含有狼毒萃取物或其级分的用于伤口治疗的组合物和治疗个体的伤口的方法与流程

本发明涉及一种用于治疗伤口的包含狼毒萃取物或其级分的组合物；一种治疗个体的伤口的方法，该方法包括向个体施用治疗有效剂的所述组合物来治疗伤口；一种用于伤口改善、皮肤皱纹改善或皮肤抗衰老的化妆品组合物；以及一种用于伤口改善、皮肤皱纹改善或皮肤抗衰老的化妆方法。
背景技术：
：皮肤充当屏障，保护身体免受外界的伤害。当皮肤形成伤口时，伤口部位通过生物体的自然愈合作用而充满血液。随着血小板颗粒的数量减少，哈格曼因子(hagemanfactor)的活化开始，伤口愈合过程进行。血液凝结是一种临时防御作用，其保护暴露的伤口组织并且为伤口愈合过程中细胞的移动提供基础。伤口治疗和/或愈合发生在三个主要阶段。第一阶段是特征为伤口部位发炎的炎症期。当没有发生严重的感染时，炎症通常会较短暂。第二阶段是增生期，其特征在于上皮形成、血管生成、肉芽组织形成和胶原蛋白沉积。伴随有新的毛细血管形成的血管生成是为了输送营养并且保持肉芽组织形成。伤口中没有形成新的毛细血管，必需的营养物质不能到达伤口，形成长期不愈合的伤口。受伤伤口的表面被一层角质细胞覆盖，导致新的表皮和重建上皮层的再上皮化。一旦再上皮化完成，进行一系列的过程，其中通过结缔组织的增加和重组来使伤口面积减小。伤口愈合的最终阶段是成纤维细胞分化成胶原蛋白的成熟期。在成熟期中，恢复组织的细胞或毛细血管的凝块逐渐消失，如果这些组织的细胞和毛细血管增生或者未正常分解，则可能形成疤痕。由于重要的不仅是在伤口愈合的过程中快速地治疗伤口，而且要在没有副作用或疤痕的情况下治疗伤口，因此，已经不断努力在寻找这种物质。技术实现要素：技术问题根据一个方面，一种用于治疗伤口的组合物包含狼毒(stellerachamaejasme)萃取物或其级分作为活性成分。根据另一方面，一种治疗个体的伤口的方法包括向个体施用治疗有效量的上述组合物来治疗伤口。根据另一方面，一种用于伤口改善、皮肤皱纹改善或皮肤抗衰老的化妆品组合物包含狼毒萃取物或其级分作为活性成分。根据另一方面，一种用于伤口改善、皮肤皱纹改善或皮肤抗衰老的化妆方法包括将上述化妆品组合物施用于个体。技术方案根据一个方面，一种用于治疗伤口的组合物包含狼毒萃取物或其级分作为活性成分，其中，所述狼毒萃取物从狼毒的地上部分萃取。狼毒萃取物是使用溶剂从狼毒的地上部分的全部、部分或由其衍生的物质中萃取的萃取物。狼毒的该部分可以是狼毒的茎、叶、花或花瓣。狼毒可以生长在蒙古的山区。该山区可以在乌兰巴托附近。狼毒可以生长至约30cm至40cm的高度。狼毒的叶子的长度可以为约15mm至27mm，叶子可以为披针形。叶子的表面可以是绿色，其背面可以是蓝灰色。叶子的两面没有毛，叶柄较短。萃取中使用的狼毒的地上部分的全部、部分或由其衍生的物质可以被研磨、切片或适当地干燥。上述溶剂可以是水、丙酮、诸如c1-c6醇的醇，或它们的混合物。c1-c6醇可以是甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、1，3-丙二醇、丁醇、戊醇、己醇等。上述溶剂可以是，例如，水和醇的混合物，即，醇的水溶液。醇的水溶液中醇的浓度可以在1％v/v至100％v/v，例如，1％v/v至99.5％v/v、10％v/v至100％v/v、20％v/v至100％v/v、30％v/v至100％、40％v/v至100％、50％v/v至100％v/v、60％v/v至100％、70％v/v至100％v/v或75％v/v至100％v/v的范围内。醇的水溶液可以是甲醇、乙醇或丁醇的水溶液。丙酮的浓度可以为100％。上述萃取可以包括将萃取溶剂添加到狼毒的地上部分的全部、部分或由其衍生的物质中。所述溶剂的量可以是对于每1kg的狼毒的地上部分的全部、部分或其衍生的物质为3l至10l，例如，3l至7l、3l至5l、5l至10l或4l至10l。例如，萃取可以包括将3l至10l的萃取溶剂添加到1kg的狼毒的地上部分的全部、部分或由其衍生的物质中。萃取可以通过加热液体萃取、加压液体萃取(ple)、微波辅助萃取(mae)、亚临界萃取(se)或它们的组合进行。se可以是亚临界水萃取(swe)。swe也称为过热水萃取或加压热水萃取(phwe)。加热液体萃取可以是回流萃取。上述萃取可以在4℃至70℃，例如，4℃至50℃、4℃至40℃、4℃至30℃、10℃至70℃、15℃至70℃、20℃至70℃、4℃至50℃、10℃至50℃、4℃至40℃、4℃至30℃、10℃至40℃、10℃至35℃或10℃至30℃的范围内进行。可以根据温度而改变的萃取持续时间可以为1小时至2个月，例如，1小时至1个月、1小时至15天、1小时至10天、1小时至5天、1小时至3天、1小时至2天、1小时至1天、5小时至1个月、5小时至15天、5小时至10天、5小时至5天、5小时至3天、5小时至2天、5小时至1天、10小时至1个月、10小时至15天、10小时至10天、10小时至5天、10小时至3天或10小时至2天。萃取可以包括将狼毒的地上部分的全部、部分或由其衍生的物质与溶剂混合并且使混合物静置一段时间。使混合物静置可以包括适当地搅拌。萃取可以重复一次或多次，例如，一至五次。上述萃取可以通过已知的方法进行，例如，过滤混合物以分离出萃取物并且除去植物残渣。萃取还可以包括通过已知的方法(如减压浓缩)从得到的萃取物中除去溶剂。