用于持续疗法的纳米颗粒组合物的制作方法

相关专利申请的交叉引用

本申请根据35u.s.c.§119(e)要求分别于2015年5月6日、2015年12月31日和2016年2月16日提交的美国临时申请号62/157,933、62/273,953和62/296,032的优先权，其每一个的内容均通过引用以其全文并入本文。

背景技术：

贯穿本公开内容的是技术和专利出版物，其通过标识性引文或通过阿拉伯数字引用。对应于阿拉伯数字的全部文献引文可见于说明书的最后部分。本文引用的全部文献的公开内容通过引用并入本申请中，以更充分地描述本公开内容所属领域的状况。

各种各样的疾病暗示在症状的发病机理或恶化中有不适当的免疫功能。尽管存在各种各样的免疫疗法，但它们由于缺乏靶向特异性和/或不良副作用而往往伴随着脱靶效应。

因此存在关于找到针对这些病症的安全又有效的疗法的需要。本公开内容满足了这一需要并且还提供了相关优势。

技术实现要素：

本公开内容涉及一种纳米药物，其在一方面是一种包含与多个疾病相关抗原-mhc复合物(在本文缩写为“pmhc”或“pmhc复合物”)偶联的纳米颗粒核心的复合物，其可用于在以有效量施用于受试者时扩增和分化t细胞群体以及治疗疾病。如本文更详细描述的，该纳米颗粒核心包含多种组合物或组分。在一些方面，该纳米颗粒核心具有选自约1nm至约100nm；约1nm至约75nm；约1nm至约50nm；约1nm至约25nm；约1nm至约25nm；约5nm至约100nm；约5nm至约50nm；或约5nm至约25nm、或约15nm至约25nm或约20nm的直径。在一些实施方案中，该纳米颗粒核心具有约25nm至约60nm、或约25nm至约50nm、或约20nm至约40nm、或约15nm至约50nn、或约15nm至约40nm、或约15nm至约35nm、或约15nm至约30nm、或约15nm至约25nm，或备选地约15nm、或约20nm、或约25nm、或约30nm、或约35nm、或约40nm的直径。

在一些方面，每个纳米颗粒核心的pmhc数目(在本文称为纳米颗粒复合物的“化合价”)的范围可为约1个pmhc复合物比1个纳米颗粒核心至约6000个pmhc复合物比1个纳米颗粒核心，或备选地约10:1至约6000:1，或备选地约11:1至约6000:1，或备选地约12:1至约6000:1，或备选地至少2:1，或备选地至少8:1，或备选地至少9:1，或备选地至少10:1，或备选地至少11:1，或备选地至少12:1。在一些方面，每个纳米颗粒核心的pmhc数目为约10:1至约6000:1，或约20:1至约5500:1，或备选地约10:1至约5000:1，或备选地约10:1至约4000:1，或备选地约10:1至约3500:1，或备选地约10:1至约3000:1，或备选地约10:1至约2500:1，或备选地约10:1至约2000:1，或备选地约10:1至约1500:1，或备选地约10:1至1000:1，或备选地约10:1至约500:1，或备选地约10:1至约100:1，或备选地约20:1至约50:1，或备选地约25:1至约60:1，或备选地约30:1至约50:1，或备选地约35:1至约45:1，或备选地约40:1。

在一些方面，所述纳米颗粒核心具有限定的化合价/核心表面积，它在本文中也被称为“密度”。在这些方面，每个纳米颗粒的pmhcl密度为约0.025pmhc/100nm²至约100pmhc/100nm²纳米颗粒核心表面积，或备选地约0.406pmhc/100nm²至约50pmhc/100nm²，或备选地约0.05pmhc/100nm²至约25pmhc/100nm²。在某些方面，每个纳米颗粒的pmhc密度为约0.4pmhc/100nm²至约25pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约20pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约15pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约14pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约13pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约12pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约11.6pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约11.5pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约11pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约10pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约9pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约8pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约7pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约6pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约5pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约4pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约3pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约2.5pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约2pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约1.5pmhc/100nm²。

在另一方面，所述纳米颗粒可具有约0.22pmhc/100nm²至约10pmhc/100nm²、或约0.22pmhc/100nm²至约9pmhc/100nm²、或约0.22pmhc/100nm²至约8pmhc/100nm²、或约0.22pmhc/100nm²至约7pmhc/100nm²、或约0.22pmhc/100nm²至约6pmhc/100nm²、或约0.22pmhc/100nm²至约5pmhc/100nm²、或约0.22pmhc/100nm²至约4pmhc/100nm²、或约0.22pmhc/100nm²至约3pmhc/100nm²、或约0.22pmhc/100nm²至约2pmhc/100nm²、或约0.22pmhc/100nm²至约1.5pmhc/100nm²的pmhc密度。在一些方面，所述纳米颗粒具有约0.22pmhc/100nm²至约10pmhc/100nm²、或0.24pmhc/100nm²至约9pmhc/100nm²、或约0.26pmhc/100nm²至约8pmhc/100nm²、或约0.28pmhc/100nm²至约7pmhc/100nm²、或约0.24pmhc/100nm²至约4pmhc/100nm²、或约0.5pmhc/100nm²至约3pmhc/100nm²、或约0.6pmhc/100nm²至约1.5pmhc/100nm²的pmhc密度。在进一步的方面，所述纳米颗粒具有约0.4pmhc/100nm²至约1.3pmhc/100nm²、或备选地约0.5pmhc/100nm²至约0.9pmhc/100nm²、或备选地约0.6pmhc/100nm²至约0.8pmhc/100nm²的pmhc密度。

在一些实施方案中，所述纳米颗粒可具有0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10.0、10.1、10.2、10.3、10.4、10.5、10.6、10.7、10.8、10.9、11.0、11.1、11.2、11.3、11.4、11.5、11.6、11.7、11.8、11.9或12.0pmhc/100nm²的pmhc密度。在具体的实施方案中，所述纳米颗粒可具有约0.4pmhc/100nm²至约1.5pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约6pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约12pmhc/100nm²的pmhc密度。

在另一方面，所述纳米颗粒具有约0.4pmhc/100nm²至约1.3pmhc/100nm²、或备选地约0.5pmhc/100nm²至约0.9pmhc/100nm²、或备选地约0.6pmhc/100nm²至约0.8pmhc/100nm²的如本文限定的pmhc密度，并且此外其中所述纳米颗粒核心具有约25nm至约60nm、或约25nm至约50nm、或约20nm至约40nm、或约15nm至约50nn、或约15nm至约40nm、或约15nm至约35nm、或约15nm至约30nm、或约15nm至约25nm、或备选地约15nm、或约20nm、或约25nm、或约30nm、或约35nm、或约40nm的直径。

在一些方面，所述纳米颗粒核心进一步包含与纳米颗粒核心偶联的多个共刺激分子、共刺激抗体、抑制性受体阻断抗体和/或多个细胞因子。

因此，本公开内容的某些方面涉及一种复合物，其包含与多个pmhc复合物偶联的纳米颗粒核心，或备选地基本上由该偶联的纳米颗粒核心组成，或进一步由该偶联的纳米颗粒核心组成，其中所述纳米颗粒核心任选地进一步包含与纳米颗粒核心偶联的一个或多个共刺激分子和/或一个或多个细胞因子，或进一步由它们组成，或备选地进一步基本上由它们组成。对于含有多个复合物的这些组合物，每个纳米颗粒核心上的pmhc复合物彼此相同或不同；和/或每个纳米颗粒核心上的pmhc复合物的mhc彼此相同或不同；和/或每个纳米颗粒核心上的细胞因子彼此相同或不同；和/或每个纳米颗粒核心上的共刺激分子彼此相同或不同；和/或纳米颗粒核心的直径彼此相同或不同；和/或每个纳米颗粒核心上的pmhc复合物的化合价彼此相同或不同；和/或每个纳米颗粒核心上的pmhc复合物的密度彼此相同或不同；和/或每个纳米颗粒核心上的共刺激分子的化合价彼此相同或不同；和/或每个纳米颗粒核心上的细胞因子的化合价彼此相同或不同。

在某些方面，本文提供了包含本文提供的多个复合物的组合物。在一些实施方案中，该组合物进一步包含载体，任选药物载体。在一些实施方案中，本文提供的组合物可任选包含与一个或多个共刺激分子和/或细胞因子偶联的一个或多个纳米颗粒核心。因此，在一些实施方案中，该组合物包含以下项，或备选地基本上由以下项组成，或进一步由以下项组成：1)与多个抗原-mhc复合物偶联的多个纳米颗粒核心，其中该纳米颗粒核心的至少一部分进一步包含一个或多个共刺激分子和/或一个或多个细胞因子，且该纳米颗粒核心的第二部分的不进一步包含共刺激分子和/或细胞因子，和2)与一个或多个共刺激分子和/或细胞因子偶联的多个纳米颗粒核心。

本公开内容的另外的方面涉及针对治疗或预防人类患者和动物中的疾病而优化的具体的疾病相关抗原、mhc和它们的组合。

本公开内容还提供了组合物以及任何上述复合物或组合物的使用方法，其各自任选地与载体，例如药学上可接受的载体组合。

本公开内容还提供了以不依赖于pmhc剂量的方式分化或触发t调节1型(tr1)细胞形成的方法。申请人已发现，纳米颗粒核心上的pmhc密度以不依赖于剂量的方式调节纳米颗粒核心上的pmhc触发tr1细胞形成的能力，而pmhc剂量以不依赖于pmhc密度的方式调节tr1细胞扩增的量级。申请人已观察到，pmhc密度阈值和pmhc密度与剂量对tr1细胞形成与扩增的独立效应是出乎意料的发现，该发现不能基于本领域的常规免疫学知识进行预期。这些方法要求使同源t细胞与有效量的pmhc-np或本文公开的组合物接触(在体外或体内)。在某些方面，依赖于密度的方法涉及通过使活化t细胞或记忆t细胞与有效量的本文公开的复合物或组合物接触，使活化t细胞或记忆t细胞分化为任选具有标志物cd49b和/或lag3的产生il-10的同源tr1细胞，和/或使b细胞分化为调节b细胞。在一些实施方案中，分化的tr1细胞与b细胞结合，从而使b细胞分化为调节b细胞。在所述方法的某些方面，所述接触在体外或体内进行。在一些实施方案中，所述pmhc-np或含有多个pmhc-np的组合物具有平均纳米颗粒核心直径为约25nm至约60nm、或约25nm至约50nm、或约20nm至约40nm、或约15nm至约50nn、或约15nm至约40nm、或约15nm至约35nm、或约15nm至约30nm、或约15nm至约25nm，或备选地约15nm、或约20nm、或约25nm、或约30nm、或约35nm、或约40nm的pmhc-np。在一些方面，所述纳米颗粒核心进一步包含外涂层或外层，其中该核心和外层的直径具有约30nm至约75nm、或约30nm至约70nm、或约30nm至约60nm、或约30nm至约50nm、或约40nm的平均直径。在一些方面，所述纳米颗粒具有约0.4pmhc/100nm²至约12pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约11.6pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约11.5pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约11pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约10pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约9pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约8pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约7pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约6pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约5pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约4pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约3pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约2.5pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约2pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约1.5pmhc/100nm²的平均pmhc密度。

本公开内容的进一步的方面涉及通过施用有效量的如本文公开的pmhc-np来治疗或预防如本文公开的相关疾病或病况的方法。还公开了检测采用如本文公开的pmhc-np复合物和组合物进行治疗的存在和功效的方法。

附图说明

以下附图构成本说明书的一部分并被包含在内以进一步说明本公开内容的某些方面。通过与本文提出的具体实施方案的详细描述相结合，参考这些附图中的一幅或多幅，可以更好地理解本公开内容。

图1a-图1b显示了np-复合物的示意图。图1a是单链pmhc-i类表达构建体(顶部)的示意图和相应pmhc四聚体(荧光染料标记的)与同源cd8+t细胞的结合的代表性流式细胞术曲线。图1b是显示np-复合物的连接体和二维结构的示意图。从图中可以看出，一个np可含有通过不同化学连接体与纳米颗粒核心复合的相同抗原。

图2显示了典型的pmhcii类单体的结构(顶部)和采用相应pmhc四聚体染色或未染色的同源cd4+t细胞的代表性facs曲线。

图3显示了树状接枝聚l-赖氨酸(dendri-graftpoly-l-lysines)第3代(dglsg3)的化学结构。

图4显示了用peg-叠氮基官能化的g3树状接枝聚l-赖氨酸

(dgln)的合成。

图5显示了pmhc-dgln的合成。

图6显示了pmhc-dgln缀合物的非变性和变性page分析。

图7显示了v7cho-dgln的afm分析。

图8a-图8b显示，v7cho-dgln对同源cd8+t细胞具有强大的激动剂性质。

图9a-图9n显示，与t1d或eae有关的pmhc–np在体内扩增同源疾病抑制性tr1样cd4⁺t细胞。图9a和图9b显示了四聚体染色图(图9a)和四聚体⁺cd4⁺t细胞的百分比(图9b)。数据对应于治疗5周的前驱糖尿病nod雌性(分别为，血液：n＝5，8和6；脾：n＝5，18和6)。tet，四聚体。图9c显示来自经治疗或未治疗的nodfoxp3-egfp小鼠的脾cd⁴⁺t细胞的四聚体染色。图9d显示2.5mi/ia^g7–np治疗的小鼠的四聚体⁺cd4⁺t细胞展现出tr1样表型。图9e显示了在输注来自不同供体±2.5mi/ia^g7–np的cd4⁺t细胞的t细胞重建的nodscid宿主中糖尿病的发病率(从顶部，n＝11，5，7和6)。图9f显示了在2.5mi/ia^g7–np治疗或未治疗的nodscid宿主中四聚体⁺cd4⁺t细胞的百分比(每组n＝4–5)。图9g显示了在用pmhc–np(顶部从左至右，n＝9,7,7,7)或igrp4–22肽(burton,b.r.等人(2014)naturecommun.5:4741-4747)和igrp4–22肽–np(n＝9)治疗的糖尿病小鼠中疾病逆转的发生率。图9h显示了发病时的糖尿病小鼠响应于2.5mi/ia^g7–np疗法以及年龄匹配的非糖尿病对照中四聚体⁺cd4⁺t细胞的百分比(从左侧，n＝8，6，2和7)。图9i显示了胰岛炎评分(从左侧，n＝6，4，3和6)。底部，代表性图像。图9j-9m显示了用pmog35–55进行免疫的c57bl/6小鼠。图9j显示了从第14天起治疗的小鼠的eae评分(每组n＝4)。图9k显示了从第21天起治疗的小鼠的eae评分(从顶部，n＝10，7和3)。图9l显示了来自图9j和图9k的小鼠的脾和血液中的四聚体⁺cd4⁺t细胞的百分比(从顶部，n＝13，14和5)。图9m显示了来自图9j和图9k的小鼠的cd4⁺t细胞的代表性流式细胞术曲线。图9n显示了来自图9k的小鼠(n＝4–5)的小脑中的代表性小神经胶质iba1染色和相对排名评分。p值经由mann–whitneyu检验、对数秩(mantel–cox)检验或双因素anova来计算。误差条，s.e.m.。

图10a-图10h显示治疗效果是疾病特异性的且依赖于pmhc和纳米颗粒。图10a-图10f显示了用牛胶原蛋白免疫的c57bl/10.mhla-dr4-ie转基因小鼠。图10a(左侧)显示了响应于未包被的np、pmhc–np、肽皮下注射(burton,b.r.等人(2014)naturecommun.5:4741-4747)或肽包被的mp静脉内注射(getts,d.r.等人(2012)naturebiotechnol.30:1217-1224)的关节肿胀变化(顶部)和临床评分变化(底部)。当关节肿胀达到基线的130％(数据针对治疗开始时(100％值)进行归一化)时开始治疗(从顶部，n＝4，4，4和8)。右侧，关节肿胀相对于免疫前基线的增加百分比(100％值)。图10b显示了代表性的苏木精和曙红(第一行)和o-番红/固绿/苏木精(第二行和第三行)膝关节染色图像。第三行显示了在骨和半月板关节表面上的陷窝的放大图像。1，非化脓性淋巴结炎形成；2，半月板的细胞浸润；3，骨质侵蚀；4，蛋白聚糖消耗；5，软骨细胞/陷窝的损失。图10c显示了平均病理学评分(每组n＝3–4)。图10d显示了四聚体⁺cd4⁺t细胞的百分比。图10e显示了在mcii259–273/dr4–np治疗中tr1标志物的代表性流式细胞术曲线。图10f-图10h显示了用hplp免疫的c57bl/6iab^nullhla-dr4-ie转基因小鼠。图10f显示了eae评分的变化(从顶部，n＝5，4，13(每组4–9只)，5，19(每组4–5只，也参见图9h)，4和5)。图10g显示了来自图10f的小鼠的脾中四聚体⁺cd4⁺t细胞的百分比(从左侧，n＝4，5，4，6，15，3和3)。图10h显示了tr1标志物的代表性流式细胞术曲线。数据使用mann–whitneyu检验或双因素anova来比较。误差条，s.e.m.。

图11a-图11h显示疾病逆转涉及在不危及系统免疫的情况下tr1细胞因子对同源b细胞和局部cd11b+细胞的作用。图11a显示了在用2.5mi/ia^g7–np和阻断抗体治疗的糖尿病nod小鼠中的血糖水平(从顶部至右侧，n＝8，4，6，6，5和4)。图11b显示来自2.5mi/ia^g7–np治疗的nod宿主中nodil10^gfp供体的egfp^-2.5mi脉冲脾b细胞表达il-10(egfp)以及上调cd5和cd1d。图11c显示来自图11b的平均结果(从左侧，n＝4，3，3和7)。图11d显示了未处理的或输注plncd19⁺细胞的t细胞重建的nodscid宿主中糖尿病的发病率(从顶部，n＝7，13和7)。图11e显示了在输注cd19+和/或cd4+细胞的t细胞重建的nodscid宿主中糖尿病的发病率(从顶部，n＝7，6，3，7，8，11和13)。图11f显示了来自2.5mi/ia^g7–np治疗的nod小鼠的pln和mlncd11b⁺细胞响应于lps的细胞因子和趋化因子曲线(每组n＝3–4)。图11g显示了在痘苗病毒感染后4天和14天，与未治疗的nod小鼠相比，经治疗的动物在脾中四聚体+cd4+t细胞的百分比(左侧)和卵巢中的病毒滴度(右侧)(每组n＝3)。图11h显示了在用钥孔虫戚血蓝蛋白(klh)-dnp免疫的治疗和未治疗的nod小鼠中，脾中四聚体⁺cd4⁺t细胞的百分比(左侧)和血清抗二硝基苯基(dnp)抗体滴度(右侧)(每组n＝3–5)。数据使用mann–whitneyu检验、对数秩检验或双因素anova来比较。误差条，s.e.m.。

图12a-12g显示响应于pmhcii–np而产生的tr1样cd4⁺t细胞来源于经历抗原的前体。图12a，与用igrp4–22/ia^g7–(n＝4和7)或2.5mi/ia^g7–np(n＝6和9)治疗的nod小鼠相比，高血糖nodg6pc2^-/-中四聚体⁺cd4⁺t细胞的百分比。图12b显示了响应于pmhc–np疗法的高血糖nodg6pc2^–/–小鼠的血糖水平(每组n＝4–6)。图12c显示了响应于不同体外刺激，来自bdc2.5nodfoxp3-egfp小鼠的抗-cd3/抗-cd28mab-激活的egfp–cd4+t细胞对tr1转录物的上调(每组n＝4只小鼠)。图12d显示了响应于体内2.5mi/ia^g7-np，在幼稚或记忆bdc2.5cd4⁺t细胞中tr1相关转录物的变化(从左侧，n＝6，6，5和4)。图12e显示了来自图12d的thy1^b+细胞的lag-3和cd49b曲线(蓝色：与红色的同种型对照相比)。图12f显示了nod.thy1^a宿主中的cfse标记的记忆bdc2.5cd4+t细胞响应于2.5mi/iag7–np的增殖。图12g显示了输注幼稚或记忆bdc2.5cd4⁺t细胞且用每两周一次剂量的2.5mi/ia^g7–np(n＝4和3)治疗或未治疗(n＝4和6)的t细胞重建的nodscid宿主中糖尿病的发病率。p值经由mann–whitneyu检验、对数秩(mantel–cox)检验来计算。误差条，s.e.m.。

图13a-图13i显示在移植人pbmc的nsg宿主中，人t1d相关的pmhc–np扩增同源tr1样cd4⁺t细胞。图13a显示在从dr4⁺t1d患者移植pbmc的nsg小鼠中，gad555–567(557i)/dr4–np(顶部)或ppi76–90(88s)/dr4–np(底部)扩增同源cd4⁺t细胞。图13b显示了在图13a的底部的样品上的cd49b和lag-3标志物表达。图13c显示响应于igrp13–25/dr3–np疗法，在从dr3⁺t1d患者移植pbmc的nsg小鼠中同源tr1样cd4⁺t细胞的扩增。图13d显示响应于治疗，在移植t1dpbmc的小鼠中四聚体⁺cd4⁺t细胞的百分比(左侧)和数目(右侧)(从左侧图例，针对每次治疗的脾和pln，n＝9/6，7/6和14/1)。图13e显示了在用igrp13–25/dr3–np治疗的小鼠的igrp13–25/dr3四聚体⁺cd4⁺t细胞中il10mrna的表达(每组，n＝3)。图13f显示相比于其他组，响应者小鼠的pln含有数目增加的淋巴细胞(从顶部图例，n＝6，3，4，3)。图13g和13h显示pln(图13g)或脾(图13h)中igrp13–25/dr3四聚体⁺细胞的绝对数目与igrp13–25/dr3–np治疗的小鼠中pln或脾b细胞的百分比或绝对数目之间的关系(n＝6和7)。图13i显示从用igrp13–25/dr3–np治疗的移植hpbmc的nsg小鼠的pln或脾中分离的、lps刺激的cd19⁺细胞(离体，24h)的il-10分泌(每组n＝3)。p值经由mann–whitneyu检验或pearson相关性检验来计算。误差条，s.e.m.。

图14a-14n显示，pmhcii–np疗法引起的同源tr1样cd4⁺t细胞的持续扩增通过抑制pln中的抗原呈递和非同源自身反应性t细胞的激活以及胰岛炎的进展，恢复糖尿病nod小鼠中正常的葡萄糖稳态。图14a(顶部左侧)显示了在抗-cd25mab治疗的nodfoxp3-egfp小鼠中2.5mi/ia^g7–np导致的同源cd4⁺t细胞的扩增。数据对应于8周龄的小鼠，该小鼠用500μg的消耗性抗-cd25mab或对照抗-hprnmab每周腹膜内治疗三次，接着在10周龄开始给予10个剂量的2.5mi/ia^g7–np(每周两个剂量；每组n＝4只小鼠)。底部，来自抗-cd25mab治疗的小鼠的四聚体⁺cd4⁺t细胞表达tr1标志物。右侧，循环foxp3⁺egfp⁺cd4⁺(顶部)和cd25⁺cd4⁺细胞(底部)的百分比。图14b显示从2.5mi/ia^g7–np治疗的小鼠中分选的四聚体⁺cd4⁺t细胞响应于2.5mi肽脉冲dc的刺激而增殖并产生il-10，并且在较小程度上产生ifnγ(n＝3只小鼠)。图14c显示了与来自转基因或野生型nod小鼠的四聚体-cd4⁺t细胞相比，来自bdc2.5nodfoxp3-egfp小鼠的四聚体⁺cd4⁺t细胞上的代表性细胞表面cd49b和lag-3曲线(n＝4)。图14d显示响应于2.5mi/ia^g7–np(25μgpmhc/ml)与2.5mi肽(10μgml^-1)或2.5mi/ia^g7单体(25μgpmhc/ml)，在来自bdc2.5nodfoxp3-egfp小鼠的抗-cd3/抗-cd28mab激活的bdc2.5cd4⁺t细胞上的cd49b和lag-3上调。图14e显示作为cd49b和lag-3表达的函数，响应于2.5mi/ia^g7–np，在来自bdc2.5nodil10^gfp小鼠的抗-cd3/抗-cd28mab激活的bdc2.5cd4⁺t细胞中egfp(il-10)的上调。图14f显示了作为cd49b和lag-3表达的函数，在2.5mi/ia^g7–np治疗的nodil10^gfp小鼠(每周2个剂量，持续5周)的cd4⁺t细胞中egfp(il-10)的表达(左侧，代表性曲线；右侧，egfpmfi值)(n＝8)。图14g显示了在来自2.5mi/ia^g7-np治疗的小鼠的四聚体^-或四聚体⁺cd4⁺t细胞的存在下，以及在细胞因子阻断mab、大鼠igg(阴性对照)或1-甲基-1-色氨酸(1-mt；一种ido抑制剂)的存在或不存在下，cfse标记的8.3-tcr-转基因cd8⁺t细胞(igrp206–214/nrp–v7-特异性)响应于2.5mi/nrp–v7–肽脉冲或非脉冲dc的增殖。数据对应于每一条件下3-7次实验中增殖细胞的平均值。图14h显示了用2.5mi/ia^g7–np、igrp4–22/ia^g7–np、igrp128–145/ia^g7–np或hel14-22/ia^g7–np(每组n＝6–9)、igrp4–22肽或igrp4–22肽–np(每组n＝9，4–5)治疗的自发高血糖(>11mm)雌性nod小鼠的血糖水平变化。小鼠每周接受两个剂量，直到连续4周为不可逆的高血糖或血糖正常，此时停止治疗。图14i显示在治疗停止时(连续4周血糖正常后)，由于用2.5mi/ia^g7–np、igrp4-22/ia^g7–np或igrp128–145/ia^g7–np治疗而呈现稳定的正常血糖的高血糖雌性nod小鼠中疾病复发的发病率和时间。数据对应于图9g中的响应者小鼠。图14j显示了在50周龄以前恢复至正常血糖的pmhc–np治疗的小鼠(n＝6)与新近患糖尿病(n＝12)和非糖尿病的年龄匹配的未治疗对照(n＝10)中的餐后血清胰岛素水平。图14k显示了图14h中小鼠的腹膜内葡萄糖耐量试验(ipgtt)。图14l显示了图14k中所示ipgtt的曲线下面积(auc)。图14m显示了对应于图14k中小鼠的ipgtt血清胰岛素水平。图14n显示了与在50周龄以前恢复至正常血糖的2.5mi/ia^g7–np治疗的小鼠、非糖尿病的年龄匹配的未治疗对照和新近患糖尿病的小鼠的mln相比，在pln中cfse-标记的igrp206–214-反应性8.3-cd8⁺t细胞的增殖。左图显示了代表性facs曲线。右图比较了在减去非引流(non-draining)mln中的背景增殖值之后在pln中的增殖细胞的百分比(每组n＝6–8只小鼠)。p值通过mann–whitneyu检验、对数秩(mantel–cox)检验或双因素anova来计算。数据为平均值±s.e.m.。

图15a-图15h显示了用不同t1d相关pmhcii复合物包被的纳米颗粒以相似的程度在体内扩增同源tr1样cd4⁺t细胞，而与疾病过程中靶t细胞特异性的表位优势(epitopedominance)或作用无关。图15a显示了与新近患糖尿病的(n＝5–6)和非糖尿病的年龄匹配的未治疗对照(n＝4–6)相比，在50周龄以前恢复至正常血糖(对于每个淋巴器官，n＝5–6只小鼠)或复发(n＝1–2)的2.5mi/ia^g7–np治疗的小鼠的pln、mln和骨髓(bm)中四聚体⁺cd4⁺t细胞的百分比。图15b显示了在50周龄之前恢复至正常血糖的2.5mi/ia^g7–np治疗的小鼠，或年龄匹配的非糖尿病的未治疗小鼠的脾cd4⁺t细胞中四聚体⁺cd4⁺t细胞的百分比，所述细胞用两种t1d相关的，但非同源的pmhcii四聚体染色(每组n＝3–4)。图15c显示了与新近患糖尿病(n＝5–8)和非糖尿病的年龄匹配的未治疗对照(n＝4-6)相比，在50周龄以前恢复至正常血糖(对于每个淋巴器官，n＝5–6只小鼠)的igrp4–22/ia^g7–np治疗的小鼠的血液、脾、pln、mln和骨髓中四聚体⁺cd4⁺t细胞的百分比。图15d显示了与新近患糖尿病(n＝4-7)和非糖尿病的年龄匹配的未治疗对照(n＝5-7)相比，在50周龄以前恢复至正常血糖(对于每个淋巴器官，n＝5-7只小鼠)的igrp5-145/ia^g7–np治疗的小鼠的血液、脾、pln、mln和骨髓中四聚体⁺cd4⁺t细胞的百分比。图15e显示了与未治疗的nod小鼠相比，针对来自igrp4–22/ia^g7–np-和igrp128–145/ia^g7–np治疗的小鼠的脾cd4⁺t细胞的代表性igrp4–22/ia^g7、igrp128–145/ia^g7和gpi282–292/ia^g7四聚体染色图。图15f显示了用非同源pmhcii四聚体染色的igrp4–22/ia^g7–np-或igrp128–145/ia^g7–np治愈的、hel14–22/ia^g7–np治疗的以及年龄匹配的非糖尿病的未治疗小鼠的血液cd4⁺t细胞的百分比(每组n＝3–7)。图15g显示了用igrp128–145/ia^g7–np(顶部)和igrp4-22/ia^g7–np(底部)治疗的小鼠的四聚体⁺cd4⁺t细胞分别特异性地响应于igrp4–22或igrp128–145肽脉冲dc的刺激而增殖并产生il-10(各自n＝3只小鼠)，cpm，每分钟计数。图15h显示了在高血糖症发作或用igrp4–22/ia^g7–np或igrp4–22肽或igrp4–22肽包被的纳米颗粒治疗时，在nod小鼠的血液、脾、pln、mln和骨髓中igrp4–22/ia^g7四聚体⁺cd4⁺t细胞的百分比(对于每个器官，n＝5–9只小鼠)。p值经由mann–whitneyu检验来计算。数据为平均值±s.e.m.。

图16a-图16f显示eae相关的pmhcii–np扩增分泌il-10的同源tr1样cd4⁺t细胞并改善eae的已确认的临床和病理体征。图16a和图16b显示了用pmog35–55免疫并从免疫后第14天(图16a)或第21天(图16b)开始用pmog38–49/ia^b–np或未包被的纳米颗粒治疗的c57bl/6小鼠的平均体重变化。图16c显示在来自图16a和图16b的小鼠的周围淋巴结、骨髓和中枢神经系统(cns)中pmog38–49/iab四聚体⁺cd4⁺t细胞的百分比。图16d显示pmog38–49/ia^b–np治疗的小鼠的四聚体⁺cd4⁺t细胞响应于pmog38–49肽脉冲dc的刺激而增殖并产生il-10，并且在较小程度上产生ifnγ。图16e(左侧和中间)显示了来自图16b的未治疗和治疗的小鼠的代表性勒克司坚牢蓝(luxolfastblue，lfb)/h&e小脑染色图像，其显示存在炎性病灶和脱髓鞘区域(红色箭头)。右侧，每一段的炎性病灶的平均数。数据对应于4只未治疗的和5只治疗的小鼠。图16f显示来自图16b中的小鼠的代表性lfb/h&e染色的脊髓段。数据采用mann–whitneyu检验进行比较。数据为平均值±s.e.m.。

图17a-17i显示在hla-dr4-ie-转基因c57bl/6iab^null或c57bl/10.m小鼠中，eae-或cia-相关的pmhcii–np扩增同源tr1样cd4⁺t细胞并改善eae或cia的临床和病理体征。图17a显示了在小鼠达到1.5的评分当天开始(以使各组的疾病活动性同步)，用hplp175–192或hmog97–108免疫并用hplp175–192/dr4-ie或hmog97–108/dr4-ie–np或未包被的纳米颗粒治疗的hla-dr4-ie-转基因c57bl/6iab^null小鼠的平均eae评分的变化(每组n＝3–4)。图17b显示了来自图17a的小鼠的脾、血液、子宫颈和腹股沟ln和cns中的四聚体⁺cd4⁺t细胞的百分比。数据对应于4只pmhc–np治疗的和6只对照-np治疗的小鼠。图17c显示了当小鼠达到1.5的评分时，用hplp175–192或hmog97–108免疫并用hplp175–192/dr4-ie–np、hmog97–108/dr4-ie–np或未包被的纳米颗粒治疗的来自图17a的hla-dr4–ie-转基因c57bl/6iab^null小鼠的平均体重的变化。图17d显示来自图17a的hla-dr4-ie-转基因c57bl/6iab^null小鼠的小脑的lfb/h&e染色，其表明与对照相比，用hplp175–192/dr4-ie或hmog97–108/dr4-ie–np治疗的小鼠中炎症和脱髓鞘的减少。图17e显示了在随访结束时(10个剂量，5周)，图10a中小鼠(用牛胶原蛋白免疫的c57bl/10.mhla-dr4-ie小鼠)的淋巴结和骨髓中四聚体⁺cd4⁺t细胞的百分比。图17f显示了来自图10f的用hplp175–192免疫的hla-dr4-ie-转基因c57bl/6iab^null小鼠的平均体重的变化。图17g显示了与未治疗或用未包被的np或mp(以相同的np/mp数)治疗的小鼠相比，用hplp175–192免疫并用hplp175–192/dr4-ie–np、hmog97–108/dr4-ie–np、hmog97–108肽静脉内注射或皮下注射(8μg/剂量)、hmog97–108/dr4-ie单体(25μg/剂量)、hmog97–108肽-np(使用经由pmhc-np递送的摩尔当量的肽；0.68μg/剂量)或hmog97–108肽-mp(15μg肽/剂量)治疗的hla-dr4-ie-转基因c57bl/6iab^null小鼠的小脑的代表性lfb/h&e染色。图17h显示了与未治疗或用未包被的np或mp(以相同的np/mp数)治疗的小鼠相比，响应于用hmog97–108肽静脉内注射或皮下注射(8μg/剂量16)、hmog97–108/dr4-ie单体(25μg/剂量)、hmog97–108肽–np(0.68μg肽/剂量)、hmog97–108肽–mp(15μg肽/剂量(getts,d.r.等人(2012)naturebiotechnol.30:1217-1224))或单剂量的hmog97–108肽–mp(15μg肽(getts,d.r.等人(2012)naturebiotechnol.30:1217-1224))的治疗，用hplp175–192免疫的hla-dr4-ie-转基因c57bl/6iab^null小鼠的平均eae评分和体重的变化(每组n＝4–5)。由于疾病的快速进展，用一个剂量治疗的小鼠的组必须在2.5周之后终止。图17i显示了来自图17h的小鼠的脾、血液、子宫颈和腹股沟ln和骨髓中四聚体⁺cd4⁺t细胞的百分比(每组n＝3–9)。数据采用mann–whitneyu检验或双因素anova来比较。数据为平均值±s.e.m.。

图18a-图18y显示pmhc–np引起的疾病逆转由tr1细胞因子il-21、il-10和tgf-β驱动，并且涉及若干下游细胞靶标。图18a显示了在用igrp4–22/ia^g7–np和阻断抗-il-10、抗-ifnγ或抗-tgf-βmab或抗-hrpn大鼠-igg治疗的糖尿病nod小鼠中血糖水平(>11mm)的变化(每组n＝4–6)。图18b和18c显示了在随访结束时来自图11a的小鼠的脾中四聚体⁺cd4⁺t细胞的百分比(图18b)和pln与mln中cfse-标记的8.3-cd8⁺t细胞的增殖(图18c)。图18d显示了响应于2.5mi/ia^g7–np，高血糖nod、nodil10^-/-和nodifng^-/-小鼠中血糖的变化(每组n＝3-6)。图18e和18f显示了在随访结束时来自图18d的小鼠的脾中四聚体⁺cd4⁺t细胞的百分比(图18e)和pln与mln中cfse-标记的8.3-cd8⁺t细胞的增殖(图18f)。图18g显示了用pmhc–np和大鼠-igg或阻断mab治疗的小鼠的eae评分(每组n＝4)。图18h显示了来自图18g的hla-dr4-ie-转基因c57bl/6iab^null小鼠的小脑的lfb/h&e染色，其突出显示了在用hplp175–192/dr4-ie–np和大鼠-igg与阻断抗-il-10、抗-tgf-β或抗-il-21rmab治疗的小鼠中炎症和脱髓鞘的差异。图18i显示了来自图18g的hla-dr4-ie-转基因c57bl/6iab^null小鼠的平均体重的变化。图18j，来自图18g的小鼠的脾、血液和腹股沟ln中四聚体⁺cd4⁺t细胞的百分比(每组n＝4)。图18k和18l显示了在小鼠达到1.5的评分当天开始(以使各组的疾病活动性同步)，用pmog35–55免疫并用pmog38–49/ia^b–np或未包被的纳米颗粒治疗的c57bl/6il27r^-/-小鼠的平均eae评分(图18k)和体重(图18l)的变化(分别地，n＝7和4)。图18m显示了来自图18k的小鼠的小脑的代表性iba1和lfb/h&e染色和相应的相对排名评分(分别地，n＝3和4)。图18n显示了来自图18k的小鼠的脾、血液和腹股沟ln和骨髓中四聚体⁺cd4⁺t细胞的百分比(左侧)，以及四聚体⁺与四聚体^-细胞的代表性cd49b和lag-3染色图(右侧)。图18o显示了2.5mi/ia^g7–np-或hel14-22/ia^g7–np治疗的小鼠的pln或mln中b220⁺细胞的百分比(每组n＝4)。图18p显示了经过一系列总pmhc剂量(0.75–25μg的总pmhc)，用2.5mi/ia^g7-np治疗的小鼠的附加群组中pln和脾b220⁺细胞与2.5mi/ia^g7四聚体⁺cd4⁺t细胞的百分比之间的关系(n＝24–28)。图18q(左侧)显示了针对从未治疗的nod小鼠或用2.5mi/ia^g7–np治疗的小鼠的pln或mln中纯化的2.5mi或gpi282–292肽脉冲b细胞，cfse-标记的bdc2.5cd4⁺t细胞的体外增殖(每组n＝5–6)。右侧，代表性cfse稀释曲线。简而言之，曲线显示了在从未治疗的或2.5mi/ia^g7–np治疗的nod小鼠的pln或mln中纯化的2.5mi或gpi282–292肽脉冲b细胞的存在下培养的cfse-标记的bdc2.5cd4⁺t细胞中cfse稀释的程度。图18r，来自2.5mi/ia^g7–np治疗的小鼠的pln衍生的b细胞(10⁵)在体外响应于lps(1μgml^-1)分泌il-10。数据对应于6只pmhc治疗的和5只未治疗的nod小鼠。图18s和18t，在转移(以1:1的比例)至未治疗的或2.5mi/ia^g7-np治疗的nod小鼠之后7天，与gpi282–292肽脉冲(cfse标记的)b细胞(图18s)或dc(图18t)相比，2.5mi(pkh26标记的)的百分比的变化。柱状图显示了对于每种细胞类型和条件的平均比例(对于每一细胞类型和条件，n＝3–4只小鼠)。图18u显示了在如图11b所示加上阻断ab进行治疗的小鼠中cd5⁺cd1d^hiegfp⁺b220⁺细胞的百分比(各自n＝4)。图18v显示与来自未治疗的对照的lps刺激的plnb细胞相比，来自用10个剂量的2.5mi/ia^g7–np治疗的nod小鼠的lps刺激的plnb细胞在体外抑制由2.5mi肽脉冲dc引起的cfse标记的bdc2.5cd4⁺t细胞的增殖。图18x显示在3个剂量的250μg抗-cd20mab之前和之后，血液中cd19⁺cd3^-细胞的百分比(n＝4)。图18y，在来自nodthy1^a宿主中bdc2.5-tcr-转基因nodfoxp3-egfp供体的记忆egfp^-bdc2.5cd4⁺t细胞中，2.5mi/ia^g7–np诱导的il-21和il-10mrna的上调(n＝5)。p值经由pearson相关性检验、mann–whitneyu检验或双因素anova来计算。数据为平均值±s.e.m.。

图19显示了细胞因子阻断或遗传缺陷对通过2.5mi/ia^g7–np扩增的同源cd4⁺t细胞的细胞因子概貌(profile)的影响。各自n＝3只小鼠。数据为平均值±s.e.m.。

图20a和20b显示人t1d相关的pmhcii–np扩增移植人pbmc的nsg宿主中的同源tr1样cd4⁺t细胞，而游离肽或肽包被的纳米颗粒或微粒则不能。图20a显示了来自在表2中被鉴定为响应者的小鼠的样品的facs谱(hcd4⁺t细胞中的同源与对照四聚体染色)。关于四聚体⁺t细胞的数值数据呈现在表2中。图20b显示了用igrp13-25/dr3–np治疗的移植人健康对照pbmc的nsg宿主(左侧)，或用igrp13–25肽、igrp13–25肽包被的纳米颗粒、igrp13–25肽包被的微粒治疗的或未治疗的移植人t1dpbmc的nsg宿主(右侧)的代表性facs谱(脾hcd4⁺t细胞中染色的同源与对照四聚体)。详情参见图13a-图13i的图例。

图21显示了基于pmhcii的纳米药物的建议操作模式的示意图。pmhcii包被的np(pmhc-np，缺乏共刺激分子)促进疾病引发的(经历抗原的)产生ifnγ的cd4⁺th1-细胞分化成记忆tr1样cd4⁺t细胞，随后是系统扩增。该分化过程(但不是后续扩增)需要ifnγ和il-10两者，而il-27是不必要的。pmhc-np扩增的(单特异性)自身反应性tr1样cd4⁺t细胞随后通过分泌作用于局部apc(b细胞，cd11c⁺和cd11b⁺细胞)的il-21、il-10和tgf-β来抑制其他自身反应性t细胞应答，所述apc已经捕获了同源自身抗原，并因此将同源pmhcii复合物呈递给扩增的tr1样细胞。这一相互作用抑制靶向apc的促炎功能，并且阻断其将其他pmhci类和ii类复合物呈递给非pmhc–np同源自身反应性t细胞特异性的能力(注意，局部apc同时摄取释放到环境中的同源和非同源自身抗原)。抗原呈递的抑制需要il-10和tgf，而不需要ifnγ或il-21。此外，pmhc–np扩增的tr1cd4⁺t细胞与同源自身抗原特异性的自身反应性b细胞之间的同源相互作用(能够在表面上展现该同源pmhcii复合物)促进它们以il-21依赖性方式分化为breg细胞，这很可能通过分泌il-10而有助于促进局部免疫抑制。抗原呈递的抑制选择性地靶向展现出同源pmhc的apc，但是当捕获同源自身抗原的局部apc也同时捕获其他自身抗原时，通过pmhc–np扩增的自身调节cd4⁺t细胞减弱其他自身抗原pmhc复合物向广泛的自身反应性t细胞的呈递。这一抑制是疾病特异性的和自限制性的。

图22a-图22c显示了作为pmhc密度和剂量的函数，pmhci类和ii类包被的pf-mnp在体内的自身调节t细胞扩增性质。(图22a)在用10个剂量(在5周内给予)的展现出不同pmhc化合价的2.5mi/ia^g7-pf-m制剂治疗的10周龄nod小鼠的脾cd4+t细胞中2.5mi/ia^g7四聚体+细胞的百分比。x轴的值对应于在每个剂量中给予的pmhc的量(ug)。数据对应于在减去用阴性对照四聚体(hel14-22/ia^g7)染色之后的四聚体+细胞的净值。(图22b)在5周内给予的10个剂量的2.5mi/ia^g7-pf-m与2.5mi/ia^g7-sfp-znp的tr1cd4+treg扩增效力。数据对应于携带22-45pmhcs/np的制剂。(图22c)作为pmhc密度的函数，在体内通过不同2.5mi/ia^g7-np制剂扩增的2.5mi/ia^g7四聚体阳性细胞上的tr1细胞标志物cd49b的平均荧光强度的增加百分比。当cd49b上调水平作为pmhc剂量的函数作图时，这种关系不存在。

表格说明

表1.官能化的peg连接体。

表2.密码子。

表3a和表3b.pmhc-np扩增的cd4+t细胞的转录谱。(a)从10-15周龄起用10个剂量的2.5mi/ia^g7-np治疗的nod小鼠中分选的2.5mi/ia^g7四聚体+与四聚体–cd4+t细胞中，针对一组384个免疫标志物的qrt-pcr(分别地，n＝3和4个样品)。在rna收集前，在体外用抗-cd3/抗-cd28mab包被的dynabead刺激这些细胞。组总结了最重要的差异。(b)针对8个tr1相关标志物的qrt-pcr，这些标志物包括(a)中使用的引物组中没有表示出的标志物。数据对应于四种附加的2.5mi/ia^g7四聚体+和七种四聚体-cd4+t细胞样品。

表4a、4b和4c.人t1d供体以及移植pbmc的nsg宿主中pmhc-np疗法的结果。

表5是用于本公开内容的癌症相关抗原的示例性列表。

表6是用于本公开内容的糖尿病相关抗原的示例性列表。

表7是用于本公开内容的多发性硬化相关抗原的示例性列表。

表8是用于本公开内容的乳糜泻相关抗原的示例性列表。

表9是用于本公开内容的原发性胆汁性肝硬化相关抗原的示例性列表。

表10是用于本公开内容的落叶型天疱疮相关抗原和寻常型天疱疮相关抗原的示例性列表。

表11是用于本公开内容的视神经脊髓炎谱系障碍相关抗原的示例性列表。

表12是用于本公开内容的变应性哮喘相关抗原的示例性列表。

表13是用于本公开内容的炎性肠病相关抗原的示例性列表。

表14是用于本公开内容的系统性红斑狼疮相关抗原的示例性列表。

表15是用于本公开内容的动脉粥样硬化相关抗原的示例性列表。

表16是用于本公开内容的慢性阻塞性肺疾病相关抗原和气肿相关抗原的示例性列表。

表17是用于本公开内容的银屑病相关抗原的示例性列表。

表18是用于本公开内容的自身免疫性肝炎相关抗原的示例性列表。

表19是用于本公开内容的葡萄膜炎相关抗原的示例性列表。

表20是用于本公开内容的舍格伦综合征相关抗原的示例性列表。

表21是用于本公开内容的硬皮病相关抗原的示例性列表。

表22是用于本公开内容的抗磷脂综合征相关抗原的示例性列表。

表23是用于本公开内容的anca相关性血管炎相关抗原的示例性列表。

表24是用于本公开内容的僵人综合征相关抗原的示例性列表。

详述

应当理解，本公开内容不限于所述的特定实施方案，因此当然可以有所变化。还应当理解，本文所用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，并非旨在限制，因为本公开内容的范围仅由所附权利要求来限制。

必须指出，如本文所用且在所附权利要求中，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数指代，除非上下文另有明确规定。因此，例如，提及“一种赋形剂”包括多种赋形剂。术语“至少一个”意思是一个或多个。

在整个本申请中，术语“约”用来表示，一个值包括用来测定该值的装置或方法的标准偏差或标准误差。当术语“约”用在数字表示例如温度、时间、量和浓度(包括范围)之前时表示近似值，它可变化(+)或(-)10％、5％或1％。

定义

除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本公开内容所属领域的普通技术人员通常理解相同的含义。如本文所用，以下术语具有以下含义。

如本文所用，术语“包含”旨在意指组合物和方法包括所述元素，但不排除其他元素。“基本上由...组成”当用来定义组合物和方法时，应意指排除对于所述目的的组合有任何重要影响的其他元素。因此，基本上由本文所定义的元素组成的组合物将不排除不实质影响要求保护的本公开内容的基本和新型特性的其他材料或步骤，如用于治疗或预防多发性硬化的组合物。“由...组成”应意指排除超过微量元素的其他成分和实质性方法步骤。由这些过渡术语中的每一种定义的实施方案在本公开内容的范围内。

当在权利要求和/或说明书中使用时，术语“抑制”、“减少”或“预防”或这些术语的任何变化，包括任何可测量的减少或完全抑制以获得所需结果。

“生物相容的”意指递送系统的组分将不会引起组织损伤或对人生物系统的损伤。为了赋予生物相容性，将优先使用在人类中具有安全使用历史或具有gras(通常被认为是安全的)状态的聚合物和赋形剂。生物相容性意指组合物中使用的成分和赋形剂最终将被身体“生物吸收”或清除，而不会对身体产生不利影响。对于生物相容的且被认为无毒的组合物，它必须不引起对细胞的毒性。类似地，术语“生物可吸收的”是指由这样的材料制成的纳米颗粒，该材料在一段时间内经历体内生物吸收，使得该材料在患者中的长期积累得到避免。在某个实施方案中，生物相容纳米颗粒在少于2年、优选少于1年、甚至更优选少于6个月的时间段内被生物吸收。生物吸收速率与颗粒的大小、所用的材料以及熟练技术人员公认的其他因素有关。生物可吸收、生物相容的材料的混合物可用来形成本公开内容中使用的纳米颗粒。在一个实施方案中，氧化铁和生物相容的、生物可吸收的聚合物可以组合。例如，氧化铁和pgla可以组合以形成纳米颗粒。

如本文所用，术语“树状聚体”是指重复分支的分子，其也称为树枝醇或级联分子。关于纳米颗粒合成，术语“树状聚体核心”是指使用树状聚体作为纳米颗粒的中心组分，使得其构成纳米颗粒结构的基础。在一些实施方案中，本文公开的纳米颗粒核心包含树状聚体。

如本文所用，术语“聚合物胶束”是指包含疏水核心和可由嵌段共聚物制备的亲水壳的两亲性结构。关于纳米颗粒合成，术语“聚合物胶束核心”是指使用聚合物胶束作为纳米颗粒的中心组分，使得其构成纳米颗粒结构的基础。在一些实施方案中，本文公开的纳米颗粒核心包含聚合物胶束。

抗原-mhc纳米颗粒复合物(“np-复合物”或“复合物”或pmhc-np或“纳米颗粒复合物”)是指肽、碳水化合物、脂质或其他抗原区段、片段或抗原分子或蛋白质(即自体肽或自身抗原)的表位呈现在表面如纳米颗粒核心上。

“纳米颗粒核心”是包含或不包含层或涂层的纳米颗粒基底。纳米颗粒复合物包含核心，至少抗原-mhc复合物与该核心偶联。

“密度”当指每个纳米颗粒的pmhc时，其被计算为具有或不具有外层的纳米颗粒核心的表面积，其还可包括连接体。表面积是所用构建体的总可用表面积。在一方面，当使用peg连接体时，它可以使纳米颗粒核心的总直径增加约20nm²的纳米颗粒，这相应地增加该纳米颗粒的总可用表面积的表面积。换言之，它是在不添加pmhc、共刺激分子和/或细胞因子中的一个或多个的情况下纳米颗粒的最终表面积。

如本文所用，“抗原”是指可诱导受试者中的免疫应答或免疫细胞、优选t或b细胞的扩增的分子的全部、部分、片段或区段。

术语“烷基”是指具有1至10个碳原子(即，c1-c10烷基)或1至6个碳原子(即，c1-c6烷基)或1至4个碳原子的单价饱和脂肪族烃基。该术语包括，例如，直链和支链烃基，如甲基(ch3-)、乙基(ch3ch2-)、正丙基(ch3ch2ch2-)、异丙基((ch3)2ch-)、正丁基(ch3ch2ch2ch2-)、异丁基((ch3)2chch2-)、仲丁基((ch3)(ch3ch2)ch-)、叔丁基((ch3)3c-)、正戊基(ch3ch2ch2ch2ch2-)和新戊基((ch3)3cch2-)。

术语“烷氧基”是指–o-烷基。

“模拟物”是给定配体或肽的类似物，其中该类似物基本上类似于该配体。“基本上类似”意指该类似物具有类似于该配体的结合曲线，不同之处在于该模拟物具有总共占该配体分子量的小于约50％、小于约40％、小于约30％、小于约20％、小于约10％或小于约5％的一个或多个官能团或修饰。

“免疫细胞”包括，例如，衍生自在骨髓中产生的造血干细胞(hsc)的白血细胞(白细胞)、淋巴细胞(t细胞、b细胞、自然杀伤(nk)细胞)和髓系来源的细胞(嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突细胞)。如本文所用，术语“b细胞”是指适应性免疫系统的体液免疫中的一种淋巴细胞类型。b细胞主要用于生成抗体，用作抗原呈递细胞，释放细胞因子，并在通过抗原相互作用激活之后形成记忆b细胞。b细胞通过在细胞表面上存在b细胞受体而区别于其他淋巴细胞，如t细胞。如本文所用，术语“t细胞”是指一种在胸腺中成熟的淋巴细胞类型。t细胞在细胞介导的免疫中发挥重要作用，并且通过在细胞表面上存在t细胞受体而区别于其他淋巴细胞，如b细胞。t细胞可以从商购可得的来源中分离或得到。“t细胞”包括表达cd3的所有类型的免疫细胞，包括t辅助细胞(cd4+细胞)、细胞毒性t细胞(cd8+细胞)、自然杀伤t细胞、t调节细胞(treg)和γ-δt细胞。“细胞毒性细胞”包括cd8+t细胞、自然杀伤(nk)细胞和嗜中性粒细胞，所述细胞能够介导细胞毒性反应。

如本文所用，术语“效应t细胞”是指可特异性结合抗原并介导免疫应答(效应子功能)而不需要进一步分化的t细胞。效应t细胞的实例包括ctl、th1细胞、th2细胞、效应记忆细胞和t辅助细胞。与效应t细胞相反，幼稚t细胞尚未遇见其特异性抗原：mhc复合物，也未通过增殖和分化为效应t细胞来对它产生响应。效应t细胞可以是静息的(在细胞周期的g0期)或激活的(正在增殖)。

术语“抗致病自身反应性t细胞”是指具有抗致病性质的t细胞(即，抵抗自身免疫疾病如ms、ms相关的疾病或病症或前驱糖尿病的t细胞)。这些t细胞可包括抗炎t细胞、中心记忆t细胞、效应记忆t细胞、记忆t细胞、低亲合力t细胞、t辅助细胞、自身调节t细胞、细胞毒性t细胞、自然杀伤t细胞、调节t细胞、tr1细胞、抑制性t细胞、cd4+t细胞、cd8+t细胞等。

术语“抗炎t细胞”是指促进抗炎反应的t细胞。t细胞的抗炎功能可通过产生和/或分泌抗炎蛋白质、细胞因子、趋化因子等来实现。抗炎蛋白质还旨在包括抑制免疫应答的抗增殖信号。抗炎蛋白质包括il-4、il-10、il-13、il-21、il-23、il-27、ifn-α、tgf-β、il-1ra、g-csf以及tnf和il-6的可溶性受体。

术语“分化的”是指第一种类型的细胞被诱导成为第二种类型的细胞。在一些实施方案中，同源t细胞被分化为调节tr1细胞。在一些实施方案中，活化t细胞被分化为tr1细胞。在一些实施方案中，记忆t细胞被分化为tr1细胞。在一些实施方案中，b细胞被分化为调节b细胞。

如本文所用，“孔-突起接合(knob-in-hole)”是指需要在第一多肽的界面处的凸起(或“突起”)和在第二多肽的界面处的相应空腔(或“孔”)的多肽架构，使得该凸起可以置于该空腔中以促进异多聚体形成。通过用较大的侧链(例如，苯丙氨酸或酪氨酸)代替第一多肽的界面处的小氨基酸侧链来构建凸起。通过用较小的氨基酸侧链(例如，丙氨酸或苏氨酸)代替大氨基酸侧链，在第二多肽的界面中创建与该凸起相同或类似大小的空腔。可由本领域技术人员使用常规方法通过合成手段来制备凸起和空腔，如通过改变编码多肽的氨基酸或通过肽合成。在一些实施方案中，第一多肽的界面位于第一多肽中的fc结构域上；且第二多肽的界面位于第二多肽的fc结构域上。孔-突起接合异多聚体及其制备方法和用途公开在美国专利号5,731,168；5,807,706；5,821,333；7,642,228；7,695,936；8,216,805；和8,679,785中，其中所有专利均通过引用它们的全文并入本文。

如本文所用，“mhc-α-fc/mhc-β-fc”是指包含第一多肽和第二多肽的异二聚体，其中第一多肽包含mhcii类α链和抗体fc结构域；第二多肽包含mhcii类β链和抗体fc结构域。孔-突起接合mhc-α-fc/mhc-β-fc进一步要求每个多肽的fc结构域通过将一个fc结构域上的突起互补置于另一个fc结构域上的相应空腔内而相互接合。

术语“分离的”意指与细胞组分或其他组分分开，这些组分在正常情况下在自然界中与多核苷酸、肽、多肽、蛋白质、抗体或其片段相关联。例如，关于多核苷酸，分离的多核苷酸是与在染色体中通常关联的5′和3′序列分离的多核苷酸。对于本领域技术人员显而易见的是，非天然存在的多核苷酸、肽、多肽、蛋白质、抗体或其片段不需要“分离”来将它与其天然存在的对应物区分开。此外，“浓缩的”、“分离的”或“稀释的”多核苷酸、肽、多肽、蛋白质、抗体或其片段与其天然存在的对应物的区别可在于每体积的分子浓度或分子数大于“浓缩的”或小于“分离的”其天然存在的对应物的分子浓度或分子数。在一级序列上或例如由于其糖基化模式而不同于天然存在的对应物的多核苷酸、肽、多肽、蛋白质、抗体或其片段不需要以其分离形式存在，因为它通过其一级序列或备选地通过另一种特征如其糖基化模式而可区别于其天然存在的对应物。如果将哺乳动物细胞如t细胞从生物体中它被发现的解剖部位移取，则该细胞被分离。

“自身反应性t细胞”是识别“自身抗原”的t细胞，该自身抗原是含有该t细胞的相同个体产生和含有的分子。

“致病t细胞”是对含有t细胞的受试者有害的t细胞。而非致病t细胞对受试者基本上无害，并且抗致病t细胞减少、改善、抑制或消除致病t细胞的伤害。

如本文所用，术语调节b细胞或b调节细胞(“b-reg”)是指那些引起抗炎作用的细胞，该抗炎作用的特征在于cd1d、cd5的表达和il-10的分泌。b-reg还根据tim-1的表达来鉴定，并且可通过tim-1连接来诱导以促进耐受性。成为b-reg的能力被显示为由诸如toll样受体、cd40配体等许多刺激因子来驱动。然而，b-reg的全面表征正在进行中。b-reg还表达高水平的cd25、cd86和tgf-β。b细胞的该亚组能够抑制th1增殖，因此有助于维持自身耐受性。b-reg功能的增强应成为许多免疫调节药物的目的，以有助于更好地控制自身免疫疾病。参见，例如：ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23707422，于2013年10月31日最后一次访问。

