积约0.5ml。

当在使用人补体的血清杀菌测定(hsba)中的相同条件下测量时，该组合物诱导针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的杀菌效价，其中在接受第一剂量后在人中针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的杀菌效价比在接受第一剂量之前在人中针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的杀菌效价至少高1倍，优选至少高2倍。

在优选的实施方案中，杀菌效价或杀菌免疫应答针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科a菌株和针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科b菌株。最优选地，杀菌效价或杀菌免疫应答至少针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b，亚科b，b01菌株。

在另一个优选的实施方案中，杀菌效价或杀菌免疫应答至少针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b，亚科b，b24菌株。在另一个优选的实施方案中，杀菌效价或杀菌免疫应答至少针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b，亚科a，a22菌株。

在一个实施方案中，当在使用人补体的血清杀菌测定中的相同条件下测量时，该组合物诱导针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的杀菌效价，其中在接受一个剂量的组合物后在人中针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的杀菌效价比在接受所述剂量之前在人中针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的杀菌效价至少高1倍，例如至少高1.01倍、1.1倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍或16倍。

在一个实施方案中，组合物是用于人的免疫原性组合物。在另一个实施方案中，组合物是疫苗。“疫苗”是指包含抗原的组合物，其含有诱导针对该抗原特异性的免疫应答的至少一个表位。疫苗可以通过皮下，口服，口鼻或鼻内施用途径直接施用于受试者。优选地，肌内施用疫苗。在一个实施方案中，组合物是用于人的疫苗。在一个实施方案中，组合物是针对脑膜炎奈瑟球菌的免疫原性组合物。

在一个实施方案中，组合物是液体组合物。在优选的实施方案中，组合物是液体悬浮剂组合物。在另一个优选的实施方案中，组合物未被冻干。

第一多肽

在一个实施方案中，组合物包括具有seqidno：1所示氨基酸序列的第一多肽。在一个优选的实施方案中，组合物包含约60μg的包括seqidno：1所示氨基酸序列的第一多肽，其中组合物的总体积优选为0.5ml。在另一个实施方案中，组合物包含约120μg/ml的包含seqidno：1所示氨基酸序列的第一多肽。多肽是来自脑膜炎奈瑟球菌m98250771菌株的经修饰的因子h结合蛋白(fhbp)。在wo2012032489和美国专利公开us2012/0093852(其全部内容通过引用并入本文)中公开了fhbp的描述。该多肽n-末端脂化有与在多肽的三个位置共价连接的三个主要脂肪酸c16:0，c16:1和c18:1。第一多肽包括总共258个氨基酸。

与来自脑膜炎奈瑟球菌菌株m98250771的相应野生型序列相比，第一多肽包括引入多肽的n末端区域的两个修饰。作为引入克隆位点的结果，加入第二位置的甘氨酸。第二个修饰包括缺失四个氨基酸。因此，在一个实施方案中，第一多肽在n末端包含c-g-s-s序列(seqidno：3)。见seqidno：1，前四个氨基酸残基。

第一个多肽序列和野生型奈瑟球菌序列之间的n-末端差异如下所示。因此，在一个实施方案中，第一多肽包括seqidno：1所示氨基酸序列的至少前2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13个或更多个氨基酸残基。优选地，第一多肽包含seqidno：1的至少前4个，更优选至少前6个，最优选至少前8个氨基酸残基。

重组和奈瑟球菌亚科lp2086多肽的预测n末端序列的比较

rlp2086m98250771cgss-----ggggvaad(seqidno:4)

neisseriallp2086m98250771c-ssgs-gsggggvaad(seqidno:5)

>a05(seqidno:1)

cgssggggvaadigtgladaltapldhkdkglksltledsisqngtltlsaqgaektfkvgdkdnslntgklkndkisrfdfvqkievdgqtitlasgefqiykqdhsavvalqiekinnpdkidslinqrsflvsglggehtafnqlpsgkaeyhgkafssddaggkltytidfaakqghgkiehlktpeqnvelasaelkadekshavilgdtrygseekgtyhlalfgdraqeiagsatvkirekvheigiagkq

在一个实施方案中，第一多肽包括seqidno：1所示的氨基酸序列。在一个实施方案中，第一多肽总共具有258个氨基酸。在一个实施方案中，第一多肽不包括与seqidno：1具有小于100％序列同一性的氨基酸序列。在另一个实施方案中，第一多肽由seqidno：1所示的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，第一多肽包括氨基酸序列kdn。参见例如seqidno：1的氨基酸残基73-75。在另一个实施方案中，第一多肽包括在该多肽的n末端的seqidno：3所示的氨基酸序列。在另一个实施方案中，第一多肽包括在该多肽的n-末端的seqidno：4所示的氨基酸序列。

在优选的实施方案中，使用本领域已知的标准技术，易于在重组宿主细胞中表达第一多肽。在另一个优选的实施方案中，第一多肽包含seqidno：1的n-和/或c-结构域上的杀菌表位。在一个实施方案中，第一多肽包括seqidno：1所示氨基酸序列的至少前4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100个氨基酸残基。优选地，第一多肽包含seqidno：1的至少前2个，更优选至少前4个，以及最优选至少前8个氨基酸残基。

在另一个实施方案中，第一多肽包括seqidno：1所示氨基酸序列的至少最后4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100个氨基酸残基。

第二多肽

在一个实施方案中，组合物包含具有seqidno：2所示氨基酸序列的第二多肽。在一个优选的实施方案中，组合物包含约60μg的包含seqidno：2所示氨基酸序列的第二多肽，其中组合物的总体积优选为0.5ml。在另一个实施方案中，组合物包含120μg/ml的包含seqidno：2所示氨基酸序列的第二多肽。该多肽是来自脑膜炎奈瑟球菌菌株cdc1573的因子h结合蛋白(fhbp)。在wo2012032489和美国专利公开us2012/0093852(其全部内容通过引用并入本文)中公开了fhbp的描述。该多肽n-末端脂化有与在该多肽的三个位置共价连接的三个主要脂肪酸c16:0、c16:1和c18:1。第二多肽总共包括261个氨基酸。在一个实施方案中，第二多肽在n末端包含c-g-s-s序列(seqidno：3)。参见seqidno：2的前4个氨基酸残基。

>b01(seqidno:2)

cgssggggsggggvtadigtgladaltapldhkdkglksltledsisqngtltlsaqgaektygngdslntgklkndkvsrfdfirqievdgqlitlesgefqvykqshsaltalqteqeqdpehsekmvakrrfrigdiagehtsfdklpkdvmatyrgtafgsddaggkltytidfaakqghgkiehlkspelnvdlavayikpdekhhavisgsvlynqdekgsyslgifgekaqevagsaevetangihhiglaakq

在一个实施方案中，第二多肽包括seqidno：2所示的氨基酸序列。在一个实施方案中，第二多肽总共具有261个氨基酸。在一个实施方案中，第二多肽由seqidno：2所示的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，第二多肽没有进一步包括与seqidno：2具有小于100％序列同一性的多肽。在优选的实施方案中，第一多肽和第二多肽在各自多肽的n末端包含c-g-s-s(seqidno：3)序列。

在优选的实施方案中，使用本领域已知的标准技术，易于在重组宿主细胞中表达第二多肽。在另一个优选的实施方案中，第二多肽包含seqidno：2的n-和/或c结构域上的杀菌表位。在一个实施方案中，第二多肽包括seqidno：2所示氨基酸序列的至少前2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100个氨基酸残基。优选地，第二多肽包含seqidno：2的至少前2个，更优选至少前4个，以及最优选至少前8个氨基酸残基。

在另一个实施方案中，第一多肽包括seqidno：2所示的氨基酸序列的至少最后4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100个氨基酸残基。

聚山梨酯80

聚山梨酯80(ps-80)是非离子表面活性剂。使用基于体外单克隆抗体的效价测定法进行的加速稳定性研究表明，在最终制剂中，ps-80与mnbrlp2086蛋白质的摩尔比较高的亚科b蛋白的不稳定性。具有不同比例ps-80的进一步实验已经证明保留效价的ps-80与mnbrlp2086蛋白的最佳摩尔比约为2.8±1.4。

组合物中ps-80的浓度取决于ps-80与多肽的摩尔比。在一个实施方案中，组合物包含ps-80与第一多肽和与第二多肽的摩尔比为2.8±1.4。在一个实施方案中，组合物包含ps-80与第一多肽和与第二多肽的摩尔比为2.8±1.1。在一个实施方案中，组合物包含ps-80与多肽的摩尔比为至少1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2或3.3。优选地，组合物包含ps-80与多肽的摩尔比为2.8。

通过从测量的ps-80浓度和测量的总多肽浓度(其中两个值均以摩尔表示)计算确定ps-80与多肽的摩尔比。例如，通过在最终药物物质中测量的ps-80浓度(例如，通过反相高压液相色谱(rp-hplc))与测量的总蛋白质浓度(例如通过离子交换-高压液相色谱(iex-hplc))(其中两个值都以摩尔表示)计算确定ps-80与蛋白质的摩尔比。

使用rp-hplc来定量疫苗制剂中聚山梨酯80的浓度。洗涤剂的浓度通过脂肪酸部分的皂化来确定；聚山梨酯80在40℃下通过碱水解转化为游离油酸。使用c18柱通过rp-hplc分离样品，并使用uv检测器在200nm波长下进行定量。

通过阴离子交换hplc解析第一和第二多肽。rlp2086(fhbp)亚科a和b蛋白在不同的保留时间洗脱，并使用针对相应的rlp2086蛋白质参考物质产生的标准曲线进行定量。

术语“摩尔比”和包含fhbp和ps-80的免疫原性组合物的描述进一步公开在wo2012025873和美国专利公开us2013/0171194中，其各自通过引用整体并入本文。

本文所用的术语“摩尔比”是指组合物中两种不同元素的摩尔数比。在一些实施方案中，摩尔比是洗涤剂的摩尔数与多肽的摩尔数之比。在一些实施方案中，摩尔比是ps-80的摩尔数与蛋白质的摩尔数之比。在一个实施方案中，基于蛋白质和聚山梨酯80浓度，摩尔比可以使用以下等式计算：

在一个实施方案中，组合物包含约0.0015、0.0017、0.0019、0.0021、0.0023、0.0025、0.0027、0.0029、0.0031、0.0033、0.0035、0.0037、0.0039、0.0041、0.0043、0.0045、0.0047、0.0049、0.0051mg/ml的ps-80。优选地，组合物包含约0.0035mg/mlps-80。

在另一个实施方案中，组合物包含约10μg、11μg、12μg、13μg、14μg、15μg、16μg、17μg、18μg、19μg、20μg、21μg、22μg、23μg、24μg或25μgps-80。在优选的实施方案中，组合物包含约18μgps-80。

在另一个实施方案中，组合物包含0.0005％至1％的ps-80浓度。例如，组合物中的ps-80浓度可以为0.0005％、0.005％、0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.10％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％或1.1％的ps-80。在优选的实施方案中，组合物包含约0.07％的ps-80。

任何最小值都可以与此处描述的任何最大值相结合，以定义一个范围。

铝

组合物优选包含约0.5mg/ml磷酸铝。在一个实施方案中，组合物包含约0.5mg铝/ml如磷酸铝。加入0.50mg/ml的alpo4作为稳定剂，以提供增强的可制造性和稳定性。该浓度保持亚科a和b蛋白与铝的结合(90％或更好的结合)。

生产磷酸铝的方法描述于美国专利公开us2009/0016946中，其全部内容通过引用并入本文。

在一个实施方案中，该组合物没有进一步包括除铝以外的多价阳离子。在一个实施方案中，组合物没有进一步包括al(oh)3或al(so4)3。

赋形剂

在一个实施方案中，组合物包括组氨酸。在一个实施方案中，组合物包括氯化钠。组合物优选包含约10mm组氨酸和约150mm氯化钠。在一个实施方案中，组合物包含10mm组氨酸和150mm氯化钠。

在另一个实施方案中，组合物包含约650μg、660μg、670μg、680μg、690μg、700μg、710μg、720μg、730μg、740μg、750μg、760μg、770μg、780μg、790μg、800μg、810μg、820μg、830μg、840μg或850μg的组氨酸。优选地，组合物包含约780μg组氨酸。任何最小值可以与本文所述的任何最大值组合以定义范围。

在一个实施方案中，组合物包含三羟甲基氨基甲烷(tris)、磷酸盐或琥珀酸盐缓冲剂。在优选的实施方案中，组合物不包括三羟甲基氨基甲烷缓冲剂。优选地，组合物不包括磷酸盐缓冲剂。在一个优选实施方案中，组合物不包括琥珀酸盐缓冲剂。在优选的实施方案中，组合物包括组氨酸缓冲剂。

在优选的实施方案中，组合物的ph为6.0-7.0，最优选为ph6.0。在一个实施方案中，组合物的ph至多为6.1。

杀菌活性

通过使用人补体(hsba)针对四种脑膜炎奈瑟球菌血清群b(mnb)菌株的血清杀菌测定法测定向人施用组合物诱导的免疫应答。从菌株库中选出hsba中使用的4种mnb菌株。菌株库代表来自美国和欧洲的系统收集的临床相关脑膜炎奈瑟球菌血清群b菌株的集合。用于sba的4种菌株中的两种来自脑膜炎奈瑟球菌血清群blp2086(fhbp)亚科a，4种菌株中的另外两种来自脑膜炎奈瑟球菌血清群blp2086(fhbp)亚科b。

对所有测试菌株、特别是表达具有与第一多肽异源的序列的脂蛋白2086变体的菌株的高比例的hsba表明该组合物是广泛保护性疫苗，并且两个剂量足以赋予至少针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科a菌株的高血清保护作用。

对所有测试菌株、特别是表达具有与第一多肽和第二多肽二者异源的序列的脂蛋白2086变体的菌株的高比例的hsba表明该组合物是广泛保护性疫苗，并且在约6个月的时间段内至多三个剂量足以赋予表达rlp2086(fhbp)亚科a和/或亚科b的脑膜炎奈瑟球菌血清群b菌株的高血清保护作用。

在一个实施方案中，hsba菌株是lp2086(fhbp)亚科a菌株。在一个实施方案中，hsba菌株是表达与表达a05的脑膜炎奈瑟球菌菌株异源的脂蛋白2086变体的lp2086(fhbp)亚科a菌株。例如，在一个实施方案中，hsba菌株是表达与菌株m98250771异源的脂蛋白2086变体的lp2086(fhbp)亚科a菌株。在一个实施方案中，hsba菌株是lp2086(fhbp)a22菌株。在另一个实施方案中，hsba菌株是lp2086(fhbp)a56菌株。在另一个实施方案中，hsba菌株是lp2086(fhbp)a22和lp2086(fhbp)a56菌株。在另一个实施方案中，hsba菌株是lp2086a04菌株。在一个实施方案中，hsba菌株是lp2086a05菌株。在一个实施方案中，hsba菌株是lp2086a12菌株。在一个实施方案中，hsba菌株是lp2086a22菌株。在一个实施方案中，hsba菌株是lp2086a12菌株。在一个实施方案中，hsba菌株是lp2086a04菌株。在一个实施方案中，hsba菌株是lp2086a19菌株。在一个实施方案中，hsba菌株是lp2086a07菌株。在另一个实施方案中，hsba菌株包括a22，a12，a19，a05和a07，或其任何组合。在一个实施方案中，hsba菌株包括a06，a15和a29，或其任何组合。

在一个实施方案中，免疫应答针对与表达a05的脑膜炎奈瑟球菌菌株异源的脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科a菌株具有杀菌作用。在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈瑟球菌血清群ba22菌株。在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈瑟球菌血清群ba56菌株。在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈瑟球菌血清群ba06菌株。在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈瑟球菌血清群ba15菌株。在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈瑟球菌血清群ba29菌株。在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈瑟球菌血清群ba62菌株。在一个实施方案中，免疫应答针对与脑膜炎奈瑟球菌菌株m98250771异源的脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科a菌株具有杀菌作用。在一个实施方案中，免疫应答针对表达因子h结合蛋白的脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科a菌株具有杀菌作用，所述因子h结合蛋白包括与第一多肽具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在另一个实施方案中，免疫应答针对表达因子h结合蛋白的脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科a菌株具有杀菌作用，所述因子h结合蛋白包括与由脑膜炎奈瑟球菌菌株m98250771表达的因子h结合蛋白具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在优选的实施方案中，免疫应答针对表达因子h结合蛋白的脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科a菌株具有杀菌作用，所述因子h结合蛋白包括与由脑膜炎奈瑟球菌菌株m98250771表达的因子h结合蛋白具有至少80％、更优选至少84％同一性的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，免疫应答针对表达因子h结合蛋白的脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科a菌株具有杀菌作用，所述因子h结合蛋白包括与第一多肽具有至多81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在另一个实施方案中，免疫应答针对表达因子h结合蛋白的脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科a菌株具有杀菌作用，所述因子h结合蛋白包括与由脑膜炎奈瑟球菌菌株m98250771表达的因子h结合蛋白具有至多81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在优选的实施方案中，免疫应答针对表达因子h结合蛋白的脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科a菌株具有杀菌作用，所述因子h结合蛋白包括与由脑膜炎奈瑟球菌菌株m98250771表达的因子h结合蛋白具有至多99％、更优选至多85％的同一性的氨基酸序列。任何最小值可以与本文所述的任何最大值组合以定义范围。

在一个实施方案中，hsba菌株是lp2086(fhbp)亚科b菌株。在一个实施方案中，hsba菌株是表达与表达b01的脑膜炎奈瑟球菌菌株异源的脂蛋白2086变体的lp2086(fhbp)亚科b菌株。例如，在一个实施方案中，hsba菌株是表达与菌株cdc1127异源的脂蛋白2086变体的lp2086(fhbp)亚科b菌株。在优选的实施方案中，hsba菌株是表达与菌株cdc1573异源的脂蛋白2086变体的lp2086(fhbp)亚科b菌株。

在一个实施方案中，免疫应答针对与表达b01的脑膜炎奈瑟球菌菌株异源的脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科b菌株具有杀菌作用。在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈瑟球菌血清群bb24菌株。在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈瑟球菌血清群bb44菌株。在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈瑟球菌血清群bb16菌株。在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈瑟球菌血清群bb03菌株。在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈瑟球菌血清群bb09菌株。在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈瑟球菌血清群bb15菌株。在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈瑟球菌血清群bb153菌株。在一个实施方案中，免疫应答针对与脑膜炎奈瑟球菌菌株cdc1573异源的脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科b菌株具有杀菌作用。在一个实施方案中，免疫应答针对表达因子h结合蛋白的脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科b菌株具有杀菌作用，所述因子h结合蛋白包括与第二多肽具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在另一个实施方案中，免疫应答针对表达因子h结合蛋白的脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科b菌株具有杀菌作用，所述因子h结合蛋白包括与由脑膜炎奈瑟球菌菌株cdc1573表达的因子h结合蛋白具有至少80％、81％、82％、83％、84％85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在优选的实施方案中，免疫应答针对表达因子h结合蛋白的脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科b菌株具有杀菌作用，所述因子h结合蛋白包括与由脑膜炎奈瑟球菌菌株cdc1573表达的因子h结合蛋白具有至少80％同一性、更优选至少87％同一性的氨基酸序列。在另一个优选的实施方案中，免疫应答针对表达因子h结合蛋白的脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科b菌株具有杀菌作用，所述因子h结合蛋白包括与由脑膜炎奈瑟球菌菌株cdc1573表达的因子h结合蛋白具有100％同一性的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，免疫应答针对表达因子h结合蛋白的脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科b菌株具有杀菌作用，所述表达因子h结合蛋白包括与第二多肽具有至多81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在另一个实施方案中，免疫应答针对表达因子h结合蛋白的脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科b菌株具有杀菌作用，所述因子h结合蛋白包括与由脑膜炎奈瑟球菌菌株cdc1573表达的因子h结合蛋白具有至多81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在优选的实施方案中，免疫应答针对表达因子h结合蛋白的脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科b菌株具有杀菌作用，所述因子h结合蛋白包括与由脑膜炎奈瑟球菌菌株cdc1573表达的因子h结合蛋白具有至少99％同一性、更优选至少88％同一性的氨基酸序列。任何最小值可以与本文所述的任何最大值组合以定义范围。

在一个实施方案中，hsba菌株是lp2086(fhbp)b24菌株。在另一个实施方案中，hsba菌株是lp2086(fhbp)b44菌株。在另一个实施方案中，hsba菌株包括lp2086(fhbp)b24和lp2086(fhbp)b44菌株。在一个实施方案中，hsba菌株包括lp2086(fhbp)a22，lp2086(fhbp)a56，lp2086(fhbp)b24和lp2086(fhbp)b44菌株。在一个实施方案中，hsba菌株包括b15。在一个实施方案中，hsba菌株包括b153。在另一个实施方案中，hsba菌株是lp2086b16菌株。在一个实施方案中，hsba菌株是lp2086b03菌株。在一个实施方案中，hsba菌株是lp2086b09菌株。在另一个实施方案中，hsba菌株包括b24，b16，b44，b03和b09，或其任何组合。在另一个实施方案中，hsba菌株包括b24、b16、b44、a22、b03、b09、a12、a19、a05和a07，或其任何组合。例如，在一个实施方案中，hsba菌株包括a22和b24。在另一个实施方案中，hsba菌株包括a06，a07，a12，a15，a19，a29，b03，b09，b15和b16，或其任何组合。

在一个实施方案中，该方法诱导针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科a菌株和针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科b菌株的免疫应答。优选地，免疫应答针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科a菌株和针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科b菌株具有杀菌作用。

在一个实施方案中，针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科a菌株的免疫应答大于针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科b菌株的免疫应答。例如，在一个实施方案中，当在相同条件下进行测试时，免疫原性组合物诱导比针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科b菌株更高的针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科a菌株的杀菌效价。在一个实施方案中，更高的针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科a菌株的杀菌效价在第二剂量的针对脑膜炎奈瑟球菌的免疫原性组合物后30天内发生。在一个实施方案中，更高的针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科a菌株的杀菌效价在不存在第三剂量的针对脑膜炎奈瑟球菌的免疫原性组合物的情况下发生。

在另一个实施方案中，针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科b菌株的免疫应答大于针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科a菌株的免疫应答。例如，在一个实施方案中，当在相同条件下进行测试时，免疫原性组合物诱导比针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科a菌株更高的针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科b菌株的杀菌效价。在一个实施方案中，更高的针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科b菌株的杀菌效价在第二剂量的针对脑膜炎奈瑟球菌的免疫原性组合物后30天内发生。在一个实施方案中，更高的针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科b菌株的杀菌效价在不存在第三剂量的针对脑膜炎奈瑟球菌的免疫原性组合物的情况下发生。

