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发明背景
肺癌是最常见的癌症形式之一，是导致男性和女性癌症死亡的主要原因。每年死于肺癌的人数比结肠癌、乳腺癌和前列腺癌的总和还要多。非小细胞肺癌(nsclc)是肺癌最常见的形式。虽然有吸烟史的患者患肺癌的风险较高，但肺癌也会影响到非吸烟者。尽管改善了医学疗法，但提高肺癌患者的生存率难度依然很大。在治疗选项有限时，大多数肺癌只有到了晚期才被检出。人们逐渐认识到，肺癌和其他恶性肿瘤是由各种致病机制引起的。在分子水平表征这些恶性肿瘤的方法对于患者分层是有用的，从而迅速地指导他们接受有效的疗法。迫切需要改进的方法以预测患有肺癌，包括nsclc的受试者的响应性。
发明概述
如下所述，本发明特征在于针对被鉴定为患有egfr突变阳性肿瘤(例如，egfr基因的外显子19缺失)的受试者，用抗pd-l1抗体和表皮生长因子受体(egfr)酪氨酸激酶抑制剂(例如，吉非替尼)治疗非小细胞肺癌的方法。
一方面，本发明特征在于一种用于治疗人类患者中的非小细胞肺癌(nsclc)的方法，该方法包括以每2周约3mg/kg至约10mg/kg之间的剂量向该患者给予抗pd-l1抗体或其抗原结合片段，并且每天向该患者给予约250mg的表皮生长因子受体(egfr)酪氨酸激酶抑制剂，从而治疗该患者中的nsclc。
另一方面，本发明特征在于用于治疗人类患者中的非小细胞肺癌(nsclc)的方法，该方法包括以每2周约3mg/kg或约10mg/kg的剂量向该患者给予抗pd-l1抗体或其抗原结合片段，并且每天向该患者给予约250mg的egfr酪氨酸激酶抑制剂，从而治疗该患者中的nsclc。
另一方面，本发明提供了一种治疗方法，该方法包括每2周向被鉴定为患有非小细胞肺癌的患者给予约3mg/kg至约10mg/kg之间的抗pd-l1抗体或其抗原结合片段，并且每天向该患者给予约250mg的egfr酪氨酸激酶抑制剂，该非小细胞肺癌为egfr激活突变阳性的。
另一方面，本发明提供了一种治疗方法，该方法包括每2周向被鉴定为患有非小细胞肺癌的患者给予约3mg/kg至约10mg/kg之间的medi4736或其抗原结合片段，并且每天向该患者给予250mg的吉非替尼，该非小细胞肺癌为egfr激活突变阳性的。
在本文所述的任何方面的各种实施例中，该抗pd-l1抗体具有以下各项中的一个或多个：重链cdr1，其包含氨基酸序列gftfsrywms(seqidno：3)；重链cdr2，其包含氨基酸序列nikqdgsekyyvdsvkg(seqidno：4)；重链cdr3，其包含氨基酸序列eggwfgelafdy(seqidno：5)；轻链cdr1，其包含氨基酸序列rasqrvsssyla(seqidno：6)；轻链cdr2，其包含氨基酸序列dassrat(seqidno：7)；以及轻链cdr3，其包含氨基酸序列qqygslpwt(seqidno：8)。在某些实施例中，抗pd-l1抗体具有以下各项中的一个或多个：重链，其包含氨基酸序列：
eivltqspgtlslspgeratlscrasqrvsssylawyqqkpgqaprlliydassratgipdrfsgsgsgtdftltisrlepedfavyycqqygslpwtfgqgtkveik(seqidno：1)
以及轻链，其包含氨基酸序列：
evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfsrywmswvrqapgkglewvanikqdgsekyyvdsvkgrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycareggwfgelafdywgqgtlvtvss(seqidno：2)。
在具体实施例中，该抗pd-l1抗体是medi4736。在各种实施例中，抗pd-l1抗体或medi4736或其抗原结合片段的给予是通过静脉内输注进行的。
在本文所述的任何方面的各种实施例中，egfr酪氨酸激酶抑制剂是吉非替尼、埃罗替尼、埃克替尼(icotinib)、阿法替尼(afatinib)、达可替尼(dacomitinib)、来那替尼(neratinib)、诺司替尼(rociletinib)和azd9291中的一种或多种。在各种实施例中，egfr酪氨酸激酶抑制剂或吉非替尼的给予是通过口服给予进行的。
在本文所述的任何方面的各种实施例中，该抗pd-l1抗体、medi4736或其抗原结合片段是在给予吉非替尼之前、期间或之后给予的。在本文所述的任何方面的各种实施例中，该抗pd-l1抗体、medi4736或其抗原结合片段是与吉非替尼同时给予的。
在本文所述的任何方面的各种实施例中，非小细胞肺癌选自下组，该组由以下各项组成：鳞状细胞癌、腺癌、大细胞癌、腺鳞癌和肉瘤样癌。
在本文所述的任何方面的各种实施例中，medi4736是以每2周约3mg/kg至约10mg/kg之间(例如，每2周约3m/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg或约10mg/kg)给予一次。在各种实施例中，medi4736和吉非替尼的给予持续8、10、12、16、20、24周或更长时间。
在本文所述的任何方面的各种实施例中，治疗使得肿瘤直径、肿瘤体积、肿瘤质量和肿瘤负荷中的一种或多种处于稳定状态或者使其减小。
在本文所述的任何方面的各种实施例中，egfr激活突变是egfr激酶结构域中的突变或缺失。在某些实施例中，缺失包括egfr多肽的746-750(elrea)(seqidno：13)位处的氨基酸。在具体实施例中，缺失位于由egfr核酸分子的外显子19编码的区域中。在进一步的实施例中，egfr多肽包含在790位的甲硫氨酸。