1型t调节(tr1)细胞是具有调节性质并且能够在体外和体内抑制抗原特异性免疫应答的cd4+t细胞的亚组。这些tr1细胞通过它们产生细胞因子的独特概貌来定义，并产生高水平的il-10和tgf-β，而非il-4或il-2。这些细胞产生的il-10和tgf-β介导体外原代幼稚t细胞的抑制。还有证据表明tr细胞存在于体内，并且已记录了在接受同种异体干细胞移植的严重联合免疫缺陷患者中存在高水平的产生il-10的cd4(+)t细胞。tr1细胞参与外周耐受性的调节，并且它们可潜在地用作细胞疗法以调节体内免疫应答。参见，例如：ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10887343，于2013年10月31日最后一次访问。

tr1细胞通过其产生高水平的il-10和tgf-β的能力来定义。对多种抗原具有特异性的tr1细胞在体内产生，但也可以在il-10的存在下在体外由幼稚cd4+t细胞分化而成。tr1细胞具有低增殖能力，这可被il-15克服。tr1细胞经由il-10和tgf-β的产生抑制幼稚和记忆t辅助细胞1型或2型应答。tr1细胞在分子水平上的进一步表征将定义其作用机制并阐明它们与tr细胞的其他亚组的关系。可以预见使用tr1细胞来鉴定用于开发新治疗剂的新型靶标，以及作为细胞疗法来调节外周耐受性。参见，例如，ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11722624，于2013年10月31日最后一次访问。

“有效量”是足以实现预期目的的量，这种目的的非限制性实例包括：启动免疫应答、调节免疫应答、抑制炎症应答和调节t细胞活性或t细胞群体。在一方面，有效量是用于实现所述治疗目的的量，例如，治疗有效量。如本文详细描述的，有效量或剂量取决于目的和组合物，并且可根据本公开内容来确定。

治疗组合物的有效量根据预期目标来确定。术语“单位剂量”或“剂量”是指适合于在受试者中使用的物理上离散的单位，每个单位含有预定量的组合物，该预定量经计算以产生与其施用，即，适当的途径和方案有关的上述所需应答。根据治疗次数和单位剂量，待施用的量取决于所需的结果和/或保护。该组合物的精确的量还取决于医生的判断并且是每个个体所特有的。影响剂量的因素包括受试者的身体和临床状态、施用途径、预期治疗目标(减轻症状与治愈)以及特定组合物的效力、稳定性和毒性。一经配制，溶液将以与剂量制剂相容的方式且以治疗上或预防上有效的量来施用。所述制剂容易以多种剂型来施用，如上述可注射溶液的类型。

如本文使用的术语“mhc多聚体”意指两个或更多个，通常四个，直到约五十个或更多个mhc单体的复合物。

如本文所用，“多聚体复合物”是指靶细胞群体与一个或多个pmhc复合物之间的复合物，其中该pmhc复合物的mhc蛋白质包含mhc蛋白质的多聚体形式。在一些实施方案中，mhc蛋白质的多聚体形式包括二聚体或三聚体。

如本文所用，短语“免疫应答”或其等同短语“免疫学应答”是指细胞介导的应答(由抗原特异性t细胞或其分泌产物介导)的发展。细胞免疫应答由与i类或ii类mhc分子缔合的多肽表位的呈递而引发，以治疗或预防病毒感染，扩增抗原特异性breg细胞、tc1、cd4⁺t辅助细胞和/或cd8+细胞毒性t细胞和/或疾病生成的自身调节t细胞和b细胞“记忆”细胞。该应答还可包括其他组分的激活。在一些方面，术语“免疫应答”可用来包括免疫细胞的调节网络的形成。因此，术语“调节网络形成”可指引发的免疫应答，使得免疫细胞，优选t细胞，更优选t调节细胞，触发其他免疫细胞的进一步的分化，例如但不限于b细胞或抗原呈递细胞，其非限制性的实例包括树突细胞、单核细胞和巨噬细胞。在某些实施方案中，调节网络形成涉及正在分化为调节b细胞的b细胞；在某些实施方案中，调节网络形成涉及致耐受性的抗原呈递细胞的形成。

“纳米球”、“np”或“纳米颗粒”在本文中意指小的离散颗粒，其根据情况以单数或复数形式施用于受试者、细胞样本或组织样本。在某些实施方案中，如本文所用的术语“纳米颗粒”包括纳米颗粒核心周围的任何层。在某些实施方案中，纳米颗粒的形状基本上呈球形。在某些实施方案中，纳米颗粒不是脂质体或病毒颗粒。在进一步的实施方案中，纳米颗粒包含任何合适的材料，例如，固体、固体核心、金属、树状聚体、聚合物胶束、金属氧化物或蛋白质或其片段或组合。如本文所用的术语“基本上呈球形”意指颗粒的形状不偏离球形超过约10％。本公开内容的各种已知的抗原或肽复合物可应用于颗粒。本公开内容的纳米颗粒的大小范围为约1nm至约1μm，优选约1nm至约500nm，或备选地约1nm至约100nm，或备选地约1nm至约50nm，或备选地约5nm至约100nm，并且在一些方面当意指多个纳米颗粒时，是指多个纳米颗粒的平均或中值直径。较小的纳米大小的颗粒可通过例如分级分离过程获得，从而使较大颗粒沉降在水溶液中。该溶液的上部随后通过本领域技术人员已知的方法回收。该上部富含较小大小的颗粒。重复该过程直到产生所需的平均大小。术语“纳米结构”通常用来描述小于约1μm的结构。

如本文所用的术语“炎症应答”和“炎症”表示个体的血管组织对有害刺激如病原体、受损细胞或刺激物的复杂生物反应，并且包括细胞因子的分泌，并且更具体地说是促炎性细胞因子，即主要由激活的免疫细胞产生并参与炎症反应放大的细胞因子。示例性促炎性细胞因子包括但不限于il-1、il-6、il-10、tnf-α、il-17、il21、il23、il27和tgf-β。示例性炎症包括急性炎症和慢性炎症。急性炎症表示以由血浆和白细胞浸润组织而引起的典型炎症体征(肿胀、发红、疼痛、发热或功能缺失)为特征的短期过程。急性炎症通常在出现有害刺激时发生，而一旦刺激被移除、分解或被瘢痕形成(纤维化)隔开，急性炎症就会停止。慢性炎症表示以并发的活动性炎症、组织破坏和修复尝试为特征的状况。慢性炎症不以以上列出的急性炎症的典型体征为特征。相反，慢性发炎组织的特征在于单核免疫细胞(单核细胞、巨噬细胞、淋巴细胞和浆细胞)的浸润、组织破坏和愈合尝试，其包括血管发生和纤维化。通过影响、特别是抑制形成与个体炎症相关的复杂生物反应的任何一种事件，可以在本公开内容的意义上抑制炎症。

如本文所用，“cd49b”或“分化簇49b”是一种蛋白质，该蛋白质是整联蛋白α亚基并且组成α2β1整联蛋白双链体的大约一半。在人类中，cd49b由cd49b基因编码。cd49b可在各种各样的细胞类型中发现，包括t细胞、自然杀伤细胞、成纤维细胞和血小板。在一些实施方案中，t细胞包括tr1细胞。在一些实施方案中，cd49b的表达表征tr1细胞。表达cd49b的细胞的检测可使用常规技术如使用抗-cd49b抗体来鉴定，这些技术从例如供应商如biolegend商购可得。

如本文所用，“lag3”或“淋巴细胞激活基因3”或“cd223”或“分化簇223”是一种由lag3基因编码且属于免疫球蛋白(ig)超家族的蛋白质。lag3是在包括t细胞、自然杀伤细胞、b细胞和浆细胞样树突细胞在内的多种细胞类型中表达的细胞表面蛋白质。在一些实施方案中，t细胞包括tr1细胞。在一些实施方案中，lag3的表达表征tr1细胞。表达lag3的细胞的检测可使用常规技术如使用抗-lag3抗体来鉴定，这些技术从例如供应商如biolegend商购可得。

如本文所用，术语“疾病相关的”抗原意指被选择用来治疗所选择的疾病的抗原或其片段，并且参与疾病过程。例如，糖尿病相关抗原是一种抗原或其片段，当呈递时产生用来治疗糖尿病的免疫应答；因此，选择产生这种作用的糖尿病相关抗原来治疗糖尿病。选择多发性硬化(ms)相关抗原来治疗ms。不选择糖尿病相关抗原来治疗ms。类似地，自身免疫有关的抗原是一种与自身免疫疾病有关的抗原，且不被选择用于治疗除自身免疫以外的病症或疾病，例如癌症。本文公开了非限制性的示例性疾病相关抗原，并且另外，可根据文献中记录的技术、机制以及方法针对特定的疾病确定这样的抗原。

“自身免疫疾病或病症”包括由个体的自身组织或器官引起并针对该自身组织或器官的疾病或病症，或其表现，或由此产生的病况。在一个实施方案中，它是指由对正常身体组织和抗原具有反应性的t细胞引起、产生或由其加剧的病况。自身免疫疾病或病症的实例包括但不限于关节炎(类风湿性关节炎如急性关节炎、慢性类风湿性关节炎、痛风或痛风性关节炎、急性痛风性关节炎、急性免疫性关节炎、慢性炎性关节炎、退行性关节炎、ii型胶原诱发性关节炎、感染性关节炎、莱姆关节炎、增生性关节炎、银屑病关节炎、斯蒂尔病、脊椎关节炎和青少年发作型类风湿性关节炎、骨关节炎、慢性进行性关节炎(arthritischronicaprogrediente)、变形性关节炎、慢性原发性多关节炎、反应性关节炎和强直性脊柱炎)，炎性过度增殖性皮肤病，银屑病，如斑块状银屑病、滴状银屑病、脓疱性银屑病和指甲的银屑病，特应性，包括特应性疾病，如枯草热和job综合征，皮炎，包括接触性皮炎、慢性接触性皮炎、剥脱性皮炎、变应性皮炎、变应性接触性皮炎、疱疹样皮炎、钱币状皮炎、脂溢性皮炎、非特异性皮炎、原发性刺激性接触性皮炎和特应性皮炎，x连锁高igm综合征，变应性眼内炎性疾病，荨麻疹，如慢性变应性荨麻疹和慢性特发性荨麻疹，包括慢性自身免疫性荨麻疹，肌炎，多肌炎/皮肌炎，青少年皮肌炎，中毒性表皮坏死松解症，硬皮病(包括系统性硬皮病)，硬化，如系统性硬化，多发性硬化(ms)，如脊柱光学ms、原发性进行性ms(ppms)和复发缓解性ms(rrms)，进行性系统性硬化，动脉粥样硬化，动脉硬化，弥漫性硬化，运动失调性硬化，视神经脊髓炎谱系障碍(nmo，也称为德维克病或德维克综合征)，炎性肠病(ibd)(例如克罗恩病、自身免疫介导的胃肠疾病、结肠炎，如溃疡性结肠炎、溃疡结肠炎、镜下结肠炎、胶原性结肠炎、息肉状结肠炎、坏死性小肠结肠炎和透壁性结肠炎，以及自身免疫性炎性肠病)，肠炎，坏疽性脓皮病，结节性红斑，原发性硬化性胆管炎，呼吸窘迫综合征，包括成人或急性呼吸窘迫综合征(ards)，脑膜炎，全部或部分葡萄膜的炎症，虹膜炎，脉络膜炎，自身免疫性血液病，类风湿性脊椎炎，类风湿性滑膜炎，遗传性血管性水肿，脑膜炎的脑神经损伤，妊娠疱疹，妊娠性类天疱疮，阴囊瘙痒、自身免疫性卵巢功能早衰，由于自身免疫病况引起的突发性听觉丧失，ige介导的疾病，如过敏反应和变应性和特应性鼻炎，脑炎，如rasmussen脑炎和边缘和/或脑干脑炎，葡萄膜炎，如前葡萄膜炎、急性前葡萄膜炎、肉芽肿性葡萄膜炎、非肉芽肿性葡萄膜炎、晶状体抗原性葡萄膜炎、后葡萄膜炎或自身免疫性葡萄膜炎，伴有和不伴有肾病综合征的肾小球肾炎(gn)，如慢性或急性肾小球肾炎，如原发性gn、免疫介导的gn、膜性gn(膜性肾病)、特发性膜性gn或特发性膜性肾病、膜性或膜增生性gn(mpgn)，包括i型和ii型，以及快速进行性gn、增生性肾炎，自身免疫性多腺内分泌衰竭，龟头炎，包括浆细胞性局限性龟头炎、龟头包皮炎，离心性环状红斑，持久性色素异常性红斑，多形性红斑(eythemamultiform)，环状肉芽肿，光泽苔藓，硬化萎缩苔藓，慢性单纯性苔藓，小棘苔藓，扁平苔藓，片层状鱼鳞藓，表皮松懈角化过度症，恶变前角化症，坏疽性脓皮病，变应性病况和反应，变态反应，湿疹，包括变应性或特应性湿疹、干性湿疹、汗疱湿疹和水疱样掌跖湿疹，哮喘，如细支气管哮喘、支气管哮喘和自身免疫性哮喘，涉及t细胞浸润和慢性炎症应答的病况，针对外来抗原如妊娠期间的胎儿abo血型的免疫反应，慢性肺部炎性疾病，自身免疫性心肌炎，白细胞粘附缺陷，狼疮，包括狼疮肾炎、狼疮脑炎、小儿狼疮、非肾性狼疮、肾外狼疮、盘状狼疮和盘状红斑狼疮、脱发性狼疮、系统性红斑狼疮(sle)，如皮肤sle或亚急性皮肤sle、新生儿狼疮综合征(nle)和播散性红斑狼疮，i型糖尿病，ii型糖尿病，成人潜伏性自身免疫性糖尿病(或1.5型糖尿病)。还想到与由细胞因子和t淋巴细胞介导的急性和迟发型超敏反应有关的免疫应答，结节病，肉芽肿病，包括淋巴瘤样肉芽肿病、韦格纳肉芽肿病，粒细胞缺乏，血管炎病，包括血管炎、大血管血管炎(包括风湿性多肌痛和巨细胞(takayasu)动脉炎)、中血管血管炎(包括川畸病和结节性多动脉炎/结节性动脉周围炎)、显微镜可见的多动脉炎、免疫性血管炎、cns血管炎、皮肤血管炎、超敏感性血管炎、坏死性血管炎，如系统性坏死性血管炎，和anca相关性血管炎，如churg-strauss血管炎或综合征(css)和anca相关性小血管血管炎，颞动脉炎，再生障碍性贫血，自身免疫性再生障碍性贫血，coombs阳性贫血，diamondblackfan贫血，溶血性贫血或免疫性溶血性贫血，包括自身免疫性溶血性贫血(aiha)，艾迪生病，自身免疫性中性白细胞减少症，全血细胞减少症，白细胞减少，涉及白细胞渗出的疾病，cns炎性病症，阿尔茨海默病，帕金森病，多器官损伤综合征，如继发于败血症、创伤或出血的那些综合征，抗原-抗体复合物介导的疾病，抗肾小球基膜疾病，抗磷脂抗体综合征，抗磷脂综合征，变应性神经炎，贝赫切特病/综合征，卡斯尔曼综合征，古德帕斯丘综合征，雷诺综合征，舍格伦综合征，史-约综合征，类天疱疮，如大疱性类天疱疮和皮肤类天疱疮，天疱疮(包括寻常型天疱疮(pemphigusvulgaris)、落叶型天疱疮、天疱疮粘膜类天疱疮和红斑型天疱疮)，自身免疫性多内分泌腺疾病，赖特尔病或综合征，热伤，先兆子痫，免疫复合物病症，如免疫复合物肾炎，抗体介导的肾炎，多发性神经病，慢性神经病，如igm多发性神经病或igm-介导的神经病，自身免疫性或免疫介导的血小板减少，如特发性血小板减少性紫癜(itp)，包括慢性或急性itp，获得性血小板减少性紫癜，巩膜炎，如特发性角膜-巩膜炎，巩膜外层炎，睾丸和卵巢的自身免疫疾病，包括自身免疫性睾丸炎和卵巢炎，原发性甲状腺功能减退症，甲状旁腺功能减退症，自身免疫性内分泌病，包括甲状腺炎，如自身免疫性甲状腺炎、桥本病、慢性甲状腺炎(桥本甲状腺炎)或亚急性甲状腺炎，自身免疫性甲状腺疾病，特发性甲状腺功能减退症，格雷夫斯病，多腺性综合征，如自身免疫性多腺性综合征(或多腺性内分泌病综合征)，类肿瘤综合征，包括神经病类肿瘤综合征，如兰-伊肌无力综合征或伊-兰综合征，僵人综合征，脑脊髓炎，如变应性脑脊髓炎或过敏性脑脊髓炎和实验性变应性脑脊髓炎(eae)，重症肌无力，如胸腺瘤相关性重症肌无力，小脑退化，神经性肌强直，视性眼阵挛或眼球斜视痉挛综合征(oms)和感觉神经病，多病灶运动神经病，希恩综合征，自身免疫性肝炎，慢性肝炎，类狼疮性肝炎，巨细胞性肝炎，慢性活动性肝炎或自身免疫性慢性活动性肝炎，淋巴样间质性肺炎(lip)，闭塞性细支气管炎(非移植)与nsip、格林-巴利综合征，贝尔热病(berger'sdisease)(iga肾病)，特发性iga肾病，线状iga皮肤病，急性发热性嗜中性皮肤病，角层下脓疱性皮肤病，暂时性棘层松解性皮肤病，硬化，如原发性胆汁性肝硬化和肺硬变，自身免疫性肠病综合征，腹或腹腔疾病，乳糜泻(麸质肠病)，难治性口炎性腹泻，特发性口炎性腹泻，冷球蛋白血症，肌萎缩侧索硬化(als；lougehrig病)，冠状动脉疾病，自身免疫性耳病，如自身免疫性内耳病(aied)、自身免疫性听力损失，多软骨炎，如难治性或复发的或复发性多软骨炎，肺泡蛋白沉着症，寇甘综合征/非梅毒性间质性角膜炎，贝尔麻痹，斯威特病/综合征，自身免疫性酒渣鼻，带状疱疹相关性疼痛，淀粉样变性，非癌性淋巴细胞增多，原发性淋巴细胞增多，其包括单克隆b细胞淋巴细胞增多(例如，良性单克隆丙球蛋白病和意义未明的单克隆丙球蛋白病，mgus)，周围神经病，副肿瘤综合征，通道病变，如癫痫、偏头痛、心律失常、肌肉病症、耳聋、失明、周期性瘫痪和cns的通道病变，孤独症，炎性肌病，局灶性或节段性或局灶性节段性肾小球硬化症(fsgs)，内分泌性眼病，葡萄膜视网膜炎，脉络膜视网膜炎，自身免疫性肝脏病症，纤维肌痛，多发性内分泌衰竭，施密特综合征，肾上腺炎，胃萎缩，早老性痴呆，脱髓鞘病，如自身免疫性脱髓鞘病和慢性炎性脱髓鞘性多神经病，德雷斯勒综合征，斑秃(alopeciagreata)，全秃，crest综合征(钙质沉着症、雷诺现象，食管活动不良、指端硬化和毛血管扩张)，男性和女性自身免疫性不育，例如，由抗精子抗体引起的，混合性结缔组织病，南美洲锥虫病，风湿热，复发性流产，农民肺，多形性红斑，心脏切开后综合征，库欣综合征，养鸟迷的肺(bird-fancier'slung)，变应性肉芽肿性脉管炎，良性淋巴细胞脉管炎，奥尔波特综合征，肺泡炎，如变应性肺泡炎和纤维化肺泡炎，间质性肺病，输血反应，麻风，疟疾，寄生虫病，如利什曼病，锥虫病(kypanosomiasis)，血吸虫病、蛔虫病、曲霉病，sampter综合征，caplan综合征，登革热，心内膜炎，心内膜心肌纤维化，弥漫性肺间质纤维化，肺间质纤维化，肺纤维化，特发性肺纤维化，囊性纤维化，眼内炎，持久隆起性红斑(erythemaelevatumetdiutinum)，胎儿成红细胞增多症，嗜酸性筋膜炎，舒尔曼综合征，费尔蒂综合征，丝虫病(flariasis)，睫状体炎，如慢性睫状体炎、异时性睫状体炎、虹膜睫状体炎(急性或慢性)或fuch睫状体炎，henochschonlei紫癜，人类免疫缺陷病毒(hiv)感染，scid，获得性免疫缺陷综合征(aids)，埃可病毒感染，脓毒症，内毒素血症，胰腺炎，甲状腺毒症(thyroxicosis)，细小病毒感染、风疹病毒感染，疫苗接种后综合征，先天性风疹感染、eb病毒感染，流行性腮腺炎，埃文斯综合征，自身免疫性腺衰竭，西登哈姆舞蹈病，链球菌感染后肾炎，闭塞性血栓性脉管炎(thromboangitisubiterans)，甲状腺毒症，脊髓痨，脉络膜炎，巨细胞性多肌痛，慢性过敏性肺炎，干燥性角结膜炎，流行性角结膜炎，特发性肾病综合征，微小病变肾病，良性家族性和缺血再灌注损伤，移植器官再灌注，视网膜自身免疫，关节炎症，支气管炎，慢性阻塞性气道/肺疾病，矽肺，口疮，口疮性口炎，动脉硬化病症，asperniogenese，自身免疫性溶血、伯克病、冷球蛋白血症、dupuytren挛缩，晶状体蛋白过敏性眼内炎(endophthalmiaphacoanaphylactica)，变应性肠炎，麻风结节性红斑、特发性面神经麻痹，慢性疲劳综合征，发热肌痛，哈-里病，感音神经性听觉丧失，haemoglobinuriaparoxysmatica，性腺功能减退，局限性回肠炎，白细胞减少症，传染性单核细胞增多症，横贯脊髓炎，原发性特发性粘液性水肿，肾病，ophthalmiasymphatica，肉芽肿性睾丸炎，胰腺炎，急性多神经根炎，坏疽性脓皮病，quervain甲状腺炎，获得性脾萎缩，非恶性胸腺瘤，白癜风，中毒性休克综合征，食物中毒，涉及t细胞浸润的病况，白细胞粘附缺陷，与由细胞因子和t淋巴细胞介导的急性和迟发型超敏反应相关的免疫应答，涉及白细胞渗出的疾病，多器官损伤综合征、抗原-抗体复合物介导的疾病，抗肾小球基膜病，变应性神经炎，自身免疫性多内分泌腺疾病，卵巢炎，原发性粘液性水肿，自身免疫性萎缩性胃炎，交感性眼炎，风湿性疾病，混合性结缔组织病，肾病综合征，胰岛炎，多内分泌腺衰竭，i型自身免疫性多内分泌腺综合征，成人发作型特发性甲状旁腺功能减退(aoih)，心肌病，如扩张型心肌病、获得性大疱性表皮松解(eba)，血色素沉着症，心肌炎，肾病综合征，原发性硬化性胆管炎，化脓性或非化脓性鼻窦炎，急性或慢性鼻窦炎，筛骨、额骨、上颌骨或蝶窦炎，嗜酸性粒细胞相关疾病，如嗜酸性粒细胞增多，肺嗜酸性粒细胞增多性浸润，嗜酸性粒细胞增多肌痛综合征，吕弗勒综合征，慢性嗜酸细胞性肺炎，热带性肺嗜酸细胞浸润症，支气管肺曲霉病，曲霉肿或含有嗜酸性粒细胞的肉芽肿，过敏反应，血清阴性脊柱关节病，多内分泌自身免疫疾病，硬化性胆管炎，巩膜、巩膜外层、慢性皮肤粘膜念珠菌病，布鲁顿综合征，婴儿一过性低丙种球蛋白血症，威-奥综合征，共济失调-毛细血管扩张综合征，血管扩张，与胶原病相关的自身免疫病症，风湿病，神经系统疾病，淋巴结炎，血压反应减少，血管功能障碍、组织损伤、心血管缺血、痛觉过敏、肾缺血，脑缺血以及伴随血管生成的疾病，变应性超敏反应病症、肾小球肾炎、再灌注损伤、缺血再灌注病症，心肌或其他组织再灌注损伤，淋巴瘤性气管支气管炎，炎性皮肤病，具有急性炎性组分的皮肤病，多器官衰竭，大疱性疾病，肾皮质坏死，急性化脓性脑膜炎或其他中枢神经系统炎性病症，眼部和眼眶的炎性病症，粒细胞输注相关综合征，细胞因子诱发的毒性，发作性睡病，急性严重炎症，慢性顽固性炎症，肾盂炎，动脉增生，消化性溃疡，瓣膜炎，气肿，斑秃，脂肪组织炎症/ii型糖尿病，肥胖症相关的脂肪组织炎症/胰岛素抗性，以及子宫内膜异位症。

在一些实施方案中，自身免疫病症或疾病可包括但不限于i型和ii型糖尿病、前驱糖尿病、移植排斥、多发性硬化、多发性硬化相关的病症、卵巢功能早衰、硬皮病、舍格伦病/综合征、狼疮、白癜风、脱发(秃顶)，多腺体衰竭、格雷夫斯病、甲状腺功能减退症、多肌炎、天疱疮、克罗恩病、结肠炎、自身免疫性肝炎、垂体功能减退症、心肌炎、艾迪生病、自身免疫性皮肤病、葡萄膜炎、恶性贫血、甲状旁腺功能减退症和/或类风湿性关节炎。其他感兴趣的适应证包括但不限于哮喘、变应性哮喘、原发性胆汁性肝硬化、硬化、视神经脊髓炎谱系障碍(德维克病、视神经脊髓型多发性硬化(osms))、寻常型天疱疮、炎性肠病(ibd)、关节炎、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮(sle)、乳糜泻、银屑病、自身免疫性心肌病、特发性扩张型心肌病(idcm)、重症肌无力(myasthyeniagravis)、葡萄膜炎、强直性脊柱炎、免疫介导性肌病、前列腺癌、抗磷脂综合征(anca+)、动脉粥样硬化、皮肌炎、慢性阻塞性肺疾病(copd)、气肿、脊髓损伤、创伤性损伤、烟草诱发的肺破坏、anca相关性血管炎、银屑病、硬化性胆管炎、原发性硬化性胆管炎，和中枢神经系统和周围神经系统疾病。

在一些实施方案中，自身免疫病症或疾病可包括但不限于糖尿病、多发性硬化、乳糜泻、原发性胆汁性肝硬化、天疱疮、落叶型天疱疮、寻常型天疱疮、视神经脊髓炎谱系障碍、关节炎(包括类风湿性关节炎)、变应性哮喘、炎性肠病(包括克罗恩病和溃疡性结肠炎)、系统性红斑狼疮、动脉粥样硬化、慢性阻塞性肺疾病、气肿、银屑病、自身免疫性肝炎、葡萄膜炎、舍格伦综合征、硬皮病、抗磷脂综合征、anca相关的血管炎和僵人综合征。

如本文所用，术语“脂肪组织炎症/ii型糖尿病”是指患有ii型糖尿病的受试者表现出的脂肪组织炎症。脂肪组织炎症导致在受试者中形成胰岛素抗性。

如本文所用，术语“肥胖症相关的脂肪组织炎症/胰岛素抗性”是指患有肥胖症的受试者表现出的脂肪组织炎症。脂肪组织炎症导致受试者的胰岛素抗性，从而提高脂肪组织炎症引起ii型糖尿病的发病的可能性。

如本文所用，术语“规范序列”是指在本公开内容或现有技术中不存在进一步指导的情况下，用作氨基酸编号的参考的蛋白质序列。对于本领域技术人员显而易见的是，抗原片段的末端可以随着该片段已经被定位到的参考序列而变化。因此，应当理解，除非另有明确规定，否则片段标识符是近似的末端。

如本文所用，“ppi”是指与名称“前胰岛素原”(生物学活性内分泌激素胰岛素的生物学上无活性的前体)相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。同种型ppi的规范序列的长度为110个氨基酸：

malwmrllpllallalwgpdpaaafvnqhlcgshlvealylvcgergffytpktrreaedlqvgqvelgggpgagslqplalegslqkrgiveqcctsicslyqlenycn。

如本文所用，“igrp”是指与名称“胰岛特异性葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基相关蛋白”或“葡萄糖-6-磷酸酶-2”(自身免疫性1型糖尿病的主要自身抗原)相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。igrp的规范序列的长度为355个氨基酸：

mdflhrngvliiqhlqkdyrayytflnfmsnvgdprniffiyfplcfqfnqtvgtkmiwvavigdwlnlifkwilfghrpywwvqetqiypnhsspcleqfpttcetgpgspsghamgascvwyvmvtaalshtvcgmdkfsitlhrltwsflwsvfwliqisvcisrvfiathfphqvilgviggmlvaeafehtpgiqtaslgtylktnlflflfavgfylllrvlnidllwsvpiakkwcanpdwihidttpfaglvrnlgvlfglgfainsemfllscrggnnytlsfrllcaltsltilqlyhflqiptheehlfyvlsfcksasipltvvafipysvhmlmkqsgkksq。

如本文所用，“gad”是指与名称“谷氨酸脱羧酶”(糖尿病相关的抗原)相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。gad可任选地指gad1、gad2、gad65、gad67或任何其他糖尿病相关的谷氨酸脱羧酶。同种型gad2的规范序列的长度为585个氨基酸并且在本文公开如下：

maspgsgfwsfgsedgsgdsenpgtarawcqvaqkftggignklcallygdaekpaesggsqppraaarkaacacdqkpcscskvdvnyaflhatdllpacdgerptlaf

lqdvmnillqyvvksfdrstkvidfhypnellqeynweladqpqnleeilmhcqttlkyaiktghpryfnqlstgldmvglaadwltstantnmftyeiapvfvlleyvtlkkmreiigwpggsgdgifspggaisnmyammiarfkmfpevkekgmaalprliaftsehshfslkkgaaalgigtdsvilikcdergkm

ipsdlerrileakqkgfvpflvsatagttvygafdpllav

adickkykiwmhvdaawgggllmsrkhkwklsgveransvtwnphkmmgvplqcsallvreeglmqncnqmhasylfqqdkhydlsydtgdkalqcgrhvdvfklwlmwrakgttgfeahvdkclelaeylyniiknregyemvfdgkpqhtnvcfwyippslrtledneermsrlskvapvikarmmeygttmvsyqplgdkvnffrmvisnpaathqdidflieeierlgqdl。

如本文所用，“外周蛋白”是指与该名称相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。与uniprot参考编号p41219相关的人外周蛋白的非限制性示例性序列在本文公开如下：

mshhpsglragfsstsyrrtfgpppslspgafsyssssrfsssrllgsaspsssvrlgsf

rspragagallrlpserldfsmaealnqeflatrsnekqelqelndrfanfiekvrfleqqnaalrgelsqargqeparadqlcqqelrelrrelellgrerdrvqverdglaedlaalkqrleeetrkredaehnlvlfrkdvddatlsrlelerkieslmdeieflkklheeelrdlqvsvesqqvqqveveatvkpeltaalrdiraqyesiaaknlqeaeewykskyadlsdaanrnhealrqakqemnesrrqiqsltcevdglrgtneallrqlreleeqfaleaggyqagaarleeelrqlkeemarhlreyqellnvkmaldieiatyrkllegeesrisvpvhsfaslnikttvpeveppqdshsrktvliktietrngevvtesqkeqrseldkssahsy。

如本文所用，“aglia”是指与来源于小麦科成员的名称“α/β-麦醇溶蛋白”或另一种乳糜泻相关变应原相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。在小麦中表达的与genbank登录号caa10257.1相关的α-麦醇溶蛋白的非限制性示例性序列为：

mktflilallaivattattavrvpvpqlqpqnpsqqqpqeqvplvqqqqflgqqqpf

ppqqpypqpqpfpsqqpylqlqpfpqpqlpysqpqpfrpqqpypqpqpqysqpqqpisqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqilqqi

lqqqlipcmdvvlqqhniahgrsqvlqqst

yqllqelccqhlwqipeqsqcqaihkvvhaiilhqqqkqqqqpssqvsfqqplqqyplgqgsfrpsqqnpqaqgsvqpqqlpqfeeirnlalqtlpamcnvyippyctitpfgifgtn。

在小麦中表达的α-麦醇溶蛋白的另一个非限制性示例性序列在本文公开如下：

vrvpvpqlqpqnpsqqqpqeqvplvqqqqflgqqqpfppqqpypqpqpfpsqqpylqlqpfpqpqlpysqpqpfrpqqpypqpqpqysqpqqpisqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqilqqilqqqlipcmdvvlqqhniahgrsqvlqqstyqllqelccqhlwqipeqsqcqaihkvvhaiilhqqqkqqqqpssqvsfqqplqqyplgqgsfrpsqqnpqaqgsvqpqqlpqfeeirnlalqtlpamcnvyippyctitpfgifgtn。

如本文所用，“pdc-e2”是指与名称“二氢硫辛酰胺s-乙酰基转移酶”或“dlat”(原发性胆汁性肝硬化的自身抗原)相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。pdc-e2的规范序列的长度为647个氨基酸并且在本文公开如下：

mwrvcarraqnvapwaglearwtalqevpgtprvtsrsgpaparrnsvttgyggvralcgwtpssgatprnrlllqllgspgrryyslpphqkvplpslsptmqagtiarwekkegdkinegdliaevetdkatvgfesleecymakilvaegtrdvpigaiicitvgkpedieafknytldssaaptpqaapaptpaataspptpsaqapgssypphmqvllpalsptm

tmgtvqrwekkvgeklsegdllaeietdkatigfevqeegylakilvpegtrdvplgtplciivekeadisafadyrptevtdlkpqvppptpppvaavpptpqplaptpsapcpatpagpkgrvfvsplakklavekgidltqvkgtgpdgritkkdidsfvpskvapapaavvpptgpgmapvptgvftdipisnirrviaqrlmqskqtiphyylsidvnmgevllvrkelnkilegrskisvndfiikasalaclkvpeansswmdtvirqnhvvdvsvavstpaglitpivfnahikgvetiandvvslatkaregklqphefqggtftisnlgmfgiknfsaiinppqacilaigasedklvpadnekgfdvasmmsvtlscdhrvvdgavgaqwlaefrkylekpitmll。

如本文所用，“胰岛素”是指与该名称相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。与uniprot参考编号p01308相关的人胰岛素的非限制性示例性序列在本文公开如下：

malwmrllpllallalwgpdpaaafvnqhlcgshlvealylvcgergffytpktrreaedlqvgqvelgggpgagslqplalegslqkrgiveqcctsicslyqlenycn。

如本文所用，“dg1ec2”是指与名称“桥粒糖蛋白1”相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。dg1ec2的规范序列的长度为1054个氨基酸并且在本文公开如下：

mnwhflrtatvlliflvvveinsefriqvrdyntkngtikwhsirrqkrewikfaaacregednskrnpiakihsdcaanqqvtyrisgvgidqppygifiinqktgeinitsivdreitpffiiycralnslgqdlerplelrvrvldindnppvfsmstfvgqieensnantlvmrlnatgadepnnlnskiafkiirqepsdspmfiinrntgeirtmnnfldreqysqyslavrgsdrdggadgmsaececnikildvndnipymepsshmvrieenalsqnlveirvidldeefsanwmaviffisgneggwfdiemnertnvgilkvikpldyeavqnlqlslgvrnkadfhhsimsqykvtataisvtvlnviegsvfrpgsktyvvrsdmgqnykvgdfvatdldtglasttvryvmgnnpanllnvdsktgvitlrnkvtmeqyemlngkyqgtilsiddalqrtctgtinidlqgsgwekdsekvtssqnsgsstgdssggtggggrenpsegdtttntggktstdyedgetqtqsnnnhqelgsnnlsdnvhfgpagigllimgflvlglvpfllmccdcggapgagagfepvpecsdgaihswavegpqplptdattvcvppipsnnanviecidtsgvytneyggremqdlgggerttgfeltegvktsgvpeicqeysgtlrrnsmrecregglnmnfmesyfcqkayayadedegrpsndclliydiegvgspagsvgccsfigedlddsfldtlgpkfkkladislgkevepdpswppestepicpqqgtepiigghppisphfgtttvisentypsgpgvqhpmpipdplgygnvtvtesyttsgtlkptvhvhdnrhasnvvvtervvgpisgtdlhgmlempdlrdgsnvi。

如本文所用，“dg3”是指与名称“桥粒芯蛋白3”相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。与uniprot参考编号p32926-1相关的人桥粒芯蛋白3的非限制性示例性序列在本文公开如下：

mmglfprttgalaifvvvilvhgelrietkgqydeeemtmqqakrrqkrewvkfakpcregednskrnpiakitsdyqatqkityrisgvgidqppfgifvvdkntgdinitaivdreetpsflitcralnaqgldvekpliltvkildindnppvfsqqifmgeieensasnslvmilnatdadepnhlnskiafkivsqepagtpmfllsrntgevrtltnsldreqassyrlvvsgadkdgeglstqcecnikvkdvndnfpmfrdsqysarieenilssellrfqvtdldeeytdnwlavyfftsgnegnwfeiqtdprtnegilkvvkaldyeqlqsvklsiavknkaefhqsvisryrvqstpvtiqvinvregiafrpasktftvqkgisskklvdyilgtyqaidedtnkaasnvkyvmgrndggylmidsktaeikfvknmnrdstfivnktitaevlaideytgktstgtvyvrvpdfndncptavlekdavcssspsvvvsartlnnrytgpytfaledqpvklpavwsittlnatsallraqeqippgvyhislvltdsqnnrcemprsltlevcqcdnrgicgtsypttspgtrygrphsgrlgpaaigllllgllllllaplllltcdcgagstggvtggfipvpdgsegtihqwgiegahpedkeitnicvppvtangadfmessevctntyargtavegtsgmemttklgaatesggaagfatgtvsgaasgfgaatgvgicssgqsgtmrtrhstggtnkdyadgaismnfldsyfsqkafacaeeddgqeandclliydnegadatgspvgsvgccsfiaddlddsfldslgpkfkklaeislgvdgegkevqppskdsgygiescghpievqqtgfvkcqtlsgsqgasalstsgsvqpavsipdplqhgnylvtetysasgslvqpstagfdplltqnvivtervicpissvpgnlagptqlrgshtmlctedpcsrli。

如本文所用，“aqp4”是指与名称“水通道蛋白4”相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段，“水通道蛋白4”属于将水引导通过细胞膜的内在膜蛋白的水通道蛋白家族，并且是视神经脊髓炎谱系障碍的原发性自身免疫靶标。aqp4的规范序列的长度为323个氨基酸并且在本文公开如下：

msdrptarrwgkcgplctrenimvafkgvwtqafwkavtaeflamlifvllslgstinwggtekplpvdmvlislcfglsiatmvqcfghisgghinpavtvamvctrkisiaksvfyiaaqclgaiigagilylvtppsvvgglgvtmvhgnltaghgllveliitfqlvftifascdskrtdvtgsialaigfsvaighlfainytgasmnparsfgpavimgnwenhwiywvgpiigavlagglyeyvfcpdvefkrrfkeafskaaqqtkgsymevednrsqvetddlilkpgvvhvidvdrgeekkgkdqsgevlssv。

如本文所用，“plp”是指与名称“髓磷脂蛋白脂质蛋白”相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。与uniprot参考编号p60201相关的人髓磷脂蛋白脂质蛋白的非限制性示例性序列在本文公开如下：

mglleccarclvgapfaslvatglcffgvalfcgcghealtgteklietyfsknyqdyeylinvihafqyviygtasffflygalllaegfyttgavrqifgdyktticgkglsatvtggqkgrgsrgqhqahslervchclgkwlghpdkfvgityaltvvwllvfacsavpvyiyfntwttcqsiafpsktsasigslcadarmygvlpwnafpgkvcgsnllsicktaefqmtfhlfiaafvgaaatlvslltfmiaatynfavlklmgrgtkf。

如本文所用，“mog”是指与名称“髓磷脂少突胶质细胞糖蛋白”相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。与uniprot参考编号q16653相关的人髓磷脂少突胶质细胞糖蛋白的非限制性示例性序列在本文公开如下：

maslsrpslpsclcsfllllllqvsssyagqfrvigprhpiralvgdevelpcrispgknatgmevgwyrppfsrvvhlyrngkdqdgdqapeyrgrtellkdaigegkvtlrirnvrfsdeggftcffrdhsyqeeaamelkvedpfywvspgvlvllavlpvlllqitvgliflclqyrlrgklraeienlhrtfdphflrvpcwkitlfvivpvlgplvaliicynwlhrrlagqfleelrnpf。

如本文所用，“mbp”是指与名称“髓鞘碱性蛋白”相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。与uniprot参考编号p02686相关的人髓鞘碱性蛋白的非限制性示例性序列在本文公开如下：

mgnhagkrelnaekastnsetnrgesekkrnlgelsrttsednevfgeadanqnngtssqdtavtdskrtadpknawqdahpadpgsrphlirlfsrdapgredntfkdrpsesdelqtiqedsaatsesldvmasqkrpsqrhgskylatastmdharhgflprhrdtgildsigrffggdrgapkrgsgkdshhpartahygslpqkshgrtqdenpvvhffknivtprtpppsqgkgrglslsrfswgaegqrpgfgyggrasdyksahkgfkgvdaqgtlskifklggrdsrsgspmarr。

如本文所用，“cii”是指与名称“天然ii型胶原蛋白”(参与慢性多关节炎的高分子量纤维分子)相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。人胶原蛋白ii的非限制性示例性共有序列在本文公开如下：

mrgasvtvaavrcgdvagscvdgryndkdvwkcrcvcdtgtvcddcdvkdcsgccctdatasggkgkggdkdvgkgggaggrgdrgdkgkgagrgrdggtgngggggggnaamaggdkaggagvmgmgmgrggagagggngggvsgmgrgggkgddgagkgkagrgggarggtggvkghrgygdgakgagagvkgsgsgngsgmgrggrgrtgagaagargndggaggvgaggggagakgagtgarggagrggtgsgagasgngtdggakgsagagagaggrgggatggkgtggagkggkggaggagaggkrgargggvgggrgagnrggdgagkgagrgsgagkgangdgrgggargtgrgdaggkvgsgagdgrgggarggvmggkganggkagkggagrggkdgtgaaggagagrggagsgggggggkgdgvgagagvgrgrggrgsgaggrggtgtdgkgasgaggagggmgrgaagagkgdrgdvgkggagkdggrgtgggagangkgvggagsagargagrgtggagaggadggakggagkgdagaggsgaggtgvtgkgargaggatggaagrvggsngngggsgkdgkgargdsggragggaggkggddgsgagggagrgvggrgrgggsggkgagasgdrggvggtgaggrgsgadggrdgaagvkgdrgtgavgagaggsgagtgkgdrgagagmgsgagargggrgdkgaggrgkghrgtggggsgdgasgagsgrggvgsgkdganggggrgrsgtgaggngggggdmsaaggrkgdymradaaggrhdavdatksnnsrsgsrknartcrdkchwksgdywdngctdamkvcnmtgtcvynanvkknwwsskskkkhwgtngghsygddnantanvmtrstgsntyhcknsaydaagnkkagsndvragnsrtytakdgctkhtgkwgktvyrsktsrdamdgggvdgvc。

鼠胶原蛋白ii的另一个非限制性示例性序列在本文公开如下：

mirlgapqslvlltlliaavlrcqgqdarklgpkgqkgepgdirdiigprgppgpqgpageqgprgdrgdkgekgapgprgrdgepgtpgnpgpagppgppgppglsagn

faaqmaggydekaggaqmgvmqgpmgpmgprgppgpagapgpqgfqgnpgepgepgvsgpmgprgppgpagkpgddgeagkpgksgerglpgpqgargfpgtpglpgvkghrgypgldgakgeagapgvkgesgspgengspgpmgprglpgergrtgpagaagargndgqpgpagppgpvgpaggpgfp

gapgakgeagptgargpegaqgsrgepgnpgspgpagasgnpgtdgipgakgsagapgiagapgfpgprgppgpqgatgplgpkgqagepgiagfkgdqgpkgetgpagp

qgapgpageegkrgargepggagpigppgergapgnrgfpgqdglagpkgapgergpsgltgpkgangdpgrpgepglpgargltgrpgdagpqgkvgpsgapgedgrpgppgpqgargqpgvmgfpgpkgangepgkagekglagapglrglpgkdgetgaagppgpsgpagergeqgapgpsgfqglp

gppgppgeggkqgdqgipgeagapglvgprgergfpgergspgaqglqgprglpgtpgtdgpkgaagpdgppgaqgppglqgmpgergaagiagpkgdrgdvgekgpega

pgkdggrgltgpigppgpagangekgevgppgpsgstgargapgergetgppgpagfagppgadgqpgakgdqgeagqkgdagapgpqgpsgapgpqgptgvtgpkgargaqgppgatgfpgaagrvgppgangnpgpagppgpagkdgpkgvrgdsgppgragdpglqgpagapgekgepgddgpsgld

gppgpqglagqrgivglpgqrgergfpglpgpsgepgkqgapgasgdrgppgpvgppgltgpagepgregspgadgppgrdgaagvkgdrgetgalgapgapgppgspgp

agptgkqgdrgeagaqgpmgpsgpagargiagpqgprgdkgesgeqgerglkghrgftglqglpgppgpsgdqgasgpagpsgprgppgpvgpsgkdgsngipgpigppgprgrsgetgp

vgppgspgppgppgppgpgidmsafaglgqrekgpdpmqy

mradeadstlrqhdvevdatlkslnnqies

irspdgsrknpartcqdlklchpewksgdywidpnqgctldamkvfcnmetgetcvypnpatvprknwwsskskekkhiwfgetmnggfhfsygdgnlapntanvqmtfl

rllstegsqnityhcknsiayldeaagnlkkalliqgsnd

vemraegnsrftytalkdgctkhtgkwgktvieyrsqktsrlpiidiapmdiggaeqefgvdigpvcfl。

如本文所用，“derp1”是指与名称“屋尘螨(dermatophagoidespteronyssius)p1”相关且已知在人体中引起变态反应的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。derp1的非限制性示例性共有序列在本文公开如下：

neiaxakidlrqmrtvtpixmqggcgscwalsgvaatesaylaygnxsldlaeqelvdcasqhgchgdtiprgieyiqhngvvqesyyryvareqscrrpnaqrfgisnycqiyppnvnkirealaqthsaiaviigikdldafrhydgrtiiqrdngyqpnyhavnivgysnaqgvdywivrnswdtnwgdngygyfaanidlmmieeypyvvil。

如本文所用，“derp2”是指与名称“屋尘螨p2”相关且已知在人体中引起变态反应的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。derp2的非限制性示例性共有序列在本文公开如下：

mmykilclsllvaavardqvdvkdcanheikkvlvpgchgsepciihrgkpfqleavfeanqntktakieikasidglevdvpgidpnachymkcplvkgqqydikytwnvpkiapksenvvvtvkvmgddgvlacaiathakird。

如本文所用，“ova”是指与用于在小鼠中产生变态反应的名称“卵清蛋白”相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。

如本文所用，“bacint”或“拟杆菌整合酶”是指与该名称相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。bacint的规范序列的长度为406个氨基酸并且在本文公开如下：

mdkiryrlvynrqntlnrqgtalvqveaylnqrkiylktnvylkpecwsregaqvinhpqsnelnimlyeyilylqgielgywkrgipatlsllkdavkkksavnisfstfaksaidnsdkkqstkdnlhstlavlhdfrsgldfkdltytflrdfeqylrekgnavntiakhmrqlrtlvneainqgymhadaypfrkykikqekgrhefltpdelkkletveveeesmrhvldaflfccytglrysdfcqltpenfiringkrwlyfksvktgveirlplhllfesralgildrypdigsfaalpcnsevnkqlrklaglcgikkrityhvsrhtcatllihqgvaittvqkllghtsvkttqiysevlsstivrdlknvqkgkrkvkmfpdkglrtsdfidnr。

如本文所用，“cbir”、“fla-x”和/或“fla-2”是指与参与结肠炎的一种或多种细菌鞭毛蛋白相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。fla-x的非限制性示例性序列在本文公开如下：

mvvqhnlramnsnrmlgitqgslnksteklssgykvnraaddaaglsise

kmrkqirglsqaslnaedgisavqtaegaltevhdmlqrmnelavkaang

tnstsdrqtiqdevdqllteidrvaettkfnelytlkgdedkvtrylsah

dagiegtltqgatnatfsmdqlkfgdtimiagreyhisgtkaeqaaiita

svkigqqvtidgimytcssvsnadkfelksedliakldtsslsimsvngk

tyygagitddrtvvssigaykliqkelglassigadgatqasvnagvdgk

tlmkpsfegkwvfsidkgsvqvredidfslhvgadadmnnkiavkigald

tkglgiqglnvkdttgaaatyaidsiadavarisaqrsllgavqnrleht

innldnvventtaaesqirdtdmatemvkysnnnvlaqagqsmlaqsnqa

nqgvlqllq。

fla-2的非限制性示例性序列在本文公开如下：

mvvqhnlramnsnrmlgitqgslnksteklssgykvnraaddaaglsise

kmrkqirglsqaslnaedgisavqtaegaltevhdmlqrmnelavkaang

tnstsdrqtiqdevdqllteidrvaettkfnelytlkgdedkvtrylsah

dagiegtltqgatnatfsmdqlkfgdtimiagreyhisgtqkqqgeiits

svkigqqvtidgimytctatvsnadkfeltkddliakldtsslsimsvng

ktyygagitddrtvvssigaykliqkelglassigadgstqasvnagvdg

ktlkkpsfegkwvfsidkgsvqvredidfslhvgadadmnnkiavkigal

dtkglgiqglnvkdttgaaatyaidsiadavarisaqrsllgavqnrleh

tinnldnvventtaaesqirdtdmatemvkysnnnvlaqagqsmlaqsnq

anqgvlsllg。

如本文所用，“yidx”是指与该名称相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段，它来源于细菌并且参与免疫相关的疾病发病。yidx的非限制性示例性序列在本文公开如下：

mklnfkgffkaaglfplalmlsgcisyalvshtakgssgkyqsqsdtitg

lsqakdsngtkgyvfvgesldylitdgaddivkmlndpalnrhniqvadd

arfvlnagkkkftgtislyyywnneeekalathygfacgvqhctrslenl

kgtiheknknmdyskvmafyhpfkvrfyeyysprgipdgvsaallpvtvt

ldiitaplqflvvyavnq。

yidx的另一个非限制性示例性序列在本文公开如下：

mklnfkgffkaaglfplalmlsgcisyalvshtakgssgkyqsqsdtitglsqakdsngtkgyvfvgesldylitdgaddivkmlndpalnrhniqvaddarfvlnagkkkftgtislyyywnneeekalathygfacgvqhctrslenlkgtiheknknmdyskvmafyhpfkvrfyeyysprgipdgvsaallpvtvtldiitaplqflvvyavnq。

如本文所用，“achr”是指与该名称相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。

与uniprot参考编号q13702-1相关的乙酰胆碱受体的非限制性示例性序列在本文公开如下：

mgqdqtkqqiekglqlyqsnqtekalqvwtkvlekssdlmgrfrvlgclvtahsemgrykemlkfavvqidtareledadfllesylnlarsneklcefhktisycktclglpgtragaqlggqvslsmgnaflglsvfqkalesfekalryahnnddamlecrvccslgsfyaqvkdyekalffpckaaelvnnygkgwslkyramsqyhmavayrllgrlgsamecceesmkialqhgdrplqalcllcfadihrsrgdletafprydsamsimteignrlgqvqallgvakcwvarkaldkaldaieraqdlaeevgnklsqlklhclsesiyrskglqrelrahvvrfhecveetelycglcgesigeknsrlqalpcshifhlrclqnngtrscpncrrssmkpgfv。

与uniprot参考编号q04844-1相关的乙酰胆碱受体的非限制性示例性序列在本文公开如下：

maraplgvllllgllgrgvgkneelrlyhhlfnnydpgsrpvrepedtvtislkvtltnlislnekeetlttsvwigidwqdyrlnyskddfggietlrvpselvwlpeivlennidgqfgvaydanvlvyeggsvtwlppaiyrsvcavevtyfpfdwqncslifrsqtynaeeveftfavdndgktinkididteaytengewaidfcpgvirrhhggatdgpgetdviysliirrkplfyviniivpcvlisglvllayflpaqaggqkctvsinvllaqtvflfliaqkipetslsvpllgrflifvmvvatlivmncvivlnvsqrtptthamsprlrhvllellprllgsppppeapraaspprrassvglllraeelilkkprselvfegqrhrqgtwtaafcqslgaaapevrccvdavnfvaestrdqeatgeevsdwvrmgnaldnicfwaalvlfsvgssliflgayfnrvpdlpyapciqp。

与uniprot参考编号p02708-1相关的乙酰胆碱受体的非限制性示例性序列在本文公开如下：

mepwpllllfslcsaglvlgsehetrlvaklfkdyssvvrpvedhrqvvevtvglqliqlinvdevnqivttnvrlkqgdmvdlprpscvtlgvplfshlqneqwvdynlkwnpddyggvkkihipsekiwrpdlvlynnadgdfaivkftkvllqytghitwtppaifksyceiivthfpfdeqncsmklgtwtydgsvvainpesdqpdlsnfmesgewvikesrgwkhsvtysccpdtpyldityhfvmqrlplyfivnviipcllfsfltglvfylptdsgekmtlsisvllsltvfllvivelipstssavpligkymlftmvfviasiiitvivinthhrspsthvmpnwvrkvfidtipnimffstmkrpsrekqdkkiftedidisdisgkpgpppmgfhsplikhpevksaiegikyiaetmksdqesnnaaaewkyvamvmdhillgvfmlvciigtlavfagrlielnqqg。

与uniprot参考编号p07510-1相关的乙酰胆碱受体的非限制性示例性序列在本文公开如下：

mhggqgplllllllavclgaqgrnqeerlladlmqnydpnlrpaerdsdvvnvslkltltnlislnereealttnvwiemqwcdyrlrwdprdyeglwvlrvpstmvwrpdivlennvdgvfevalycnvlvspdgciywlppaifrsacsisvtyfpfdwqncslifqsqtystneidlqlsqedgqtiewifidpeaftengewaiqhrpakmlldpaapaqeaghqkvvfylliqrkplfyviniiapcvlissvailihflpakaggqkctvainvllaqtvflflvakkvpetsqavpliskyltfllvvtilivvnavvvlnvslrsphthsmargvrkvflrllpqllrmhvrplapaavqdtqsrlqngssgwsittgeevalclprsellfqqwqrqglvaaaleklekgpelglsqfcgslkqaapaiqacveacnliacarhqqshfdngneewflvgrvldrvcflamlslficgtagiflmahynrvpalpfpgdprpylpspd。

与uniprot参考编号p11230-1相关的乙酰胆碱受体的非限制性示例性序列在本文公开如下：

mtpgallmllgalgaplapgvrgseaegrlreklfsgydssvrparevgdrvrvsvglilaqlislnekdeemstkvyldlewtdyrlswdpaehdgidslritaesvwlpdvvllnnndgnfdvaldisvvvssdgsvrwqppgiyrsscsiqvtyfpfdwqnctmvfssysydssevslqtglgpdgqghqeihihegtfiengqweiihkpsrliqppgdprggregqrqevifyliirrkplfylvnviapcilitllaifvfylppdagekmglsifalltltvflllladkvpetslsvpiiikylmftmvlvtfsvilsvvvlnlhhrsphthqmplwvrqifihklplylrlkrpkperdlmpepphcsspgsgwgrgtdeyfirkppsdflfpkpnrfqpelsapdlrrfidgpnravallpelrevvssisyiarqlqeqedhdalkedwqfvamvvdrlflwtfiiftsvgtlvifldatyhlpppdpfp。

与uniprot参考编号q07001-1相关的乙酰胆碱受体的非限制性示例性序列在本文公开如下：

megpvltlgllaalavcgswglneeerlirhlfqekgynkelrpvahkeesvdvalaltlsnlislkeveetlttnvwiehgwtdnrlkwnaeefgnisvlrlppdmvwlpeivlennndgsfqisyscnvlvyhygfvywlppaifrsscpisvtyfpfdwqncslkfsslkytakeitlslkqdakenrtypvewiiidpegftengeweivhrparvnvdprapldspsrqditfyliirrkplfyiinilvpcvlisfmvnlvfylpadsgektsvaisvllaqsvfllliskrlpatsmaipligkfllfgmvlvtmvvvicvivlnihfrtpsthvlsegvkklfletlpellhmsrpaedgpspgalvrrssslgyiskaeeyfllksrsdlmfekqserhglarrlttarrppasseqaqqelfnelkpavdganfivnhmrdqnnyneekdswnrvartvdrlclfvvtpvmvvgtawiflqgvynqpppqpfpgdpysynvqdkrfi。

如本文所用，“甲状腺过氧化物酶”是指与该名称相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。与uniprot参考编号p07202相关的人甲状腺过氧化物酶的非限制性示例性序列在本文公开如下：

mralavlsvtlvmacteaffpfisrgkellwgkpeesrvssvleeskrlvdtamyatmqrnlkkrgilspaqllsfsklpeptsgviaraaeimetsiqamkrkvnlktqqsqhptdalsedllsiianmsgclpymlppkcpntclankyrpitgacnnrdhprwgasntalarwlppvyedgfsqprgwnpgflyngfplppvrevtrhviqvsnevvtdddrysdllmawgqyidhdiaftpqstskaafgggadcqmtcenqnpcfpiqlpeearpaagtaclpfyrssaacgtgdqgalfgnlstanprqqmngltsfldastvygsspalerqlrnwtsaegllrvharlrdsgraylpfvpprapaacapepgipgetrgpcflagdgrasevpsltalhtlwlrehnrlaaalkalnahwsadavyqearkvvgalhqiitlrdyiprilgpeafqqyvgpyegydstanptvsnvfstaafrfghatihplvrrldasfqehpdlpglwlhqaffspwtllrgggldplirgllarpaklqvqdqlmneelterlfvlsnsstldlasinlqrgrdhglpgynewrefcglprletpadlstaiasrsvadkildlykhpdnidvwlgglaenflprartgplfacligkqmkalrdgdwfwwenshvftdaqrrelekhslsrvicdntgltrvpmdafqvgkfpedfescdsitgmnleawretfpqddkcgfpesvengdfvhceesgrrvlvyscrhgyelqgreqltctqegwdfqpplckdvnecadgahppchasarcrntkggfqclcadpyelgddgrtcvdsgrlprvtwismslaalliggfagltstvicrwtrtgtkstlpisetgggtpelrcgkhqavgtspqraaaqdseqesagmegrdthrlpral。