萃取还可以包括对得到的萃取物进行干燥(如冻干)来制备干燥的萃取物。关于所述组合物，术语“级分(fraction)”指狼毒萃取物分成其组分的一部分的物质，即，分级萃取物质。级分可以通过溶剂分级萃取得到。所述分级萃取可以是将狼毒萃取物与溶剂混合并且分离溶剂中存在的物质。级分可以是己烷级分、乙酸乙酯级分、丁醇级分或水级分，其中，己烷级分、乙酸乙酯级分、丁醇级分和水级分通过将狼毒萃取物悬浮在水中，然后使用己烷、乙酸乙酯和丁醇对得到的悬浮液进行分级萃取而得到。具体而言，可以将狼毒萃取物与水混合，该混合物可以与己烷混合，将得到的混合物静置一段时间之后，可以分离己烷层，从分离的己烷层中可以分离出级分。由此，可以得到己烷级分。己烷级分的分离可以包括从己烷层中除去己烷。分离出己烷级分之后，可以将剩余的水层与乙酸乙酯混合，将得到的混合物静置一段时间之后，可以分离乙酸乙酯层，从分离的乙酸乙酯层中可以分离出级分。由此，可以得到乙酸乙酯级分。乙酸乙酯级分的分离可以包括从乙酸乙酯层中除去乙酸乙酯。分离出乙酸乙酯级分之后，可以将剩余的水层与丁醇混合，将得到的混合物静置一段时间之后，可以分离丁醇层，从分离的丁醇层中可以分离出级分。由此，可以得到丁醇级分。丁醇级分的分离可以包括从丁醇层中除去丁醇。分级萃取的条件如温度条件、压力条件、时间、所使用的溶剂的量或浓度、搅拌等可以与上面描述的关于制备狼毒萃取物的条件相同。分级萃取可以重复一次或多次，例如，一至五次。分级萃取的顺序仅用于举例说明的目的，因此，使用己烷、乙酸乙酯和丁醇的分级萃取可以以任意顺序进行。级分的分离可以通过已知的方法如过滤来进行。分级萃取还可以包括通过已知的方法如减压浓缩从得到的级分中除去溶剂。分级萃取还可以包括对得到的级分进行浓缩和/或干燥。所述浓缩可以在减压下浓缩。所述干燥可以包括减压干燥、沸腾干燥、喷雾干燥、室温干燥或冷冻干燥。关于所述组合物，术语“伤口”指在组织被切割、撕裂、折断、燃烧或创伤时在身体上形成的损伤，或者由造成这种损伤的伤害或疾病引起的损伤。术语“组织”指专门用于执行特定功能的细胞的有组织的集合。组织可以包括眼睛、粘液、肺、肾脏、心脏、内脏、肌腱、血管组织、骨骼、皮肤、结缔组织和神经如脊髓。伤口可以是表面开裂的开放性伤口或者是表面不开裂的闭合性伤口。伤口的一个实例可以是皮肤上的开放性伤口。伤口可以包括病变、疮、坏死和溃疡。坏死可以与由感染、损伤或梗塞引起的死组织有关。溃疡可以是由坏死组织的分解引起的器官或组织表面的局部缺陷或剥脱。伤口的一个实例可以是皮肤的表皮；真皮；表皮和真皮；或表皮、真皮和皮下脂肪层中的受伤处的伤口。伤口的实例可以包括切口、刀口(例如，手术刀口)、擦伤、撕裂、骨折、挫伤、烧伤或截肢。与自然愈合相比，本文所使用的术语“治疗”可以在缩短的时间内提供伤口愈合。治疗可以包括伤口的改善和/或减轻。治疗还可以包括用于伤口和/或与伤口有关的疾病的所有治疗。治疗可以指由伤口引起的受损组织的愈合和/或再生。伤口治疗可以包括皮肤再生的含义。治疗还可以保持受损组织的原始组成。此外，治疗可以促进受损组织的愈合和/或再生，同时使与伤口有关的疾病的并发症和/或疤痕最小化。所述组合物可以用于促进伤口愈合过程的整个阶段。而且，所述组合物可以促进伤口愈合过程的增生期和/或成熟期。因此，所述组合物可以用于治疗增生期和/或成熟期的伤口。基于所述组合物的总量，该组合物可以包含0.001重量％至80重量％，例如，0.01重量％至60重量％、0.01重量％至40重量％、0.01重量％至30重量％、0.01重量％至20重量％、0.01重量％至10重量％、0.01重量％至5重量％、0.05重量％至60重量％、0.05重量％至40重量％、0.05重量％至30重量％、0.05重量％至20重量％、0.05重量％至10重量％、0.05重量％至5重量％、0.1重量％至60重量％、0.1重量％至40重量％、0.1重量％至30重量％、0.1重量％至20重量％、0.1重量％至10重量％或0.1重量％至5重量％的狼毒萃取物或其级分。所述组合物可以是药物组合物。所述组合物还可以包含药学上可接受的稀释剂或载体。稀释剂可以是乳糖、玉米淀粉、大豆油、微晶纤维素或甘露醇。润滑剂可以是硬脂酸镁、滑石或它们的组合。载体可以是赋形剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂或它们的组合。赋形剂可以是微晶纤维素、乳糖、低取代羟基纤维素或它们的组合。崩解剂可以是羧甲基纤维素钙、羧甲基淀粉钠、无水磷酸一氢钙或它们的组合。粘合剂可以是聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙基纤维素、羟丙基纤维素或它们的组合。润滑剂可以是硬脂酸镁、二氧化硅、滑石或它们的组合。所述组合物可以配制成肠胃外剂型。肠胃外剂型可以是皮肤的注射剂或外用制剂。皮肤的外用制剂可以是霜剂、凝胶剂、软膏剂、皮肤乳化剂、皮肤悬浮剂、透皮贴剂、含药绷带、洗剂或它们的组合。根据需要，皮肤的外用制剂可以与外用皮肤制剂(如化妆品或药物)中通常使用的成分，例如，水性成分、油性成分、粉末成分、醇、保湿剂、增稠剂、紫外线吸收剂、增白剂、防腐剂、抗氧化剂、表面活性剂、香料、着色剂、各种皮肤营养素或它们的组合适当地混合。