效价

在一个实施方案中，当在相同条件下(例如在hsba中)测量时，与施用一个剂量的组合物之前人中针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的杀菌效价相比，组合物在人中诱导的针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的杀菌效价增加。在一个实施方案中，当在相同条件下(例如在hsba中)测量时，与施用第一剂量的组合物之前人中的杀菌效价相比，杀菌效价的增加是相比于施用第一剂量的组合物之前人中的杀菌效价。在一个实施方案中，当在相同条件下(例如在hsba中)测量时，与施用第二剂量的组合物之前人中的杀菌效价相比，在第二剂量的组合物后观察到效价的增加。在另一个实施方案中，当在相同条件下(例如在hsba中)测量时，与施用第三剂量的组合物之前人中的杀菌效价相比，在第三剂量的组合物后观察到杀菌效价的增加。

在一个实施方案中，当在相同条件下(例如在hsba中)测量时，组合物在施用一个剂量后在人中诱导针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的杀菌效价，其中所述杀菌效价比在施用一个剂量之前在人中针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的杀菌效价至少高1倍。例如，当在相同条件下(例如在hsba中)测量时，在接受一个剂量的组合物后在人中针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的杀菌效价与在施用该剂量之前在人中针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的杀菌效价相比至少高1.01倍、1.1倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍或16倍。

在一个实施方案中，当在相同条件下测量时，当与针对人乳头瘤病毒的额外的免疫原性组合物组合使用时，与施用一个剂量的组合物之前在人中针对人乳头瘤病毒的杀病毒效价相比，组合物在人中诱导针对人乳头瘤病毒的杀病毒效价的增加。在一个实施方案中，当在相同条件下测量时，与施用第一剂量的组合物之前在人中的杀病毒效价相比，杀病毒效价的增加是相比于在施用第一剂量的组合物之前在人中的杀病毒效价。在一个实施方案中，当在相同条件下测量时，与施用第二剂量的组合物之前人中的杀病毒效价相比，在第二剂量的组合物后观察到效价的增加。在另一个实施方案中，当在相同条件下测量时，与施用第三剂量的组合物之前人中的杀病毒效价相比，在第三剂量的组合物后观察到杀病毒效价的增加。

在一个实施方案中，当在相同条件下测量时，当与针对人乳头瘤病毒的额外的免疫原性组合物组合使用时，组合物在施用一个剂量后在人中诱导杀病毒效价，其中针对人乳头瘤病毒的杀病毒效价比在施用该剂量之前在人中针对人乳头瘤病毒的杀病毒效价至少高1倍。例如，当在相同条件下测量时，在接受一个剂量的组合物后在人中针对人乳头瘤病毒的杀病毒效价与在施用该剂量之前在人中针对人乳头瘤病毒的杀病毒效价相比至少高1.01倍、1.1倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍或16倍。

在一个实施方案中，“应答者”是指人，其中组合物在施用一个剂量后在人中诱导针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的杀菌效价，其中针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的杀菌效价与在施用该剂量之前在人中针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的杀菌效价相比至少高1倍。在优选的实施方案中，与施用该剂量之前在人中的杀菌效价相比，应答者达到hsba效价至少≥4倍的升高。这样的应答者可以被称为具有保护性效价。

在一个实施方案中，hsba效价是产生可测量效应的血清样品的最高稀释度的倒数。例如，在一个实施方案中，hsba效价是测试血清的最高2倍稀释度的倒数，其导致与t30cfu值(即，在含有除测试血清以外的所有测定组分的测定孔中孵育后存活细菌的数量；100％细菌存活)相比mnb细菌至少50％的降低(50％细菌存活)。

在一个实施方案中，当在hsba中的相同条件下测量时，该组合物在接受第一剂量后在人中诱导比在接受第一剂量之前在人中针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的杀菌效价至少高2倍的针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的杀菌效价(例如比在不存在第一剂量的情况下在人中的杀菌效价更高)。在一个实施方案中，当在采用人补体(hsba)的人血清杀菌测定中的相同条件下测量时，该组合物在人中诱导比在接受第一剂量之前在人中针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的杀菌效价至少高4倍的针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的杀菌效价。在一个实施方案中，当在采用人补体(hsba)的人血清杀菌测定中的相同条件下测量时，该组合物在人中诱导比在接受第一剂量之前在人中针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的杀菌效价至少高8倍的针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的杀菌效价。

在优选的实施方案中，人血清补体衍生自对于给定sba测试菌株具有低固有杀菌活性的人。低固有杀菌活性是指例如针对给定的sba测试菌株至少小于1:4稀释度的杀菌效价。在一个实施方案中，人补体衍生自具有针对给定sba测试菌株至少小于1:4稀释度、例如1:2稀释度的hsba效价的人，其中未向该人施用所述组合物。

在施用组合物如二价rlp2086组合物之前，人可以表现出小于1:4的hsba效价，或者在施用组合物之前，人可以表现出≥1:4的hsba效价。因此，在优选的实施方案和实施例中，向人施用至少一个剂量的组合物导致hsba效价至少大于1:4，例如hsba效价≥1:8，hsba效价≥1:16，以及hsba效价≥1：32。本文所述的各个实施例包括具有hsba效价≥1:8和/或≥1:16的人受试者比例的评估，其中向该人施用二价rlp2086组合物。对于hsba效价大于1:4的优选评估显示保护(即在人中诱导的杀菌免疫应答)与该组合物相关。

在一个实施方案中，在施用第一剂量的组合物后，该人具有等于或大于hsba的定量下限(lloq)的hsba效价。在另一个实施方案中，在施用第二剂量的组合物后，该人具有等于或大于hsba的lloq的hsba效价。在另一个实施方案中，在施用第三剂量的组合物后，该人具有等于或大于hsba的lloq的hsba效价。

额外的免疫原性组合物

一方面，本发明涉及一种除了诱导针对以下中的至少任一种的免疫应答之外还诱导针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科a菌株和针对脑中脑膜炎奈瑟球菌血清群b亚科b菌株的杀菌免疫应答的方法：脑膜炎奈瑟球菌血清群a菌株，脑膜炎奈瑟球菌血清群c菌株，脑膜炎奈瑟球菌血清群y菌株和/或脑膜炎奈瑟球菌血清群w135菌株；白喉，破伤风和/或百日咳；甲型肝炎病毒；人乳头瘤病毒；白喉、破伤风、百日咳和/或脊髓灰质炎；或其任何组合。

该方法包括向人施用有效量的针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的免疫原性组合物，并且伴随向人施用以下免疫原性组合物中的至少一种：(i)针对脑膜炎奈瑟球菌血清群a菌株，脑膜炎奈瑟球菌血清群c菌株，脑膜炎奈瑟球菌血清群y菌株和/或脑膜炎奈瑟球菌血清群w135菌株的免疫原性组合物；(ii)针对白喉、破伤风和百日咳的免疫原性组合物；(iii)针对甲型肝炎病毒的免疫原性组合物；(iv)针对人乳头瘤病毒的免疫原性组合物；(v)针对白喉、破伤风、百日咳和脊髓灰质炎的免疫原性组合物；或(vi)其任何组合。

在一个实施方案中，该方法包括向人施用有效量的针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b的免疫原性组合物，并且伴随向人施用以下免疫原性组合物中的至少一种：(i)menactra，menveo或nimenrix；(ii)adacel；(iii)havrix；(iv)gardasil；(v)repevax；或(vi)其任何组合。

例如，在示例性的实施方案中，该方法包括伴随向人施用以下组合物的组合中的至少一种：

本文所用的“伴随的”和“伴随地”和“共同施用的”和“共同施用”是指将向人同时施用至少两种组合物或在一段时间内施用，在此期间第一次施用的组合物的作用在人中仍然有效。如果第一组合物是例如rlp2086组合物并且第二组合物是mcv4组合物，则第二组合物的伴随施用可以在施用第一组合物的1至7天内，优选48小时内，更优选24小时内发生。在一个实施方案中，伴随施用发生在施用第一组合物的至多1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、24小时或48小时内。在另一个实施方案中，伴随施用发生在施用第一组合物的同时。

在伴随施用中，第一组合物可以在规定时间段内在额外的组合物之前、之后或同时施用。例如，在一个实施方案中，将第一组合物(例如rlp2086组合物)首先施用于人，而第二组合物(例如mcv4组合物)在rlp2086组合物后24小时内施用。在另一个实施方案中，将第一组合物(例如mcv4组合物)首先施用于人，而第二组合物(例如rlp2086组合物)在mcv4组合物后24小时内施用于人。

在一个实施方案中，额外的组合物在规定时间段内在第一剂量的rlp2086组合物之前、之后或同时施用。在另一个实施方案中，在一个实施方案中，额外的组合物在规定时间段内在第二剂量的rlp2086组合物之前、之后或同时施用。在另一个实施方案中，额外的组合物在规定时间段内在第三剂量的rlp2086组合物之前、之后或同时施用。在另一个实施方案中，额外的组合物在规定时间段内在加强剂量的rlp2086组合物之前、之后或同时施用。

本发明人出乎意料地发现，rlp2086组合物可以与至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14种额外的抗原一起施用，而不会不利地影响针对脑膜炎奈瑟球菌的免疫应答。例如，实施例11证实了观察到对脑膜炎奈瑟球菌菌株和至少10种mcv4和tdap抗原中的每一种的大量hsba应答。实施例13证实了rlp2086组合物可以与hpv4、mcv4和tdap疫苗中包含的14种抗原共同施用，同时诱导有效的免疫应答，其可包括杀菌和/或杀病毒的免疫应答。

因此，一方面，本发明涉及诱导针对脑膜炎奈瑟球菌血清群a菌株，脑膜炎奈瑟球菌血清群c菌株，脑膜炎奈瑟球菌血清群y菌株，脑膜炎奈瑟球菌血清群w135菌株，脑膜炎奈瑟球菌血清群b菌株的免疫应答的方法。在优选的实施方案中，免疫应答包括杀菌免疫应答。所述方法包括向人施用有效量的脑膜炎奈瑟球菌rlp2086组合物，所述组合物包含a)具有seqidno：1所示氨基酸序列的第一脂化多肽，和b)具有seqidno：2所示氨基酸序列的第二脂化多肽；以及另外的组合物，其包含四种不同且分开制备的蛋白质-荚膜多糖缀合物的混合物，其中所述第一缀合物包括与载体蛋白缀合的血清群w-135的纯化的脑膜炎奈瑟球菌荚膜多糖，所述第二缀合物包括与载体蛋白缀合的血清群y的纯化的脑膜炎奈瑟荚膜多糖，第三缀合物包括与纯化的载体蛋白缀合的血清群a的纯化的脑膜炎奈瑟球菌荚膜多糖，以及第四缀合物包括与载体蛋白缀合的血清群c的纯化的脑膜炎奈瑟球菌荚膜多糖，其中载体蛋白选自白喉类毒素、crm197和破伤风类毒素。

在一个优选实施方案中，该方法包括施用mcv4组合物，其中载体蛋白是白喉类毒素。在一个实施方案中，该方法包括施用menactra疫苗。

在另一个实施方案中，该方法包括施用mcv4组合物，其中载体蛋白为crm197。在一个实施方案中，该方法包括施用menveo疫苗。menveo[脑膜炎球菌(群a、c、y和w-135组)寡糖白喉crm197缀合疫苗]是一种无菌液体疫苗，通过肌内注射施用，含有分别缀合至白喉棒状杆菌crm197蛋白的脑膜炎奈瑟球菌血清群a、c、y和w-135寡糖。

在另一个实施方案中，该方法包括施用mcv4组合物，其中载体蛋白是破伤风类毒素。在一个实施方案中，该方法包括施用nimenrix疫苗。(脑膜炎球菌多糖群a，c，w-135和y缀合疫苗)是四价脑膜炎球菌多糖缀合的疫苗，包括各自与作为载体蛋白的破伤风类毒素偶联的脑膜炎奈瑟球菌荚膜多糖a，c，w-135和y。脑膜炎奈瑟球菌血清群a和c多糖与己二酸二酰肼(ah)间隔物缀合，并间接缀合至破伤风类毒素，而w-135和y多糖直接与破伤风类毒素缀合。

在一个实施方案中，与施用免疫原性组合物之前在人中的效价相比，该方法提高针对脑膜炎奈瑟球菌血清群a，c，w-135和/或y的效价至少大于1倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍或更多。在另一个实施方案中，与在施用免疫原性组合物之前在人中的效价相比，该方法提高针对脑膜炎奈瑟球菌血清群a，c，w-135和y的效价至少大于1倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍或更多。在另一个实施方案中，与在施用免疫原性组合物之前在人中的效价相比，该方法提高针对脑膜炎奈瑟球菌脑膜炎奈瑟球菌血清群a，c，w-135和y以及血清群b的效价至少大于1倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍或更多。

另一方面，本发明涉及一种在人中诱导针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b菌株诱导免疫应答和针对破伤风、白喉和百日咳的方法。在优选的实施方案中，免疫应答包括杀菌免疫应答。在另一个优选的实施方案中，免疫应答包括杀病毒免疫应答。在另一个优选的实施方案中，免疫应答包括杀菌和杀病毒的免疫应答。该方法包括向人施用有效量的脑膜炎奈瑟球菌rlp2086组合物，所述组合物包含a)具有seqidno：1所示氨基酸序列的第一脂化多肽，和b)具有seqidno：2所示氨基酸序列的第二脂化多肽；以及包括破伤风和白喉类毒素和百日咳抗原的另外的组合物，优选吸附在磷酸铝上。在一个实施方案中，所述方法包括施用adacel疫苗。

在一个实施方案中，与施用免疫原性组合物之前在人中的效价相比，所述方法增加至少大于1倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍或更多倍的针对破伤风，白喉和/或百日咳的效价。在另一个实施方案中，与在施用免疫原性组合物之前在人中的效价相比，所述方法增加至少大于1倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍或更多的针对破伤风，白喉和百日咳的效价。在另一个实施方案中，与在施用免疫原性组合物之前在人中的效价相比，该方法增加了至少大于1倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍或更多的针对破伤风，白喉和百日咳，脑膜炎奈瑟球菌血清群a，c，w-135和y和血清群b的效价。

一方面，本发明涉及在人中诱导针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b菌株、针对脑膜炎奈瑟球菌血清群a，c，y和w135菌株以及针对破伤风，白喉和百日咳的免疫应答的方法。在优选的实施方案中，免疫应答包括杀菌免疫应答。在另一个优选的实施方案中，免疫应答包括杀病毒免疫应答。在另一个优选的实施方案中，免疫应答包括杀菌和杀病毒的免疫应答。在一个实施方案中，该方法包括伴随施用rlp2086组合物、menactra和adacel疫苗。

一方面，本发明涉及在人中诱导针对脑膜炎奈瑟球菌血清群b菌株、针对脑膜炎奈瑟球菌血清群a，c，y和w135菌株以及针对破伤风，白喉和百日咳和进一步针对人类乳头瘤病毒的免疫应答的方法。在优选的实施方案中，免疫应答包括杀菌免疫应答。在另一个优选的实施方案中，免疫应答包括杀病毒免疫应答。在另一个优选的实施方案中，免疫应答包括杀菌和杀病毒的免疫应答。在一个实施方案中，该方法包括伴随施用rlp2086组合物，menactra和adacel疫苗。在一个实施方案中，该方法包括伴随施用rlp2086组合物，menactra，adacel和gardasil疫苗。

本发明人出乎意料地发现，针对脑膜炎奈瑟球菌的免疫原性组合物可以与针对人乳头瘤病毒(hpv)的免疫原性组合物一起施用，而不会对针对脑膜炎奈瑟球菌的杀菌应答产生不利影响。如实施例7和实施例8中所解释的，在用针对脑膜炎奈瑟球菌和gardasil的免疫原性组合施用和用针对脑膜炎奈瑟球菌和盐水的免疫原性组合物施用的人中观察到大量对脑膜炎奈瑟球菌测试菌株的hsba应答。在第三剂量的针对脑膜炎奈瑟球菌的免疫原性组合物约1个月后观察到hsba应答的额外增加。

此外，本发明人出乎意料地发现，与施用组合物之前在人中的免疫应答相比，在施用针对脑膜炎奈瑟球菌的免疫原性组合物和针对hpv的免疫原性组合物两者之后，在人中产生稳健的针对脑膜炎奈瑟球菌和hpv两者的免疫应答。如在实施例7和实施例8中所解释的，与施用免疫原性组合物之前在人中的效价相比，在施用针对脑膜炎奈瑟球菌和gardasil免疫原性组合物后，在人中针对hpv的效价增加。针对hpv的效价的增加至少大于1倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍或更多。

因此，在一个实施方案中，该方法包括在人中诱导针对脑膜炎奈瑟球菌的免疫应答，其中所述方法还包括向人施用针对人乳头瘤病毒的免疫原性组合物。优选地，免疫应答针对脑膜炎奈瑟球菌具有杀菌作用。在一个实施方案中，该方法还包括诱导针对hpv的免疫应答。在一个优选的实施方案中，所述方法还包括诱导针对人类6型、11型、16型和18型乳头瘤病毒或其任何组合中的至少一种的免疫应答。在一个实施方案中，在施用所述针对脑膜炎奈瑟球菌的组合物24小时内向人施用针对hpv的免疫原性组合物。

在一个实施方案中，所述方法包括在人中诱导针对脑膜炎奈瑟球菌的免疫应答，其中所述方法还包括向人施用针对hpv的免疫原性组合物。优选地，免疫应答针对脑膜炎奈瑟球菌具有杀菌作用。在一个实施方案中，该方法还包括诱导针对hpv的免疫应答。在一个优选的实施方案中，所述方法还包括诱导针对人类6型、11型、16型和18型乳头瘤病毒或其任何组合中的至少一种的免疫应答。在一个实施方案中，在施用所述针对脑膜炎奈瑟球菌的组合物24小时内向人施用针对人乳头瘤病毒的免疫原性组合物。

另一方面，本发明人出乎意料地发现，针对脑膜炎奈瑟球菌的免疫原性组合物可以与针对白喉，破伤风，无细胞百日咳和灭活的脊髓灰质炎病毒(dtap)的免疫原性组合物一起施用，而不会对针对脑膜炎奈瑟球菌的杀菌应答产生不利影响。如实施例4所解释的，在用针对脑膜炎奈瑟球菌和repevax的免疫原性组合物施用的人中观察到大量对脑膜炎奈瑟球菌测试菌株的hsba应答。在第三剂量的针对脑膜炎奈瑟球菌的免疫原性组合物约1个月后观察到hsba应答的额外增加。

此外，本发明人出乎意料地发现，与施用组合物之前在人中的免疫应答相比，在施用针对脑膜炎奈瑟球菌的免疫原性组合物和针对dtap的免疫原性组合物两者之后，在人中产生了稳健的针对脑膜炎奈瑟球菌和dtap的免疫应答。如在实施例4中所解释的，与施用免疫原性组合物之前在人中的效价相比，在施用针对脑膜炎奈瑟球菌和repevax免疫原性组合物后，在人中针对dtap的效价增加。针对dtap的效价的增加至少大于1倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍或更多。

方法与施用

一方面，本发明涉及在人中诱导免疫应答的方法。在优选的实施方案中，免疫应答包括杀菌免疫应答。在另一个优选的实施方案中，免疫应答包括杀病毒免疫应答。在另一个优选的实施方案中，免疫应答包括杀菌和杀病毒的免疫应答。在另一个优选的实施方案中，免疫应答包括灭活细菌和/或病毒。

另一方面，本发明涉及疫苗接种人的方法。在一个实施方案中，该方法包括向人施用至少一剂量的上述组合物。在另一个实施方案中，该方法包括向人施用至少第一剂量和第二剂量的上述组合物。

出乎意料的是，本发明人发现，rlp2086组合物的两剂量方案在人中诱导针对不同异源亚科a和针对不同异源亚科b菌株的杀菌效价。例如，按照上述组合物的两剂量方案，对于表达lp2086(fhbp)a22或lp2086(fhbp)a56的sba测试菌株，hsba效价≥1:8的人的百分比为90％或更高。参见实施例1。

在一个实施方案中，第二剂量在第一剂量后至少20、30、50、60、100、120、160、170或180天，并且在第一剂量后至多250、210、200或190天施用。任何最小值可以与本文所述的任何最大值组合以定义范围。

在另一个实施方案中，第二剂量在第一剂量后约30天施用。在另一个实施方案中，第二剂量在第一剂量后约60天施用，例如在0、2个月的免疫方案中施用。在另一个实施方案中，第二剂量在第一剂量后约180天施用，例如在0、6个月的免疫方案中施用。在另一个实施方案中，第二剂量在第一剂量后约120天施用，例如在2、6个月的免疫方案中施用。

在一个实施方案中，所述方法包括向人施用两个剂量的组合物并且至多两个剂量。在一个实施方案中，两次剂量在第一剂量后约6个月的时间段内施用。在一个实施方案中，该方法不包括向人进一步施用加强剂。本文所用的“加强剂”是指向人额外施用组合物。向人施用至多两个剂量的组合物可能是有利的。这样的优点包括，例如，促进人遵守完整的施用方案并促进方案的成本效益。

在一个实施方案中，第一剂量和第二剂量在约25、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190或200天，以及最多400、390、380、370、365、350、340、330、320、310、3300、290、280、270、260、250、240、230、220、210或200天的时间段上向人施用。任何最小值可以与本文所述的任何最大值组合以定义范围。

在一个实施方案中，在约30天的时间段内向人施用第一剂量和第二剂量。在另一个实施方案中，在约60天的时间段内向人施用第一剂量和第二剂量。在另一个实施方案中，在约180天的时间段内向人施用第一剂量和第二剂量。

三个剂量

本发明人进一步出乎意料地发现，rlp2086组合物的三剂量方案针对表达异源lp2086(fhbp)亚科b菌株的菌株比二剂量方案在更大百分比的人群中诱导更广泛的杀菌效价。例如，按照上述组合物的两剂量方案，对于sba测试菌株lp2086(fhbp)b24和lp2086(fhbp)b44，hsba效价≥1:8的人的百分比为65％或更高。按照上述组合物的三剂量方案，对于sba测试菌株b24和b44，hsba效价≥1:8的人的百分比为86％或更高。参见实施例1。

因此，在一个实施方案中，组合物的三剂量方案比两剂量方案在更大百分比的人中诱导针对第一和/或第二多肽表达lp2086(fhbp)的多种菌株的杀菌效价。

在一个实施方案中，所述方法包括向人施用三个剂量的组合物。在另一个实施方案中，该方法包括施用至多三个剂量的组合物。在一个实施方案中，三个剂量在第一剂量后约6个月的时间段内施用。在一个实施方案中，该方法包括在第三剂量后向人施用加强剂量。在另一个实施方案中，该方法不包括在第三剂量后向人施用加强剂量。在另一个实施方案中，该方法没有进一步包括向人施用第四或加强剂量的组合物。在另一个实施方案中，在约6个月的时间段内向人施用至多三个剂量。