如本文所用，“甲状腺受体”是指与该名称相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。在一些实施方案中，“甲状腺受体”包括“甲状腺刺激激素受体”。与uniprot参考编号p16473-1相关的甲状腺刺激激素受体的非限制性示例性序列在本文公开如下：

mrpadllqlvllldlprdlggmgcssppcechqeedfrvtckdiqripslppstqtlkliethlrtipshafsnlpnisriyvsidvtlqqleshsfynlskvthieirntrnltyidpdalkelpllkflgifntglkmfpdltkvystdiffileitdnpymtsipvnafqglcnetltlklynngftsvqgyafngtkldavylnknkyltvidkdafggvysgpslldvsqtsvtalpskglehlkeliarntwtlkklplslsflhltradlsypshccafknqkkirgileslmcnessmqslrqrksvnalnsplhqeyeenlgdsivgykekskfqdthnnahyyvffeeqedeiigfgqelknpqeetlqafdshydyticgdsedmvctpksdefnpcedimgykflrivvwfvsllallgnvfvllilltshyklnvprflmcnlafadfcmgmyllliasvdlythseyynhaidwqtgpgcntagfftvfaselsvytltvitlerwyaitfamrldrkirlrhacaimvggwvccfllallplvgissyakvsiclpmdtetplalayivfvltlnivafvivcccyvkiyitvrnpqynpgdkdtkiakrmavliftdficmapisfyalsailnkplitvsnskillvlfyplnscanpflyaiftkafqrdvfillskfgickrqaqayrgqrvppknstdiqvqkvthdmrqglhnmedvyelienshltpkkqgqiseeymqtvl。

与uniprot参考编号q59ga2-1相关的甲状腺刺激激素受体的非限制性示例性序列在本文公开如下：

prvpwkmrpadllqlvllldlprdlggmgcssppcechqeedfrvtckdiqripslppstqtlkliethlrtipshafsnlpnisriyvsidvtlqqleshsfynlskvthieirntrnltyidpdalkelpllkflgifntglkmfpdltkvystdiffileitdnpymtsipvnafqglcnetltlklynngftsvqgyafngtkldavylnknkyltvidkdafggvysgpslldvsqtsvtalpskglehlkeliarntwtlkklplslsflhltradlsypshccafknqkkirgileslmcnessmqslrqrksvnalnsplhqeyeenlgdsivgykekskfqdthnnahyyvffeeqedeiigfgqelknpqeetlqafdshydyticgdsedmvctpksdefnpcedimgykflrivvwfvsllallgnvfvllilltshyklnvprflmcnlafadfcmgmyllliasvdlythseyynhaidwqtgpgcntagfftvfaselsvytltvitlerwyaitfamrldrkirlrhacaimvggwvccfllallplvgissyakvsiclpmdtetplalayivfvltlnivafvivcccyvkiyitvrnpqynpgdkdtkiakrmavliftdficmapisfyalsailnkplitvsnskillvlfyplnscanpflyaiftkafqrdvfillskfgickrqaqayrgqrvppknstdiqvqkvthdmrqglhnmedvyelienshltpkkqgqiseeymqtvl。

与uniprot参考编号b4e0h2-1相关的甲状腺刺激激素受体的非限制性示例性序列在本文公开如下：

mrpadllqlvllldlprdlggmgcssppcechqeedfrvtckdiqripslppstqtlkliethlrivvwfvsllallgnvfvllilltshyklnvprflmcnlafadfcmgmyllliasvdlythseyynhaidwqtgpgcntagfftvfaselsvytltvitlerwyaitfamrldrkirlrhacaimvggwvccfllallplvgissyakvsiclpmdtetplalayivfvltlnivafvivcccyvkiyitvrnpqynpgdkdtkiakrmavliftdficmapisfyalsailnkplitvsnskillvlfyplnscanpflyaiftkafqrdvfillskfgickrqaqayrgqrvppknstdiqvqkvthemrqglhnmedvyelienshltpkkqgqiseeymqtvl。

如本文所用，“磷脂抗原”是指与该名称相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。磷脂抗原的一个非限制性实例是“β2-糖蛋白i”，其序列在本文公开如下：

mispvlilfssflchvaiagrtcpkpddlpfstvvplktfyepgeeitysckpgyvsrggmrkficpltglwpintlkctprvcpfagilengavryttfeypntisfscntgfylngadsakcteegkwspelpvcapiicpppsiptfatlrvykpsagnnslyrdtavfeclpqhamfgndtitctthgnwtklpecrevkcpfpsrpdngfvnypakptlyykdkatfgchdgysldgpeeiectklgnwsampsckasckvpvkkatvvyqgervkiqekfkngmlhgdkvsffcknkekkcsytedaqcidgtievpkcfkehsslafwktdasdvkpc。

如本文所用，“h4”是指与名称“组蛋白h4”相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。h4的规范序列在本文公开如下：sgrgkggkglgkggakrhrkvlrdniqgitkpairrlarrggvkrisgliyeetrgvlkvflenvirdavtytehakrktvtamdvvyalkrqgrtlygfgg。

如本文所用，“h2b”是指与名称“组蛋白h2b”相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。h2b的规范序列在本文公开如下：

pepaksapapkkgskkavtkaqkkdgkkrkrsrkesysvyvykvlkqvhpdtgisskamgimnsfvndiferiaseasrlahynkrstitsreiqtavrlllpgelakhavsegtkavtkytssk。

如本文所用，“h1”是指与名称“组蛋白h1”相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。h1的规范序列在本文公开如下：mtenstsapaakpkrakaskkstdhpkysdmivaaiqaeknragssrqsiqkyikshykvgenadsqiklsikrlvttgvlkqtkgvgasgsfrlakgdepkrsvafkktkkevkkvatpkkaakpkkaaskapskkpkatpvkkakkkpaatpkkakkpkvvkvkpvkaskpkkaktvkpkakssakraskkk。

如本文所用，“apob”是指与名称“载脂蛋白b”相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。apob的规范序列在本文公开如下：

mgprkpalrtpllllflllfldtsvwaqdevlenlsfscpkdatrfkhlrkyvynyeaesssgvqgtadsrsatkinckvelevpqicgfimrtnqctlkevygfnpegkalmkktknseefaaamsryelklaipegkqivlypdkdepkyilnikrgiisallvppeteedqqelfldtvygncstqvtvnsrkgtvptemsternlqqcdgfqpistsvsplalikglvhplstlisssqtcqytldpkrkhvseavcdeqhlflpfsyknkygimtrvtqklsledtpkinsrffsegtnrmglafestkstsspkqadavlktlqelkklsiseqnaqranlfnklvtelrgltgeaitsllpqlievsspitlqalvqcgqpqcythilqwlktekahpllvdivtylmalipnpstqrlqeifntakeqqsratlyalshavnsyfdvdhsrspvlqdiagyllkqidnectgnedhtflilrvignmgrtmeqvmpalkssvlscvrstkpslliqkaalqalrkmeledevrtilfdtfvngvapvekrlaaylllmknpsssdinkiaqllqweqseqvknfvashianilnseelyvqdlkvliknalensqfptimdfrkfsrnyqisksaslpmfdpvsvkiegnlifdpssylpresllkttltvfglasldlfeiglegkgfeptlealfgkqgffpdsvnkalywvngrvpdgvskvlvdhfgyttdgkheqdmvngimpivdklikdlkskeipearaylrilgkelsfvrlqdlqvlgklllsgaqtlqgipqmvvqairegskndlflhyifmdnafelptgaglqlqvsssgvftpgikagvrlelaniqaelvakpsvslefvtnmgiiipdfakssvqmntnffhesglearvalkagqlkviipspkrpvklfsgsntlhlvsttktevipplvenrqswstckplftgmnycttgaysnasstesasyypltgdtryelelrptgeveqysatatyellkedkslvdtlkflvqaegvqqseatvlfkynrrsrtlssevlipgfdvnfgtilrvndesakdkntyklildiqnkkitevslvghlsydkkgdgkikgvvsiprlqaearsevhthwsstkllfqmdssataygstiskrvtwrydneiiefdwntgtnvdtkkvasnfpvdlshyprmlheyanglldhrvpqtdvtfrdmgsklivatntwlqmatrglpypqtlqdhlnslselnllkmglsdfhipdnlflktdgrvkytmnrnkinidiplplggksskdlkmpesvrtpalnfksvgfhlpsrevqvptftipkthqlqvpllgvldlstnvysnlynwsasytggntsrdhfslqaqyrmktdsvvdlfsysvqgsgettydskntftlscdgslhhkfldskfkvshvekfgnspvskglltfetssalgpqmsatvhldskkkqhlyvkdikvdgqfrassfyaqgkyglscerdvttgqlsgesnmrfnstyfqgtnqivgmyqdgalsitstsdlqdgifkntaslkyenyeltlksdssgqyenfaasnkldvtfstqsallrsehqanykslrlvtllsgsltsqgvelnadilgtdkintgahkatlkiardglstsattnlkysplllenelnaelglsgasmklstngrfkehhakfsldgraaltevslgsiyqamilgadsknifnfklsreglrlsndlmgsyaemkldhthslniaglsldffskmdniysgdkfykqnfnlqlqpysfittlsndlrygaldltnngrfrleplklnvggnfkgtyqnnelkhiytisytdlvvasyradtvakvqgvefshrlnadiegltssvdvttsynsdplhfnnvfhfslapftlgidthtsgdgklsfwgehtgqlyskfllkaeplalivshdykgstshslpyessistalehtvsalltpaeqtstwkfktklndkvysqdfeayntkdkigvelsgradlsglyspiklpffysepvnvlnglevndavdkpqeftiiavvkydknqdvhtinlpffkslpdylernrrgmislleamrgelqrlsvdqfvrkyraalsrlpqqihhylnasdwerqvagakekitsfmenyritdndvliaidsakinfneklsqletyaiqfdqyikdnydphdlkrtiaeiidriieklkildeqyhirvnlaksihnlylfvenvdlnqvsssntswiqnvdsnyqvriqiqeklqqlrtqiqnidiqqlaaevkrqmdaidvtmhldqlrtailfqrisdiidrvkyfvmnliedfkvtekintfrvivreliekyevdqhiqvlmdksvelahryslseplqklsnvlqrieikdyyeklvgfiddtvewlkalsfkntieelnrltdmlvkklkafdyhqfvdktnskiremtqrinaeiqalklpqkmealkllvedfkttvsnslerlkdtkvtvvidwlqdiltqmkdhfqdtledvrdriyqmdiqrelehflslvnqvystlvtymsdwwtltaknitdfaeqysiqnwaesikvlveqgfivpemqtflwtmpafevslralqegnfqtpvfivpltdlripsirinfkmlknikiplrfstpeftllntfhvhsftidlleikakiirtidqilsselqwplpemylrdldvvniplarltlpdfhvpeitipeftipnvnlkdlhvpdlhipefqlphlshtieipafgklhsilkiqsplfildananiqnvttsgnkaeivasvtakgesqfealnfdfqaqaqflelnphppvlkesmnfsskhvrmehegeivfdgkaiegksdtvaslhteknevefnngmtvkvnnqltldshtkyfhklsvprldfsskaslnneiktlleaghvaltssgtgswnwacpnfsdegihssqisftvdgpiafvglsnningkhlrviqkltyesgflnyskfeveskvesqhvgssiltangrallkdakaemtgehnanlngkvigtlknslffsaqpfeitastnnegnlkvgfplkltgkidflnnyalflspraqqaswqastrfnqykynqnfsainnehnieasigmngdanldflnipltipeinlpytefktpllkdfsiweetglkeflkttkqsfdlsvkaqykknsdkhsivvplgmfyefilnnvnswdrkfekvrnnalhflttsyneakikvdkyktenslnqpsgtfqnhgytipvvnievspfavetlasshviptaistpsvtipgpnimvpsyklvlpplelpvfhgpgnlfkfflpdfkgfntidniyipamgnftydfsfkssvitlntnaglynqsdivahflssssfvtdalqyklegtsrlmrkrglklatavsltnkfvkgshdstisltkknmeasvrttanlhapifsmnfkqelngntkskptvsssielnydfnssklhstatggidhkfslesltsyfsiesftkgnikssflsqeysgsvaneanvylnskgtrssvrlqgaskvdgiwnvevgenfageatlqriyttwehnmknhlqvysyfftkgkqtcratlelspwtmstllqvhvsqlsslldlhhfdqevilkantknqkiswkggvqvesrvlqhnaqfsndqeeirldlagsldgqlwdleaiflpvygkslqellqmdgkrqylqastsllytknpngyllslpvqeladrfiipgiklndfsgvkiykklstspfalnltmlpkvkfpgidlltqystpegssvpifeatipeihltvsqftlpkslpvgntvfdlnklanmiadvdlpsvtlpeqtivipplefsvpagifipffgeltaragmasplynvtwsagwktkadhvetfldsmctstlqfleyalkvvethkieedlltynikgtlqhcdfnveynedglfkglwdwqgeahlditspaltdfhlyykedktslsasaasstigtvgldsstddqsvelnvyfhpqsppekklsifktewrykesdgeryikinweeeaasrllgslksnvpkaskaiydyankyhleyvsselrkslqvnaeharrmvdemnmsfqrvardtyqnlyeemlaqkslsipenlkkrvldsivhvtqkyhmavmwlmdsfihflkfnrvqfpgyagtytvdelytivmketkkslsqlfnglgnllsyvqnqveksrlinditfkcpffskpcklkdlilifreelnilsnigqqdikfttilsslqgflervldiieeqikclkdnestcvadhinmvfkiqvpyafkslrediyfvlgefndflqsilqegsyklqqvhqymkalreeyfdpsmvgwtvkyyeieenmveliktllvsfrdvyseysvtaadfaskmstqveqfvsrdireylsmltdingkwmekiaelsivaketmkswvtavakimsdypqqfhsnlqdfsdqlssyyekfvgestrlidlsiqnyhvflryitellrklqvatannvspyiklaqgelmitf。

如本文所用，“apoe”是指与名称“载脂蛋白e”相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。与uniprot参考编号p02649相关的人apoe的非限制性示例性序列在本文公开如下：

mkvlwaallvtflagcqakveqavetepepelrqqtewqsgqrwelalgrfwdylrwvqtlseqvqeellssqvtqelralmdetmkelkaykseleeqltpvaeetrarlskelqaaqarlgadmedvcgrlvqyrgevqamlgqsteelrvrlashlrklrkrllrdaddlqkrlavyqagaregaerglsairerlgplveqgrvraatvgslagqplqeraqawgerlrarmeemgsrtrdrldevkeqvaevrakleeqaqqirlqaeafqarlkswfeplvedmqrqwaglvekvqaavgtsaapvpsdnh。

如本文所用，“nmdar”是指与名称“n-甲基-d-天冬氨酸受体”相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。与uniprot参考编号q13224-1相关的n-甲基-d-天冬氨酸受体的非限制性示例性序列在本文公开如下：

mkpraeccspkfwlvlavlavsgsrarsqksppsigiavilvgtsdevaikdahekddfhhlsvvprvelvamnetdpksiitricdlmsdrkiqgvvfaddtdqeaiaqildfisaqtltpilgihggssmimadkdessmffqfgpsieqqasvmlnimeeydwyifsivttyfpgyqdfvnkirstiensfvgweleevllldmslddgdskiqnqlkklqspiillyctkeeatyifevansvgltgygytwivpslvagdtdtvpaefptglisvsydewdyglparvrdgiaiittaasdmlsehsfipepksscynthekriyqsnmlnrylinvtfegrnlsfsedgyqmhpklviillnkerkwervgkwkdkslqmkyyvwprmcpeteeqeddhlsivtleeapfvivesvdplsgtcmrntvpcqkrivtenktdeepgyikkcckgfcidilkkisksvkftydlylvtngkhgkkingtwngmigevvmkraymavgsltineersevvdfsvpfietgisvmvsrsngtvspsaflepfsadvwvmmfvmllivsavavfvfeyfspvgynrcladgrepggpsftigkaiwllwglvfnnsvpvqnpkgttskimvsvwaffaviflasytanlaafmiqeeyvdqvsglsdkkfqrpndfsppfrfgtvpngsternirnnyaemhaymgkfnqrgvddallslktgkldafiydaavlnymagrdegcklvtigsgkvfastgygiaiqkdsgwkrqvdlailqlfgdgemeelealwltgichneknevmssqldidnmagvfymlgaamalslitficehlfywqfrhcfmgvcsgkpgmvfsisrgiyscihgvaieerqsvmnsptatmnnthsnilrllrtaknmanlsgvngspqsaldfirressvydisehrrsfthsdcksynnppceenlfsdyisevertfgnlqlkdsnvyqdhyhhhhrphsigsassidglydcdnppfttqsrsiskkpldiglpsskhsqlsdlygkfsfksdrysghddlirsdvsdisthtvtygniegnaakrrkqqykdslkkrpasaksrrefdeielayrrrpprspdhkryfrdkeglrdfyldqfrtensphwehvdltdiykersddfkrdsvsgggpctnrshikhgtgdkhgvvsgvpapweknltnvewedrsggnfcrscpsklhnysttvtgqnsgrqacirceackkagnlydisednslqeldqpaapvavtsnasttkypqsptnskaqkknrnklrrqhsydtfvdlqkeealaprsvslkdkgrfmdgspyahmfemsagestfannkssvptaghhhhnnpgggylskslypdrvtqnpfiptfgddqcllhgsksyffrqptvagaskarpdfralvtnkpvsalhgavparfqkdicignqsnpcvpnnknprafngssnghvyeklssiesdv。

如本文所用，“电压门控钾通道”通常是指对于钾为特异性的且对细胞的膜电位的电压变化敏感的跨膜通道。在动作电位过程中，所述通道在使去极化细胞返回静息状态中起关键作用。与uniprot参考编号p22459-1相关的电压门控钾通道的非限制性示例性序列在本文公开如下：

mevamvsaessgcnshmpygyaaqararererlahsraaaaaavaaataavegsggsgggshhhhqsrgactshdpqssrgsrrrrrqrsekkkahyrqssfphcsdlmpsgseekilrelseeeedeeeeeeeeeegrfyyseddhgdecsytdllpqdeggggyssvrysdccervvinvsglrfetqmktlaqfpetllgdpekrtqyfdplrneyffdrnrpsfdailyyyqsggrlkrpvnvpfdifteevkfyqlgeeallkfredegfvreeedralpenefkkqiwllfeypessspargiaivsvlvilisivifcletlpefrddrdlvmalsagghggllndtsaphlensghtifndpffivetvcivwfsfefvvrcfacpsqalffknimniidivsilpyfitlgtdlaqqqgggngqqqqamsfailriirlvrvfrifklsrhskglqilghtlrasmrelgllifflfigvilfssavyfaeadeptthfqsipdafwwavvtmttvgygdmkpitvggkivgslcaiagvltialpvpvivsnfnyfyhreteneeqtqltqnavscpylpsnllkkfrsstssslgdkseylemeegvkeslcakeekcqgkgddsetdknncsnakavetdv。

如本文所用，“弹性蛋白”是指与该名称相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。弹性蛋白的规范序列的长度为786个氨基酸并且在本文公开如下：

magltaaaprpgvlllllsilhpsrpggvpgaipggvpggvfypgaglgalgggalgpggkplkpvpgglagaglgaglgafpavtfpgalvpggvadaaaaykaakagaglggvpgvgglgvsagavvpqpgagvkpgkvpgvglpgvypggvlpgarfpgvgvlpgvptgagvkpkapgvggafagipgvgpfggpqpgvplgypikapklpggyglpyttgklpygygpggvagaagkagyptgtgvgpqaaaaaaakaaakfgagaagvlpgvggagvpgvpgaipgiggiagvgtpaaaaaaaaaakaakygaaaglvpggpgfgpgvvgvpgagvpgvgvpgag

ipvvpgagipgaavpgvvspeaaakaaakaakygarpgvgvggiptygvgaggfpgfgvgvggipgvagvpgvggvpgvggvpgvgispeaqaaaaakaakygaagagvlgglvpgpqaavpgvpgtggvpgvgtpaaaaakaaakaaqfglvpgvgvapgvgvapgvgvapgvglapgvgvapgvgvapgvgvapgigpggvaaaaksaakvaakaqlraaaglgagipglgvgvgvpglgvgagvpglgvgagvpgfgagadegvrrslspelregdpsssqhlpstpssprvpgalaaakaakygaavpgvlgglgalggvgipggvvgagpaaaaaaakaaakaaqfglvgaaglgglgvgglgvpgvgglggippaaaakaakygaaglggvlggagqfplggvaarpgfglspifpggaclgkacgrkrk。

如本文所用，“irbp”是指与名称“光感受器间类维生素a结合蛋白”相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。

如本文所用，“阻滞性(arresting)人视网膜s抗原”是指与该名称相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。一个非限制性示例性序列在本文公开如下：

maasgktsksepnhvifkkisrdksvtiylgnrdyidhvsqvqpvdgvvlvdpdlvkgkkvyvtltcafrygqedidvigltfrrdlyfsrvqvyppvgaastptklqesllkklgsntypflltfpdylpcsvmlqpapqdsgkscgvdfevkafatdstdaeedkipkkssvrllirkvqhaplemgpqpraeaawqffmsdkplhlavslnkeiyfhgepipvtvtvtnntektvkkikafveqvanvvlyssdyyvkpvameeaqekvppnstltktltllpllannrerrgialdgkikhedtnlasstiikegidrtvlgilvsyqikvkltvsgflgeltssevatevpfrlmhpqpedpakesyqdanlvfeefarhnlkdageaeegkrdkndvde。

如本文所用，“肌球蛋白”是指与该名称相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。与uniprot参考编号p35580-1相关的肌球蛋白的非限制性示例性序列在本文公开如下：

maqrtgledperylfvdraviynpatqadwtakklvwipserhgfeaasikeergdevmvelaengkkamvnkddiqkmnppkfskvedmaeltclneasvlhnlkdryysgliytysglfcvvinpyknlpiyseniiemyrgkkrhempphiyaisesayrcmlqdredqsilctgesgagktentkkviqylahvasshkgrkdhnipgelerqllqanpilesfgnaktvkndnssrfgkfirinfdvtgyivganietylleksravrqakdertfhifyqllsgagehlksdlllegfnnyrflsngyipipgqqdkdnfqetmeamhimgfsheeilsmlkvvssvlqfgnisfkkerntdqasmpentvaqklchllgmnvmeftrailtprikvgrdyvqkaqtkeqadfavealakatyerlfrwlvhrinkaldrtkrqgasfigildiagfeifelnsfeqlcinytneklqqlfnhtmfileqeeyqregiewnfidfgldlqpcidlierpanppgvlalldeecwfpkatdktfveklvqeqgshskfqkprqlkdkadfciihyagkvdykadewlmknmdplndnvatllhqssdrfvaelwkdvdrivgldqvtgmtetafgsayktkkgmfrtvgqlykesltklmatlrntnpnfvrciipnhekragkldphlvldqlrcngvlegiricrqgfpnrivfqefrqryeiltpnaipkgfmdgkqacermiraleldpnlyrigqskiffragvlahleeerdlkitdiiiffqavcrgylarkafakkqqqlsalkvlqrncaaylklrhwqwwrvftkvkpllqvtrqeeelqakdeellkvkekqtkvegeleemerkhqqlleeknilaeqlqaetelfaeaeemrarlaakkqeleeilhdlesrveeeeernqilqnekkkmqahiqdleeqldeeegarqklqlekvtaeakikkmeeeillledqnskfikekklmedriaecssqlaeeeekaknlakirnkqevmisdleerlkkeektrqelekakrkldgettdlqdqiaelqaqidelklqlakkeeelqgalargddetlhknnalkvvrelqaqiaelqedfesekasrnkaekqkrdlseelealkteledtldttaaqqelrtkreqevaelkkaleeetknheaqiqdmrqrhataleelseqleqakrfkanleknkqgletdnkelacevkvlqqvkaesehkrkkldaqvqelhakvsegdrlrvelaekasklqneldnvstlleeaekkgikfakdaaslesqlqdtqellqeetrqklnlssrirqleeeknslqeqqeeeeearknlekqvlalqsqladtkkkvdddlgtiesleeakkkllkdaealsqrleekalaydklektknrlqqelddltvdldhqrqvasnlekkqkkfdqllaeeksisaryaeerdraeaeareketkalslaraleealeakeeferqnkqlradmedlmsskddvgknvhelekskraleqqveemrtqleeledelqatedaklrlevnmqamkaqferdlqtrdeqneekkrllikqvreleaelederkqralavaskkkmeidlkdleaqieaankardevikqlrklqaqmkdyqreleearasrdeifaqskesekklksleaeilqlqeelasserarrhaeqerdeladeitnsasgksalldekrrleariaqleeeleeeqsnmellndrfrkttlqvdtlnaelaaersaaqksdnarqqlerqnkelkaklqelegavkskfkatisaleakigqleeqleqeakeraaanklvrrtekklkeifmqvederrhadqykeqmekanarmkqlkrqleeaeeeatranasrrklqrelddateaneglsrevstlknrlrrggpisfsssrsgrrqlhlegaslelsdddtesktsdvnetqppqse。

肌球蛋白的另一个非限制性示例性序列在本文公开如下：

mtdaqmadfgaaaqylrksekerleaqtrpfdirtecfvpddkeefvkakilsreggkviaetengktvtvkedqvlqqnppkfdkiedmamltflhepavlfnlkerya

awmiytysglfcvtvnpykwlpvynaevvaayrgkkrseapphifsisdnayqymltdrenqsilitgesgagktvntkr

viqyfasiaa

igdrgkkdnanankgtledqiiqanpaleafgnaktvrndnssrfgkfirihfgatgklasadietylleksrvifqlkaernyhifyqilsnkkpelldmllvtnnpydyafvsqgevsvasiddseelmatdsafdvlgftseekagvykltgaimhygnmkfkqkqreeqaepdgtedadksaylmglnsadllkglchprvkvgneyvtkgqsvqqvyysigalakavyekmfnwmvtrinatletkqprqyfigvldiagfeifdfnsfeqlcinftneklqqffnhhmfvleqe

eykkegiewtfidfgmdlqacidliekpmg

imsileeecmfpkatdmtfkaklydnhlgksnnfqkprnikgkpeahfslihyagtvdynilgwleknkdplnetvvglyqksslklmatlfssyatadtgdsgkskggkkkgssfqtvsalhrenlnklmtnlrtthphfvrciipnerkapgvmdnplvmhqlrcngvlegiricrkgfpnrilygdf

rqryrilnpvaipegqfidsrkgaekllssldidhnqykf

ghtkvffkagllglleemrderlsriitriqaqargqlmriefkkiverrdallviqwnirafmgvknwp

wmklyfkikpllksaetekematmkeefgriketleksearrkeleekmvsllqekndlqlqvqaeqdnlndaeercdqliknkiqleakvkemnerledeeemnaeltakkrkledecselkkdiddleltlakvekekhatenkvknlteemagldeiiakltkekkalqeahqqalddlqaeedkvn

tlskskvkleqqvddlegsleqekkvrmdlerakrklegdlkltqesimdlendklqleeklkkkefdinqqnskiedeqvlalqlqkklkenqarieeleeeleaerta

rakveklrsdlsreleeiserleeaggatsvqiemnkkreaefqkmrrdleeatlqheataaalrkkhadsvaelgeqidnlqrvkqklekeksefklelddvtsnmeqiikakanlekvsrtledqaneyrvkleeaqrslndfttqraklqtengelsrqleekealisqltrgklsytqqmedlkrq

leeegkaknalahalqsarhdcdllreqyeeeteakaelqrvlskansevaqcrtkyetdaiqrteeleeakkklaqrlqdaeeaveavnakcsslektkhrlqneiedl

mvdversnaaaaaldkkqrnfdkilaewkqkyeesqselessqkearslstelfklknayeeslehletfkrenknlqeeisdlteqlgeggknvhelekvrkqleveklelqsaleeaeasleheegkilraqlefnqikaeierklaekdeemeqakrnhqrvvdslqtsldaetrsrnevlrvkkkm

egdlnemeiqlshanrmaaeaqkqvkslqsllkdtqiqlddavranddlkeniaiverrnnllqaeleelravveqtersrkladrelietservqllhsqntslinqkk

kmdadlsqlqseveeavqecrnaeekakkaithaammaeelkkeqdtsahlermkknmeqtikdlqhrldeaeqialkggkkqlqklearvrelegeleaeqkrnaesvkgmrkserrikeltyqteedkknllrlqdlvdklqlkvkaykrqaeeaeeqantnlskfrkvqheldeaeeradiaesqvn

klraksrdigakqkmhdee。

如本文所用，“cd1d结合脂质抗原”通常是指与非经典mhccd1d结合的脂质抗原。

如本文所用，“hsp”是指与名称“热休克蛋白”相关的蛋白质或其生物等同物的所有同种型、变体和其片段。在一些实施方案中，热休克蛋白包括热休克蛋白60。与uniprot参考编号p10809-1相关的热休克蛋白60的非限制性示例性序列在本文公开如下：

mlrlptvfrqmrpvsrvlaphltrayakdvkfgadaralmlqgvdlladavavtmgpkgrtviieqswgspkvtkdgvtvaksidlkdkyknigaklvqdvanntneeagdgtttatvlarsiakegfekiskganpveirrgvmlavdaviaelkkqskpvttpeeiaqvatisangdkeigniisdamkkvgrkgvitvkdgktlndeleiiegmkfdrgyispyfintskgqkcefqdayvllsekkissiqsivpaleianahrkplviiaedvdgealstlvlnrlkvglqvvavkapgfgdnrknqlkdmaiatggavfgeegltlnledvqphdlgkvgevivtkddamllkgkgdkaqiekriqeiieqldvttseyekeklnerlaklsdgvavlkvggtsdvevnekkdrvtdalnatraaveegivlgggcallrcipaldsltpanedqkigieiikrtlkipamtiaknagvegslivekimqsssevgydamagdfvnmvekgiidptkvvrtalldaagvasllttaevvvteipkeekdpgmgamggmgggmgggmf。

多发性硬化(ms)也称为“弥漫性硬化”、“弥漫性脑脊髓炎”或“变应性脑脊髓炎”。ms是一种炎性疾病，其中脑和脊髓轴突周围的脂肪髓鞘受损，导致脱髓鞘和瘢痕形成以及广泛的体征和症状。多发性硬化相关的病症包括例如视神经脊髓炎谱系障碍(nmo)、葡萄膜炎、神经性疼痛等。

“髓磷脂少突胶质细胞糖蛋白”(mog)是一种被认为在中枢神经系统(cns)的神经髓鞘形成过程中至关重要的糖蛋白。在人类中该蛋白质由mog基因编码。据推测，它充当必要的“粘附分子”，为髓鞘提供结构完整性，并且已知在少突胶质细胞上晚期形成。genbank登录号nm_001008228.2和np_001008229.1分别代表mog基因的mrna和蛋白质序列。与这些genbank登录号中的每一个相关的序列通过引用并入以用于所有目的。

如本文所用，术语“癌症”和“癌性”是指或描述哺乳动物中的生理状态，其特征通常在于不受调节的细胞生长。癌症的实例包括但不限于癌、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病及其转移。“转移”意指致病生物体或恶性细胞或癌细胞通过血液或淋巴管或膜表面转移至身体的其他部位。这类癌症的非限制性实例包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞状癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃肠癌、胰腺癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、肝癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌和各种类型的头颈癌。

如本文所用，术语“糖尿病”意指由遗传和环境因素的组合引起的碳水化合物代谢的可变紊乱，并且其特征通常在于胰岛素分泌或利用不充分、尿产生过量、血液和尿中的糖过量，以及口渴、饥饿和体重减轻。糖尿病分为1型糖尿病和2型糖尿病。非肥胖糖尿病(“nod”)小鼠是一种用于研究和治疗糖尿病的公认的动物模型。小鼠中的1型糖尿病(t1d)与自身反应性cd8+t细胞相关。非肥胖糖尿病(nod)小鼠发展成t1d的形式，非常类似于人t1d，它是由识别越来越多的自身抗原的t细胞选择性破坏胰腺β细胞而产生的。虽然t1d的启动明确需要cd4+细胞的贡献，但有令人信服的证据表明t1d是cd8+t细胞依赖性的。已经发现，nod小鼠中的大部分胰岛相关的cd8+细胞使用cdr3不变的vα17-jα42+tcr，其被称为“8.3-tcr样”。在mhc分子k^d的背景中识别模拟表位nrp-a7(使用组合肽文库定义)的这些细胞已经是最早的nod胰岛cd8+浸润物的重要组分，是致糖尿病的，并且靶向来自胰岛特异性的葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基相关蛋白(igrp)的肽，igrp是一种功能未知的蛋白质。识别该肽(igrp206-214，类似于nrp-a7)的cd8+细胞在循环中非常常见(>1/200cd8+细胞)。值得注意的是，在nod小鼠中胰岛炎发展为糖尿病总是伴随着循环igrp206-214反应性cd8+池的周期性扩大，以及其胰岛相关对应物的急性(avid)成熟。最近，已经证明，nod小鼠中的胰岛相关cd8+细胞识别多个igrp表位，这表明igrp是cd8+细胞的主要自身抗原，至少在鼠t1d中是这样。nod胰岛相关cd8+细胞，特别是在疾病过程早期发现的那些细胞，也识别胰岛素表位(insb15-23)。

如本文所用，术语“前驱糖尿病”意指以亚临床β细胞损伤为特征的在糖尿病病况之前的无症状期，其中患者表现出正常的血浆葡萄糖水平。前驱糖尿病还以存在胰岛细胞自身抗体(ica)为特征，并且在接近临床症状发作时可能伴有对葡萄糖的不耐受。

如本文所用，术语“多发性硬化相关的病症”意指与对ms的易感性或与ms共存的病症。这类病症的非限制性实例包括视神经脊髓炎谱系障碍(nmo)、葡萄膜炎、神经性疼痛、硬化、动脉粥样硬化、动脉硬化、弥漫性硬化、系统性硬化、脊柱光学ms，原发性进行性ms(ppms)和复发缓解性ms(rrms)、进行性系统性硬化和运动失调性硬化。

术语“表位”和“抗原决定簇”可互换使用，指的是b和/或t细胞响应或识别的抗原上的位点。b细胞表位可以由连续氨基酸，或通过蛋白质三级折叠并列的非连续氨基酸形成。由连续氨基酸形成的表位通常在暴露于变性溶剂时保留，而通过三级折叠形成的表位通常在用变性溶剂处理时丢失。表位通常包含至少3个，且更通常包含至少5个或8-20个独特空间构象的氨基酸。确定表位的空间构象的方法包括例如x射线晶体分析法和2维核磁共振。参见，例如，glenne.morris,epitopemappingprotocols(1996)。对于cd8细胞，t细胞识别约九个氨基酸的连续表位，或者对于cd4细胞，识别约13-15个氨基酸的连续表位。识别表位的t细胞可通过测量抗原依赖性增殖的体外测定来鉴定，如通过致敏t细胞响应于表位的³h-胸苷掺入(burke等人,j.inf.dis.,170:1110-1119,1994)、通过抗原依赖性杀伤(细胞毒性t淋巴细胞测定，tigges等人,j.immunol.,156(10):3901-3910,1996)或通过细胞因子分泌所确定的。细胞介导的免疫应答的存在可通过增殖测定(cd4⁺t细胞)或ctl(细胞毒性t淋巴细胞)测定来确定。

任选地，抗原或优选抗原的表位可与其他蛋白质如mhc和mhc相关蛋白质化学缀合，或表达为含有该蛋白质的融合蛋白。

如本文所用，术语“患者”和“受试者”同义使用，并且指哺乳动物。在一些实施方案中，该患者是人。在其他实施方案中，该患者是需要兽医医疗的哺乳动物或通常在实验室中使用的哺乳动物。在一些实施方案中，该哺乳动物是小鼠、大鼠、猴、犬、猫、牛、马或绵羊。

如在本公开内容中所用，术语“多核苷酸”是指重组的或已经分离的不含总基因组核酸的核酸分子。在术语“多核苷酸”中包括寡核苷酸(长度为100个或更少残基的核酸)、重组载体，包括例如质粒、粘粒、噬菌体、病毒等。在某些方面，多核苷酸包括从其天然存在的基因或蛋白质编码序列中基本分离的调节序列。多核苷酸可以是rna、dna、其类似物或它们的组合。编码全部或部分多肽的核酸可含有以下长度的编码这类多肽的全部或一部分的连续核酸序列：10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、441、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、850、860、870、880、890、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990、1000、1010、1020、1030、1040、1050、1060、1070、1080、1090、1095、1100、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、9000、10000个或更多个核苷酸、核苷或碱基对。还想到来自给定物种的特定多肽可由含有天然变异的核酸来编码，所述核酸具有略微不同的核酸序列，但编码相同或基本相似的蛋白质、多肽或肽。

多核苷酸由四种核苷酸碱基的特定序列构成：腺嘌呤(a)；胞嘧啶(c)；鸟嘌呤(g)；胸腺嘧啶(t)；以及当多核苷酸是rna时用尿嘧啶(u)代替胸腺嘧啶。因此，术语“多核苷酸序列”是多核苷酸分子的字母表示。这种字母表示可输入到具有中央处理单元的计算机的数据库中，并用于生物信息学应用，如功能基因组学和同源性检索。

如本文关于核酸如dna或rna所用的术语“分离的”或“重组的”是指分别与存在于大分子以及多肽的天然来源中的其他dna或rna分离的分子。术语“分离或重组的核酸”意在包括并非以片段形式天然存在的且不会在自然状态中发现的核酸片段。术语“分离的”在本文中也用于指与其他细胞蛋白质分离的多核苷酸、多肽和蛋白质，并且意在包括纯化的和重组的多肽。在其他实施方案中，术语“分离的或重组的”意指与细胞组分以及其他组分分开，这些组分在正常情况下在自然界中与细胞、组织、多核苷酸、肽、多肽、蛋白质、抗体或其片段相关联。例如，分离的细胞是与具有不同表型或基因型的组织或细胞分离的细胞。分离的多核苷酸与在其原始或天然环境中例如在染色体上通常关联的3’和5’连续核苷酸分离。对于本领域技术人员显而易见的是，非天然存在的多核苷酸、肽、多肽、蛋白质、抗体或其片段不需要“分离”来将它与其天然存在的对应物区分开。

与另一序列具有一定百分比(例如80％、85％、90％或95％)的“序列同一性”的多核苷酸或多核苷酸区域(或多肽或多肽区域)意味着，当比对时，所述百分比的碱基(或氨基酸)在比较两个序列时是相同的。比对和百分同源性或序列同一性可以使用本领域已知的软件程序来确定，例如，currentprotocolsinmolecularbiology(ausubel等人编著,1987)增刊30的第7.7.18节，表7.7.1中所描述的那些程序。优选地，使用默认参数进行比对。某一种比对程序为blast，使用默认参数。尤其是，某些程序是blastn和blastp，使用以下默认参数：遗传密码＝标准；过滤器＝无；链＝两条；截止值＝60；预期值＝10；矩阵＝blosum62；描述＝50个序列；排序方式＝高评分；数据库＝非冗余，genbank+embl+ddbj+pdb+genbankcds翻译+swissprotein+spupdate+pir。这些程序的详情可在以下因特网网址找到：ncbi.nlm.nih.gov/cgi-bin/blast。

在没有明确列举的情况下应当推断，除非另有预期，当本公开内容涉及抗原、多肽、蛋白质、多核苷酸或抗体时，其等同物或生物等同物在本公开内容的范围内。如本文所用，当提及参考抗原、蛋白质、抗体、片段、多肽或核酸时，术语“其生物等同物”意在与“其等同物”同义，并且意指具有最小同源性，同时仍保持所需的结构或功能性的那些等同物。除非本文明确说明，预期本文提及的任何多核苷酸、多肽或蛋白质还包括其等同物。在一方面，等同的多核苷酸是在严格条件下与如本文所述用于所述方法的多核苷酸或该多核苷酸的互补序列杂交的多核苷酸。在另一方面，等同的抗体或抗原结合多肽意指以至少70％、或备选地至少75％、或备选地至少80％、或备选地至少85％、或备选地至少90％或备选地至少95％的亲和力或更高亲和力与参考抗体或抗原结合片段结合的抗体或抗原结合多肽。在另一方面，在竞争elisa测定中，其等同物与抗体或抗原结合片段竞争结合其抗原。在另一方面，等同物意指至少约80％的同源性或同一性，以及备选地至少约85％、或备选地至少约90％、或备选地至少约95％、或备选地98％的百分同源性或同一性，并且表现出与参考蛋白质、多肽或核酸基本上等同的生物活性。

“杂交”是指这样一种反应，其中一个或多个多核苷酸反应形成经由核苷酸残基的碱基之间的氢键键合而稳定化的复合物。氢键键合可通过watson-crick碱基配对、hoogstein结合或以任何其他的序列特异性方式发生。该复合物可包含两条链以形成双链体结构、三条链或更多链以形成多链复合物、单个自杂交链或它们的任何组合。杂交反应可以构成更广泛的过程中的步骤，如启动聚合酶链(pc)反应或核酶对多核苷酸的酶切。

严格杂交条件的实例包括：约25℃至约37℃的温育条件；约6xssc至约10xssc的杂交缓冲液浓度；约0％至约25％的甲酰胺浓度；以及约4xssc至约8xssc的洗涤溶液。中度杂交条件的实例包括：约40℃至约50℃的温育条件；约9xssc至约2xssc的缓冲液浓度；约30％至约50％的甲酰胺浓度；以及约5xssc至约2xssc的洗涤溶液。高度严格杂交条件的实例包括：约55℃至约68℃的温育条件；约1xssc至约0.1xssc的缓冲液浓度；约55％至约75％的甲酰胺浓度；以及约1xssc、0.1xssc或去离子水的洗涤溶液。一般而言，杂交温育时间为5分钟至24小时，具有1个、2个或更多个洗涤步骤，并且洗涤温育时间为约1、2或15分钟。ssc为0.15mnacl和15mm柠檬酸盐缓冲液。应当理解，可以采用使用其他缓冲液系统的ssc的等同物。

“同源性”或“同一性”或“相似性”是指两种肽之间或两种核酸分子之间的序列相似性。同源性可以通过比较每个序列中的位置来确定，所述序列可以为了比较目的而进行比对。当比较的序列中的位置被相同碱基或氨基酸占据时，则所述分子在该位置处是同源的。序列之间的同源性程度是所述序列共有的匹配或同源位置的数目的函数。“不相关”或“非同源”序列与本公开内容的序列之一共有小于40％的同一性或备选地小于25％的同一性。

“同源性”或“同一性”或“相似性”也可指在严格条件下杂交的两个核酸分子。

如本文所用，术语“治疗”、“处理”等在本文中用来指获得所需的药理学和/或生理学效应。就部分或完全治愈病症和/或可归因于该病症的不良作用而言，该效应可以是治疗性的。在一方面，治疗指示利用已建立的标准，疾病的体征减轻。

如本文所用，与肿瘤学有关的术语“治疗”或“处理”意指在患者中对疾病或病况或相关病症的任何治疗，包括抑制该疾病或病况，即阻止或抑制临床症状的发展，如癌症中的恶病质；和/或减轻该疾病或病况，即引起临床症状的消退，例如增加总生存期或减少肿瘤负荷。

在一些方面，术语“治疗”是指临床结果的改善。术语“临床结果”是指涉及患者对治疗的反应的任何临床观察结果或测量结果。临床结果的非限制性实例包括肿瘤反应(tr)、总生存期(os)、无进展生存期(pfs)、无病生存期、到肿瘤复发的时间(ttr)、到肿瘤进展的时间(ttp)、相对风险(rr)、毒性或副作用。“总生存期”(os)意指与原始或未治疗的个体或患者相比预期寿命的延长。“无进展生存期”(pfs)或“到肿瘤进展的时间”(ttp)表示在治疗期间和治疗之后癌没有生长的时间长度。无进展生存期包括患者已经历完全反应或部分反应的时间长度以及患者已经历病情稳定的时间长度。如本文所用并且由国家癌症研究所(nationalcancerinstitute)定义的“肿瘤复发”是通常在检测不到癌症的一段时间之后复发(再发)的癌症。癌症可在与最初(原发)肿瘤相同的位置或在身体的另一位置再发。这也可称为复发癌症。“到肿瘤复发的时间”(ttr)被定义为从癌症诊断日期到首次复发、死亡或直到最后一次联系(如果该患者在最后一次联系时没有任何肿瘤复发)的日期之间的时间。如果患者没有复发，那么在死亡或最后一次随访时审查ttr。统计学和数学流行病学中的“相对风险”(rr)是指事件(或发展疾病)相对于暴露的风险。相对风险是暴露组与非暴露组中发生该事件的概率的比值。

“组合物”旨在表示活性剂和另一种惰性(例如，可检测试剂或标记物)或活性的化合物或组合物如佐剂的组合。在某些实施方案中，该组合物不包含佐剂。

“药物组合物”旨在包括活性剂与惰性或活性的载体的组合，使得该组合物适合于体外、体内或离体的诊断性或治疗性用途。

术语“功能上等同的密码子”在本文中用来指编码相同氨基酸的密码子，如精氨酸或丝氨酸的六个密码子，也指编码生物学上等同的氨基酸的密码子(参见表2)。

如本文所用，“蛋白质”或“多肽”或“肽”是指包含至少五个氨基酸残基的分子。

根据以下详细描述，本公开内容的其他目的、特征和优点将变得显而易见。其中还提供了额外的定义。然而，应当理解，详细描述和具体实例在说明本公开内容的具体实施方案时，仅作为示例给出，因为本领域技术人员从该详细描述中将会容易得到在本公开内容的精神和范围内的各种改变和修改。

描述性实施方案

自身免疫疾病如1型糖尿病(t1d)、多发性硬化和类风湿性关节炎由慢性自身免疫应答引起，该免疫应答涉及识别不完全定义的自身抗原列表上的许多抗原表位的t细胞和b细胞(santamaria,p.(2010)immunity32:437-445；babbe,h.等人(2000)j.exp.med.192:393-404；firestein,g.s.(2003)nature423:356-361)。消除或抑制每个单个自身免疫病症中的所有多克隆自身反应性t细胞特异性(已知和未知的)而不损害全身免疫目前是不可能的。

已提出离体扩增的多克隆foxp3⁺cd4⁺cd25⁺调节t(treg)细胞的过继转移作为备选的治疗方法(sakaguchi,s.等人(2006)immunol.rev.212:8-27)。旁观者免疫抑制的可能性、用于体外扩增抗原特异性treg细胞的有效策略的缺乏以及foxp3⁺treg细胞的谱系不稳定性阻碍了这种方法的临床转化(zhou,x.等人(2009)natureimmunol.10:1000-1007；komatsu,n.等人(2014)naturemed.20:62-68；bailey-bucktrout,s.l.等人(2013)immunity39:949-962)。产生细胞因子il-10和il-21且表达表面标志物cd49b和lag-3以及转录因子c-maf8的tr1foxp3^-cd4⁺cd25^-t细胞构成了最近用于治疗人类炎性疾病的另一种调节t细胞亚组(mclarnon,a.(2012)naturerev.gastroenterol.hepatol.9:559；desreumaux,p.等人(2012)gastroenterology143:1207-1217；roncarolo,m.g.等人(2011)immunol.rev.241:145-163)。然而，与foxp3+treg细胞一样，没有可体内扩增自身抗原或疾病特异性tr1样细胞的药理学方法。

因此，调节t细胞有希望作为自身免疫中的治疗干预的靶标，但是目前还没有能够体内扩增抗原特异性调节t细胞的方法。在此申请人表明，全身递送用与主要组织相容性复合物ii类(pmhcii)分子结合的自身免疫疾病相关肽包被的纳米颗粒在不同小鼠模型(包括用来自患者的淋巴细胞人源化的小鼠)中触发抗原特异性调节cd4⁺t细胞1型(tr1)样细胞的产生和扩增，导致已建立的自身免疫现象的消退。十种基于pmhcii的纳米药物显示出相似的生物效应，不管其遗传背景、同源t细胞群体的普遍性或mhc限制如何。这些纳米药物促进疾病引发的自身反应性t细胞分化成tr1样细胞，该细胞转而抑制负载有自身抗原的抗原呈递细胞并驱动同源b细胞分化成疾病抑制性调节b细胞，而不损害全身免疫。基于pmhcii的纳米药物因此代表了一类新的药物，可用于以疾病特异性方式治疗广泛的自身免疫病况。

申请人先前发现，全身递送用t1d相关的pmhci类复合物(pmhc-np)包被的纳米颗粒(np)可以通过扩增具有调节潜力但常规记忆样表型的cd8⁺t细胞的亚组来减弱(blunt)t1d的进展(tsai,s.等人(2010)immunity32:568-580)。由于纳米颗粒可以用不同的pmhci类复合物包被，申请人推断pmhc-np疗法可以利用天然存在的负反馈调节回路，由此慢性自身抗原暴露(以及暴露于pmhc-np)可以触发自身反应性t细胞分化为调节t细胞后代。通过此推理，申请人预测并已经在本文中证明，用疾病相关的pmhcii复合物包被的np可能能够在体内扩增疾病特异性调节cd4⁺t细胞。

本公开内容通过提供pmhc-np、组合物及其制备方法以及它们的用途而建立在那些初步观察结果的基础上。

基底/颗粒

本文的“颗粒”、“纳米颗粒”、“微粒”、“珠子”、“微球”和语法上的等同物意指可施用于受试者的小的离散颗粒。在某些实施方案中，所述颗粒基本上呈球形。如本文所用的术语“基本上呈球形”意指颗粒的形状不偏离球形超过约10％。本公开内容的各种已知的抗原或肽复合物可应用于颗粒。

所述pmhc-np的纳米颗粒核心包含核心，例如固体核心、金属核心、树状聚体核心、聚合物胶束纳米颗粒核心，纳米棒，富勒烯，纳米壳，核壳，基于蛋白质的纳米结构或基于脂质的纳米结构，或基本上由它们组成，或进一步由它们组成。在一些方面，纳米颗粒核心是生物可吸收的和/或生物可降解的。在一些方面，纳米颗粒核心是树状聚体纳米颗粒核心，它包含具有从核心生长的树状结构的高度分支大分子，或备选地基本上由其组成或进一步由其组成。在进一步的方面，该树状聚体纳米颗粒核心可包含基于聚(酰胺基胺)的树状聚体或基于聚-l-赖氨酸的树状聚体，或备选地基本上由其组成或进一步由其组成。在某些方面，纳米颗粒核心是聚合物胶束核心，它包含组装成纳米级核壳结构的两亲性嵌段共聚物，或备选地基本上由其组成，或备选地由其组成。在进一步的方面，该聚合物胶束核心包含使用聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺嵌段共聚物产生的聚合物胶束，或备选地基本上由其组成，或进一步由其组成。在进一步的方面，该纳米颗粒核心包含金属，或备选地基本上由金属组成，或进一步由金属组成。在另一方面，该纳米颗粒核心不是脂质体。核心材料的附加实例包括但不限于，标准和特制玻璃、二氧化硅、聚苯乙烯、聚酯、聚碳酸酯、丙烯酸类聚合物、聚丙烯酰胺、聚丙烯腈、聚酰胺、含氟聚合物、硅酮、纤维素、硅、金属(例如铁、金、银)、矿物质(例如，红宝石)、纳米颗粒(例如，金纳米颗粒、胶体颗粒、金属氧化物、金属硫化物、金属硒化物和磁性材料如氧化铁)及其复合材料。在一些实施方案中，氧化铁纳米颗粒核心包含铁(ii，iii)氧化物。该核心根据所需的性质可具有均匀的组成，或两种或更多种类别材料的复合材料。在某些方面，将使用金属纳米颗粒。这些金属颗粒或纳米颗粒可由au、pt、pd、cu、ag、co、fe、ni、mn、sm、nd、pr、gd、ti、zr、si和in、前体、它们的二元合金、它们的三元合金以及它们的金属间化合物形成。参见美国专利6,712,997，其通过引用它的全文并入本文。在某些实施方案中，核心和层的组成(以下所述)可以变化，条件是纳米颗粒是生物相容的和生物可吸收的。该核心根据所需的性质可具有均匀的组成，或两种或更多种类别材料的复合材料。在某些方面，使用金属纳米球。这些金属纳米颗粒可由fe、ca、ga等形成。在某些实施方案中，纳米颗粒包含含有金属或金属氧化物如金或铁氧化物的核心，或备选地基本上由其组成，或进一步由其组成。

所述颗粒通常由基本上呈球形的核心和可选的一个或多个层或涂层组成。如本文所述，核心的大小和组成可以变化。除了核心以外，所述颗粒还可具有一个或多个层，以提供适合于感兴趣的应用的功能性。层(若存在)的厚度可根据具体应用的需要而变化。例如，层可以赋予有用的光学性质。

层还可以赋予化学或生物功能性，在本文中称为化学活性层或生物活性层。这些层通常涂在颗粒的外表面上，并且可向pmhc-np赋予功能性。一层或多层的厚度的范围通常为约0.001微米(1纳米)至约10微米或更大(取决于所需的颗粒直径)，或约1nm至5nm，或备选地约1nm至约10nm，或备选地约1nm至约40nm，或约15nm至约25nm，或约20nm，以及在其中的范围。

该层或涂层可包含生物可降解的糖或其他聚合物，或备选地基本上由其组成，或进一步由其组成。生物可降解的层的实例包括但不限于葡聚糖；聚(乙二醇)；聚(环氧乙烷)；甘露醇；基于聚乳酸(pla)、聚乙交酯(pga)、聚己内酯(pcl)的聚(酯)；phb-phv类的聚(羟基链烷酸酯)；和其他改性多糖，如淀粉、纤维素和壳聚糖。此外，该纳米颗粒可包含具有合适表面的层，该表面适合于附接用于化学结合或偶联位点的化学官能性。

可以以本领域技术人员已知的多种方式在纳米颗粒上产生层。实例包括溶胶-凝胶化学技术，如iler,chemistryofsilica,johnwiley&sons,1979；brinker和scherer,sol-gelscience,academicpress,(1990)中所述。在纳米颗粒上产生层的附加方法包括表面化学和包封技术，如partch和brown,j.adhesion,67:259-276,1998；pekarek等人,nature,367:258,(1994)；hanprasopwattana,langmuir,12:3173-3179,(1996)；davies,advancedmaterials,10:1264-1270,(1998)；及其中的参考文献所述。还可以使用气相沉积技术；参见，例如，golman和shinohara,trendschem.engin.,6:1-6,(2000)；和美国专利号6,387,498。其他技术还包括逐层自组装技术，如sukhorukov等人,polymersadv.tech.,9(10-11):759-767,(1998)；caruso等人,macromolecules,32(7):2317-2328,(1998)；caruso等人,j.amer.chem.soc.,121(25):6039-6046,(1999)；美国专利号6,103,379及其中引用的参考文献所述。

在一些方面，纳米颗粒核心是树状聚体纳米颗粒核心，其包含具有从核心生长的树状结构的高度分支大分子，或备选地基本上由其组成，或进一步由其组成。在进一步的方面，该树状聚体纳米颗粒可包含基于聚(酰胺基胺)的树状聚体或基于聚-l-赖氨酸的树状聚体，或备选地基本上由其组成，或进一步由其组成。在某些方面，该纳米颗粒核心是聚合物胶束核心，其包含组装成纳米级核壳结构的两亲性嵌段共聚物，或备选地基本上由其组成，或进一步由其组成。在进一步的方面，该聚合物胶束核心可包含使用聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺嵌段共聚物产生的聚合物胶束，或备选地基本上由其组成，或进一步由其组成。该树状聚体核心或聚合物胶束核心可进一步包含如本文所述的外涂层或层。

在某些实施方案中，树状聚体纳米颗粒或具有树状聚体纳米颗粒核心的纳米颗粒的具体合成方法，可能需要将金属离子提取到树状聚体的内部，并随后进行化学缩减，以产生尺寸小于3nm的几乎大小单分散的颗粒，如crooks等人,"synthesis,characterization,andapplicationsofdendrimer-encapsulatednanoparticles".thejournalofphysicalchemistryb(109):692–704(2005)中公开的方法，其中得到的树状聚体核心组分不仅用作制备纳米颗粒的模板，而且还用于稳定纳米颗粒，使得调节溶解性成为可能，以及提供将纳米颗粒固定在固体支持物上的方法。

纳米颗粒核心的大小范围可为约1nm至约1μm。在某些实施方案中，纳米颗粒核心的直径小于约1μm。在其他实施方案中，纳米颗粒核心的直径小于约500nm、小于约400nm、小于约300nm、小于约200nm、小于约100nm或小于约50nm。在进一步的实施方案中，纳米颗粒核心的直径为约1nm至约10nm、15nm、20nm、25nm、30nm、40nm、50nm、75nm或100nm。在具体的实施方案中，该纳米颗粒核心的直径为约1nm至约100nm；约1nm至约75nm；约1nm至约50nm；约1nm至约25nm；约1nm至约25nm；约5nm至约100nm；约5nm至约50nm；或约5nm至约25nm，或约15nm至约25nm或约20nm。在一些实施方案中，该纳米颗粒核心的直径为约25nm至约60nm，或约25nm至约50nm，或约20nm至约40nm，或约15nm至约50nn，或约15nm至约40nm，或约15nm至约35nm，或约15nm至约30nm，或约15nm至约25nm，或备选地约15nm，或约20nm，或约25nm，或约30nm，或约35nm，或约40nm。

具有或不具有层的pmhc-np的大小范围可为直径约5nm至约1μm。在某些实施方案中，pmhc-np复合物的直径小于约1μm或备选地小于100nm。在其他实施方案中，pmhc-np复合物的直径小于约500nm、小于约400nm、小于约300nm、小于约200nm、小于约100nm或小于约50nm。在进一步的实施方案中，复合物的直径为约5nm或10nm至约50nm，或约5nm至约75nm，或约5nm至约50nm，或约5nm至约60nm，或约10nm至约50nm，或约10nm至约60nm，或约10nm至约70nm，或约10nm至约75nm，或约20nm至约50nm，或约20nm至约60nm，或约20nm至约70nm，或约20nm至约75nm，或约30nm至约50nm，或约30nm至约60nm，或约30nm至约70nm，或约30nm至约75nm，或在一方面，直径为约55nm。在具体的实施方案中，pmhc-np复合物的直径为约35nm至约60nm，或约35nm至约70nm，或约35nm至约75nm。在一方面，pmhc-np复合物的直径为约30nm至约50nm。