根据需要，皮肤的外用制剂可以与金属螯合剂，如乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸三钠、柠檬酸钠、多磷酸钠、偏磷酸钠或葡萄糖酸；药物，如咖啡因、单宁、维拉帕米、甘草萃取物、光甘草定、水果的热水萃取物、多种草药、生育酚乙酸酯、甘草酸或氨甲环酸以及它们的衍生物或盐；维生素c；抗坏血酸磷酸镁；抗坏血酸葡萄糖苷；熊果苷；曲酸；或糖，如葡萄糖、果糖、甘露糖、蔗糖或海藻糖适当地混合。所述组合物可以用于促进胶原蛋白基因在细胞中的表达。所述组合物可以增加胶原蛋白基因的表达，或者可以提高由该组合物形成的胶原蛋白的活性。所述组合物还可以提高产生胶原蛋白的上游酶或蛋白质的活性或表达。在一个实施方案中，所述组合物可以提高胶原蛋白的表达和/或活性以治疗伤口。所述组合物可以用于提高胶原蛋白的表达和/或活性，以维持或提高含有胶原蛋白的组织的弹性。例如，所述组合物可以保持或促进皮肤的弹性，从而减少含有胶原蛋白的组织中的皱纹的形成并且消除皱纹。胶原蛋白可以是i型胶原蛋白或iii型胶原蛋白。编码胶原蛋白的基因可以选自col1a1和col3a1。所述组合物可以增加角化细胞的分化因子的产生。所述组合物可以，例如，促进角化细胞的分化因子基因的表达。分化因子可以是丝聚蛋白(flg)、兜甲蛋白(lor)或外皮蛋白(ivl)。所述组合物可以促进角化细胞向伤口迁移。所述组合物可以增加胶原蛋白基因的表达，或者可以提高由该组合物形成的胶原蛋白的活性。所述组合物还可以提高产生胶原蛋白的上游酶或蛋白质的活性或表达。根据另一方面，一种治疗个体的伤口的方法包括向个体施用治疗有效量的组合物以治疗伤口。所述组合物与上面描述的相同。这种施用可以使用本领域技术人员已知的方法来进行。这种施用可以，例如，采用能够对个体直接给药的任意途径进行，如静脉给药、肌内给药、经皮给药、粘膜给药、鼻内给药、气管内给药或皮下给药。施用可以是全身或局部给药。施用可以是对伤口部位的局部给药。个体可以是哺乳动物，例如，人、牛、马、猪、狗、绵羊、山羊或猫。个体可以有伤口。伤口可以是皮肤伤口。施用可以以0.1mg至1,000mg，例如，0.1mg至500mg、0.1mg至100mg、0.1mg至50mg、0.1mg至25mg、0.1mg至5mg、1mg至1,000mg、1mg至500mg、1mg至100mg、1mg至50mg、1mg至25mg、5mg至1,000mg、5mg至500mg、5mg至100mg、5mg至50mg、1mg至5mg、5mg至25mg、10mg至1,000mg、10mg至500mg、10mg至100mg、10mg至50mg或10mg至25mg的范围的量对个体施用狼毒萃取物。根据另一方面，用于伤口改善、皮肤皱纹改善或皮肤抗衰老的化妆品组合物包含狼毒萃取物或其级分作为活性成分。所述狼毒萃取物与上面描述的相同。术语“用于伤口改善”可以理解为包括降低或减轻伤口的程度的用途。例如，伤口改善可以指较低或减轻形成的伤口的程度。术语“皮肤皱纹改善”可以理解为包括保持皮肤的弹性以防止皱纹形成或去除形成的皱纹。所述萃取物促进成纤维细胞中胶原蛋白的产生。胶原蛋白是皮肤真皮层的主要成分，并且是对水分具有较强的结合性能的弹性蛋白质。换言之，胶原蛋白具有为皮肤提供弹性的性能，并且具有防止皱纹形成的效果。随着人的年龄的增长，皮肤中胶原蛋白的含量减少，皮肤经历老化过程，导致皮肤失去弹性并形成皱纹。因此，本发明要求保护的包含所述萃取物的组合物可以用作用于皮肤皱纹改善或皮肤抗衰老的化妆品组合物。所述化妆品组合物可以不包含除所述萃取物以外的具有皱纹改善效果或抗衰老效果的其它活性成分。所述化妆品组合物可以以任何适合于局部施用的制剂来提供。例如，所述化妆品组合物可以提供为如下制剂：溶液剂、通过将油相分散在水相中得到的乳剂；通过将水相分散在油相中得到的乳剂、悬浮剂、固体、凝胶剂、粉剂、糊剂、面膜(maskpack)、片材、泡沫或气溶胶组合物。这些制剂的组合物可以根据本领域中的常规方法制备。化妆品组合物还可以包含保湿剂、润肤剂、紫外线吸收剂、防腐剂、杀菌剂、抗氧化剂、ph调节剂、有机和无机颜料、香料、冷却剂或止汗剂。本领域普通技术人员可以在不损害本发明的目的和效果的范围内容易地选择附加成分(如保湿剂)的量，其量可以在0.01重量％至5重量％，具体地，0.01重量％至3重量％的范围内。基于上述组合物的总量，该组合物可以包含0.001重量％至80重量％，例如，0.01重量％至60重量％、0.01重量％至40重量％、0.01重量％至30重量％、0.01重量％至20重量％、0.01重量％至10重量％、0.01重量％至5重量％、0.05重量％至60重量％、0.05重量％至40重量％、0.05重量％至30重量％、0.05重量％至20重量％、0.05重量％至10重量％、0.05重量％至5重量％、0.1重量％至60重量％、0.1重量％至40重量％、0.1重量％至30重量％、0.1重量％至20重量％、0.1重量％至10重量％或0.1重量％至5重量％的范围内的狼毒萃取物或其级分。根据另一方面，一种用于伤口改善、皮肤皱纹改善或皮肤抗衰老的皮肤的化妆方法包括将所述化妆品组合物施用于个体。所述化妆方法可以用于伤口改善、皮肤皱纹改善或皮肤抗衰老。在所述化妆方法中，将所述化妆品组合物应用于包括头皮的皮肤、嘴唇和头发的多种处理，特别是美容处理。在所述美容方法中，施用于皮肤的阶段包括使所述组合物与皮肤接触以使组合物的成分渗入皮肤中。