在示例性实施方案中，第二剂量在第一剂量后约30天施用，第三剂量在第二剂量后约150天施用，例如在0、1、6个月的免疫方案中施用。在另一个示例性实施方案中，第二剂量在第一剂量后约60天施用，第三剂量在第二剂量后约120天施用，例如在0、2、6个月的免疫方案中施用。

在一个实施方案中，在约150、160、170或180天，最多240、210、200或190天的时间段上向人施用第一剂量、第二剂量和第三剂量。任何最小值可以与本文所述的任何最大值组合以定义范围。优选地，在约180天或6个月的时间段上向人施用第一剂量、第二剂量和第三剂量。例如，可以在第一剂量后约60天向人施用第二剂量，并且可以在第二剂量后约120天向人施用第三剂量。因此，示例性施用方案包括在约0、2和6月向人施用一个剂量。

如上所述，可以向人施用多个剂量的免疫原性组合物，并且每个剂量之间的天数可以变化。该方法的优点包括例如人可以灵活遵守施用方案。

实施例

以下实施例说明本发明的实施方案。除非另有说明，否则在以下实施例中提及研究性二价重组疫苗(rlp2086)，其是组合物的优选示例性实施方案，所述组合物包含每0.5ml剂量60μg的包含seqidno：1所示氨基酸序列的第一脂化多肽，每0.5ml剂量60μg包含seqidno：2所示氨基酸序列的第二脂化多肽，聚山梨酯80与第一多肽的摩尔比为2.8，聚山梨酯80与第二多肽的摩尔比为2.8，0.5mgal³⁺/ml组合物，10mm组氨酸和150mm氯化钠。更具体地，该研究性二价重组rlp2086疫苗包括(a)60μg包含seqidno：1所示氨基酸序列的第一脂化多肽；(b)60μg包含seqidno：2所示氨基酸序列的第二脂化多肽；(c)18μg聚山梨酯80；(d)250μg铝；(e)780μg组氨酸，(f)4380μg氯化钠。每个剂量为0.5ml。

实施例1：在11至18岁的健康受试者中以2或3个剂量的方案施用时，调查性脑膜炎球菌血清群b二价(mnb)rlp2086疫苗在健康青少年中的安全性、耐受性和免疫原性

背景：在11-18岁的健康青少年中使用包括2或3次疫苗接种的5种剂量方案研究了调查性二价重组疫苗(rlp2086)的安全性、耐受性和免疫原性(表1)。

疫苗是配制成含有60μg纯化的亚科a和60μg纯化的亚科brlp2086蛋白，摩尔比2.8的聚山梨酯80和0.25mg的al³⁺如alpo4，10mm组氨酸缓冲盐水，ph为6.0的0.5ml剂量。

盐水被用作安慰剂，因为没有已知的已证实的安全、免疫原性和有效的针对mnb的疫苗可以作为活性对照。生理盐水溶液在0.5ml剂量中包含0.9％氯化钠。

方法：在该2期、随机分组、安慰剂对照、单盲研究中的所有受试者均在0、1、2和6个月参加了疫苗接种就诊。对于盲法，当没有安排疫苗时，给予盐水对照。使用表达lp2086(fhbp)fhbp变体a22、a56、b24和b44(即主要终点分析中的4种“主要(primary)hsba测试菌株”)的4种mnb测试菌株(与疫苗中的变体均不同)进行使用人补体(hsba)的血清杀菌测定。评估了主动不良事件(ae)、征集的局部和全身反应和解热用药。

对于每种主要菌株在每个血液采样时间点计算几何平均hsba效价与双侧95％置信区间(ci)。计算几何平均倍数升高与95％ci。

应答者被定义为hsba效价等于或高于hsba测定的定量下限(lloq)的受试者。在主要终点分析中，4种hsba测试菌株中的每一个的lloq是等于1:8的hsba效价。每种主要测试菌株的检测限(lod)为等于1:4的效价(被广泛视为与保护免受脑膜炎球菌病相关)。

结果：在最后一次疫苗剂量后1个月，86-99％的受试者(3个剂量后，p<0.001)和69-100％的受试者(2个剂量后)对每种mnb测试菌株的hsba效价≥8。研究剂量1后，按组分别有19-27％(1.1-4.3％严重)和23-27％(0.0-1.0％严重)rlp2086受体发生发红和肿胀。注射部位疼痛是研究剂量1后最常见的局部反应(7.6-13.1％严重)。第一研究剂量的二价rlp2086疫苗后，按组发生发热≥38℃，发生率为3.3-6.5％，而盐水接受者为2.1％。局部和全身反应在剂量1之后通常比后续剂量之后更常见。1712名受试者中有43人(2.5％)报告了51例严重不良事件；2例被认为相关(1例眩晕、寒战和头痛，1例发烧和呕吐)。没有报告死亡。

表1

表.每种主要菌株在最后一次剂量的二价rlp2086后1个月达到hsba效价≥8*的可评估研究受试者的比例的统计分析-可评估免疫原性群体

＊所有菌株的定量下限＝8。

hsba效价≥8的受试者数量。

具有有效hsba效价的受试者数量。

使用基于二项分布的单侧确切检验p<0.001；<0.0125的值被认为是显著的。

基于观察到的受试者比例的确切的双侧置信区间(clopper和pearson)。

结论：二价rlp2086具有可接受的安全特征。所有5种给药方案在高比例受试者中针对所有4种测试菌株产生hsba效价≥8。与2个剂量相比，3个剂量后的一些测试菌株的比例较高，表明3个剂量可以为对抗多种mnb临床菌株提供最广泛的保护。二价rlp2086疫苗正在进行全球三期临床试验。

本研究的目标之一是评估如在组1受试者(0-，1-和6-个月的方案，随机分组)中和组2受试者(0-，2-和6-个月的方案，随机分组)中通过使用表达lp2086亚科a和b蛋白的mnb菌株在用二价rlp2086第三次接种后1个月进行的hsba测量的免疫应答。免疫原性分析的终点是对于4种主要mnb测试菌株(a22、a56、b24和b44)中每一种，组1和组2中在第7个月(或第三剂量的二价rlp2086后1个月)达到hsba效价≥lloq的受试者比例。对于4种主要mnb测试菌株，lloq为1:8。

对于可评估免疫原性群体，3个剂量的二价rlp2086后，组1中达到hsba效价≥1:8的受试者比例为91.7％(a22)，99.4％(a56)，89.4％(b24)，以及88.5％(b44)(参见上面的表1)。由于所有菌株的97.5％ci的下限均>50％(菌株a22、a56、b24和b44分别为87.8％，p<0.001；97.8％，p<0.001；84.7％，p<0.001和84.1％，p<0.001)，组1的受试者满足研究目标。

对于组2，3个剂量的二价rlp2086后，达到hsba效价≥1:8的受试者比例为95.0％(a22)，98.9％(a56)，88.4％(b24)，86.1％(b44)(见上表1)。与组1所见相似，所有菌株的97.5％ci的下限均>50％(菌株a22、a56、b24和b44分别为91.7％，p<0.001；96.9％，p<0.001；84.1％，p<0.001和81.4％，p<0.001)，这表明组2中的受试者也满足目标。

次要目标是评估如在组3受试者(0-和6个月的方案，随机分组)中通过使用表达lp2086亚科a和b蛋白的mnb菌株在第二剂量的二价rlp2086后1个月进行的hsba测量的免疫应答。该次要目标是对于4种主要mnb测试菌株中的每一种，组3中在第7个月(或第二剂量的二价rlp2086后1个月)达到hsba效价≥lloq(1:8)的受试者比例。

该次要目标也得到满足，因为在2个剂量的rlp2086后，组3中达到hsba效价≥1:8的受试者比例对于主要mnb测试菌株为93.5％，98.4％，81.1％和77.5％，其中所有菌株的97.5％ci的下限均>50％(菌株a22、a56、b24和b44分别为90.0％，p<0.001；96.2％，p<0.001；76.0％，p<0.001；和72.2％，p<0.001，见上表1)。

另一个次要目标是在组1至5受试者的每个采血时间点的4种主要mnb测试菌株中的每一种的hsba效价≥lloq的受试者比例。4种主要hsba测试菌株中的每一种的lloq是1:8的效价。对于可评估免疫原性群体，按照研究时间的hsba效价≥1:8的受试者比例显示在上表1中。

1个剂量的二价rlp2086后(组5[2个月和6个月的方案]，注射3后1个月)的hsba效价≥1:8的受试者比例为55.9％(a22)，67.6％(a56)，56.9％(b24)，以及23.8％(b44)。

2个剂量的二价rlp2086后一个月hsba效价≥1:8的受试者比例，亚科a菌株为亚科b菌株为3个剂量后，比例增加并且亚科a和b菌株分别为和

实施例2：使用人补体的血清杀菌测定(hsba)

mnb从人血流中的清除主要通过补体介导的溶菌作用实现，完整的补体系统对于抗mnb引起的感染是重要的。通过使用人补体的血清杀菌测定(hsba)在体外模拟体内补体介导的mnb的溶菌，功能性血清学测定显示其是保护免受脑膜炎球菌疾病侵害的替代物(surrogate)。也就是说，使用人补体的血清杀菌测定(hsba)中的细菌杀伤的证明与防止免受脑膜炎球菌疾病侵害相关。使用针对4种mnb菌株(fhbp变体a22、a56、b24和b44)的hbba测定由疫苗引起的免疫力。

在实施例中描述的hsba中使用四种主要mnb测试菌株用于测定终点。也就是说，这些菌株用于使用hsba免疫原性终点来估计疫苗功效。这些测试菌株代表了在美国和欧洲流行的占疾病分离物＞90％的6种fhbp系统发育亚群中的4种。

2014年10月29日，(二价重组脂蛋白2086[rlp2086])在美国获得批准，以预防10至25岁的个体中由mnb引起的侵袭性脑膜炎球菌病。的批准是基于针对代表美国和欧洲的imd菌株的四种血清群b菌株的血清杀菌活性测定的免疫应答的证明。

在从入侵性疾病分离物中选择4种主要mnb测试菌株时，采用考虑了体外lp2086表面表达的群体分布的方法。此外，hsba测试菌株必须显示低基线hsba阳性，因为处于脑膜炎球菌病风险的群体的特征在于对大多数菌株具有不存在或低基线杀菌活性。此外，4种主要mnb测试菌株中的每一种表达lp2086变体，其不同于疫苗中的lp2086变体，因此允许客观评估在群体中流行的侵袭性脑膜炎球菌疾病(imd)菌株的功能性免疫原性和功效。

hsba测量能启动补体介导的杀菌活性的血清中抗脑膜炎球菌血清群b(mnb)抗体的量。简言之，将测试血清以2倍的步骤连续稀释并加入到96孔测定板中。加入mnbsba测试菌株和人血清补体，开始杀菌应答。在37℃下孵育测定板30-60分钟(取决于sba测试菌株(称为t30))后，将含有在该孵育中存活的细菌的反应混合物稀释并转移至微孔滤板。过夜孵育后，使用immunospot分析仪计数以菌落形成单位(cfu)表达的存活细菌。原始cfu数据以电子方式记录，并转移到计算hsba效价的数据分析应用程序。hsba效价是测试血清最高2倍稀释度的倒数，与t30cfu值(即，在含有除测试血清以外的所有测定组分的测定孔中孵育后存活细菌的数量；100％细菌存活)相比，所述测试血清导致mnb细菌至少降低50％(50％细菌存活)。效价可以报告为逐步的效价(steptiter)，即1:4、1:8、1:16等。血清样品通过在相同测定中的两次单独的重复测定来测试。对于其中重复测量不相同的样品报告的最终效价是当满足系统适用性和样品适合性标准(例如，一个2倍稀释度中的重复效价必须一致)时，两次重复测量中较低者。

在dulbecco磷酸盐缓冲盐水中连续稀释测试血清后进行hsba测定。将细菌(约2000个菌落形成单位)和人血清补体(终浓度为20重量％)加入到96孔板中的连续稀释的血清中，并在37℃下在小半径轨道振荡器中以700rpm孵育30-40分钟(取决于hsba测试菌株)。孵育后，将一部分反应混合物转移至微孔滤板。孵育过夜后，用immunospot分析仪(cellulartechnologylimited；shakerheights，oh，usa)计数存活的细菌，并用sas(9.2版)分析hsba效价。计算hsba效价是内插测试血清稀释度的倒数，导致与未经测试血清的对照相比细菌减少了50％(即hsba应答结束时存活的细菌)。按照操作方案，hsba是基于hsba效价完成的，所述hsba效价等于或高于在实施例1的表1中列出的菌株的测定鉴定期间确定的hsba测定的定量下限。

人血清是sba的补体来源。然而，hsba效价可能会取决于所使用的人补体批次而变化。因此，人的补体优选通过严格的筛选和鉴定来控制，以确保在hsba中的一致性能。对于hsba，人血清补体可以从多个正常健康成年人汇集或者从个体供体使用(即未汇集)。

实施例3-聚山梨酯80

已经针对药物产品配制优化了三个参数：ph，铝浓度和聚山梨酯80(ps-80)与蛋白质的摩尔比。在总体积为0.5ml的一个剂量的组合物中，在约6.0的ph和约0.5mg/ml浓度的铝如磷酸铝(alpo4)(其相当于每个剂量0.25mg铝)。ps-80与蛋白质的摩尔比保持在2.8±1.4，以便相对于体外功效使制剂稳定。将聚山梨酯80(ps-80)加入到药物物质中以获得2.8的目标ps-80与蛋白质的摩尔比。因此，优选在药物产品配制期间不加入ps-80。

实施例4

与二价rlp2086疫苗伴随施用的在健康青少年中的免疫原性和安全性的随机分组、安慰剂对照、二期研究

背景/目的：评估被开发用于预防青少年脑膜炎奈瑟球菌血清群b(mnb)疾病的研究性二价rlp2086疫苗，并伴随施用目前在该人群中使用的(dtap灭活脊髓灰质炎疫苗)(可描述于美国专利号7479283，wo1990/013313和ep1666057b1以及ukmarketingauthorizationpl06745/0121)。

方法：在0、2和6个月给青少年(1：1随机分组至repevax+rlp2086或repevax+盐水)接种疫苗。测定初次疫苗接种后30天达到9种repevax抗原预先确定抗体水平的受试者比例。在疫苗接种2和3后30天测量对4种mnb测试菌株的免疫应答(hsba)。评估不良事件(ae)和局部/全身反应。

repevax(sanofipasteurmsdlimited)是一种组合低剂量白喉、破伤风、无细胞百日咳和灭活的脊髓灰质炎病毒疫苗，其每0.5ml剂量含有白喉类毒素(不低于2iu)，破伤风类毒素(不低于20iu)，百日咳抗原(百日咳类毒素(2.5微克)，丝状血凝素(5微克)，粘附素(3微克)和2型和3型菌毛(5微克)))，脊髓灰质炎病毒(灭活)1型(40d抗原单位)，脊髓灰质炎病毒(灭活)2型(8d抗原单位)，脊髓灰质炎病毒(灭活)3型(32d抗原单位)，吸附在磷酸铝(1.5mg(0.33mg铝))上。

使用多重luminex测定评估了对repevax(白喉类毒素，破伤风类毒素，百日咳类毒素，粘附素，2型和3型菌毛和丝状血凝素)的白喉、破伤风和百日咳成分的免疫应答。在病毒中和测定中测量对1、2型和3型脊髓灰质炎病毒的免疫应答。在这两种测定中使用从两组中的所有受试者获得的血清。

为了评估对二价rlp2086的免疫应答，在hsba中用描述的4种主要的mnb测试菌株分析了功能性抗体。选择四种主要mnbhsba测试菌株(a22，a56，b44和b24)，2种表达lp2086亚科a，另外2种表达lp2086亚科b变体。这4种主要hsba测试菌株(来自6种fhbp系统发育亚群中的4种，并且代表在美国和欧洲流行的＞90％的疾病分离物)用于确定本研究中的主要免疫原性终点。此外，a22，b24和b44变体在欧洲是流行病学相关的变体，而在美国，a22和b24是发现在mnb菌株引起的疾病中表达的最普遍的变体。在测试用于主要和次要分析的样品之前，验证mnbhsba。

来自两组随机选择受试者中50％的血清样品均用a22和b24进行hsba检测，其余50％用a56和b44测试。这些测试是对疫苗接种1之前，疫苗接种2之后和疫苗接种3之后收集的血液样品进行的。

repevax的免疫原性通过使用形成repevax许可基础的青少年中关键三期临床试验中定义的每种抗原的预先规定的标准进行评估。repevax伴随抗原包括白喉、破伤风、百日咳类毒素，百日咳丝状血凝素，百日咳粘附素，2+3型百日咳菌毛凝集原，1型脊髓灰质炎病毒，2型脊髓灰质炎病毒，3型脊髓灰质炎病毒。例外是2+3型百日咳菌毛凝集原(fim)，在用于repevax许可的测定中定义了≥5eu/ml的效价。在本研究中，2+3型百日咳fim测定的定量下限(lloq)≥10.6eu/ml，比repevax的许可标准更高，因此更严格。

伴随抗原的lloq为0.037iu/ml(白喉类毒素)；0.05iu/ml(破伤风类毒素)；0.9eu/ml(百日咳类毒素)；2.9eu/ml(百日咳丝状血凝素)，3.0eu/ml(百日咳粘附素)；10.6eu/ml(2+3型百日咳菌毛凝集原)；1:8(1型脊髓灰质炎病毒，2型脊髓灰质炎病毒，3型脊髓灰质炎病毒)。

主要目标的附加描述性终点是在疫苗接种1后(就诊2)以几何平均效价(gmt)或几何平均浓度(gmc)测量的抗伴随疫苗抗原的抗体。

另一终点是对于4种主要mnb测试菌株中的每一种，在疫苗接种3后(就诊6)，hsba效价≥lloq的受试者比例。

伴随疫苗抗原。对于组1和组2，在白喉、破伤风和百日咳无细胞(dtap)-ipv(repevax)疫苗接种后1个月达到预先规定标准的伴随疫苗抗原的受试者比例用双侧95％确切(或clopper-pearson置信限)进行计算。还计算比例的差异(二价rlp2086/dtap-ipv-dtap-ipv或组1-组2)以及差异的双侧95％确切ci。如果dtap-ipv疫苗的所有9种抗原的差异的双侧95％ci的下限大于-0.10(-10％)，则宣布非劣性。

用主要测试菌株进行hsba。对于每个主要的mnbhsba测试菌株，在每个血液采样时间点，描述性概括达到hsba效价≥lloq，≥1:4，≥1:8，≥1:16和≥1:128的受试者的数量和比例，以及比例的确切的双侧95％ci(或clopper-pearson置信限)。

结果：749名随机分组的受试者中，685名(91.5％)包括可评估免疫原性群体。repevax+rlp2086或repevax+生理盐水后免疫应答对所有9种repevax抗原均为非劣的。对二价rlp2086疫苗的免疫应答在2个剂量后是显著的，并且在3个剂量后进一步增强(表2)。轻度至中度注射部位疼痛是最常见的局部反应；头痛和疲劳是最常见的全身事件。在疫苗接种后30天内报告ae的受试者比例相似(repevax+rlp2086和repevax+盐水分别为8.8％和11.4％)。

对于伴随疫苗可评估免疫原性群体，，repevax剂量后1个月，达到预先规定抗伴随疫苗抗原的抗体水平(应答阈值)的受试者比例在二价rlp2086+repevax组和单独repevax组之间对于伴随疫苗抗原是相似的：白喉类毒素(每组99.4％)，破伤风类毒素(每组100％)，百日咳类毒素(分别为94.7％和96.0％)，百日咳丝状血凝素(每组100％)，百日咳粘附素(每组100％)，2+3型百日咳菌毛凝集原(分别为97.6％和98.9％)，1型脊髓灰质炎病毒(每组100％)，2型脊髓灰质炎病毒(每组100％)，3型脊髓灰质炎病毒(100％在每组)。

实现了非劣性，因为在repevax剂量后1个月，二价rlp2086+repevax组(组1)和单独repevax组(组2)之间的应答者比例差异的双侧95％ci的下限对于repevax中的9种抗原大于-0.10(-10％)(即，比例差异的95％ci的最低下限为-4.7％(百日咳类毒素)。因此，给予repevax与二价rlp2086诱导的免疫应答不比单独使用repevax诱导的免疫应答差。

评估了4种主要mnb测试菌株中的每一种对于疫苗接种3后可评估免疫原性群体的hsba效价≥lloq的受试者比例。a22的lloq是等于1:16的hsba效价，而所有其他mnb测试菌株的lloq是等于1:8的hsba效价。

对于组1，基线(疫苗接种1之前)hsba效价≥lloq的受试者比例为14.4％(主要mnb菌株a22)，18.2％(a56)，12.7％(b24)，以及6.2％(b44)。对于组2，基线(疫苗接种1之前)hsba效价≥lloq的受试者比例为23.0％(主要mnb菌株a22)，21.8％(a56)，12.9％(b24)，以及6.3％(b44)。

在剂量2的二价rlp2086之后，观察到组1受试者的大量hsba应答，疫苗接种3后1个月3个剂量后观察到额外增加。对于组1(二价rlp2086+repevax)，在疫苗接种2后1个月和疫苗接种3后1个月达到hsba效价≥lloq的受试者比例为81.1％和95.6％(a22)，97.3％和100％(a56)，81.0％和96.8％(b24)，以及55.5％和81.5％(b44)。虽然仅在两个二价rlp2086剂量后实现了大量hsba应答，但与3个剂量(疫苗接种3后1个月)相比，2个剂量(疫苗接种2后1个月)后hsba效价≥lloq的受试者比例增加，这例证了3个剂量后的免疫应答增强。在对照组(组2)中，在疫苗接种2后1个月和疫苗接种3后1个月4种主要mnb测试菌株中每一种的hsba效价≥lloq的受试者比例与每种mnb测试菌株的基线hsba结果(疫苗接种1之前)相似。

对于4种主要mnb测试菌株，组1中表现出限定的hsba效价的受试者比例在3个剂量后大于2个剂量后。描述了达到≥1:16的hsba效价的受试者，因为该效价是从1:4效价(效价≥1:4被广泛认为与保护免受imd侵害相关)提高4倍。对于组1，在疫苗接种2后1个月时hsba效价为1:16的受试者比例为81.8％(a22)，97.3％(a56)，68.0％(b24)，以及53.4％(b44)。疫苗接种后1个月，hsba效价为1:16的受试者比例为95.6％(a22)，100％(a56)，87.3％(b24)，以及79.5％(b44)。

在对照组(组2)中，在疫苗接种2后1个月和疫苗接种3后1个月，4种主要mnb测试菌株中的每一种显示出限定的hsba效价的受试者比例与具有限定的hsba效价的基线受试者比例(疫苗接种1之前)相似。