抗原-mhc复合物

本公开内容的纳米颗粒复合物包含与抗原-mhc(pmhc)复合物偶联的具有或不具有层的纳米颗粒核心。如上所述，抗原的选择将取决于待治疗的疾病或病况。单独的多肽(例如，mhc)和抗原(例如，肽)组分通过共价或非共价结合(例如，通过氢键、离子键或疏水键)形成复合物。这类复合物的制备可能需要不同程度的操作并且这类方法是文献中公知的。在一些方面，抗原组分可通过例如将mhc与抗原组分混合而与mhc组分的口袋部分非共价缔合；这依靠mhc与抗原之间的天然结合亲和力。或者，在一些方面，mhc组分可使用标准程序例如但不限于引入已知偶联剂或光亲和标记而与抗原组分共价结合(参见例如，hall等人,biochemistry24:5702-5711(1985))。在某些方面，抗原组分可以经由肽连接或文献中讨论的其他方法与mhc组分可操作地偶联，所述方法包括但不限于经由糖蛋白上的碳水化合物基团(包括例如α和/或β链的碳水化合物部分)附接。在特定的实施方案中，抗原组分可附接至合适的mhc分子的n-末端或c-末端。或者，在某些实施方案中，mhc复合物可通过将抗原组分的序列并入编码mhc的序列中而重组形成，使得两者均保留它们的功能性质。

多个抗原-mhc复合物可与同一纳米颗粒核心偶联；这些复合物、mhc和/或抗原可以是彼此相同或不同的。

化合价被定义为每个纳米颗粒核心的pmhc复合物数目。在某些实施方案中，纳米颗粒的化合价的范围可为约1个pmhc复合物比1个纳米颗粒核心至约6000个pmhc复合物比1个纳米颗粒核心，或备选地约10:1至约6000:1，或备选地约11:1至约6000:1，或备选地约12:1至约6000:1，或备选地至少2:1，或备选地至少8:1，或备选地至少9:1，或备选地至少10:1，或备选地至少11:1，或备选地至少12:1。

在一些方面，化合价为约10:1至约6000:1，或约20:1至约5500:1，或备选地约10:1至约5000:1，或备选地约10:1至约4000:1，或备选地约10:1至约3500:1，或备选地约10:1至约3000:1，或备选地约10:1至约2500:1，或备选地约10:1至约2000:1，或备选地约10:1至约1500:1，或备选地约10:1至1000:1，或备选地约10:1至约500:1，或备选地约10:1至约100:1，或备选地约20:1至约50:1，或备选地约25:1至约60:1，或备选地约30:1至约50:1，或备选地约35:1至约45:1，或备选地约40:1。

申请人已发现，纳米颗粒上的pmhc密度以不依赖于剂量的方式调节pmhc-np触发或分化tr1细胞形成的能力。密度被计算为纳米颗粒的单位表面积上复合物的数目。纳米颗粒的表面积可以在具有或不具有层的情况下测定，包括但不限于将pmhc复合物与纳米颗粒缀合的连接体。为了计算密度的目的，在纳米颗粒核心上具有或不具有外层的情况下，相关的表面积值基于不具有pmhc复合物的颗粒构建体的最终直径。

本文确定并公开了纳米颗粒上的pmhc复合物的密度以不依赖于剂量的方式有助于治疗益处。因此，如本文所公开的，假设至少2个mhc分子、或备选地至少8个、或备选地至少9个、或备选地至少10个、或备选地至少11个、或备选地至少12个pmhc分子与纳米颗粒复合，纳米颗粒可具有约0.01个pmhc或备选地0.025个pmhc分子/100nm²包含层或复合物的纳米颗粒表面积至约100个pmhc分子/100nm²表面积的范围内的确定的pmhc密度。在一方面，纳米颗粒具有约0.05pmhc/100nm²至约76pmhc/100nm²、或备选地0.1pmhc/100nm²至约50pmhc/100nm²、或备选地约0.3pmhc/100nm²至约25pmhc/100nm²、或备选地约0.35pmhc/100nm²至约25pmhc/100nm²、或备选地约0.4pmhc/100nm²至约50pmhc/100nm²、或备选地约0.4pmhc/100nm²至约25pmhc/100nm²、或备选地约0.4pmhc/100nm²至约20pmhc/100nm²、0.4pmhc/100nm²至约10pmhc/100nm²、0.4pmhc/100nm²至约5pmhc/100nm²、或备选地约0.5pmhc/100nm²至约20pmhc/100nm²、或备选地约0.5pmhc/100nm²至约10pmhc/100nm²、或备选地约0.6pmhc/100nm²至约20pmhc/100nm²、或备选地约1.0pmhc/100nm²至约20pmhc/100nm²、或备选地约10pmhc/100nm²至约20pmhc/100nm²、或备选地至少约0.4、或备选地至少约0.406、或备选地至少约0.5、或备选地至少约1.0、或备选地至少约5.0、或备选地至少约10.0、或备选地至少约15.0pmhc/100nm²、或备选地小于约76pmhc/100nm²、或备选地小于约50pmhc/100nm²、或备选地小于约47.75pmhc/100nm²、或备选地小于约25pmhc/100nm²、或备选地小于约20pmhc/100nm²的pmhc密度。

在某些实施方案中，每个纳米颗粒的pmhc密度为约0.4pmhc/100nm²至约25pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约20pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约15pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约14pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约13pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约12pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约11.6pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约11.5pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约11pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约10pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约9pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约8pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约7pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约6pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约5pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约4pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约3pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约2.5pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约2pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约1.5pmhc/100nm²。

在进一步的实施方案中，纳米颗粒可具有约0.22pmhc/100nm²至约10pmhc/100nm²、或约0.22pmhc/100nm²至约9pmhc/100nm²、或约0.22pmhc/100nm²至约8pmhc/100nm²、或约0.22pmhc/100nm²至约7pmhc/100nm²、或约0.22pmhc/100nm²至约6pmhc/100nm²、或约0.22pmhc/100nm²至约5pmhc/100nm²、或约0.22pmhc/100nm²至约4pmhc/100nm²、或约0.22pmhc/100nm²至约3pmhc/100nm²、或约0.22pmhc/100nm²至约2pmhc/100nm²、或约0.22pmhc/100nm²至约1.5pmhc/100nm²的pmhc密度。在一些方面，纳米颗粒具有约0.22pmhc/100nm²至约10pmhc/100nm²、或0.24pmhc/100nm²至约9pmhc/100nm²、或约0.26pmhc/100nm²至约8pmhc/100nm²、或约0.28pmhc/100nm²至约7pmhc/100nm²、或约0.24pmhc/100nm²至约4pmhc/100nm²、或约0.5pmhc/100nm²至约3pmhc/100nm²、或约0.6pmhc/100nm²至约1.5pmhc/100nm²的pmhc密度。在一些实施方案中，纳米颗粒具有约0.4pmhc/100nm²至约1.3pmhc/100nm²、或备选地约0.5pmhc/100nm²至约0.9pmhc/100nm²、或备选地约0.6pmhc/100nm²至约0.8pmhc/100nm²的pmhc密度。

在进一步的实施方案中，纳米颗粒可具有0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10.0、10.1、10.2、10.3、10.4、10.5、10.6、10.7、10.8、10.9、11.0、11.1、11.2、11.3、11.4、11.5、11.6、11.7、11.8、11.9或12.0pmhc/100nm²的密度。在具体的实施方案中，纳米颗粒具有约0.4pmhc/100nm²至约1.5pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约6pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约11pmhc/100nm²的pmhc密度。

在一些方面，本文提供了一种包含纳米颗粒核心的复合物，其中多个疾病相关抗原-mhc(pmhc)复合物与核心偶联；该核心的直径为约15nm至约25nm；并且其中所述纳米颗粒上的pmhc密度为约0.4pmhc/100nm²至约6pmhc/100nm²纳米颗粒表面积。在一些实施方案中，该复合物还在纳米颗粒核心上包含外层，其中所述pmhc复合物与纳米颗粒核心和/或外层偶联，并且其中该纳米颗粒核心和外层的直径为约35nm至约45nm。

如本文所用的术语“可操作地偶联”或“包被的”是指在靶位点例如免疫细胞处结合之前将单独的多肽(例如，mhc)和抗原(例如，肽)组分组合以形成活性复合物的情况。这包括在施用于受试者之前，在体外合成或重组表达单独的多肽复合物组分并随后分离和组合形成复合物的情况；将嵌合或融合多肽(即，复合物的每个离散蛋白质组分被包含在单一多肽链中)合成或重组表达为完整的复合物的情况。通常，将多肽复合物添加至纳米颗粒中以产生具有吸附或偶联的多肽复合物的纳米颗粒，所述多肽复合物具有约、至少约或至多约0.1:1、0.5:1、1:1、3:1、5:1、7:1、10:1、15:1、20:1、25:1、30:1、35:1、40:1、50:1、100:1、125:1、150:1、175:1、200:1、225:1、250:1、275:1、300:1、325:1、350:1、375:1、400:1、425:1、450:1、475:1、500:1、600:1、700:1、800:1、900:1、1000:1、1500:1或更多，更通常为0.1:1、1:1至50:1或300:1，以及其间的范围的分子数：纳米颗粒数的比例，其中所述比例提供每个范围的所选终点。纳米颗粒的多肽含量可使用标准技术来测定。

mhc分子

如本文所用且除非明确指出，在pmhc复合物背景中的术语mhc意指经典或非经典mhci类蛋白质和/或经典或非经典mhcii类蛋白质，hladr、hladq、hladp、hla-a、hla-b、hla-c、hla-e、cd1d的任何基因座，或其片段或生物等同物，双链或单链构建体，二聚体(fc融合体)、四聚体、多聚体形式，以及mhci或mhcii的聚合形式。在一些实施方案中，pmhc可以是单链构建体。在一些实施方案中，

pmhc可以是双链构建体。

在一些实施方案中，mhc蛋白质可以是二聚体或多聚体。

在一些实施方案中，mhc蛋白质可包含基于孔-突起接合的mhc-α-fc/mhc-β-fc异二聚体或多聚体。

如上所述，“孔-突起接合”是需要在第一多肽的界面处的凸起(或“突起”)和在第二多肽的界面处的相应空腔(或“孔”)的多肽架构，使得该凸起可以置于空腔中以促进异多聚体形成。通过用较大的侧链(例如，苯丙氨酸或酪氨酸)代替第一多肽的界面处的小氨基酸侧链来构建凸起。通过用较小的氨基酸侧链(例如，丙氨酸或苏氨酸)代替大氨基酸侧链，在第二多肽的界面中创建与该凸起相同或类似大小的空腔。可由本领域技术人员使用常规方法通过合成手段来制备凸起和空腔，如通过改变编码多肽的氨基酸或通过肽合成。在一些实施方案中，第一多肽的界面位于第一多肽中的fc结构域上；且第二多肽的界面位于第二多肽的fc结构域上。

如上所述，“mhc-α-fc/mhc-β-fc”是包含第一多肽和第二多肽的异二聚体，其中第一多肽包含mhcii类α链和抗体fc结构域；第二多肽包含mhcii类β链和抗体fc结构域。孔-突起接合mhc-α-fc/mhc-β-fc进一步要求每个多肽的fc结构域通过将一个fc结构域上的突起互补定位在另一个fc结构域上的相应空腔内而相互接合。

在本公开内容的某些实施方案中，在合适的mhci或ii类多肽的背景中鉴定特定抗原并将其呈递在抗原-mhc纳米颗粒复合物中。向t细胞呈递抗原由两类不同的分子介导：mhci类(mhc-i)和mhcii类(mhc-ii)，它们利用不同的抗原处理途径。衍生自细胞内抗原的肽通过几乎在所有细胞上表达的mhci类分子呈递给cd8⁺t细胞，而细胞外抗原衍生的肽通过mhc-ii分子呈递给cd4⁺t细胞。然而，这种一分为二的情况存在某些例外。几项研究已经显示，由吞噬的颗粒或可溶性蛋白质产生的肽在巨噬细胞以及树突细胞中呈递在mhc-i分子上。在某些方面，可评估受试者的遗传组成以确定哪个mhc多肽将用于特定患者和特定的肽组。在某些实施方案中，mhc1类组分可包含hla-a、hla-b、hla-c、hla-e、hla-f、hla-g或cd-1分子的全部或部分，基本上由其组成，或备选地进一步由其组成。在mhc组分是mhcii类组分的实施方案中，mhcii类组分可包含hla-dr、hla-dq或hla-dp的全部或部分，基本上由其组成，或备选地进一步由其组成。在某些实施方案中，mhc可包含hladrb1、hladrb3、hladrb4、hladrb5、hladqb1、hladqa1、iag7、i-ab、i-ad、hla-dq、hla-dp、hla-a、hla-b、hla-c、hla-e或cd1d。

也考虑将非经典mhc分子用于本公开内容的mhc复合物。在一些实施方案中，非经典mhc分子是非多态的，在物种间保守，并具有窄的、深的、疏水性的配体结合口袋。这些结合口袋能够将糖脂和磷脂呈递给自然杀伤t(nkt)细胞。nkt细胞代表共表达nk细胞标志物和半不变量t细胞受体(tcr)的独特淋巴细胞群体。它们参与与广泛范围的疾病相关的免疫应答的调节。

如上所述，当关于人mhc使用时，术语“mhc”可与术语“人白细胞抗原”(hla)互换使用；因此，mhc是指所有hla亚型，包括但不限于以上公开的经典mhc基因：hla-a、hla-b、hla-c、hla-dp、hla-dq和hla-dr，以及其所有变体、亚型、同种型以及其他生物等同物。

用于根据本公开内容使用的mhc可通过本领域已知的技术产生、分离或纯化。用于获得mhc的常见方案包括下述步骤，例如但不限于电泳或基于电荷或大小的其他分离技术、生物素化或其他标记方法和纯化，或转染和诱导表达mhc蛋白质的载体构建体。纯化的动物抗体也可通过商购可得的来源获得，包括零售商如ebioscience、biolegend或tonbobiosciences。

在某些实施方案中，抗原-mhc复合物的mhc可以是经典mhci、非经典mhci、经典mhcii、非经典mhcii、二聚体(fc融合体)、mhc四聚体或mhc的聚合形式。在一些实施方案中，mhc多聚体根据本领域充分记录的方法产生，参见，例如，bakker等人"mhcmultimertechnology:currentstatusandfutureprospects,"currentopinioninimmunology,vol.17,no.4pp.428-433(2005)及其中引用的参考文献。非限制性示例性方法包括使用生物素化剂例如但不限于链霉亲和素或抗生物素蛋白来结合mhc单体，以产生具有该生物素化剂作为骨架的多聚体结构。具体地，mhc二聚体可以备选地通过与抗体恒定区或fc区融合而产生；这可以通过直接操作性偶联或通过连接体例如半胱氨酸连接体进行操作性偶联来完成。

共刺激分子组分

在某些方面，np另外包含至少一个共刺激分子，或者备选地基本上由至少一个共刺激分子组成，或进一步由至少一个共刺激分子组成。共刺激分子是在体内产生次级信号的分子，该次级信号用于将幼稚t细胞激活成能够对具有所述特异性抗原的细胞产生免疫应答的抗原特异性t细胞。本公开内容不限于任何特定的共刺激分子。各种共刺激分子是本领域公知的。共刺激分子的一些非限制性实例是4-ibbl、ox40l、cd40、il-15/il-15ra、cd28、cd80、cd86、cd30l和icosl。只有一种特定的共刺激分子可以与一个纳米颗粒偶联，或者多种共刺激分子可以与相同的纳米颗粒偶联。在某些实施方案中，该共刺激分子是蛋白质，如能够使t细胞上的共刺激受体激动的抗体。在这种情况下，该抗体能够诱导共刺激信号，该信号是激活幼稚t细胞和以抗原特异性方式诱导免疫应答所必需的。此外或备选地，如本文所用的术语“共刺激分子”也可指能够通过对天然共刺激信号分子的激动作用产生共刺激信号的试剂，例如产生sd28共刺激反应的抗-cd28或cd28配体。

在具体的实施方案中，本公开内容的共刺激分子可以是以下分子中的任何一种或多种：b7-1/cd80、btla、b7-2/cd86、cd28、b7-h1/pd-l1、ctla-4、b7-h2、gi24/vista/b7-h5、b7-h3、icos、b7-h4、pd-1、b7-h6、pd-l2/b7-dc、b7-h7、pdcd6、lilra3/cd85e、lilrb2/cd85d/ilt4、lilra4/cd85g/ilt7、lilrb3/cd85a/ilt5、lilrb1/cd85j/ilt2、lilrb4/cd85k/ilt3、4-1bb/tnfrsf9/cd137、gitr配体/tnfsf18、4-1bb配体/tnfsf9、hvem/tnfrsf14、

baff/blys/tnfsf13b、light/tnfsf14、baffr/tnfrsf13c、淋巴毒素-α/tnf-β、cd27/tnfrsf7、ox40/tnfrsf4、cd27配体/tnfsf7、ox40配体/tnfsf4、cd30/tnfrsf8、relt/tnfrsf19l、cd30配体/tnfsf8、taci/tnfrsf13b、cd40/tnfrsf5、tl1a/tnfsf15、cd40配体/tnfsf5、tnf-α、dr3/tnfrsf25、tnfrii/tnfrsf1b、gitr/tnfrsf18、2b4/cd244/slamf4、cd84/slamf5、blame/slamf8、cd229/slamf3、cd2、cracc/slamf7、cd2f-10/slamf9、ntb-a/slamf6、cd48/slamf2、slam/cd150、cd58/lfa-3、cd7、dppiv/cd26、cd96、ephb6、cd160、整联蛋白α4β1、cd200、整联蛋白α4β7/lpam-1、cd300a/lmir1、lag-3、crtam、tim-1/kim-1/havcr、dap12、tim-4、dectin-1/clec7a、tslpr、icosl和/或其生物等同物。

共刺激分子可以以与pmhc复合物相同的方式与纳米颗粒偶联。在本公开内容的一个实施方案中，共刺激分子和抗原/mhc复合物分别附接至纳米颗粒。在本公开内容的另一个实施方案中，共刺激分子和pmhc复合物首先复合在一起，随后与纳米颗粒复合。多个共刺激分子可与纳米颗粒偶联；这些分子可以是多个相同的共刺激分子或多个不同的共刺激分子。通常，将多肽复合物添加至纳米颗粒以产生具有吸附或偶联的多肽复合物的纳米颗粒，其具有约1至6000个分子/纳米颗粒的共刺激分子数：纳米颗粒数的比例，或备选地至少约或至多约0.1:1、0.5:1、1:1、10:1、100:1、500:1、1000:1、2000:1、3000:1、4000:1、5000:1、6000:1或更多，以及其中的范围，通常为约0.1:1至约50:1。在另一方面，共刺激分子与pmhc复合物的比例可以为约0.1:1、0.5:1、1:1、2:1、5:1、10:1、50:1或更多，优选获得1:1、1:2、1:9、1:10、1:100、2:1、9:1、10:1或100:1的共刺激分子：pmhc复合物比例。类似地，可根据与pmhc复合物相同的相关公式计算共刺激分子相对于纳米颗粒表面积的密度。在某些实施方案中，每单位纳米颗粒表面积的共刺激分子的密度为约0.0022个共刺激分子/100nm²至约13.26个共刺激分子/100nm²。在一些实施方案中，共刺激分子的密度范围可与pmhc复合物的密度范围相同或不同。

在其中所述纳米颗粒包含一个或多个共刺激分子且不包含pmhc复合物的一些实施方案中，该纳米颗粒具有约0.2个共刺激分子/100nm²至约6.5个共刺激分子/100nm²、或约0.2个共刺激分子/100nm²至约6个共刺激分子/100nm²、或约0.2个共刺激分子/100nm²至约5.8个共刺激分子/100nm²、或约0.2个共刺激分子/100nm²至约5.75个共刺激分子/100nm²、或约0.2个共刺激分子/100nm²至约5.5个共刺激分子/100nm²、或约0.2个共刺激分子/100nm²至约5个共刺激分子/100nm²、或约0.2个共刺激分子/100nm²至约4.5个共刺激分子/100nm²、或约0.2个共刺激分子/100nm²至约4个共刺激分子/100nm²、或约0.2个共刺激分子/100nm²至约3.5个共刺激分子/100nm²、或约0.2个共刺激分子/100nm²至约3个共刺激分子/100nm²、或约0.2个共刺激分子/100nm²至约2.5个共刺激分子/100nm²、或约0.2个共刺激分子/100nm²至约2个共刺激分子/100nm²、或约0.2个共刺激分子/100nm²至约1.5个共刺激分子/100nm²、或约0.2个共刺激分子/100nm²至约1.25个共刺激分子/100nm²、或约0.2个共刺激分子/100nm²至约1个共刺激分子/100nm²、或约0.2个共刺激分子/100nm²至约0.75个共刺激分子/100nm²的共刺激分子密度。

在另一方面，该纳米颗粒可具有约0.11个共刺激分子/100nm²至约5个共刺激分子/100nm²、或约0.11个共刺激分子/100nm²至约4.5个共刺激分子/100nm²、或约0.11个共刺激分子/100nm²至约4个共刺激分子/100nm²、或约0.11个共刺激分子/100nm²至约3.5个共刺激分子/100nm²、或约0.11个共刺激分子/100nm²至约3个共刺激分子/100nm²、或约0.11个共刺激分子/100nm²至约2.5个共刺激分子/100nm²、或约0.11个共刺激分子/100nm²至约2个共刺激分子/100nm²、或约0.11个共刺激分子/100nm²至约1.5个共刺激分子/100nm²、或约0.11个共刺激分子/100nm²至约1pmhc/100nm²、或约0.11个共刺激分子/100nm²至约0.75个共刺激分子/100nm²的共刺激分子密度。在一些方面，该纳米颗粒核心具有约0.11个共刺激分子/100nm²至约5个共刺激分子/100nm²、或0.12个共刺激分子/100nm²至约4.5个共刺激分子/100nm²、或约0.13个共刺激分子/100nm²至约4个共刺激分子/100nm²、或约0.14个共刺激分子/100nm²至约3.5个共刺激分子/100nm²、或约0.12个共刺激分子/100nm²至约2个共刺激分子/100nm²、或约0.25个共刺激分子/100nm²至约1.5个共刺激分子/100nm²、或约0.3个共刺激分子/100nm²至约0.75个共刺激分子/100nm²的共刺激分子密度。在进一步的方面，该纳米颗粒核心具有约0.2个共刺激分子/100nm²至约0.65个共刺激分子/100nm²、或备选地约0.25个共刺激分子/100nm²至约0.45个共刺激分子/100nm²、或备选地约0.3个共刺激分子/100nm²至约0.4个共刺激分子/100nm²的共刺激分子密度。

在其中所述纳米颗粒包含pmhc复合物和一个或多个共刺激分子的一些实施方案中，该纳米颗粒具有约0.4个共刺激分子/100nm²至约13个共刺激分子/100nm²、或约0.4个共刺激分子/100nm²至约12个共刺激分子/100nm²、或约0.4个共刺激分子/100nm²至约11.6个共刺激分子/100nm²、或约0.4个共刺激分子/100nm²至约11.5个共刺激分子/100nm²、或约0.4个共刺激分子/100nm²至约11个共刺激分子/100nm²、或约0.4个共刺激分子/100nm²至约10个共刺激分子/100nm²、或约0.4个共刺激分子/100nm²至约9个共刺激分子/100nm²、或约0.4个共刺激分子/100nm²至约8个共刺激分子/100nm²、或约0.4个共刺激分子/100nm²至约7个共刺激分子/100nm²、或约0.4个共刺激分子/100nm²至约6个共刺激分子/100nm²、或约0.4个共刺激分子/100nm²至约5个共刺激分子/100nm²、或约0.4个共刺激分子/100nm²至约4个共刺激分子/100nm²、或约0.4个共刺激分子/100nm²至约3个共刺激分子/100nm²、或约0.4个共刺激分子/100nm²至约2.5个共刺激分子/100nm²、或约0.4个共刺激分子/100nm²至约2个共刺激分子/100nm²、或约0.4个共刺激分子/100nm²至约1.5个共刺激分子/100nm²的共刺激分子密度。

在另一方面，该纳米颗粒可具有约0.22个共刺激分子/100nm²至约10个共刺激分子/100nm²、或约0.22个共刺激分子/100nm²至约9个共刺激分子/100nm²、或约0.22个共刺激分子/100nm²至约8个共刺激分子/100nm²、或约0.22个共刺激分子/100nm²至约7个共刺激分子/100nm²、或约0.22个共刺激分子/100nm²至约6个共刺激分子/100nm²、或约0.22个共刺激分子/100nm²至约5个共刺激分子/100nm²、或约0.22个共刺激分子/100nm²至约4个共刺激分子/100nm²、或约0.22个共刺激分子/100nm²至约3个共刺激分子/100nm²、或约0.22个共刺激分子/100nm²至约2pmhc/100nm²、或约0.22个共刺激分子/100nm²至约1.5个共刺激分子/100nm²的共刺激分子密度。在一些方面，该纳米颗粒核心具有约0.22个共刺激分子/100nm²至约10个共刺激分子/100nm²、或0.24个共刺激分子/100nm²至约9个共刺激分子/100nm²、或约0.26个共刺激分子/100nm²至约8个共刺激分子/100nm²、或约0.28个共刺激分子/100nm²至约7个共刺激分子/100nm²、或约0.24个共刺激分子/100nm²至约4个共刺激分子/100nm²、或约0.5个共刺激分子/100nm²至约3个共刺激分子/100nm²、或约0.6个共刺激分子/100nm²至约1.5个共刺激分子/100nm²的共刺激分子密度。在进一步的方面，该纳米颗粒具有约0.4个共刺激分子/100nm²至约1.3个共刺激分子/100nm²、或备选地约0.5个共刺激分子/100nm²至约0.9个共刺激分子/100nm²、或备选地约0.6个共刺激分子/100nm²至约0.8个共刺激分子/100nm²的共刺激分子密度。

细胞因子

在某些方面，所述np进一步包含至少一个细胞因子分子，或者备选地基本上由至少一个细胞因子分子组成，或进一步由至少一个细胞因子分子组成。如本文所用，术语“细胞因子”包括由免疫系统中的各种细胞分泌的低分子量蛋白质，所述蛋白质用作用于在分子和细胞水平上调节体内广泛范围的生物过程的信号分子。“细胞因子”包括属于淋巴因子、白细胞介素或趋化因子类别的单独的免疫调节蛋白质。

本文公开了下述非限制性实例：例如，il-1a和il-1b是人白细胞介素-1(il-1)家族的两个不同成员。成熟的il-1a是一种18kda的蛋白质，又称成纤维细胞激活因子(faf)、淋巴细胞激活因子(laf)、b细胞激活因子(baf)、白细胞内源性介质(lem)等。il-4是诱导t辅助细胞-2(th2)细胞分化的细胞因子，并且与il-13密切相关且具有与il-13相似的功能。il-5由th2细胞和肥大细胞产生。il-5用来刺激b细胞生长并增加免疫球蛋白分泌。il-5还参与嗜酸性粒细胞激活。il-6是可用作促炎性或抗炎性细胞因子的白细胞介素。它由t细胞和巨噬细胞分泌，以刺激对创伤或导致炎症的其他组织损伤的免疫应答。il-6也由肌肉响应于肌肉收缩而产生。il-8是由巨噬细胞和其他细胞类型如上皮细胞和内皮细胞产生的趋化因子，并且用作先天性免疫系统应答中免疫反应的重要介质。il-12参与幼稚t细胞向t辅助(th1或th2)细胞的分化。作为异二聚体细胞因子，il-12在由两个单独的基因il-12a(p35)和il-12b(p40)编码的两个亚基在蛋白质合成后二聚化之后形成。il-12p70表示该异二聚体组合物。il-13是由许多细胞类型、特别是th2细胞分泌的细胞因子，是变应性炎症和疾病的重要介质。il-17是由t辅助细胞产生的细胞因子并且由il-23诱导，导致迟发型反应中的破坏性组织损伤。il-17充当促炎性细胞因子，它响应于细胞外病原体对免疫系统的侵袭并诱导病原体细胞基质的破坏。ip-10或干扰素γ诱导蛋白10也被称为c-x-c基序趋化因子10(cxcl10)或小诱导型细胞因子b10。作为属于cxc趋化因子家族的小细胞因子，ip-10由几种细胞类型(包括单核细胞、内皮细胞和成纤维细胞)响应于ifn-γ而分泌。巨噬细胞炎性蛋白质(mip)属于趋化因子的家族。有两种主要形式的人mip：mip-1α和mip-1β，也分别被称为趋化因子(c-c基序)配体3(ccl3)和ccl4。两者均由巨噬细胞在用细菌内毒素刺激之后产生。粒细胞集落刺激因子(g-csf或gcsf)也被称为集落刺激因子3(csf3)，是一种集落刺激因子激素。g-csf是由许多不同组织产生的糖蛋白、生长因子和细胞因子，以刺激骨髓产生粒细胞和干细胞。g-csf还刺激嗜中性粒细胞前体和成熟嗜中性粒细胞的存活、增殖、分化和功能。表皮生长因子或egf是一种生长因子，它通过以高亲和力与其受体egfr结合，在调节细胞生长、增殖和分化中发挥重要作用。血管内皮生长因子(vegf)是生长因子家族，它是参与血管发生(胚胎循环系统的从头形成)和血管生成(来自预先存在的脉管系统的血管生长)的重要信号蛋白质。

一个或多个细胞因子可以以与pmhc复合物相同的方式与纳米颗粒偶联。在本公开内容的一个实施方案中，一个或多个细胞因子和pmhc复合物分别附接至纳米颗粒。在本公开内容的另一个实施方案中，一个或多个细胞因子分子和pmhc复合物首先复合在一起，随后与纳米颗粒复合。多个细胞因子可与纳米颗粒偶联；这些细胞因子可以是多个相同的细胞因子或不同的细胞因子。

在一些实施方案中，细胞因子与抗细胞因子抗体复合形成细胞因子/抗细胞因子抗体复合物，该复合物随后与纳米颗粒复合。在一些实施方案中，细胞因子/抗细胞因子抗体复合物包括但不限于il-2/抗-il-2复合物。il-2/抗-il-2复合物可具有激动性质或拮抗性质。

在一些实施方案中，细胞因子与抗细胞因子受体复合形成细胞因子/细胞因子受体复合物，该复合物随后与纳米颗粒复合。在一些实施方案中，细胞因子/细胞因子受体复合物包括但不限于il15/il-15ra和/或il-1/il-2ra。在一些实施方案中，il15/il-15ra复合物可充当t细胞共刺激物。

通常，将多肽复合物添加至纳米颗粒以产生具有吸附或偶联的多肽复合物的纳米颗粒，其具有约1至5999个分子/纳米颗粒的细胞因子数：纳米颗粒数的比例，或备选地至少约或至多约0.1:1、0.5:1、1:1、10:1、100:1、500:1、1000:1、2000:1、3000:1、4000:1、5000:1、6000:1或更多，以及其中的范围，例如约0.1:1至约50:1。在另一方面，细胞因子与抗原/mhc复合物的比例可以为约0.1:1、0.5:1、1:1、2:1、5:1、10:1、50:1或更多，优选获得1:1、1:2、1:9、1:10、1:100、2:1、9:1、10:1或100:1的细胞因子：抗原/mhc复合物比例。类似地，可根据与抗原/mhc复合物相同的相关公式计算细胞因子相对于纳米颗粒表面积的密度。在某些实施方案中，每单位纳米颗粒表面积的细胞因子的密度为约0.0022个细胞因子/100nm²至约13.26个细胞因子/100nm²。在一些实施方案中，细胞因子的密度范围可与抗原/mhc复合物的密度范围相同或不同。

抗原组分

本公开内容的某些方面包括涉及抗原组合物的方法和组合物，所述抗原组合物包括通常称为抗原的多肽、肽、核酸、碳水化合物、脂质和引发或诱导抗原反应的其他分子的区段、片段或表位。特别地，自身抗原或这类自身抗原的抗原区段或片段(其导致经由自身免疫应答的细胞破坏)可被鉴定并用于制备本文所述的肽-mhc/纳米颗粒复合物。

尽管本文公开了抗原和抗原组分的具体实例，但是本公开内容不限于此。除非另有明确说明，本文包括分离或纯化的多肽抗原的等同物，其包含本文所述的氨基酸序列，或与该抗原的氨基酸序列具有至少约80％序列同一性、或备选地至少85％、或备选地至少90％、或备选地至少95％或备选地至少98％序列同一性的多肽，或由与编码该抗原的氨基酸序列的多核苷酸具有至少约80％序列同一性、或备选地至少85％、或备选地至少90％、或备选地至少95％或备选地至少98％序列同一性的多核苷酸编码的多肽，或其互补体，或由在中度至高度严格条件下与编码该抗原的氨基酸序列的多核苷酸杂交的多核苷酸编码的多肽，或基本上由它们组成，或进一步由它们组成。还提供了编码本文公开的抗原多肽的分离和纯化的多核苷酸，或与公开的序列具有至少约80％序列同一性、或备选地至少85％、或备选地至少90％、或备选地至少95％或备选地至少98％序列同一性的氨基酸，或等同物，或在严格条件下与该多核苷酸杂交的多核苷酸、其等同物或其互补体以及由这些多核苷酸编码的分离或纯化的多肽。所述多肽和多核苷酸可以与非天然存在的物质(在自然界中不与它们关联)例如载体、药学上可接受的载体、载体(vector)和mhc分子组合。

经修饰的肽及其等同物

抗原多肽、蛋白质及其片段可以通过各种氨基酸缺失、插入和/或置换来修饰。在特定的实施方案中，经修饰的多肽和/或肽能够调节受试者中的免疫应答。如本文所用，“蛋白质”或“多肽”或“肽”是指包含至少五个氨基酸残基的分子。在一些实施方案中，利用野生型形式的蛋白质或肽，但是，在本公开内容的许多实施方案中，利用经修饰的蛋白质或多肽来产生肽/mhc/纳米颗粒复合物。可使用肽/mhc/纳米颗粒复合物来产生免疫应答和/或修饰免疫系统的t细胞群体(即重新训练

(re-educate)免疫系统)。上述术语在本文中可互换使用。“经修饰的蛋白质”或“经修饰的多肽”或“经修饰的肽”是指其化学结构、特别是其氨基酸序列相对于野生型蛋白质或多肽发生改变的蛋白质或多肽。在一些实施方案中，经修饰的蛋白质或多肽或肽具有至少一种经修饰的活性或功能(意识到蛋白质或多肽或肽可具有多种活性或功能)。特别地考虑到，在mhc/纳米颗粒复合物的背景下，经修饰的蛋白质或多肽或肽可以在一种活性或功能方面发生变化，但是在其他方面保留野生型活性或功能，如免疫原性或与免疫系统的其他细胞相互作用的能力。

在某些实施方案中，对于蛋白质或多肽(野生型或经修饰的)，包括感兴趣的蛋白质或肽的任何复合物，特别是mhc/肽融合体，其大小可包括但不限于5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575、600、625、650、675、700、725、750、775、800、825、850、875、900、925、950、975、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1750、2000、2250、2500个或更多的氨基分子，包括其中可得到的任何范围或值，或其衍生物。在一些方面中，可使用自身抗原的5、6、7、8、9、10个或更多个连续氨基酸(包括其衍生物)和片段(如本文公开和参考的那些氨基酸序列)作为抗原。考虑到多肽可以通过截短而突变，使其比其相应的野生型形式更短，但它们也可以通过融合或缀合具有特定功能的异源蛋白质序列来改变(例如，为了呈现为蛋白质复合物，为了增强免疫原性等)。

如本文所用的“氨基分子(aminomolecule)”是指本领域中已知的任何氨基酸、氨基酸衍生物或氨基酸模拟物。在某些实施方案中，蛋白质分子的残基是连贯的，没有任何非氨基分子打断氨基分子残基的序列。在其他实施方案中，所述序列可包含一个或更多个非氨基分子部分。在特定的实施方案中，所述蛋白质分子的残基序列可被一个或更多个非氨基分子部分打断。

因此，术语“蛋白质组分”涵盖了包含天然合成蛋白质中20种常见氨基酸中至少之一或者包含至少一个经修饰或非常见氨基酸的氨基分子序列。

可通过本领域技术人员已知的任何技术制备蛋白质组合物，所述技术包括(i)通过标准分子生物学技术表达蛋白质、多肽或肽，(ii)从天然来源分离蛋白质化合物，或(iii)化学合成蛋白质材料。多个基因的核苷酸以及蛋白质、多肽和肽序列之前已经公开，并且可以在公认的计算机化数据库中找到。一个这样的数据库是nationalcenterforbiotechnologyinformation的genbank和genpept数据库(互联网地址是ncbi.nlm.nih.gov/)。可以使用本文公开的技术或本领域普通技术人员已知的技术扩增和/或表达这些基因的编码区的全部或一部分。

自身抗原表位的氨基酸序列变体和这些组合物的其他多肽可以是置换、插入或缺失变体。与野生型相比，本公开内容的多肽的修饰可影响肽或多肽的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、302、303、304、305、306、307、308、309、310、311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、322、323、324、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、337、338、339、340、341、342、343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、353、354、355、356、357、358、359、360、361、362、363、364、365、366、367、368、369、370、371、372、373、374、375、376、377、378、379、380、381、382、383、384、385、386、387、388、389、390、391、392、393、394、395、396、397、398、399、400、401、402、403、404、405、406、407、408、409、410、411、412、413、414、415、416、417、418、419、420、421、422、423、424、425、426、427、428、429、430、431、432、433、434、435、436、437、438、439、440、441、442、443、444、445、446、447、448、449、450、451、452、453、454、455、456、457、458、459、460、461、462、463、464、465、466、467、468、469、470、471、472、473、474、475、476、477、478、479、480、481、482、483、484、485、486、487、488、489、490、491、492、493、494、495、496、497、498、499、500个或更多个非连续或连续氨基酸。考虑将产生自身免疫应答、特别是病理性自身免疫应答的肽或多肽用于本公开内容的方法。

缺失变体通常缺少天然或野生型氨基酸序列的一个或多个残基。可以缺失单个残基或缺失数个连续氨基酸。可以将终止密码子(通过置换或插入)引入到编码核酸序列中，以产生截短蛋白质。插入突变体通常包括在多肽的非末端位点加入物质。这可以包括插入一个或多个残基。还可以产生被称为融合蛋白的末端添加。

置换变体通常包括在蛋白质内的一个或多个位点处用一个氨基酸替换另一个，并可设计成调节所述多肽的一种或多种性质，而丧失或不丧失其他功能或性质。置换可以是保守的，即，一个氨基酸被具有相似形状和电荷的另一个氨基酸所代替。保守置换是本领域公知的，并且包括例如以下改变：丙氨酸替换成丝氨酸；精氨酸替换成赖氨酸；天冬酰胺替换成谷氨酰胺或组氨酸；天冬氨酸替换成谷氨酸；半胱氨酸替换成丝氨酸；谷氨酰胺替换成天冬酰胺；谷氨酸替换成天冬氨酸；甘氨酸替换成脯氨酸；组氨酸替换成天冬酰胺或谷氨酰胺；异亮氨酸替换成亮氨酸或缬氨酸；亮氨酸替换成缬氨酸或异亮氨酸；赖氨酸替换成精氨酸；甲硫氨酸替换成亮氨酸或异亮氨酸；苯丙氨酸替换成酪氨酸、亮氨酸或甲硫氨酸；丝氨酸替换成苏氨酸；苏氨酸替换成丝氨酸；色氨酸替换成酪氨酸；酪氨酸替换成色氨酸或苯丙氨酸；以及缬氨酸替换成异亮氨酸或亮氨酸。或者，置换可以是非保守的，使得多肽或肽的功能或活性(如对细胞受体的亲合力或亲和力)受到影响。非保守改变通常包括将残基置换为化学上不相似的残基，如用极性或带电荷氨基酸置换非极性或不带电荷氨基酸，反之亦然。

本公开内容的蛋白质可以是重组的，或者体外合成的。或者，重组蛋白可以分离自细菌或其他宿主细胞。

本文使用的术语“功能等同密码子”是指编码相同氨基酸的密码子，如编码精氨酸或丝氨酸的六个密码子，也指编码生物学等同氨基酸的密码子(参见表2)。

还应理解，氨基酸和核酸序列可包含额外的残基，如分别包含额外的n-或c-末端氨基酸，或者5’或3’核酸序列，但仍然基本如本文所公开的序列之一所示，只要所述序列满足上文给出的标准(包括保持蛋白质生物活性(例如免疫原性))即可。末端序列的添加特别适用于核酸序列，该核酸序列例如可包含位于编码区5’或3’部分任一的侧翼的多种非编码序列。

疾病相关抗原

所述纳米颗粒可用于如本文所述的治疗方法中。基于待治疗的疾病选择pmhc-np的pmhc复合物以供使用。例如，糖尿病相关抗原是一种抗原或其片段，其在该自身免疫疾病中靶向的细胞、组织或器官中表达，并且在由自身免疫应答引起细胞、组织或器官损伤时暴露于免疫系统，即使该抗原不是疾病过程的触发物或其发病机制中的关键参与者，并且当呈递时，该抗原产生用于治疗糖尿病的免疫应答；因此，选择符合这一定义的糖尿病相关抗原来治疗糖尿病。选择ms相关抗原来治疗ms。不选择糖尿病相关抗原来治疗ms。本文公开了非限制性的示例性疾病相关抗原，并且另外，可根据文献中充分记录的技术、机制以及方法针对特定的疾病确定这样的抗原。

感兴趣的疾病的非限制性实例包括但不限于哮喘、i型和ii型糖尿病、前驱糖尿病、多发性硬化、周围神经病变、变应性哮喘、原发性胆汁性肝硬化、硬化、视神经脊髓炎谱系障碍、自身抗体相关的神经系统症状如僵人综合征、自身免疫性脑炎、发作性睡病、寻常型天疱疮、落叶型天疱疮、银屑病、舍格伦病/综合征、炎性肠病(ibd)、关节炎、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮(sle)、硬皮病、anca相关性血管炎、古德帕斯丘综合征、川畸病、乳糜泻、自身免疫性心肌病、特发性扩张型心肌病(idcm)、重症肌无力、自身免疫性葡萄膜炎、强直性脊柱炎、格雷夫斯病、免疫介导性肌病、抗磷脂综合征(anca+)、动脉粥样硬化、自身免疫性肝炎、硬化性胆管炎、原发性硬化性胆管炎、皮肌炎、慢性阻塞性肺疾病、脊髓损伤、创伤性损伤、烟草诱发的肺破坏、气肿、天疱疮、葡萄膜炎、任何其他相关的癌症和/或中枢神经系统和周围神经系统的疾病。

癌症/肿瘤相关抗原

在某些方面，疾病相关抗原是癌症相关抗原。在进一步的方面，癌症是癌、肉瘤、骨髓瘤、白血病、淋巴瘤和/或来自这些或其他癌症的混合类型的转移。示例性癌症或肿瘤相关抗原包括但不限于以下表5中公开的那些抗原。

表5.

其他癌症相关抗原包括于在线数据库

http://cancerimmunity.org/peptide/的表格中总结的那些抗原，并且通过引用并入本文，2015年5月6日最后一次参考。

自身免疫疾病相关抗原

在某些方面，包含在抗原-mhc复合物中的疾病相关抗原选自自身免疫疾病相关抗原、炎症相关抗原或变应性疾病相关抗原。在进一步的方面，免疫炎症相关抗原是选自下组的一种或多种：哮喘相关抗原、糖尿病相关抗原、前驱糖尿病相关抗原、多发性硬化相关抗原、变应性哮喘相关抗原、原发性胆汁性肝硬化相关抗原、硬化相关抗原、视神经脊髓炎谱系障碍(德维克病，nmo)相关抗原、自身免疫性脑炎相关抗原、自身抗体介导的神经系统综合征相关抗原、僵人综合征相关抗原、副肿瘤病相关抗原、中枢和周围神经系统其他疾病相关抗原、寻常型天疱疮相关抗原、炎性肠病(ibd)相关抗原、克罗恩病相关抗原、溃疡性结肠炎相关抗原、关节炎相关抗原、类风湿性关节炎相关抗原、系统性红斑狼疮(sle)相关抗原、乳糜泻相关抗原、银屑病相关抗原、斑秃相关抗原、获得性血小板减少性紫癜相关抗原、自身免疫性心肌病相关抗原、特发性扩张型心肌病(idcm)相关抗原、重症肌无力相关抗原、葡萄膜炎相关抗原、强直性脊柱炎相关抗原、格雷夫斯病相关抗原、桥本甲状腺炎相关抗原、免疫介导性肌病相关抗原、抗磷脂综合征

(anca+)相关抗原、动脉粥样硬化相关抗原、硬皮病相关抗原、自身免疫性肝炎相关抗原、皮肌炎相关抗原、慢性阻塞性肺疾病相关抗原、脊髓损伤相关抗原、创伤性损伤相关抗原、烟草诱发的肺破坏相关抗原、慢性阻塞性肺疾病(copd)相关抗原、肺气肿相关抗原、硬化性胆管炎相关抗原、周围神经病变相关抗原、发作性睡病相关抗原、古德帕斯丘综合征相关抗原、川畸病相关抗原、自身免疫性葡萄膜炎相关抗原、结肠炎相关抗原、气肿相关抗原、天疱疮相关抗原、落叶型天疱疮相关抗原、关节炎相关抗原、舍格伦综合征相关抗原、anca相关性血管炎相关抗原、原发性硬化性胆管炎相关抗原、脂肪组织炎症/ii型糖尿病相关抗原或肥胖症相关的脂肪组织炎症/胰岛素抗性相关抗原。

在某些方面，疾病相关抗原来源于下组中的一个或多个：ppi、igrp、gad、外周蛋白、aglia、pdc-e2、胰岛素、dg1ec2、dg3、aqp4、plp、mog、mbp、cii、derp1、derp2、ova、bacint、cbir、fla-x、fla-2、yidx、achr、甲状腺过氧化物酶、甲状腺受体、磷脂抗原、h4、h2b、h1、dna、apob、apoe、nmdar、电压门控钾通道、弹性蛋白、抑制蛋白、perm_human髓过氧化物酶、prtn3_human成髓细胞素、cp2d6_human细胞色素p4502d6、spcs_humano-phosphoseryl-trna(sec)硒转移酶、camp_humancathelicidinantimicrobialpeptide、dna拓扑异构酶i、cenp-c、apoh_humanβ-2-糖蛋白1、ro60_human60kdass-a/ro核糖核蛋白、la_human狼疮la蛋白、irbp、肌球蛋白、cd1d结合脂质抗原、cap18、cp2d6、spcs、ro60、ro52、la、apoh、mpo、prtn3或hsp。

在一些实施方案中，疾病相关抗原是：

a)糖尿病相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：前胰岛素原(ppi)、胰岛特异性葡萄糖-6-磷酸酶(igrp)、谷氨酸脱羧酶(gad)、胰岛细胞自身抗原-2(ica2)、胰岛素、胰岛素原，或其各自的片段或等同物；

b)多发性硬化相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：髓鞘碱性蛋白、髓磷脂相关糖蛋白、髓磷脂少突胶质细胞蛋白、蛋白脂质蛋白、少突胶质细胞髓鞘寡聚蛋白、髓鞘相关少突胶质细胞碱性蛋白、少突胶质细胞特异性蛋白、热休克蛋白、少突胶质细胞特异性蛋白、nogoa、糖蛋白po、周围髓磷脂蛋白22、2'3'-环核苷酸3'-磷酸二酯酶，或其各自的片段或等同物；

c)乳糜泻相关抗原，并且来源于麦醇溶蛋白或其片段或等同物；

d)原发性胆汁性硬化相关抗原，并且来源于pdc-e2或其片段或等同物；

e)落叶型天疱疮相关抗原和/或寻常型天疱疮相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：dg1、dg3，或其各自的片段或等同物；

f)视神经脊髓炎谱系障碍相关抗原，并且来源于aqp4或其片段或等同物；

g)关节炎相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：热休克蛋白、免疫球蛋白结合蛋白、异源核rnp、膜联蛋白v、钙蛋白酶抑制蛋白、ii型胶原蛋白、葡萄糖-6-磷酸异构酶、延伸因子人软骨gp39、甘露糖结合凝集素、瓜氨酸化波形蛋白、ii型胶原蛋白、纤维蛋白原、α烯醇酶、抗氨基甲酰化蛋白质(抗carp)、4型肽基精氨酸脱亚胺酶

(pad4)、braf、纤维蛋白原γ链、间-α-胰蛋白酶抑制剂重链h1、α-1-抗胰蛋白酶、血浆蛋白酶c1抑制剂、凝溶胶蛋白、α1-b糖蛋白、血浆铜蓝蛋白、间-α-胰蛋白酶抑制剂重链h4、补体因子h、α2巨球蛋白、血清淀粉样蛋白、c反应蛋白、血清白蛋白、纤维蛋白原β链、血清转铁蛋白、α2hs糖蛋白、波形蛋白、补体c3，或其各自的片段或等同物；

h)变应性哮喘相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：derp1、derp2，或其各自的片段或等同物；

i)炎性肠病相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：flagelin、fla-2、fla-x、yidx、拟杆菌整合酶，或其各自的片段或等同物；

j)系统性红斑狼疮相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：双链(ds)dna、核糖核蛋白(rnp)、smith(sm)、舍格伦综合征相关抗原a(ss-a)/ro、舍格伦综合征相关抗原b(ss-b)/la、ro60、ro52、组蛋白，或其各自的片段或等同物；

k)动脉粥样硬化相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：apob、apoe或其各自的片段或等同物；

l)copd相关抗原和/或气肿相关抗原，并且来源于弹性蛋白或其片段或等同物；

m)银屑病相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：cap18、admtsl5、atl5，或其各自的片段或等同物；

n)自身免疫性肝炎相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：cyp2d6、sla，或其各自的片段或等同物；

o)葡萄膜炎相关抗原，并且来源于抑制蛋白或其片段或等同物；

p)舍格伦综合征相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：(ss-a)/ro、(ss-b)/la、mr3、ro60、ro52，或其各自的片段或等同物；

q)硬皮病相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：cenp-c、top1、rna聚合酶iii，或其各自的片段或等同物；

r)抗磷脂综合征相关抗原，并且来源于apoh或其片段或等同物；

s)anca相关性血管炎相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：mpo、prtn3，或其各自的片段或等同物；或

t)僵人综合征相关抗原，并且来源于gad或其片段或等同物。糖尿病相关抗原

糖尿病相关抗原包括但不限于来源于ppi、igrp、gad、胰岛细胞自身抗原-2(ica2)和/或胰岛素的那些抗原。自身反应性糖尿病相关抗原肽包括但不限于在以下表6中列出的那些肽，和通过引用其全文并入本文的美国公开号2005/0202032中公开的肽和蛋白质，以及它们各自的等同物和/或组合，

表6.

ms相关抗原

本公开内容的抗原包括与多发性硬化有关的抗原。这样的抗原包括例如美国专利申请公开号2012/0077686中公开的那些抗原，以及来源于髓鞘碱性蛋白、髓磷脂相关糖蛋白、髓磷脂少突胶质细胞蛋白、蛋白脂质蛋白、少突胶质细胞髓鞘寡聚蛋白、髓鞘相关少突胶质细胞碱性蛋白、少突胶质细胞特异性蛋白、热休克蛋白、少突胶质细胞特异性蛋白、nogoa、糖蛋白po、周围髓磷脂蛋白22或2'3'-环核苷酸3'-磷酸二酯酶的抗原。在某些实施方案中，抗原来源于髓磷脂少突胶质细胞糖蛋白(mog)。

在进一步的方面，用于治疗ms和ms相关病症的肽抗原包括但不限于表7中列出的那些肽抗原及其各自的等同物和/或组合。

表7.

乳糜泻(cd)相关抗原

与乳糜泻相关的抗原包括但不限于来源于麦醇溶蛋白的那些抗原。在一些实施方案中，麦醇溶蛋白的非限制性类型包括α/β麦醇溶蛋白、γ-麦醇溶蛋白或ω-麦醇溶蛋白。其他非限制性的示例性乳糜泻相关抗原包括表8中列出的那些抗原及其各自的等同物和/或组合。

表8.

原发性胆汁性肝硬化(pbc)相关抗原

与原发性胆汁性肝硬化相关的抗原包括但不限于来源于pdc-e2的那些抗原。示例性抗原的非限制性实例包括表9中列出的那些抗原及其各自的等同物和/或组合。

表9.

落叶型天疱疮(pf)和寻常型天疱疮(pv)相关抗原

与pf和pv相关的抗原包括但不限于来源于桥粒芯蛋白3(dg3)和/或桥粒芯蛋白1(dg1)的那些抗原。非限制性实例包括表10中列出的那些抗原及其各自的等同物和/或组合。

表10.

视神经脊髓炎谱系障碍(nmo)相关抗原

与nmo相关的抗原包括但不限于来源于aqp4或水通道蛋白4的那些抗原。非限制性实例包括表11中列出的那些抗原及其各自的等同物和/或组合。

表11.

关节炎相关抗原

与关节炎相关的抗原包括但不限于来源于热休克蛋白、免疫球蛋白结合蛋白、异源核rnp、膜联蛋白v、钙蛋白酶抑制蛋白、ii型胶原蛋白、葡萄糖-6-磷酸异构酶、延伸因子人软骨gp39、甘露糖结合凝集素、瓜氨酸化波形蛋白、ii型胶原蛋白、纤维蛋白原、α烯醇酶、抗氨基甲酰化蛋白质(抗carp)、4型肽基精氨酸脱亚胺酶(pad4)、braf、纤维蛋白原γ链、间-α-胰蛋白酶抑制剂重链h1、α-1-抗胰蛋白酶、血浆蛋白酶c1抑制剂、凝溶胶蛋白、α1-b糖蛋白、血浆铜蓝蛋白、间-α-胰蛋白酶抑制剂重链h4、补体因子h、α2巨球蛋白、血清淀粉样蛋白、c反应蛋白、血清白蛋白、纤维蛋白原β链、血清转铁蛋白、α2hs糖蛋白、波形蛋白、补体c3或其各自的片段或等同物的那些抗原。

变应性哮喘相关抗原

与变应性哮喘相关的抗原包括但不限于来源于derp1和derp2的那些抗原。非限制性实例包括表12中列出的那些抗原及其各自的等同物和/或组合。

表12.

炎性肠病相关抗原

与炎性肠病相关的抗原包括但不限于克罗恩病相关抗原和溃疡性结肠炎相关抗原。在一些实施方案中，炎性肠病相关抗原包括但不限于来源于拟杆菌整合酶、flagelin、鞭毛蛋白2(fla-2/fla-x)或未表征的大肠杆菌蛋白质(yidx)的那些抗原。非限制性实例包括表13中列出的那些抗原及其各自的等同物和/或组合。

表13.

系统性红斑狼疮(sle)相关抗原

与sle相关的抗原包括但不限于来源于h4、h2b、h1’、dsdna、rnp、smith(sm)、舍格伦综合征相关抗原a(ss-a)/ro、舍格伦综合征相关抗原b(ss-b)/la和/或组蛋白的那些抗原。在一些实施方案中，ss-a包括但不限于ro60和ro52。在一些实施方案中，组蛋白包括但不限于h4、h2b、h1’。非限制性实例包括表14中列出的那些抗原及其各自的等同物和/或组合。

表14.

动脉粥样硬化相关抗原

与动脉粥样硬化相关的抗原包括但不限于来源于载脂蛋白b

(apob)或载脂蛋白e(apoe)的那些抗原。非限制性实例包括表15中列出的那些抗原及其各自的等同物和/或组合。

表15.

慢性阻塞性肺疾病(copd)和/或气肿相关抗原

与copd和/或气肿相关的抗原包括但不限于来源于弹性蛋白的那些抗原。非限制性实例包括表16中列出的那些抗原及其各自的等同物和/或组合。

表16.

银屑病相关抗原

与银屑病相关的抗原包括但不限于以下表17中列出的那些抗原及其等同物和/或组合。其他非限制性的示例性银屑病相关抗原可来源于人adamis样蛋白5(atl5)、cathelicidinantimicrobialpeptide(cap18)和/或adamts样蛋白5(admtsl5)。

表17.

自身免疫性肝炎相关抗原

自身免疫性肝炎相关抗原包括但不限于以下表18中公开的那些抗原及其等同物和/或组合。其他非限制性的示例性自身免疫性肝炎相关抗原可来源于微粒体细胞色素p450iid6(cyp2d6)和/或可溶性肝抗原(sla)。

表18.

葡萄膜炎相关抗原

葡萄膜炎相关抗原包括但不限于以下表19中公开的那些抗原及其等同物和/或组合。其他非限制性的示例性葡萄膜炎相关抗原可来源于抑制蛋白、人视网膜s抗原和/或光感受器间类维生素a结合蛋白(irbp)。表19.

舍格伦综合征相关抗原

舍格伦综合征相关抗原包括但不限于以下表20中公开的那些抗原及其等同物和/或组合。其他非限制性的示例性舍格伦综合征相关抗原可来源于(ss-a)/ro、(ss-b)/la、ro60、ro52和/或毒蕈碱受体3(mr3)。表20.

硬皮病相关抗原

硬皮病相关抗原包括但不限于以下表21中公开的那些抗原及其等同物和/或组合。非限制性的示例性硬皮病相关抗原可来源于着丝粒自身抗原着丝粒蛋白c(cenp-c)、dna拓扑异构酶i(top1)和/或rna聚合酶iii。

表21.

抗磷脂综合征相关抗原

抗磷脂综合征相关抗原包括但不限于以下表22中公开的那些抗原及其等同物和/或组合。非限制性的示例性抗磷脂综合征相关抗原可来源于β-2-糖蛋白1(bg2p1或apoh)。

表22.

anca相关性血管炎相关抗原

anca相关性血管炎相关抗原包括但不限于以下表23中公开的那些抗原及其等同物和/或组合。非限制性的示例性anca相关性血管炎相关抗原可来源于髓过氧化物酶(mpo)、蛋白酶(prtn3)或细菌通透性增高因子(bpi)。

表23.

僵人综合征相关抗原

僵人综合征相关抗原包括但不限于以下表24中公开的那些抗原及其等同物和/或组合。非限制性的示例性僵人综合征相关抗原可来源于谷氨酸脱羧酶(gad)。在一些实施方案中，gad包括但不限于gad65。表24.