施用于皮肤的阶段可以与诸如电力或磁力(例如，离子电渗疗法)的其它手段结合，以帮助组合物渗入皮肤中。有益效果当使用根据一个方面的用于治疗伤口的组合物时，可以有效地治疗个体的伤口。当使用根据一个方面的治疗个体的伤口的方法时，可以有效地治疗个体的伤口。当使用根据一个方面的用于伤口改善、皮肤皱纹改善或皮肤抗衰老的化妆品组合物时，伤口改善、皮肤皱纹改善或皮肤抗衰老可以变得有效。当使用根据一个方面的皮肤的化妆方法时，可以实现伤口改善、皮肤皱纹改善或皮肤抗衰老。附图说明图1示出了狼毒的地上部分的乙醇萃取物促进角化细胞的迁移；图2示出了狼毒的地上部分的乙醇萃取物的级分促进角化细胞的迁移；图3示出了狼毒的地上部分的乙醇萃取物促进col1a1和col3a1基因在成纤维细胞中的表达；图4示出了狼毒的地上部分的各种溶剂萃取物促进col1a1和col3a1基因在成纤维细胞中的表达；图5示出了在不同浓度的丁醇中萃取的狼毒的地上部分的丁醇萃取物促进col1a1和col3a1基因在成纤维细胞中的表达；图6示出了狼毒的乙醇萃取物的存在对mmp-1的表达水平的影响；图7示出了在uvb照射下狼毒的乙醇萃取物对i型原胶原在人成纤维细胞中的表达的影响的程度的测量结果；图8示出了狼毒萃取物在动物实验中对裂开伤口的上皮形成的影响；图9示出了狼毒萃取物在动物实验中对裂开伤口的伤口面积的减小的影响；图10示出了通过苏木精-曙红(h&e)染色方案测试的狼毒萃取物在动物实验中促进裂开伤口的恢复；图11示出了狼毒的茎萃取物促进角化细胞的迁移；图12示出了狼毒的茎萃取物的级分促进角化细胞的迁移；图13示出了狼毒的茎萃取物促进col1a1和col3a1基因在成纤维细胞中的表达；图14示出了狼毒的茎萃取物的级分促进col1a1和col3a1基因在成纤维细胞中的表达；图15示出了狼毒的茎萃取物在动物实验中促进裂开伤口的恢复的临床试验结果；图16示出了狼毒的茎萃取物在动物实验中促进裂开伤口的恢复的定量试验结果。具体实施方式下文中，将参照实施例更详细地描述本发明。然而，这些实施例仅用于举例说明的目的，本发明不意在受这些实施例的限制。实施例1：狼毒萃取物及其级分的制备在实施例1中，狼毒萃取物由狼毒制备，并且测试狼毒萃取物及其级分对伤口治疗的影响。1.狼毒萃取物及其级分的制备(1)狼毒的乙醇萃取物的制备仅收集在蒙古乌兰巴托生长的狼毒的地上部分。用水洗涤收集的地上部分并干燥。使用切草机将干燥后的狼毒的地上部分切成尺寸在2cm至3cm的范围内的小段。将100g的切成薄片的狼毒的地上部分与1l的95％v/v的乙醇水溶液添加到玻璃锥形瓶中，然后混合在一起。在约20℃的室温下以每分钟150转(rpm)的速度搅拌的同时对混合物萃取48小时。接着，通过滤纸(whatman，no.2，8μm)使混合物过滤，从而得到滤液。使用旋转蒸发仪(购自eyela的n-1100)对得到的滤液进行减压浓缩。为了除去剩余的溶剂，使用冷冻干燥机(购自operone的fdcf-12003)对其进行冷冻干燥48小时，从而得到3g的溶剂被除去的干燥的狼毒萃取物。(2)狼毒的乙醇萃取物的级分的制备(2.1)乙醇萃取物的级分将3g干燥的狼毒的乙醇萃取物和100ml的水添加到锥形瓶中然后悬浮。将悬浮液倒入250ml的分液漏斗中，并向其中添加100ml的正己烷(超纯级，100％v/v)，接着充分摇动。然后，将混合物在室温下静置3小时。使用分液漏斗从混合物中仅分离出己烷层。将该过程重复三次，并使用旋转蒸发仪(购自eyela的n-1100)对得到的己烷层进行减压浓缩，从而得到己烷级分。此外，以相同的方式，将100％v/v的乙酸乙酯添加到由己烷级分分离过程得到的剩余的水层中并混合。然后，对其进行相同的处理，从而得到乙酸乙酯级分。此外，以相同的方式，将水饱和的丁醇添加到由乙酸乙酯级分分离过程得到的剩余的水层中并混合。然后，对其进行相同的处理，从而得到丁醇级分。剩余部分用作水级分。将狼毒的乙醇萃取物及其级分以20mg/ml的浓度溶解在二甲基亚砜(dmso)中，并用于下面的实验。(2.2)其它溶剂的萃取物及其级分除了使用100％v/v的丙酮、特定浓度的甲醇、丁醇代替乙醇之外，以与(2.1)节中基本相同的方式得到其它溶剂的萃取物及其级分。2.人角化细胞的迁移的增加如下测试狼毒的萃取物或其级分是否增加人角化细胞的迁移。将hacat人角化细胞添加到含有1ml的hyclonedulbecco改良伊格尔培养基(hyclonedulbecco′smodifiedeagle′smedium，dmem)(含有2.5％v/v的胎牛血清)的24孔微量滴定板的各个孔中，使得各个孔中置有2×105个细胞。接着，在37℃的温度和5％的co2培养箱中培养角化细胞，直至它们的融合达到80％。用p10移液管尖端将培养基中的细胞单层“划伤”。随后，将200μl的无血清的dmem与狼毒萃取物或其级分以5μg/ml和10μg/ml的浓度添加到各个培养基中划伤的细胞单层中。然后，在相同的培养条件下培养人角化细胞24小时。在阴性对照中，处理相同的量的用于溶解萃取物的dmso；在阳性对照中，使用给定浓度的积雪草(centellaasiatica)萃取物(10μg/ml)。之后，使用结晶紫试剂对细胞层进行染色，以测试划伤的恢复程度。积雪草萃取物购自biospectrum(korea)。