在本文所述的任何方面的各种实施例中，患者被鉴定为对egfr酪氨酸激酶抑制剂的治疗有反应。在本文所述的任何方面的各种实施例中，患者正在经历或者已经经历了用egfr酪氨酸激酶抑制剂或吉非替尼进行的治疗。在本文所述的任何方面的各种实施例中，与单独给予egfr酪氨酸激酶抑制剂或吉非替尼相比，该治疗增加了总存活期。
本发明的其他特征及优点将在详细说明以及在权利要求书中呈现。
定义
除非另外说明，本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所属领域的技术人员通常理解的含义。以下参考文献为本领域技术人员提供本发明中所使用的许多术语的一般定义：辛格尔顿(singleton)等人，微生物学和分子生物学词典(dictionaryofmicrobiologyandmolecularbiology)(第2版，1994)；剑桥科技词典(thecambridgedictionaryofscienceandtechnology)(沃克(walker)编著，1988)；遗传学词汇(theglossaryofgenetics)，第5版，r.雷格(r.rieger)等人(编著)，施普林格·维拉格(springerverlag)(1991)；以及黑尔(hale)和马汉姆(marham)，哈珀科林斯生物学词典(theharpercollinsdictionaryofbiology)(1991)。除非另外指明，否则如在此所使用的以下术语具有以下赋予它们的含意。
“程序性死亡配体1(pd-l1)多肽”意指与ncbi登录号np_001254635具有至少约85％氨基酸一致性、并且具有pd-1和cd80结合活性的多肽或其片段。以下提供示例性pd-l1氨基酸序列：
“pd-l1核酸分子”意指编码pd-l1多肽的多核苷酸。示例性pd-l1核酸分子序列以ncbi登录号nm_001267706提供。
“抗pd-l1抗体”意指选择性结合pd-l1多肽的抗体。示例性抗pd-l1抗体描述于，例如美国专利号8,779,108/美国公开号20130034559(其披露内容通过引用以其全文结合在此)中。在一个具体实施例中，抗pd-l1抗体是medi4736，其具有以下cdr和重链及轻链序列：
medi4736vhcdr1
gftfsrywms(seqidno：3)
medi4736vhcdr2
nikqdgsekyyvdsvkg(seqidno：4)
medi4736vhcdr3
eggwfgelafdy(seqidno：5)
medi4736vlcdr1
rasqrvsssyla(seqidno：6)
medi4736vlcdr2
dassrat(seqidno：7)
medi4736vlcdr3
qqygslpwt(seqidno：8)
medi4736重链
evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfsrywmswvrqapgkglewvanikqdgsekyyvdsvkgrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycareggwfgelafdywgqgtlvtvss(seqidno：2)
medi4736轻链
eivltqspgtlslspgeratlscrasqrvsssylawyqqkpgqaprlliydassratgipdrfsgsgsgtdftltisrlepedfavyycqqygslpwtfgqgtkveik(seqidno：1)
“表皮生长因子受体(egfr)多肽”意指与ncbi登录号np_005219具有至少约85％氨基酸一致性、并且具有酪氨酸激酶活性的多肽或其片段。以下提供示例性egfr氨基酸序列：
在各种实施例中，egfr包含激活突变。在一些实施例中，与野生型egfr相比，含egfr的突变对酪氨酸激酶抑制剂更敏感。在某些实施例中，egfr含有包含在746-750位(elrea)(seqidno：13)的氨基酸的缺失。
“egfr核酸分子”意指编码egfr多肽的多核苷酸。以ncbi登录号nm_005228提供了示例性egfr核酸分子序列，其在下文中呈现：
在各种实施例中，egfr核酸分子在外显子19中含有框内缺失，该缺失编码egfr激酶结构域的部分。
“酪氨酸激酶抑制剂(tki)分子”意指受体酪氨酸激酶(例如，egfr)的酪氨酸激酶结构域的抑制剂。在一些实施例中，酪氨酸激酶抑制剂特异性结合和/或抑制特异性受体酪氨酸激酶结构域的激酶活性。因此，tki可以区分序列一致性密切相关的蛋白酪氨酸激酶。
“egfr酪氨酸激酶抑制剂(tki)分子”意指特异性结合激酶结构域和/或抑制egfr多肽的激酶活性的化合物。在各种实施例中，egfr酪氨酸激酶抑制剂包括吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼和azd9291。在具体实施例中，选择被鉴定为患有egfr突变阳性非小细胞肺癌的受试者来采用egfr酪氨酸激酶抑制剂和抗pd-l1抗体进行治疗。
“吉非替尼”意指具有以下化学式的化合物：
吉非替尼(cas号184475-35-2)也称为n-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉丙氧基)喹唑啉-4-胺、n-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-[3-(4-吗啉)丙氧基]喹唑啉-4-胺，并且为商品名