预期在本公开内容的组合物中，每ml组合物中存在约0.001mg至约10mg的总蛋白质。因此，组合物中蛋白质的浓度可以为约、至少约或至多约0.001、0.010、0.050、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0、50、100μg/ml或mg/ml或更多(或其中可得到的任何范围)。这其中，约、至少约或至多约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％可以为肽/mhc/纳米颗粒复合物。

本公开内容预期施用肽/mhc/纳米颗粒复合物来实现针对与自身免疫应答或癌症相关的疾病或病况的发展的诊断、治疗或预防性疗法。

另外，通过引用并入本文的美国专利号4,554,101(hopp)教导了以亲水性为基础从一级氨基酸序列中鉴定和制备表位。通过hopp中公开的方法，本领域技术人员能够从氨基酸序列中鉴定可能的表位，并确定它们的免疫原性。许多科学出版物也致力于从氨基酸序列分析中预测二级结构，并鉴定表位(chou&fasman,1974a,b；1978a,b；1979)。如果需要，可以使用这些技术中的任意技术来补充hopp在美国专利号4,554,101中的教导。

其他抗原组分

可以使用除肽以外的分子作为与mhc分子复合的抗原或抗原片段。此类分子包括但不限于碳水化合物、脂质、小分子等。碳水化合物是多种细胞外表面的主要组分。某些碳水化合物是不同分化阶段的特征，并且这些碳水化合物经常被特异性抗体所识别。不同碳水化合物的表达可局限在特定的细胞类型中。针对子宫内膜和血清抗原的自身抗体应答已显示为子宫内膜易位症的常见特征。已描述了子宫内膜易位症中针对数种之前所鉴定抗原(包括2-hs糖蛋白(2-heremansschmidtglycoprotein)和碳酸酐酶)的血清自身抗体应答，它们对碳水化合物表位是特异性的。

非限制性的示例性抗原-mhc复合物

在某些实施方案中，可优化抗原与mhc的特定组合以用于治疗特定疾病。非限制性实例包括但不限于以下实例：

为了治疗i型糖尿病，pmhc复合物的抗原可来源于下组中的抗原：ppi76-90(k88s)、igrp13-25、gad555-567、gad555-567(557i)、igrp23-35、b24-c36、ppi76-90或其各自的片段或等同物，并且pmhc复合物的mhc包含下组的全部或部分多肽：hla-drb1*0401/dra、hla-drb1*0301/dra或其各自的片段或等同物。

在一些实施方案中，pmhc复合物的抗原包含：

a)糖尿病相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：前胰岛素原(ppi)、胰岛特异性葡萄糖-6-磷酸酶(igrp)、谷氨酸脱羧酶(gad)、胰岛细胞自身抗原-2(ica2)、胰岛素、胰岛素原，或其各自的片段或等同物；

b)多发性硬化相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：髓鞘碱性蛋白、髓磷脂相关糖蛋白、髓磷脂少突胶质细胞蛋白、蛋白脂质蛋白、少突胶质细胞髓鞘寡聚蛋白、髓鞘相关少突胶质细胞碱性蛋白、少突胶质细胞特异性蛋白、热休克蛋白、少突胶质细胞特异性蛋白、nogoa、糖蛋白po、周围髓磷脂蛋白22、2'3'-环核苷酸3'-磷酸二酯酶，或其各自的片段或等同物

c)乳糜泻相关抗原，并且来源于麦醇溶蛋白或其片段或等同物；

d)原发性胆汁性硬化相关抗原，并且来源于pdc-e2或其片段或等同物；

e)落叶型天疱疮相关抗原和/或寻常型天疱疮相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：dg1、dg3，或其各自的片段或等同物；

f)视神经脊髓炎谱系障碍相关抗原，并且来源于aqp4或其片段或等同物；

g)关节炎相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：热休克蛋白、免疫球蛋白结合蛋白、异源核rnp、膜联蛋白v、钙蛋白酶抑制蛋白、ii型胶原蛋白、葡萄糖-6-磷酸异构酶、延伸因子人软骨gp39、甘露糖结合凝集素、瓜氨酸化波形蛋白、ii型胶原蛋白、纤维蛋白原、α烯醇酶、抗氨基甲酰化蛋白质(抗carp)、4型肽基精氨酸脱亚胺酶(pad4)、braf、纤维蛋白原γ链、间-α-胰蛋白酶抑制剂重链h1、α-1-抗胰蛋白酶、血浆蛋白酶c1抑制剂、凝溶胶蛋白、α1-b糖蛋白、血浆铜蓝蛋白、间-α-胰蛋白酶抑制剂重链h4、补体因子h、α2巨球蛋白、血清淀粉样蛋白、c反应蛋白、血清白蛋白、纤维蛋白原β链、血清转铁蛋白、α2hs糖蛋白、波形蛋白、补体c3，或其各自的片段或等同物；

h)变应性哮喘相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：derp1、derp2，或其各自的片段或等同物；

i)炎性肠病相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：flagelin、fla-2、fla-x、yidx、拟杆菌整合酶，或其各自的片段或等同物；

j)系统性红斑狼疮相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：双链(ds)dna、核糖核蛋白(rnp)、smith(sm)、舍格伦综合征相关抗原a(ss-a)/ro、舍格伦综合征相关抗原b(ss-b)/la、ro60、ro52、组蛋白，或其各自的片段或等同物；

k)动脉粥样硬化相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：apob、apoe，或其各自的片段或等同物；

l)copd相关抗原和/或肺气肿相关抗原，并且来源于弹性蛋白或其片段或等同物；

m)银屑病相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：cap18、admtsl5、atl5，或其各自的片段或等同物；

n)自身免疫性肝炎相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：cyp2d6、sla，或其各自的片段或等同物；

o)葡萄膜炎相关抗原，并且来源于抑制蛋白或其片段或等同物；

p)舍格伦综合征相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：(ss-a)/ro、(ss-b)/la、mr3、ro60、ro52，或其各自的片段或等同物；

q)硬皮病相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：cenp-c、top1、rna聚合酶iii，或其各自的片段或等同物；

r)抗磷脂综合征相关抗原，并且来源于apoh或其片段或等同物；

s)anca相关性血管炎相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：mpo、prtn3，或其各自的片段或等同物；或

t)僵人综合征相关抗原，并且来源于gad或其片段或等同物。

在一些实施方案中，pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分的经典mhci类蛋白质、非经典mhci类蛋白质、经典mhcii类蛋白质、非经典mhcii类蛋白质、mhc二聚体(fc融合体)、mhc四聚体或mhc蛋白质的聚合形式，其中该mhc蛋白质任选地包含基于孔-突起接合的mhc-α-fc/mhc-β-fc异二聚体或多聚体。

在一些实施方案中，pmhc复合物的mhc蛋白质包含下组的全部或部分多肽：hladr、hladq、hladp、hla-a、hla-b、hla-c、hla-e、hla-f、hla-g、cd1d，或其各自的片段或等同物。

在一些实施方案中，pmhc复合物的mhc蛋白质包含下组的全部或部分多肽：hla-dr、hla-dq、hla-dp，或其各自的片段或等同物。

在一些实施方案中，pmhc复合物的mhc蛋白质包含下组的全部或部分多肽：hla-drb1/dra、hla-drb3/dra、hla-drb4/dra、hla-drb5/dra、hla-dqa1/hla-dqb1、hla-dpb1/hla-dpa1，或其各自的片段或等同物。

在某些方面，pmhc复合物包含：

a)糖尿病相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：hinsb10-18、higrp228-236、higrp265-273、igrp206-214、higrp206-214、nrp-a7、nrp-i4、nrp-v7、yai/d^b、insb15–23、ppi76-90(k88s)、igrp13-25、gad555-567、gad555-567(557i)、igrp23-35、b24-c36、ppi76-90、ins-i9、tum、g6pase、胰岛素原l2-10、胰岛素原l3-11、胰岛素原l6-14、胰岛素原b5-14、胰岛素原b10-18、胰岛素原b14-22、胰岛素原b15-24、胰岛素原b17-25、胰岛素原b18-27、胰岛素原b20-27、胰岛素原b21-29、胰岛素原b25-c1、胰岛素原b27-c5、胰岛素原c20-28、胰岛素原c25-33、胰岛素原c29-a5、胰岛素原a1-10、胰岛素原a2-10、胰岛素原a12-20，或其各自的片段或等同物；

b)多发性硬化相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：mog35-55、mog36-55、mag287-295、mag509-517、mag556-564、mbp110-118、mog114-122、mog166-175、mog172-180、mog179-188、mog188-196、mog181-189、mog205-214、plp80-88、mag287-295、mag509-517、mag556-564、mog97-109mog97-109(e107s)、mbp89-101、plp175-192、plp94-108、mbp86-98、plp54-68、plp249-263、mog156-170、mog201-215、mog38-52、mog203-217、plp250-264、mpb13-32、mpb83-99、mpb111-129、mpb146-170、mog223-237、mog6-20、plp88-102、plp139-154，或其各自的片段或等同物；

c)乳糜泻相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：aglia57-68、aglia62-72、aglia217-229，或其各自的片段或等同物；

d)原发性胆汁性肝硬化相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：pdc-e2122-135、pdc-e2249-262、pdc-e2249-263、pdc-e2629-643、pdc-e272-86、pdc-e2353-367、pdc-e2422-436、pdc-e2629-643、pdc-e280-94、pdc-e2353-367、pdc-e2535-549，或其各自的片段或等同物；

e)落叶型天疱疮相关抗原和/或寻常型天疱疮相关抗原，其各自来源于选自下组中一个或多个的抗原：dg1216-229、dg397-111、dg3251-265、dg3441-455,dg3351-365、dg3453-467、dg3540-554、dg3280-294、dg3326-340、dg3367-381、dg313-27、dg3323-337、dg3438-452、dg148-62、dg1206-222、dg1363-377、dg13-17、dg1192-206、dg1326-340、dg11-15、dg135-49、dg1325-339，或其各自的片段或等同物；

f)视神经脊髓炎谱系障碍相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：aqp4129-143、aqp4284-298、aqp463-76、aqp4129-143、aqp439-53，或其各自的片段或等同物；

g)变应性哮喘相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：derp116-30、derp1171-185、derp1110-124、derp-226-40、derp-2107-121，或其各自的片段或等同物；

h)炎性肠病相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：拟杆菌整合酶抗原183-197、拟杆菌整合酶抗原146-160、拟杆菌整合酶抗原175-189、拟杆菌整合酶抗原1-15、拟杆菌整合酶抗原183-197、拟杆菌整合酶抗原30-44、拟杆菌整合酶抗原70-84、拟杆菌整合酶抗原337-351、拟杆菌整合酶抗原171-185、拟杆菌整合酶抗原4-18、拟杆菌整合酶抗原256-270、fla-2/fla-x366-380、fla-2/fla-x164-178、fla-2/fla-x261-275、fla-2/fla-x1-15、fla-2/fla-x51-65、fla-2/fla-x269-283、fla-2/fla-x4-18、fla-2/fla-x271-285、yidx78-92、yidx93-107、yidx98-112、yidx23-37、yidx78-92、yidx195-209、yidx22-36、yidx80-94、yidx101-115，或其各自的片段或等同物；

i)系统性红斑狼疮相关抗原，并且其来源于选自下组中一个或多个的抗原：h471-94、h474-88、h476-90、h475-89、h478-92、h480-94、h2b10-24、h2b16-30、h1′22-42、h1′27-41，或其各自的片段或等同物；

j)动脉粥样硬化相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：apob3501-3516、apob1952-1966、apob978-993、apob3498-3513、apob210a、apob210b、apob210c，或其各自的片段或等同物；

k)copd相关抗原和/或气肿相关抗原，其各自来源于选自下组中一个或多个的抗原：弹性蛋白89-103、弹性蛋白698-712、弹性蛋白8-22、弹性蛋白94-108、弹性蛋白13-27、弹性蛋白695-709、弹性蛋白563-577、弹性蛋白558-572、弹性蛋白698-712、弹性蛋白566-580、弹性蛋白645-659，或其各自的片段或等同物；

l)银屑病相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：cap1864-78、cap1834-48、cap1847-61、cap18151-165、cap18149-163、cap18152-166、cap18131-145、cap1824-38、admtsl5245-259、admtsl5267-281、admtsl5372-386、admtsl5289-303、admtsl5396-410、admtsl5433-447、admtsl5142-156、admtsl5236-250、admtsl5301-315、admtsl5203-217、admtsl5404-418，或其各自的片段或等同物；

m)自身免疫性肝炎相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：(cyp2d6)193-207、cyp2d676-90、cyp2d6293-307、cyp2d6313-332、cyp2d6393-412、cyp2d6199-213、cyp2d6450-464、cyp2d6301-315、cyp2d6452-466、cyp2d659-73、cyp2d6130-144、cyp2d6193-212、cyp2d6305-324、cyp2d6131-145、cyp2d6216-230、cyp2d6238-252、cyp2d6199-213、cyp2d6235-252、cyp2d6293-307、cyp2d6381-395、cyp2d6429-443、sla334-348、sla196-210、sla115-129、sla373-386、sla186-197、sla317-331、sla171-185、sla417-431、sla359-373、sla215-229、sla111-125、sla110-124、sla299-313、sla342-356、sla49-63、sla119-133、sla260-274、sla26-40、sla86-100、sla331-345，或其各自的片段或等同物；

n)葡萄膜炎相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：抑制蛋白199-213、抑制蛋白77-91、抑制蛋白250-264、抑制蛋白172-186、抑制蛋白354-368、抑制蛋白239-253、抑制蛋白102-116、抑制蛋白59-73、抑制蛋白280-294、抑制蛋白291-306、抑制蛋白195-209、抑制蛋白200-214，或其各自的片段或等同物；

o)舍格伦综合征相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：ro60127-141、ro60523-537、ro60243-257、ro60484-498、ro60347-361、ro60369-383、ro60426-440、ro60267-281、ro60178-192、ro60358-372、ro60221-235、ro60318-332、ro60407-421、ro60459-473、ro6051-65、ro60312-326、la241-255、la101-115、la153-167、la178-192、la19-33、la37-51、la133-147、la50-64、la32-46、la153-167、la83-97、la136-150、la297-311、la59-73、la151-165、la86-100、la154-168，或其各自的片段或等同物；

p)硬皮病相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：top1346-360、top1420-434、top1750-764、top1419-433、top1591-605、top1695-709、top1305-319、top1346-360、top1419-433、top1425-439、top1614-628、cenp-c297-311、cenp-c857-871、cenp-c887-901、cenp-c212-226、cenp-c643-657、cenp-c832-846、cenp-c167-181、cenp-c246-260、cenp-c846-860、cenp-c149-163、cenp-c833-847、cenp-c847-861，或其各自的片段或等同物；

q)抗磷脂综合征相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：apoh235-249、apoh306-320、apoh237-251、apoh295-309、apoh28-42、apoh173-187、apoh264-278、apoh295-309、apoh49-63、apoh269-283、apoh295-309、apoh321-355、apoh322-336、apoh324-338，或其各自的片段或等同物；

r)anca相关性血管炎相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：mpo506-520、mpo302-316、mpo7-21、mpo689-703、mpo248-262、mpo444-458、mpo513-527、mpo97-111、mpo616-630、mpo462-476、mpo617-631、mpo714-728、prtn344-58、prtn3234-248、prtn359-73、prtn3117-131、prtn3164-178、prtn371-85、prtn3241-255、prtn359-73、prtn3183-197、prtn362-76、prtn3118-132、prtn3239-253，或其各自的片段或等同物；或

s)僵人综合征相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：gad212-226、gad555-569、gad297-311，或其各自的片段或等同物。

在某些方面，pmhc复合物包含：

a)糖尿病相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：hinsb10-18、higrp228-236、higrp265-273、igrp206-214、higrp206-214、nrp-a7、nrp-i4、nrp-v7、yai/d^b、insb15–23、ppi76-90(k88s)、igrp13-25、gad555-567、gad555-567(557i)、igrp23-35、b24-c36、ppi76-90、ins-i9、tum、g6pase、胰岛素原l2-10、胰岛素原l3-11、胰岛素原l6-14、胰岛素原b5-14、胰岛素原b10-18、胰岛素原b14-22、胰岛素原b15-24、胰岛素原b17-25、胰岛素原b18-27、胰岛素原b20-27、胰岛素原b21-29、胰岛素原b25-c1、胰岛素原b27-c5、胰岛素原c20-28、胰岛素原c25-33、胰岛素原c29-a5、胰岛素原a1-10、胰岛素原a2-10、胰岛素原a12-20或其各自的片段或等同物，并且pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分hla-dr或其片段或等同物；

b)多发性硬化相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：mog35-55、mog36-55、mag287-295、mag509-517、mag556-564、mbp110-118、mog114-122、mog166-175、mog172-180、mog179-188、mog188-196、mog181-189、mog205-214、plp80-88、mag287-295、mag509-517、mag556-564、mog97-109mog97-109(e107s)、mbp89-101、plp175-192、plp94-108、mbp86-98、plp54-68、plp249-263、mog156-170、mog201-215、mog38-52、mog203-217、plp250-264、mpb13-32、mpb83-99、mpb111-129、mpb146-170、mog223-237、mog6-20、plp88-102、plp139-154或其各自的片段或等同物，并且pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分hla-dr或其片段或等同物；

c)乳糜泻相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：aglia57-68、aglia62-72、aglia217-229或其各自的片段或等同物，并且pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分hla-dq或其片段或等同物；

d)原发性胆汁性肝硬化相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：pdc-e2122-135、pdc-e2249-262、pdc-e2249-263、pdc-e2629-643、pdc-e272-86、pdc-e2353-367、pdc-e2422-436、pdc-e2629-643、pdc-e280-94、pdc-e2353-367、pdc-e2535-549或其各自的片段或等同物，并且pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分hla-dr或其片段或等同物；

e)落叶型天疱疮相关抗原和/或寻常型天疱疮相关抗原，其各自来源于选自下组中一个或多个的抗原：dg1216-229、dg397-111、dg3251-265、dg3441-455,dg3351-365、dg3453-467、dg3540-554、dg3280-294、dg3326-340、dg3367-381、dg313-27、dg3323-337、dg3438-452、dg148-62、dg1206-222、dg1363-377、dg13-17、dg1192-206、dg1326-340、dg11-15、dg135-49、dg1325-339或其各自的片段或等同物，并且pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分hla-dr或其片段或等同物；

f)视神经脊髓炎谱系障碍相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：aqp4129-143、aqp4284-298、aqp463-76、aqp4129-143、aqp439-53或其各自的片段或等同物，并且pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分hla-dr或其片段或等同物；

g)变应性哮喘相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：derp116-30、derp1171-185、derp1110-124、derp-226-40、derp-2107-121或其各自的片段或等同物，并且pmhc复合物的mhc蛋白质包含下组的全部或部分多肽：hla-dr、hla-dp或其各自的片段或等同物；

h)炎性肠病相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：拟杆菌整合酶抗原183-197、拟杆菌整合酶抗原146-160、拟杆菌整合酶抗原175-189、拟杆菌整合酶抗原1-15、拟杆菌整合酶抗原183-197、拟杆菌整合酶抗原30-44、拟杆菌整合酶抗原70-84、拟杆菌整合酶抗原337-351、拟杆菌整合酶抗原171-185、拟杆菌整合酶抗原4-18、拟杆菌整合酶抗原256-270、fla-2/fla-x366-380、fla-2/fla-x164-178、fla-2/fla-x261-275、fla-2/fla-x1-15、fla-2/fla-x51-65、fla-2/fla-x269-283、fla-2/fla-x4-18、fla-2/fla-x271-285、yidx78-92、yidx93-107、yidx98-112、yidx23-37、yidx78-92、yidx195-209、yidx22-36、yidx80-94、yidx101-115或其各自的片段或等同物，并且pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分hla-dr或其片段或等同物；

i)系统性红斑狼疮相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：h471-94、h474-88、h476-90、h475-89、h478-92、h480-94、h2b10-24、h2b16-30、h1′22-42、h1′27-41或其各自的片段或等同物，并且pmhc复合物的mhc蛋白质包含下组的全部或部分多肽：i-ad、hla-dr或其各自的片段或等同物；

j)动脉粥样硬化相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：apob3501-3516、apob1952-1966、apob978-993、apob3498-3513、apob210a、apob210b、apob210c或其各自的片段或等同物，并且pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分i-ab或其片段或等同物；

k)copd相关抗原和/或气肿相关抗原，其各自来源于选自下组中一个或多个的抗原：弹性蛋白89-103、弹性蛋白698-712、弹性蛋白8-22、弹性蛋白94-108、弹性蛋白13-27、弹性蛋白695-709、弹性蛋白563-577、弹性蛋白558-572、弹性蛋白698-712、弹性蛋白566-580、弹性蛋白645-659或其各自的片段或等同物，并且pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分hla-dr或其片段或等同物；

l)银屑病相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：cap1864-78、cap1834-48、cap1847-61、cap18151-165、cap18149-163、cap18152-166、cap18131-145、cap1824-38、admtsl5245-259、admtsl5267-281、admtsl5372-386、admtsl5289-303、admtsl5396-410、admtsl5433-447、admtsl5142-156、admtsl5236-250、admtsl5301-315、admtsl5203-217、admtsl5404-418或其各自的片段或等同物，并且pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分hla-dr或其片段或等同物；

m)自身免疫性肝炎相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：cyp2d6193-207、cyp2d676-90、cyp2d6293-307、cyp2d6313-332、cyp2d6393-412、cyp2d6199-213、cyp2d6450-464、cyp2d6301-315、cyp2d6452-466、cyp2d659-73、cyp2d6130-144、cyp2d6193-212、cyp2d6305-324、cyp2d6131-145、cyp2d6216-230、cyp2d6238-252、cyp2d6199-213、cyp2d6235-252、cyp2d6293-307、cyp2d6381-395、cyp2d6429-443、sla334-348、sla196-210、sla115-129、sla373-386、sla186-197、sla317-331、sla171-185、sla417-431、sla359-373、sla215-229、sla111-125、sla110-124、sla299-313、sla342-356、sla49-63、sla119-133、sla260-274、sla26-40、sla86-100、sla331-345或其各自的片段或等同物，并且pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分hla-dr或其片段或等同物；

n)葡萄膜炎相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：抑制蛋白199-213、抑制蛋白77-91、抑制蛋白250-264、抑制蛋白172-186、抑制蛋白354-368、抑制蛋白239-253、抑制蛋白102-116、抑制蛋白59-73、抑制蛋白280-294、抑制蛋白291-306、抑制蛋白195-209、抑制蛋白200-214或其各自的片段或等同物，并且pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分hla-dr或其片段或等同物；

o)舍格伦综合征相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：ro60127-141、ro60523-537、ro60243-257、ro60484-498、ro60347-361、ro60369-383、ro60426-440、ro60267-281、ro60178-192、ro60358-372、ro60221-235、ro60318-332、ro60407-421、ro60459-473、ro6051-65、ro60312-326、la241-255、la101-115、la153-167、la178-192、la19-33、la37-51、la133-147、la50-64、la32-46、la153-167、la83-97、la136-150、la297-311、la59-73、la151-165、la86-100、la154-168或其各自的片段或等同物，并且pmhc复合物的mhc蛋白质包含下组的全部或部分多肽：hla-dr、hla-dp或其各自的片段或等同物；

p)硬皮病相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：top1346-360、top1420-434、top1750-764、top1419-433、top1591-605、top1695-709、top1305-319、top1346-360、top1419-433、top1425-439、top1614-628、cenp-c297-311、cenp-c857-871、cenp-c887-901、cenp-c212-226、cenp-c643-657、cenp-c832-846、cenp-c167-181、cenp-c246-260、cenp-c846-860、cenp-c149-163、cenp-c833-847、cenp-c847-861或其各自的片段或等同物，并且pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分hla-dr或其片段或等同物；

q)抗磷脂综合征相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：apoh235-249、apoh306-320、apoh237-251、apoh295-309、apoh28-42、apoh173-187、apoh264-278、apoh295-309、apoh49-63、apoh269-283、apoh295-309、apoh321-355、apoh322-336、apoh324-338或其各自的片段或等同物，并且pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分hla-dr或其片段或等同物；

r)anca相关性血管炎相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：mpo506-520、mpo302-316、mpo7-21、mpo689-703、mpo248-262、mpo444-458、mpo513-527、mpo97-111、mpo616-630、mpo462-476、mpo617-631、mpo714-728、prtn344-58、prtn3234-248、prtn359-73、prtn3117-131、prtn3164-178、prtn371-85、prtn3241-255、prtn359-73、prtn3183-197、prtn362-76、prtn3118-132、prtn3239-253或其各自的片段或等同物，并且pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分hla-dr或其片段或等同物；或

s)僵人综合征相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：gad212-226、gad555-569、gad297-311，并且pmhc复合物的mhc蛋白质包含下组的全部或部分多肽：hla-dr、hla-dq或其各自的片段或等同物。

在某些方面，pmhc复合物用于治疗：

a)i型糖尿病，并且pmhc复合物选自：2pi76-90(k88s)-hla-drb1*0401/dra、igrp13-25-hla-drb1*0301/dra、gad555-567-hla-drb1*0401/dra、gad555-567(557i)-hla-drb1*0401/dra、igrp23-35-hla-drb1*0401/dra、b24-c36-hla-drb1*0301/dra或ppi76-90-hla-drb1*0401/dra；

b)多发性硬化，并且pmhc复合物选自：mbp86-98-hla-drb1*1501/dra、mbp89-101-hla-drb5*0101/dra、mog38-52-hla-drb4*0101/dra、mog97-109(e107s)-hla-drb1*0401/dra、mog203-217-hla-drb3*0101/dra、plp54-68-hla-drb3*0101/dra、plp94-108-hla-drb1*0301/dra、plp250-264-hla-drb4*0101/dra、mpb13-32-hla-drb5*0101/dra、mpb83-99-hla-drb5*0101/dra、mpb111-129-hla-drb5*0101/dra、mpb146-170-hla-drb5*0101/dra、mog223-237-hla-drb3*0202/dra、mog6-20-hla-drb5*0101/dra、plp88-102-hla-drb3*0202/dra或plp139-154-hla-drb5*0101/dra；

c)乳糜泻，并且pmhc复合物选自：aglia57-68-hla-dqa1*0501/hla-dqb1*0201、aglia62-72-hla-dqa1*0501/hla-dqb1*0201、aglia217-229-hla-dqa1*0501/hla-dqb1*0302或aglia217-229-hla-dqa1*03/hla-dqb1*0302；

d)原发性胆汁性肝硬化，并且pmhc复合物选自：pdc-e2122-135-hla-drb4*0101/dra、pdc-e2249-262-hla-drb4*0101/dra、pdc-e2249-263-hla-drb1*0801/dra、pdc-e2629-643-hla-drb1*0801/dra、pdc-e272-86-hla-drb3*0202/dra、pdc-e2353-367-hla-drb3*0202/dra、pdc-e2422-436-hla-drb3*0202/dra、pdc-e2629-643-hla-drb4*0101/dra、pdc-e280-94-hla-drb5*0101/dra、pdc-e2353-367-hla-drb5*0101/dra或pdc-e2535-549-hla-drb5*0101/dra、mpdc-e2166-181-i-ag7或mpdc-e282-96-i-ag7；

e)落叶型天疱疮和/或寻常型天疱疮，并且pmhc复合物选自：dg1216-229-hla-drb1*0101/dra、dg1216-229-hla-drb1*0102/dra、dg397-111-hla-drb1*0402/dra、dg3251-265-hla-drb1*0402/dra、dg3251-265-hla-drb1*0401/dra、dg3441-455-hla-drb1*0402/dra、dg3351-365-hla-drb3*0202/dra、dg3453-467-hla-drb3*0202/dra、dg3540-554-hla-drb3*0202/dra、dg3280-294-hla-drb4*0101/dra、dg3326-340-hla-drb4*0101/dra、dg3367-381-hla-drb4*0101/dra、dg313-27-hla-drb5*0101/dra、dg3323-337-hla-drb5*0101/dra、dg3438-452-hla-drb5*0101/dra、dg148-62-hla-drb3*0202/dra、dg1206-222-hla-drb3*0202/dra、dg1363-377-hla-drb3*0202/dra、dg13-17-hla-drb4*0101/dra、dg1192-206-hla-drb4*0101/dra、dg1326-340-hla-drb4*0101/dra、dg11-15-hla-drb5*0101/dra、dg135-49-hla-drb5*0101/dra或dg1325-339-hla-drb5*0101/dra；

f)视神经脊髓炎谱系障碍，并且pmhc复合物选自：aqp4129-143-hla-drb1*0101/dra、aqp4284-298-hla-drb1*0301/dra、aqp463-76-hla-drb1*0301/dra、aqp4129-143-hla-drb1*0401/dra或aqp439-53-hla-drb1*1501/dra；

g)变应性哮喘，并且pmhc复合物选自：derp-116-30–hla-drb1*0101/dra、derp-116-30-hla-drb1*1501/dra、derp1171-185–hla-drb1*1501/dra、derp-1110-124–hla-dpb1*0401/dra、derp-226-40-hla-drb1*0101/dra、derp-226-40-hla-drb1*1501/dra或derp-2107-121–hla-drb1*0301/dra；

h)炎性肠病，并且pmhc复合物选自：拟杆菌整合酶抗原183-197–hla-drb3*0101/dra、拟杆菌整合酶抗原146-160–hla-drb3*0101/dra、拟杆菌整合酶抗原175-189–hla-drb3*0101/dra、拟杆菌整合酶抗原1-15–hla-drb5*0101/dra、拟杆菌整合酶抗原183-197-hla-drb5*0101/dra、拟杆菌整合酶抗原183-197-hla-drb3*0101/dra、拟杆菌整合酶抗原30-44-hla-drb5*0101/dra、拟杆菌整合酶抗原70-84-hla-drb4*0101/dra、拟杆菌整合酶抗原337-351-hla-drb4*0101/dra、拟杆菌整合酶抗原171-185-hla-drb4*0101/dra、拟杆菌整合酶抗原4-18-hla-drb3*0202/dra、拟杆菌整合酶抗原171-185-hla-drb3*0202/dra、拟杆菌整合酶抗原256-270-hla-drb3*0202/dra、fla-2/fla-x366-380–hla-drb3*0101/dra、fla-2/fla-x164-178–hla-drb3*0101/dra、fla-2/fla-x261-275-hla-drb5*0101/dra、fla-2/fla-x1-15-hla-drb5*0101/dra、fla-2/fla-x51-65-hla-drb4*0101/dra、fla-2/fla-x269-283-hla-drb4*0101/dra、fla-2/fla-x4-18-hla-drb3*0202/dra、fla-2/fla-x261-275-hla-drb3*0202/dra、fla-2/fla-x271-285-hla-drb3*0202/dra、yidx78-92–hla-drb3*0101/dra、yidx78-92–hla-drb4*0101/dra、yidx93-107–hla-drb3*0101/dra、yidx98-112-hla-drb5*0101/dra、yidx23-37-hla-drb5*0101/dra、yidx78-92-hla-drb4*0101/dra、yidx195-209-hla-drb4*0101/dra、yidx22-36-hla-drb3*0202/dra、yidx80-94-hla-drb3*0202/dra或yidx101-115-hla-drb3*0202/dra；

i)copd和/或气肿，并且pmhc复合物选自：弹性蛋白89-103-hla-drb3*0101/dra、弹性蛋白698-712-hla-drb5*0101/dra、弹性蛋白8-22-hla-drb5*0101/dra、弹性蛋白94-108-hla-drb5*0101/dra、弹性蛋白13-27-hla-drb4*0101/dra、弹性蛋白695-709-hla-drb4*0101/dra、弹性蛋白563-577-hla-drb4*0101/dra、弹性蛋白558-572-hla-drb4*0101/dra、弹性蛋白698-712-hla-drb5*0101/dra、弹性蛋白566-580-hla-drb3*0202/dra或弹性蛋白645-659-hla-drb3*0202/dra；

j)银屑病，并且pmhc复合物选自：cap1864-78-hla-drb3*0101/dra、cap1834-48-hla-drb3*0101/dra、cap1847-61-hla-drb3*0101/dra、cap18151-165-hla-drb4*0101/dra、cap18149-163-hla-drb5*0101/dra、cap18152-166-hla-drb5*0101/dra、cap18131-145-hla-drb5*0101/dra、cap1824-38-hla-drb3*0202/dra、admtsl5245-259-hla-drb3*0101/dra、admtsl5267-281-hla-drb3*0101/dra、admtsl5372-386-hla-drb3*0101/dra、admtsl5289-303-hla-drb4*0101/dra、admtsl5396-410-hla-drb4*0101/dra、admtsl5433-447-hla-drb4*0101/dra、admtsl5142-156-hla-drb5*0101/dra、admtsl5236-250-hla-drb5*0101/dra、admtsl5301-315-hla-drb5*0101/dra、admtsl5203-217-hla-drb3*0202/dra、admtsl5404-418-hla-drb3*0202/dra或admtsl5433-447-hla-drb3*0202/dra；

k)自身免疫性肝炎，并且pmhc复合物选自：cyp2d6193-207-hla-drb1*0301/dra、cyp2d676-90-hla-drb1*0301/dra、cyp2d6293-307-hla-drb1*0301/dra、cyp2d6313-332-hla-drb1*0301/dra、cyp2d6393-412-hla-drb1*0301/dra、cyp2d6199-213-hla-drb1*0401/dra、cyp2d6450-464-hla-drb1*0401/dra、cyp2d6301-315-hla-drb1*0401/dra、cyp2d6452-466-hla-drb1*0701/dra、cyp2d659-73-hla-drb1*0701/dra、cyp2d6130-144-hla-drb1*0701/dra、cyp2d6193-212-hla-drb1*0701/dra、cyp2d6305-324-hla-drb1*0701/dra、cyp2d6131-145-hla-drb3*0202/dra、cyp2d6216-230-hla-drb3*0202/dra、cyp2d6238-252-hla-drb3*0202/dra、cyp2d6199-213-hla-drb4*0101/dra、cyp2d6235-252-hla-drb4*0101/dra、cyp2d6293-307-hla-drb4*0101/dra、cyp2d6238-252-hla-drb5*0101/dra、cyp2d6381-395-hla-drb5*0101/dra、cyp2d6429-443-hla-drb5*0101/dra、sla334-348-hla-drb1*0301/dra、sla196-210-hla-drb1*0301/dra、sla115-129-hla-drb1*0301/dra、sla373-386-hla-drb1*0301/dra、sla186-197-hla-drb1*0301/dra、sla317-331-hla-drb1*0401/dra、sla171-185-hla-drb1*0401/dra、sla417-431-hla-drb1*0401/dra、sla359-373-hla-drb1*0701/dra、sla215-229-hla-drb1*0701/dra、sla111-125-hla-drb1*0701/dra、sla110-124-hla-drb3*0202/dra、sla299-313-hla-drb3*0202/dra、sla342-356-hla-drb3*0202/dra、sla49-63-hla-drb4*0101/dra、sla119-133-hla-drb4*0101/dra、sla260-274-hla-drb4*0101/dra、sla26-40-hla-drb5*0101/dra、sla86-100-hla-drb5*0101/dra或sla331-345-hla-drb5*0101/dra；

l)葡萄膜炎，并且pmhc复合物选自：抑制蛋白199-213-hla-drb3*0101/dra、抑制蛋白77-91-hla-drb3*0101/dra、抑制蛋白250-264-hla-drb3*0101/dra、抑制蛋白172-186-hla-drb4*0101/dra、抑制蛋白354-368-hla-drb4*0101/dra、抑制蛋白239-253-hla-drb4*0101/dra、抑制蛋白102-116-hla-drb5*0101/dra、抑制蛋白59-73-hla-drb5*0101、抑制蛋白280-294-hla-drb5*0101、抑制蛋白291-306-hla-drb1*0301/dra、抑制蛋白195-209-hla-drb3*0202/dra、抑制蛋白199-213-hla-drb3*0202/dra或抑制蛋白200-214-hla-drb3*0202/dra；

m)舍格伦综合征，并且pmhc复合物选自：ro60127-141-hla-drb1*0301/dra、ro60523-537-hla-drb1*0301/dra、ro60243-257-hla-drb1*0301/dra、ro60484-498-hla-drb3*0101/dra、ro60347-361-hla-drb3*0101/dra、ro60369-383-hla-drb3*0101/dra、ro60426-440-hla-drb4*0101/dra、ro60267-281-hla-drb4*0101/dra、ro60178-192-hla-drb4*0101/dra、ro60358-372-hla-drb5*0101/dra、ro60358-372-hla-drb4*0101/dra、ro60221-235-hla-drb5*0101/dra、ro60221-235-hla-drb4*0101/dra、ro60318-332-hla-drb5*0101/dra、ro60318-332-hla-drb4*0101/dra、ro60407-421-hla-drb4*0101/dra、ro60407-421-hla-dqa1*0501/hla-dqb1*0201、ro60459-473-hla-drb4*0101/dra、ro60459-473-hla-dqa1*0501/hla-dqb1*0201、ro60318-332-hla-dqa1*0501/hla-dqb1*0201、ro6051-65-hla-drb3*0202/dra、ro60312-326-hla-drb3*0202/dra、ro60347-361-hla-drb3*0202/dra、la241-255-hla-drb1*0301/dra、la101-115-hla-drb1*0301/dra、la153-167-hla-drb1*0301/dra、la178-192-hla-drb3*0101/dra、la19-33-hla-drb3*0101/dra、la37-51-hla-drb3*0101/dra、la133-147-hla-drb4*0101/dra、la50-64-hla-drb4*0101/dra、la32-46-hla-drb4*0101/dra、la153-167-hla-drb5*0101/dra、la83-97-hla-drb5*0101/dra、la136-150-hla-drb5*0101/dra、la297-311-hla-dqa1*0501/hla-dqb1*0201、la59-73-hla-dqa1*0501/hla-dqb1*0201、la59-73-hla-drb4*0101/dra、la151-165-hla-dqa1*0501/hla-dqb1*0201、la151-165-hla-drb4*0101/dra、la297-311-hla-drb4*0101/dra、la50-64-hla-drb3*0202/dra、la86-100-hla-drb3*0202/dra或la154-168-hla-drb3*0202/dra；

n)硬皮病，并且pmhc复合物选自：top1346-360-hla-drb3*0101/dra、top1420-434-hla-drb3*0101/dra、top1750-764-hla-drb3*0101/dra、top1419-433-hla-drb4*0101/dra、top1591-605-hla-drb4*0101/dra、top1695-709-hla-drb4*0101/dra、top1305-319-hla-drb5*0101/dra、top1346-360-hla-drb5*0101/dra、top1419-433-hla-drb5*0101/dra、top1420-434-hla-drb3*0202/dra、top1425-439-hla-drb3*0202/dra、top1614-628-hla-drb3*0202/dra、cenp-c297-311-hla-drb3*0101/dra、cenp-c857-871-hla-drb3*0101/dra、cenp-c887-901-hla-drb3*0101/dra、cenp-c212-226-hla-drb4*0101/dra、cenp-c643-657-hla-drb4*0101/dra、cenp-c832-846-hla-drb4*0101/dra、cenp-c167-181-hla-drb5*0101/dra、cenp-c246-260-hla-drb5*0101/dra、cenp-c846-860-hla-drb5*0101/dra、cenp-c149-163-hla-drb3*0202/dra、cenp-c833-847-hla-drb3*0202/dra或cenp-c847-861-hla-drb3*0202/dra；

o)抗磷脂综合征，并且pmhc复合物选自：apoh235-249-hla-drb3*0101/dra、apoh306-320-hla-drb3*0101/dra、apoh237-251-hla-drb3*0101/dra、apoh295-309-hla-drb3*0101/dra、apoh28-42-hla-drb4*0101/dra、apoh173-187-hla-drb4*0101/dra、apoh264-278-hla-drb4*0101/dra、apoh295-309-hla-drb4*0101/dra、apoh49-63-hla-drb5*0101/dra、apoh269-283-hla-drb5*0101/dra、apoh295-309-hla-drb5*0101/dra、apoh321-355-hla-drb3*0202/dra、apoh322-336-hla-drb3*0202/dra或apoh324-338-hla-drb3*0202/dra；

p)anca相关性血管炎，并且pmhc复合物选自：mpo506-520-hla-drb3*0101/dra、mpo302-316-hla-drb3*0101/dra、mpo7-21-hla-drb3*0101/dra、mpo689-703-hla-drb4*0101/dra、mpo248-262-hla-drb4*0101/dra、mpo444-458-hla-drb4*0101/dra、mpo513-527-hla-drb5*0101/dra、mpo97-111-hla-drb5*0101/dra、mpo616-630-hla-drb5*0101/dra、mpo462-476-hla-drb3*0202/dra、mpo617-631-hla-drb3*0202/dra、mpo714-728-hla-drb3*0202/dra、prtn344-58-hla-drb3*0101/dra、prtn3234-248-hla-drb3*0101/dra、prtn359-73-hladrb3*0101/dra、prtn359-73-hla-drb5*0101/dra、prtn3117-131-hla-drb4*0101/dra、prtn3164-178-hla-drb4*0101/dra、prtn371-85-hla-drb4*0101/dra、prtn3241-255-hla-drb5*0101/dra、prtn3183-197-hla-drb5*0101/dra、prtn362-76-hla-drb3*0202/dra、prtn3118-132-hla-drb3*0202/dra或prtn3239-253-hla-drb3*0202/dra；或

q)僵人综合征，并且pmhc复合物选自：gad212-226-hla-drb1*0801/dra、gad555-569-hla-drb1*0801/dra或gad297-311-hla-drb1*0301/dra。

在一些方面，pmhc复合物用于治疗：

a)i型糖尿病，并且pmhc复合物选自：ppi76-90(k88s)-hla-drb1*0401/dra、igrp13-25-hla-drb1*0301/dra、gad555-567-hla-drb1*0401/dra、gad555-567(557i)-hla-drb1*0401/dra、igrp23-35-hla-drb1*0401/dra或ppi76-90-hla-drb1*0401/dra；

b)多发性硬化，并且pmhc复合物选自：mbp86-98-hla-drb1*1501/dra、mbp89-101-hla-drb5*0101/dra、mog38-52-hla-drb4*0101/dra、mog97-109(e107s)-hla-drb1*0401/dra、mog203-217-hla-drb3*0101/dra、plp54-68-hla-drb3*0101/dra、plp94-108-hla-drb1*0301/dra、plp250-264-hla-drb4*0101/dra、mpb13-32-hla-drb5*0101/dra、mpb83-99-hla-drb5*0101/dra、mpb111-129-hla-drb5*0101/dra、mpb146-170-hla-drb5*0101/dra、mog223-237-hla-drb3*0202/dra、mog6-20-hla-drb5*0101/dra、plp88-102-hla-drb3*0202/dra或plp139-154-hla-drb5*0101/dra；

c)乳糜泻，并且pmhc复合物选自：aglia57-68-hla-dqa1*0501/hla-dqb1*0201、aglia62-72-hla-dqa1*0501/hla-dqb1*0201或aglia217-229-hla-dqa1*0501/hla-dqb1*0302；

d)原发性胆汁性肝硬化，并且pmhc复合物选自：pdc-e2122-135-hla-drb4*0101/dra、pdc-e2249-262-hla-drb4*0101/dra、pdc-e2249-263-hla-drb1*0801/dra、pdc-e2629-643-hla-drb1*0801/dra、pdc-e272-86-hla-drb3*0202/dra、pdc-e2353-367-hla-drb3*0202/dra、pdc-e2422-436-hla-drb3*0202/dra、pdc-e2629-643-hla-drb4*0101/dra、pdc-e280-94-hla-drb5*0101/dra、pdc-e2353-367-hla-drb5*0101/dra或pdc-e2535-549-hla-drb5*0101/dra；

e)落叶型天疱疮和/或寻常型天疱疮，并且pmhc复合物选自：dg1216-229-hla-drb1*0101/dra、dg397-111-hla-drb1*0402/dra、dg3251-265-hla-drb1*0401/dra、dg3441-455-hla-drb1*0402/dra、dg3351-365-hla-drb3*0202/dra、dg3453-467-hla-drb3*0202/dra、dg3540-554-hla-drb3*0202/dra、dg3280-294-hla-drb4*0101/dra、dg3326-340-hla-drb4*0101/dra、dg3367-381-hla-drb4*0101/dra、dg313-27-hla-drb5*0101/dra、dg3323-337-hla-drb5*0101/dra、dg3438-452-hla-drb5*0101/dra、dg148-62-hla-drb3*0202/dra、dg1206-222-hla-drb3*0202/dra、dg1363-377-hla-drb3*0202/dra、dg13-17-hla-drb4*0101/dra、dg1192-206-hla-drb4*0101/dra、dg1326-340-hla-drb4*0101/dra、dg11-15-hla-drb5*0101/dra、dg135-49-hla-drb5*0101/dra或dg1325-339-hla-drb5*0101/dra；

f)视神经脊髓炎谱系障碍，并且pmhc复合物选自：aqp4284-298-hla-drb1*0301/dra、aqp463-76-hla-drb1*0301/dra、aqp4129-143-hla-drb1*0401/dra或aqp439-53-hla-drb1*1501/dra；

g)变应性哮喘，并且pmhc复合物选自：derp-116-30–hla-drb1*0101/dra、derp-116-30-hla-drb1*1501/dra、derp1171-185–hla-drb1*1501/dra、derp-1110-124–hla-dpb1*0401/dra、derp-226-40-hla-drb1*0101/dra、derp-226-40-hla-drb1*1501/dra或derp-2107-121–hla-drb1*0301/dra；

h)炎性肠病，并且pmhc复合物选自：拟杆菌整合酶抗原1-15–hla-drb5*0101/dra、拟杆菌整合酶抗原183-197-hla-drb3*0101/dra、拟杆菌整合酶抗原70-84-hla-drb4*0101/dra、拟杆菌整合酶抗原4-18-hla-drb3*0202/dra、拟杆菌整合酶抗原171-185-hla-drb3*0202/dra、拟杆菌整合酶抗原256-270-hla-drb3*0202/dra、fla-2/fla-x366-380–hla-drb3*0101/dra、fla-2/fla-x261-275-hla-drb5*0101/dra、fla-2/fla-x51-65-hla-drb4*0101/dra、fla-2/fla-x4-18-hla-drb3*0202/dra、fla-2/fla-x261-275-hla-drb3*0202/dra、fla-2/fla-x271-285-hla-drb3*0202/dra、yidx78-92–hla-drb3*0101/dra、yidx78-92–hla-drb4*0101/dra、yidx98-112-hla-drb5*0101/dra、yidx22-36-hla-drb3*0202/dra、yidx80-94-hla-drb3*0202/dra或yidx101-115-hla-drb3*0202/dra；

i)气肿，并且pmhc复合物选自：弹性蛋白89-103-hla-drb3*0101/dra、弹性蛋白698-712-hla-drb5*0101/dra、弹性蛋白558-572-hla-drb4*0101/dra、弹性蛋白566-580-hla-drb3*0202/dra或弹性蛋白645-659-hla-drb3*0202/dra；

j)银屑病，并且pmhc复合物选自：cap1864-78-hla-drb3*0101/dra、cap1834-48-hla-drb3*0101/dra、cap1847-61-hla-drb3*0101/dra、cap18151-165-hla-drb4*0101/dra、cap18149-163-hla-drb5*0101/dra、cap18152-166-hla-drb5*0101/dra、cap18131-145-hla-drb5*0101/dra、cap1824-38-hla-drb3*0202/dra、admtsl5245-259-hla-drb3*0101/dra、admtsl5267-281-hla-drb3*0101/dra、admtsl5372-386-hla-drb3*0101/dra、admtsl5289-303-hla-drb4*0101/dra、admtsl5396-410-hla-drb4*0101/dra、admtsl5433-447-hla-drb4*0101/dra、admtsl5142-156-hla-drb5*0101/dra、admtsl5236-250-hla-drb5*0101/dra、admtsl5301-315-hla-drb5*0101/dra、admtsl5203-217-hla-drb3*0202/dra、admtsl5404-418-hla-drb3*0202/dra或admtsl5433-447-hla-drb3*0202/dra；

k)自身免疫性肝炎，并且pmhc复合物选自：cyp2d6193-207-hla-drb1*0301/dra、cyp2d676-90-hla-drb1*0301/dra、cyp2d6293-307-hla-drb1*0301/dra、cyp2d6313-332-hla-drb1*0301/dra、cyp2d6393-412-hla-drb1*0301/dra、cyp2d6199-213-hla-drb1*0401/dra、cyp2d6450-464-hla-drb1*0401/dra、cyp2d6301-315-hla-drb1*0401/dra、cyp2d6452-466-hla-drb1*0701/dra、cyp2d659-73-hla-drb1*0701/dra、cyp2d6130-144-hla-drb1*0701/dra、cyp2d6193-212-hla-drb1*0701/dra、cyp2d6305-324-hla-drb1*0701/dra、cyp2d6131-145-hla-drb3*0202/dra、cyp2d6216-230-hla-drb3*0202/dra、cyp2d6238-252-hla-drb3*0202/dra、cyp2d6199-213-hla-drb4*0101/dra、cyp2d6235-252-hla-drb4*0101/dra、cyp2d6293-307-hla-drb4*0101/dra、cyp2d6238-252-hla-drb5*0101/dra、cyp2d6381-395-hla-drb5*0101/dra、cyp2d6429-443-hla-drb5*0101/dra、sla334-348-hla-drb1*0301/dra、sla196-210-hla-drb1*0301/dra、sla115-129-hla-drb1*0301/dra、sla373-386-hla-drb1*0301/dra、sla186-197-hla-drb1*0301/dra、sla317-331-hla-drb1*0401/dra、sla171-185-hla-drb1*0401/dra、sla417-431-hla-drb1*0401/dra、sla359-373-hla-drb1*0701/dra、sla215-229-hla-drb1*0701/dra、sla111-125-hla-drb1*0701/dra、sla110-124-hla-drb3*0202/dra、sla299-313-hla-drb3*0202/dra、sla342-356-hla-drb3*0202/dra、sla49-63-hla-drb4*0101/dra、sla119-133-hla-drb4*0101/dra、sla260-274-hla-drb4*0101/dra、sla26-40-hla-drb5*0101/dra、sla86-100-hla-drb5*0101/dra或sla331-345-hla-drb5*0101/dra；

l)葡萄膜炎，并且pmhc复合物选自：抑制蛋白199-213-hla-drb3*0101/dra、抑制蛋白77-91-hla-drb3*0101/dra、抑制蛋白250-264-hla-drb3*0101/dra、抑制蛋白172-186-hla-drb4*0101/dra、抑制蛋白354-368-hla-drb4*0101/dra、抑制蛋白239-253-hla-drb4*0101/dra、抑制蛋白102-116-hla-drb5*0101/dra、抑制蛋白59-73-hla-drb5*0101、抑制蛋白280-294-hla-drb5*0101、抑制蛋白291-306-hla-drb1*0301/dra、抑制蛋白195-209-hla-drb3*0202/dra、抑制蛋白199-213-hla-drb3*0202/dra或抑制蛋白200-214-hla-drb3*0202/dra；

m)舍格伦综合征，并且pmhc复合物选自：ro60127-141-hla-drb1*0301/dra、ro60523-537-hla-drb1*0301/dra、ro60243-257-hla-drb1*0301/dra、ro60484-498-hla-drb3*0101/dra、ro60347-361-hla-drb3*0101/dra、ro60369-383-hla-drb3*0101/dra、ro60426-440-hla-drb4*0101/dra、ro60267-281-hla-drb4*0101/dra、ro60178-192-hla-drb4*0101/dra、ro60358-372-hla-drb5*0101/dra、ro60221-235-hla-drb5*0101/dra、ro60318-332-hla-drb5*0101/dra、ro6051-65-hla-drb3*0202/dra、ro60312-326-hla-drb3*0202/dra、ro60347-361-hla-drb3*0202/dra、la241-255-hla-drb1*0301/dra、la101-115-hla-drb1*0301/dra、la153-167-hla-drb1*0301/dra、la178-192-hla-drb3*0101/dra、la19-33-hla-drb3*0101/dra、la37-51-hla-drb3*0101/dra、la133-147-hla-drb4*0101/dra、la50-64-hla-drb4*0101/dra、la32-46-hla-drb4*0101/dra、la153-167-hla-drb5*0101/dra、la83-97-hla-drb5*0101/dra、la136-150-hla-drb5*0101/dra、la50-64-hla-drb3*0202/dra、la86-100-hla-drb3*0202/dra或la154-168-hla-drb3*0202/dra；

n)硬皮病，并且pmhc复合物选自：top1346-360-hla-drb3*0101/dra、top1420-434-hla-drb3*0101/dra、top1750-764-hla-drb3*0101/dra、top1419-433-hla-drb4*0101/dra、top1591-605-hla-drb4*0101/dra、top1695-709-hla-drb4*0101/dra、top1305-319-hla-drb5*0101/dra、top1346-360-hla-drb5*0101/dra、top1419-433-hla-drb5*0101/dra、top1420-434-hla-drb3*0202/dra、top1425-439-hla-drb3*0202/dra、top1614-628-hla-drb3*0202/dra、cenp-c297-311-hla-drb3*0101/dra、cenp-c857-871-hla-drb3*0101、cenp-c887-901-hla-drb3*0101、cenp-c212-226-hla-drb4*0101/dra、cenp-c643-657-hla-drb4*0101/dra、cenp-c832-846-hla-drb4*0101/dra、cenp-c167-181-hla-drb5*0101/dra、cenp-c246-260-hla-drb5*0101/dra、cenp-c846-860-hla-drb5*0101/dra、cenp-c149-163-hla-drb3*0202/dra、cenp-c833-847-hla-drb3*0202/dra或cenp-c847-861-hla-drb3*0202/dra；

o)抗磷脂综合征，并且pmhc复合物选自：apoh235-249-hla-drb3*0101/dra、apoh306-320-hla-drb3*0101/dra、apoh237-251-hla-drb3*0101/dra、apoh295-309-hla-drb3*0101/dra、apoh28-42-hla-drb4*0101/dra、apoh173-187-hla-drb4*0101/dra、apoh264-278-hla-drb4*0101/dra、apoh295-309-hla-drb4*0101/dra、apoh49-63-hla-drb5*0101/dra、apoh269-283-hla-drb5*0101/dra、apoh295-309-hla-drb5*0101/dra、apoh321-355-hla-drb3*0202/dra、apoh322-336-hla-drb3*0202/dra或apoh324-338-hla-drb3*0202/dra；

p)anca相关性血管炎，并且pmhc复合物选自：mpo506-520-hla-drb3*0101/dra、mpo302-316-hla-drb3*0101/dra、mpo7-21-hla-drb3*0101/dra、mpo689-703-hla-drb4*0101/dra、mpo248-262-hla-drb4*0101/dra、mpo444-458-hla-drb4*0101/dra、mpo513-527-hla-drb5*0101/dra、mpo97-111-hla-drb5*0101/dra、mpo616-630-hla-drb5*0101/dra、mpo462-476-hla-drb3*0202/dra、mpo617-631-hla-drb3*0202/dra、mpo714-728-hla-drb3*0202/dra、prtn344-58-hla-drb3*0101/dra、prtn3234-248-hla-drb3*0101/dra、prtn359-73-hladrb3*0101/dra、prtn359-73-hla-drb5*0101/dra、prtn3117-131-hla-drb4*0101/dra、prtn3164-178-hla-drb4*0101/dra、prtn371-85-hla-drb4*0101/dra、prtn3241-255-hla-drb5*0101/dra、prtn3183-197-hla-drb5*0101/dra、prtn362-76-hla-drb3*0202/dra、prtn3118-132-hla-drb3*0202/dra或prtn3239-253-hla-drb3*0202/dra；或

q)僵人综合征，并且pmhc复合物选自：gad212-226-hla-drb1*0801/dra、gad555-569-hla-drb1*0801/dra或gad297-311-hla-drb1*0301/dra。

与pmhc/np复合物偶联的一个或多个共刺激分子的选择也可以类似地优化，并将主要取决于需要分化或扩增的免疫细胞群体的性质。例如，如果意图扩增或分化t调节细胞群体，则相关的组合可以包括但不限于共刺激分子和细胞因子，如il15-il15ra、il-2、il-10、il-35、icos-l、il2/抗-il2mab复合物、tgf-β、il-21、ite或icosl。相反，在某些实施方案中，如对于某些类型的癌症，t调节表型的扩增和/或分化可能不是所需的应答。因此，供选择的共刺激分子和细胞因子将针对特定的治疗进行优化。

纳米颗粒和复合物的制备方法

mhc和纳米颗粒可通过多种方法制备。以下仅为示例性的。

mhc

为了制备mhci类复合物，提供了两种示例性方法。第一种方法涉及重新折叠在肽的存在下在细菌中表达的mhci类重链和轻链，随后通过凝胶过滤和阴离子交换层析进行纯化，如文献(garboczi,d.n.等人(1992)procnatl.acadsciusa89:3429-3433；altman,j.d.等人(1996)

science274:94-96)中所述。第二种方法涉及在慢病毒转导的自由式cho细胞中以高产率表达mhci类复合物作为单链构建体，其中肽编码序列、mhci类轻链和重链依次用柔性gs连接体栓接(yu,y.y.等人(2002)jimmunol168:3145-3149)，随后是羧基端连接体，其编码bira位点、6xhis标签，结束于游离cys。使用镍柱和阴离子交换层析从培养上清液中纯化分泌的蛋白质，并将其直接用于np包被或使用荧光染料缀合的链霉亲和素进行生物素化以产生pmhc四聚体。如通过流式细胞术所测，使用编码igrp206-214自身抗原肽或其模拟物nrp-v7的代表性单链pmhc复合物产生的四聚体与同源单克隆自身反应性cd8+t细胞有效结合，但不与其多克隆对应物结合。

重组pmhcii类单体可以从果蝇sc2细胞中纯化，所述细胞用编码分别携带c-jun或c-fos亮氨酸拉链的i-aβ和i-aα链以及bira和6xhis标签的构建体进行转染，如先前所述(stratmann,t.等人(2000)jimmunol165:3214-3225，stratmann,t.等人(2003)j.clin.invest.112:3214-3225)。由于这种方法的产率通常很低并且耗时，申请人已经开发了在用编码单顺反子信息的慢病毒转导的自由式cho细胞中的表达系统，其中复合物的肽-iaβ和iaα链被核糖体跳跃p2a序列隔开(holst,j.等人(2006)natprotoc1:406-417)。如同上述单链pmhci类构建体一样，将编码bira位点、6xhis标签和游离cys的连接体添加至构建体的羧基末端。自组装的pmhcii类复合物从细胞培养上清液中通过镍层析纯化，随后进行阴离子交换，并用于包被到np上，或者如上所述进行加工以用于生物素化和四聚体形成。如通过流式细胞术所测，使用编码2.5mi自身抗原肽的代表性pmhcii类复合物产生的pmhcii类四聚体被同源单克隆自身反应性cd4+t细胞特异性且有效地结合。