图1示出了狼毒的地上部分的乙醇萃取物促进角化细胞的迁移。图2示出了狼毒的地上部分的乙醇萃取物的级分促进角化细胞的迁移。在图1中，a、b、c和d分别表示dmso(阴性对照)、5μg/ml的狼毒萃取物、10μg/ml的狼毒萃取物和10μg/ml的积雪草萃取物(阳性对照)。在图2中，a、b、c、d、e、f、g和h分别表示dmso(阴性对照)、5μg/ml的狼毒地上部分的乙醇萃取物的己烷级分、5μg/ml的狼毒地上部分的乙醇萃取物的乙酸乙酯级分、5μg/ml的狼毒地上部分的乙醇萃取物的丁醇级分、5μg/ml的积雪草萃取物、10μg/ml的狼毒地上部分的乙醇萃取物的己烷级分、10μg/ml的狼毒地上部分的乙醇萃取物的乙酸乙酯级分和10μg/ml的狼毒地上部分的乙醇萃取物的丁醇级分。如图1和图2中所示，在阴性对照条件下，在处理24小时之后，处理后的细胞的划伤保持相对未愈合。另一方面，在用狼毒的地上部分的乙醇萃取物处理的细胞中，由于伤口边缘的增生和迁移，划伤愈合，因此，24小时之后，划伤面积减小。3.col1a1和col3a1基因在成纤维细胞中的表达的增加测试狼毒萃取物是否促进胶原蛋白基因在人成纤维细胞中的表达。将人皮肤成纤维细胞(购自americantypeculturecollection，usa的hdf)添加到含有2ml的hyclonedmem(含有2.5％v/v的胎牛血清)的6孔微量滴定板的各个孔中，使得各个孔中置有2×106个细胞。接着，在相同的条件下培养人皮肤成纤维细胞，直至它们融合达到80％。将狼毒萃取物以1μg/ml、5μg/ml和10μg/ml的浓度添加到在各个培养基中培养的细胞中。然后，在与上面描述的条件相同的条件下继续培养细胞24小时。在阴性对照中，处理相同的量的用于溶解萃取物的dmso；在阳性对照中，使用积雪草萃取物(购自biospectrum，korea)。经过24小时之后，通过逆转录聚合酶链式反应(rt-pcr)试验来测试胶原蛋白基因的表达。具体而言，经过24小时之后，使用trizol试剂(购自invitrogen，carlsbad，ca，usa)从细胞中收集总rna，然后使其逆转录以进行rt-pcr，过程如下。首先，为了合成cdna，使用逆转录酶使rna逆转录。使用下面示出的特异性引物进行rt-pcr。基于β-肌动蛋白的量使各个基因的mrna表达的相对量标准化。图3示出了狼毒的地上部分的乙醇萃取物促进col1a1和col3a1基因在成纤维细胞中的表达。如图3中所示，可以发现，狼毒的地上部分的乙醇萃取物显著激活了选自与胶原蛋白合成相关的因子col1a1和col3a1中的至少一种基因的表达。图4示出了狼毒的地上部分的各种溶剂萃取物促进col1a1和col3a1基因在成纤维细胞中的表达。在图4中，样品1、2、3、4、5、6和7分别表示丙酮萃取物、丙酮萃取物、100％的乙醇萃取物、25％的甲醇萃取物、50％的甲醇萃取物、75％的甲醇萃取物和100％的甲醇萃取物。图5示出了在不同浓度的丁醇中萃取的狼毒的地上部分的丁醇萃取物促进col1a1和col3a1基因在成纤维细胞中的表达。在图5中，样品1、2、3和4分别表示25％的丁醇萃取物、50％的丁醇萃取物、75％的丁醇萃取物和100％的丁醇萃取物。如图4和图5中所示，可以发现，狼毒的地上部分的丙酮、甲醇、乙醇和丁醇萃取物显著激活了选自与胶原蛋白合成相关的因子col1a1和col3a1中的至少一种基因的表达。[表1]4.在由uv照射诱导衰老的成纤维细胞中胶原酶-1分泌的抑制的测量实验测试狼毒的乙醇萃取物对胶原酶-1(基质金属蛋白酶-1，mmp-1)的形成的抑制作用。首先，将人成纤维细胞添加到含有dmem介质(含有2.5％的胎牛血清)的24孔微量滴定板的各个孔中，使得各个孔中置有1×105个细胞。培养人成纤维细胞直至它们的融合达到90％。然后，将溶解在无血清的dmem培养基中的狼毒的乙醇萃取物以1μg/ml、5μg/ml和10μg/ml的浓度添加到各个培养基中。然后，继续培养细胞24小时。之后，使用uv照射器用15mj的紫外线b(uvb)进行照射。随后，将溶解在无血清的dmem培养基中的狼毒的乙醇萃取物以1μg/ml、5μg/ml和10μg/ml的浓度进一步添加到各个培养基中。24小时之后收集细胞培养基，然后离心，仅获取上清液。使用elisa试剂盒mmp-1(qia55，购自merck&co.，usa)测量收集的上清液的mmp-1的水平。首先，将上清液添加到均匀地涂布有小鼠抗-mmp-1抗体作为第一抗体的96孔板中。然后，在室温下进行孵育2小时，以形成抗原-抗体复合物。经过2小时之后，将与辣根过氧化物酶缀合的抗-mmp-1抗体作为发色团添加到96孔板中。然后，对其进行孵育1小时。经过1小时之后，向其中添加四甲基联苯胺(作为显色底物)。然后，在室温下对其进行孵育30分钟，以形成颜色。随后，向其中添加终止缓冲液以停止反应。反应溶液的颜色为黄色，黄色的程度根据反应进程的程度而改变。使用酶标仪(platereader)在450/540nm处测量黄色96孔板的孔的吸光度。图6示出了狼毒的乙醇萃取物的存在对mmp-1的表达水平的影响。如图6中所示，可以发现，狼毒的乙醇萃取物对mmp-1基因的表达具有显著的抑制作用。作为阳性对照，使用表没食子儿茶素没食子酸酯(egcg)。5.在由uv照射诱导衰老的成纤维细胞中促进胶原蛋白的产生的测量实验测试狼毒的乙醇萃取物是否促进i型原胶原(1型原胶原)的表达。