如在本披露中所用，术语“抗体”是指免疫球蛋白或其片段或衍生物，并且涵盖包含抗原结合位点的任何多肽，无论它在体外或在体内产生。该术语包括但不限于多克隆、单克隆、单特异性、多特异性、非特异性、人源化、单链、嵌合、合成、重组、杂交、突变以及接枝的抗体。除非用术语“完整”另外修饰，如在“完整抗体”中，出于本披露的目的，术语“抗体”还包括抗体片段诸如fab、f(ab′)2、fv、scfv、fd、dab以及保留抗原结合功能(即，特异性结合pd-l1的能力)的其他抗体片段。典型地，这类片段将包含抗原结合结构域。
术语“抗原结合结构域”、“抗原结合片段”和“结合片段”是指包括负责抗体和抗原之间特异性结合的氨基酸的抗体分子的一部分。例如，在抗原很大的情况下，抗原结合结构域可只结合抗原的一部分。负责与抗原结合结构域特异性相互作用的抗原分子的一部分被称为“表位”或“抗原决定簇”。抗原结合结构域典型地包括抗体轻链可变区(vl)和抗体重链可变区(vh)，然而，它不一定必须包括两者。例如，所谓的fd抗体片段仅由vh结构域组成，但是仍然保留完整抗体的一定抗原结合功能。
抗体的结合片段通过重组dna技术或通过完整抗体的酶促或化学裂解来产生。结合片段包括fab、fab′、f(ab′)2、fv以及单链抗体。除了“双特异性”或“双功能”抗体以外，抗体应理解为其每个结合位点是相同的。使用酶(木瓜蛋白酶)来消化抗体的结果是两个相同的抗原结合片段，又称为“fab”片段和“fc”片段，它们不具有抗原结合活性，但具有结晶的能力。用酶(胃蛋白酶)来消化抗体的结果是f(ab′)2片段，其中该抗体分子的两个臂保持链接并且包括两个抗原结合位点。f(ab′)2片段具有交联抗原的能力。当在此使用时，“fv”是指保留了抗原识别和抗原结合位点的抗体的最小片段。当在此使用时，“fab”是指包括轻链的恒定结构域和重链的chi结构域的抗体的片段。
术语“mab”是指单克隆抗体。本发明的抗体包括但不限于全天然抗体、双特异性抗体；嵌合抗体；fab、fab′、单链v区片段(scfv)、融合多肽以及非常规抗体。
在本披露中，“包括(comprises、comprising)”、“包含(containing)”和“具有(having)”等可以具有美国专利法赋予它们的意义并且可以意味着“包括(includes、including)”等；“基本上由...组成(consistingessentiallyof或consistsessentially)”同样具有美国专利法赋予的意义并且该术语是开放性的，允许超出所叙述的存在，只要所叙述的基本或新特征不被超过叙述的存在改变，但是排除现有技术实施例。
“参比”意指用于比较的标准。
“应答性”在治疗学的情况下意指易受治疗的影响。
“特异性结合”意指识别并结合一种分子(例如，多肽)，但是基本上不识别和不结合样品例如生物样品中的其他分子的化合物(例如，抗体)。例如，特异性结合的两个分子形成在生理条件下相对稳定的复合物。特异性结合的特征在于高亲和力和区别于非特异性结合的低等至中等容量，非特异性结合通常具有中等至高等容量的低亲和力。典型地，当亲和力常数ka高于106m-1，或更优选地高于108m-1时，结合被认为是特异的。如果需要的话，可以通过改变结合条件来减少非特异性结合，基本上不影响特异性结合。如抗体浓度、溶液的离子强度、温度、允许结合的时间、封闭剂(例如，血清白蛋白、乳酪蛋白)的浓度等适当的结合条件，可被熟练的技术人员使用常规技术来优化。
“受试者”意指哺乳动物，包括但不限于人或非人哺乳动物，如牛、马、犬、羊或猫。在具体实施例中，受试者是患有非小细胞肺癌(nsclc)的人类患者。有三个主要的nsclc亚型：鳞状细胞癌、腺癌和大细胞(未分化)癌。其他亚型包括腺鳞癌和肉瘤样癌。
在此提供的范围被理解成对范围内的所有值的简写。例如，1到50的范围应当理解为包括来自下组的任何数字、数字组合或子范围，该组由以下各项组成：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50。
如在此所使用的术语“治疗(treat、treating、treatment等)”指的是减少或改善失调和/或与其相关联的症状。将被理解的是，尽管不能排除，治疗失调或病症并不要求完全地消除该失调、病症或与其相关联的症状。
除非明确声明或从上下文显而易见，如在此所使用的，术语“或”被理解为包括在内。除非明确声明或从上下文显而易见，如在此所使用的，术语“一种(a)”、“一个(an)”和“该(the)”被理解为单数的或复数的。
除非确切规定或从上下文显而易见，否则如在此所使用的术语“约(about)”被理解为在本领域的正常公差范围内，例如，在平均数的2个标准偏差之内。大约可以被理解为在声明值的10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％、或0.01％之内。除非从上下文显而易见，在此提供的所有数值被该术语约修饰。
在本文中在变量的任何定义中对化学基团清单的引用包括将所述变量定义为任何单个基团或所列基团的组合。在本文中对变量或方面的实施例的详述包括作为任何单个实施例或与任何其他实施例或其部分结合的实施例。
本文提供的任何组合物或方法可以与本文提供的一个或多个任何其他组合物和方法进行组合。
具体实施方式
如下文所述，本发明特征在于用于采用抗pd-l1抗体和egfr酪氨酸激酶抑制剂(例如，吉非替尼)对受试者(例如，被鉴定为患有egfr激活突变阳性的非小细胞肺癌肿瘤的受试者)进行治疗的方法。程序性死亡配体1(pd-l1)
免疫系统，特别是t细胞介导的细胞毒性在肿瘤控制中的作用是公认的。尽管已经显示了在早期和晚期癌症患者体内归因于t细胞的肿瘤生长和存活的控制，但是肿瘤特异性t细胞应答很难在癌症患者体内稳定存在和维持下来。