如(stratmann,t.等人(2000)jimmunol165:3214-3225；stratmann,t.等人(2003)j.clin.invest.112:3214-3225；amrani,a.等人(2000)nature406:739-742)所述，pe缀合的四聚体可使用生物素化pmhc单体来制备。外周血单个核细胞、脾细胞和淋巴结cd8+或cd4+t细胞可以在4℃下用facs缓冲液(pbs中的0.1％叠氮化钠和1％fbs)中的四聚体(5ug/ml)染色1小时，洗涤，并在4℃下与fitc缀合的抗-cd8α或抗-cd4(5μg/ml)和percp缀合的抗-b220(2μg/ml；作为“哑(dumb)”门)一起温育30min。将细胞洗涤，在1％pfa/pbs中固定，并通过facs分析。

np合成

纳米颗粒可以通过以下步骤形成：接触含有共刺激分子、pmhc复合物和/或细胞因子和聚合物的水相，以及非水相，随后蒸发该非水相，以引起颗粒从该水相中的聚结，如美国专利号4,589,330或4,818,542中所教导的。用于这类制备的某些聚合物为天然的或合成的共聚物或聚合物，其包括明胶琼脂、淀粉、阿拉伯半乳聚糖、白蛋白、胶原蛋白、聚乙醇酸、聚乳酸、乙交酯-l(-)丙交酯聚(ε-己内酯)、聚(ε-己内酯-共-乳酸)、聚(ε-己内酯-共-乙醇酸)、聚(β-羟基丁酸)、聚(氧化乙烯)、聚乙烯、聚(烷基-2-氰基丙烯酸酯)、聚(甲基丙烯酸羟乙酯)、聚酰胺、聚(氨基酸)、聚(2-羟乙基dl-天冬酰胺)、聚(酯脲)、聚(l-苯丙氨酸/乙二醇/1,6-二异氰酸己烷)和聚(甲基丙烯酸甲酯)。特别地，某些聚合物为聚酯，如聚乙醇酸、聚乳酸、乙交酯-l(-)丙交酯聚(ε-己内酯)、聚(ε-己内酯-共-乳酸)和聚(ε-己内酯-共-乙醇酸)。可用于溶解聚合物的溶剂包括：水、六氟异丙醇、二氯甲烷、四氢呋喃、己烷、苯或六氟丙酮倍半水合物。

如(perrault,s.d.等人,(2009)nanolett9:1909-1915)所述，用柠檬酸钠化学还原氯化金来合成金纳米颗粒(gnp)。简言之，在剧烈搅拌下将2ml1％的haucl4(sigmaaldrich)添加至100mlh2o中，并将该溶液在油浴中加热。将6ml(对于14nmgnp)或2ml(对于40nmgnp)1％的柠檬酸钠添加至沸腾的haucl4溶液中，将其再搅拌10分钟，然后冷却至室温。通过添加1μmol的用-cooh或-nh2基团官能化的巯基-peg连接体(nanocs,ma)作为mhc的受体来稳定gnp。聚乙二醇化的gnp用水洗涤以除去游离的巯基-peg，浓缩，并储存在水中以供进一步分析。np密度通过分光光度法测定并且根据比尔定律计算。

sfp系列氧化铁np(sfpionp)也可以如下产生：在表面活性剂的存在下在有机溶剂中进行乙酸铁的热分解，然后通过聚乙二醇化在水性缓冲液中提供溶剂(xie,j.等人(2007)advmater19:3163；xie,j.等人(2006)pureappl.chem.78:1003-1014；xu,c.等人(2007)polymerinternational56:821-826)。简言之，将2mmolfe(acac)3(sigmaaldrich,oakville,on)溶解于10ml二苄醚和油酰胺的混合物中，并且加热至100℃保持1小时，随后在氮气层保护下回流加热至300℃保持2小时。通过添加乙醇使合成的np沉淀并且重悬于己烷中。对于ionp的聚乙二醇化，将100mg不同的3.5kdadpa-peg连接体(jenkemtechusa)溶解于chcl3和hcon(ch3)2(二甲基甲酰胺(dmf))的混合物中。然后将该np溶液(20mgfe)添加至dpa-peg溶液中，并且在室温下搅拌4小时。通过添加己烷使聚乙二醇化的sfpnp沉淀过夜，然后重悬于水中。通过高速离心(20,000xg，30分钟)去除痕量的聚集体，并且将单分散sfpnp储存于水中以供进一步表征和pmhc缀合。ionp产物中铁的浓度通过在2nhcl中在a410下的分光光度法测定。基于sfpnp(fe3o4；直径8+1nm)的分子结构和直径(xie,j.等人(2007)advmater19:3163；xie,j.等人(2006)pureappl.chem.78:1003-1014)，申请人估计含有1mg铁的sfp溶液含有5x10¹⁴个np。

纳米颗粒也可以通过热分解或加热纳米颗粒前体来制备。在一个实施方案中，该纳米颗粒为金属或金属氧化物纳米颗粒。在一个实施方案中，该纳米颗粒为氧化铁纳米颗粒。在一个实施方案中，该纳米颗粒为金纳米颗粒。在一个实施方案中，本文提供了根据本技术制备的纳米颗粒。在一个实施方案中，本文提供了制备包含乙酰丙酮酸铁的热分解反应的氧化铁纳米颗粒的方法。在一个实施方案中，所获得的氧化铁纳米颗粒为水溶性的。在一方面，该氧化铁纳米颗粒适用于蛋白质缀合。在一个实施方案中，所述方法包括单步热分解反应。

在一方面，所述热分解在官能化peg分子的存在下发生。表1中示出了官能化peg连接体的某些非限制性实例。

在一方面，所述热分解包括加热乙酰丙酮酸铁。在一个实施方案中，所述热分解包括在官能化peg分子的存在下加热乙酰丙酮酸铁。在一个实施方案中，所述热分解包括在二苄醚和官能化peg分子的存在下加热乙酰丙酮酸铁。

不受理论束缚，在一个实施方案中，使用官能化peg分子作为还原剂和表面活性剂。本文提供的制备纳米颗粒的方法简化了并且改进了常规方法，其使用难以被peg分子置换的或不能完全置换的表面活性剂，以使颗粒成为水溶性的。常规地，表面活性剂可以是昂贵的(例如磷脂)或有毒的(例如油酸或油酰胺)。另一方面，不受理论束缚，所述制备纳米颗粒的方法避免了使用常规表面活性剂的需要，由此获得高度的分子纯度和水溶性。

在一个实施方案中，所述热分解涉及乙酰丙酮酸铁和二苄醚，并且不存在除本文使用的那些之外的常规表面活性剂。

在一个实施方案中，热分解温度为约80℃至约300℃，或约80℃至约200℃，或约80℃至约150℃，或约100℃至约250℃，或约100℃至约200℃，或约150℃至约250℃，或约150℃至约250℃。在一个实施方案中，热分解在约1小时至约2小时的时间发生。

在一个实施方案中，所述制备氧化铁纳米颗粒的方法包括纯化步骤，如通过使用miltenyibiotecls磁体柱。

在一个实施方案中，所述纳米颗粒在约4℃下在磷酸盐缓冲盐水(pbs)中稳定，没有任何可检测的降解或聚集。在一个实施方案中，所述纳米颗粒稳定至少6个月。

在一方面，本文提供了制备纳米颗粒复合物的方法，其包括使pmhc与本文提供的氧化铁纳米颗粒接触。不受理论束缚，pmhc在其羧基末端编码半胱氨酸，该半胱氨酸可以在约ph6.2至约ph6.5下与官能化peg中的马来酰亚胺基团反应约12至约14小时。

在一方面，所述制备纳米颗粒复合物的方法包括纯化步骤，如通过使用miltenyibiotecls磁体柱。

偶联至纳米颗粒

在某些方面，抗原-mhc复合物和/或细胞因子和/或共刺激分子可以通过共价、非共价或交联中的一种或多种与纳米颗粒核心偶联，并且任选地通过连接体偶联。在进一步的方面，该连接体在大小上可以小于5kd，并且任选地为聚乙二醇。在涉及一个或多个连接体的方面，所述连接体在单个纳米颗粒核心上可以彼此相同或不同。

为了将基底或颗粒偶联至抗原-mhc复合物和/或细胞因子和/或共刺激分子，可以应用以下技术。

可以通过化学修饰基底或颗粒(其通常涉及在表面上产生“官能团”)而产生结合，所述官能团能够结合mhc复合物，和/或将表面或颗粒的任选地化学修饰的表面与共价或非共价结合的所谓“连接分子”连接，随后使mhc或mhc复合物与获得的颗粒反应。

术语“连接分子”或“连接体”意指能够与基底或颗粒连接并且还能够连接至mhc复合物的物质。

上文中使用的术语“官能团”不限于形成共价键的反应性化学基团，而且包括导致与mhc复合物之间的离子相互作用或氢键的化学基团。此外，应该注意的是，在表面产生的“官能团”与带有“官能团”的连接分子之间的严格区分是不可能的，因为有时表面的修饰需要更小的连接分子如乙二醇与颗粒表面反应。

官能团或带有该官能团的连接分子可选自氨基、碳酸基、硫醇、硫醚、二硫化物、胍基、羟基、胺基、邻位二醇、醛、α-卤代乙酰基、汞有机物(organyles)、酯基、酰卤、酸硫酯、酸酐、异氰酸酯、异硫氰酸酯、磺酰卤、亚氨酸酯、重氮乙酸酯、重氮盐、1,2-二酮、膦酸、磷酸酯、磺酸、唑啉(azolides)、咪唑、吲哚、n-马来酰亚胺、α-β-不饱和羰基化合物、芳基卤化物或其衍生物。

其他具有较高分子量的连接分子的非限制性实例为核酸分子、聚合物、共聚物，可聚合偶联剂、二氧化硅、蛋白质和具有相对于基底或颗粒具有相反极性的表面的链状分子。虽然具有关于连接分子的互补序列，核酸可以提供与含有其核酸分子的亲和分子的连接。

在一些实施方案中，所述连接分子包含聚乙二醇。在一些实施方案中，所述连接分子包含聚乙二醇和马来酰亚胺。在一些实施方案中，所述聚乙二醇包含c1-c3烷氧基、-r¹⁰nhc(o)r-、-r¹⁰c(o)nhr-、-r¹⁰oc(o)r-、-r¹⁰c(o)or-中的一种或多种，其中每个r独立地为h或c1-c6烷基，并且其中每个r¹⁰独立地为键或c1-c6烷基。

作为可聚合偶联剂的实例，可以引用联乙炔、苯乙烯丁二烯、乙酸乙烯酯、丙烯酸酯、丙烯酰胺、乙烯基化合物、苯乙烯，氧化硅、氧化硼、氧化磷、硼酸盐、吡咯、聚吡咯和磷酸盐。

可以通过多种方法将pmhc复合物偶联至纳米颗粒，一个非限制性实例包括可在1-乙基-3-[3-二甲基氨基丙基]碳二亚胺盐酸盐(edc)的存在下通过形成酰胺键而实现的，与采用携带远端-nh2或-cooh基团的peg连接体产生的np的缀合。将具有-cooh基团的np首先溶解在ph5.5的20mmmes缓冲液中。将n-羟基磺基琥珀酰亚胺钠盐(sulpha-nhs,thermoscientific,waltham,ma，终浓度10mm)和edc(thermoscientific,waltham,ma，终浓度1mm)添加至np溶液。在室温下搅拌20分钟后，将该np溶液逐滴添加至含有溶解于20mm硼酸盐缓冲液(ph8.2)中的pmhc单体的溶液中。将该混合物再搅拌4小时。为了将mhc缀合至nh2官能化的np上，将pmhc复合物首先溶解于含有100mmnacl的20mmmes缓冲液(ph5.5)中。然后将sulpha-nhs(10mm)和edc(5mm)添加至该mhc溶液中。然后将该活化的mhc分子添加至20mm硼酸盐缓冲液(ph8.2)中的np溶液中，并且在室温下搅拌4小时。

为了将mhc缀合至马来酰亚胺官能化的np上，首先将pmhc复合物与三丁基膦(tbp，1mm)在室温下温育4小时。然后将经改造以编码游离羧基末端cys残基的pmhc与含有2mmedta、150mmnacl的40mm磷酸盐缓冲液(ph6.0)中的np混合，并且在室温下温育过夜。该pmhc复合物的mhc通过在马来酰亚胺基团与cys残基之间形成碳-硫键而与np共价结合。

点击化学可用于将pmhc或抗生物素蛋白缀合至用叠氮基团官能化的np上。对于这个反应，首先将mhc或抗生物素蛋白分子与二苯并环辛基(dbco,clickchemistrytools,scottdale,az)试剂在室温下温育2小时。游离的dbco分子可以通过透析过夜去除。然后将mhc-或抗生物素蛋白-dbco缀合物与sfp-z温育2小时，导致在pmhc或抗生物素蛋白分子与np之间形成三唑键。

在不同的mhc-np缀合反应中未缀合的pmhc复合物可以使用本领域已知的方法通过充分透析而去除。一个非限制性的实例为在4℃下通过300kda分子量截止值的膜(spectrumlabs)针对ph7.4的pbs进行透析。或者，可以通过磁力分离纯化pmhc缀合的ionp。可以通过amiconultra-15单元(100kdamwco)通过超滤来浓缩该缀合的np并且储存于pbs中。

基底或颗粒的表面可以被化学修饰，例如通过具有反应性官能团的膦酸衍生物的结合。这些膦酸或膦酸酯衍生物的一个实例是可以根据“mannich-moedritzer”反应合成的亚氨基-双(亚甲基膦酰基)碳酸。该结合反应可以采用从制备工艺直接获得的或者(例如用三甲基溴硅烷)预处理之后的基底或颗粒进行。在第一种情况下，例如，膦酸(酯)衍生物可取代仍然与表面结合的反应介质的组分。这种取代在更高的温度下可以得到加强。另一方面，三甲基溴硅烷被认为使含烷基的磷基络合剂脱烷基化，从而为膦酸(酯)衍生物创造新的结合位点。该膦酸(酯)衍生物或与其结合的连接分子可显示出与上面给出的相同的官能团。该基底或颗粒的表面处理的另一个实例涉及在二醇如乙二醇中加热。应该指出的是，如果合成已经在二醇中进行，则这种处理可能是多余的。在这些情况下，直接获得的合成产物可能显示出必需的官能团。然而，这种处理适用于在含n或p的络合剂中产生的基底或颗粒。如果对这样的基底或颗粒进行乙二醇后处理，则仍然与表面结合的反应介质的成分(例如络合剂)可以被二醇取代和/或可以脱烷基化。

还可以用具有第二官能团的伯胺衍生物取代仍然与颗粒表面结合的含n的络合剂。基底或颗粒的表面也可以用二氧化硅包被。二氧化硅允许有机分子的相对简单的化学缀合，因为二氧化硅容易与有机连接体如三乙氧基硅烷或氯硅烷反应。颗粒表面也可以被均聚物或共聚物包被。可聚合偶联剂的实例为：n-(3-氨基丙基)-3-巯基苄脒、3-(三甲氧基甲硅烷基)丙基酰肼和3-(三甲氧基甲硅烷基)丙基马来酰亚胺。本文提及可聚合偶联剂的其他非限制性实例。这些偶联剂可以单独或组合使用，这取决于将作为涂层产生的共聚物的类型。

可以与含有氧化过渡金属化合物的基底或颗粒一起使用的另一种表面修饰技术是通过氯气或有机氯化剂将氧化的过渡金属化合物转化为相应的氯氧化物。这些氯氧化物能够与亲核试剂如生物分子中常见的羟基或氨基反应。这种技术允许产生与蛋白质的直接缀合，例如通过赖氨酸侧链的氨基。用氯氧化物进行表面修饰后与蛋白质的缀合也可以通过使用双功能连接体如马来酰亚胺基丙酸酰肼来实现。

对于非共价连接技术，具有与基底或颗粒表面相反的极性或电荷的链型分子是特别合适的。可以与核/壳纳米颗粒非共价连接的连接分子的实例涉及阴离子、阳离子或两性离子表面活性剂、酸性或碱性蛋白质、聚胺、聚酰胺、聚砜或聚羧酸。基底或颗粒与具有反应官能团的两亲试剂之间的疏水相互作用可产生必要的连接。特别地，可以彼此交联的具有两亲特征的链型分子，如磷脂或衍生化的多糖是有用的。这些分子在表面上的吸附可以通过共温育来实现。亲和分子与基底或颗粒之间的结合也可以基于非共价自组织键。其中一个实例涉及用生物素作为连接分子并采用抗生物素蛋白或链霉亲和素偶联分子的简单检测探针。

官能团与生物分子的偶联反应的方案可以在文献中找到，例如在“bioconjugatetechniques”(gregt.hermanson,academicpress1996)中。根据有机化学的标准程序，如氧化、卤化、烷基化、酰化、加成、取代或酰胺化，生物分子(例如mhc分子或其衍生物)可以共价或非共价地与连接分子偶联。用于偶联共价或非共价结合的连接分子的这些方法可以在连接分子与基底或颗粒偶联之前或之后应用。进一步，通过温育可以实现分子与相应预处理的基底或颗粒(例如通过三甲基溴硅烷)的直接结合，该基底或颗粒由于该预处理而显示出修饰的表面(例如更高电荷或极性表面)。

药物组合物和施用

本文提供了可用于治疗和预防疾病的药物组合物。该组合物包含本文所述的纳米颗粒复合物和载体，或者基本上由该纳米颗粒复合物和载体组成，或者进一步由该纳米颗粒复合物和载体组成。

该组合物可以用于诱发或改变针对疾病相关抗原，例如多肽、肽、碳水化合物、脂质或其他分子或分子片段的免疫应答，以及对抗发展由这种自身免疫应答引起的病况或疾病或癌症。

本公开内容的组合物可以常规地通过胃肠外，通过注射，例如静脉内、皮下或肌肉内施用。适用于其他施用模式的其他制剂包含口服制剂。口服制剂包含通常使用的赋形剂，例如药物等级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。这些组合物采取溶液、悬浮液、片剂、丸剂、胶囊、持续释放制剂或粉末的形式，并且含有约10％至约95％的活性成分，优选约25％至约70％。根据本公开内容，本领域技术人员将知道含有改变受试者免疫状态的抗原-mhc-纳米颗粒复合物的水性组合物的制备。在某些实施方案中，组合物可以被吸入(例如美国专利号6,651,655，其特别通过引用整体并入)。在一个实施方案中，全身施用该抗原-mhc-纳米颗粒复合物。在具体的实施方案中，可以静脉内施用该pmhc-np复合物或包含多种pmhc-np复合物的组合物。

通常，本公开内容的组合物以与剂量制剂相匹配的方式施用，并且其用量将是治疗有效的和免疫改变性的。施用的量取决于待治疗的受试者。需要施用的活性成分的精确量取决于从业者的判断。然而，合适的剂量范围为每次施用大约10至数百纳克或者微克抗原/mhc/纳米颗粒复合物。初始施用和加强施用的合适的方案也是可变的，但是以初始施用之后进行后续施用为典型。

应用方式可以差别很大。任何用于疫苗施用的常规方法都适用。据信这些包括在固体生理上可接受的基质上或在生理上可接受的分散体中的口服施用，肠胃外，注射等。抗原/mhc/纳米颗粒复合物的剂量将取决于施用途径，并且将根据受试者的体格和健康而变化。

在许多情况下，希望多次施用肽/mhc/纳米颗粒复合物，大约、至少约或至多约3、4、5、6、7、8、9、10次或更多次施用。施用的范围通常为1、2、3、4、5、6或7天至12周的间隔，更常见的为1至2周的间隔。将希望以每隔一天、每周两次、每周、每两周、每月，或0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1、2、3、4或5年(通常为两年)的时间间隔定期进行加强施用，以维持免疫系统的状况。在施用过程之后可以进行自身反应性免疫应答、同源tr1细胞和t细胞活性的测定。

在某些方面，不包含纳米颗粒核心和任何外层的单剂量的pmhc复合物包含约0.001mg/kg至约2.0mg/kg，或约0.001mg/kg至约1.5mg/kg，或约0.001mg/kg至约1.4mg/kg，或约0.001mg/kg至约1.3mg/kg，或约0.001mg/kg至约1.2mg/kg，或约0.001mg/kg至约1.1mg/kg，或约0.001mg/kg至约1.0mg/kg。在一些实施方案中，所述单剂量包含约0.004mg/kg至约1.014mg/kg，或约0.02mg/kg至约0.811mg/kg，或约0.041mg/kg至约0.608mg/kg，或约0.061mg/kg至约0.507mg/kg，或约0.081mg/kg至约0.405mg/kg，或约0.121mg/kg至约0.324mg/kg，或约0.162mg/kg至约0.243mg/kg。在一些实施方案中，所述单剂量包含约0.004mg/kg至约1.015mg/kg，或约0.004mg/kg至约1.0mg/kg，或约0.004mg/kg至约0.9mg/kg，或约0.004mg/kg至约kg，或约0.004mg/kg至约0.7mg/kg，或约0.004mg/kg至约0.6mg/kg，或约0.004mg/kg至约0.5mg/kg，或约0.004mg/kg至约0.4mg/kg，或约0.004mg/kg至约0.3mg/kg，或约0.004mg/kg至约0.2mg/kg，或约0.004mg/kg至约0.1mg/kg。

联合疗法

本公开内容的组合物和相关方法，特别是抗原/mhc/纳米颗粒复合物的施用，也可以与传统疗法的施用联合使用。这些包括但不限于免疫抑制或调节疗法或治疗的施用。某些疾病相关治疗的非限制性实例包括avonex(干扰素β-1a)、betaseron(干扰素β-1b)、copaxone(格拉默醋酸盐)、novantrone(米托蒽醌)、rebif(干扰素β-1a)、tysabri(那他珠单抗)、gilenya(芬戈莫德)、格拉默、类固醇、环磷酰胺(cytoxan)、依木兰(imuran)、巴氯芬、深度脑刺激、ampyra(达伐吡啶)、针灸和物理疗法。当治疗癌症时，可以添加额外的化学疗法、放射疗法或手术，以增加所公开的组合物和方法的治疗反应。

在一方面，考虑将抗原/mhc/纳米颗粒复合物与细胞因子治疗结合使用。或者，抗原/mhc/纳米颗粒复合物施用可以在其他治疗之前或之后数分钟至数周的时间间隔进行。在分开施用其他药剂和/或抗原/mhc/纳米颗粒复合物的实施方案中，通常将确保在每次递送时间之间不会超过显著的一段时间，使得该药剂和抗原/mhc/纳米颗粒复合物仍然能够对受试者施加有利的组合效果。在这类情况下，考虑可以在彼此约12-24小时内施用两种形式，更优选地在彼此约6-12小时内施用两种形式。在一些情况下，可能需要显著延长施用时间，然而，各个施用之间有数天(2、3、4、5、6或7)至数周(1、2、3、4、5、6、7或8)的时间间隔。

可以采用多种组合，例如抗原/mhc/纳米颗粒复合物施用为“a”而额外的药剂为“b”：

a/b/ab/a/bb/b/aa/a/ba/b/bb/a/aa/b/b/bb/a/b/b

b/b/b/ab/b/a/ba/a/b/ba/b/a/ba/b/b/ab/b/a/a

b/a/b/ab/a/a/ba/a/a/bb/a/a/aa/b/a/aa/a/b/a

考虑到毒性(如果有的话)，将本公开内容的肽-mhc复合物组合物施用于患者/受试者将遵循用于施用此类化合物的一般方案。预计治疗周期将根据需要重复进行。也考虑到各种标准疗法，如水合作用，可以与所述疗法联合应用。

药物载体和制剂

在一些实施方案中，将药物组合物施用于受试者。本公开内容的不同方面涉及向受试者施用有效量的抗原/mhc/纳米颗粒复合物组合物。另外，这类组合物可以与免疫系统调节剂联合施用。这类组合物通常将溶解或分散于药学上可接受的载体或水性介质中。

短语“药学上可接受的”或“药理学上可接受的”是指当施用于动物或人时不会产生不利的、变应性的或其他不良反应的分子实体和组合物。如本文所用，“药学上可接受的载体”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣剂、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。这类介质和药剂用于药物活性物质的使用在本领域中是公知的。除了与活性成分不相容的任何常规介质或试剂外，考虑其在免疫原性和治疗性组合物中的应用。

本公开内容的活性化合物可以配制用于肠胃外施用，例如配制为通过静脉内、肌肉内、皮下或甚至腹膜内途径注射。包含改变受试者免疫状况的抗原/mhc/纳米颗粒复合物的水性组合物的制备根据本公开内容是本领域技术人员已知的。通常，这类组合物可制备为注射剂，或者为液体溶液或者为悬浮液；在注射前适合通过加入液体而制备为溶液或悬浮液的固体形式；并且，所述制品也可以被乳化。

适用于可注射使用的药物形式包括无菌水溶液或分散体；包含芝麻油、花生油或水性丙二醇的制剂；以及用于即时制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。在所有情况下，所述形式必须为无菌的，并且必须为可以容易注射的流体。在生产和储存条件下也应该是稳定的，并且必须防止微生物如细菌和真菌的污染作用。

所述组合物可以配制为中性或盐的形式。包括酸加成盐(与蛋白质的游离氨基形成)在内的药学上可接受的盐由诸如盐酸或磷酸等无机酸或诸如乙酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等有机酸形成。与游离羧基形成的盐也可以衍生自无机碱，例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙或氢氧化铁，以及有机碱，如异丙胺、三甲胺、组氨酸、普鲁卡因等。

所述载体也可以是包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)的溶剂或分散介质，其合适的混合物，和植物油。例如通过使用诸如卵磷脂的包衣，在分散体的情况下通过维持所需的颗粒大小，并且通过使用表面活性剂，可以维持适当的流动性。多种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等，可以引起对微生物作用的预防。在许多情况下，优选包含等渗剂，例如糖或氯化钠。通过在组合物中使用延迟吸收剂，例如单硬脂酸铝和明胶，可以引起可注射组合物的延长吸收。

通过根据需要将所需量的活性化合物与以上列举的各种其他成分在合适的溶剂中合并，随后灭菌，来制备无菌可注射溶液。溶液的灭菌将以不降低抗原-mhc-纳米颗粒复合物的治疗性质的方式进行。通常，通过将各种灭菌的活性成分掺入含有基本分散介质和以上列举的所需其他成分的无菌媒介物中来制备分散体。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，某些制备方法为真空干燥和冷冻干燥技术，这些技术从预先灭菌的溶液产生活性成分加任何额外的所需成分的粉末。一种这样的溶液灭菌方法是过滤除菌，然而，本公开内容意图包括任何不明显降低抗原-mhc-纳米颗粒复合物的治疗性质的灭菌方法。涉及强热和压力的灭菌方法，如高压灭菌法，可能损害复合物的三级结构，因此显著降低抗原-mhc-纳米颗粒复合物的治疗性质。

根据本公开内容的组合物的施用通常将通过任何常见途径进行。这包括但不限于原位、真皮内、皮下、肌肉内、腹膜内、鼻内或静脉内注射。在某些实施方案中，可以吸入疫苗组合物(例如美国专利6,651,655，其特别通过引用而并入)。

治疗或预防组合物的有效量基于预期的目标来确定。术语“单位剂量”或“剂量”是指适用于受试者的物理离散的单元，每个单元都含有预定量的组合物，该量经计算为产生与其施用，即合适的途径和方案相关的上述所需反应。根据治疗次数和单位剂量，要施用的量取决于所需的结果和/或保护。组合物的精确量也取决于执业医生的判断，并且是每个个体所特有的。影响剂量的因素包括受试者的身体和临床状态、施用途径、预期治疗目标(症状的缓解与治愈)以及特定组合物的效力、稳定性和毒性。在配制后，溶液将以与剂量制剂相匹配的方式并且以治疗或预防有效的量施用。该制剂易于以多种剂型施用，如以上所述的可注射溶液的类型。小鼠模型中的典型给药方案包括施用每剂量1μg-50μg的总pmhc(np包被的)和1μg-50μg的总铁，其可以转换为在人体中的特定单位剂量。在某些实施方案中，所述剂量可以在约0.1μg至约400μg的范围内。然而，应当理解，每剂量的pmhc的量可以在低至0.1μg至100mg的范围内。作为一个例子，在60kg的人类患者中，每剂量的pmhc的量可以在0.24mg至12mg的范围内，应该理解这对应于以上讨论的1μg至50μg。同样如上所述，该剂量可以改变为对应于以上的0.1μg至100mg，对应于0.0004mg/kg至405.4mg/kg的人类等效剂量，以及之间的范围，这取决于所治疗的患者、状况以及治疗医师决定的其他参数。

体外或离体施用

如本文所用，术语“体外施用”是指对从受试者中移取的或体外的细胞进行的操作，包括但不限于培养中的细胞。术语“离体施用”是指已经在体外操作并且随后施用于受试者的细胞。术语“体内施用”包括在受试者内进行的所有操作，包括施用。

在本公开内容的某些方面，所述组合物可以在体外、离体或体内施用。在某些体外实施方案中，将自体t细胞与本公开内容的组合物一起温育。然后可以将该细胞用于体外分析，或者备选地用于离体施用。蛋白质组分的生产

本公开内容描述了用于本公开内容的多种实施方案的多肽、肽和蛋白质。例如，测定特定肽及其复合物引发或调节免疫应答的能力。在具体的实施方案中，本公开内容的全部或部分肽或蛋白质也可以根据常规技术在溶液中或在固体支持物上合成。多种自动合成仪是可商购的，并且可以根据已知的方案使用。

或者，可以使用重组dna技术，其中将编码本公开内容的肽的核苷酸序列插入到表达载体中，转化或转染至合适的宿主细胞中，并且在适合于表达的条件下培养。

本公开内容的一个实施方案包括使用向细胞(包括微生物)的基因转移来生产蛋白质。感兴趣的蛋白质的基因可以转移至合适的宿主细胞中，随后在合适的条件下培养细胞。可以使用实际上编码任何多肽的核酸。重组表达载体的产生以及其中包含的元件是本领域技术人员已知的，并且在本文中简要讨论。哺乳动物宿主细胞系的实例包括但不限于vero和hela细胞，其他b和t细胞系，如cem、721.221、h9、jurkat、raji，以及中国仓鼠卵巢细胞系、w138、bhk、cos-7、293、hepg2、3t3、rin和mdck细胞。另外，可以选择调节插入序列的表达的宿主细胞株，或者以所需方式修饰并加工基因产物的宿主细胞株。蛋白质产物的这类修饰(例如糖基化)和加工(例如切割)对于蛋白质的功能可能是重要的。不同的宿主细胞具有特征性和特异性的蛋白质翻译后加工和修饰机制。可以选择合适的细胞系或宿主系统以确保对表达的外源蛋白质的正确修饰和加工。

可以使用多种选择系统，包括但不限于分别在tk-、hgprt-或aprt-细胞中的hsv胸苷激酶、次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶和腺嘌呤磷酸核糖基转移酶基因。另外，抗代谢物抗性可以用作选择的基础：赋予甲氧苄氨嘧啶和甲氨蝶呤抗性的dhfr；赋予霉酚酸抗性的gpt；赋予氨基糖苷g418抗性的neo；以及赋予潮霉素抗性的hygro。

核酸

本公开内容可包括编码本公开内容的蛋白质、多肽、肽的重组多核苷酸。包括自身抗原和用于呈递自身抗原的mhc分子的核酸序列，并且可用于制备肽/mhc复合物。

如本公开内容所使用的，术语“多核苷酸”是指重组的或已经分离的不含总基因组核酸的核酸分子。在术语“多核苷酸”中包括寡核苷酸(长度为100个或更少残基的核酸)、重组载体，包括例如质粒、粘粒、噬菌体、病毒等。在某些方面，多核苷酸包括基本上远离其天然存在的基因或蛋白质编码序列分离的调节序列。多核苷酸可以为rna、dna、其类似物或其组合。

在这方面，术语“基因”、“多核苷酸”或“核酸”用于指编码蛋白质、多肽或肽的核酸(包括正确转录、翻译后修饰或定位所需的任何序列)。本领域技术人员将会理解，这些术语包括表达或可能适合于表达蛋白质、多肽、结构域、肽、融合蛋白和突变体的基因组序列、表达盒、cdna序列和较小的工程化核酸区段。编码全部或部分多肽的核酸可含有编码以下长度的这类多肽的全部或一部分的连续核酸序列：10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、441、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、850、860、870、880、890、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990、1000、1010、1020、1030、1040、1050、1060、1070、1080、1090、1095、1100、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、9000、10000个或更多的核苷酸、核苷或碱基对。也考虑来自给定物种的特定多肽可以由具有稍微不同的核酸序列但是编码相同或基本相似的蛋白质、多肽或肽的含有天然变异的核酸编码。

在具体的实施方案中，本公开内容涉及分离的核酸区段和掺入编码自身抗原和/或mhc分子的核酸序列的重组载体。术语“重组”可以与多肽或特定多肽的名称结合使用，并且这通常是指由体外操作的核酸分子产生的多肽或者是这类分子的复制产物。

不管编码序列本身的长度如何，本公开内容中使用的核酸区段可以与其他核酸序列如启动子、聚腺苷酸化信号、额外的限制性酶切位点、多克隆位点、其他编码区段等组合，使得它们的总长度可以有相当大地变化。因此考虑可以使用几乎任何长度的核酸片段，其总长度优选被预期重组核酸方案中的制备和使用的容易度限制。在一些情况下，核酸序列可以编码具有额外异源编码序列的多肽序列，例如，以允许纯化多肽、转运、分泌、翻译后修饰或用于治疗益处，如靶向或功效。可以将标签或其他异源多肽添加至修饰的多肽编码序列，其中“异源”是指与修饰的多肽不同的多肽。

治疗方法

还提供了医疗和诊断方法。在一方面，提供了在有需要的受试者中以抗原特异性方式促进包括但不限于效应细胞、b调节细胞和/或tr1细胞(例如tr1和cd4⁺细胞)或cd8⁺细胞的免疫细胞的形成、扩增和募集的方法，该方法包括向该受试者施用有效量的如本文所述的np复合物或组合物，或备选地基本上由该步骤组成，或进一步由该步骤组成。

本公开内容还提供了以不依赖于pmhc剂量的方式分化或触发t调节1型(tr1)细胞形成的方法。申请人已经发现，纳米颗粒核心上的pmhc密度调节纳米颗粒核心上的pmhc以不依赖于剂量的方式触发tr1细胞形成的能力，而pmhc剂量以不依赖于pmhc密度的方式调节tr1细胞扩增的量级。申请人已经观察到，pmhc密度阈值以及pmhc密度与剂量对tr1细胞形成与扩增的独立影响是基于本领域常规免疫学知识无法预料的意想不到的发现。这些方法需要将同源t细胞与有效量的pmhc-np或本文公开的组合物接触。在某些方面，密度依赖性方法涉及活化t细胞或记忆t细胞分化为任选地具有标志物cd49b和/或lag3的产生il-10的同源tr1细胞，和/或通过将活化t细胞或记忆t细胞与有效量的本文公开的复合物或组合物接触而使b细胞分化成调节b细胞。在一些实施方案中，所分化的t调节细胞与b细胞结合，从而将b细胞分化成调节b细胞。在所述方法的某些方面，所述接触在体外或体内进行。

因此，本公开内容的方面涉及用于以不依赖于pmhc剂量的方式分化或触发tr1细胞形成的方法，其包括将同源t细胞与有效量的本文公开的复合物或组合物接触。在某些方面，所述接触可以为体外或体内的。在某些方面，所述方法涉及活化t细胞或记忆t细胞分化为任选地表达标志物cd49b和/或lag3的产生il-10的tr1细胞，其包括将活化t细胞或记忆t细胞与有效量的本文公开的复合物或组合物接触。基于每种疾病的相关细胞类型之间的相关性，还施用相应的优化的mhc/np复合物和可选的共刺激分子和/或细胞因子。

考虑到这一点，申请人提供了将活化t细胞或记忆t细胞分化为任选地表达标志物cd49b和/或lag3的产生il-10的tr1细胞，和/或将b细胞分化为调节b细胞的方法，其包括使活化t细胞或记忆t细胞与有效量的如本文所述的复合物或组合物接触，或备选地由该步骤组成，或进一步由该步骤组成。所述接触可以为体外或体内的。在一些实施方案中，所述pmhc-np或含有多个pmhc-np的组合物具有平均纳米颗粒核心直径为约25nm至约60nm、或约25nm至约50nm、或约20nm至约40nm、或约15nm至约50nm、或约15nm至约40nm、或约15nm至约35nm、或约15nm至约30nm、或约15nm至约25nm、或备选地约15nm、或约20nm、或约25nm、或约30nm、或约35nm、或约40nm的pmhc-np。在一些方面，所述纳米颗粒核心还包含外涂层或层，其中核心和外层的直径具有约30nm至约75nm、或约30nm至约70nm、或约30nm至约60nm、或约30nm至约50nm、或约40nm的平均直径。在一些方面，所述纳米颗粒具有约0.4pmhc/100nm²至约12pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约11.6pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约11.5pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约11pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约10pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约9pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约8pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约7pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约6pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约5pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约4pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约3pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约2.5pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约2pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约1.5pmhc/100nm²的平均pmhc密度。

还提供了将活化t细胞或记忆t细胞分化为任选地表达标志物cd49b和/或lag3的产生il-10的tr1细胞，和/或将b细胞分化为调节b细胞的方法，其包括向受试者施用有效量的如本文所述的复合物或组合物，或备选地基本上由该步骤组成，或进一步由该步骤组成。如本文所用，所述受试者可以包括动物、哺乳动物、鼠、牛、马、犬、猫、绵羊或人。在一些实施方案中，所述pmhc-np或含有多个pmhc-np的组合物具有平均纳米颗粒核心直径为约25nm至约60nm、或约25nm至约50nm、或约20nm至约40nm、或约15nm至约50nm、或约15nm至约40nm、或约15nm至约35nm、或约15nm至约30nm、或约15nm至约25nm、或备选地约15nm、或约20nm、或约25nm、或约30nm、或约35nm、或约40nm的pmhc-np。在一些方面，所述纳米颗粒核心还包含外涂层或层，其中核心和外层的直径具有约30nm至约75nm、或约30nm至约70nm、或约30nm至约60nm、或约30nm至约50nm、或约40nm的平均直径。在一些方面，所述纳米颗粒具有约0.4pmhc/100nm²至约12pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约11.6pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约11.5pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约11pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约10pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约9pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约8pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约7pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约6pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约5pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约4pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约3pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约2.5pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约2pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约1.5pmhc/100nm²的平均pmhc密度。

本文提供了治疗有需要的受试者的自身免疫疾病或病症的方法，其包括将有效量的本文公开的任何复合物或组合物施用于受试者，条件是所述复合物和组合物不包含共刺激分子。

本文进一步提供了治疗有需要的受试者的癌症或肿瘤和/或抑制肿瘤细胞或组织的生长的方法，其包括施用有效量的具有一个或多个共刺激分子的任何pmhc-np复合物。

本文提供的另一些方面包括pmhc密度为约0.4pmhc/100nm²至约12pmhc/100nm²的纳米颗粒复合物，其用于促进活化t细胞或记忆t细胞分化为任选表达标志物cd49b和/或lag3的产生il-10的tr1细胞。在一些实施方案中，所述pmhc-np或含有多个pmhc-np的组合物具有平均纳米颗粒核心直径为约25nm至约60nm、或约25nm至约50nm、或约20nm至约40nm、或约15nm至约50nm、或约15nm至约40nm、或约15nm至约35nm、或约15nm至约30nm、或约15nm至约25nm、或备选地约15nm、或约20nm、或约25nm、或约30nm、或约35nm、或约40nm的pmhc-np。在一些方面，所述纳米颗粒核心还包含外涂层或层，其中核心和外层的直径具有约30nm至约75nm、或约30nm至约70nm、或约30nm至约60nm、或约30nm至约50nm、或约40nm的平均直径。在一些方面，所述纳米颗粒具有约0.4pmhc/100nm²至约12pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约11.6pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约11.5pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约11pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约10pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约9pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约8pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约7pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约6pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约5pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约4pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约3pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约2.5pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约2pmhc/100nm²、或约0.4pmhc/100nm²至约1.5pmhc/100nm²的平均pmhc密度。

在一方面，本文提供了用于将活化t细胞或记忆t细胞分化为表达包含cd49b和/或lag3的标志物的产生il-10的tr1细胞，和/或将b细胞分化为调节b细胞的方法，该方法包括将所述活化t细胞或记忆t细胞与有效量的复合物接触，该复合物包含：纳米颗粒核心，其中：多个疾病相关抗原-mhc(pmhc)复合物与所述纳米颗粒核心偶联；核心直径为约15nm至约25nm；并且其中所述纳米颗粒上的pmhc密度为约0.4pmhc/100nm²至约12pmhc/100nm²纳米颗粒表面积。在一些实施方案中，所述纳米颗粒核心进一步在该核心上包含外层，其中所述pmhc复合物与纳米颗粒核心和/或外层偶联，并且其中纳米颗粒核心和外层的组合直径为约35nm至约45nm。在一些实施方案中，接触为体外或体内的。

在另一方面，本文提供了一种纳米颗粒复合物，其用于将活化t细胞或记忆t细胞分化为表达包含cd49b和/或lag3的标志物的产生il-10的tr1细胞，和/或将b细胞分化为调节b细胞，其中所述纳米颗粒复合物包含纳米颗粒核心，其中：多个疾病相关抗原-mhc(pmhc)复合物与所述纳米颗粒核心偶联；核心直径为约15nm至约25nm；并且其中所述纳米颗粒上的pmhc密度为约0.4pmhc/100nm²至约12pmhc/100nm²纳米颗粒表面积。

在另一方面，本文提供了一种纳米颗粒复合物，其用于将活化t细胞或记忆t细胞分化为表达包含cd49b和/或lag3的标志物的产生il-10的tr1细胞，和/或将b细胞分化为调节b细胞，其中所述纳米颗粒复合物包含纳米颗粒核心和该纳米颗粒上的外层，其中：多个疾病相关抗原-mhc(pmhc)复合物与所述纳米颗粒核心和/或外层偶联；所述核心和外层的结合直径为约25nm至约45nm；并且其中所述纳米颗粒上的pmhc密度为约0.4pmhc/100nm²至约12pmhc/100nm²纳米颗粒表面积。

在一些实施方案中，治疗效果包括tr1细胞群体增加约0.1％至约250％。在一些实施方案中，所述增加包括tr1细胞群体增加约0.1％至约225％，或约0.1％至约200％，或约0.1％至约175％，或约0.1％至约150％，或约0.1％至约125％，或约0.1％至约100％，或约0.1％至约75％，或约0.1％至约50％，或约0.1％至约25％，或约0.1％至约20％，或约0.1％至约15％，或约0.1％至约10％，或约0.1％至约9％，或约0.1％至约8％，或约0.1％至约7％，或约0.1％至约6％，或约0.1％至约5％，或约0.1％至约4％，或约0.1％至约3％，或约0.1％至约2％，或约0.1％至约1％，或约0.1％至约0.9％，或约0.1％至约0.8％，或约0.1％至约0.7％，或约0.1％至约0.6％，或约0.1％至约0.5％，或约0.1％至约0.4％，或约0.1％至约0.3％，或约0.1％至约0.2％。

对于治疗用途，以下疾病可以与以下抗原-mhc复合物和含有它们的组合物组合：

在一些实施方案中，所述pmhc复合物的抗原包含：

a)糖尿病相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：前胰岛素原(ppi)、胰岛特异性葡萄糖-6-磷酸酶(igrp)、谷氨酸脱羧酶(gad)、胰岛细胞自身抗原-2(ica2)、胰岛素、胰岛素原，或其各自的片段或等同物；

b)多发性硬化相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：髓鞘碱性蛋白、髓磷脂相关糖蛋白、髓磷脂少突胶质细胞蛋白、蛋白脂质蛋白质、少突胶质细胞髓鞘寡聚蛋白、髓鞘相关少突胶质细胞碱性蛋白、少突胶质细胞特异性蛋白、热休克蛋白、少突胶质细胞特异性蛋白、nogoa、糖蛋白po、周围髓磷脂蛋白22、2'3'-环核苷酸3'-磷酸二酯酶，或其各自的片段或等同物；

c)乳糜泻相关抗原，并且来源于麦醇溶蛋白或其片段或等同物；

d)原发性胆汁性肝硬化相关抗原，并且来源于pdc-e2或其片段或等同物；

e)落叶型天疱疮相关抗原和/或寻常型天疱疮相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：dg1、dg3，或其各自的片段或等同物；

f)视神经脊髓炎谱系障碍相关抗原，并且来源于aqp4或其片段或等同物；

g)关节炎相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：热休克蛋白、免疫球蛋白结合蛋白、异源核rnp、膜联蛋白v、钙蛋白酶抑制蛋白、ii型胶原蛋白、葡萄糖-6-磷酸异构酶、延伸因子人软骨gp39、甘露糖结合凝集素、瓜氨酸化波形蛋白、ii型胶原蛋白、纤维蛋白原、α-烯醇酶、抗氨基甲酰化蛋白质(抗carp)、4型肽基精氨酸脱亚胺酶(pad4)、braf、纤维蛋白原γ链、间-α-胰蛋白酶抑制剂重链h1、α-1-抗胰蛋白酶、血浆蛋白酶c1抑制剂、凝溶胶蛋白、α1-b糖蛋白、血浆铜蓝蛋白、间-α-胰蛋白酶抑制剂重链h4、补体因子h、α2巨球蛋白、血清淀粉样蛋白、c-反应蛋白、血清白蛋白、纤维蛋白原β链、血清转铁蛋白、α2hs糖蛋白、波形蛋白、补体c3，或其各自的片段或等同物；

h)变应性哮喘相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：derp1、derp2，或其各自的片段或等同物；

i)炎性肠病相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：flagelin、fla-2、fla-x、yidx、拟杆菌整合酶，或其各自的片段或等同物；

j)系统性红斑狼疮相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：双链(ds)dna、核糖核蛋白(rnp)、smith(sm)、舍格伦综合征相关抗原a(ss-a)/ro、舍格伦综合征相关抗原b(ss-b)/la、ro60、ro52、组蛋白，或其各自的片段或等同物；

k)动脉粥样硬化相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：apob、apoe，或其各自的片段或等同物；

l)copd相关抗原和/或气肿相关抗原，并且来源于弹性蛋白或其片段或等同物；

m)银屑病相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：cap18、admtsl5、atl5，或其各自的片段或等同物；

n)自身免疫性肝炎相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：cyp2d6、sla，或其各自的片段或等同物；

o)葡萄膜炎相关抗原，并且来源于抑制蛋白或其片段或等同物；

p)舍格伦综合征相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：(ss-a)/ro、(ss-b)/la、mr3、ro60、ro52，或其各自的片段或等同物；

q)硬皮病相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：cenp-c、top1、rna聚合酶iii，或其各自的片段或等同物；

r)抗磷脂综合征相关抗原，并且来源于apoh或其片段或等同物；

s)anca相关性血管炎相关抗原，并且来源于选自下组中一个或多个的抗原：mpo、prtn3，或其各自的片段或等同物；或者

t)僵人综合征相关抗原，并且来源于gad或其片段或等同物。

在一些实施方案中，所述pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分的经典mhci类蛋白质、非经典mhci类蛋白质、经典mhcii类蛋白质、非经典mhcii类蛋白质、mhc二聚体(fc融合体)、mhc四聚体或mhc蛋白质的聚合形式，其中该mhc蛋白质任选地包含基于孔-突起接合的mhc-α-fc/mhc-β-fc异二聚体或多聚体。

在一些实施方案中，所述pmhc复合物的mhc蛋白质包含下组的全部或部分多肽：hladr、hladq、hladp、hla-a、hla-b、hla-c、hla-e、hla-f、hla-g、cd1d，或其各自的片段或等同物。

在一些实施方案中，所述pmhc复合物的mhc蛋白质包含下组的全部或部分多肽：hla-dr、hla-dq、hla-dp，或其各自的片段或等同物。

在一些实施方案中，所述pmhc复合物的mhc蛋白质包含下组的全部或部分多肽：hla-drb1/dra、hla-drb3/dra、hla-drb4/dra、hla-drb5/dra、hla-dqa1/hla-dqb1、hla-dpb1/hla-dpa1，或其各自的片段或等同物。

在某些方面，所述pmhc复合物包含：

a)糖尿病相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：hinsb10-18、higrp228-236、higrp265-273、igrp206-214、higrp206-214、nrp-a7、nrp-i4、nrp-v7、yai/d^b、insb15-23、ppi76-90(k88s)、igrp13-25、gad555-567、gad555-567(557i)、igrp23-35、b24-c36、ppi76-90、ins-i9、tum、g6pase、胰岛素原l2-10、胰岛素原l3-11、胰岛素原l6-14、胰岛素原b5-14、胰岛素原b10-18、胰岛素原b14-22、胰岛素原b15-24、胰岛素原b17-25、胰岛素原b18-27、胰岛素原b20-27、胰岛素原b21-29、胰岛素原b25-c1、胰岛素原b27-c5、胰岛素原c20-28、胰岛素原c25-33、胰岛素原c29-a5、胰岛素原a1-10、胰岛素原a2-10、胰岛素原a12-20，或其各自的片段或等同物；

b)多发性硬化相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：mog35-55、mog36-55、mag287-295、mag509-517、mag556-564、mbp110-118、mog114-122、mog166-175、mog172-180、mog179-188、mog188-196、mog181-189、mog205-214、plp80-88、mag287-295、mag509-517、mag556-564、mog97-109mog97-109(e107s)、mbp89-101、plp175-192、plp94-108、mbp86-98、plp54-68、plp249-263、mog156-170、mog201-215、mog38-52、mog203-217、plp250-264、mpb13-32、mpb83-99、mpb111-129、mpb146-170、mog223-237、mog6-20、plp88-102、plp139-154，或其各自的片段或等同物；

c)乳糜泻相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：aglia57-68、aglia62-72、aglia217-229，或其各自的片段或等同物；

d)原发性胆汁性肝硬化相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：pdc-e2122-135、pdc-e2249-262、pdc-e2249-263、pdc-e2629-643、pdc-e272-86、pdc-e2353-367、pdc-e2422-436、pdc-e2629-643、pdc-e280-94、pdc-e2353-367、pdc-e2535-549，或其各自的片段或等同物；

e)落叶型天疱疮相关抗原和/或寻常型天疱疮相关抗原，其各自来源于选自下组中一个或多个的抗原：dg1216-229、dg397-111、dg3251-265、dg3441-455、dg3351-365、dg3453-467、dg3540-554、dg3280-294、dg3326-340、dg3367-381、dg313-27、dg3323-337、dg3438-452、dg148-62、dg1206-222、dg1363-377、dg13-17、dg1192-206、dg1326-340、dg11-15、dg135-49、dg1325-339，或其各自的片段或等同物；

f)视神经脊髓炎谱系障碍相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：aqp4129-143、aqp4284-298、aqp463-76、aqp4129-143、aqp439-53，或其各自的片段或等同物；

g)变应性哮喘相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：derp116-30、derp1171-185、derp1110-124、derp-226-40、derp-2107-121，或其各自的片段或等同物；

h)炎性肠病相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：拟杆菌整合酶抗原183-197、拟杆菌整合酶抗原146-160、拟杆菌整合酶抗原175-189、拟杆菌整合酶抗原1-15、拟杆菌整合酶抗原183-197、拟杆菌整合酶抗原30-44、拟杆菌整合酶抗原70-84、拟杆菌整合酶抗原337-351、拟杆菌整合酶抗原171-185、拟杆菌整合酶抗原4-18、拟杆菌整合酶抗原256-270、fla-2/fla-x366-380、fla-2/fla-x164-178、fla-2/fla-x261-275、fla-2/fla-x1-15、fla-2/fla-x51-65、fla-2/fla-x269-283、fla-2/fla-x4-18、fla-2/fla-x271-285、yidx78-92、yidx93-107、yidx98-112、yidx23-37、yidx78-92、yidx195-209、yidx22-36、yidx80-94、yidx101-115，或其各自的片段或等同物；

i)系统性红斑狼疮相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：h471-94、h474-88、h476-90、h475-89、h478-92、h480-94、h2b10-24、h2b16-30、h1′22-42、h1′27-41，或其各自的片段或等同物；

j)动脉粥样硬化相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：apob3501-3516、apob1952-1966、apob978-993、apob3498-3513、apob210a、apob210b、apob210c，或其各自的片段或等同物；

k)copd相关抗原和/或气肿相关抗原，其各自来源于选自下组中一个或多个的抗原：弹性蛋白89-103、弹性蛋白698-712、弹性蛋白8-22、弹性蛋白94-108、弹性蛋白13-27、弹性蛋白695-709、弹性蛋白563-577、弹性蛋白558-572、弹性蛋白698-712、弹性蛋白566-580、弹性蛋白645-659，或其各自的片段或等同物；

l)银屑病相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：cap1864-78、cap1834-48、cap1847-61、cap18151-165、cap18149-163、cap18152-166、cap18131-145、cap1824-38、admtsl5245-259、admtsl5267-281、admtsl5372-386、admtsl5289-303、admtsl5396-410、admtsl5433-447、admtsl5142-156、admtsl5236-250、admtsl5301-315、admtsl5203-217、admtsl5404-418，或其各自的片段或等同物；

m)自身免疫性肝炎相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：(cyp2d6)193-207、cyp2d676-90、cyp2d6293-307、cyp2d6313-332、cyp2d6393-412、cyp2d6199-213、cyp2d6450-464、cyp2d6301-315、cyp2d6452-466、cyp2d659-73、cyp2d6130-144、cyp2d6193-212、cyp2d6305-324、cyp2d6131-145、cyp2d6216-230、cyp2d6238-252、cyp2d6199-213、cyp2d6235-252、cyp2d6293-307、cyp2d6381-395、cyp2d6429-443、sla334-348、sla196-210、sla115-129、sla373-386、sla186-197、sla317-331、sla171-185、sla417-431、sla359-373、sla215-229、sla111-125、sla110-124、sla299-313、sla342-356、sla49-63、sla119-133、sla260-274、sla26-40、sla86-100、sla331-345，或其各自的片段或等同物；

n)葡萄膜炎相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：抑制蛋白199-213、抑制蛋白77-91、抑制蛋白250-264、抑制蛋白172-186、抑制蛋白354-368、抑制蛋白239-253、抑制蛋白102-116、抑制蛋白59-73、抑制蛋白280-294、抑制蛋白291-306、抑制蛋白195-209、抑制蛋白200-214，或其各自的片段或等同物；

o)舍格伦综合征相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：ro60127-141、ro60523-537、ro60243-257、ro60484-498、ro60347-361、ro60369-383、ro60426-440、ro60267-281、ro60178-192、ro60358-372、ro60221-235、ro60318-332、ro60407-421、ro60459-473、ro6051-65、ro60312-326、la241-255、la101-115、la153-167、la178-192、la19-33、la37-51、la133-147、la50-64、la32-46、la153-167、la83-97、la136-150、la297-311、la59-73、la151-165、la86-100、la154-168，或其各自的片段或等同物；

p)硬皮病相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：top1346-360、top1420-434、top1750-764、top1419-433、top1591-605、top1695-709、top1305-319、top1346-360、top1419-433、top1425-439、top1614-628、cenp-c297-311、cenp-c857-871、cenp-c887-901、cenp-c212-226、cenp-c643-657、cenp-c832-846、cenp-c167-181、cenp-c246-260、cenp-c846-860、cenp-c149-163、cenp-c833-847、cenp-c847-861，或其各自的片段或等同物；

q)抗磷脂综合征相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：apoh235-249、apoh306-320、apoh237-251、apoh295-309、apoh28-42、apoh173-187、apoh264-278、apoh295-309、apoh49-63、apoh269-283、apoh295-309、apoh321-355、apoh322-336、apoh324-338，或其各自的片段或等同物；

r)anca相关性血管炎相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：mpo506-520、mpo302-316、mpo7-21、mpo689-703、mpo248-262、mpo444-458、mpo513-527、mpo97-111、mpo616-630、mpo462-476、mpo617-631、mpo714-728、prtn344-58、prtn3234-248、prtn359-73、prtn3117-131、prtn3164-178、prtn371-85、prtn3241-255、prtn359-73、prtn3183-197、prtn362-76、prtn3118-132、prtn3239-253，或其各自的片段或等同物；或者

s)僵人综合征相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：gad212-226、gad555-569、gad297-311，或其各自的片段或等同物。