首先，将人成纤维细胞添加到含有dmem培养基(含有2.5％的胎牛血清)的24孔微量滴定板的各个孔中，使得各个孔中置有1×105个细胞。培养人成纤维细胞直至它们的融合达到90％。然后，将溶解在无血清的dmem培养基中的狼毒的乙醇萃取物以1μg/ml、5μg/ml和10μg/ml的浓度添加到各个培养基中。然后，继续培养细胞24小时。之后，使用uv照射器用15mj的uvb进行照射。随后，将溶解在无血清的dmem培养基中的狼毒萃取物以1μg/ml、5μg/ml和10μg/ml的浓度进一步添加到各个培养基中。然后，以相同的方式继续培养细胞。经过24小时之后，从中收集细胞培养基，然后离心，仅获取上清液。随后，使用pipeia试剂盒(购自takarabioinc.，japan的cat.#mk101)测量获取的上清液中的i型原胶原c-肽(pip)的水平。pip是一种在体内由原胶原合成胶原蛋白的过程中从原胶原裂解出来的肽。pip的水平与胶原蛋白的水平成正比。因此，pip是本领域中一种用作测量胶原蛋白水平的指标的肽。具体而言，将与辣根过氧化物酶(pod)缀合的小鼠抗-pip单克隆抗体(也称为“抗体-pod缀合物”)添加到均匀地涂布有小鼠抗-pip单克隆抗体的96孔板中。随后，向各个孔中分别添加细胞培养基和标准溶液，然后将96孔板在37℃的温度下放置3小时。然后洗涤孔，并向各个孔中添加包含过氧化氢和四甲基联苯胺的底物溶液。然后，将孔孵育15分钟。接着向各个孔中添加停止液以停止反应。使用酶标仪在450nm处测量孔的吸光度。图7示出了在uvb照射下狼毒的乙醇萃取物对i型原胶原在人成纤维细胞中的表达的影响程度的测量结果。如图7中所示，可以发现，狼毒的乙醇萃取物对i型原胶原的表达具有显著的促进作用。6.动物实验中伤口愈合的改善测试狼毒萃取物在动物实验中是否促进伤口愈合。(1)实验动物sprague-dawley(sd)大鼠(雄性，7周龄)购自koatechco.，ltd.。通过自动控制保持25±1℃的温度、50％±10％的湿度、以及12小时光照和12小时黑暗的光周期的条件。此外，使大鼠能够自由地进食正常饮食和水。使所有实验动物有一周的时间来适应动物室的环境，然后用于实验。实验组的饮食、剂量和施用方法示于表2中。[表2](2)伤口产生和治疗在将sd大鼠麻醉之前使sd鼠禁食24小时，并对sd大鼠喂食100ml的水。在各个实验组中伤口产生之前1小时，以1∶2的比例混合100％的舒泰(zoletil)和100％的龙朋(rompun)来制备混合物。使用所述混合物以0.1cc/k通过肌内注射对各个实验组进行麻醉。之后，使用电动脱毛机除去所有实验组的每只大鼠的背面的毛。在用10％的聚维酮碘和70％v/v的乙醇对背面进行消毒之后，使用消过毒的手术刀通过切割来产生平方尺寸为2cm×2cm的全层切除伤口(包括真皮层)。(3)通过肉眼观察伤口的变化将已知对伤口愈合有效的狼毒萃取物(1％v/v或3％v/v)和积雪草萃取物(1％v/v或3％v/v)分别施用于伤口皮肤两周，一天一次。积雪草萃取物与在实施例1的第2节中所描述的相同。在将各个测试物质施用于伤口之后的第1、4、8、11和15天对伤口部位进行拍照，并使用imagej(nih，usa)对伤口面积进行测量和分析。(4)组织学检查在施用各个测试物质之后的第14天，使用乙醚对所有实验组进行吸入麻醉，并将施用测试物质的部位用10％的中性缓冲福尔马林溶液固定。对于病理组织学检查，相对于伤口表面的长轴，将固定的皮肤组织逐个切割成边长为2cm×2cm的正方形，使得可以均匀地检查伤口表面。根据常规的组织处理方法将切割的组织包埋在石蜡中，形成厚度为约3μm至4μm的一片组织并附着在载玻片上。用苏木精-曙红(h&e)使附着的片染色，并使用光学显微镜(olympusbx53，japan)检查染色后的片。伤口组织(例如，切口)的解读根据nisbet等人(tissueengparta.2010，sep；16(9)：2833-42)和barati等人(diagnpathol.2013；8：120)的评价法进行得分评价。评价标准示于表3中。[表3]图8示出了狼毒的乙醇萃取物在动物实验中对裂开伤口的上皮形成的影响。在图8中，x轴上的g1、g2、g3、g4和g5表示与表2中所示的相同的实验组，y轴上的得分是基于表3中所示的上皮形成标准而测得的值。如图8中所示，与对照组g1相比，g4和g5示出的本发明的狼毒萃取物显著改善上皮形成。在图8和图9，*表示由scheffe检验(p＜0.05)得到的方差分析(anova)。图9示出了狼毒的乙醇萃取物在动物实验中对裂开伤口的伤口面积的减小的影响。在图9中，伤口面积表示在将狼毒萃取物施用于伤口之后第1、4、8、11和15天测量的伤口面积的结果。在图9中，x轴上的g1、g2、g3、g4和g5表示与表2中所示的相同的实验组，y轴表示伤口面积。如图9中所示，与对照组g1相比，g4和g5示出的本发明的狼毒萃取物使伤口面积显著减小。图10示出了通过苏木精-曙红(h&e)染色方案测试的狼毒的乙醇萃取物在动物实验中促进裂开伤口的恢复。如图10中所示，可以发现，与对照组相比，本发明的狼毒萃取物促进伤口的再上皮化。如图8中所示，当使用h&e组织染色时，可以发现两层：上部的粉红色层是表皮，下部的粉红层是真皮。