对于组1，3个剂量的二价rlp2086后，hsba效价为1:16的受试者比例表明，当施用3个剂量的二价rlp2086时，疫苗引起稳健的免疫应答。

hsba几何平均效价(gmt)。一般来说，两组的基线gmt低于hsba的lloq。对于组1，疫苗接种2后1个月的hsbagmt为35.5(a22)，91.1(a56)，15.9(b24)，以及14.6(b44)。疫苗接种3后1个月的hsbagmt为63.4(a22)，151.5(a56)，28.3(b24)，以及36.5(b44)。

对于组1，亚科a菌株的2个剂量后以及亚科b菌株的3个剂量后观察到的gmt均表现出稳健的免疫应答。

评估了显示a22、a56、b24和b44的hsba效价分布的反向累积分布曲线(rcdc)。组1中的rcdc的结果显示，在二价rlp2086的疫苗接种2之后，组1受试者中观察到大量免疫应答；然而，这些图还显示了第三剂量的二价rlp2086的益处，因为更大比例的受试者获得更高的针对4种mnb测试菌株的效价。对于菌株b44，效果最明显。

结论：当伴随给予二价rlp2086时，repevax诱导不比单独使用repevax引起的免疫应答差的免疫应答。二价rlp2086疫苗针对四种不同的mnb测试菌株、特别是代表亚科b的那些菌株诱导了稳健的杀菌应答，在3个剂量之后比2个剂量更大。一般而言，伴随施用安全且耐受性好。

实施例5

研究性脑膜炎球菌血清群b二价rlp2086疫苗在健康青少年中的免疫原性

背景和目的：脑膜炎奈瑟球菌血清群b(mnb)引起婴儿，青少年和成年人的侵袭性疾病。一种保守的，表面暴露的脂蛋白lp2086(因子h结合蛋白[fhbp])是一种有希望的mnb疫苗靶标。在健康青少年(11-18岁)研究了研究性二价重组疫苗(rlp2086)的安全性和免疫原性。

方法：将该安慰剂对照、单盲研究中的受试者随机分为两个3剂量方案和三个2剂量方案。每个120μg剂量含有2种rlp2086抗原，1种来自每个lp2086亚科(a和b)。当没有安排疫苗时，给予盐水。用4种mnb测试菌株(与疫苗fhbp异源)进行使用人补体的血清杀菌测定(hsba)。

结果：1713例受试者(平均年龄14.4岁)随机分组。在3个剂量的疫苗一个月后，分别在95-99％和86-89％的受试者中观察到亚科a和b菌株的hsba效价≥8；2个剂量后，这些数字分别为91-100％和69-77％的受试者。在2剂量方案中，0和6个月诱导最高的抗体应答(实施例5的表1)。4种mnb异源测试菌株的2个剂量后的hsbagmt范围为6.2-125.6，3个剂量后的范围为25.6-155.6。轻度至中度注射部位疼痛是最常见的局部反应。在剂量1后，分别在3.3-6.5％和2.1％的rlp2086和盐水接受者中发生发热≥38℃。

表1.达到每种菌株在最后一次剂量的二价rlp2086后1个月hsba效价≥8*的受试者比例

hsba＝使用人补体的血清杀菌测定。

*所有菌株的定量下限＝8。

基于观察到的受试者比例的确切的双侧置信区间(clopper和pearson)。

p<0.001；<0.0125的值被认为是显著的。p值仅应用于组1、2和3。

表2.每种菌株在最后一次剂量的二价rlp2086后1个月hsbagmt

gmt＝几何平均效价；hsba＝使用人补体的血清杀菌测定。

*使用在给定时间点的所有具有有效和确定的hsba效价的受试者计算gmt。

ci是基于hsba效价平均对数的studentt分布的置信水平的反向变换。

结论：rlp2086耐受良好。所有给药方案产生稳健的杀菌应答，在3个剂量后最显著。

实施例5的表1与上述实施例1的表1相同。表2总结了可评估免疫原性群体按照研究时间的hsbagmt和相应的ci。gmt从基线(注射1之前)增加，并且随后续剂量的二价rlp2086继续增加。

对于4种主要mnb菌株，3个剂量的二价rlp2086(组1和2)之后的gmt比在2个剂量(组3、4和5)之后更大。两个3剂量组之间的gmt相似，三个2剂量组之间的gmt相似。

注射1之前(基线)，组1、2、3、4和5的hsbagmt分别如下：a22分别为7.1、6.3、6.4、6.4和6.8；a56分别为6.8、6.1、6.7、6.3和6.2；b24分别为5.3、5.1、5.0、4.9和5.1；以及b44分别为4.4、4.5、4.5、4.6和4.4。

对于组1(0-，1-和6个月)，所有4种主要mnb菌株在剂量2后1个月后，注意到gmt的显著增加(a22、a56、b24和b44分别为24.4、77.3、13.8和13.1)。对于4种主要mnb测试菌株，组1受试者3个剂量的二价rlp2086后，gmt进一步增加；55.1(a22)；152.96(a56)；29.1(b24)；以及40.3(b44)。

对于组2，在2个和3个剂量的二价rlp2086后，注意到gmt的类似增加。对于a22，组2受试者在2个剂量的二价rlp2086后的gmt为32.9(a22)；94.6(a56)；14.9(b24)；以及15.5(b44)。3个剂量后，gmt增加到56.3(a22)；155.6(a56)；25.6(b24)；以及35.0(b44)。

对于组1和组2，亚科a菌株的2个剂量后以及亚科b菌株的3个剂量后观察到的gmt值均表现出稳健的免疫应答。

对于组3，1个剂量的二价rlp2086后，观察到gmt的微小增加如下：a22为12.0；a56为18.5；b24为9.2；以及b44为5.7。2个剂量后，gmt增加到48.4(a22)；125.6(a56)；20.6(b24)；以及22.5(b44)。

对于组4，在1个剂量的二价rlp2086后，gmt为13.3(a22)；17.7(a56)；9.8(b24)；以及5.9(b44)。在2个剂量的二价rlp2086后，gmt为37.1(a22)；104.9(a56)；17.7(b24)；以及19.1(b44)。

对于组5，在1个剂量的二价rlp2086后，gmt为16.0(a22)；26.8(a56)；12.6(b24)；以及6.8(b24)。在2个剂量的二价rlp2086后，gmt增加到39.6(a22)；111.8(a56)；14.7(b24)；以及17.8(b44)。

综合考虑，对于组3、4和5，观察到的gmt指示了2个剂量的二价rlp2086后亚科a和b菌株的免疫应答。

总之，3个剂量的二价rlp2086提供了基于4种主要mnb测试菌株的hsba效价的稳健且最广泛的免疫应答。与2个剂量相比，接受3个剂量的二价rlp2086的达到针对4种主要mnb测试菌株的hsba效价≥1:8的受试者比例更高。

按照0-，1-和6个月给药方案的结果(组1)与按照0-，2-和6个月给药方案的结果(组2)相似。对于组1和2，剂量3后达到的gmt值高于剂量2后的gmt值。对于组1和组2，亚科a菌株的剂量2后gmt值范围为24.4至94.6，亚科b菌株为13.1至15.5。亚科a菌株的剂量3后gmt值范围为55.1至155.6，亚科b菌株为25.6至40.3。对于组1和组2，与2个剂量的二价rlp2086后达到针对4种主要mnb测试菌株的hsba效价≥1:8的受试者比例相比，在3个剂量的二价rlp2086后，达到针对4种主要mnb测试菌株的hsba效价≥1:8的受试者比例更高。

还评估了达到≥1:16的hsba效价的受试者。对于组1，2个剂量的二价rlp2086后一个月达到hsba效价≥1:16的受试者百分比为73.5％(a22)；96.3(a56)；57.6(b24)；以及47.2％(b44)。3个剂量的二价rlp2086后，达到hsba效价≥1:16的组1受试者的百分比为91.4％(a22)；99.5％(a56)；82.8％(b24)；以及84.8％(b44)。

对于组2，2个剂量的二价rlp2086后1个月达到hsba效价≥1:16的受试者百分比为88.1％(a22)；97.9％(a56)；63.5％(b24)；以及58.6％(b44)。3个剂量的二价rlp2086后，达到hsba效价≥1:16的组2受试者的百分比为95.0％(a22)；98.9％(a56)；83.6％(b24)；以及83.8％(b44)。

对于组1和组2，3个剂量的二价rlp2086后达到hsba效价≥1:16的受试者百分比表明疫苗引起了稳健的免疫应答。

对于组3，2个剂量的二价rlp2086后达到≥1:16的hsba效价的受试者百分比为93.2％(a22)；98.4％(a56)；73.8％(b24)；以及70.8％(b44)。

对于组4，2个剂量的二价rlp2086后1个月达到hsba效价≥1:16的受试者百分比为90.8％(a22)；99.2％(a56)；67.1％(b24)；以及64.5％(b44)。

对于组5，2个剂量的二价rlp2086后达到≥1:16的hsba效价的受试者百分比为91.0％(a22)；99.1％(a56)；64.5％(b24)；以及66.7％(b44)。

对于组3、4和5，达到hsba效价≥1:16的受试者百分比表明，疫苗仅在2个剂量后引起对亚科a菌株的稳健免疫应答。然而，3个剂量增加了对亚科b菌株的应答的稳健性。

3个剂量的二价rlp2086后，达到hsba效价≥1:16的受试者百分比显示，疫苗对表达与疫苗组分不同的lp2086变体的mnb菌株引起了稳健且广泛的免疫应答。

还对于可评估免疫原性群体、每种菌株按组评估了按照研究时间显示hsba效价分布的反向累积分布曲线(rcdc)。rcdc在2个剂量的二价rlp2086后针对亚科a菌株显示出稳健的免疫应答。在第三剂量的二价rlp2086之后，应答曲线下的面积对于所有4种主要mnb测试菌株增加，从而证明3个剂量的二价rlp2086后免疫应答的增加。

主要和次要免疫原性终点分析的结果表明，疫苗可以产生针对mnb的异源亚科a和亚科b变体具有显著hsba活性的抗体。虽然在2或3个剂量的二价rlp2086后，达到hsba效价≥1:8的受试者的比例更高，但在1个剂量的二价rlp2086后1个月，大部分受试者的hsba效价≥1:8。参见例如组5。

对于4种主要mnb测试菌株，3个剂量的二价rlp2086(组1和2)之后的gmt比在2个剂量(组3、4和5)之后更大。两个3剂量组的gmt相似。三个2剂量组之间的gmt也相似。这些数据还显示了基于达到hsba效价≥1:16的受试者百分比的3个剂量的二价rlp2086后的稳健的hsba应答。

这些数据表明，二价rlp2086的最终制剂产生稳健的免疫应答，当以2或3个剂量给药时，其安全且耐受良好。即便是1个剂量的二价rlp2086也提供了高于基线的大量免疫应答，并且也是安全且耐受良好的。总体来说，2或3个剂量的二价rlp2086后，安全性方面没有明显的临床意义上的差异。

实施例6

脑膜炎球菌血清群b二价rlp2086疫苗在三个二期、随机分组、对照研究中在11-18岁健康青少年中的安全性，耐受性和免疫原性

背景：脑膜炎奈瑟球菌血清群b(mnb)是青少年中侵袭性脑膜炎球菌病的主要原因。保守的表面暴露的脂蛋白lp2086(因子h结合蛋白[fhbp])是保护免受mnb引起的侵入性疾病的有希望的疫苗靶标。在对于11-18岁健康青少年的三个2期、随机分组、对照研究中进行了检查了研究性二价重组mnb疫苗(包括seqidno：1和seqidno：2，摩尔比为2.8的聚山梨酯80，0.5mg/ml铝，10mm组氨酸和150mm氯化钠，在整个实施例中称为“二价rlp2086”)的安全性，耐受性和免疫原性。

方法：研究1012检查了二价rlp2086的5种疫苗方案，而研究1010和1011分别评估了与tdap-ipv和hpv疫苗伴随给予的二价rlp2086疫苗的3剂量方案。每个剂量的二价rlp2086含有60μg的rlp2086亚科a变体a05和60μg的rlp2086亚科b变体b01。为了检查三个研究中每一个的二价rlp2086的免疫原性，使用表达异源fhbp变体a22、a56、b24和b44的4种mnb测试菌株进行使用人补体的血清杀菌测定(hsba)，这些菌株被选择为代表fhbp变异性的相关多样性，以及提供针对表达流行病学流行的fhbp变体的菌株的疫苗引发的免疫应答的广度的观点。评估不良事件和征集的局部和全身反应。

结果：在所有3项研究中，82-100％的受试者在剂量3后1个月达到高于4种mnb测试菌株中每一种的定量下限(lloq)的hsba效价(表)。在三项研究中，大多数全身事件和局部反应的严重程度轻微至中度；不良事件一般不严重或与研究疫苗有关。

结论：高于1:4的血清杀菌抗体效价可防止免受侵袭性脑膜炎球菌病侵害。在这些青少年2期研究中每一项研究中，针对4种mnb测试菌株(每种与疫苗抗原异源)的hsba效价≥lloq的证明表明，二价rlp2086疫苗提供了可能针对多种mnb疾病相关菌株的广泛活性的功能性抗体应答。二价rlp2086的疫苗接种通常耐受良好。

表.达到由每种测试菌株表达的每种fhbp变体在最后一次剂量的二价rlp2086疫苗后1个月hsba效价≥lloq的受试者比例

lloq＝定量下限；fhbp＝因子h结合蛋白；hsba＝使用人补体的血清杀菌测定；tdap-ipv疫苗＝破伤风、白喉、百日咳、脊髓灰质炎疫苗。

lloq＝样品中可被定量测定的最低量的分析物。≥1:4的hsba效价是保护免受侵袭性脑膜炎球菌疾病侵害的相关因素。≥lloq的hsba效价高于最小相关因素。lloq为1:16(a22)以及1:8(a56，b24，以及b44)。

实施例7

当与人乳头瘤病毒疫苗伴随施用时脑膜炎球菌血清群b二价rlp2086疫苗在11-18岁的健康青少年中的免疫原性

该2期、随机分组、观察者盲、对照研究在≥11至<18岁的健康青少年中评估了与共同施用或不共同施用的二价rlp2086的免疫原性，是针对人乳头状瘤病毒(hpv4)的四价疫苗(也在美国专利号5,820,870中描述)。gardasil含有hpv6型、11型、16型和18型(即hpv-6，hpv-11，hpv-16和hpv-18)l1蛋白的重组抗原。在每个适用的血液采样时间点，4种主要mnb测试菌株中的每一种的终点是hsbagmt。

方法：受试者在第0，第2和第6个月接受二价rlp2086(包括seqidno：1和seqidno：2，摩尔比为2.8的聚山梨酯80，0.5mg/ml铝，10mm组氨酸和150mm氯化钠)+hpv4(组1)，二价rlp2086+盐水(组2)或者hpv4+盐水(组3)。使用4种mnb测试菌株使用人补体进行血清杀菌测定(hsba)测试了来自疫苗接种1之前和疫苗接种2和3后1个月的血清，所述菌株每种表达与疫苗组分异源的fhbp(a22，a56，b44和b24)，代表fhbp多样性的广度以及流行病学流行。评估的终点包括具有hsba效价≥下限定量(lloq；1:16[a22]或1:8[a56，b44，b24])和hsba几何平均效价(gmt)的受试者比例。

为了证明与单独的gardasil相比，给予gardasil加二价rlp2086的非劣性，使用代表亚科a变体的1个主要测试菌株(a22)和代表亚科b变体的1个主要测试菌株(b24)，使用2个hsba进行免疫原性评估。然而，所有4种主要mnb测试菌株用于测定额外的二价rlp2086免疫原性/功效探索性终点。

为了评估对二价rlp2086的免疫应答，如实施例2所述，随机选择辉瑞代表性的mnbsba菌株库的脑膜炎球菌血清群b菌株在hsba中分析功能性抗体。hsba测量人血清中的功能性抗体，其在补体依赖方式杀死目标脑膜炎球菌株。

结果：814和812名受试者分别包括组1和组2的可评估免疫原性群体。与疫苗接种1之前相比，疫苗接种2(55％-99％)和3(83％-99％；图1)后所有4种测试菌株的hsba效价≥lloq的受试者比例更高。实施例7的表a显示了可评估免疫原性群体按照取样时间点4种主要mnb菌株中的每一种的hsbagmt和相应的ci。两组的基线gmt低于hsballoq。组1和组2在疫苗接种1后，gmt范围分别为11.1-70.6和11.9-76.3，疫苗接种2后分别为25.8-117.2和28.0-128.2(下表a)。

对于可评估免疫原性群体，在疫苗接种3后1个月组1和组2的3个二价rlp2086剂量针对2种主要mnb菌株的hsbagmt分别如下：a22分别为53.3和57.8，b24分别为25.8和28.0。

对于组2(二价rlp2086+盐水)，在疫苗接种2后1个月hsbagmt如下：a22为33.7，a56为76.3，b24为16.3，以及b44为11.9。疫苗接种3后1个月的hsbagmt如下：a22为57.8，a56为128.2，b24为28.0，以及b44为31.9。

对于组1(二价rlp2086+gardasil)，在疫苗接种2后1个月hsbagmt如下：a22为31.9，a56为70.6，b24为15.0，以及b44为11.1。在疫苗接种3后2个月hsbagmt如下：a22为53.3，a56为117.2，b24为25.8，以及b44为27.2。

对于可评估免疫原性群体，评估了在所有取样时间点显示a22、a56、b24和b44的hsba效价分布的反向累积分布曲线(rcdc)。rcdc显示大多数受试者在疫苗接种2后应答，并且在疫苗接种3之后对4种主要mnb测试菌株的效价进一步增加。对于组1和组2，对抗原的免疫应答是相似的。

结论：二价rlp2086可与hpv4一起施用，不影响hsba血清应答或gmt评估的杀菌应答。由于hsba效价≥1:4与保护免受脑膜炎球菌疾病侵害相关，这些数据表明，在伴随施用hpv疫苗的情况下施用二价rlp2086后，青少年对广泛范围的mnb菌株有保护作用。

表a.hsbagmt–可评估免疫原性群体

gmt＝几何平均效价；hpv4＝四价人乳头瘤病毒疫苗；hsba＝使用人补体的血清杀菌测定。

^an＝对于给定菌株具有有效和确定的hsba效价的受试者数量。

^b在规定时间点使用所有具有有效和确定的hsba效价的受试者计算几何平均效价。

^c置信区间是基于hsba效价平均对数的studentt分布的置信区间的反向变换。

实施例8

在健康青少年中与针对脑膜炎球菌血清群b的二价rlp2086疫苗共同施用的人乳头瘤疫苗的免疫原性

背景：该2期随机分组研究评估了针对人乳头状瘤病毒(hpv4)的四价疫苗与二价rlp2086(针对由脑膜炎奈瑟球菌血清群b(mnb)引起的侵袭性疾病的研究性疫苗)在年龄≥11至<18岁的健康青少年中的共同施用。

方法：受试者在第0、2和6个月时接受hpv4+二价rlp2086(组1)，二价rlp2086+盐水(组2)或盐水+hpv4(组3)。在基线和剂量2和3后在所有组中收集血清。通过竞争性luminex免疫测定(clia)测定对hpv4抗原(hpv-6、11、16和18)的免疫应答。通过用表达疫苗异源fhbp变体的2种mnb测试菌株(a22和b24)使用人补体的血清杀菌测定法(hsba)测量二价rlp2086的免疫原性。均在剂量3之后的免疫原性终点包括：组1和组3中针对hpv抗原的几何平均效价(gmt)；组1和2中表达变体a22和b24的菌株的hsbagmt；和组1和组3基线血清阴性受试者中hpv抗原的血清转化率。在与hpv4或盐水伴随施用后，还评估了二价rlp2086的安全性。

使用基于荧光标记的基于微球的平台(luminex)的clia进行对gardasil(hpv6型、11型、16型和18型l1蛋白)的免疫应答的评估。在使用gardasil进行第一次疫苗接种之前(就诊1)和使用gardasil(就诊5)进行第三次疫苗接种后1个月从组1和组3的所有受试者获得的血清用于这些测定。

组1和组3对4种hpv抗原的gmt比较，以及其对应的组1与3组的gmt比(gmr)和比率的双侧95％ci列于本实施例后面的表a。非劣性边界的标准为1.5倍，其对应于gmr的双侧95％ci的下限值为0.67。所有mnb测试菌株和除hpv-18(其95％置信区间(ci)下限为0.62)之外的hpv抗原均满足0.67的1.5倍标准。在分开的分析中，≥99％的受试者在盐水+hpv4和rlp2086+hpv4两组中血清转化所有4种hpv抗原。

本研究的另一个目标是描述由二价rlp2086+gardasil(组1)和盐水+gardasil(组3)诱导的免疫应答，如通过在两组中疫苗接种3剂gardasil后(就诊5)的hpv免疫原性测定中血清转化所测量的。

在组1和组3基线时hpv血清阴性的受试者的最后一次剂量gardasil后1个月，4种hpv抗原中的每一种的血清转化率计算为具有抗hpv血清clia水平hpv-6为≥20mmu/ml，hpv-11为≥16mmu/ml，hpv-16为≥20mmu/ml，hpv-18为≥24mmu/ml的受试者的比例。

基线hpv阴性血清阴性受试者的数量和比例达到4种hpv抗原血清转化的预先规定标准，每组具有相应的95％ci，比例的百分比差异(组1-组3)和差异的95％ci在实施例8的表b中给出了基线hpv-血清阴性可评估免疫原性群体。

结果：4种hpv抗原中的3种(不是hpv-18)和两种mnb测试菌株，满足预先规定的1.5倍的非劣性标准(gmr的95％ci的下限为0.67)(表a)。组1和组3中所有hpv抗原的血清转化率均≥99％(表b)。rlp2086之后与盐水相比发生更大的局部反应原性，但没有增加后续剂量；注射部位疼痛是最常见的局部反应。一般而言，所有3组的全身事件的严重程度轻微和中度。

对于可评估免疫原性群体，组1和组3在gardasil剂量疫苗接种3后1个月时抗4种hpv抗原的抗体的gmt分别如下：451.8和550.3(hpv-6)；892.9和1084.3(hpv-11)；3695.4和4763.4(hpv-16)；以及744.0和1047.4(hpv-18)。在gardasil剂量疫苗接种3后1个月时组1与组3的gmr对于hpv-6(95％ci：0.72,0.94)为0.82，对于hpv-11(95％ci：0.74,0.91)为0.82，对于hpv-16(95％ci：0.68,0.88)为0.78，以及对于hpv-18(95％ci：0.62,0.81)为0.71。因此，与组3相比，组1的抗hpvgmr的双侧95％ci的下限对于hpv6为0.72，对于hpv-11为0.74，对于hpv-16为0.68，以及对于hpv-18为0.62。除hpv-18(95％ci的下限为0.62)外，所有hpv抗原均满足0.67(gmr双侧95％ci的下限)的1.5倍标准。