迄今为止受到显著关注的一个t细胞调控通路通过程序性死亡配体1(pd-l1，也被称为b7h-1或cd274)发信号。pd-l1也是涉及控制t细胞激活的受体和配体的复杂系统的一部分。在正常组织中，pd-l1在t细胞、b细胞、树突细胞、巨噬细胞、间充质干细胞、骨髓源性肥大细胞以及不同非造血细胞上表达。它的正常功能是通过与它的两个受体程序性死亡1(又称为pd-1或cd279)和cd80(又称为b7-1或b7.1)的相互作用来调节t-细胞激活与耐受之间的平衡。pd-l1还通过肿瘤来表达并且在多个部位上起作用以帮助肿瘤避开由宿主免疫系统进行的检测和消除。pd-l1在宽范围的癌症中高频率地表达。在一些癌症中，pd-l1的表达与存活降低和不利预后相关联。阻断pd-l1与它的受体之间的相互作用的抗体能够在体外解除pd-l1依赖性免疫抑制作用并且增强抗肿瘤t细胞的细胞毒性活性。
抗pd-l1抗体
特异性结合并抑制pd-l1活性(例如，结合pd-1和/或cd80)的抗体可用于治疗肺癌(例如，非小细胞肺癌)。实际上本领域已知的任何抗pd-l1抗体都可用于本发明所述的方法。合适的抗pd-l1抗体包括，例如，已知的抗pd-l1抗体、可商购的抗pd-l1抗体、或使用本领域熟知的方法开发的抗pd-l1抗体。抗pd-l1抗体包括但不限于medi4736、mpdl3280a(genentech/roche)、bms-936559(bristolmyerssquibb)和msb0010718c(merckserono)。
medi4736是示例性抗pd-l1抗体，其对pd-l1有选择性并且阻断了pd-l1与pd-1和cd80受体的结合。medi4736可以在体外解除pd-l1介导的对人t-细胞激活的抑制，并且通过t-细胞依赖性机制在异种移植物模型中抑制肿瘤生长。
关于用于在此提供的方法中的medi4736(或其片段)的信息可以见于us8,779,108/us2013/0034559(其披露内容通过引用以其全文结合在此)中。medi4736的片段可结晶(fc)结构域在igg1重链的恒定结构域中含有三重突变，该三重突变使与负责介导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)的补体组分c1q和fcγ受体的结合减少。
用于在此提供的这些方法中的medi4736和其抗原结合片段包括重链和轻链或重链可变区和轻链可变区。在一个特定方面中，用于在此所提供的这些方法中的medi4736或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，该轻链可变区包含seqidno：1的氨基酸序列，该重链可变区包含seqidno：2的氨基酸序列。在具体方面中，用于在此提供的这些方法中的medi4736或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，其中该重链可变区包含seqidno：3-5的卡巴特(kabat)定义的cdr1、cdr2和cdr3序列，并且其中该轻链可变区包含seqidno：6-8的卡巴特定义的cdr1、cdr2和cdr3序列。本领域技术人员将能够容易地鉴定对于本领域技术人员而言已知的乔西亚(chothia)定义、abm定义或其他cdr定义。在一个特定方面，用于在此提供的这些方法中的medi4736或其抗原结合片段包含如在us8,779,108/us2013/0034559中所披露的2.14h9opt抗体的可变重链和可变轻链cdr序列，这些中的披露内容都通过引用以其全文结合在此。
表皮生长因子受体(egfr)
表皮生长因子受体(egfr、erbb1或her1)是由c-erbb1原癌基因编码的170kda的跨膜糖蛋白。egfr是受体酪氨酸激酶(rtk)的人表皮生长因子受体(her)家族的一个成员，其包含her2(erbb2)、her3(erbb3)和her4(erbb4)。
受体酪氨酸激酶在生物化学信号(其启动细胞复制)的传递中是十分重要的。它们是跨越细胞膜的大型酶类，并且具有针对生长因子(例如表皮生长因子(egf))的胞外结合域、和用作激酶来磷酸化在蛋白质中的酪氨酸氨基酸的胞内部分，并因此来影响细胞增殖。基于与不同受体酪氨酸激酶结合的生长因子家族，各种分类的受体酪氨酸激酶是已知的(威尔克斯，癌症研究进展(advancesincancerresearch)，1993，60，43-73)。该分类包括i类受体酪氨酸激酶，其包含受体酪氨酸激酶的egf家族，例如egf、tgfα、neu、erbb、xmrk、her和let23受体；ii类受体酪氨酸激酶，其包含受体酪氨酸激酶的胰岛素家族，例如胰岛素、igfi和胰岛素相关受体(irr)受体；和iii类受体酪氨酸激酶，其包含受体酪氨酸激酶的血小板衍生生长因子(pdgf)家族，例如pdgfα、pdgfβ和集落刺激因子1(csf1)受体。已知i类激酶，例如受体酪氨酸激酶的egf家族经常存在于常见人类癌症中，例如乳腺癌(sainsbury等人，英国癌症杂志(brit.j.cancer)，1988，58，458；guerin等人，致癌基因研究(oncogeneres.)，1988，3，21和klijn等人，乳腺癌研究与治疗(breastcancerres.treat.，1994，29，73)，包括腺癌的非小细胞肺癌(nsclc)(cerny等人，英国癌症杂志(brit.j.cancer)，1986，54，265；reubi等人，国际癌症杂志(int.j.cancer)1990，45，269；和rusch等人，癌症研究(cancerresearch)，1993，53，2379)以及肺鳞状细胞癌(hendler等人，癌症细胞(cancercells)，1989，7，347)，膀胱癌(neal等人，柳叶刀(lancet)，1985，366)，食管癌(mukaida等人，癌症(cancer)，1991，68，142)，胃肠癌，例如结肠癌、直肠癌或胃癌(bolen等人，致癌基因研究(oncogeneres.)