将对照组与用样品处理过的组进行比较，可以看出，根据表皮(即，上层)的厚度和裂纹，用样品处理过的组恢复了。根据上述结果，可以发现，狼毒萃取物在动物实验中促进裂开伤口的再上皮化，并且显著促进伤口的恢复。上述结果基于使用狼毒的地上部分的乙醇萃取物，然而，还发现，狼毒的地上部分的乙醇萃取物的己烷、乙酸乙酯或丁醇级分；以及狼毒的地上部分的丙酮、甲醇或丁醇萃取物，或者其己烷、乙酸乙酯或丁醇级分也具有相似的结果。另外，根据上述实施例，在紫外线(uv)照射下，可以发现，狼毒萃取物降低mmp-1的表达，并且促进胶原蛋白在人成纤维细胞中的表达。换言之，在uv照射下，狼毒萃取物降低胶原酶的表达并且促进胶原蛋白在人成纤维细胞中的表达。因此，狼毒萃取物可以，例如，通过促进皮肤中的胶原蛋白合成来促进包含人成纤维细胞的组织的弹性。因此，狼毒萃取物有效地用于改善包含人成纤维细胞的组织，例如，狼毒萃取物有效地用于皮肤皱纹改善或皮肤抗衰老。实施例2：狼毒的茎萃取物及其级分的制备在实施例2中，狼毒的茎萃取物及其级分由狼毒制备，并且测试狼毒的茎萃取物及其级分对伤口治疗的影响。1.狼毒的茎萃取物及其级分的制备(1)狼毒的茎萃取物的制备仅收集在蒙古乌兰巴托生长的狼毒的地上部分的茎。用水洗涤收集的茎并干燥。使用切草机将干燥后的狼毒的茎切成尺寸在2cm至3cm的范围内的小段。将100g的切成薄片的狼毒的茎和1l的乙醇添加到玻璃锥形瓶中，然后混合在一起。在约20℃的室温下以150rpm的速率搅拌的同时对混合物萃取48小时。接着，通过滤纸(whatman，no.2，8μm)使混合物过滤，从而得到滤液。使用旋转蒸发仪(购自eyela的n-1100)对得到的滤液进行减压浓缩。为了除去剩余的溶剂，使用冷冻干燥机(购自operone的fdcf-12003)对其进行冷冻干燥48小时，从而得到3g的溶剂被除去的干燥的狼毒茎萃取物。(2)狼毒的茎萃取物的级分的制备将3g干燥的狼毒茎萃取物和100ml的水添加到锥形瓶中然后悬浮。将悬浮液倒入250ml的分液漏斗中，并向其中添加100ml的正己烷(超纯级，95％以上)，接着充分摇动。然后，将混合物在室温下静置3小时。使用分液漏斗仅由混合物取己烷层。将该过程重复三次，得到己烷级分并使用旋转蒸发仪(购自eyela的n-1100)进行减压浓缩，从而得到最终的己烷级分。此外，以相同的方式，将乙酸乙酯添加到除去己烷级分的水级分中并混合。然后，对其进行相同的处理，从而得到乙酸乙酯级分。此外，以相同的方式，将水饱和的丁醇添加到除去乙酸乙酯级分的水级分中并混合。然后，对其进行相同的处理，从而得到丁醇级分。将狼毒的萃取物及其级分以20mg/rnl的浓度溶解在dmso中，并用于下面的实验。2.人角化细胞的迁移的增加如下测试狼毒的茎萃取物或其级分是否增加人角化细胞的迁移。将hacat人角化细胞添加到含有1ml的hyclonedmem(含有2.5％v/v的胎牛血清)的24孔微量滴定板的各个孔中，使得各个孔中置有2×105个细胞。接着，在37℃的温度和5％的co2培养箱中培养角化细胞，直至它们的融合达到80％。用p10移液管尖端将培养基中的细胞单层“划伤”。随后，将200μl的无血清的dmem和狼毒萃取物或其级分以5μg/ml和10μg/ml的浓度添加到各个培养基中的划伤的细胞单层中。然后，在相同的培养条件下将人角化细胞培养24小时。在阴性对照中，处理相同的量的用于溶解萃取物的dmso；在阳性对照中，使用给定浓度的gw501516(购自sigma-aldrich，usa)，即，过氧化物酶体增生物激活受体δ(pparδ)，或者积雪草萃取物。之后，使用结晶紫试剂对细胞层进行染色，以测试划伤的恢复程度。积雪草萃取物购自biospectrum(korea)。图11示出了狼毒的茎萃取物促进角化细胞的迁移。图12示出了狼毒的茎萃取物的级分促进角化细胞的迁移。如11和图12中所示，在阴性对照条件下，在处理24小时之后，处理后的细胞的划伤保持相对未愈合。另一方面，在用狼毒的地上部分的茎萃取物或其级分处理的细胞中，由于伤口边缘的增生和迁移，划伤愈合，因此，24小时之后，划损面积减小。在图11中，gw表示gw501516。3.col1a1和col3a1基因在成纤维细胞中的表达的增加测试狼毒的茎萃取物或其级分是否促进胶原蛋白基因在人成纤维细胞中的表达。将hdf(购自americantypeculturecollection，usa)添加到含有2ml的hyclonedmem(含有2.5％v/v的胎牛血清)的6孔微量滴定板的各个孔中，使得各个孔中置有2×106个细胞。接着，在相同的条件下培养人皮肤成纤维细胞，直至它们的融合达到80％。将狼毒的茎萃取物以1μg/ml、5μg/ml和10μg/ml的浓度添加到在各个培养基中培养的细胞中。将狼毒的茎萃取物的级分以15μg/ml和10μg/ml的浓度添加到各个培养基中。然后，在与上面描述的条件相同的条件下继续培养细胞24小时。在阴性对照中，处理相同的量的用于溶解萃取物的dmso；在阳性对照中，使用积雪草萃取物(购自biospectrum，korea)。经过24小时之后，通过rt-pcr试验来测试胶原蛋白基因的表达。详细地，经过24小时之后，使用trizol试剂(购自invitrogen，carlsbad，ca，usa)从细胞中收集总rna，然后使其逆转录以进行rt-pcr，过程如下。