疫苗接种3个二价rlp2086剂量后1个月的二价rlp2086+gardasil组与二价rlp2086+盐水组的gmr值对于a22为0.92(95％ci：0.85,1.00)，以及对于b24为0.92(95％ci：0.84，1.01)。与组2相比，组1的hsbagmr的双侧95％ci的下限对于a22为0.85和对于b24为0.84，二者均大于0.67，因此满足1.5倍的非劣性边界。

通过分析2个主要mnb菌株(a22和b24)在疫苗接种3后1个月时的hsba效价4倍应答率，将二价rlp2086+gardasil(组1)施用的数据与来自二价rlp2086+盐水(组2)施用的数据进行比较。对于接受二价rlp2086+gardasil的组1受试者和接受二价rlp2086+盐水的组2受试者，测量了2种主要mnb菌株从基线到疫苗接种3后1个月的hsba效价倍数升高≥4的受试者比例。在组1的受试者中，85.3％的针对b24的hsba效价倍数升高≥4。在组2的受试者中，86.4％的针对a22的hsba效价倍数升高≥4，84.8％的针对b24的hsba效价倍数升高≥4。

在疫苗接种后1个月组1与2组之间在应答者比例中的差异对于a22为-1.1％(95％ci：-4.6,2.3)，对于b24为-1.4％(95％ci：-5.1,2.3)。4倍应答率的差异均接近1％的值，比例差异的95％ci的下限对于a22为-4.6％，并且对于b24为-5.1％。

二价rlp2086+gardasil与盐水+gardasil相比或与二价rlp2086+盐水相比的非劣性标准要求所有4种hpv抗原(hpv-6，hpv-11，hpv-16和hpv-18)的抗hpv抗体的gmr以及在疫苗接种3后1个月使用2个主要mnb测试菌株(a22和b24)的hsba效价的双侧95％ci的下限大于0.67。对于两种mnb测试菌株和4种hpv抗原中的至少3种，满足了该预先规定的标准。对于hpv-18，gmr的双侧ci的下限略低于0.67的预设阈值，为0.62。

在接受二价rlp2086+gardasil的组与接受二价rlp2086+盐水的组之间，对2种主要mnb测试菌株(a22和b24)的4倍升高应答相似(范围为83.4％至86.4％)。

对于菌株a22，组1和2中疫苗接种前(即疫苗接种1之前)hsba效价≥1:4的受试者比例分别为15.2％和18.8％；对于菌株a56分别为10.4％和10.5％；对于菌株b24分别为6.1％和8.4％以及对于菌株b44分别为1.7％和3.2％。此外，对于a22型菌株，组2和组1中疫苗接种前(即疫苗接种1之前)hsba效价≥1:16的受试者比例分别为13.7％和16.4％；对于菌株a56分别为9.0％和9.1％；对于菌株b24分别为4.1％和5.4％，以及对于菌株b44分别为1.2％和2.1％。

在组2(二价rlp2086+盐水)中，疫苗接种2后1个月hsba效价≥1:4的受试者比例如下：a22为86.3％，a56为98.7％，b24为77.1％，以及b44为60.1％。疫苗接种3后1个月hsba效价≥1:4的受试者比例如下：a22为96.4％，a56为99.4％，b24为92.8％，以及b44为86.5％。在组1(二价rlp2086+gardasil)中，疫苗接种2后1个月hsba效价≥1:4的受试者比例如下：a22为83.8％，a56为97.8％，b24为71.9％，以及b44为57.7％。疫苗接种3后1个月hsba效价≥1:4的受试者比例如下：a22为94.3％，a56为99.1％，b24为91.1％，以及b44为84.4％。

在组2(二价rlp2086+盐水)中，疫苗接种2后1个月hsba效价≥1:16的受试者如下：a22为85.8％，a56为98.4％，b24为68.8％，以及b44为49.9％。疫苗接种3后1个月hsba效价≥1:16的受试者如下：a22为96.3％，a56为99.4％，b24为89.2％，以及b44为82.4％。在组1(二价rlp2086+gardasil)中，疫苗接种2后1个月hsba效价≥1:16的受试者比例如下：a22为83.0％，a56为97.2％，b24为65.2％，以及b44为46.4％。疫苗接种3后1个月hsba效价≥1:16的受试者比例如下：a22为94.0％，a56为98.9％，b24为86.3％，以及b44为78.0％。

对于组1和组2，高比例的受试者在2或3个剂量的二价rlp2086后达到≥1:16或更高的hsba效价，而大多数受试者在疫苗接种前就诊1时对于任何主要mnb测试菌株没有可测量的hsba效价。

对于基线hpv-血清阴性可评估免疫原性群体，二价rlp2086+gardasil组(组1)和盐水+gardasil组(组3)在疫苗接种3的gardasil剂量后1个月达到hpv抗原的hpv血清转化的预定标准的受试者比例如下：hpv-6(分别为99.4％和99.3％)，hpv-11(分别为99.6％和99.5％)，hpv-16(分别为99.6％和99.5％)，以及hpv-18(分别为99.5％和99.0％)。

gardasil剂量后1个月，二价rlp2086+gardasil组(组1)和盐水+gardasil组(组3)之间的应答者的比例差异对于hpv-6为0.1％(95％ci；-0.9,1.5)，对于hhpv-11为0.1％(95％ci：-0.7,1.3)，对于hpv-16为0.1％(95％ci为-0.7,1.3)，以及对于hpv-18为0.5％(95％ci为-0.6，1.9)。

对于二价rlp2086+gardasil组(组1)和盐水+gardasil组(组3)，所有4种hpv抗原的血清转化率差异均在0.1％和0.5％之间，血清转化率在各组间非常相似，超过99％的受试者血清转化所有4种hpv抗原。

作为额外的评估，通过分析疫苗接种3后1个月2个主要mnb菌株(a22和b24)的hsba效价4倍的应答率，将二价rlp2086+gardasil(组1)与二价rlp2086+盐水(组2)进行比较。达到从基线到疫苗接种3后1个月2个主要mnb菌株的hsba效价倍数升高≥4的受试者比例如下：在组1的受试者中，85.3％表现出针对测试菌株a22的hsba效价倍数升高≥4，83.4％表现出针对测试菌株b24的hsba效价倍数升高≥4。在组2的受试者中，86.4％表现出针对测试菌株a22的hsba效价倍数升高≥4，84.8％表现出针对测试菌株b24的hsba效价倍数升高≥4。

疫苗接种3后1个月组1与组2之间应答者比例差异对于a22为-1.1％(95％ci：-4.6,2.3)，对于b24为-1.4％(95％ci：-5.1,2.3)。4倍应答率差异均接近1％，比例差异95％ci的下限为-4.6％(a22)和-5.1％(b24)。

对二价rlp2086的免疫应答。本研究的另一个目标是描述通过用4个主要mnb测试菌株，2个表达lp2086亚科a蛋白(a22和a56)和2个表达lp2086亚科b蛋白(b24和b44)的hsba测量的免疫应答，第二次就诊(就诊3)和第三次(就诊5)用二价rlp2086疫苗接种后1个月测量。

该目标的一个终点是在疫苗接种2(就诊3)后1个月和疫苗接种3(就诊5)后1个月，4个主要mnb测试菌株中的每一种的hsba效价≥lloq的受试者比例。评估了四种主要mnb测试菌株对于可评估免疫原性群体的hsba效价≥lloq的受试者比例。a22的lloq是等于1:16的hsba效价，而所有其他mnb测试菌株的lloq为等于1:8的hsba效价。

对于组2(二价rlp2086+盐水)，基线(疫苗接种1之前)的hsba效价≥lloq的受试者比例如下：a22为16.4％，a56为9.3％，b24为6.9％，以及b44为2.5％。对于组2，在疫苗接种2后1个月和疫苗接种3后1个月后达到hsba效价≥lloq的受试者比例如下：a22分别为85.8％和96.3％，a56分别为98.5％和99.4％，b24分别为74.2％和92.6％，以及b44分别为57.1％和85.7％。

对于组1(二价rlp2086+gardasil)，基线(疫苗接种1之前)hsba效价≥lloq的受试者比例如下：a22为13.7％，a56为9.2％，b24为5.1％，b44为1.4％。对于组1，在疫苗接种2后1个月和疫苗接种3后1个月达到hsba效价≥lloq的受试者比例如下：a22分别为83.0％和94.0％，a56分别为97.5％和98.9％，b24分别为70.6％和90.5％；以及b44分别为54.5％和82.7％。

在疫苗接种2后1个月，观察到1组和组2受试者对4种主要mnb测试菌株的大量hsba应答，疫苗接种3后1个月观察到额外增加。

评估了达到对四种主要mnb测试菌株中每一种的hsba效价升高≥4的受试者比例以及达到可评价免疫原性群体的复合应答的受试者比例。在基线(疫苗接种1之前)组合的所有4种mnb菌株观察到的hsba效价≥lloq的受试者比例在组1(0.3％)和组2(0.7％)之间是相似的。

对于组2(二价rlp2086+盐水)，从基线至疫苗接种3后1个月达到hsba效价倍数升高≥4的受试者比例如下：a22为86.4％，a56为95.3％，b24为84.8％，b44为80.7％，并且83.9％的受试者达到复合hsba应答(对于组合的所有4种主要菌株hsba≥lloq)。疫苗接种2后1个月，从基线达到hsba效价倍数升高≥4的受试者比例如下：a22为74.2％，a56为92.6％，b24为63.4％，b44为47.4％，并且51.9％的受试者达到复合hsba应答。

对于组1(二价rlp2086+生理盐水)，从基线至疫苗接种3后1个月达到hsba效价倍数升高≥4的受试者比例如下：a22为86.4％，a56为95.3％，b24为84.8％，b44为80.7％，并且83.9％的受试者达到复合hsba应答(对于所有组合的4种主要菌株hsba≥lloq)。疫苗接种2后1个月，从基线达到hsba效价倍数升高≥4的受试者比例如下：a22为74.2％，a56为92.6％，b24为63.4％，b44为47.4％，并且51.9％的受试者达到复合hsba应答。

额外的hsba倍数应答。其他终点是对于4个主要mnb菌株中的每一个，达到从基线到每个疫苗接种后血液取样就诊至少2倍和3倍hsba效价的受试者比例。注意，a22的lloq是等于1:16的hsba效价，而所有其他mnb测试菌株的lloq是等于1:8的hsba效价。

组1和组2的达到从基线至疫苗接种2后1个月对于mnb菌株的hsba效价≥2倍升高的受试者比例如下：a22分别为77.3％和81.1％，a56分别为94.4％和95.3％，b24分别为63.0％和66.0％；和b44分别为46.1％和48.6％。组1和组2的达到从基线至疫苗接种3后1个月对于mnb菌株的hsba效价倍数升高≥2的受试者比例如下：a22分别为90.2％和92.8％，a56分别为97.2％和97.9％，b24分别为84.6％和87.2％，以及b44分别为77.7％和81.7％。

组1和组2的达到从基线至疫苗接种2后1个月对于mnb菌株的hsba效价倍数升高≥3的受试者比例如下：a22分别为73.1％和74.2％，a56分别为92.5％和92.6％，b24分别为61.3％和63.4％和b44分别为45.7％和47.4％。组1和组2的达到从基线至疫苗接种3后1个月对于mnb菌株的hsba效价倍数升高≥3的受试者比例如下：a22分别为85.3％和86.4％，a56分别为95.0％和95.3％，b24分别为83.4％和84.8％，b44分别为77.0％和80.7％。

总结目标描述性终点，组1(二价rlp2086+gardasil)和组2(二价rlp2086+盐水)的大多数受试者对于所有4种主要mnb测试菌株均为hsba效价≥lloq，而只有非常小比例的受试者在基线(疫苗接种之前就诊1)时具有可测量的hsba效价≥lloq。在疫苗接种2后1个月观察到具有4种mnb菌株的大量免疫应答，在组1和组2受试者接种疫苗3后1个月观察到额外增加。该结论由3个剂量后hsba效价≥1:16的受试者比例，观察到的两组中2个剂量后和3个剂量后达到的gmt以及4种主要mnb测试菌株的rcdc证实。

对于组1和组2，高比例的受试者在第三次研究疫苗接种后，对于所有4种主要mnb菌株中的每一种的hsba效价倍数升高≥4，复合hsba应答≥lloq。

此外，大多数受试者在所有采样时间点对于组1(二价rlp2086+gardasil)和组2(二价rlp2086+盐水)达到4个主要mnb菌株的hsba效价倍数升高≥2。满足这些标准结果的受试者比例在3次疫苗接种后比2次疫苗接种更高。

这些结果支持以下证据，当与hpv疫苗gardasil共同施用时，对二价rlp2086的免疫应答产生与对二价rlp2086+盐水的免疫应答相当的稳健的免疫应答。

hpvgmt。实施例8的表b列出了在可评估免疫原性群体中，组1(二价rlp2086+gardasil)和组3(盐水+gardasil)的疫苗接种3后1个月的4种hpv抗原中的每一种的gmt和相应的ci。

对于组3，基线(疫苗接种1之前)和疫苗接种3后1个月的hpvgmt如下：hpv-6分别为6.0和550.3；hpv-11分别为4.3和1084.3；6.1和4763.4；和hpv-18分别为5.3和1047.4。对于组1(二价rlp2086+gardasil)，基线(疫苗接种1之前)和疫苗接种3后1个月的hpvgmt如下：hpv-6分别为5.8和451.8；hpv-11分别为4.2和892.9；hpv-16分别为5.8和3695.4；和hpv-18分别为5.2和744.0。总体而言，与组1相比，组3的gmt数值较高。针对组1(二价rlp2086+gardasil)和组3(盐水+gardasil)评估了在所有采样时间点针对可评估免疫原性群体显示hpv-6，hpv-11，hpv-16和hpv-18效价分布的反向累积分布曲线(rcdc)。对于组1和组3，rcdc在疫苗接种3后在受试者中显示出稳健的免疫应答。

对gardasil的免疫应答概述。与组1(二价rlp2086+gardasil)相比，组3(盐水+gardasil)的对hpv抗原的gmt数值更高，疫苗接种3后观察到的hpvgmt指示了两组的稳健的免疫应答。rcdc也支持组1和组3接种疫苗3后的稳健的免疫应答。这一点也受到4种hpv抗原血清阳性状态的受试者比例的支持，两组的接受疫苗接种3后1个月的受试者比例大于99％。在组3(盐水+gardasil)中年龄较小的亚组比年龄较大的亚组具有更高的hpvgmt。当gardasil与二价rlp2086伴随给予时，这种差异得以保持。

免疫原性结论。二价rlp2086_gardasil与盐水+gardasil相比或与二价rlp2086+盐水相比的非劣性标准要求所有4种hpv抗原(hpv-6，hpv-11，hpv-16和hpv-18)的hpv抗体的几何平均效价比(gmr)以及在疫苗接种3后1个月使用2个主要mnb测试菌株(a22和b24)的hsba效价的双侧95％ci的下限大于0.67。对于两种mnb菌株和4种hpv抗原中的3种，满足了该预先确定的阈值。对于hpv-18，gmr的双侧95％ci的下限略低于0.67的预设阈值，为0.62。

对于与二价rlp2086或盐水伴随接受gardasil的组的99％或更多受试者，达到了所有4种hpv抗原的血清转化。所有4种hpv抗原的rcdc显示，大多数受试者在接种疫苗3后1个月达到高于血清转化阈值的应答。对于接受gardasil的两组，均观察到相对于基线的稳健的gmt。

在以下两组之间，针对两个主要mnb测试菌株(a22和b24)的4倍升高应答相似(范围为83.4％至86.4％)：接受二价rlp2086+gardasil的组(分别为85.3％和83.4％)和接受二价rlp2086+盐水的组(分别为86.4％和84.8％)。

使用4个主要mnb测试菌株(a22、a56、b24和b44)进一步描述性分析对二价rlp2086的应答。对于接受二价rlp2086的两组可评估免疫原性群体(与gardasil伴随(二价rlp2086+gardasil)或者与盐水伴随(二价rlp2086+盐水))，在疫苗接种2或3后1个月，高比例的受试者达到了hsba效价倍数升高≥4和复合应答(所有4个主要mnb测试菌株和与3期临床程序中使用的相同的免疫原性/功效终点定义)。这些应答明显高于hsba效价≥1:4，其已证明与保护免受脑膜炎球菌疾病(包括血清群b疾病)侵害相关。这些结果还表明并支持这样的证据：无论是与盐水还是与gardasil伴随施用，对二价rlp2086产生稳健的免疫应答。

结论：数据表明，在伴随施用rlp2086+hpv4后，产生对两种疫苗的稳健的免疫应答。6种抗原中的5种符合预先规定的非劣性标准。虽然hpv-18的gmr较接近地错过了非劣性标准，但高比例的应答者(≥99％)表明预计在伴随施用后维持临床有效性。二价rlp2086良好耐受，并引发了对表达与疫苗中那些异源的fhbp的测试菌株的稳健的免疫应答。

表a.比较疫苗接种3后1个月的几何平均效价(可评估免疫原性群体)

ci＝置信区间；gmt＝几何平均效价；hpv＝人乳头瘤病毒；hsba＝使用人补体的血清杀菌测定；

lloq＝定量下限；na＝不适用。

注:lloq＝11mmu/ml(hpv-6),8mmu/ml(hpv-11)；11mmu/ml(hpv-16)；以及10mmu/ml(hpv-18)。lloq＝1:16(a22)；1:8(a56,b24,以及b44)。低于lloq的结果设为0.5*lloq用于分析。

a.n＝对于给定抗原或菌株具有有效和确定的hsba效价的受试者数量。

b.使用在疫苗接种3后1个月的所有具有有效和确定的测定结果计算几何平均效价(gmt)。

c.置信区间(ci)是基于测定结果平均对数的studentt分布的置信水平的反向变换。

d.gmt之比(组1/组3为hpv抗原效价而组1/组2为hsba菌株效价)。

e.比的置信区间(ci)是基于这些测量的对数的平均差异的studentt分布的置信区间的反向变换。(组1-组3(hpv效价)和组1-组2(hsba菌株效价))。

表b.比较在疫苗接种3后1个月达到hpv血清转化的受试者——基线hpv血清阴性可评估免疫原性群体

ci＝置信区间；hpv＝人乳头瘤病毒。

a.n＝对于给定抗原具有基线hpv血清阴性状态的受试者数量。

b.n＝对于给定抗原在疫苗接种3后1个月达到血清转化(预先规定的标准)的受试者数量。

c.基于观察到的受试者比例的确切的双侧置信区间(clopper和pearson)。

d.比例差异，以百分比表示。

e.比例差异的确切的双侧置信区间(基于chan&zhang)，以百分比表示。

实施例9：二价rlp2086疫苗功效

已经使用hsba应答作为功效替代物和对侵袭性脑膜炎奈瑟球菌血清群b(mnb)菌株的血清杀菌抗体应答的证明来推断二价rlp2086的功效。

在评估中使用了四种mnb菌株，代表引起侵袭性脑膜炎球菌病(imd)的菌株。每个mnb测试菌株表达与疫苗组分(a05和b01)异源(不同)的fhbp蛋白质变体(a22，a56，b24或b44)。

在美国和欧洲的11至18岁的4,459名青少年中进行的3项随机对照ii期研究中评估了二价rlp2086的疗效。另见实施例6。总共2,293名使用0个月、2个月和6个月疫苗接种方案接受至少1个剂量的120μg二价rlp2086。通过在用二价rlp2086接种的受试者中评估hsba免疫应答来评估功效。

使用5个共同的主要免疫原性终点推断功效。对于5个共同主要终点中的4个，预先规定比例的受试者在3个剂量的二价rlp2086后，在4个mnb测试菌株中的每一个中必须达到hsba效价的4倍升高。第五个共同主要终点是一个复合终点，其要求预先规定的高比例受试者在3个剂量的二价rlp2086后，在用主要的mnb测试菌株所有4个hsba中各自应答。还根据在第三剂量的疫苗后1个月达到hsba效价≥定量下限(lloq)的受试者比例评估免疫应答。lloq定义为可测量样品中抗体的最低量。

研究1(在实施例7和实施例8中描述)是ii期、随机分组、活性对照、观察者盲法、多中心试验，其中2499名11至17岁的受试者被随机分配(以2:2:1比例)至3个组之一：组1接受二价rlp2086+hpv4，组2接受二价rlp2086+盐水，组3接受盐水+hpv4。所有的疫苗接种均以0个月、2个月和6个月的方案进行。

研究2(实施例4中描述)是ii期，随机分组，安慰剂对照，单盲试验，其中753名11至18岁的欧洲受试者以1：1的比例随机分配至2组：组1在0个月、2个月和6个月接受二价rlp2086，在0个月接受dtap-ipv(白喉、破伤风、无细胞百日咳-灭活的脊髓灰质炎病毒)。组2在0个月、2个月和6个月时接受盐水和在0个月接受dtap-ipv。

研究3(实施例5中所述)是ii期，随机分组，安慰剂对照，单盲，多中心试验，其中1,713名11至18岁的欧洲受试者以3:3:3:2:1的比随机分配至5个组。受试者接受2或3个剂量的二价rlp2086以0个月、1个月和6个月的方案(组1)；以0个月、2个月和6个月的方案(组2)；以0个月和6个月的方案(组3)；以0个月和2个月的方案(组4)；或以0个月和4个月的方案(组1)。在每组中施用盐水注射(取决于组1或2个剂量)以维持盲法。

在上文各实施例4-8中描述了在0个月、2个月和6个月接受3-剂量的二价rlp2086系列的受试者中的研究1、2和3的结果。所有研究的4倍和复合应答率的评估是探索性终点。4倍的应答率表明，所有4个终点的95％置信区间(ci)的下限在3项研究中是相似的，并且一致地满足了iii期终点的阈值限值。在3项研究中，达到hsba效价≥lloq的受试者比例是相似的。

根据2次施用疫苗以1或2个月隔开给予后获得的hsba数据，在这些间隔期间施用的2个剂量的疫苗可能由于潜在的暴露于脑膜炎球菌血清群b病的情况而处于风险增加中的个体提供保护。在2次疫苗施用以1或2个月隔开递送后观察到的反应显示，一部分受试者表达的hsba水平等于或高于4种主要测试菌株中的每一种的lloq值(参见组1和组2的研究1结果；参见组2的研究2结果；参见组2的研究3结果)。在6个月时施用的第三剂量的疫苗可以实现疫苗介导的保护。

伴随疫苗施用。研究1(实施例7和实施例8中描述)评估了在美国青少年中二价rlp2086和hpv4的伴随使用。研究终点包括针对四个hpv4抗原(基于几何效价效价[gmt])和针对二价rlp2086(基于使用两个mnb测试菌株[变体a22和b24]的hsba)在第三次疫苗接种后1个月的免疫应答的非劣性评估。hpv4免疫应答还通过对4种hpv抗原中的每一种的血清转化进行评估。