，1987，1，149)，前列腺癌(visakorpi等人，histochem.j.，1992，24，481)，白血病(konaka等人，细胞(cell)，1984，37，1035)和卵巢癌、支气管癌或胰腺癌(欧洲专利说明书号0400586)。还已知egf型酪氨酸激酶活性在正常细胞中很少检测到，而在恶性细胞中则可更频繁地被检测到(hunter，细胞(cell)，1987，50，823)。最近已经显示(w.j.gullick，英国医学通报(brit.med.bull.)，1991，47，87)具有酪氨酸激酶活性的egf受体在脑肿瘤、肺鳞状细胞肿瘤、膀胱肿瘤、胃肿瘤、乳腺肿瘤、头颈部肿瘤、食道肿瘤、妇科肿瘤和甲状腺肿瘤等多种人类癌症中过表达。
egfr信号转导通过配体结合引发，随后诱导受体与其他erbb家族成员的形态变化、均二聚化或异二聚化，以及受体的反式自磷酸化(ferguson等人，生物物理学杂志年度评论(annurevbiophys)，37：353-73，2008)，其启动信号转导级联反应，该级联反应最终影响细胞增殖和存活等多种细胞功能。egfr的表达或激酶活性的增加已经与一系列人类癌症相关联，使egfr成为干预治疗的一种有吸引力的靶标(mendelsohn等人，致癌基因(oncogene)19：6550-6565，2000；grünwald等人，美国国立癌症研究所杂志(jnatlcancerinst)95：851-67，2003；mendelsohn等人，肿瘤学研讨会(seminoncol)33：369-85，2006)。在非小细胞肺癌中，egfr基因拷贝数和蛋白质表达两者的增加都与(hirsch等人，肿瘤学年鉴(annoncol)18：752-60，2007)对egfr酪氨酸激酶抑制剂
egfr酪氨酸激酶抑制剂(tki)
表皮生长因子受体(egfr)中的酪氨酸激酶的抑制剂通过阻断导致肿瘤生长和扩散的egfr信号而起作用。与具有野生型egfr的非小细胞肺癌(nsclc)相比，以表皮生长因子受体(egfr)突变为特征的那些nsclc已显示对采用tki进行治疗敏感。在各种实施例中，egfr突变激活egfr信号转导(例如，通过激酶活性)和/或发生在egfr激酶结构域中。在egfr基因的外显子18到21的四个外显子中发现激活表皮生长因子受体(egfr)突变，其中所有突变中的大约90％是由于外显子19中的缺失或外显子21中的l858r点突变产生的(参见例如，gazdar等人，分子医学动态(trendsmolmed)2004；10：481-486；yoshida等人，胸部肿瘤学杂志(jthoraconcol)2007；2：22-28；forbes等人，当代人类遗传学实验技术(currprotochumgenet)2008；第10章：10.11单元；mok等人，新英格兰医学杂志(nengljmed)2009；361：947-957；wu等人，临床癌症研究(clincancerres)2011；17：3812-3821；kim等人，肺癌(lungcancer)2011；71：65-69；kosaka等人，临床癌症研究(clincancerres)2006；12：5764-5769；masago等人，胸部肿瘤学杂志(jthoraconcol)2010；40：1105-1109；mitsudomi等人，柳叶刀肿瘤学(lancetoncology)2010；11：121-128；sharma等人，自然综述-癌症(naturerevcancer)2007；7：169-181，其披露内容通过引用以其全文结合在此)。不受特定理论束缚，在突变的egfr中，酪氨酸激酶抑制剂以高特异性和亲和力结合egfr酪氨酸激酶结构域，导致异常信号转导通路的高强抑制作用。在一些实施例中，这使得在大多数患有egfr突变阳性肿瘤的患者中都产生明显的肿瘤体积缩小。
egfr的第一代可逆酪氨酸激酶抑制剂(tki)包括例如，吉非替尼(
第二代不可逆的egfrtki在晚期临床发展中具有克服可逆的酪氨酸激酶抑制剂的egfr抗性的潜力。第二代不可逆的egfrtki包括例如，阿法替尼(
第三代不可逆egfrtki是突变选择性的，并且被设计为靶向野生型egfr的突变型egfr。相比之下，第一代和第二代egfr抑制剂最初被设计为靶向野生型egfr。第三代不可逆的egfrtki包括例如，诺司替尼(co-1686；克洛维斯肿瘤公司(clovisoncology))和azd9291(阿斯利康公司)。azd9291具有以下化学式：
azd9291(cas号184475-35-2)也称为n-(2-((2-(二甲基氨基)乙基(甲基)氨基]-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺和2-丙烯酰胺、n-[2-[[2-(二甲基氨基)乙基]甲基氨基]-4-甲氧基-5-[[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-)。azd9291及其用途描述于，例如us2013/0053409(其披露内容通过引用以其全文结合在此)中。在临床前模型中，azd9291对egfr-tki敏感性和抗性t790m突变均有效(janne等人，临床肿瘤学杂志(jclinoncol)32：5s，2014suppl；abstr8009)。
抗pd-l1和egfrtki治疗的选择