首先，为了合成cdna，使用逆转录酶使rna逆转录。使用表1中示出的特异性引物进行rt-pcr。基于β-肌动蛋白的量使各个基因的mrna表达的相对量标准化。图13示出了狼毒的茎萃取物促进col1a1和col3a1基因在成纤维细胞中的表达。图14示出了狼毒的茎萃取物的级分促进col1a1和col3a1基因在成纤维细胞中的表达。如图13和图14中所示，可以发现，狼毒的茎萃取物或其级分显著激活了选自与胶原蛋白合成相关的因子col1a1和col3a1中的至少一种基因的表达。4.动物实验过程中的伤口愈合的改善测试狼毒的茎萃取物在动物实验中是否促进伤口愈合。(1)实验动物sd大鼠(雄性，7周龄)购自koatechco.，ltd.。通过自动控制保持温度为25±1℃、湿度为50％±10％、以及12小时的光照和12小时的黑暗的光周期的条件。此外，使鼠能够自由地进食正常饮食和水。使所有实验动物有一周的时间来适应动物室的环境，然后用于实验。实验组的饮食、剂量和施用方法示于表4中。[表4]实验组的组成、测试物质的剂量以及施用方法(2)伤口产生和治疗在将sd大鼠麻醉之前使sd大鼠禁食24小时，并对sd大鼠喂食100ml的水。在各个实验组中产生伤口之前1小时，以1∶2的比例混合100％的舒泰和100％的龙朋来制备混合物。使用所述混合物以0.1cc/kg通过肌内注射对各个实验组进行麻醉。之后，使用电动脱毛机除去所有实验组的每只鼠的背面的毛。在用10％的聚维酮碘和70％的乙醇对背面进行消毒之后，使用消过毒的手术刀通过切割来产生平方尺寸为2cm×2cm的全层切除伤口(包括真皮层)。(3)通过肉眼观察伤口的变化将已知对伤口愈合有效的狼毒的茎萃取物(3％v/v)和积雪草萃取物(3％v/v)分别施用于伤口皮肤两周，一天一次。积雪草萃取物与在实施例1的第2节中描述的积雪草萃取物相同。在将各个测试物质施用于伤口之后的第1、4、8、11和14天对伤口部位进行拍照，并使用imagej(nih，usa)对伤口面积进行测量和分析。(4)组织学检查在施用各个测试物质之后第14天，使用乙醚对所有实验组进行吸入麻醉，并将施用测试物质的部位用10％的中性缓冲福尔马林溶液固定。对于病理组织学检查，相对于伤口表面的轴向，将固定的皮肤组织逐个切割成边长为2cm×2cm的正方形，使得可以均匀地检查伤口表面。根据常规的组织处理方法将切割的组织包埋在石蜡中，形成厚度为约3μm至4μm的一片组织并附着在载玻片上。用苏木精-曙红(h&e)使附着的片染色，并使用光学显微镜(olympusbx53，japan)检查染色后的片。伤口组织的解读根据现有技术中已知的评价方法(nisbet等人(tissueengparta.2010，sep；16(9)：2833-42))和barati等人(diagnpathol.2013；8：120)进行得分评价。评价的标准示于表5中。解读结果示于表6中。如表6所示，可以看出，狼毒的茎萃取物对纤维组织的形成、血管生成和上皮形成具有显著的影响。图15示出了狼毒的茎萃取物在动物实验中促进裂开伤口的恢复的临床试验结果。图16示出了狼毒的茎萃取物在动物实验中促进裂开伤口的恢复的定量试验结果。如图15和图16中所示，可以发现，狼毒萃取物促进伤口部位的再上皮化，并且显著促进裂开伤口的恢复。[表5][表6]*表示表示与g1的统计显著性p＜0.05。制备实施例1：药物制剂的制备1.软胶囊的制备通过混合150mg的狼毒茎的乙醇萃取物或其级分、2mg的棕榈油、8mg的氢化棕榈油、4mg的黄蜡和6mg的卵磷脂，并按照常规方法将软胶囊填充至每个胶囊为400mg来制备软胶囊。2.片剂的制备将150mg的狼毒茎的乙醇萃取物或其级分、100mg的葡萄糖、50mg的红参萃取物、96mg的淀粉和4mg的硬脂酸镁混合，并向其中添加40mg的30％的乙醇来形成颗粒。然后，将所述颗粒在60℃的温度下干燥，并使用压片机制成片剂。3.颗粒剂的制备将150mg的狼毒茎的乙醇萃取物或其级分、100mg的葡萄糖、50mg的红参萃取物和600mg的淀粉混合，并向其中添加100mg的30％的乙醇来形成颗粒。然后，将所述颗粒在60℃的温度下干燥，然后填充进包装中。内容物的最终重量为1g。制备实施例2：化妆品组合物的制备在制备实施例2中，使用狼毒的茎的乙醇萃取物。1.保湿剂(化妆水)的制备[表7]配料成分含量(重量％)狼毒萃取物或其级分0.1甘油3.0丁二醇2.0丙二醇2.0羧基乙烯基聚合物0.1聚乙二醇-12(peg-12)壬基苯基醚0.2聚山梨酯800.4乙醇10.0三乙醇胺0.1防腐剂、色素、香料适量蒸馏水剩余部分2.营养乳液(牛奶乳液)的制备[表8]3.营养霜的制备[表9]4.按摩霜的制备[表10]配料成分含量(重量％)狼毒萃取物或其级分0.1甘油8.0丁二醇4.0液体石蜡45.0β-葡聚糖7.0卡波姆0.1辛酸/癸酸甘油三酯3.0蜡4.0鲸蜡硬脂基葡糖苷1.5脱水山梨醇倍半油酸酯0.9凡士林3.0石蜡1.5防腐剂、色素、香料适量蒸馏水剩余部分5.面膜的制备[表11]6.软膏的制备[表12]配料成分含量(重量％)狼毒萃取物或其级分0.1甘油8.0丁二醇4.0液体石蜡15.0β-葡聚糖7.0卡波姆0.1辛酸/癸酸甘油三酯3.0角鲨烷1.0鲸蜡硬脂基葡糖苷1.5脱水山梨醇硬脂酸酯0.4鲸蜡硬脂醇1.0蜡4.0防腐剂、色素、香料适量蒸馏水剩余部分当前第1页12