研究1显示了比较组1(二价rlp2086+hpv4)和组3(盐水+hpv4)的抗hpv抗原抗体的几何平均效价(gmt)，和组1与组3之间相应的gmt比(gmr)和这些比的双侧95％ci。研究1还提供了比较组1和组2的对2个主要mnb测试菌株的hsbagmt，和组1与组2之间相应的gmr以及这些比的双侧95％ci。非劣性边界的标准为1.5倍，其对应于gmr的双侧95％ci的下限值为0.67。所有mnb测试菌株和除hpv-18(其95％置信区间(ci)下限为0.62)之外的hpv抗原均满足1.5倍标准。虽然对hpv-18的应答不符合预先规定的非劣性标准，但差异是微不足道的。在分开的分析中，在盐水+hpv4和二价rlp2086+hpv4组中的≥99％的受试者血清转化所有4种hpv抗原。

实施例10：二价rlp2086在个体中引发针对表达普遍和爆发相关的fhbp变体的mnb菌株提供广泛覆盖的抗体

在使用人补体的血清杀菌测定(hsba)中测量的杀菌抗体已经与保护免受脑膜炎球菌疾病侵害相关，并且hsba应答已经被常规地用作疫苗功效的替代物。fhbp多样性的全球流行病学研究表明，约80％的脑膜炎球菌病是由表达10种流行的fhbp变体之一的菌株引起的。

方法：评估了在用二价rlp2086免疫的个体人类受试者中针对表达美国和欧洲中10种最流行的fhbp变体(b24、b16、b44、a22、b03、b09、a12、a19、a05和a07)的脑膜炎奈瑟球菌血清群b(mnb)菌株的hsba应答。表达这十种最流行的变体的mnb菌株代表fhbp多样性的广度，包括6个主要fhbp亚群中的5个，其分别代表mnbsba菌株库和mnbsba菌株库的us子集中>98％和97％菌株(按照亚群)。从辉瑞的mnbsba菌株库(n＝1263)获得了二十三种mnb测试菌株，其代表了从2000年到2006年间从美国和欧洲系统收集的菌株。此外，最近的mnb疾病爆发的分离物被纳入分析。从参与临床研究b1971005、b1971012或b1971003的青少年和年轻成年受试者随机获得匹配的疫苗接种前和疫苗接种后血清(剂量2后和剂量3后)。

为了提供支持用二价rlp2086进行疫苗接种的潜在覆盖度的额外信息，用爆发菌株和来自用二价rlp2086免疫的9名受试者的血清样品进行hsba(临床研究b1971012，实施例5和实施例6中所述)。受试者(年龄在11至＜19岁)在0、2和6个月时已经接受了3个剂量的二价rlp2086。为了确保保守的hsba评估，从针对主要mnb测试菌株没有基线hsba活性的一组受试者以非偏倚的方式选择了9名受试者。测试了克隆的普林斯顿大学爆发菌株中的两株(pmb5021和pmb5025)和ucsb爆发菌株中的两株(来自两个遗传簇中每一个的菌株，pmb4478和pmb4479)。

克隆的普林斯顿大学mnb爆发菌株的遗传特征如下：数据表明普林斯顿大学爆发菌株是克隆的。每个菌株分型为cc41/44(st409)，表达fhbp变体b153(seqidno：6)。该菌株对于nhba(2)、pora(亚型p1.5-1,2-2)和porb(3-82)具有相同的等位基因分配，都没有nada，并且都具有相同的脉冲场凝胶电泳(pfge)谱(429)。

2013年加州圣巴巴拉大学(universityofcaliforniasantabarbara，ucsb)爆发菌株的遗传特征如下：ucsb菌株分型为cc32(et5；st32)，表达fhbp变体b24，与自1993年以来高度流行血清群b疾病有关的俄勒冈克隆有关。与普林斯顿爆发组的菌株不同，ucsb菌株基因分离成两个不同的簇，其通过其pfge谱(468或467)和porb类型(3-461或3-24)进行区分。该菌株对于nada(1)、nhba(5)、pora(亚型p1.7,16-20)具有相同的等位基因分配

所有受试者和所有爆发菌株的基线hsba效价<4，表明受试者在用二价rlp2086免疫之前对任何爆发菌株没有保护性抗体。

结果：用二价rlp2086免疫的个体受试者的血清中，所有23种mnb菌株在hsba中敏感。代表所有10种流行的fhbp变体和其他菌株的菌株都被hsba杀死。基线hsba血清保护率(达到hsba效价≥1:4的受试者比例)通常较低。在用二价rlp2086免疫前观察到的受试者中较低的血清保护率证明非接种疫苗的青少年或年轻人群对mnb疾病的脆弱性。然而，在具有疫苗接种后血清的青少年和年轻人中观察到稳健的血清保护率：根据mnb菌株和测试群体，观察到这些菌株中的83％的血清保护率>70％。表达最流行的亚科a和bfhbp变体b24和a22的菌株的疫苗接种后血清保护率范围为81.0％至100％，对表达fhbp变体b24和b153的近期爆发菌株为77.8％至100％。此外，根据hsba中使用的爆发菌株，在这些受试者中观察到对所有爆发菌株的稳健的剂量2后应答(与基线相比)，其范围在56至89％之间。相比之下，对最近美国爆发菌株的疫苗接种前血清保护率低或不可检测。对普林斯顿大学和ucsb爆发菌株的hsba应答示于图2中。

结论：二价rlp2086在个体中引起对美国和欧洲表达流行的fhbp的不同侵入性mnb菌株以及新出现的变体(b153)(seqidno：6)稳健的血清保护性hsba应答。用二价rlp2086免疫后显示血清保护应答的受试者比例大大超过了在基线时血清保护的受试者比例。数据支持二价rlp2086有潜力为青少年和年轻人提供广泛的保护，免受侵袭性脑膜炎球菌血清群b疾病、包括最近爆发疾病的侵害。

>b153(seqidno:6)

cssggggvaadigagladaltapldhkdkglqsltldqsvrkneklklaaqgaektygngdslntgklkndkvsrfdfirqievdgqlitlesgefqvykqshsaltalqteqvqdsedsgkmvakrqfrigdiagehtsfdklpkggsatyrgtafgsddaggkltytidfaakqghgkiehlkspelnvdlaaayikpdekhhavisgsvlynqdekgsyslgifggkaeevagsaevktvngirhiglaakq

实施例11：二价rlp2086、脑膜炎球菌血清群b疫苗在美国青少年中与tdap和mcv4共同施用的免疫原性和安全性

2期、随机分组、活性对照、观察者盲法试验评估在年龄≥10岁至＜13岁的健康受试者中伴随施用的mcv4、tdap疫苗和二价rlp2086疫苗的安全性、耐受性和免疫原性，。

背景：二价rlp2086与美国推荐的疫苗同时施用可以提高对疫苗方案的遵守。

目的：确定由共同施用[脑膜炎球菌a、c、y和w-135多糖缀合疫苗(mcv4)]和[破伤风类毒素，减少的白喉类毒素，无细胞百日咳疫苗(tdap)]与[脑膜炎双球菌b(mnb)疫苗，在美国批准的(二价rlp2086)]所诱导的免疫应答是否不比mcv4+tdap或单独的二价rlp2086差

设计/方法：年龄≥10至<13岁的健康青少年接受mcv4+tdap+二价rlp2086、mcv4+tdap或二价rlp2086。通过使用表达疫苗异源fhbp变体的2个mnb测试菌株使用人补体的血清杀菌测定(hsba)来评估二价rlp2086免疫原性；多重luminex测定和/或兔sba评估mcv4/tdap抗原的免疫原性。评估安全性。

结果：2648名受试者接受mcv4+tdap+二价rlp2086、mcv4+tdap或二价rlp2086。对伴随给予mcv4、tdap和二价rlp2086的免疫应答不比对mcv4+tdap或单独的二价rlp2086的免疫应答差。疫苗接种2和3后分别有的62.3-68.0％和87.5-90％mcv4+tdap+二价rlp2086接受者具有预先规定的针对2个mnb测试菌株的血清保护性hsba效价；单独的二价rlp2086诱导相似的应答。与单独的二价rlp2086相比，伴随施用并没有显著增加局部反应或全身事件。

与mcv4+tdap伴随给予的二价rlp2086符合所有非劣免疫原性标准，没有临床显著增加的反应原性。与伴随施用相关的便利可以提高对推荐方案的遵守。

本研究(b1971015)评估了四价脑膜炎球菌多糖缀合物(mcv4)疫苗；破伤风、白喉和无细胞百日咳(tdap)疫苗；和二价rlp2086伴随施用的免疫原性。它还评估了二价rlp2086在美国年龄≥10岁至<13岁的健康受试者的安全性、耐受性和免疫原性。用于hsba以评估对具有或不具有许可疫苗的对二价rlp2086的免疫应答的非劣性的2个mnb测试菌株表达美国两种最流行的fhbp，即a22和b24。

使用盐水作为安慰剂来维持研究盲法，因为没有证明安全、具有免疫原性和有效的针对mnb的疫苗可以作为活性对照。此外，选择盐水作为惰性对照，而不是具有赋形剂(例如铝)的对照疫苗，因为描述研究性产品的耐受性特征的安全目标符合盐水而不是另一种疫苗。

约2625名受试者在美国约88个地点(每个地点约30名受试者)参加本研究。受试者以1:1:1的比例(组1:组2:组3)随机分配到3组中之一(表a)。受试者在每次疫苗接种就诊时都接受了研究性产品(就诊1、3和5)。

呈现以下任何一项的受试者不包括在研究中：以前接种过任何脑膜炎球菌血清群b疫苗；在第一次研究疫苗接种的5年内接种任何白喉、破伤风或百日咳疫苗；以前接种过任何mcv4疫苗。

在研究期间，组1和组3的受试者在约0、2和6个月在左臂中接受二价rlp2086(分别为就诊1、3和5)。对于组2中的受试者，在约0、2和6个月(分别为就诊1、3和5)在左臂通过肌内(im)注射(0.5ml)施用盐水。组3受试者在0个月时在右臂接受2个im盐水注射。mcv4和tdap疫苗仅在0个月时通过im注射施用一次(组1和2)于右臂。在就诊6最后一次抽血后(疫苗接种3后抽血)，组3中的受试者接受了mcv4和tdap疫苗。

mcv4和tdap疫苗仅在0个月时通过im注射施用一次(组1和2)，进入右臂上三角肌。将疫苗施用至少分隔开5cm。在他们最后一次抽血后，组3中的受试者在就诊6时接受了mcv4和tdap疫苗。

在疫苗接种1之前立刻、在疫苗接种1后28至41天、在疫苗接种2后28至42天以及在疫苗接种3后28至42天，收集血样(每次约20ml)用于免疫原性分析。

使用的二价rlp2086疫苗是配制成含有以下内容的0.5ml剂量：60μg纯化的亚科arlp2086蛋白(变体a05，seqidno：1)和纯化的亚科brlp2086蛋白(变体b01，seqidno：2))，0.15m氯化钠，摩尔比2.8的聚山梨酯80和0.25mgal³⁺如磷酸铝(alpo4)作为稳定剂，在ph6.0的10mm组氨酸缓冲盐水中。

mcv4疫苗是市售疫苗[脑膜炎球菌(群a、c、y和w-135)多糖白喉类毒素缀合疫苗(mcv4)]。menactra是一种以0.5ml剂量供应用于im注射液的溶液。该疫苗含有分别与白喉类毒素蛋白缀合的脑膜炎奈瑟球菌血清群a、c、y和w-135荚膜多糖抗原。作为个体血清群特异性糖缀合物存在的四种脑膜炎球菌组分构成最终配制的疫苗。在制造过程中不添加防腐剂或佐剂。通过计算，每0.5ml剂量可含有小于2.66μg(0.000532％)的残留量的甲醛。menactra制成无菌、澄清至稍微混浊的液体。将每0.5ml剂量的疫苗配制在磷酸钠缓冲等渗氯化钠溶液中，以包含与约48μg白喉类毒素蛋白载体缀合的各自4μg脑膜炎球菌a、c、y和w-135多糖。

tdap疫苗是市售疫苗(吸附的破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳疫苗[tdap])。adacel以0.5ml剂量供应用于im注射。该疫苗是一种吸附在磷酸铝上的破伤风和白喉类毒素和百日咳抗原的无菌等渗混悬液。每0.5ml剂量含有5lf的破伤风类毒素，2lf的白喉类毒素，以及无细胞百日咳抗原(2.5μg脱毒百日咳毒素，5μg丝状血凝素，3μg粘附素[prn]，5μg2和3型菌毛)。每0.5ml剂量的其他成分包括1.5mg磷酸铝(0.33mg铝)作为佐剂，≤5μg残留甲醛，<50ng残留戊二醛和3.3mg(0.6％v/v)2-苯氧乙醇(不作为防腐剂)。adacel不含防腐剂。

用于注射的无菌生理盐水溶液(0.9％氯化钠)在0.5ml的剂量中。

二价rlp2086的血清杀菌试验。为了评估对二价rlp2086的免疫应答，在验证的hsba中分析功能性抗体。hsba测量人血清中的抗体，其导致补体介导的目标mnb菌株的杀死。在hsba中用菌株pmb80[a22]和pmb2948[b24]测试了在用二价rlp2086的第一次疫苗接种之前、用二价rlp2086第二次疫苗接种后约1个月(就诊3)、用二价rlp2086第三次疫苗接种后约1个月(就诊5)从组1和组3中所有受试者得到血清。

mcv4伴随疫苗的sba。为了评估对mcv4疫苗的免疫应答，在使用兔补体血清杀菌测定(rsba)中用代表血清群a、c、y和w-135的脑膜炎球菌菌株分析功能性抗体。在用mcv4第一次疫苗接种之前(就诊1)和用mcv4疫苗接种后1个月(就诊2)从组1和组2中的所有受试者获得的血清用于这些测定。

mcv4和其他伴随疫苗的抗原检测测定。使用经验证的和多重luminex多重测定评估白喉、破伤风和百日咳抗体应答(mcv4lxa)。在用mcv4和tdap第一次疫苗接种之前(就诊1)和用mcv4和tdap疫苗接种后1个月(就诊2)从组1和组2中的所有受试者获得的血清用于该测定。使用经验证的多重lxa额外评估脑膜炎球菌血清群a、c、y和w-135应答(a、c、y、wlxa)。在用mcv4和tdap第一次疫苗接种之前(就诊1)和用mcv4和tdap疫苗接种后1个月(就诊2)从组1和组2中的所有受试者获得的血清用于这些测定。

样品大小。对市售的10种抗原疫苗和2种mnb菌株的抗体应答被认为是独立的。非劣边界的标准为1.5倍。

分析方法。pmb80(a22)的lloq为1:16，pmb2948(b24)的lloq为1:8。tdap/mcv4测定的lloq列于表b中。

共同主要(coprimary)目标分析(非劣性目标)

gmt和gmc。对于mnb菌株pmb80(a22)和pmb2948(b24)，在每个血液采样时间点(就诊1、4和6)测量的hsba效价对数变换用于分析，并计算每个主要菌株和每组在每个血液采样时间点的gmt以及双侧95％置信区间(ci)。基于student'st分布，通过对对数变换的测定数据的平均值计算的置信限的反向变换构建ci。在rsba中测定的对4个mcv4抗原中的每一个的gmt和在lxasr中测定的对4个mcv4抗原中的每一个的gmc在就诊1和就诊2时都类似地总结了。通过lxa对tdap疫苗中的6种抗原中的每一种测定的gmc在就诊1和就诊2总结了。

几何平均比。为了测试非劣性假设，使用了在每个适用的就诊对应组之间的几何平均比(gmr)(就诊6的hsba效价对应组1/组3，就诊2的mcv4/tdap抗原对应组1/组2)以及95％的ci。对数变换结果的平均差相当于对数尺度的比的平均值：log(组1/组2)＝log(组1)-log(组2)。使用适当的指数变换来计算gmr。类似地，通过使用studentt分布计算的对数变换的测定结果的平均差的ci反向变换，构建了比率的双侧95％ci。统计学推论基于gmr的ci(即95％ci的下限>0.67)。

市售疫苗的非劣性(mcv4/tdap的共同主要作用)。对于第一个共同主要目标，在疫苗接种后1个月测量对市售疫苗中的10种抗体中的每种抗体效价或浓度(就诊2)被对数变换用于分析，并计算组1和组2的gm。对于10种抗原中的每一种提供gm比([二价rlp2086+mcv4/tdap]/[mcv4/tdap])的双侧95％ci。

rlp2086疫苗的非劣性(二价rlp2086的共同主要作用)。对于第二个共同主要目标，在就诊6测量的2种主要菌株中的每一种的hsba效价被对数变换用于分析，并且计算组1和组3的gmt。提供2种主要菌株中的每一种的gmr([二价rlp2086+mcv4/tdap]/二价rlp2086)的双侧95％ci。对于所有10种mcv4/tdap抗原和2种主要菌株中的每一种，当在就诊2时([二价rlp2086+mcv4/tdap]/[mcv4/tdap]和在就诊6时[二价rlp2086+mcv4/tdap]/二价rlp2086))的gmr的双侧95％ci的下限大于0.67，达到对两种市售疫苗(mcv4/tdap)和研究性产品(二价rlp2086)的非劣性研究的共同主要目标。对于mcv4中4种抗原中的每一种在就诊2的igg浓度，将gmr(组1/组2)用双侧95％ci进行描述性总结。

hsba数据分析。在每个血液采样时间点，描述性概括了以下的受试者数量和比例：达到hsba效价≥lloq、≥1:4、≥1:8、≥1:16、≥1:32、≥1:64和≥1:128，并且从基线到疫苗接种2和疫苗接种3之后的hsba效价至少升高了2倍、3倍和4倍，以及组1和组3的主要mnb测试菌株pmb80(a22)和pmb2948(b24)的比例确切的双侧95％ci(或clopper-pearson置信限)。使用f分布计算比例的确切ci。作为对二价rlp2086的非劣性的额外分析，比较组1和组3的a22变体(pmb80)和b24变体(pmb2948)的hsba4倍应答率。提供了比(二价rlp2086/mcv4/tdap-二价rlp2086或组1-组3)的差异和关于该差异的确切的双侧95％ci。使用标准化检验统计量计算确切的ci，γ＝0.000001。这被认为是一种描述性分析。

mcv4/tdap免疫原性的分析。用组1和组2的确切的双侧95％ci总结了达到对每个mcv4/tdap抗原血清应答的受试者比例以及达到破伤风和白喉类毒素的抗体水平≥1.0iu/ml的受试者比例。分析了对于每种mcv4/tdap抗原的血清应答率以及达到破伤风和白喉类毒素的抗体水平≥1.0iu/ml的受试者比例(组1-组2)的非劣性。

伴随施用时对二价rlp2086和mcv4/tdap抗原的免疫应答。对tdap和mcv4抗原的几何平均浓度和几何平均效价的非劣性分析。本研究的第一个共同主要目标是证明当在两组中第一疫苗接种后1个月(就诊2)测量时，由与二价rlp2086一起给予mcv4和tdap疫苗诱导的基于gmt(或适用的情况下gmc)的免疫应答不比由单独的mcv4和tdap疫苗诱导的免疫应答差。第一个共同主要目标的主要终点是在组1和组2的受试者中，在第一次疫苗接种后1个月(就诊2)，对市售疫苗中的10种抗原中的每一种的gmt或gmc。

将比较组1和组2的对10种mcv4和tdap抗原的gmt(或在适用情况下gmc)，与其对应的组1与组2的gmt(或在适用情况下gmc)比(gmr)以及这些比的双侧95％ci列于表c。非劣性边界的标准为1.5倍，其对应于gmr的双侧95％ci的下限值为0.67。

对于可评估免疫原性群体，tdap抗原在疫苗接种后1个月组1与组2的gmr如下：白喉类毒素为0.94(95％ci：0.86,1.03)，破伤风类毒素为0.92(95％ci：0.85,0.99)，百日咳类毒素为0.93(95％ci：0.85，1.02)，百日咳丝状血凝素为0.91(95％ci：0.84,0.98)，百日咳粘附素为0.88(95％ci：0.80,0.98)，2+3型百日咳菌毛凝集原为0.90(95％ci：0.74,1.08)；并且mcv4抗原的gmr如下：血清群a为0.91(95％ci：0.82,1.01)，血清群c为1.02(95％ci：0.90,1.15)，血清群y为0.99(95％ci：0.89,1.09)，血清群w-135为0.93(95％ci：0.83,1.04)。因此，与组2相比，组1的mcv4和tdap抗原gmr的双侧95％ci的下限如下：白喉类毒素为0.86，破伤风类毒素为0.85，百日咳类毒素为0.85，百日咳丝状血凝素为0.84，百日咳粘附素为0.80，2+3型百日咳菌毛凝集原为0.74，血清群a为0.82，血清群c为0.90，血清群y为0.89，血清群w-135为0.83。所有mcv4和tdap抗原都满足0.67的1.5倍标准(gmr的双侧95％ci的下限)。因此，第一个共同主要目标得到满足。

当这些疫苗与二价rlp2086伴随给予时，对tdap+mcv4抗原的免疫应答不比单独给予时获得的免疫应答差。

对二价rlp2086的hsbagmt的非劣性分析。

本研究的第二个共同主要目标是证明由mcv4+tdap+二价rlp2086(组1)诱导的对主要菌株pmb80(a22)和pmb2948(b24)(基于gmt)的hsba应答不比由盐水+盐水+二价rlp2086(组3)诱导免疫应答差。两组在用二价rlp2086第三次疫苗接种后1个月(就诊6)进行hsba。第二个共同主要目标的主要终点是评估2种主要菌株(pmb80[a22]和pmb2948[b24])中的每一种在向组1(mcv4+tdap+二价rlp2086)和组3(盐水+盐水+二价rlp2086)的受试者施用第三剂量的二价rlp2086(就诊6)后1个月测量的hsbagmt。

对于可评估免疫原性群体，表c呈现了比较对组1和组3的2个主要mnb测试菌株的hsbagmt与其对应的组1与组3的gmr和比的双侧95％ci。非劣性边界的标准为1.5倍，其对应于gmr的双侧95％ci的下限值为0.67。

对于可评估免疫原性群体，组1和组3在接种疫苗3(二价rlp2086)后1个月对2个主要mnb菌株的hsbagmt如下：pmb80(a22)分别为45.9和49.7，以及pmb2948(b24)分别为24.8和27.4。在疫苗接种3(二价rlp2086)后1个月时，mcv4+tdap+二价rlp2086组与盐水+盐水+二价rlp2086组的gmr如下：pmb80(a22)为0.92(95％ci：0.84,1.02)，pmb2948(b24)为0.90(95％ci：0.82,1.00)。与组3相比，组1的hsbagmr的双侧95％ci的下限是pmb80(a22)为0.84，pmb2948(b24)为0.82，这两者均大于0.67，满足了1.5倍的非劣性边界。因此，实现了第二个共同主要目标。