患有肺癌(例如，非小细胞肺癌)的受试者可以在选择治疗方法的过程中对egfr突变进行测试。用于检测egfr突变的商业测试是可用的，包括例如，egfrrgqpcr试剂盒(thermoscreen-qiagen)、egfr29突变检测(amoy)pnaclampegfr突变检测试剂盒(panagene)、
在某些方面，对具有实体瘤的nsclc患者给予medi4736或其抗原结合片段和egfr酪氨酸激酶抑制剂，例如吉非替尼。在某些方面，实体瘤是非小细胞肺癌(nsclc)，其是鳞状细胞癌、腺癌、大细胞癌、腺鳞癌和肉瘤样癌中的一种或多种。
medi4736或其抗原结合片段的给药之间的间隔可以是约每2周一次。每天给予egfr酪氨酸激酶抑制剂或吉非替尼。在某些方面中，该患者被给予一个或多个剂量的egfr酪氨酸激酶抑制剂或吉非替尼，剂量为每天约250mg。在某些方面，根据在此提供的方法，egfr酪氨酸激酶抑制剂或吉非替尼的给予是通过肠内或肠给予进行的。在某些方面，根据在此提供的方法，egfr酪氨酸激酶抑制剂或吉非替尼的给予是通过口服给予进行的。例如，将egfr酪氨酸激酶抑制剂或吉非替尼配制到用于口服给予的组合物(例如，丸剂或片剂)中。
在某些方面中，该患者被给予两个或更多个剂量的medi4736或其抗原结合片段，其中该剂量是约3mg/kg。在某些方面中，该患者被给予两个或更多个剂量的medi4736或其抗原结合片段，其中该剂量是约10mg/kg。在一些实施例中，相隔约两周给予该至少两个剂量。
在某些方面中，该患者被给予至少三个剂量的medi4736或其抗原结合片段，其中该剂量是约3mg/kg。在某些方面中，该患者被给予至少三个剂量的medi4736或其抗原结合片段，其中该剂量是约4mg/kg。在某些方面中，该患者被给予至少三个剂量的medi4736或其抗原结合片段，其中该剂量是约5mg/kg。在某些方面中，该患者被给予至少三个剂量的medi4736或其抗原结合片段，其中该剂量是约6mg/kg。在某些方面中，该患者被给予至少三个剂量的medi4736或其抗原结合片段，其中该剂量是约7mg/kg。在某些方面中，该患者被给予至少三个剂量的medi4736或其抗原结合片段，其中该剂量是约8mg/kg。在某些方面中，该患者被给予至少三个剂量的medi4736或其抗原结合片段，其中该剂量是约9mg/kg。在某些方面中，该患者被给予至少三个剂量的medi4736或其抗原结合片段，其中该剂量是约10mg/kg。
在某些方面中，该患者被给予至少四个剂量的medi4736或其抗原结合片段，其中该剂量是约3mg/kg。在某些方面中，该患者被给予至少四个剂量的medi4736或其抗原结合片段，其中该剂量是约4mg/kg。在某些方面中，该患者被给予至少四个剂量的medi4736或其抗原结合片段，其中该剂量是约5mg/kg。在某些方面中，该患者被给予至少四个剂量的medi4736或其抗原结合片段，其中该剂量是约6mg/kg。在某些方面中，该患者被给予至少四个剂量的medi4736或其抗原结合片段，其中该剂量是约7mg/kg。在某些方面中，该患者被给予至少四个剂量的medi4736或其抗原结合片段，其中该剂量是约8mg/kg。在某些方面中，该患者被给予至少四个剂量的medi4736或其抗原结合片段，其中该剂量是约9mg/kg。在某些方面中，该患者被给予至少四个剂量的medi4736或其抗原结合片段，其中该剂量是约10mg/kg。
在某些方面中，约每两周向患者给予约3mg/kg的medi4736或其抗原结合片段。在某些方面中，约每两周向患者给予约4mg/kg的medi4736或其抗原结合片段。在某些方面中，约每两周向患者给予约5mg/kg的medi4736或其抗原结合片段。在某些方面中，约每两周向患者给予约6mg/kg的medi4736或其抗原结合片段。在某些方面中，约每两周向患者给予约7mg/kg的medi4736或其抗原结合片段。在某些方面中，约每两周向患者给予约8mg/kg的medi4736或其抗原结合片段。在某些方面中，约每两周向患者给予约9mg/kg的medi4736或其抗原结合片段。在某些方面中，约每两周向患者给予约10mg/kg的medi4736或其抗原结合片段。
在某些方面中，根据在此提供的这些方法给予medi4736或其抗原结合片段是通过肠胃外给予进行的。例如，可以通过静脉内输注或通过皮下注射来给予medi4736或其抗原结合片段。在一些实施例中，该给予是通过静脉内输注进行的。在某些方面中，根据在此提供的这些方法给予medi4736或其抗原结合片段是通过肠胃外给予进行的。例如，可以通过静脉内输注或通过皮下注射来给予medi4736或其抗原结合片段。在一些实施例中，该给予是通过静脉内输注进行的。
在某些方面中，约每两周向患者给予约3mg/kg的medi4736或其抗原结合片段，并且在相同时期内，每天给予剂量为约250mg的egfr酪氨酸激酶抑制剂或吉非替尼。在某些方面中，约每两周向患者给予约4mg/kg的medi4736或其抗原结合片段，并且在相同时期内，每天给予剂量为约250mg的egfr酪氨酸激酶抑制剂或吉非替尼。在某些方面中，约每两周向患者给予约5mg/kg的medi4736或其抗原结合片段，并且在相同时期内，每天给予剂量为约250mg的egfr酪氨酸激酶抑制剂或吉非替尼。在某些方面中，约每两周向患者给予约6mg/kg的medi4736或其抗原结合片段，并且在相同时期内，每天给予剂量为约250mg的egfr酪氨酸激酶抑制剂或吉非替尼。在某些方面中，约每两周向患者给予约7mg/kg的medi4736或其抗原结合片段，并且在相同时期内，每天给予剂量为约250mg的egfr酪氨酸激酶抑制剂或吉非替尼。在某些方面中，约每两周向患者给予约8mg/kg的medi4736或其抗原结合片段，并且在相同时期内，每天给予剂量为约250mg的egfr酪氨酸激酶抑制剂或吉非替尼。在某些方面中，约每两周向患者给予约9mg/kg的medi4736或其抗原结合片段，并且在相同时期内，每天给予剂量为约250mg的egfr酪氨酸激酶抑制剂或吉非替尼。在某些方面中，约每两周向患者给予约10mg/kg的medi4736或其抗原结合片段，并且在相同时期内，每天给予剂量为约250mg的egfr酪氨酸激酶抑制剂或吉非替尼。