在某些方面，所述pmhc复合物包含：

a)糖尿病相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：hinsb10-18、higrp228-236、higrp265-273、igrp206-214、higrp206-214、nrp-a7、nrp-i4、nrp-v7、yai/d^b、insb15-23、ppi76-90(k88s)、igrp13-25、gad555-567、gad555-567(557i)、igrp23-35、b24-c36、ppi76-90、ins-i9、tum、g6pase、胰岛素原l2-10、胰岛素原l3-11、胰岛素原l6-14、胰岛素原b5-14、胰岛素原b10-18、胰岛素原b14-22、胰岛素原b15-24、胰岛素原b17-25、胰岛素原b18-27、胰岛素原b20-27、胰岛素原b21-29、胰岛素原b25-c1、胰岛素原b27-c5、胰岛素原c20-28、胰岛素原c25-33、胰岛素原c29-a5、胰岛素原a1-10、胰岛素原a2-10、胰岛素原a12-20或其各自的片段或等同物，并且所述pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分hla-dr或其片段或等同物；

b)多发性硬化相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：mog35-55、mog36-55、mag287-295、mag509-517、mag556-564、mbp110-118、mog114-122、mog166-175、mog172-180、mog179-188、mog188-196、mog181-189、mog205-214、plp80-88、mag287-295、mag509-517、mag556-564、mog97-109mog97-109(e107s)、mbp89-101、plp175-192、plp94-108、mbp86-98、plp54-68、plp249-263、mog156-170、mog201-215、mog38-52、mog203-217、plp250-264、mpb13-32、mpb83-99、mpb111-129、mpb146-170、mog223-237、mog6-20、plp88-102、plp139-154或其各自的片段或等同物，并且所述pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分hla-dr或其片段或等同物；

c)乳糜泻相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：aglia57-68、aglia62-72、aglia217-229或其各自的片段或等同物，并且所述pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分hla-dq或其片段或等同物；

d)原发性胆汁性肝硬化相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：pdc-e2122-135、pdc-e2249-262、pdc-e2249-263、pdc-e2629-643、pdc-e272-86、pdc-e2353-367、pdc-e2422-436、pdc-e2629-643、pdc-e280-94、pdc-e2353-367、pdc-e2535-549或其各自的片段或等同物，并且所述pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分hla-dr或其片段或等同物；

e)落叶型天疱疮相关抗原和/或寻常型天疱疮相关抗原，其各自其来源于选自下组中一个或多个的抗原：dg1216-229、dg397-111、dg3251-265、dg3441-455、dg3351-365、dg3453-467、dg3540-554、dg3280-294、dg3326-340、dg3367-381、dg313-27、dg3323-337、dg3438-452、dg148-62、dg1206-222、dg1363-377、dg13-17、dg1192-206、dg1326-340、dg11-15、dg135-49、dg1325-339或其各自的片段或等同物，并且所述pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分hla-dr或其片段或等同物；

f)视神经脊髓炎谱系障碍相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：aqp4129-143、aqp4284-298、aqp463-76、aqp4129-143、aqp439-53或其各自的片段或等同物，并且所述pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分hla-dq或其片段或等同物；

g)变应性哮喘相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：derp116-30、derp1171-185、derp1110-124、derp-226-40、derp-2107-121或其各自的片段或等同物，并且所述pmhc复合物的mhc蛋白质包含下组的全部或部分多肽：hla-dr、hla-dp或其各自的片段或等同物；

h)炎性肠病相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：拟杆菌整合酶抗原183-197、拟杆菌整合酶抗原146-160、拟杆菌整合酶抗原175-189、拟杆菌整合酶抗原1-15、拟杆菌整合酶抗原183-197、拟杆菌整合酶抗原30-44、拟杆菌整合酶抗原70-84、拟杆菌整合酶抗原337-351、拟杆菌整合酶抗原171-185、拟杆菌整合酶抗原4-18、拟杆菌整合酶抗原256-270、fla-2/fla-x366-380、fla-2/fla-x164-178、fla-2/fla-x261-275、fla-2/fla-x1-15、fla-2/fla-x51-65、fla-2/fla-x269-283、fla-2/fla-x4-18、fla-2/fla-x271-285、yidx78-92、yidx93-107、yidx98-112、yidx23-37、yidx78-92、yidx195-209、yidx22-36、yidx80-94、yidx101-115或其各自的片段或等同物，并且所述pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分hla-dq或其片段或等同物；

i)系统性红斑狼疮相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：h471-94、h474-88、h476-90、h475-89、h478-92、h480-94、h2b10-24、h2b16-30、h1′22-42、h1′27-41或其各自的片段或等同物，并且所述pmhc复合物的mhc蛋白质包含下组的全部或部分多肽：i-ad、hla-dr、hla-dp或其各自的片段或等同物；

j)动脉粥样硬化相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：apob3501-3516、apob1952-1966、apob978-993、apob3498-3513、apob210a、apob210b、apob210c或其各自的片段或等同物，并且所述pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分i-ab或其片段或等同物；

k)copd相关抗原和/或气肿相关抗原，其中每一个来源于选自下组中一个或多个的抗原：弹性蛋白89-103、弹性蛋白698-712、弹性蛋白8-22、弹性蛋白94-108、弹性蛋白13-27、弹性蛋白695-709、弹性蛋白563-577、弹性蛋白558-572、弹性蛋白698-712、弹性蛋白566-580、弹性蛋白645-659或其各自的片段或等同物，并且所述pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分hla-dr或其片段或等同物；

l)银屑病相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：cap1864-78、cap1834-48、cap1847-61、cap18151-165、cap18149-163、cap18152-166、cap18131-145、cap1824-38、admtsl5245-259、admtsl5267-281、admtsl5372-386、admtsl5289-303、admtsl5396-410、admtsl5433-447、admtsl5142-156、admtsl5236-250、admtsl5301-315、admtsl5203-217、admtsl5404-418或其各自的片段或等同物，并且所述pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分hla-dr或其片段或等同物；

m)自身免疫性肝炎相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：cyp2d6193-207、cyp2d676-90、cyp2d6293-307、cyp2d6313-332、cyp2d6393-412、cyp2d6199-213、cyp2d6450-464、cyp2d6301-315、cyp2d6452-466、cyp2d659-73、cyp2d6130-144、cyp2d6193-212、cyp2d6305-324、cyp2d6131-145、cyp2d6216-230、cyp2d6238-252、cyp2d6199-213、cyp2d6235-252、cyp2d6293-307、cyp2d6381-395、cyp2d6429-443、sla334-348、sla196-210、sla115-129、sla373-386、sla186-197、sla317-331、sla171-185、sla417-431、sla359-373、sla215-229、sla111-125、sla110-124、sla299-313、sla342-356、sla49-63、sla119-133、sla260-274、sla26-40、sla86-100、sla331-345或其各自的片段或等同物，并且所述pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分hla-dr或其片段或等同物；

n)葡萄膜炎相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：抑制蛋白199-213、抑制蛋白77-91、抑制蛋白250-264、抑制蛋白172-186、抑制蛋白354-368、抑制蛋白239-253、抑制蛋白102-116、抑制蛋白59-73、抑制蛋白280-294、抑制蛋白291-306、抑制蛋白195-209、抑制蛋白200-214或其各自的片段或等同物，并且所述pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分hla-dr或其片段或等同物；

o)舍格伦综合征相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：ro60127-141、ro60523-537、ro60243-257、ro60484-498、ro60347-361、ro60369-383、ro60426-440、ro60267-281、ro60178-192、ro60358-372、ro60221-235、ro60318-332、ro60407-421、ro60459-473、ro6051-65、ro60312-326、la241-255、la101-115、la153-167、la178-192、la19-33、la37-51、la133-147、la50-64、la32-46、la153-167、la83-97、la136-150、la297-311、la59-73、la151-165、la86-100、la154-168或其各自的片段或等同物，并且所述pmhc复合物的mhc蛋白质包含下组的全部或部分多肽：hla-dr、hla-dp或其各自的片段或等同物；

p)硬皮病相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：top1346-360、top1420-434、top1750-764、top1419-433、top1591-605、top1695-709、top1305-319、top1346-360、top1419-433、top1425-439、top1614-628、cenp-c297-311、cenp-c857-871、cenp-c887-901、cenp-c212-226、cenp-c643-657、cenp-c832-846、cenp-c167-181、cenp-c246-260、cenp-c846-860、cenp-c149-163、cenp-c833-847、cenp-c847-861或其各自的片段或等同物，并且所述pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分hla-dr或其片段或等同物；

q)抗磷脂综合征相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：apoh235-249、apoh306-320、apoh237-251、apoh295-309、apoh28-42、apoh173-187、apoh264-278、apoh295-309、apoh49-63、apoh269-283、apoh295-309、apoh321-355、apoh322-336、apoh324-338或其各自的片段或等同物，并且所述pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分hla-dr或其片段或等同物；

r)anca相关性血管炎相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：mpo506-520、mpo302-316、mpo7-21、mpo689-703、mpo248-262、mpo444-458、mpo513-527、mpo97-111、mpo616-630、mpo462-476、mpo617-631、mpo714-728、prtn344-58、prtn3234-248、prtn359-73、prtn3117-131、prtn3164-178、prtn371-85、prtn3241-255、prtn359-73、prtn3183-197、prtn362-76、prtn3118-132、prtn3239-253或其各自的片段或等同物，并且所述pmhc复合物的mhc蛋白质包含全部或部分hla-dr或其片段或等同物；

s)僵人综合征相关抗原，其来源于选自下组中一个或多个的抗原：gad212-226、gad555-569、gad297-311，并且所述pmhc复合物的mhc蛋白质包含下组的全部或部分多肽：hla-dr、hla-dq或其各自的片段或等同物。

在某些方面，所述pmhc复合物用于治疗：

a)i型糖尿病并且所述pmhc复合物选自：ppi76-90(k88s)-hla-drb1*0401/dra、igrp13-25-hla-drb1*0301/dra、gad555-567-hla-drb1*0401/dra、gad555-567(557i)-hla-drb1*0401/dra、igrp23-35-hla-drb1*0401/dra、b24-c36-hla-drb1*0301/dra或ppi76-90-hla-drb1*0401/dra；

b)多发性硬化并且所述pmhc复合物选自：mbp86-98-hla-drb1*1501/dra、mbp89-101-hla-drb5*0101/dra、mog38-52-hla-drb4*0101/dra、mog97-109(e107s)-hla-drb1*0401/dra、mog203-217-hla-drb3*0101/dra、plp54-68-hla-drb3*0101/dra、plp94-108-hla-drb1*0301/dra、plp250-264-hla-drb4*0101/dra、mpb13-32-hla-drb5*0101/dra、mpb83-99-hla-drb5*0101/dra、mpb111-129-hla-drb5*0101/dra、mpb146-170-hla-drb5*0101/dra、mog223-237-hla-drb3*0202/dra、mog6-20-hla-drb5*0101/dra、plp88-102-hla-drb3*0202/dra或plp139-154-hla-drb5*0101/dra；

c)乳糜泻并且所述pmhc复合物选自：aglia57-68-hla-dqa1*0501/hla-dqb1*0201、aglia62-72-hla-dqa1*0501/hla-dqb1*0201、aglia217-229-hla-dqa1*0501/hla-dqb1*0302或aglia217-229-hla-dqa1*03/hla-dqb1*0302；

d)原发性胆汁性肝硬化并且所述pmhc复合物选自：pdc-e2122-135-hla-drb4*0101/dra、pdc-e2249-262-hla-drb4*0101/dra、pdc-e2249-263-hla-drb1*0801/dra、pdc-e2629-643-hla-drb1*0801/dra、pdc-e272-86-hla-drb3*0202/dra、pdc-e2353-367-hla-drb3*0202/dra、pdc-e2422-436-hla-drb3*0202/dra、pdc-e2629-643-hla-drb4*0101/dra、pdc-e280-94-hla-drb5*0101/dra、pdc-e2353-367-hla-drb5*0101/dra或pdc-e2535-549-hla-drb5*0101/dra、mpdc-e2166-181-i-ag7或mpdc-e282-96-i-ag7；

e)落叶型天疱疮相关抗原和/或寻常型天疱疮并且所述pmhc复合物选自：dg1216-229-hla-drb1*0101/dra、dg1216-229-hla-drb1*0102/dra、dg397-111-hla-drb1*0402/dra、dg3251-265-hla-drb1*0402/dra、dg3251-265-hla-drb1*0401/dra、dg3441-455-hla-drb1*0402/dra、dg3351-365-hla-drb3*0202/dra、dg3453-467-hla-drb3*0202/dra、dg3540-554-hla-drb3*0202/dra、dg3280-294-hla-drb4*0101/dra、dg3326-340-hla-drb4*0101/dra、dg3367-381-hla-drb4*0101/dra、dg313-27-hla-drb5*0101/dra、dg3323-337-hla-drb5*0101/dra、dg3438-452-hla-drb5*0101/dra、dg148-62-hla-drb3*0202/dra、dg1206-222-hla-drb3*0202/dra、dg1363-377-hla-drb3*0202/dra、dg13-17-hla-drb4*0101/dra、dg1192-206-hla-drb4*0101/dra、dg1326-340-hla-drb4*0101/dra、dg11-15-hla-drb5*0101/dra、dg135-49-hla-drb5*0101/dra或dg1325-339-hla-drb5*0101/dra；

f)视神经脊髓炎谱系障碍并且所述pmhc复合物选自：aqp4129-143-hla-drb1*0101/dra、aqp4284-298-hla-drb1*0301/dra、aqp463-76-hla-drb1*0301/dra、aqp4129-143-hla-drb1*0401/dra或aqp439-53-hla-drb1*1501/dra；

g)变应性哮喘并且所述pmhc复合物选自：derp-116-30-hla-drb1*0101/dra、derp-116-30-hla-drb1*1501/dra、derp1171-185-hla-drb1*1501/dra、derp-1110-124-hla-dpb1*0401/dra、derp-226-40-hla-drb1*0101/dra；derp-226-40-hla-drb1*1501/dra或derp-2107-121-hla-drb1*0301/dra；

h)炎性肠病并且所述pmhc复合物选自：拟杆菌整合酶抗原183-197-hla-drb3*0101/dra、拟杆菌整合酶抗原146-160-hla-drb3*0101/dra、拟杆菌整合酶抗原175-189-hla-drb3*0101/dra、拟杆菌整合酶抗原1-15-hla-drb5*0101/dra、拟杆菌整合酶抗原183-197-hla-drb5*0101/dra、拟杆菌整合酶抗原183-197-hla-drb3*0101/dra、拟杆菌整合酶抗原30-44-hla-drb5*0101/dra、拟杆菌整合酶抗原70-84-hla-drb4*0101/dra、拟杆菌整合酶抗原337-351-hla-drb4*0101/dra、拟杆菌整合酶抗原171-185-hla-drb4*0101/dra、拟杆菌整合酶抗原4-18-hla-drb3*0202/dra、拟杆菌整合酶抗原171-185-hla-drb3*0202/dra、拟杆菌整合酶抗原256-270-hla-drb3*0202/dra、fla-2/fla-x366-380-hla-drb3*0101/dra、fla-2/fla-x164-178-hla-drb3*0101/dra、fla-2/fla-x261-275-hla-drb5*0101/dra、fla-2/fla-x1-15-hla-drb5*0101/dra、fla-2/fla-x51-65-hla-drb4*0101/dra、fla-2/fla-x269-283-hla-drb4*0101/dra、fla-2/fla-x4-18-hla-drb3*0202/dra、fla-2/fla-x261-275-hla-drb3*0202/dra、fla-2/fla-x271-285-hla-drb3*0202/dra、yidx78-92-hla-drb3*0101/dra、yidx78-92-hla-drb4*0101/dra、yidx93-107-hla-drb3*0101/dra、yidx98-112-hla-drb5*0101/dra、yidx23-37-hla-drb5*0101/dra、yidx78-92-hla-drb4*0101/dra、yidx195-209-hla-drb4*0101/dra、yidx22-36-hla-drb3*0202/dra、yidx80-94-hla-drb3*0202/dra或yidx101-115-hla-drb3*0202/dra；

i)copd和/或气肿并且所述pmhc复合物选自：弹性蛋白89-103-hla-drb3*0101/dra、弹性蛋白698-712-hla-drb5*0101/dra、弹性蛋白8-22-hla-drb5*0101/dra、弹性蛋白94-108-hla-drb5*0101/dra、弹性蛋白13-27-hla-drb4*0101/dra、弹性蛋白695-709-hla-drb4*0101/dra、弹性蛋白563-577-hla-drb4*0101/dra、弹性蛋白558-572-hla-drb4*0101/dra、弹性蛋白698-712-hla-drb5*0101/dra、弹性蛋白566-580-hla-drb3*0202/dra或弹性蛋白645-659-hla-drb3*0202/dra；

j)银屑病并且所述pmhc复合物选自：cap1864-78-hla-drb3*0101/dra、cap1834-48-hla-drb3*0101/dra、cap1847-61-hla-drb3*0101/dra、cap18151-165-hla-drb4*0101/dra、cap18149-163-hla-drb5*0101/dra、cap18152-166-hla-drb5*0101/dra、cap18131-145-hla-drb5*0101/dra、cap1824-38-hla-drb3*0202/dra、admtsl5245-259-hla-drb3*0101/dra、admtsl5267-281-hla-drb3*0101/dra、admtsl5372-386-hla-drb3*0101/dra、admtsl5289-303-hla-drb4*0101/dra、admtsl5396-410-hla-drb4*0101/dra、admtsl5433-447-hla-drb4*0101/dra、admtsl5142-156-hla-drb5*0101/dra、admtsl5236-250-hla-drb5*0101/dra、admtsl5301-315-hla-drb5*0101/dra、admtsl5203-217-hla-drb3*0202/dra、admtsl5404-418-hla-drb3*0202/dra或admtsl5433-447-hla-drb3*0202/dra；

k)自身免疫性肝炎并且所述pmhc复合物选自：cyp2d6193-207-hla-drb1*0301/dra、cyp2d676-90-hla-drb1*0301/dra、cyp2d6293-307-hla-drb1*0301/dra、cyp2d6313-332-hla-drb1*0301/dra、cyp2d6393-412-hla-drb1*0301/dra、cyp2d6199-213-hla-drb1*0401/dra、cyp2d6450-464-hla-drb1*0401/dra、cyp2d6301-315-hla-drb1*0401/dra、cyp2d6452-466-hla-drb1*0701/dra、cyp2d659-73-hla-drb1*0701/dra、cyp2d6130-144-hla-drb1*0701/dra、cyp2d6193-212-hla-drb1*0701/dra、cyp2d6305-324-hla-drb1*0701/dra、cyp2d6131-145-hla-drb3*0202/dra、cyp2d6216-230-hla-drb3*0202/dra、cyp2d6238-252-hla-drb3*0202/dra、cyp2d6199-213-hla-drb4*0101/dra、cyp2d6235-252-hla-drb4*0101/dra、cyp2d6293-307-hla-drb4*0101/dra、cyp2d6238-252-hla-drb5*0101/dra、cyp2d6381-395-hla-drb5*0101/dra、cyp2d6429-443-hla-drb5*0101/dra、sla334-348-hla-drb1*0301/dra、sla196-210-hla-drb1*0301/dra、sla115-129-hla-drb1*0301/dra、sla373-386-hla-drb1*0301/dra、sla186-197-hla-drb1*0301/dra、sla317-331-hla-drb1*0401/dra、sla171-185-hla-drb1*0401/dra、sla417-431-hla-drb1*0401/dra、sla359-373-hla-drb1*0701/dra、sla215-229-hla-drb1*0701/dra、sla111-125-hla-drb1*0701/dra、sla110-124-hla-drb3*0202/dra、sla299-313-hla-drb3*0202/dra、sla342-356-hla-drb3*0202/dra、sla49-63-hla-drb4*0101/dra、sla119-133-hla-drb4*0101/dra、sla260-274-hla-drb4*0101/dra、sla26-40-hla-drb5*0101/dra、sla86-100-hla-drb5*0101/dra或sla331-345-hla-drb5*0101/dra；

l)葡萄膜炎并且所述pmhc复合物选自：抑制蛋白199-213-hla-drb3*0101/dra、抑制蛋白77-91-hla-drb3*0101/dra、抑制蛋白250-264-hla-drb3*0101/dra、抑制蛋白172-186-hla-drb4*0101/dra、抑制蛋白354-368-hla-drb4*0101/dra、抑制蛋白239-253-hla-drb4*0101/dra、抑制蛋白102-116-hla-drb5*0101/dra、抑制蛋白59-73-hla-drb5*0101、抑制蛋白280-294-hla-drb5*0101、抑制蛋白291-306-hla-drb1*0301/dra、抑制蛋白195-209-hla-drb3*0202/dra、抑制蛋白199-213-hla-drb3*0202/dra或抑制蛋白200-214-hla-drb3*0202/dra；

m)舍格伦综合征并且所述pmhc复合物选自：ro60127-141-hla-drb1*0301/dra、ro60523-537-hla-drb1*0301/dra、ro60243-257-hla-drb1*0301/dra、ro60484-498-hla-drb3*0101/dra、ro60347-361-hla-drb3*0101/dra、ro60369-383-hla-drb3*0101/dra、ro60426-440-hla-drb4*0101/dra、ro60267-281-hla-drb4*0101/dra、ro60178-192-hla-drb4*0101/dra、ro60358-372-hla-drb5*0101/dra、ro60358-372-hla-drb4*0101/dra、ro60221-235-hla-drb5*0101/dra、ro60221-235-hla-drb4*0101/dra、ro60318-332-hla-drb5*0101/dra、ro60318-332-hla-drb4*0101/dra、ro60407-421-hla-drb4*0101/dra、ro60407-421-hla-dqa1*0501/hla-dqb1*0201、ro60459-473-hla-drb4*0101/dra、ro60459-473-hla-dqa1*0501/hla-dqb1*0201、ro60318-332-hla-dqa1*0501/hla-dqb1*0201、ro6051-65-hla-drb3*0202/dra、ro60312-326-hla-drb3*0202/dra、ro60347-361-hla-drb3*0202/dra、la241-255-hla-drb1*0301/dra、la101-115-hla-drb1*0301/dra、la153-167-hla-drb1*0301/dra、la178-192-hla-drb3*0101/dra、la19-33-hla-drb3*0101/dra、la37-51-hla-drb3*0101/dra、la133-147-hla-drb4*0101/dra、la50-64-hla-drb4*0101/dra、la32-46-hla-drb4*0101/dra、la153-167-hla-drb5*0101/dra、la83-97-hla-drb5*0101/dra、la136-150-hla-drb5*0101/dra、la297-311-hla-dqa1*0501/hla-dqb1*0201、la59-73-hla-dqa1*0501/hla-dqb1*0201、la59-73-hla-drb4*0101/dra、la151-165-hla-dqa1*0501/hla-dqb1*0201、la151-165-hla-drb4*0101/dra、la297-311-hla-drb4*0101/dra、la50-64-hla-drb3*0202/dra、la86-100-hla-drb3*0202/dra或la154-168-hla-drb3*0202/dra；

n)硬皮病并且所述pmhc复合物选自：top1346-360-hla-drb3*0101/dra、top1420-434-hla-drb3*0101/dra、top1750-764-hla-drb3*0101/dra、top1419-433-hla-drb4*0101/dra、top1591-605-hla-drb4*0101/dra、top1695-709-hla-drb4*0101/dra、top1305-319-hla-drb5*0101/dra、top1346-360-hla-drb5*0101/dra、top1419-433-hla-drb5*0101/dra、top1420-434-hla-drb3*0202/dra、top1425-439-hla-drb3*0202/dra、top1614-628-hla-drb3*0202/dra、cenp-c297-311-hla-drb3*0101/dra、cenp-c857-871-hla-drb3*0101/dra、cenp-c887-901-hla-drb3*0101/dra、cenp-c212-226-hla-drb4*0101/dra、cenp-c643-657-hla-drb4*0101/dra、cenp-c832-846-hla-drb4*0101/dra、cenp-c167-181-hla-drb5*0101/dra、cenp-c246-260-hla-drb5*0101/dra、cenp-c846-860-hla-drb5*0101/dra、cenp-c149-163-hla-drb3*0202/dra、cenp-c833-847-hla-drb3*0202/dra或cenp-c847-861-hla-drb3*0202/dra；

o)抗磷脂综合征并且所述pmhc复合物选自：apoh235-249-hla-drb3*0101/dra、apoh306-320-hla-drb3*0101/dra、apoh237-251-hla-drb3*0101/dra、apoh295-309-hla-drb3*0101/dra、apoh28-42-hla-drb4*0101/dra、apoh173-187-hla-drb4*0101/dra、apoh264-278-hla-drb4*0101/dra、apoh295-309-hla-drb4*0101/dra、apoh49-63-hla-drb5*0101/dra、apoh269-283-hla-drb5*0101/dra、apoh295-309-hla-drb5*0101/dra、apoh321-355-hla-drb3*0202/dra、apoh322-336-hla-drb3*0202/dra或apoh324-338-hla-drb3*0202/dra；

p)anca相关性血管炎并且所述pmhc复合物选自：mpo506-520-hla-drb3*0101/dra、mpo302-316-hla-drb3*0101/dra、mpo7-21-hla-drb3*0101/dra、mpo689-703-hla-drb4*0101/dra、mpo248-262-hla-drb4*0101/dra、mpo444-458-hla-drb4*0101/dra、mpo513-527-hla-drb5*0101/dra、mpo97-111-hla-drb5*0101/dra、mpo616-630-hla-drb5*0101/dra、mpo462-476-hla-drb3*0202/dra、mpo617-631-hla-drb3*0202/dra、mpo714-728-hla-drb3*0202/dra、prtn344-58-hla-drb3*0101/dra、prtn3234-248-hla-drb3*0101/dra、prtn359-73-hladrb3*0101/dra、prtn359-73-hla-drb5*0101/dra、prtn3117-131-hla-drb4*0101/dra、prtn3164-178-hla-drb4*0101/dra、prtn371-85-hla-drb4*0101/dra、prtn3241-255-hla-drb5*0101/dra、prtn3183-197-hla-drb5*0101/dra、prtn362-76-hla-drb3*0202/dra、prtn3118-132-hla-drb3*0202/dra或prtn3239-253-hla-drb3*0202/dra；或者

q)僵人综合征并且所述pmhc复合物选自：gad212-226-hla-drb1*0801/dra、gad555-569-hla-drb1*0801/dra或gad297-311-hla-drb1*0301/dra。

在一些方面，所述pmhc复合物用于治疗：

a)i型糖尿病并且所述pmhc复合物选自：ppi76-90(k88s)-hla-drb1*0401/dra、igrp13-25-hla-drb1*0301/dra、gad555-567-hla-drb1*0401/dra、gad555-567(557i)-hla-drb1*0401/dra、igrp23-35-hla-drb1*0401/dra或ppi76-90-hla-drb1*0401/dra；

b)多发性硬化并且所述pmhc复合物选自：mbp86-98-hla-drb1*1501/dra、mbp89-101-hla-drb5*0101/dra、mog38-52-hla-drb4*0101/dra、mog97-109(e107s)-hla-drb1*0401/dra、mog203-217-hla-drb3*0101/dra、plp54-68-hla-drb3*0101/dra、plp94-108-hla-drb1*0301/dra、plp250-264-hla-drb4*0101/dra、mpb13-32-hla-drb5*0101/dra、mpb83-99-hla-drb5*0101/dra、mpb111-129-hla-drb5*0101/dra、mpb146-170-hla-drb5*0101/dra、mog223-237-hla-drb3*0202/dra、mog6-20-hla-drb5*0101/dra、plp88-102-hla-drb3*0202/dra或plp139-154-hla-drb5*0101/dra；

c)乳糜泻并且所述pmhc复合物选自：aglia57-68-hla-dqa1*0501/hla-dqb1*0201、aglia62-72-hla-dqa1*0501/hla-dqb1*0201或aglia217-229-hla-dqa1*0501/hla-dqb1*0302；

d)原发性胆汁性肝硬化并且所述pmhc复合物选自：pdc-e2122-135-hla-drb4*0101/dra、pdc-e2249-262-hla-drb4*0101/dra、pdc-e2249-263-hla-drb1*0801/dra、pdc-e2629-643-hla-drb1*0801/dra、pdc-e272-86-hla-drb3*0202/dra、pdc-e2353-367-hla-drb3*0202/dra、pdc-e2422-436-hla-drb3*0202/dra、pdc-e2629-643-hla-drb4*0101/dra、pdc-e280-94-hla-drb5*0101/dra、pdc-e2353-367-hla-drb5*0101/dra或pdc-e2535-549-hla-drb5*0101/dra；

e)落叶型天疱疮相关抗原和/或寻常型天疱疮并且所述pmhc复合物选自：dg1216-229-hla-drb1*0101/dra、dg397-111-hla-drb1*0402/dra、dg3251-265-hla-drb1*0401/dra、dg3441-455-hla-drb1*0402/dra、dg3351-365-hla-drb3*0202/dra、dg3453-467-hla-drb3*0202/dra、dg3540-554-hla-drb3*0202/dra、dg3280-294-hla-drb4*0101/dra、dg3326-340-hla-drb4*0101/dra、dg3367-381-hla-drb4*0101/dra、dg313-27-hla-drb5*0101/dra、dg3323-337-hla-drb5*0101/dra、dg3438-452-hla-drb5*0101/dra、dg148-62-hla-drb3*0202/dra、dg1206-222-hla-drb3*0202/dra、dg1363-377-hla-drb3*0202/dra、dg13-17-hla-drb4*0101/dra、dg1192-206-hla-drb4*0101/dra、dg1326-340-hla-drb4*0101/dra、dg11-15-hla-drb5*0101/dra、dg135-49-hla-drb5*0101/dra或dg1325-339-hla-drb5*0101/dra；

f)视神经脊髓炎谱系障碍并且所述pmhc复合物选自：aqp4284-298-hla-drb1*0301/dra、aqp463-76-hla-drb1*0301/dra,aqp4129-143-hla-drb1*0401/dra或aqp439-53-hla-drb1*1501/dra；

g)变应性哮喘并且所述pmhc复合物选自：derp-116-30-hla-drb1*0101/dra、derp-116-30-hla-drb1*1501/dra、derp1171-185-hla-drb1*1501/dra、derp-1110-124-hla-dpb1*0401/dra、derp-226-40-hla-drb1*0101/dra；derp-226-40-hla-drb1*1501/dra或derp-2107-121-hla-drb1*0301/dra；

h)炎性肠病并且所述pmhc复合物选自：拟杆菌整合酶抗原1-15-hla-drb5*0101/dra、拟杆菌整合酶抗原183-197-hla-drb3*0101/dra、拟杆菌整合酶抗原70-84-hla-drb4*0101/dra、拟杆菌整合酶抗原4-18-hla-drb3*0202/dra、拟杆菌整合酶抗原171-185-hla-drb3*0202/dra、拟杆菌整合酶抗原256-270-hla-drb3*0202/dra、fla-2/fla-x366-380-hla-drb3*0101/dra、fla-2/fla-x261-275-hla-drb5*0101/dra、fla-2/fla-x51-65-hla-drb4*0101/dra、fla-2/fla-x4-18-hla-drb3*0202/dra、fla-2/fla-x261-275-hla-drb3*0202/dra、fla-2/fla-x271-285-hla-drb3*0202/dra、yidx78-92-hla-drb3*0101/dra、yidx78-92-hla-drb4*0101/dra、yidx98-112-hla-drb5*0101/dra、yidx22-36-hla-drb3*0202/dra、yidx80-94-hla-drb3*0202/dra或yidx101-115-hla-drb3*0202/dra；

i)气肿并且所述pmhc复合物选自：弹性蛋白89-103-hla-drb3*0101/dra、弹性蛋白698-712-hla-drb5*0101/dra、弹性蛋白558-572-hla-drb4*0101/dra、弹性蛋白566-580-hla-drb3*0202/dra或弹性蛋白645-659-hla-drb3*0202/dra；

j)银屑病并且所述pmhc复合物选自：cap1864-78-hla-drb3*0101/dra、cap1834-48-hla-drb3*0101/dra、cap1847-61-hla-drb3*0101/dra、cap18151-165-hla-drb4*0101/dra、cap18149-163-hla-drb5*0101/dra、cap18152-166-hla-drb5*0101/dra、cap18131-145-hla-drb5*0101/dra、cap1824-38-hla-drb3*0202/dra、admtsl5245-259-hla-drb3*0101/dra、admtsl5267-281-hla-drb3*0101/dra、admtsl5372-386-hla-drb3*0101/dra、admtsl5289-303-hla-drb4*0101/dra、admtsl5396-410-hla-drb4*0101/dra、admtsl5433-447-hla-drb4*0101/dra、admtsl5142-156-hla-drb5*0101/dra、admtsl5236-250-hla-drb5*0101/dra、admtsl5301-315-hla-drb5*0101/dra、admtsl5203-217-hla-drb3*0202/dra、admtsl5404-418-hla-drb3*0202/dra或admtsl5433-447-hla-drb3*0202/dra；

k)自身免疫性肝炎并且所述pmhc复合物选自：cyp2d6193-207-hla-drb1*0301/dra、cyp2d676-90-hla-drb1*0301/dra、cyp2d6293-307-hla-drb1*0301/dra、cyp2d6313-332-hla-drb1*0301/dra、cyp2d6393-412-hla-drb1*0301/dra、cyp2d6199-213-hla-drb1*0401/dra、cyp2d6450-464-hla-drb1*0401/dra、cyp2d6301-315-hla-drb1*0401/dra、cyp2d6452-466-hla-drb1*0701/dra、cyp2d659-73-hla-drb1*0701/dra、cyp2d6130-144-hla-drb1*0701/dra、cyp2d6193-212-hla-drb1*0701/dra、cyp2d6305-324-hla-drb1*0701/dra、cyp2d6131-145-hla-drb3*0202/dra、cyp2d6216-230-hla-drb3*0202/dra、cyp2d6238-252-hla-drb3*0202/dra、cyp2d6199-213-hla-drb4*0101/dra、cyp2d6235-252-hla-drb4*0101/dra、cyp2d6293-307-hla-drb4*0101/dra、cyp2d6238-252-hla-drb5*0101/dra、cyp2d6381-395-hla-drb5*0101/dra、cyp2d6429-443-hla-drb5*0101/dra、sla334-348-hla-drb1*0301/dra、sla196-210-hla-drb1*0301/dra、sla115-129-hla-drb1*0301/dra、sla373-386-hla-drb1*0301/dra、sla186-197-hla-drb1*0301/dra、sla317-331-hla-drb1*0401/dra、sla171-185-hla-drb1*0401/dra、sla417-431-hla-drb1*0401/dra、sla359-373-hla-drb1*0701/dra、sla215-229-hla-drb1*0701/dra、sla111-125-hla-drb1*0701/dra、sla110-124-hla-drb3*0202/dra、sla299-313-hla-drb3*0202/dra、sla342-356-hla-drb3*0202/dra、sla49-63-hla-drb4*0101/dra、sla119-133-hla-drb4*0101/dra、sla260-274-hla-drb4*0101/dra、sla26-40-hla-drb5*0101/dra、sla86-100-hla-drb5*0101/dra或sla331-345-hla-drb5*0101/dra；

l)葡萄膜炎并且所述pmhc复合物选自：抑制蛋白199-213-hla-drb3*0101/dra、抑制蛋白77-91-hla-drb3*0101/dra、抑制蛋白250-264-hla-drb3*0101/dra、抑制蛋白172-186-hla-drb4*0101/dra、抑制蛋白354-368-hla-drb4*0101/dra、抑制蛋白239-253-hla-drb4*0101/dra、抑制蛋白102-116-hla-drb5*0101/dra、抑制蛋白59-73-hla-drb5*0101、抑制蛋白280-294-hla-drb5*0101、抑制蛋白291-306-hla-drb1*0301/dra、抑制蛋白195-209-hla-drb3*0202/dra、抑制蛋白199-213-hla-drb3*0202/dra或抑制蛋白200-214-hla-drb3*0202/dra；

m)舍格伦综合征并且所述pmhc复合物选自：ro60127-141-hla-drb1*0301/dra、ro60523-537-hla-drb1*0301/dra、ro60243-257-hla-drb1*0301/dra、ro60484-498-hla-drb3*0101/dra、ro60347-361-hla-drb3*0101/dra、ro60369-383-hla-drb3*0101/dra、ro60426-440-hla-drb4*0101/dra、ro60267-281-hla-drb4*0101/dra、ro60178-192-hla-drb4*0101/dra、ro60358-372-hla-drb5*0101/dra、ro60221-235-hla-drb5*0101/dra、ro60318-332-hla-drb5*0101/dra、ro6051-65-hla-drb3*0202/dra、ro60312-326-hla-drb3*0202/dra、ro60347-361-hla-drb3*0202/dra、la241-255-hla-drb1*0301/dra、la101-115-hla-drb1*0301/dra、la153-167-hla-drb1*0301/dra、la178-192-hla-drb3*0101/dra、la19-33-hla-drb3*0101/dra、la37-51-hla-drb3*0101/dra、la133-147-hla-drb4*0101/dra、la50-64-hla-drb4*0101/dra、la32-46-hla-drb4*0101/dra、la153-167-hla-drb5*0101/dra、la83-97-hla-drb5*0101/dra、la136-150-hla-drb5*0101/dra、la50-64-hla-drb3*0202/dra、la86-100-hla-drb3*0202/dra或la154-168-hla-drb3*0202/dra；

n)硬皮病并且所述pmhc复合物选自：top1346-360-hla-drb3*0101/dra、top1420-434-hla-drb3*0101/dra、top1750-764-hla-drb3*0101/dra、top1419-433-hla-drb4*0101/dra、top1591-605-hla-drb4*0101/dra、top1695-709-hla-drb4*0101/dra、top1305-319-hla-drb5*0101/dra、top1346-360-hla-drb5*0101/dra、top1419-433-hla-drb5*0101/dra、top1420-434-hla-drb3*0202/dra、top1425-439-hla-drb3*0202/dra、top1614-628-hla-drb3*0202/dra、cenp-c297-311-hla-drb3*0101/dra、cenp-c857-871-hla-drb3*0101、cenp-c887-901-hla-drb3*0101、cenp-c212-226-hla-drb4*0101/dra、cenp-c643-657-hla-drb4*0101/dra、cenp-c832-846-hla-drb4*0101/dra、cenp-c167-181-hla-drb5*0101/dra、cenp-c246-260-hla-drb5*0101/dra、cenp-c846-860-hla-drb5*0101/dra、cenp-c149-163-hla-drb3*0202/dra、cenp-c833-847-hla-drb3*0202/dra或cenp-c847-861-hla-drb3*0202/dra；

o)抗磷脂综合征并且所述pmhc复合物选自：apoh235-249-hla-drb3*0101/dra、apoh306-320-hla-drb3*0101/dra、apoh237-251-hla-drb3*0101/dra、apoh295-309-hla-drb3*0101/dra、apoh28-42-hla-drb4*0101/dra、apoh173-187-hla-drb4*0101/dra、apoh264-278-hla-drb4*0101/dra、apoh295-309-hla-drb4*0101/dra、apoh49-63-hla-drb5*0101/dra、apoh269-283-hla-drb5*0101/dra、apoh295-309-hla-drb5*0101/dra、apoh321-355-hla-drb3*0202/dra、apoh322-336-hla-drb3*0202/dra或apoh324-338-hla-drb3*0202/dra；

p)anca相关性血管炎并且所述pmhc复合物选自：mpo506-520-hla-drb3*0101/dra、mpo302-316-hla-drb3*0101/dra、mpo7-21-hla-drb3*0101/dra、mpo689-703-hla-drb4*0101/dra、mpo248-262-hla-drb4*0101/dra、mpo444-458-hla-drb4*0101/dra、mpo513-527-hla-drb5*0101/dra、mpo97-111-hla-drb5*0101/dra、mpo616-630-hla-drb5*0101/dra、mpo462-476-hla-drb3*0202/dra、mpo617-631-hla-drb3*0202/dra、mpo714-728-hla-drb3*0202/dra、prtn344-58-hla-drb3*0101/dra、prtn3234-248-hla-drb3*0101/dra、prtn359-73-hladrb3*0101/dra、prtn359-73-hla-drb5*0101/dra、prtn3117-131-hla-drb4*0101/dra、prtn3164-178-hla-drb4*0101/dra、prtn371-85-hla-drb4*0101/dra、prtn3241-255-hla-drb5*0101/dra、prtn3183-197-hla-drb5*0101/dra、prtn362-76-hla-drb3*0202/dra、prtn3118-132-hla-drb3*0202/dra或prtn3239-253-hla-drb3*0202/dra；或者

q)僵人综合征并且所述pmhc复合物选自：gad212-226-hla-drb1*0801/dra、gad555-569-hla-drb1*0801/dra或gad297-311-hla-drb1*0301/dra。

在某些方面，本文提供了治疗有需要的受试者的i型糖尿病的方法，其包括施用有效量的本文公开的复合物或组合物，其中所述复合物和组合物可以包含与多个pmhc复合物偶联的一个或多个纳米颗粒核心，其中该pmhc复合物的抗原为糖尿病相关抗原，其中该pmhc复合物的mhc蛋白质包含mhcii类蛋白质，其中所述纳米颗粒核心具有约1nm至约100nm的直径，并且其中每个纳米颗粒核心的pmhc密度为约0.4mhc/100nm²至约11.6pmhc/100nm²。在一些实施方案中，所述纳米颗粒核心的直径为约1nm至约75nm；约1nm至约50nm；约1nm至约25nm；约1nm至约25nm；约5nm至约100nm；约5nm至约50nm；或约5nm至约25nm；或约15nm至约25nm；或约20nm。在一些实施方案中，所述纳米颗粒核心的直径为约25nm至约60nm，或约25nm至约50nm，或约20nm至约40nm，或约15nm至约50nm，或约15nm至约40nm，或约15nm至约35nm，或约15nm至约30nm，或约15nm至约25nm，或备选地约15nm，或约20nm，或约25nm，或约30nm，或约35nm，或约40nm。在一些实施方案中，所述纳米颗粒核心的pmhc密度为约0.4pmhc/100nm²至约11.6pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约11.0pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约10pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约9pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约8pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约7pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约6pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约5pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约4pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约3pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约2pmhc/100nm²，或约0.4pmhc/100nm²至约1.5pmhc/100nm²。在一些实施方案中，所述纳米颗粒核心的pmhc密度为约0.4pmhc/100nm²至约6pmhc/100nm²或约0.4pmhc/100nm²至约1.5pmhc/100nm²。在一些实施方案中，所述pmhc复合物包含来源于igrp或ppi中的一种或多种的抗原。在一些实施方案中，所述pmhc复合物包含选自下组中一种或多种的抗原：igrp13-25、ppi76-90或ppi76-90(k88s)。在一些实施方案中，所述pmhc复合物包含hla-dr。在一些实施方案中，所述pmhc复合物包含hla-dr/dra。在一些实施方案中，所述pmhc复合物包含igrp13-25-hla-drb1*0301/dra、ppi76-90-hla-drb1*0401/dra或ppi76-90(k88s)-hla-drb1*0401/dra中的一种或多种，或备选地由其组成，或进一步基本上由其组成。

测定和监测疗法的方法是本领域已知的，并且在本文中简要描述。当体外递送时，通过任何适当的方法，例如通过施用于细胞或组织培养基，使组合物与组织或细胞接触来进行施用，并且可作为筛选用来确定该疗法是否适合于个体，或者筛选将作为公开的组合物的替代或与之组合使用的备选疗法。当体内施用时，通过全身或局部施用进行施用。在体内，所述方法可以在非人动物上实施，以在人类施用之前筛选将作为公开的组合物的替代或与之组合使用的备选疗法。在人类或非人类哺乳动物中，它们也可用于治疗疾病或病症。

上述方法需要施用有效量的与上文公开的纳米颗粒可操作地偶联的抗原/mhc复合物，该复合物可以任选地进一步包含与同一纳米颗粒偶联的共刺激分子和/或细胞因子，备选地基本上由其组成，或进一步由其组成。上文公开了疾病靶标和相关抗原。

上文描述了关于体外和体内施用模式的细节。

本公开内容还提供了所述np复合物在制备用于治疗和/或预防如本文所述的疾病和病症的药物中的用途。

监测疗法和t细胞的检测

本公开内容的一些方面涉及检测和/或监测免疫细胞群体、优选t细胞的方法，其包括施用标记的抗原-mhc复合物，其中受试者已经接受如本文所公开的pmhc-np或组合物。

在某些方面，本文提供了在已经接受本文公开的复合物或组合物的受试者中以抗原特异性方式检测tr1细胞群体和/或效应t细胞群体的方法。该方法包括以下步骤，备选地由以下步骤组成，或者进一步基本上由以下步骤组成：使怀疑包含tr1细胞的样品与有效量的标记的pmhc复合物接触以形成多聚体复合物，并且检测任何多聚体复合物，从而检测tr1细胞群体。在一些实施方案中，该方法进一步包括使用标记的多聚体复合物对任何t细胞群体进行染色，备选地进一步由该步骤组成，或进一步基本上由该步骤组成。在一些实施方案中，检测tr1细胞群体的步骤包括流式细胞术以检测任何多聚体复合物。在一些实施方案中，该方法进一步包括向所述受试者施用所述复合物或组合物，或备选地由该步骤组成，或进一步基本上由该步骤组成。

在某些方面，本文提供了在已经接受本文公开的复合物或组合物的受试者中以抗原特异性方式检测tr1细胞和/或效应t细胞群体的方法。该方法包括以下任何一种测定，备选地由该测定组成，或进一步基本上由该测定组成：细胞因子elispot测定、多聚体指导的表位分析或多聚体下拉试验。在一些实施方案中，该方法进一步包括施用本文公开的复合物或组合物，备选地进一步由该步骤组成，或进一步基本上由该步骤组成。

在其他方面，本文提供了监测受试者中抗原特异性tr1和/或效应t细胞群体扩增的方法。该方法包括以下步骤，备选地由以下步骤组成，或进一步基本上由以下步骤组成：a)向受试者施用有效量的本文公开的复合物或组合物，其中选择所述pmhc复合物的疾病相关抗原以扩增抗原特异性tr1和/或效应t细胞；b)从疑似含有所述群体的受试者中分离合适的样品；c)使该样品与有效量的标记的pmhc复合物接触以形成多聚体复合物，并且检测任何多聚体复合物；以及d)对所述群体中抗原特异性tr1和/或效应t细胞的数目进行定量。在一些实施方案中，该方法进一步包括对任何多聚体复合物进行染色，备选地进一步由该步骤组成，或进一步基本上由该步骤组成。在一些实施方案中，抗原特异性tr1和/或效应t细胞数目的定量步骤包括流式细胞术和/或elisa。在一些实施方案中，该方法进一步包括施用本文公开的复合物或组合物，备选地进一步由该步骤组成，或进一步基本上由该步骤组成。

可以实现许多类型的免疫测定。本公开内容包含的免疫测定包括但不限于美国专利4,367,110(双单克隆抗体夹心测定)和美国专利4,452,901(western印迹法)中所描述的。其他测定包括体外和体内的标记配体的免疫沉淀和免疫细胞化学。

循环抗原特异性免疫细胞数的一种定量方法为四聚体测定。在该测定中，特异性表位结合以合成荧光标记的mhc分子的多聚形式。因为免疫细胞识别与mhc分子结合的短肽形式的抗原，因此带有合适的t细胞受体的细胞会与标记的四聚体结合，并且可通过流式细胞术进行定量。尽管此方法比elispot测定节省时间，但是多聚体测定仅测量结合，而不测量功能。并不是所有与特定抗原结合的细胞都必定被活化。然而，已经证明了elispot、多聚体与细胞毒性测定之间的相关性。

免疫测定一般为结合测定。某些免疫测定，包括多种类型的酶联免疫吸附测定(elisa)、放射性免疫测定(ria)或者基于珠子的测定如技术，是本领域已知的。使用组织切片的免疫组化检测也是特别有用的。

在elisa的一个实例中，抗体或抗原被固定在选定的表面上，例如聚苯乙烯微量滴定板的孔、试纸或柱支持物。然后，将疑似含有预期抗原或抗体的测试组合物如临床样品添加至孔中。在结合并洗涤以除去非特异性结合免疫复合物之后，可检测所结合的抗原或抗体。检测一般通过添加对预期抗原或抗体有特异性的连接有可检测标记的另一种抗体来实现。该类型的elisa称为“夹心elisa”。检测也可以通过添加对预期抗原具有特异性的第二抗体，然后添加对第二抗体有结合亲和力的第三抗体来实现，第三抗体与可检测标记相连。对elisa技术的修改是本领域技术人员已知的。

竞争性elisa也是可行的，其中测试样品与已知量的经标记的抗原或抗体竞争结合。未知样品中反应性物质的量通过在与已包被的孔温育之前或期间将样品与已知的经标记物质混合来确定。该样品中反应性物质的存在减少了可用于与孔结合的经标记物质的量，从而降低了最终的信号。

不论采用什么样的形式，elisa都具有一些共同特征，如包被、温育或结合，清洗以除去非特异性结合的物质，和检测所结合的免疫复合物。

抗原或抗体还可以与诸如板、珠子、试纸、膜或者柱基质的形式的固体支持物相连，并将待分析的样品应用于已固定的抗原或抗体。在用抗原或抗体包被板时，一般将该板的孔与该抗原或抗体的溶液一起温育过夜或指定的一段时间。然后洗涤该板的孔，以除去不完全吸附的物质。然后用非特异性蛋白质“包被”孔上剩余的任何可用表面，该非特异性蛋白质相对于测试抗血清是抗原中性的。它们包括牛血清白蛋白(bsa)、酪蛋白和奶粉溶液。所述包被使得固定表面上的非特异性吸附位点被封闭，因此减少了由抗血清非特异性结合至该表面上造成的背景。

在elisa中，更惯常的是使用第二或第三种检测手段，而不是直接检测。因此，在抗原或抗体与孔结合之后，用非反应性材料包被以减少背景，并且洗涤以除去未结合的材料，在有效允许免疫复合物(抗原/抗体)形成的条件下，固定表面与待检测的临床或生物样品接触。然后，对所述免疫复合物的检测需要标记的第二结合配体或抗体，或者与标记的第三抗体或第三结合配体一起使用的第二结合配体或抗体。

另外，根据细胞表面标志物，可使用流式细胞术检测和定量特定的细胞亚型。采用流式细胞术的常见检测和定量手段包括使用荧光标记的珠子，该珠子结合每种免疫细胞亚型特有的细胞表面标志物，例如cd4特异性珠子，以选择cd4⁺t细胞等。

试剂盒

本文还提供了包含如本文所述的纳米颗粒复合物或如本文所述的组合物的试剂盒，其用于诊断、预后或治疗用途。如果需要，可以进一步提供额外的试剂和/或说明书。

实施例

给出以下实施例是为了说明本公开内容的多种实施方案的目的，而不是意图以任何方式限制本发明。本领域技术人员将容易理解，本公开内容非常适合于实现所述目标并且获得所提及的目的和优点以及本文固有的那些目标、目的和优点。本发明的实施例以及本文描述的方法目前代表了实施方案，并且是示例性的，并且不旨在限制本公开的范围。本领域技术人员将想到包含在由权利要求的范围限定的本公开内容精神内的变化和其他用途。

实施例1.用于自身免疫和免疫的聚合物和树状聚体纳米颗粒核心

自身免疫疾病和其他慢性炎性现象(包括变态反应)的巨大抗原复杂性是设计可以净化免疫系统的自身或变应原反应性而不损害全身免疫的策略的障碍；目前的系统性免疫抑制方法损害对感染和癌症的免疫力。

因此，在一方面，本公开内容确定，用自身免疫或变应性疾病相关肽-主要组织相容性复合物(pmhc)ii类分子包被的纳米颗粒(np)的全身性递送触发了同源t调节1型(tr1)cd4⁺t细胞在不同疾病模型和遗传背景中的体内扩增，导致包括自发性1型糖尿病、实验性自身免疫性脑脊髓炎和屋尘螨诱发的哮喘在内的多种自身免疫或变应现象的解决。这些纳米药物促进疾病引发的自身反应性t细胞前体分化为疾病抑制性tr1细胞，然后通过靶向自身抗原或负载变应原的抗原呈递细胞(apc)，在受影响的组织中继续抑制自身反应性和变应原特异性t细胞应答，而不影响其他地方的非负载apc。疾病的抑制不会损害宿主清除病毒感染或产生对常规疫苗的抗体应答的能力；通过响应于这些同源tr1-apc相互作用的il-10和tgf-β的局部分泌而介导；并且涉及对局部(并非远端)apc分泌促炎细胞因子和激活其他t细胞的能力的深刻抑制。此外，发现扩增的tr1细胞在体内促进同源b淋巴细胞分化为产生il-10的b调节细胞，这有助于该治疗平台的卓越的治疗活性。重要的是，实施例证明了人类1型糖尿病相关的纳米药物可以在植入来自患者的外周血单个核细胞的nsg小鼠中扩增人tr1细胞，证明了该方法的转用(translational)潜能。因此，基于pmhcii类的纳米药物可以代表针对自身免疫和变应性炎症的长期追求的抗原特异性疗法。用基于pmhci类的纳米药物扩增适当的t细胞群体可以获得类似的结果。

确定了这些纳米药物的治疗性质主要是mhc密度(分子间距离)的函数。实验数据的数学建模表明，对于任何给定的pmhc化合价，小但密集包被的np将具有优异的生物学和治疗活性。

在一个方面，对于约8-12nm的np核心直径，显示出优异的结果。聚乙二醇化氧化铁np的mhc结合能力为在68nm流体动力学直径的np上约55个pmhc。

通过使用基于第三代聚-l-赖氨酸的树状聚体(dgl；7nm)构建基于mhc的纳米药物，克服了这个限制。这些化合物上的pmhc-接受体peg的有序结构使配体结合能力(因此分子密度)增加了数倍(在19nm流体动力学直径pmhc-dgln上的52个pmhc相比于在68nm直径pmhc-ionp上的55个pmhc，导致pmhc密度提高数倍，这是生物活性的关键参数)。

树状聚体是高度分支的大分子，具有树状结构，分支从核心生长。他们以其具有许多反应性端基的三维、单分散、高度分支的大分子纳米结构而闻名。除了许多其他生物医学应用之外，这些特征使得树状聚体成为用于药物、肽和基因递送的流行工具。

广泛研究的树状聚体主要在分支的表面上携带伯胺基团，如基于聚(酰胺基胺)(pamam)和聚-l-赖氨酸(pll)的树状聚体。由于存在带电荷的末端nh3⁺基团，这些树状聚体在生理ph下可溶于水。然而，阳离子pamam树状聚体表现出生物不相容性、不可降解性和阳性相关的细胞毒性，这限制了它们在体外和体内的广泛应用。

由于其可生物降解的性质，阳离子pll是有希望的新候选物。先前的研究报道，在l-赖氨酸封端的树状聚体给药后1小时，在血浆中出现游离的赖氨酸和较大的物质(非树状聚体)，这表明pll在体内快速降解(bailey-bucktrout,s.l.等人(2013)immunity39:949-962)。然而，快速降解对于维持有效的治疗水平不是有益的。幸运的是，据报道，完全聚乙二醇化的pll树状聚体具有提高血浆稳定性和循环时间的更大能力，同时完全屏蔽表面上的正电荷。基于pll的树状聚体已经被用于构建药物递送系统。kaminskas及其同事将甲氨蝶呤(mtx)缀合至一系列聚乙二醇化的pll树状聚体上，并且证明了它们作为用于疏水性药物的递送和肿瘤靶向的长循环载体的潜力。其他人将喜树碱(cpt)与聚乙二醇化的pll树状聚体共价连接，并且证明了与游离cpt相比，在荷瘤小鼠中有显著延长的存活期。然而，使用的大多数基于pll的树状聚体是由研究人员自己合成的。这些基于pll的树状聚体的结构不完全相同，这显著限制了这些树状聚体的普及。

树状接枝聚-l-赖氨酸(dgl)，一种基于pll的树状聚体，现在可商购获得。它们由100％的l-赖氨酸组成，为可生物降解的、单分散的和定义明确的，具有基于pll的树状聚体的主要性质。目前的研究集中于dgl用于药物或基因递送的实用性。就申请人的知识所知，dgl从未用于将pmhc呈递至血液循环中的t细胞的领域。在这项研究中，第3代(g3)dgl(123个氨基，7nm)用作支架来呈递pmhc并且评价免疫学活性。

pmhc-peg-dgl的制备、纯化和表征

在这项研究中，选择具有123个氨基的dglg3作为载体材料。通过伯氨基与活化nhs酯之间的特异性反应，使其表面包被异双功能交联剂nhs-peg4-叠氮基(mw388g/mol)。异双功能peg——马来酰亚胺-peg-炔(mal-peg-炔，mw2000)可以通过硫醇-马来酰亚胺反应与pmhc分子缀合。pmhc-peg缀合物末端的游离炔可通过点击化学与叠氮基包被的dgl反应。通过凝胶过滤纯化所得np以除去未缀合的pmhc。通过z电位和琼脂糖凝胶电泳可以监测包被之前和之后dgl的显著电荷变化。所得到的np可以通过dls、z电位、sds-page和tem来表征。

树状接枝聚-l-赖氨酸第3代(dglg3)

在另一项研究中，从法国colcom购买树状接枝聚-l-赖氨酸第三代(dglg3)。dglg3是一种具有由九个与核心相连的等同树突构成的结构的合成聚合物。所述核心是具有平均8个单体的线性聚-l-赖氨酸。每个树突看起来都像由merrifield树脂合成的传统tam型树突。dglg3是具有22kda分子量和123个用于官能化和缀合的末端伯氨基(-nh2)的非免疫原性载体(图3)。

树状接枝聚-l-赖氨酸-叠氮基(-n3)(“dgln”)的合成

首先用n-羟基琥珀酰亚胺-peg4-叠氮基(nhs-peg4-叠氮基，mw388.37，购自conju-probe，加拿大)将dgl官能化以：1)使pmhc的缀合成为可能；以及2)中和非官能化dgl的正表面电荷。

所述dgl表面官能化是通过使用异双功能交联剂nhs-peg4-叠氮基实现的。活化nhs酯在温和的水性环境中容易与dgl上的伯氨基反应。在约8.0的ph下，将约1mg的dgl-nh2溶解于pbs中。向溶液中添加约4.3mg的nhs-peg4-n3(-nh2:peg4＝1:2，mol:mol)，并且在室温下反应约2小时。反应后，通过用ph约为7.4的pbs超滤(mw截止值3000)洗涤该dgl-n3三次以除去未反应的nhs-peg4-n3(图4)。

pmhc与dgln的缀合(图5)

为了将pmhc单体缀合至dgln的表面，在cho细胞(称为v7cho-cys)中，首先聚乙二醇化并且产生经工程化为编码羧基末端cys(-sh)的单链nrp-v7/k^d构建体。简言之，将v7cho-cys(3.58mg/ml)在pbsph7.4中的3.5ml溶液与24μl500mmedta、375μl1mnacl、500μl200mmpb缓冲液和1.625mletf水混合。然后向该混合物中添加4mg马来酰亚胺-peg2k-炔(最终反应体积为6.0ml)并且在室温下反应过夜。然后将反应溶液在4℃下用ph7.4的pbs透析48小时。

接着在氮气气氛下将v7cho-peg2k-炔溶液在ph7.4的pbs中浓缩至3.5ml的最终体积，并且添加60μldgln(pbs中5mg/ml)、150μl抗坏血酸(pbs中50mm)和175μlcu-tbta，使其在室温下反应24小时。反应后，纳米颗粒经pbsph7.4超滤(mw截止值100kda)纯化6次。

缀合物的生物化学和生物物理学分析

通过非变性和变性(sds)page来分析缀合物。图6显示了在非变性-page条件下(左侧两幅图)存在明显的考马斯蓝染色的涂片，在没有游离(未缀合的)v7cho单体的情况下检测到pmhc缀合的dlgn。这些化合物在变性/还原条件下的电泳显示了v7cho从np中释放，证实了pmhc与dlgn的缀合是成功的。

接着使用原子力显微术(afm)确定pmhc-dgln化合物的生物物理性质(图7)。简言之，将np溶液在云母上成层并且在afm下观察。v7cho-dgln显示平均直径为19.95±0.25nm的球形构象(afm测量)。np以单分散性分布良好。在水溶液中的多分散性指数(pi)和流体动力学直径通过dls测试。用于afm样品制备的浓度为4μgdgln/ml(等于4.38×10¹³个np/ml)。在1um×1um的扫描区域使用5μl该溶液(约2.19×10¹¹个np)进行分析。

bradford分析表明，上述化合物的pmhc含量相当于每个np上有52个pmhc单体。

最后，为了确定该化合物是否对同源t细胞具有激动活性，测定了其通过从8.3-tcr-转基因nod小鼠纯化的nrp-v7/k^d特异性cd8⁺t细胞触发ifnγ分泌的能力。简言之，将8.3-cd8⁺t细胞在游离v7cho蛋白、聚乙二醇化的v7cho、v7cho-dgln或dgln的存在下培养48小时。随后通过elisa测量在上清液中的ifn-γ含量。图8a-8b显示，v7cho-dgln，以及聚乙二醇化的v7cho在很小程度上，对这些t细胞具有非常高的浓度依赖性激动活性，证明了这些化合物的功能特性。

pmhc-peg-dspe胶束的制备、纯化和表征

两亲性嵌段共聚物组装成纳米级核壳结构，聚合物胶束，它们对于递送水溶性差的药物具有相当大的意义。聚(乙二醇)-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(peg-dspe)嵌段共聚物是安全的、生物相容的并且已经由食品和药品管理局批准用于临床应用。dspe-peg已经广泛用于制备脂质体、聚合物纳米颗粒、聚合物杂合纳米颗粒和固体脂质纳米颗粒等。两亲性共聚物是由疏水性核心(dspe)和亲水性壳(peg)组成的纳米结构。核壳结构可封装并携带水溶性差的药物以聚集在dspe的核心中，并且peg壳减少血浆蛋白质的体内清除和吸附。因此，利用dspe-peg形成纳米结构可以延长体循环。最重要的是，dspe-peg的临界胶束浓度(cmc)非常低(10-⁵m)。这种性质导致了配制的胶束的一些积极功能，如疏水性药物的更大的溶解度，以及对抗静脉内施用后大量血液稀释的更高热力学稳定性。