当与tdap+mcv4伴随给予时，对二价rlp2086疫苗的免疫应答不比单独给予疫苗时获得的免疫应答差。

共同主要目标的非劣性分析。

通过检查设定为1.5倍的非劣性边界(其对应于疫苗接种1后可评估免疫原性群体的针对10种mcv4和tdap抗原中的每一种的gmr的双侧95％ci的下限值为0.67)来测试与单独的mcv4和tdap疫苗相比，与mcv4和tdap疫苗一起给予的二价rlp2086的非劣性的第一个共同主要目标。所测试的所有mcv4和tdap抗原都符合该标准。

通过检查设定为1.5倍的非劣性边界(其对应于当在疫苗接种3后1个月测量时在疫苗接种3后可评估免疫原性群体的针对2种主要mnb菌株(变体a22和b24)中的每一种的gmr的双侧95％ci的下限值为0.67)来测试与单独的二价rlp2086相比，与mcv4和tdap疫苗一起给予的二价rlp2086的非劣性的第二个共同主要目标。两种mnb测试菌株pmb80(a22)和pmb2948(b24)均满足该标准。

因此，在tdap、mcv4和二价rlp2086疫苗中的所有抗原的1.5倍非劣性边界处均达到了两个共同主要目标。

mcv4/tdap血清应答率的描述。本研究的次要目标之一是在用mcv4和tdap疫苗接种后1个月测量时(就诊2)，描述mcv4和tdap(组1和2)中包含的抗原的血清应答。

对于疫苗接种1后可评估免疫原性群体，每组10个tdap和mvc4抗原的血清应答率与相应的95％ci，和百分比差异(组1-组2)和差异的95％ci列于表d中。

对于可评估免疫原性群体，组1和组2在疫苗接种1后1个月的6个tdap抗原的血清应答率分别为98.6％和98.3％(白喉类毒素)；分别为97.7％和97.4％(破伤风类毒素)；68.1和72.7％(百日咳类毒素)；分别为85.3％和89.2％(百日咳丝状血凝素)；分别为96.0％和96.2％(百日咳粘附素)；和79.5％和81.9％(2+3型百日咳菌毛凝集原)。对于可评估免疫原性群体，组1和组2在疫苗接种1后1个月时4种mcv4抗原的血清应答率分别为85.4％和88.6％(血清群a)；分别为89.3％和88.9％(血清群c)；分别为90.5％和93.6％(血清群y)；分别为97.1％和97.2％(血清群w-135)。疫苗接种1后1个月，组1与组2的血清应答率差异如下：白喉类毒素为0.2％(95％ci：(-1.1,1.6))，破伤风类毒素为0.2％(95％ci：-1.4,1.8)，百日咳类毒素为-4.6％(95％ci：-9.1，-0.1)，百日咳丝状血凝素为-4.0％(95％ci：-7.3,-0.6)，百日咳粘附素为-0.2％(95％ci：-2.1,1.8)，2+3型百日咳菌毛凝集原为-2.5％(95％ci：-6.4，1.5)，血清群a为-3.2％(95％ci：-6.7,0.3)，血清群c为0.3％(95％ci：-2.8,1.5)，血清群y为-3.2％(95％ci：-6.0,-0.4)，血清群w-135为-0.1％(95％ci：-1.9,1.7)。

对于mcv4+tdap+二价rlp2086组(组1)和mcv4+tdap+盐水组(组2)，6个tdap和4个mcv4抗原的血清应答率估计值差异在-4.6％至0.3％，该率差异的95％ci的下限为-9.1％以上(即全部大于-10％)。

hsba效价4倍升高的描述。通过分析在疫苗接种3后1个月2种主要mnb菌株(pmb80[a22]和pmb2948[b24])的hsba效价4倍的应答率，将mcv4+tdap+二价rlp2086(组1)与盐水+盐水+二价rlp2086(组3)进行比较。对于疫苗接种3后可评估免疫原性人群，达到从基线至疫苗接种3后1个月2种主要mnb菌株的hsba效价倍数升高≥4的受试者数量和比例，每组中相应的95％ci，百分比差异(组1-组3)以及这些差异百分比的95％ci呈现在表e中。

对于接受mcv4+tdap+二价rlp2086的组1受试者和接受盐水+盐水+二价rlp2086的组3受试者，测量了2种主要mnb测试菌株从基线至疫苗接种3后1个月hsba效价≥4倍升高的受试者比例。在组1的受试者中，84.0％表现出针对测试菌株pmb80(a22)的hsba效价≥4倍升高，85.7％表现出针对测试菌株pmb2948(b24)的hsba效价≥4倍升高。在组3的受试者中，88.7％表现出针对测试菌株pmb80(a22)的hsba效价≥4倍升高，87.7％表现出针对测试菌株pmb2948(b24)的hsba效价≥4倍升高。

疫苗接种3后1个月，组1和组3之间达到hsba效价≥4倍升高的受试者比例差异如下：pmb80(a22)为-4.7％(95％ci：-8.4，-1.1)，pmb2948(b24)为-2.1％(95％ci：-5.7,1.6)。4倍应答率的估计差异小(<5.0％)，比例差异的95％ci的下限为-8.4％(pmb80[a22])和-5.7％(pmb2948[b24])。

表e.比较从基线至疫苗接种3后1个月达到hsba效价≥4倍升高的受试者–疫苗接种3后可评估免疫原性群体

缩写:hsba＝使用人补体的血清杀菌测定；lloq＝定量下限；lod＝检测限。

注:基线定义为疫苗接种1之前的抽血。

注:4倍增加定义如下：(1)对于基线hsba效价<lod或hsba效价<lloq的受试者，4倍应答定义为hsba效价≥4倍lloq。(2)对于基线hsba效价≥lloq的受试者，4倍应答定义为hsba效价≥4倍基线效价。

a.n＝对于给定菌株在基线和在疫苗接种3后1个月具有有效和确定的hsba效价的受试者数量。

b.n＝对于给定菌株在疫苗接种3后1个月达到至少4倍应答的受试者数量。

c.使用clopper和pearson方法基于观察到的受试者比例的确切的双侧置信区间(ci)。

d.比例差异，以百分比表示。

e.比例差异的确切的双侧ci和p值(基于chan&zhang)，以百分比表示。

当伴随施用时对二价rlp2086和mcv4和tdap抗原的免疫应答的总结。与单独的mcv4和tdap疫苗相比或者与盐水+盐水+二价rlp2086相比，与mcv4和tdap疫苗一起给予的二价rlp2086的非劣性标准要求对于10个mcv4/tdap抗原(疫苗接种1后1个月)中的每一个和2个主要mnb测试菌株(a22和b24)(疫苗接种3后1个月)中的每一个，其gmr的双侧95％ci下限大于0.67。对于两种mnb测试菌株和10种tdap和mcv4抗原中的每一种，均满足预先设定的阈值。

对于mcv4+tdap+二价rlp2086组(组1)和mcv4+tdap+盐水组(组2)，6个tdap和4个mcv4抗原的血清应答率估计值差异在-4.6％至0.3％，该率差异的95％ci的下限等于9.1％或更低(所有差异均大于-10％)。对2个主要mnb测试菌株(a22和b24)的≥4倍升高的hsba应答在接受mcv4+tdap+二价rlp2086的组与接受盐水+盐水+二价rlp2086的组之间是相似的(范围为84.0％至88.7％)。

对二价rlp2086的免疫应答。hsba效价≥lloq(描述性终点)。

本研究的次要目标之一是描述通过用2个主要mnb测试菌株(1个表达亚科alp2086(pmb80[a22])和1个表达亚科blp2086(pmb2948[b24]))用二价rlp2086第二次(就诊4)和第三次(就诊6)疫苗接种后1个月测定进行hsba测量的免疫应答。

该次要目标的描述性次要终点之一是在疫苗接种2(就诊4)后1个月和疫苗接种3(就诊6)后1个月，2个主要mnb测试菌株中的每一个的hsba效价≥lloq的受试者比例。对于疫苗接种3后可评估免疫原性群体，两个主要mnb测试菌株中的每一个的hsba效价≥lloq的受试者比例列于表f中。注意，pmb80(a22)的lloq为hsba效价等于1:16，而pmb2948(b24)的lloq为hsba效价等于1:8。

对于组3(盐水+盐水+二价rlp2086)，基线(疫苗接种1之前)hsba效价≥lloq的受试者比例是pmb80(a22)为5.6％，pmb2948(b24)为3.4％。对于组3(盐水+盐水+二价rlp2086)，疫苗接种2后1个月和疫苗接种3后1个月达到hsba效价≥lloq的受试者比例如下：pmb80(a22)分别为68.0％和91.4％，pmb2948(b24)分别为66.0％和92.7％。

对于组1(mcv4+tdap+二价rlp2086)，基线(疫苗接种1之前)具有hsba效价≥lloq的受试者比例是pmb80(a22)为4.4％，pmb2948(b24)为1.6％。对于组1(mcv4+tdap+二价rlp2086)，在疫苗接种2后1个月和疫苗接种3后1个月，达到hsba效价≥lloq的受试者比例如下：pmb80(a22)分别为68.0％和87.5％；pmb2948(b24)分别为62.3％和90.0％。

与疫苗接种1之前相比，在疫苗接种2后1个月，在组1和组3的受试者中观察到具有2个主要mnb测试菌株的hsba效价≥lloq的受试者比例显著增加，疫苗接种3后1个月观察到额外增加。可评估免疫原性群体的组1和组3中的hsba应答相似。

达到规定水平的hsba效价

另一个次要终点是在每个血液采样时间点对2个主要mnb测试菌株的hsba效价≥lloq、≥1:4、≥1:8、≥1:16、≥1：32、≥1：64和≥1:128的受试者比例。

达到hsba效价≥1:4和≥1:16的受试者如下所述。≥1:4的hsba效价被广泛认为是与保护免受imd侵害相关；然而，更保守的≥1:16的hsba效价已被认为是对疫苗接种前血清阴性的受试者的4倍疫苗作用的水平。

疫苗接种前(即疫苗接种1之前)的hsba效价≥1:4的组1(mcv4+tdap+二价rlp2086)和组3(盐水+盐水+二价rlp2086)中的受试者比例对于菌株pmb80(a22)分别为6.9％和7.5％；和对于菌株pmb2948(b24)分别为2.1％和3.7％。此外，组1和组3中疫苗接种前的hsba效价≥1:16的受试者比例对于菌株pmb80(a22)分别为4.4％和5.6％和对于菌株pmb2948(b24)分别为1.5％和2.1％。

在组3(盐水+盐水+二价rlp2086)中，疫苗接种2后1个月hsba效价≥1:4的受试者比例是pmb80(a22)为68.6％，pmb2948(b24)为68.2％。疫苗接种3后1个月，hsba效价≥1:4的受试者比例是pmb80(a22)为91.7％，pmb2948(b24)为93.1％。在组1(mcv4+tdap+二价rlp2086)中，疫苗接种2后1个月hsba效价≥1:4的受试者比例是pmb80(a22)为68.2％，pmb2948(b24)为64.8％。疫苗接种3后1个月，hsba效价≥1:4的受试者比例是pmb80(a22)为87.8％，pmb2948(b24)为90.7％。

在组3(盐水+盐水+二价rlp2086)中，疫苗接种2后1个月hsba效价≥1:16的受试者比例是pmb80(a22)为68.0％，pmb2948(b24)为60.3％。疫苗接种3后1个月，hsba效价≥1:16的受试者比例是pmb80(a22)为91.4％，pmb2948(b24)为88.9％。在组1(mcv4+tdap+二价rlp2086)中，疫苗接种2后1个月，hsba效价≥1:16的受试者比例是pmb80(a22)为68.0％，pmb2948(b24)为57.6％。疫苗接种3后1个月，hsba效价≥1:16的受试者比例是pmb80(a22)为87.5％，pmb2948(b24)为86.7％。

对于组1和组3，大多数受试者在2或3个剂量的二价rlp2086后达到1:16或更高的hsba效价，而相对较少的受试者在疫苗接种前就诊1时对任何主要mnb测试菌株中具有可测量的hsba效价。

hsba几何平均滴定。另一个次要终点是在每个适用的血液采样时间点，2个主要mnb测试菌株中的每一个的hsbagmt。表g列出了在接种疫苗3后可评估免疫原性群体中按照组1和组3的采样时间点的2个主要mnb测试菌株中的每一个的hsbagmt和相应ci。两组的基线gmt低于hsballoq。对于组3(盐水+盐水+二价rlp2086)，疫苗接种2后1个月的hsbagmt是pmb80(a22)为23.8，pmb2948(b24)为13.0。疫苗接种3后1个月的hsbagmt是pmb80(a22)为49.7，pmb2948(b24)为27.4。对于组1(mcv4+tdap+二价rlp2086)，疫苗接种2后1个月的hsbagmt是pmb80(a22)为23.7，pmb2948(b24)为12.0。疫苗接种3后1个月的hsbagmt是pmb80(a22)为45.9，pmb2948(b24)为24.8。如gmt所测量的hsba应答在组1和组3之间是相似的。

hsba效价的反向累积分布曲线

对于疫苗接种3后可评估免疫原性群体，对组1和组3在所有采样时间点评估显示pmb80(a22)和pmb2948(b24)的hsba效价分布的反向累积分布曲线(rcdc)。rcdc显示大多数受试者在疫苗接种2后应答，并且在疫苗接种3之后对2个主要mnb测试菌株的效价进一步增加。对抗原的免疫应答在组1和3中是相似的。

hsba≥4倍应答

本研究的预先规定的探索性目标是描述对二价rlp2086的免疫应答，如用2个主要mnb测试菌株(1个表达lp2086亚科a蛋白和1个表达lp2086亚科b蛋白)的hsba效价中的4倍应答所测量的，在用二价rlp2086第二次和第三次疫苗接种后1个月测量(就诊3和就诊5)。

探索性目标的终点是达到从基线至用二价rlp2086第二次和第三次接种疫苗后1个月的2个mnb菌株(pmb80(a22)和pmb2948(b24))的hsba效价至少提高4倍的受试者比例。请注意，pmb80(a22)的lloq是等于1:16的hsba效价，而pmb80(a22)的lloq是等于1:8的hsba效价。4倍应答定义如下：对于基线hsba效价低于检测限(lod)或hsba效价<1:4的受试者，4倍应答定义为hsba效价≥1：16。对于基线hsba效价≥lod(即hsba效价≥1:4)和<lloq的受试者，4倍应答定义为hsba效价≥lloq的4倍。对于基线hsba效价≥lloq的受试者，4倍应答定义为hsba效价≥基线效价的4倍。

对于组1(mcv4+tdap+二价rlp2086)和组3(盐水+盐水+二价rlp2086)，对于疫苗接种3后可评估免疫原性群体，达到对2个主要mnb测试菌株中的每一个的hsba效价倍数升高≥4的受试者比例呈现在表h中。

对于组3(盐水+盐水+二价rlp2086)，从基线到疫苗接种3后1关于的hsba效价倍数升高≥4的受试者比例是pmb80(a22)为88.7％，pmb2948(b24)为87.7％。疫苗接种2后1个月，达到hsba效价从基线的倍数升高≥4的受试者比例是pmb80(a22)为63.4％，pmb2948(b24)为58.4％。

对于组1(mcv4+tdap+二价rlp2086)，从基线到疫苗接种3后1个月的hsba效价倍数升高≥4的受试者比例是pmb80(a22)为84.0％，pmb2948(b24)为85.7％。在疫苗接种2后1个月，达到hsba效价从基线的倍数升高≥4的受试者比例是pmb80(a22)为64.3％，pmb2948(b24)为56.3％。

通过4倍效价应答测量的hsba应答在组1和组3之间是相似的。

额外的hsba倍数应答

额外的终点是达到至少2倍增加的受试者比例和2个主要mnb菌株的每一个在每一次疫苗接种后血液采样就诊时达到hsba效价至少比基线增加3倍的受试者比例。注意pmb80(a22)的lloq是等于1:16的hsba效价，而pmb2948(b24)的lloq是等于1:8的hsba效价。

对于组1和组3，从基线至疫苗接种2后1个月mnb菌株的hsba效价达到≥2倍升高的受试者比例是pmb80(a22)分别为66.2％和66.1％；和pmb2948(b24)分别为56.8％和59.7％。对于组1和组3，达到从基线至疫苗接种3后1个月mnb菌株的hsba效价倍数升高≥2的受试者比例是pmb80(a22)分别为86.6％和90.3％；pmb2948(b24)分别为86.1％和88.5％。

对于组1和组3，从基线至疫苗接种2后1个月mnb菌株的hsba效价达到≥3倍升高的受试者比例是pmb80(a22)分别为64.3％和63.7％；和pmb2948(b24)分别为56.3％和58.4％。对于组1和组3，从基线至疫苗接种2后1个月mnb菌株的hsba效价达到≥3倍升高的受试者比例是pmb80(a22)分别为84.0％和88.7％；分别为pmb2948(b24)的85.7％和87.7％。

对于在接种疫苗3后可评估免疫原性群体中基线效价低于lod(1:4)的受试者，大多数受试者在组1和组3在所有血液采样时间点达到2倍、3倍和4倍的应答，疫苗接种2后1个月范围为56.7％至66.6％，疫苗接种3后1个月范围为86.3％至91.0％。

对二价rlp2086的免疫应答的总结

在根据次要目标的描述性终点的总结中，对于两种主要mnb测试菌株，对于组1(mcv4+tdap+二价rlp2086)和组3(盐水+盐水+二价rlp2086)，大多数受试者均达到hsba效价≥lloq，而只有非常小比例的受试者在基线时具有可测量的hsba效价≥lloq(疫苗接种前就诊1)。对于组1和组3的受试者，在疫苗接种2后个月观察到2种mnb菌株的显著免疫应答，疫苗接种3后1个月观察到额外增加。这个结论通过3个剂量后hsba效价≥1:16的受试者比例，2个剂量和3个剂量后在两组中达到观察的gmt以及两个主要mnb测试菌株的rcdc得到证实。

对于组1(mcv4+tdap+二价rlp2086)和组3(盐水+盐水+二价rlp2086)，高比例的受试者对于2种主要mnb测试菌株中的每一种达到hsba效价倍数升高≥4。

此外，对于组1(mcv4+tdap+二价rlp2086)和组3(盐水+盐水+二价rlp2086)，在所有采样时间点大多数受试者对于两个主要mnb菌株达到hsba效价倍数升高≥2和hsba效价倍数上升≥3。具有符合这些标准的结果的受试者比例在3次疫苗接种后比2次疫苗接种更高。灵敏度分析还支持两组对3个剂量诱导的稳健的免疫应答。

这些结果支持以下证据：当与mcv4+tdap疫苗共同施用时，对二价rlp2086的免疫应答产生可相当于对二价rlp2086+盐水的免疫应答的稳健的免疫应答。

对mcv4和tdap的免疫应答

tdap/mcv4抗原gmt和gmc

表1列出了在组1(mcv4+tdap+二价rlp2086)和组2(mcv4+tdap+盐水)的疫苗接种1后可评估免疫原性群体中，基线和疫苗接种1后1个月对tdap和mcv4抗原中的每一个的gmt和gmc以及相应的ci。

对于组2(mcv4+tdap+盐水)，基线(疫苗接种1前)和疫苗接种1后1个月的tdap抗原gmc分别为0.2和9.8(白喉类毒素)；0.5和10.3(破伤风类毒素)；3.9和14.2(百日咳类毒素)；21.8和122.9(百日咳丝状血凝素)；16.2和228.9(百日咳粘附素)；8.5和154.2(2+3型百日咳菌毛凝集原)；和基线(疫苗接种1前)和疫苗接种1后1个月的mcv4抗原gmt分别为436.3和5113.0(血清群a)；84.3和1650.2(血清群c)；168.5和2244.9(血清群y)；和177.7和6367.9(血清群w-135)。对于组1(mcv4+tdap+二价rlp2086)，基线(疫苗接种1前)和疫苗接种1后1个月的tdap抗原gm分别为0.2和9.3(白喉类毒素)；0.5和9.4(破伤风类毒素)；3.9和13.2(百日咳类毒素)；21.3和112.0(百日咳丝状血凝素)；15.7和202.0(百日咳粘附素)；8.4和138.1(2+3型百日咳菌毛凝集原)；和基线(疫苗接种1前)和疫苗接种1后1个月的mcv4抗原gm分别为490.0和4647.3(血清群a)；87.6和1679.2(血清群c)；183.3和2212.6(血清群y)；和176.7和5925.1(血清群w-135)。总体而言，组1与组2之间的估计gm相似。

iggmcv4gmc

本研究的探索性目标是描述当通过抗mcvigggmc测量时，当使用和不使用二价rlp2086时，由mcv4疫苗诱导的抗mcv4igggmc测量的igg免疫应答。本研究的探索性免疫原性终点应用于组1(mcv4+tdap+二价rlp2086)和组2(mcv4+tdap+盐水)受试者中的4种mcv4抗原成分。探索性终点是血清群a、c、y或w-135多糖的igg应答(测量为gmc)。在验证该测定之后(即验证后)和样本测试之前，根据标准参考曲线的额外数据分析向上调整lloq，对于血清群a为0.1795μg/ml，血清群c为0.0940μg/ml，血清群c为0.2485血清群y为μg/ml，血清群w-135为0.2530μg/ml。低于lloq的结果设为0.5×lloq用于分析。使用经调整的验证后lloq在疫苗接种1后可评估免疫原性群体中组1和组2的mcv4igggmc呈现在表j中。

对于组1(mcv4+tdap+rlp2086)，基线(疫苗接种1前)和疫苗接种1后1个月的mcv4igggmc分别为：0.17和11.42μg/ml(血清群a)；0.11和5.59μg/ml(血清群c)；0.14和2.49μg/ml(血清群y)；和0.13和1.79μg/ml(血清群w-135)。对于组2(mcv4+tdap+盐水)，基线(疫苗接种1前)和疫苗接种1后1个月的mcv4igggmc分别为：0.15和11.38μg/ml(血清群a)；0.11和5.47μg/ml(血清群c)；0.13和2.14μg/ml(血清群y)；和0.13和1.84μg/ml(血清群w-135)。

总体而言，mcv4igggmc在组1和组2中数值相似。基于初步测定验证数据分析，mcv4igg测定lloq对于血清群a设为0.1037μg/ml，血清群c为0.0204μg/ml，血清群y为0.1104μg/ml，血清群w-135为0.1198μg/ml。使用验证lloq的疫苗接种1后可评估免疫原性群体中组1和组2的mcv4igggmc还显示，组1和组2的mcv4igggmc在数值上相似。

达到白喉类毒素/破伤风抗原的预定抗体水平的受试者

本研究的描述性次要终点是达到抗破伤风类毒素的抗体水平≥1.0iu/ml的受试者比例(组1和2)与达到抗白喉类毒素的抗体水平≥1.0iu/ml的受试者比例(组1和2)。