在一些实施例中，向患者给予至少两个剂量的medi4736或其抗原结合片段和至少约13个剂量的egfr酪氨酸激酶抑制剂，例如吉非替尼。在一些实施例中，可以向患者给予medi4736或其抗原结合片段的至少三个剂量、至少四个剂量、至少五个剂量、至少六个剂量、至少七个剂量、至少八个剂量、至少九个剂量、至少十个剂量或至少十五个剂量或更多个剂量。在一些实施例中，在两周治疗期内、在四周治疗期内、在六周治疗期内、在八周治疗期内、在十二周治疗期内、在二十四周治疗期内或在一年或更长时间的治疗期内给予medi4736或其抗原结合片段。在一些实施例中，在四周治疗期内、在八周治疗期内、在十二周治疗期内、在十六周治疗期内、在二十周治疗期内、在二十四周治疗期内、在三十六周治疗期内、在四十八周治疗期内或在一年或更长时间的治疗期内每天给予egfr酪氨酸激酶抑制剂(例如，吉非替尼)。
有待向患者给予的medi4736或其抗原结合片段的量和egfr酪氨酸激酶抑制剂(例如，吉非替尼)的量将取决于不同参数，如该患者的年龄、体重、临床评价、肿瘤负荷和/或其他因素，包括主治医生的判断。在另外的方面中，该患者被给予另外的后继剂量。可以取决于该患者的年龄、体重、临床评价、肿瘤负荷和/或其他因素(包括主治医生的判断)，以不同时间间隔给予后续剂量。
在此提供的这些方法可以减弱或延迟肿瘤生长。在一些方面，该减小或延迟可以是统计学上显著的。可以通过与基线处的患者肿瘤的生长、针对预期的肿瘤生长、针对基于大的患者群体的预期的肿瘤生长或针对对照群体的肿瘤生长进行比较来测量肿瘤生长的减少。
在某些方面，肿瘤反应使用免疫相关反应准则(irrc)来测量。在某些方面，肿瘤反应使用实体瘤反应评价标准(recist)来进行测量。
在某些方面，肿瘤反应在第8周是可检测的。在某些方面，在给予约三或四个剂量的medi4736或其抗原结合片段和约28个剂量的吉非替尼后，可检测到肿瘤反应。
在某些方面，患者实现了疾病控制(dc)。疾病控制可以是完全应答(cr)、部分应答(pr)或疾病稳定(sd)。
“完全应答”(cr)是指所有病灶(无论是可测量的或不可测量的)消失，并且没有新的病灶。可以使用自第一次记载日期起不小于四周的重复连续评定来获得确认。新的不可测量的病灶排除cr。
“部分应答”(pr)是指相对于基线，肿瘤负荷减小≥30％。可使用自第一次记载日期起至少4周的连续重复评定来获得确认。
“疾病稳定”(sd)是指相对于基线无法建立30％的肿瘤负荷的减小，并且无法建立与最低点相比20％的增加。
在某些方面，给予medi4736或其抗原结合片段和egfr酪氨酸激酶抑制剂(例如，吉非替尼)可以增加无进展存活期(pfs)。
在某些方面，给予medi4736或其抗原结合片段和egfr酪氨酸激酶抑制剂(例如，吉非替尼)可以增加总存活期(os)。
在一些实施例中，患者先前已经接受了使用至少一种化学治疗剂进行的治疗。该化学治疗剂可以是以下各项中的一种或多种，例如并且不限于吉非替尼、威罗菲尼、埃罗替尼、阿法替尼、西妥昔单抗、卡铂、贝伐单抗、埃罗替尼和/或培美曲塞。
在一些实施例中，该肿瘤是至少一种化学治疗剂难治愈的或该肿瘤对至少一种化学治疗剂有抗性。该肿瘤可能是以下各项中的一种或多种难治愈的或该肿瘤对以下各项中的一种或多种有抗性：例如并且不限于吉非替尼、威罗菲尼、埃罗替尼、阿法替尼、西妥昔单抗、卡铂、贝伐单抗、埃罗替尼和/或培美曲塞。
使用medi4736或其抗原结合片段和egfr酪氨酸激酶抑制剂两者，例如此处所提供的吉非替尼(即，综合疗法)来治疗患有实体肺癌瘤的患者可导致加和效应和/或协同效应。本文所用的术语“协同”是指组合疗法(例如，medi4736或其抗原结合片段与egfr酪氨酸激酶抑制剂，例如，吉非替尼的组合)比单药疗法的加性效应更加有效。
组合疗法(例如，medi4736或其抗原结合片段与egfr酪氨酸激酶抑制剂，例如，吉非替尼的组合)的协同效应可允许患有实体肺癌瘤的患者使用这些治疗剂中的一种或多种的更低剂量和/或向患有实体瘤的患者以更低频率给予所述治疗剂。利用治疗剂的更低剂量和/或以更低频率给予所述疗法的能力减少与向受试者给予所述疗法相关的毒性而不降低所述疗法在实体肺癌瘤的治疗中的疗效。此外，协同效应可以导致治疗剂在实体肺癌瘤的管理、治疗或改善中的功效增加。治疗剂的组合的协同效应可避免或减少与使用任一单一治疗相关的不良或不需要的副作用。
在综合疗法中，medi4736或其抗原结合片段可以任选地被包括在与egfr酪氨酸激酶抑制剂(例如吉非替尼)相同的药物组合物中，或者可以被包括在单独的药物组合物中。在后一种情况下，包括medi4736或其抗原结合片段的药物组合物适合在给予包含egfr酪氨酸激酶抑制剂(例如吉非替尼)的药物组合物之前、同时或之后给予。在某些情况下，将medi4736或其抗原结合片段在与单独的组合物中的egfr酪氨酸激酶抑制剂(例如，吉非替尼)重叠的时期给予。
试剂盒
本发明提供用于治疗非小细胞肺癌的试剂盒，其包含抗pd-l1抗体，例如，medi4736，或其抗原结合片段和egfr酪氨酸激酶抑制剂，例如，吉非替尼。在各种实施例中，该试剂盒包括治疗组合物，该治疗组合物包含单位剂量为约3m/kg至约10mg/kg之间的medi4736和/或单位剂量为250mg的吉非替尼。