组1(mcv4+tdap+二价rlp2086)和组2(mcv4+tdap+盐水)疫苗接种1后可评估免疫原性群体中达到抗白喉类毒素和破伤风类毒素抗原的预定抗体水平的受试者比例与相应的95％ci列出在表k中。

对于组1(mcv4+tdap+二价rlp2086)，在疫苗接种1后1个月达到抗白喉类毒素和破伤风类毒素抗原的预定抗体水平的受试者比例分别为98.1％(95％ci：96.8,98.9)和99.1％(95％ci：98.2,99.6)。

对于组2(mcv4+tdap+盐水)，在疫苗接种1后1个月达到抗白喉类毒素和破伤风抗原的预定抗体水平的受试者比例分别为99.0％(95％ci：98.0,99.6)和99.0％(95％ci：98.0,99.6)。

mcv4和tdap抗原的rcdc

在疫苗接种1之前和之后1个月，显示组1(mcv4+tdap+二价rlp2086)和组2(mcv4+tdap+盐水)的mcv4血清群a、c、y和w135的rsba效价分布的rcdc，在两组的疫苗接种1之后，对疫苗接种1后可评估免疫原性群体在受试者之间显示出稳健的免疫应答，并且曲线在整个rsba效价范围内是相似的。

在疫苗接种1之前和之后1个月，使用组1(mcv4+tdap+二价rlp2086)和组2(mcv4+tdap+盐水)的验证后lloq，显示对mcv4血清群a、c、y和w-135多糖的igg效价分布的rcdc，对疫苗接种1后可评估免疫原性群体，以及在疫苗接种1之前和之后1个月，使用组1(mcv4+tdap+二价rlp2086)和组2(mcv4+tdap+盐水)的验证lloq，显示对mcv4血清群a、c、y和w-135的igg效价分布的rcdc，对疫苗接种1后可评估免疫原性群体，在疫苗接种1后对两组使用验证和验验后lloq在受试者之间均显示稳健的免疫应答。

在疫苗接种1之前和之后1个月，显示组1(mcv4+tdap+二价rlp2086)和组2(mcv4+tdap+盐水)的2+3型的白喉、破伤风、百日咳类毒素，百日咳丝氨血红蛋白，百日咳粘附素和百日咳菌血凝素的tdap效价分布的rcdc，对疫苗接种1后可评估免疫原性群体在两组接种疫苗1后，在受试者之间表现出稳健的免疫应答。

对mcv4和tdap的免疫应答

抗tdap/mcv4抗原的抗体的gm在组2(mcv4+tdap+盐水)和组1(mcv4+tdap+二价rlp2086)之间相似，疫苗接种1后观察到的tdap/mcv4抗原gm表现出对两组的稳健的免疫应答。rcdc还支持组1和组2疫苗接种1后的稳健免疫应答。

与二价rlp2086+盐水+盐水和mcv4+tdap+盐水相比，mcv4+tdap+二价rlp2086的非劣性标准要求，对于10个mcv4/tdap抗原中的每一个(疫苗接种1后1个月)和使用2个主要mnb测试菌株(pmb80[a22]和pmb2948[b24])中的每一个的hsba效价(疫苗接种3后1个月)，gmr的双侧95％ci的下限大于0.67。对于两个mnb测试菌株和所有10个tdap和mcv4抗原，均满足该预定的阈值。本研究的共同主要免疫原性目标满足该预定的阈值因为它们满足了预定的非劣性标准。

在两组中首次接种疫苗后1个月测定时，由与二价rlp2086伴随给予mcv4疫苗和tdap疫苗诱导的免疫应答不比单独用mcv4和tdap疫苗诱导的免疫应答差。评估了对mcv4和tdap疫苗的所有抗原成分的免疫应答。

在两组中第三次疫苗接种后1个月测定时，如用2种mnb测试菌株进行的hsba测定的由与mcv4和tdap疫苗伴随给予的二价rlp2086所诱导的二价rlp2086诱导的免疫应答不比由单独的二价rlp2086诱导的免疫应答差。

对于mcv4+tdap+二价rlp2086组(组1)和mcv4+tdap+盐水组(组2)，6个tdap和4个mcv4抗原的血清应答率估计差异在-4.6％至0.3％，率差异的95％ci的下限等于9.1％或更低。由于差异的ci均大于-10％；这些差异在临床上并不显著。两组的受试者在疫苗接种1后，rcdc显示出稳健的免疫应答。对于接受mcv4+tdap的两组均观察到相对于基线的稳健的gmt。

对2个主要mnb测试菌株pmb80(a22)和pmb2958(b24)的从基线到疫苗接种3后1个月的4倍升高应答在接受mcv4+tdap+二价rlp2086的组(分别为84.0％和85.7％)和接受二价rlp2086+盐水+盐水的组(分别为88.7％和87.7％)之间是相似的。

免疫原性讨论

与二价rlp2086+盐水+盐水和mcv4+tdap+盐水相比，mcv4+tdap+二价rlp2086的非劣性标准要求，对于10个mcv4/tdap抗原中的每一个(疫苗接种1后1个月)和使用2个主要mnb测试菌株(a22和b24)中的每一个的hsba效价(疫苗接种3后1个月)，gmr的双侧95％ci的下限大于0.67(即在1.5的非劣性边界)。对于两个mnb测试菌株和10个tdap和mcv4抗原，满足了该预定的阈值。因此，达成两个共同主要的免疫原性目标。具体来说，这些数据至少支持以下几点：1)当在两组中首次疫苗接种后1个月测量时，与二价rlp2086一起给予的mcv4和tdap疫苗诱导的免疫应答(基于gm)不比由单独的mcv4和tdap疫苗诱导的免疫应答差。评估了对mcv4和tdap疫苗中所有组分的免疫应答。2)当在两组中第三次疫苗接种后1个月测量时，如用2种mnb测试菌株进行的hsba测量的，通过与mcv4和tdap疫苗一起给予的二价rlp2086所诱导的免疫应答(基于gmt)不比单独的二价rlp2086诱导的免疫应答差。

在这种随机分组、观察者盲、活性对照、多中心试验中，在≥10至<13岁的受试者中，二价rlp2086和mcv4+tdap疫苗二者的免疫原性在疫苗伴随施用时保持稳健。

总的来说，这些数据表明，tdap、mcv4、menacwy-crm和hpv疫苗可临床上伴随给予，并且这些疫苗建议在一次就诊中给予。本研究(b1971015)的数据支持该结论，并且可以与tdap和mcv4一起给予二价rlp2086。这项研究表明，至少2个剂量的二价rlp2086引起对两种主要mnb测试菌株的稳健的免疫应答。这项研究还显示3个剂量的二价rlp2086引起对两种主要mnb测试菌株(a22和b24)的稳健的免疫应答。在这些测试菌株上表达的fhbp与rlp2086疫苗抗原是异源的，并且代表在美国侵袭性脑膜炎球菌疾病分离物中鉴定的最流行的亚科a和亚科b变体。这两种变体在其他地理区域的疾病分离物中也是突出的。研究b1971015的免疫原性评估采用hsba效价增加4倍的定义。

两个主要mnb测试菌株中的每一个的lod的效价等于1:4(被认为是保护的相关因素)，并且对于这两个主要mnb测试菌株的验证lloq是对于pmb2948(b24)为等于1:8的hsba效价和对于pmb80(a22)为1:16。在接受二价rlp2086之前，低比例的研究受试者的hsba效价≥1:4，表明该群体中的大多数受试者可被认为不能对抗mnb疾病。第二次研究疫苗接种后，高比例的受试者达到hsba效价提高了4倍，并表现出免疫后效价≥1:4和≥lloq。这些对两种mnb菌株的应答率在接受二价rlp2086与mcv4+tdap共同施用的受试者和接受二价rlp2086与盐水受试者之间是相似的。rcdc还表明，无论二价rlp2086是否与mcv4+tdap共同施用，大多数受试者引起对2种主要mnb菌株的应答。

在目前的研究(b1971015)中，组1和组2合并时，pmb80(a22)的第二和第三剂量的二价rlp2086后，4倍应答率(95％ci)分别为64.0％(61.3,66.5)和86.3％(84.4,88.1)。对于b24也类似，组1和组2合并的第二和第三剂量的二价rlp2086后，4倍应答率(95％ci)分别为57.4％(54.6,60.1)和86.7％(84.8,88.5)。

值得注意的是，在研究b1971015中第二剂量的rlp2086后的免疫应答是稳健的，如从基线的hsba效价的4倍增加和疫苗接种后hsba效价≥lloq(1:16对于a22和1:8对于b24)的受试者比例所评估的。对于a22，合并的组1和组2中，第二剂量后达到hsba效价≥lloq(1:16)的受试者的百分比(95％ci)为68.0％(65.4,70.5)。对于b24，在第二研究剂量后，达到hsba效价≥lloq(1:8)的受试者为64.2％(61.5,66.8)。这些数据显示了2个剂量的二价rlp2086的大量hsba应答。

总体而言，这些结果表明，当二价rlp2086和mcv4+tdap伴随施用并满足共同主要研究目标时，对mcv4+tdap的免疫应答和对二价rlp2086的免疫应答保持稳定。

年龄在≥10至＜13岁的受试者的这些数据满足共同主要研究目标，支持可以与mcv4+tdap伴随给予二价rlp2086的假设。此外，在2或3个剂量的二价rlp2086疫苗接种后，高比例的受试者达到hsba4倍应答和hsba效价≥lloq，并且这些稳健的应答不受伴随使用mcv4+tdap的影响。当考虑免疫原性和安全性数据时，效益风险特征(benefit-riskprofile)支持二价rlp2086单独施用或与mcv4+tdap一起施用。

实施例12：评估在年龄≥10至＜26岁的健康受试者中给予脑膜炎球菌血清群b二价重组脂蛋白(rlp2086)疫苗的安全性和耐受性的3期、随机分组、活性对照、观察者盲法试验

这是一项3期、随机分组、活性对照、观察者盲法、多中心试验，其设计来评估二价rlp2086在≥10至<26岁的健康受试者中的安全性和耐受性。大约5,700名受试者以2：1的比例随机分配到2组之一。组1在第0个月(第1天)接受二价rlp2086，随后在第2和第6月接种疫苗。组2在第0和第6个月接受甲型肝炎病毒(hav)疫苗，在第2个月接受盐水注射。

二价rlp2086疫苗为0.5ml剂量，其配制成含有60μg各自纯化的亚科arlp2086蛋白(变体a05，seqidno：1)和纯化的亚科brlp2086蛋白(变体b01，seqidno：2)，0.15m氯化钠，摩尔比2.8的聚山梨酯80和0.25mgal³⁺如磷酸铝(alpo4)在ph6.0的10mm组氨酸缓冲盐水中。

hav疫苗(havrix，0.5ml剂量或1.0ml剂量)含有720elisa单位(el.u.)或1440el.u.的病毒抗原。特别地，havrix(甲型肝炎疫苗)是用于肌内施用的灭活病毒的无菌悬浮液。病毒(株hm175)在mrc-5人二倍体细胞中繁殖。年龄特异性剂量的hav疫苗(havrix)根据国家具体指南提供。每1ml成人剂量的疫苗含有1440el.u.的病毒抗原，吸附在0.5mg铝如氢氧化铝上。每个0.5ml小儿剂量的疫苗含有720el.u.的病毒抗原，吸附到0.25mg铝如氢氧化铝上。havrix含有以下赋形剂：在磷酸盐缓冲盐溶液和聚山梨酯20(0.05mg/ml)中的氨基酸补充物(0.3％w/v)。从制造过程中，havrix还含有残留的mrc-5细胞蛋白(不超过5mcg/ml)，福尔马林(不超过0.1mg/ml)和硫酸新霉素(不超过40ng/ml)，包括在细胞生长培养基中的氨基糖苷抗生素。不使用防腐剂配制havrix。

用于注射的无菌生理盐水溶液(0.9％氯化钠)以0.5ml剂量供应。

表a.研究设计

缩写:vax＝疫苗接种。

本研究评估了使用0、2和6个月方案在≥10至＜26岁的健康受试者中施用的120μg剂量水平的二价rlp2086的安全性和耐受性，并提供了二价rlp2086安全性数据库的重要组成部分。

在本研究中选择在0和6月施用的hav疫苗作为对照，因为没有证明可以作为活性对照的安全、具有免疫原性和有效的针对mnb的疫苗。与其他对该年龄组推荐的疫苗相比，hav疫苗具有良好的耐受性。此外，hav疫苗对未来旅行或其他暴露期间甲型肝炎病毒感染风险可能变得增加的受试者也有益。在对照组的第2个月施用盐水以使研究保持盲法。受试者如果符合任何排除标准，则不符合参与条件，包括：以前接种过任何脑膜炎球菌血清群b疫苗；接受过hav疫苗接种的受试者；接种任何hav疫苗的禁忌。在根据表a的每次疫苗接种就诊(就诊1、3和7)时，受试者接受1个剂量的120μg二价rlp2086或hav疫苗/盐水/hav疫苗。

受试者使用0、2、6个月的方案接受疫苗接种。组1在0月(第1天)接受二价rlp2086，随后在第2和第6月接种疫苗。组2在第0和第6月接受hav疫苗，并在第2个月注射盐水以保持研究盲法。年龄特异性剂量的hav疫苗根据国家具体指导原则提供。

安全群体的主要终点是从第一次研究疫苗接种至最后一次研究疫苗接种后6个月期间至少发生1次严重不良事件(sae)的受试者百分比，以及在每次接种后30天的时间段内出现至少1次医疗上不良事件(ae)。

总体而言，两组的在每次接种疫苗30天内报告至少1次sae的受试者比例≤3.0％，并且在二价rlp2086与hav疫苗/盐水对照组之间相似。在整个研究中，组2(hav疫苗/盐水)受试者比组1(二价rlp2086)报告了数量更大的比例的sae(分别为2.52％和1.55％)。在疫苗接种期间和随访阶段，与组1相比，组2中的受试者的数量更大的比例也报告了sae。总体来说，疫苗接种阶段报告的ae的百分比在组1中高于组2。在疫苗接种阶段，组1中的受试者比组2中的受试者报告更多的反应原性。反应原性ae被定义为在疫苗接种后7天内发生的任何ae，并匹配预定义的优选术语列表。对于接受二价rlp2086的组，本研究没有发现新的安全问题。本研究的数据表明，二价rlp2086在≥10岁至＜26岁的受试者中安全且耐受良好。

实施例13：在健康青少年中与其他许可疫苗伴随给予脑膜炎球菌血清群b二价rlp2086疫苗的免疫原性

背景：二价rlp2086脑膜炎奈瑟球菌血清群b(mnb)因子h结合蛋白(fhbp)疫苗在美国被批准用于预防10-25岁的侵袭性mnb疾病。在这个人群中伴随施用推荐的疫苗可以改善依从性，并最大限度地发挥公众健康的影响。

目标：为了证明当与trumenba伴随给予时，由(hpv4)或(脑膜炎球菌群a、c、y和w-135，mcv4)和(tdap)诱导的免疫应答(基于几何平均[gm]效价)。

设计/方法：研究1：受试者(11-<18岁)在0、2和6个月接受trumenba+hpv4、trumenba或hpv4。只接受trumenba或hpv4的受试者接受盐水注射以维持盲法。研究2：受试者(10-<13岁)接受mcv4+tdap+trumenba、mcv4+tdap或trumenba。在0、2和6个月施用trumenba。在第0个月给予mcv4和tdap。仅接受mcv4和tdap或trumenba的组在第0、2和6月接受盐水注射以维持盲法。在最终疫苗施用后评估免疫应答。在两项研究中，如果各组之间gm比率的95％ci的下限>0.67(1.5倍非劣性边界)，则实现非劣。

结果：当这些疫苗与trumenba共同施用时，除了hpv18(较低的95％ci＝0.62)之外的所有hpv抗原以及所有tdap和mcv4抗原都满足非劣性标准。当hpv4单独给予或与trumenba一起给予时，所有hpv抗原的血清转化率均≥99％。当trumenba与许可疫苗共同施用时，mnbhsba应答满足非劣性标准(表)。

数据支持与推荐给美国青少年的hpv4、mcv4和tdap疫苗共同施用trumenba。

表.最后一次疫苗接种后1个月的几何平均值比较

ci＝置信区间；gmt＝几何平均效价；hpv＝人乳头瘤病毒；hpv4＝人乳头瘤病毒四价疫苗；mcv4＝脑膜炎球菌(群a,c,y和w-135)多糖白喉类毒素缀合疫苗；mnb＝脑膜炎奈瑟球菌血清群b；

na＝不适用；tdap＝吸附的破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳疫苗。

^an＝对于给定抗原或菌株具有有效和确定的测定结果的受试者数量。

^b使用在疫苗接种3后1个月所有具有有效和确定测定结果的受试者计算几何平均值。

^cgm之比。

^d比的ci是基于这些测量的对数的平均差异的studentt分布的置信区间的反向变换(组1-组3(hpv效价)；组1-组2(tdap/mcv4抗原))。

^e在第三个疫苗接种后1个月的竞争性免疫测定中评估的对hpv抗原的免疫应答。

^f在第三个二价rlp2086疫苗接种后1个月使用人补体的血清杀菌测定中评估的对mnb抗原的免疫应答。

^g在单个疫苗接种后1个月的luminex测定中评估的对白喉、破伤风和百日咳抗原的免疫应答。

^h在单个疫苗接种后1个月使用兔补体的血清杀菌测定中评估的对mcv4抗原的免疫应答。

实施例14：二价rlp2086、脑膜炎球菌血清群b疫苗在青少年中的免疫原性3期试验：针对一组抗原多样性菌株的杀菌活性

背景：

在美国批准了靶向因子h结合蛋白(fhbp)的二价rlp2086，以预防10-25岁的脑膜炎球菌血清群b(mnb)疾病。具有二价rlp2086的广泛保护最初用4种表达具有不同于疫苗抗原的序列的fhbp的不同侵入性的mnb菌株在hsba中证实。在这个关键的3期试验中，具有代表了流行侵袭性mnb菌株多样性的10个额外mnb测试菌株的hsba数据进一步支持了对mnb疾病的广泛覆盖(clinicaltrials.gov：nct01830855)。

方法：

10-＜19岁的健康受试者在0、2和6个月时随机接受二价rlp2086，或者在0和6个月时接受甲型肝炎病毒疫苗和在2个月时接受盐水。在具有4个主要mnb测试菌株(主要终点；n＝1210-1266)的hsba中和在使用10个次要mnb测试菌株(次要终点；n＝266-281)的群体子集中评估免疫应答。所有菌株表达与疫苗异源的fhbp。

结果：

在二价rlp2086接受者中，通过hsba效价≥lloq测量的4个主要mnb测试菌株的剂量2和3后1个月的hsba应答分别为64.0％-99.1％和87.1％-99.5％(表)。剂量2和3后1个月，对10个次要mnb测试菌株的hsba应答分别为61.1％-100.0％和75.1％-98.6％。每个次要测试菌株的hsbagmt从在基线时的4.5-11.4增加到剂量3之后的22.1-93.5。

表.二价rlp2086对次要mnb测试菌株的免疫原性

结论：

二价rlp2086疫苗接种导致在2和3个剂量后针对与疫苗抗原异源的不同mnb菌株的稳健的免疫应答。高比例的个体发展出对10种额外的mnb测试菌株的保护性hsba效价大于保护相关因素(hsba效价≥1:4)。总的来说，这些3期免疫原性数据支持二价rlp2086广泛保护青少年免受mnb疾病侵害。

实施例15：二价rlp2086、脑膜炎球菌血清群b疫苗在年轻人中的免疫原性3期试验：针对一组抗原多样性菌株的杀菌活性

背景：

在美国批准了靶向因子h结合蛋白(fhbp)的二价rlp2086，以预防10-25岁的脑膜炎球菌血清群b(mnb)疾病。具有二价rlp2086的广泛保护最初用4种表达具有不同于疫苗抗原的序列的fhbp的不同侵入性的mnb菌株在hsba中证实。在这个关键的3期试验中具有代表了流行侵袭性mnb菌株多样性的10个额外mnb测试菌株的hsba数据进一步支持了对mnb疾病的广泛覆盖(clinicaltrials.gov：nct01352845)。

方法：

18-＜26岁的健康受试者在0、2和6个月时随机接受二价rlp2086或盐水。在具有4个主要mnb测试菌株(主要终点；n＝1702-1714)的hbbas中和使用10个次要mnb测试菌株(次要终点；n＝273-284)的群体子集中(n＝273-284)评估免疫应答。所有菌株表达与疫苗异源的fhbp。

结果：

在二价rlp2086接受者中，通过hsba效价≥lloq测量的4个主要mnb测试菌株的剂量2和3后1个月的hsba应答分别为68.3％-97.4％和87.4％-99.4％(表)。剂量2和3后1个月，对10个次要mnb测试菌株的hsba应答分别为51.6％-97.9％和71.3％-99.3％。每个次要菌株的hsbagmt从在基线时的5.1-13.9增加到剂量3之后的20.6-96.3。

表.二价rlp2086对次要mnb测试菌株的免疫原性

结论：

二价rlp2086疫苗接种引起在2和3剂量后针对表达与疫苗抗原异源的fhbp变体的不同mnb菌株的稳健的免疫应答。高比例的个体发展出对10种额外的mnb测试菌株的保护性hsba效价大于保护相关因素(hsba效价≥1:4)。总的来说，这些3期免疫原性数据支持二价rlp2086广泛保护年轻人免受mnb疾病侵害。

序列表

<110>辉瑞大药厂

<120>脑膜炎奈瑟球菌组合物及其方法

<130>pc072198

<150>62/118457

<151>2015-02-19

<150>62/280212

<151>2016-01-19

<160>23

<170>patentinversion3.5

<210>1

<211>258

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成氨基酸序列

<400>1

cysglyserserglyglyglyglyvalalaalaaspileglythrgly

151015

leualaaspalaleuthralaproleuasphislysasplysglyleu

202530

lysserleuthrleugluaspserileserglnasnglythrleuthr

354045

leuseralaglnglyalaglulysthrphelysvalglyasplysasp

505560

asnserleuasnthrglylysleulysasnasplysileserargphe

65707580

aspphevalglnlysilegluvalaspglyglnthrilethrleuala

859095

serglyglupheglniletyrlysglnasphisseralavalvalala

100105110

leuglnileglulysileasnasnproasplysileaspserleuile

115120125

asnglnargserpheleuvalserglyleuglyglygluhisthrala

130135140

pheasnglnleuproserglylysalaglutyrhisglylysalaphe

145150155160

serseraspaspalaglyglylysleuthrtyrthrileasppheala

165170175

alalysglnglyhisglylysilegluhisleulysthrproglugln

180185190

asnvalgluleualaseralagluleulysalaaspglulysserhis

195200205

alavalileleuglyaspthrargtyrglysergluglulysglythr

210215220

tyrhisleualaleupheglyaspargalaglngluilealaglyser

225230235240

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lysgln

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<212>prt

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<220>

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