在一些实施例中，该试剂盒包括含有治疗组合物和/诊断组合物的无菌容器；这些容器可以是盒子、安瓿、瓶子、小瓶、管、袋、小袋、泡罩包装或本领域已知的其他适合的容器形式。这些容器可由塑料、玻璃、层压纸、金属箔、或适于容纳药物的其他材料制成。
如果需要，该试剂盒还包括将抗pd-l1抗体和吉非替尼给予至患有非小细胞肺癌的受试者的指令。在具体实施例中，这些说明书包括以下各项中的至少一个：对该治疗剂的描述；用于治疗或防止非小细胞肺癌或其症状的剂量时间表和给予；预防措施；警告；适应症；禁忌症；超剂量信息；不良反应；动物药理学；临床研究；和/或参考文献。这些说明书可以直接打印在容器(当存在时)上，或作为标签应用于容器，或作为单独的页、小册子、卡片、或在容器中提供或是与容器一起提供的文件夹。
除非另外指明，否则本发明的实施采用很好地处在本领域技术人员的见识范围之内的分子生物学(包含重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学、免疫组织化学以及免疫学的常规技术。这样的技术在文献中被充分阐明，诸如，“分子克隆：实验室手册(molecularcloning：alaboratorymanual)”，第二版(sambrook，1989)；“寡核苷酸合成(oligonucleotidesynthesis)”(gait，1984)；“动物细胞培养(animalcellculture)”(freshney，1987)；“酶学方法(methodsinenzymology)”“实验免疫学手册(handbookofexperimentalimmunology)”(weir，1996)；“用于哺乳动物细胞的基因转移载体(genetransfervectorsformammaliancells)”(miller和calos，1987)；“当代分子生物学实验技术(currentprotocolsinmolecularbiology)”(ausubel，1987)；“pcr：聚合酶链式反应(thepolymerasechainreaction)”(mullis，1994)；“当代免疫学实验技术(currentprotocolsinimmunology)”(coligan，1991)。这些技术适用于本发明的多核苷酸和多肽的生产，并且按照这样，可以被考虑用于制备和实施本发明。对具体实施例特别有用的技术将在下面的部分进行讨论。
给出以下的实例是为了给本领域普通技术人员提供如何准备和使用测试、筛选和本发明的治疗方法的完整的公开和说明，而不是旨在限定诸位发明人认为是自己的发明的范围。
实例
实例1：患有egfr突变的nsclc患者对medi4736和吉非替尼的治疗有反应。
第一阶段开放标签多中心研究(nct02088112)应用于评估对患有非小细胞肺癌(nsclc)的患者采用medi4736结合egfr酪氨酸激酶抑制剂(tki)吉非替尼进行治疗的安全性、耐受性和疗效。
在研究的升级阶段，选择患有局部晚期或转移性nsclc的患者，这些患者对任何标准治疗线无反应或疾病复发，不能耐受或不符合标准治疗资格(来自美国、日本和韩国的5个医疗中心；年龄≥18岁)。升级阶段患者接受每2周一次的medi4736(开始剂量为3mg/kg)和每日一次的吉非替尼(250mg)，持续≥1年，以建立组合的最大耐受剂量(mtd)。在扩张阶段。对于被鉴定为egfrtki初治/敏感的患者、egfr突变阳性的nsclc患者，在采用或未采用4周的吉非替尼治疗之前，每2周给予(以mtd)medi4736和吉非替尼。该研究的主要终点包括medi4736和吉非替尼(包括mtd)的组合的安全性和耐受性。该研究的次要终点包括该组合的抗肿瘤活性，包括recist1.1反应。
与吉非替尼组合给予的medi4736在nsclc患者(medi47363mg/kg：n＝3；10mg/kg：n＝7)中通常耐受性良好。
患有egfr突变阳性疾病的患者是对采用medi4736(3mg/kg)和吉非替尼的组合进行的治疗有反应的患者(表1)。接受medi4736(3mg/kg)和吉非替尼(pt1)的、患有nsclc(egfr外显子19缺失阳性)的患者在8周后显示出-13.04％的病灶直径变化。接受medi4736(10mg/kg)和吉非替尼(pt9)的、患有nsclc(egfr外显子19缺失阳性)的患者在8周后显示出-26.09％的病灶直径变化，并且在24周后显示出-13.04％的直径变化。
表1.接受medi4736(3mg/kg)和吉非替尼的升级阶段nsclc患者
因此，在nsclc患者中，采用medi4736和吉非替尼进行治疗通常耐受性良好。此外，在患有egfr突变阳性nsclc的患者中实现了疾病控制。
其他实施方式
从前述说明中，将显而易见的是，可以对在此所述的发明作出变更和修改以使其适应于各种用途和状况。这样的实施例也处于下述权利要求的范围内。
本文中在变量的任何定义中对要素清单的叙述包括将该变量定义为任何单个要素或所列要素的组合(或次组合)。在此的实施例的叙述包括为任何单个实施例的实施例或与任何其他实施例或其部分结合的实施例。
本说明书中提及的全部专利和出版物通过引用方式以相同的程度结合在此，如同每份单独的专利和出版物具体地且个别地指出通过引用的方式结合。
序列表
<110>免疫医疗有限公司（medimmunelimited）
<120>用于egfr突变阳性非小细胞肺癌的联合疗法
<130>b7ir-200wo1
<140>
<141>
<150>62/151,739
<151>2015-04-23
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