为了修饰(decorate)聚合物胶束表面上的pmhc，选择dspe-peg-马来酰亚胺(dspe-peg-mal)作为共聚物。如vakil,r.等人(2008)molpharm5:98-104和musacchio,t.等人(2009)molpharm6:468-479所报道的，通过溶剂蒸发法制备dspe-peg聚合物胶束。简言之，在圆底烧瓶中将dspe-peg-mal溶解于甲醇中。该有机溶剂混合物在高真空下蒸发以产生共聚物薄膜。该膜进一步在真空下干燥过夜以除去任何痕量的剩余溶剂。然后，将干燥的聚合物膜溶解于ph7.4的pbs中以自组装为在表面上具有马来酰亚胺基团的胶束。pmhc可以通过硫醇-马来酰亚胺特异性反应缀合至胶束表面上。通过凝胶过滤纯化所得np以除去未缀合的pmhc。之后，可以通过dls、z电位、sds-page和tem来表征所得np。

实施例2

疾病特异性tr1细胞的扩增

申请人用未包被的纳米颗粒或以pmhc，2.5mi/ia^g7(被致糖尿病性bdc2.5特异性t细胞受体(tcr)识别)包被的纳米颗粒(stratmann,t.等人(2003)j.clin.invest.112:902-914)或用2.5mi/ia^g7单体治疗了在小鼠foxp3启动子的控制下表达增强型绿色荧光蛋白(egfp)的非肥胖糖尿病(nod)小鼠和nodfoxp3-egfp小鼠。用2.5mi/ia^g7包被的纳米颗粒诱导所有小鼠的血液和脾脏中同源cd4⁺t细胞的扩增(图9a、9b)。这些细胞具有记忆样(cd44^hicd62l^low)foxp3^-tr1样表型，其表达icos、潜伏相关tgf-β和tr1标志物cd49b和lag-3(图9c、9d)。在cd4⁺cd25⁺t细胞消耗后用2.5mi/ia^g7-np治疗的小鼠中观察到类似的结果(图14a)。与它们的四聚体^-对应物不同，这些细胞响应于用2.5mi肽脉冲的树突细胞(dc)而增殖并分泌il-10，并且在较小程度上分泌ifnγ，但不分泌il-2、il-4或il-17(图14b)。实时逆转录(rt)-pcr分析证实了这些细胞的tr1样表型(表3a-3b)。

为了确定pmhcii-np是否可以直接触发同源cd4⁺t细胞上的tr1标志物和il-10表达，申请人在2.5mi/ia^g7-np、2.5mi肽或2.5mi/ia^g7单体的存在下从bdc2.5-tcr-转基因nodfoxp3-egfp或nodil10^gfp小鼠(携带在il10基因座中的egfp插入)(kamanaka,m.等人(2006)immunity25:941-952)中培养幼稚和抗cd3加抗cd28单克隆抗体(mab)-预活化的2.5mi/ia^g7-四聚体⁺cd4⁺t细胞。即使在与2.5mi/ia^g7-np、2.5mi/ia^g7单体或2.5mi肽温育后，幼稚t细胞也不表达cd49b或lag-3(图14c、14d)。然而，预活化的t细胞仅响应于2.5mi/ia^g7-np而上调了两种标志物以及egfp(il-10)(图14d，14e)。与此一致，用2.5mi/ia^g7-np治疗的nodil10^gfp小鼠中il-10的表达主要限制于cd49b⁺lag-3⁺cd4⁺亚组(图14f)。

在体外，pmhc-np治疗的小鼠的四聚体⁺cd4⁺t细胞以il-10和tgf-β依赖性方式响应于肽脉冲的dc抑制非同源(胰岛特异性葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基相关蛋白(igrp)或lcmvgp33特异性)cd8⁺t细胞的增殖。在体内，来自用pmhc-np治疗的供体的脾cd4⁺t细胞抑制t细胞重建的nodscid(也称为nodprkdc^scid)宿主中的糖尿病发展(图9e)，这是通过用pmhc-np治疗宿主而增强的效果(图9e、9f)。

申请人接下来研究了由自身反应性cd4⁺t细胞的次优势池靶向的2.5mi/ia^g7-np或包被有igrp4-22/ia^g7或igrp128-145/ia^g7的np(mukherjee,r.等人(2005)j.immunol.174:5306-5315)，两者中的哪一个可以恢复糖尿病nod小鼠的正常血糖。与用鸡蛋白溶菌酶(hel)14-22/ia^g7包被的纳米颗粒治疗的小鼠不同，90-100％的接受用2.5mi/ia^g7、igrp4-22/ia^g7或igrp128-145/ia^g7包被的纳米颗粒的小鼠恢复至稳定的正常血糖(图9g、14h)，并且显示同源tr1样t细胞的系统性扩增(图1h、15a-15g)。用肽(burton,b.r.等人(2014)naturecommun.5:4741-4747)或肽包被的但不含mhc的纳米颗粒治疗不能再现这些效果中的任何一种(图9g、14h、15h)。取消治疗导致25-60％的小鼠丧失正常血糖状态(图14i)，这与四聚体⁺cd4⁺t细胞池的丧失有关(图9h、15a)。维持正常血糖的动物具有正常的餐后血清胰岛素水平、空腹葡萄糖耐量(图14j-14m)和减轻的胰岛炎(图9i)。另外，它们的胰淋巴结(pln)不能支持羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(cfse)标记的igrp206-214/k^d特异性cd8⁺t细胞的体内增殖(图14n)。

申请人接下来测试了用髓磷脂少突胶质细胞糖蛋白(pmog)38-49/ia^b包被的纳米颗粒减弱c57bl/6小鼠中pmog35-55诱发的实验性自身免疫性脑脊髓炎(eae，多发性硬化的一种模型)的进展的能力。当在免疫后第14天给予时，pmog38-49/ia^b-np疗法缓解了疾病进展，并且在第21天给予时恢复了麻痹小鼠的运动功能(图9j、9k)。这些效果通过体重增加反映出来，并且与同源tr1样t细胞的系统性扩增、小脑中活化的巨噬细胞/小胶质细胞的减少、小脑白质中炎性病灶和脱髓鞘区域较少以及脊髓脱髓鞘减少相关(图9l-9n、16a-16f)。在用人(h)蛋白脂质蛋白(hplp)175-192或hmog97-108肽免疫的并且在发展为肢体麻痹后用hplp175-192/dr4-ie或hmog97-108/dr4-ie-np治疗的hla-dr4-ie转基因c57bl/6iab^null小鼠(表达由人hla-dr4的肽结合结构域和小鼠ie的膜近侧结构域(dr4-ie)构成的转基因杂合mhcii分子的mhcii敲除小鼠)中观察到类似的治疗效果(图17a-17d)。

疾病和器官特异性

在另一种自身免疫疾病模型——胶原诱导性关节炎(cia)中的研究显示展示，展现出小鼠胶原(mcii)259-273/dr4-ie/dr4-ie的纳米颗粒可以减轻关节炎hla-dr4-ie转基因c57bl/10.m小鼠中与同源tr1样t细胞的系统性扩增相关的关节炎症(图10a-10e、1e)。相反，用hmog97-108/dr4-ie复合物包被的纳米颗粒没有效果(图10a-10c)。

为了进一步研究pmhc-np疗法的疾病特异性，申请人通过用hplp175-192免疫在c57bl/6iab^nullhla-dr4-ie转基因小鼠中诱导了eae，并用hplp175-192/dr4-ie-np(阳性对照)、未包被的纳米颗粒(阴性对照)、与eae相关的hmog97-108/dr4-ie-np(其显示来自cns自身抗原的肽，而不是用于诱导疾病的肽)或cia相关的hmog97-108/dr4-ie-np治疗患病小鼠。hmog97-108/dr4-ie-np与阳性对照一样有效地减弱eae，而mcii259-273/dr4-ie-np没有治疗活性(图10f、17f、17g)。在此，治疗活性也与同源tr1样t细胞的系统性扩增有关(图10g、10h)。将mcii259-273肽(burton,b.r.等人(2014)naturecommun.5:4741-4747)或mcii259-273肽包被的微粒(mp)(getts,d.r.等人(2012)naturebiotechnol.30:1217-1224)施用于关节炎c57bl/10.mhla-dr4-ie转基因小鼠(图10a-10d、17e)或将hmog97-108肽、hmog97-108/dr4-ie单体或hmog97-108包被的纳米颗粒或微粒施用于c57bl/6iab^nullhla-dr4-ie转基因小鼠均不能扩增同源tr1样细胞和减弱疾病(图10f、10g、17f-17i)。因此，pmhcii-np的生物和治疗效果是疾病特异性的，并且与表位的致病作用分离(疾病触发相对于下游自身抗原靶标)，表明这些化合物作用于预活化的自身反应性t细胞并且可以产生来自罕见的t细胞前体池的tr1样细胞扩增。

可溶性介质

il-10、tgf-β和il-21r(但不是ifnγ)的阻断消除了2.5mi/ia^g7-np或igrp4-22/ia^g7-np的抗致糖尿病性质(图11a、18a)。除il-21r阻断(已知其抑制cd8⁺t细胞激活)外，这些干预也消除了pln中pmhc-np-扩增的tr1样t细胞对自身抗原交叉呈现的抑制(图18b、18c、19)。使用糖尿病nodifng^-/-和nodil10^-/-小鼠的研究揭示，响应于治疗而扩增的tr1前体和/或tr1样细胞的发育除了il-10之外还需要ifnγ(图18d-18f、19)。针对il-10、tgf-β和il-21r的mab也消除了c57bl/6iab^nullhla-dr4-ie转基因小鼠中hplp175-192/dr4-ie-np的抗致脑炎活性(图18g-18j)。pmog35-55免疫的c57bl/6il27r^-/-小鼠响应于pmog38-49/ia^b-np，如同其野生型对应物(图9j-9n、18k-18n)。因此，ifn-γ和il-10，而不是il-27(pot,c.等人(2009)j.immunol.183:797-801)，对于pmhc-np诱导的tr1样细胞发育是必需的；而自身反应性tr1样t细胞使用il-10、tgf-β和il-21(但不是ifnγ)来抑制疾病。

下游效应物和网络形成

与用与t1d无关的pmhcii-np治疗的小鼠的pln相比，pmhc-np治疗的nod小鼠的pln(但不是肠系膜淋巴结(mln)或脾脏)具有增加的b细胞百分比(图18o)。用一定范围pmhc-np剂量治疗的小鼠的研究揭示了pln(而不是脾)b细胞的大小与tr1样细胞池相关(图18p)。与它们的脾或mln对应物不同，这些小鼠的plnb细胞不能有效地将肽呈递给离体的同源cd4⁺t细胞(图18q)。另外，这些细胞响应于脂多糖(lps)而产生il-10(图18r)，表明pmhc-np诱导的tr1样细胞可能触发pln中调节b(breg)细胞的形成和扩增。实际上，在转移一周内，2.5mi脉冲的b细胞(而不是dc)在2.5mi/ia^g7-np治疗的宿主中经历了扩增(图18s，18t)。

为了进一步探测这一点，申请人将用2.5mi或阴性对照肽(gpi282-292)脉冲的nodil10^gfp脾b细胞输注到2.5mi/ia^g7-np治疗的nod或nodil10^-/-宿主中。七天后，分析宿主中是否存在产生il-10的(egfp⁺)cd5⁺cd1d^highb细胞。用2.5mi/ia^g7-np治疗的nod(但不是nodil10^-/-)小鼠有效地诱导了从2.5mi脉冲的b细胞特异性地形成breg细胞，并且il-21r但不是il-10或tgf-β阻断抑制了这种作用(图11b、11c、18u)。

在体外，2.5mi/ia^g7-np治疗的小鼠的plnb细胞对bdc2.5cd4⁺t细胞响应于肽脉冲dc的增殖活性具有中等的(moderate)抑制作用(图18v)。在体内，与来自对照小鼠的plnb细胞相比，这些b细胞在t细胞重建的nodscid宿主中抑制糖尿病发展(图11d)。与来自2.5mi/ia^g7-np治疗的小鼠的具有或不具有四聚体^-cd4⁺t细胞的plnb细胞相比，与来自2.5mi/ia^g7-np治疗的小鼠的具有或不具有mlnb细胞的cd4⁺t细胞相比(约40％)，或与来自未治疗的或对照np处理的小鼠的cd4⁺t细胞相比(0％)，来自2.5mi/ia^g7-np治疗的小鼠的plnb细胞和整体(bulk)或2.5mi/ia^g7四聚体⁺脾cd4⁺t细胞的共转移导致>95％的抑制(图11e)，支持协同效应的存在。与此一致，用消除b细胞的抗cd20mab治疗新近患有糖尿病的nod小鼠消除了2.5mi/ia^g7-np的抗致糖尿病活性(图11a、18x)。

来源于pmhc-np治疗的nod小鼠的pln或mln的cd11b⁺细胞的细胞因子和趋化因子谱的比较进一步揭示了与其mln对应物相比，来自pln的cd11b⁺细胞响应于lps产生较低水平的促炎介质il-3、il-17、il-6、ifnγ、cxcl9和cxcl10(图11f)。重要的是，pmhc-np疗法对来自引流淋巴结的抗原呈递细胞(apc)的作用与全身免疫受损无关，因为pmhc-np治疗的nod小鼠与未经治疗的小鼠一样有效地清除了急性病毒感染并且产生了抗外源性抗原的抗体(图11g、11h)。经历抗原的t细胞作为靶标

t-betmrna在扩增的tr1样细胞中的记忆样表型和上调，以及在非患病小鼠或nodifng^-/-小鼠中pmhc-np不能扩增同源tr1样细胞，表明pmhc-np扩增了由经历抗原的前体引起的预先存在的tr1细胞；和/或触发经历抗原的th1细胞分化为tr1样细胞。事实上，糖尿病nodg6pc2^-/-小鼠(缺乏igrp)如同野生型nod小鼠一样响应于2.5mi/ia^g7-np，而它们不响应于igrp4-22/ia^g7-np(图12a、12b)。在体外，2.5mi/ia^g7-np仅在抗cd3加抗cd28mab活化的但不是幼稚的bdc2.5cd4⁺t细胞中触发cd49b和lag-3的表达以及c-maf、il21、il10和lag3mrna的上调(图12c、14d)。

为了进一步研究，申请人将幼稚(cd44^lowcd62l^hi)或记忆样(cd44^hicd62l^low)bdc2.5cd4⁺t细胞输注到同源nod.thy1^a品系的宿主中，并且在2.5mi/ia^g7-np疗法后和在不存在疗法的情况下测量其lag-3和cd49b蛋白质和c-maf、il21、il10、ifng、lag3和cd49bmrna表达的变化。特别地，来自pmhc-np-未治疗的宿主的记忆t细胞表达的c-maf和il21水平相对于其幼稚对应物高至约一百倍，并且表达较高的lag3和cd49b(但程度较小)，但il10mrna则否(图12d)。这与观察到的il21的去甲基化和效应/记忆cd4⁺t细胞的c-maf/il-10和il-21表达能力一致(pot,c.等人(2009)j.immunol.183:797-801；spensieri,f.等人(2013)proc.natlacad.sci.usa110:14330-14335；hale,j.s.等人(2013)immunity38:805-817；sato,k.等人(2011)j.biol.chem.286:14963-14971；saraiva,m.等人(2009)immunity31:209-219)，并且表明记忆t细胞池富集未定型的tr1前体，表现了tr1预备(tr1-poised)的转录程序。显著地，pmhc-np疗法只在幼稚bdc2.5cd4⁺t细胞中上调lag3mrna并且在较小程度上上调lag-3蛋白，而它促进了il10mrna和lag-3和cd49b蛋白的上调，以及记忆bdc2.5cd4⁺t细胞的增殖(图12d-12f)。使用来自bdc2.5nodfoxp3-egfp小鼠的记忆egfp^-(foxp3^-)bdc2.5cd4⁺细胞观察到相似的结果(图18y)。

这些对经历抗原的t细胞的作用伴随着抗致糖尿病性质的获得：pmhc-np疗法对携带记忆bdc2.5t细胞的t细胞重建的nodscid宿主提供了100％的糖尿病保护，而在接受幼稚bdc2.5t细胞的宿主中治疗是不重要的(图12g)。因此，pmhc-np疗法促进了表达c-maf的经历抗原的cd4⁺t细胞向tr1后代的分化(和扩增)。

转用潜能

申请人确定了人类t1d相关的pmhcii-np在用来自t1d患者的外周血单个核细胞(pbmc)重建的nodscidil2rg^-/-(nsg)宿主中扩增同源tr1样t细胞的能力(表2)。最初的测定发展集中于用来自五个drb1*0401⁺近期发作的t1d患者的pbmc重建的并且用在人谷氨酸脱羧酶-65(gad65)555-567(f557i)/dr4或前胰岛素原(ppi)76-90(k88s)/dr4中包被的纳米颗粒治疗的nsg宿主(图13a、13b、表2)。申请人然后使用用来自七个drb1*0301⁺t1d患者的pbmc重建的nsg宿主和以较高剂量给予的第三种t1d相关的pmhc-np型(higrp13-25/dr3-np)重复这些实验。申请人观察到来自全部七个pmhc-np治疗的小鼠的脾脏和/或pln(内源性小鼠(m)igrp13-25与higrp13-25高度同源)中四聚体⁺cd49b⁺lag-3⁺cd4⁺t细胞的扩增，并且在未治疗的对照中没有观察到(图13c、13d、20a和表2)。在igrp13-25/dr3-np治疗的小鼠中，四聚体⁺cd4⁺t细胞的平均百分比和数目显著大于未治疗的同窝小鼠(图13d)并且表达il10mrna(图13e)。这些应答不能用肽或肽包被的纳米颗粒或微粒诱导(图13d、20b和表2)。

携带百分比增加的四聚体⁺cd4⁺t细胞的pmhc-np治疗的小鼠的pln具有增加的细胞量(cellularity)(图13f)。此外，pln四聚体⁺cd4⁺t细胞的数目与pln人b细胞的百分比和绝对数目之间存在相关性，并且plnb细胞不同于其脾脏对应物，响应于lps产生il-10(图13g-13i)，表明breg形成和/或募集。在用肽或肽-np/mp治疗的患者hpbmc重建的nsg小鼠中没有看到这样的反应(图13f)。

讨论

申请人已经表明，采用包被有自身免疫疾病相关的pmhcii类复合物的纳米颗粒的全身治疗触发同源tr1样cd4⁺t细胞的扩增，恢复自发性糖尿病小鼠中的正常血糖和瘫痪的eae小鼠中的运动功能，并且解决关节炎小鼠的关节肿胀和破坏而不损害全身免疫。申请人证实该结果与自身免疫疾病的遗传背景和类型分离，并且可以用十种不同的人或鼠自身免疫疾病相关的pmhc-np类型重复。通过基于pmhcii的纳米药物扩增的tr1样细胞库的细胞表面表型、细胞因子分泌模式、转录模式和功能与对于鼠tr1样cd4⁺t细胞所描述的那些一致，并且与来源于健康个体和自身免疫疾病患者的tr1细胞显著相似(gagliani,n.等人(2013)naturemed.19:739-746)。申请人证明了以前的自身抗原经历和自身反应性tr1细胞的发育生物学中的ifnγ和il-10表达能力的关键作用。申请人显示了pmhcii-np以不依赖于apc和il-27的方式促进tr1预备的经历抗原的cd4⁺t胞中的il-10转录和tr1标志物的上调，随后发生系统扩增。对于ifnγ的需求，th1转录因子t-bet的表达，效应和记忆cd4⁺t细胞的c-maf/il-10和il-21表达能力(pot,c.等人(2009)j.immunol.183:797-801；spensieri,f.等人(2013)proc.natlacad.sci.usa110:14330-14335；hale,j.s.等人(2013)immunity38:805-817)，以及pmhcii-np将通过主动免疫引发的t细胞转化为tr1抑制剂的能力，表明这些tr1前体是效应/记忆th1细胞。申请人定义了作用机制并且发现pmhc-np扩增的tr1样细胞下游的细胞相互作用的级联，包括breg细胞形成，其协同导致以抗原依赖性但抗原非特异性方式解决炎症(图21)。

总的来说，申请人的数据支持这样的观点：参与给定自身免疫疾病的任何单个pmhc都可用来通过这种方法减弱复杂的自身免疫应答。与此预测一致，不管抗原的普遍性(prevalence)、优势(dominance)或在疾病过程中的作用如何，迄今为止测试的20种基于pmhci/ii的纳米药物具有相似的效力。pmhc单体和肽或肽包被的纳米颗粒/微粒都不能触发来自多克隆t细胞组库的同源tr1细胞形成/扩增或在这里测试的慢性模型中逆转t1d、cia或eae。因此，基于pmhc的纳米药物代表了一类新的自身免疫治疗剂，其能够以疾病和器官特异性方式解决细胞和抗原复杂的自身免疫应答，而不损害全身免疫。

方法

小鼠。nod/ltj、nodscid、bdc2.5-nod、nodil10^-/-、c57bl/6、c57bl/6il27r^-/-、c57bl/10.m、nodfoxp3-egfp和nodscidil2rg^-/-(nsg)小鼠购于jacksonlab。nodifng^-/-和lcmvgp33特异性tcr转基因nod小鼠来自于d.serreze(jacksonlab)。hla-dr4-ie转基因c57bl/6iab^null小鼠购于taconicfarms。通过将来自c57bl/6il10^gfp小鼠(jacksonlab)的il10^gfp等位基因向nod/ltj背景上回交10代获得了nodil10^gfp(tiger)小鼠。已经在别处描述了8.3-nod和nodg6pc2^-/-小鼠(verdaguer,j.等人(1997)j.exp.med.186:1663-1676；wang,j.等人(2010)proc.natlacad.sci.usa107:9317-9322)。这些研究得到了相应的机构动物照护委员会的批准。没有使用统计方法预先确定样本量。

抗体、四聚体染色和流式细胞术。fitc、pe、percp或生物素缀合的抗小鼠cd4(rm4-5)、cd8α(53-6.7)、b220(ra36b2)、cd62l(mel-1)、cd69(h1.2f3)、cd44(im7)和cd49b(dx5)mab和链霉亲和素percp购于bdpharmingen。抗鼠lag-3(c9b7w)抗体来自ebioscience。抗潜伏相关的tgf-β抗体(tw7-16b4)来自biolegend。用生物素化的pmhc单体制备pe缀合的pmhcii类四聚体。在室温下将外周血单个核细胞、脾细胞、淋巴结和骨髓cd4⁺t细胞与抗生物素蛋白一起温育15分钟，并且在facs缓冲液(pbs中的0.05％叠氮化钠和1％fbs)中用四聚体(5μgml^-1)在4℃或37℃下染色30-120分钟(取决于四聚体)，洗涤，并且与fitc缀合的抗cd4(5μgml^-1)和percp缀合的抗b220(2μgml^-1；作为“转储(dump)”通道)在4℃下温育30分钟。将细胞洗涤，在pbs中的1％低聚甲醛(pfa)中固定，并且用facscan、facsaria或bdlsrii流式细胞仪分析。对于其他表型分析，将单细胞悬液用pmhc四聚体和在facs缓冲液中1:100稀释的抗体(除了在37℃下使用的抗lag-3之外，全部在4℃使用)染色、洗涤、在1％pfa中固定，并且通过facs分析。所有表型染色在抗cd16/cd32mab(2.4g2；bdpharmingen)的存在下进行以阻断fc受体。使用flowjo软件进行分析。

使用以下mab分析nsg移植的人t细胞：fitc缀合的抗cd4(okt4，biolegend)、apc缀合的抗cd19(hib19，bdpharmingen)、percp缀合的多克隆山羊抗lag-3igg(r&dsystems)、生物素缀合的抗cd49b(ak7，pierceantibodies，thermoscientific)和ef450缀合的链霉亲和素(ebioscience)。简言之，将脾细胞和胰淋巴结细胞与抗生物素蛋白(facs缓冲液中0.25mgml^-1)在室温下温育30分钟，洗涤并且在37℃用四聚体(5μgml^-1)染色1小时，洗涤，并且与fitc缀合的抗cd4(2/100)、apc缀合的抗cd19(5/100；用作“转储”通道)、percp缀合的抗lag-3(8/100)和生物素缀合的抗cd49b(4/100)在4℃下温育45分钟。洗涤后，将细胞与ef450缀合的链霉亲和素在4℃下温育30分钟，洗涤，在pbs中的1％pfa中固定，并用facscantoii(bdbioscience)分析在hcd4⁺/hcd19^-门内的细胞。

肽和pmhc。除非另有说明，否则分别从用编码携带c-jun或c-fos亮氨酸拉链的i-aβ链和i-aα链和bira和6×his标签的构建体转染的诱导果蝇sc2细胞的培养上清液中纯化重组pmhcii类单体。在这些构建体中，如(stratmann,t.等人(2003)j.clin.invest.112:902-914)所述通过柔性gly-ser连接体将肽编码序列栓系至i-aβ链的氨基末端。如(yang,j.等人(2006)j.immunol.176:2781-2789)所述，通过将相应的肽加载至从诱导的sc2细胞的上清液中纯化的dr4和dr3复合物上产生gad65555(557i)-567/dr4、ppi76-90(88s)/dr4和igrp13-25/dr3单体。其他构建体(编码2.5mi/ia^g7、pmog35-55/ia^b、hmog97-108/dr4-ie、hplp175-192/dr4-ie和mcii259-273/dr4-ie的那些)从用编码单顺反子信息的慢病毒转导的中国仓鼠卵巢(cho)细胞的上清液中纯化，该单顺反子信息中复合物的肽-mhcβ和mhcα链被核糖体跳跃p2a序列隔开(holst,j.等人(2006)natureprotocols1:406-417)。这些单体被工程化为在构建体的羧基末端编码bira位点、6×his标签和游离cys。自组装的pmhcii类复合物通过镍层析纯化，并且用于包被至纳米颗粒上或如上所述加工用于生物素化和四聚体形成。在此使用的不同单体构建体中编码的表位包括：2.5mi；ahhpiwarmda(stratmann,t.等人(2003)j.clin.invest.112:902-914)；igrp128-145(taalsytisrmeessvtl)和igrp4-22(lhrsgvliihhlqedyrty)(15)；hel14-22(rhgldnyrg)；gad65555(557i)-567(nfirmvisnpaat)(reijonen,h.等人(2002)diabetes51:1375-1382)；ppi76-90(88s)(slqplalegslqsrg)(yang,j.等人,(2008)j.autoimmun.31:30-41)；igrp13-25(qhlqkdyrayytf)(yang,j.等人(2006)j.immunol.176:2781-2789)；pmog38-49(gwyrspfsrvvh)；hmog97-108(tcffrdhsyqee)；hplp175-192(yiyfntwttcqsiafpsk)；以及mcii259-273(giagfkgdqgpkget)。igrp4-22、igrp128-145和gpi282-292(lsialhvgfdh)或2.5mi、pmog35-55(mevgwyrspfsrvvhlyrngk)、pmog38-49、hmog97-108和hplp175-192肽购自sigmagenosys、mimotopes或genscript。

纳米颗粒、pmhc-np、肽-pn和肽-mp的合成和纯化。申请人将pmhc包被在交联的葡聚糖包被的或聚乙二醇化的氧化铁np(分别为clio-或pfm-np)上。简言之，将clio-np用氨处理以产生氨基(nh2)。用高碘酸钠氧化抗生物素蛋白并且添加至氨基-np中。与氰基硼氢化钠进一步温育用于产生稳定的共价键。最后，将生物素化的单体以4mol生物素/mol抗生物素蛋白的摩尔比添加至纳米颗粒中(moore,a.等人(2004)diabetes53:1459-1466)。通过在2kda甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺的存在下fe(acac)3的热分解产生pfm-np(singha,s.等人，未发表的数据)。使用磁性(macs)柱(miltenyibiotec)或imag细胞分离系统(bdbiosciences)纯化np。为了将pmhc或游离肽与pfm-np缀合，我们在含有2mmedta、150mmnacl的40mm磷酸盐缓冲液(ph6.0)中将携带游离羧基末端cys的pmhc或肽与纳米颗粒一起在室温下温育过夜。使用磁性柱将pmhc缀合的纳米颗粒与游离的pmhc或肽分离，通过0.2μm过滤器过滤除菌，并且在4℃下储存于水或pbs中。使用透射电子显微术、动态光散射和非变性和变性凝胶电泳进行质量控制。使用包括bradford测定(thermoscientific)、变性sds-page、氨基酸分析(在水解的pmhc-np制品中，17种不同氨基酸的基于hplc的定量)或dot-elisa(singha,s.等人，未发表的数据)在内的不同方法测量pmhc或肽含量。

如先前所述(getts,d.r.等人(2012)naturebiotechnol.30:1217-1224)，使用来自polysciences(warrington，pa)的羧化的500nm直径聚苯乙烯珠子来制备肽包被的微粒。按照制造商的说明书，通过碳二亚胺化学法将肽缀合至聚苯乙烯珠子上。简言之，申请人在0.1mmes缓冲液(ph5.0)中将250μlpsb(包含约9×10¹¹个珠子)与250μg肽一起在室温下温育，在1mgedc的存在下轻轻地滚动2小时。用pbs洗涤肽缀合的聚苯乙烯珠子以除去未缀合的肽，并针对非缀合肽和微粒对照的连续稀释液用非变性和变性page进行分析。

nod小鼠中的pmhc-np和肽或肽-np治疗。在前驱糖尿病nod小鼠中的实验涉及连续5周每周两次用7.5μg的pmhc-np或等量的可溶性pmhc单体或未包被的纳米颗粒处理(静脉内)10周龄雌性小鼠的队列。在糖尿病小鼠中的实验涉及通过用accucheckstrip(roche)每周两次测量血糖水平，用于糖尿病发展的10周龄雌性nod/ltj、nodg6pc2^-/-、nodil10^-/-或nodifng^-/-小鼠的队列。显示两次连续测量>11mm的小鼠被认为是糖尿病的，并且每周两次用7.5μgpmhc-np、递送分子当量的肽或游离肽的纳米颗粒(每剂8μg)(burton,b.r.等人(2014)naturecommun.5:4741-4747)治疗，直到稳定地显示血糖正常(定义为连续8次测量<11mm)或直到认为高血糖不可逆(3次测量>25mm)为止。在图9g、图12b和图14h中，将小鼠随机分为用2.5mi/ia^g7-np或hel14-22/ia^g7-np(图9g)或2.5mi/ia^g7-np或igrp4-22/ia^g7-np(图12b)治疗。在图9g中，在单独的小鼠队列中测试igrp4-22/ia^g7和igrp128-145/ia^g7。用肽或肽-np(图9g)治疗的小鼠在同一实验内被随机分为两种治疗。体内细胞因子中和实验涉及腹膜内施用抗cd20的mab(5d2，a.chan,genentech惠赠；在相对于高血糖发作的第0-2天静脉内注射三剂250μg)或500μghrpn(rigg1)、ifnγ(r4-6a2)、il-10(jes5-2a5)、tgf-β(1d11)或il-21r(4a9)(bioxcell)，每周两次，持续2周，随后每剂200μg，再持续3周。将小鼠随机分为阻断细胞因子的mab治疗(ifnγ、il-10、tgfβ)或hrpn大鼠-igg1组。在分开的糖尿病小鼠队列中测试抗cd20和抗il21rmab(图11a)。每天评估动物的糖尿(对应于>16mm血糖)，并且如果呈阳性，则皮下给予人胰岛素低精蛋白胰岛素(isophane)(每天1iu)。停止治疗后，监测nod小鼠的高血糖复发，直至50周龄。

eae中的肽、pmhc、pmhc–np、肽–np或肽–mp疗法。在异氟烷麻醉下，在尾巴基部，分别用在cfa中的150μg的pmog35–55或hmog97–108或hplp175–192对六至八周龄的雌性c57bl/6、c57bl/6il27r^-/-或hla-dr4-ie-转基因c57bl/6iab^null小鼠进行皮下免疫。在第0天和第3天，小鼠静脉内接受300ng的百日咳毒素。将小鼠称重并在免疫后第10天开始每日评分。所使用的评分系统已经在其他地方报告30，并在5分量表上作图。当大多数小鼠显示出疾病晚期的体征(第14天)或达到最大的疾病评分(第21天)时，将小鼠分成不同的治疗组，使体重和疾病评分平均值同步，并用pmhc包被的和未包被的纳米颗粒、等量的pmhc单体、肽包被的纳米颗粒(相等剂量的肽)、游离肽(静脉内或皮下8μg/剂量)(burton,b.r.等人(2014)naturecommun.5:4741-4747)、肽缀合的微粒(15μg肽/剂量)(getts,d.r.等人(2012)naturebiotechnol.30:1217-1224)或未缀合的微粒每周治疗两次，持续5周。将小鼠随机化为用pmhc–np(根据实验如图9j-图9n、图10f-图10h、16a图-图16f、17a-图17i所述，一种或两种不同类型)、未包被的纳米颗粒治疗或未治疗。肽、肽-mp、肽-np、pmhc单体和未包被的微粒一起进行测试；随着小鼠达到指定的疾病评分，将小鼠随机分入每个治疗组(图10f、图17f-图17i)。附加的对照队列用单剂量的肽缀合的微粒进行治疗(图17h)。抗细胞因子和细胞因子受体mab阻断研究(图18g)涉及将小鼠随机分入每个治疗组。

cia中的肽、pmhc-np或肽-mp疗法。将以2mgml^-1溶于0.05m乙酸中的牛胶原蛋白ii(bcii)在含有4mgml^-1杀死的结核分枝杆菌

(h37rα)的cfa(v/v)中乳化。用cfa中的100μg的bcii对八至十二周龄的hla-dr4-ie-转基因c57bl/10.m小鼠在尾巴基部进行皮内免疫，并在第14天和第28天用ifa中的100μgbcii加强免疫。所有四只爪的大小在免疫前(第0天)使用卡尺测量，并且在疾病发作时每天测量。疾病进展被测量为相对于第0天的关节肿胀的增加百分比。当该值达到130％时，将小鼠分成不同的治疗组，并用pmhc-np、cys包被(pmhc未缀合)的np(对于pmhcnp为25μg的pmhc，或对于cys缀合的np为相等量的铁)、游离肽(皮下8μg/剂量)(burton,b.r.等人(2014)naturecommun.5:4741-4747)或肽缀合的mp(15μg肽/剂量)(getts,d.r.等人(2012)naturebiotechnol.30:1217-1224)静脉内治疗每周两次，持续5周。将小鼠分别随机化为用pmhc–np或未包被的纳米颗粒治疗，或用肽或肽-mp治疗(图10a和图14-图21)。如别处报道(leavenworth,j.w.等人(2013)j.clin.invest.123:1382-1389)，针对疾病的临床体征直到最大临床评分12对小鼠进行评估。

人pbmc重建的nsg宿主中的肽、pmhc-np、肽-np和肽-mp疗法。来自新近或最近诊断的hla-drb1*0401⁺或-drb1*0301⁺t1d患者(经知情同意招募，由医院诊所的机构审查委员会批准)的pbmc使用抗-cd8mab包被的磁珠(miltenyibiotech)消耗cd8⁺t细胞，并静脉内注射(2×10⁷)至8-10周龄的nsg宿主中。从pbmc输注后的第5天开始，小鼠用指定剂量的pmhc-np、肽包被的np(以相等剂量的肽)、单独的肽(皮下8μg/剂量)(burton,b.r.等人(2014)naturecommun.5:4741-4747)或肽缀合的微粒(15μg肽/剂量)(getts,d.r.等人(2012)naturebiotechnol.30:1217-1224)治疗，连续5周每周两次，或者不治疗。分别处理单独的患者样品并注射到两只(用于pmhc-np和肽-pn实验)或三只单独的小鼠(用于肽和肽-mp实验)中；在这些实验的每一个中使用的两至三只宿主中的一只或两只进行治疗，而另一只不治疗(表4a-表4c)。如上所述，测量pln和/或脾中的同源cd4⁺t细胞的疗法诱导的扩增。表4a-表4c总结了每个患者的hla基因型、性别、年龄、自诊断的月数和测试的pmhc-np的类型。

腹膜内葡萄糖耐量试验。使动物禁食过夜并用2mgkg^-1的d-葡萄糖进行腹膜内攻击。在葡萄糖攻击之前和之后的不同时间点用血糖仪从尾静脉监测血糖。使用小鼠超灵敏胰岛素elisa(alpco)测量血清胰岛素含量。

全身细胞和体液免疫的评价。对于细胞反应的评价，向pmhc–np治疗和未治疗的雌性小鼠静脉内注射2×10⁶噬斑形成单位(pfu)的重组痘苗病毒(rvv)。在感染后第4天和第14天时杀死小鼠队列，并处理用于pmhc四聚体染色和rvv滴度测量。简言之，称量卵巢，在含有10％fbs的300ulrpmi-1640中使用研杵均质化，冷冻-解冻3次，然后进行3轮超声处理(每次20秒)。将裂解物的连续稀释液加入到6孔板中汇合的bsc-1细胞培养物中，在37℃下温育2小时，用pbs洗涤两次，并在dmem10中培养。在第2天，丢弃上清液并将细胞层用结晶紫染色以显示出噬斑。

为了评价体液免疫，将pmhc-np治疗的和未治疗的小鼠用cfa中的100μgdnp-klh(alphadiagnosticinternational)进行腹膜内免疫。3周后进行相同的加强免疫。10天后杀死小鼠。抗-dnp抗体滴度通过在含有0.05％吐温20的pbs中稀释血清样品来测量。抗-dnp抗体根据制造商的说明书使用抗-dnpigelisa试剂盒(alphadiagnosticinternational)进行半定量。

增殖和细胞因子分泌测定。来自pmhc–np治疗的小鼠的cd4⁺t细胞使用bdimag富集试剂盒从周围淋巴器官中富集，如上所述用pmhc四聚体进行染色，并通过流式细胞术进行分选。对于使用记忆和幼稚bdc2.5cd4⁺t细胞的测定，使用stemcelltechnologies富集试剂盒富集细胞，用抗体染色并分选。将facs分选的细胞(2–3×10⁴)与用2μgml^-1肽脉冲的骨髓来源的dc(2×10⁴)共培养。48小时后收集上清液以用于通过luminex测量细胞因子，并且所述细胞用1微居里(μci)的(³h)-胸苷脉冲，并在24小时后收集以一式三份地测量胸苷掺入。

为了确定pmhc-np疗法是否促进移植pbmc的nsg宿主的pln中分泌il-10的b细胞的产生，申请人用抗-hcd4-fitc、抗hcd19-apc和如上所述的四聚体-pe对单独小鼠的pln和脾细胞悬浮液进行染色，并通过流式细胞术(facsaria-bdbiosciences)分选b细胞。将从每个器官中分选的b细胞在补充有10％人ab血清的rpmi-1640中用lps(1μgml^-1,sigma)刺激24小时。使用用于hil-10的v-plex定制人细胞因子试剂盒(mesoscalediscovery)，经由mesoscale技术一式两份地测量上清液中的il-10含量。针对脾b细胞值将数据进行归一化，并报告为变化倍数。

cd11b⁺细胞从pln和mln中的分离和体外刺激。来自ln的cd11b⁺细胞通过在胶原酶d(1.25μgml^-1)和脱氧核糖核酸酶i(0.1μgml^-1)中37℃下消化15min，然后用cd11b(bdimag)mab包被的磁珠纯化来获得。将细胞用lps(2μgml^-1)刺激3天，并用luminex多重细胞因子测定分析上清液中的细胞因子含量。

体外抑制测定。将facs分选的2.5mi/ia^g7四聚体阳性或阴性细胞(2×10⁴)与用2μgml^-1‘抑制剂’(2.5mi或gpi282–292)和‘响应者’(gp33或nrp–v7)肽脉冲的骨髓来源的dc(2×10⁴)共培养。响应者细胞是使用bd-imag珠子从8.3-nod或lcmv-gp33特异性tcr转基因nod小鼠中纯化的cd8⁺t细胞(2×10⁴)。这些细胞用cfse(5μm)标记并一式两份或一式三份地添加到dc培养物中。48小时后通过facs测量响应者细胞中cfse的稀释度。在其他实验中，在共培养24小时内向孔中补充hrpnrigg、抗-ifnγ、抗-il10或抗-tgf-β(全部为10μgml^-1)或ido抑制剂，1-甲基色氨酸(1-mt；400μm)。

交叉呈现的体内抑制。对于非转基因小鼠中的交叉呈现测定，申请人将cfse标记的8.3-cd8⁺报道细胞(5–10×10⁶)输注到未治疗的或pmhc-np治疗的小鼠中，并在转移后7天内在宿主的淋巴器官中测量cfse稀释度。

抑制的过继转移。将来自未治疗的小鼠或用10个剂量的2.5mi/ia^g7-np或未包被的纳米颗粒治疗的小鼠的脾cd4⁺或cd8⁺t细胞(10⁷)输注到5-10周龄的nodscid雌性小鼠中。24小时后向宿主输注从雌性nod供体中纯化的2×10⁷cd4⁺或cd8⁺t细胞脾细胞混合物。转移后监测宿主的糖尿病发展至少90天(图9e)。在另一实验中，用2.5mi/ia^g7–np治疗宿主每周两次(图9e)。在其他实验中(图11e)，在先前的5周中，向cd4⁺或cd8⁺t细胞重建的5-6周龄nodscid雌性小鼠中输注从用10个剂量的未包被或2.5mi/ia^g7包被的np治疗的小鼠的pln中纯化的5×10⁵个cd19⁺细胞(图11d)。b细胞使用easysep小鼠cd19阳性选择试剂盒ii(stemcelltechnologies)进行纯化。分别进行研究的其他队列(图11e)接受来自2.5mi/ia^g7–np治疗的供体的pln或mlncd19+细胞(5×10⁵)加上总脾cd4⁺t细胞(10⁷)或2.5mi/ia^g7四聚体⁺(2×10⁵)或四聚体^-cd4⁺t细胞(10⁷)。将宿主随机分入每个输注组并一起监测糖尿病的发展。图11e包括来自图9e和图11d中研究的相应队列的数据。2.5mi/ia^g7四聚体⁺和四聚体^-细胞从2.5mi/ia^g7–np治疗的小鼠的总脾cd4⁺t细胞中的分离使用抗-pemab包被的微珠和macsld柱子(miltenyibiotec)来进行。

体内的b细胞增殖和breg诱导以及体外的breg抑制。为了分离脾dc，将脾在胶原酶d和脱氧核糖核酸酶中在37℃下消化15分钟，并使用抗-cd11cmab包被的磁珠(macs)纯化dc。在37℃下将细胞用10μgml^-1的2.5mi或gpi282–292肽脉冲2小时，并分别用cfse(0.5μm)或pkh26(2μm)标记。将标记的细胞(5–10×10⁶；以1:1比例混合)静脉内施用于pmhc–np治疗或未治疗的nod小鼠。三天后，申请人通过facs比较不同宿主的脾中cfse⁺与pkh26⁺细胞的比例。使用从雌性供体小鼠中利用抗-b220mab包被的磁珠(macs)分离的肽脉冲的脾b细胞进行类似的实验。

对于体内breg诱导测定，来自nodil10^gfp(tiger)小鼠的b细胞使用cd19富集试剂盒(stemcelltechnologies)进行富集，并在37℃下用2.5mi或gpi282–292肽(10μgml^-1)脉冲2小时。将肽脉冲的b细胞用pbs洗涤两次，用pkh26标记并输注(1×10⁶)到pmhc–np治疗或未治疗的小鼠中。7天后杀死宿主，并用抗-b220-apc和生物素化的抗-cd1d或抗-cd5mab以及链霉亲和素-percp标记它们的脾。通过流式细胞术针对egfp⁺cd1d^高或cd5⁺细胞的存在分析pkh26⁺细胞。

为了确定tr1来源的细胞因子在breg形成中的作用(图18u)，申请人重复了上述实验，但使用了3×10⁶个b细胞和用250μg或500μg(从相对于b细胞转移的第-3天至第6天，每日腹膜内给予)的抗-hrpn(rigg1)、抗-il-10(jes5-2a5)、抗-tgfβ(1d11)或抗-il-21r(4a9)mab(bioxcell)治疗的宿主。将宿主随机分入每个抗体治疗组并一起研究。

为了测量tr1诱导的breg细胞在体外抑制t细胞的抗原诱导激活的能力，申请人从年龄匹配的未治疗的nod小鼠或用10个剂量的2.5mi/ia^g7-np治疗的nod小鼠的pln中分离cd19⁺b细胞，并将这些细胞与lps(10μgml^-1)一起培养过夜。申请人随后将这些细胞(2×10⁴)与2.5mi-肽脉冲(0.1μgml^-1)的骨髓来源的dc(2×10⁴)和cfse标记的bdc2.5cd4+细胞(4×10⁴)一起培养。3天后测量cd4⁺细胞中cfse的稀释度。

cd25⁺cd4⁺treg消耗。用500μg的抗-cd25(pc61.5.3,bioxcell)腹膜内治疗nod小鼠，从8周龄开始每周3次，然后从10周龄开始每周给予两次pmhc–np，10次注射。平均cd4⁺cd25⁺和foxp3–

egfp⁺cd4⁺t细胞消耗分别为90％和70％。

组织学。将组织在10％福尔马林中固定并在石蜡中包埋。根据报道针对胰岛炎对h&e染色的胰腺进行评分(verdaguer,j.等人(1997)j.exp.med.186:1663-1676)。简言之，胰腺炎如下进行评分：0，无；1，周围胰岛炎；2，浸润覆盖<25％的胰岛；3，覆盖25％–50％的胰岛；4，覆盖>50％的胰岛。

将脊髓和脑组织在10％缓冲福尔马林中固定最少24小时，在石蜡中包埋，并切成6μm。将来自石蜡包埋组织的载玻片脱蜡，并通过在10mm柠檬酸钠缓冲液(ph6.0)中用蒸汽处理载玻片20min并在室温下冷却20min来进行抗原修复。对于免疫组织化学，将载玻片用10％福尔马林固定并在-20℃下用甲醇中的3％h2o2处理。切片用0.25％

triton-x100进行透化处理并用脱脂乳封闭溶液封闭。兔抗-iba1(wako,1:500)或大鼠抗-mbp(abcam)在4℃下温育过夜，然后分别加入生物素化的第二抗体(1:500)、抗生物素蛋白-生物素复合物和3,3'-二氨基联苯胺。切片用苏木精和伊红复染，用分级乙醇脱水，并用acrytol固定。对于组织学髓磷脂染色，将载玻片用10％福尔马林固定或脱蜡，用分级乙醇脱水，并在65℃下与95％乙醇中的0.2％勒克司坚牢蓝一起温育。载玻片在0.05％碳酸锂中显影，用苏木精和伊红复染，并用acrytol固定。在olympus明视野显微镜上拍摄小脑的图像。使用imagej软件对炎性病灶(密集核簇或具有相应脱髓鞘的血管周围套)进行计数，并测量其大小。为了相对iba1强度的定量，不知情的观察者将图像从最高强度到最低强度进行排列。

将来自bcii免疫小鼠的膝关节在4％缓冲的福尔马林中固定过夜，并在3周内用14％edta脱钙。将脱钙的爪在石蜡中包埋，以8μm切片，并用苏木精和伊红染色，以在5分的范围内对浸润和血管翳形成进行评分，其中5分对应于侵蚀性关节炎，其中严重浸润和血管翳覆盖关节间隙的60％。蛋白聚糖在胫骨和股骨关节面处的消耗通过番红-o染色强度的损失来评估。为此，将切片脱蜡，水合，并用苏木精染色，然后用0.05％水性固绿染色5分钟。将载玻片用1％乙酸固定，并用0.1％水性番红-o染色2min，用分级乙醇脱水，用二甲苯清除，并用dpx固定。在0到3分的范围内进行评分，其对应于：0，0％消耗，1，低(<25％)，2，中度(25％–50％)，3，严重(>50％)。关节软骨的破坏包括评估死亡软骨细胞(空腔隙)的存在，并且在3分的范围内进行评分(0，无空腔隙；3，完全丧失关节软骨上的软骨细胞/严重软骨侵蚀)。

cns浸润性淋巴细胞的分离。用氨胺酮-赛拉嗪麻醉小鼠并通过心脏左心室用pbs灌注。手动分离脑和脊髓，切成小片段，并在37℃下用hbss中的胶原酶d(1.25μgml^-1)和脱氧核糖核酸酶i(1％w/v)的溶液消化30min。使消化的cns通过70μm细胞过滤器。将细胞重悬于dmem(补充有2％fbs和10mmhepes)和100％percoll(至最终percoll浓度为30％)中。将溶液分层到65％percoll上，并在室温下以380g离心30min。在进一步分析之前将位于分裂间期的单个核细胞层用rpmi洗涤。

定量rt-pcr。从分选自2.5mi/ia^g7–np治疗的nod小鼠并在体外用抗-cd3/抗-cd28mab包被的dynabead刺激的2.5mi/ia^g7四聚体⁺或四聚体^-cd4⁺t细胞中提取rna。

每个四聚体⁺样品对应于从2-3只小鼠合并的细胞。将rna逆转录并将cdna接种在具有2xsybrgreenmastermix(appliedbiosystems)的mouseimmunology384stellarrayqpcr平板(barharborbiotechnology)中。该平板在7900htappliedbiosystems实时pcr仪器中运行，并使用globalpatternrecognition(gpr)分析工具分析原始数据(http://www.gene-quantification.com/qpcr-array.html)。分离自附加样品的mrna使用il-21特异性引物进行rt-qpcr(正向：5′-tcatcattgacctcgtggccc-3′；反向：5′-atcgtacttctccacttgcaatcc-3′)、il-10(正向：5′-cttgcactaccaaagccaca-3′；反向：5′-gttattgtcttcccggctgt-3′)、c-maf(正向：5′-agcagttggtgaccatgtcg-3′；反向：5′-tggagatctcctgcttgagg-3′)、ifn-γ(正向：5′-tgaacgctacacactgcatcttgg-3′；反向：5′-cgactccttttccgcttcctgag-3′)、lag-3(正向：5′-tcccaaatccttcgggttac-3′；反向：5′-gagctagactctgcggcgta-3′)、cd49b(正向：5′-ccgggtgctacaaaagtcat-3′；反向：5′-gtcggccacattgaaaaagt-3′)、芳基烃受体(正向：5′-cgtccctgcatcccactactt-3′；反向：5′-ggacatggccccagcatag-3′)和icos(正向：5′-tgacccacctccttttcaag-3′；反向：5′-ttagggtcatgcacactgga-3′)。

通过在不存在apc的情况下用抗-cd3/抗-cd28mab包被的微粒(每个细胞1个珠子)培养来自bdc2.5nodfoxp3-egfp小鼠的小鼠幼稚egfp^-bdc2.5-cd4⁺t细胞(cd62l^hifoxp3^-egfp^-；1.5×10⁶ml^-1)三天，然后在rhil-2(30iuml^-1)中培养重纯化的(不含微粒)cd4⁺t细胞一天，以及用2.5mi肽(10μgml^-1)、2.5mi/ia^g7单体(25μgpmhc/ml)、2.5mi/ia^g7–np(25μgpmhc/ml和50μgml^-1铁)或未缀合的纳米颗粒(50μg铁/ml)培养6天，进行在体外激活的cd4⁺t细胞中的tr1转录物的pmhc-np诱导的上调。使用未刺激的培养物作为对照计算相对基因表达。

通过将来自bdc2.5-tcr转基因nod或nodfoxp3-egfp小鼠(thy1^b+)(每个宿主1–1.5×10⁶个细胞)的幼稚(cd44^medcd62l^hi)或记忆(cd44^hicd62l^low)egfp-cd4⁺t细胞输注到nod.thy1^a宿主中，以及在两周内通过用四个剂量的2.5mi/ia^g7–np治疗宿主或不治疗它们，进行在体内幼稚相比于记忆bdc2.5cd4⁺t细胞中tr1转录物的pmhc-np诱导的上调。两周半后，从宿主中分选thy1^b+cd4⁺t细胞，并在mrna提取和使用c-maf、il-21、il-10、ifnγ、lag-3和cd49b特异性的引物进行rt-qpcr之前用抗-cd3和抗-cd28包被的磁性dynabead攻击3天。

为了与pmhc-np治疗的移植pbmc的nsg宿主的四聚体^-cd4⁺t细胞相比，比较四聚体⁺中il-10mrna的水平，申请人如上所述用抗-hcd4-fitc、抗-hcd19-apc和四聚体-pe对脾细胞进行染色，并通过facs(facsaria-bdbiosciences)从单独的宿主中分选四聚体⁺和四聚体^-细胞。在dynabead人t-激活物cd3/cd28(lifetechnologies)的存在下，使用1:1细胞与珠子之比将分选的细胞在含有10％人ab血清的rpmi-1640中培养72h。来自细胞沉淀物的总rna使用含有5mmdtt、2uml^-1rna酶、500mmdntp、10uml^-1的superscript逆转录酶(invitrogen,lifetechnologies)、100mgml^-1牛血清蛋白、1％tritonx-100、25ngml^-1oligodt(invitrogen)、0.5nm亚精胺和20μl中的1xfirststrant缓冲液(invitrogen)的双重逆转录酶/裂解溶液在50℃下逆转录60min，并在70℃下逆转录15min。我们随后将1μl的cdna反应体积与12.5μl的powersybrgreenpcr主混合溶液(appliedbiosystem)混合，并用实时pcr机器(7900ht,appliedbiosystems)利用以下引物进行扩增：β-肌动蛋白(正向：5′-ctggaacggtgaaggtgaca-3′；反向：5′-aagggacttcctgtaacaatgca-3′)、il-10(正向：5′-aagacccagacatcaaggcg-3′；反向：5′-aatcgatgacagcgccgtag-3′)。

统计分析。图例中描述的样品大小值对应于测试的单独小鼠的数目(不是重复的)，并且显示的数据对应于来自不同实验的合并数据。数据通过studentt检验、mann–whitneyu检验、卡方、对数秩(mantel–cox)、pearson相关性或双因素anova检验进行比较。统计显著性假定在p<0.05。

实施例3.pmhc化合价和体内密度作用。

申请人接下来通过比较用2.5mi/ia^g7pmhc包被的pf-m(约20nm)和sfp-z(约8nm)np的各种制品的treg细胞扩增性质以实验方式测试了数学模型的预测，这些制品扩增同源t调节1(tr1)型cd4+t细胞。携带29-59个pmhc/np的7种不同2.5mi-ia^g7-pf-m制品的treg扩增性质的比较显示了在单独制品中明确的pmhc剂量依赖性作用，而且跨越批次的pmhc化合价没有显著影响(图22a)。然而，重要的是，与携带29-45个pmhc/np的2.5mi-ia^g7-pf-m颗粒相比，使用携带22-44个pmhc/np的较小2.5mi-ia^g7-sfp-z制品的研究在所有测试的剂量下(0.75-1μg、7.5-10μg和25μg的总pmhc/剂量)显示了显著较高的treg扩增作用(图22b)。这些结果通过产生11nm直径的pf-mnp并测试其2.5mi-ia^g7包被的对应物在体内扩增同源tr1t细胞的能力来进一步证实。值得注意的是，以15个pmhc/np递送7.5μg的总pmhc的11nmpf-mnp将同源tr1细胞扩增至总脾cd4+t细胞的1.6+0.3％，该值相当于递送7.5μg的22-44个pmhc/np的sfp系列的np。

如上所述，申请人已经证明，自身反应性记忆cd4+t细胞表达t调节1型(tr1)预备的转录程序，并将lag3而不是cd49b(tr1标志物)输出到细胞表面。由于2.5mi-ia^g7-np疗法触发tr1平衡的记忆t细胞上il-10的表达和cd49b的上调，因此促进了它们转化成稳定的tr1细胞，申请人怀疑这些过程的效率是否也受到np表面上的pmhc密度的调节。值得注意的是，在2.5mi/ia^g7密度(但不是总pmhc剂量)与响应于2.5mi/ia^g7-np疗法而在野生型nod小鼠中扩增的tr1样cd4+t细胞上的cd49b(但不是lag3)上调之间存在统计学显著相关；该效应在约0.012个pmhc/nm²处达到峰值(图22c)。总之，这些结果支持pmhc密度是在基于pmhc的纳米药物的设计中关键的参数这一观点。

pmhc密度对生物活性的这些影响也见于体内；pmhc密度的增加导致pmhc-np治疗的小鼠中tr1细胞标志物cd49b的上调增强，这表明pmhc密度与促进treg适应性相关。总pmhc剂量与这些纳米药物的treg扩增性质相关，但其对这种表型仅有轻微影响，这表明pmhc密度和pmhc剂量分别在促进treg转化和扩增方面具有不同的作用。

等同物

应当理解，尽管已通过某些实施方案和可选的特征具体公开了本公开内容，但是本领域技术人员可以对本文公开的呈现在本文中的公开内容进行修改、改进和变化，而且这样的修改、改进和变化被认为在本公开内容的范围之内。本文提供的材料、方法和实施例代表了某些实施方案，是示例性的，并且不旨在对本公开内容的范围进行限制。

本文已经对本公开内容进行了广泛地和一般性地描述。落入一般性公开内容内的每个较窄的种类和亚组也形成本公开内容的一部分。这包括对本公开内容的一般性描述，带有从该类属除去任何主题的附带条件或否定限制，而不管去除的材料是否被本文具体叙述。

此外，当以马库什组的方式描述本公开内容的特征或方面时，本领域技术人员将认识到，本发明也因此可以以马库什组中的任何单个成员或成员的亚组的形式进行描述。

权利要求中使用的术语“或”用于意指“和/或”，除非明确指出仅指替代方案或替代方案是相互排斥的，但是本公开内容支持仅指替代方案以及“和/或”的定义。

如在本说明书和权利要求中所使用的，词语“包含”(以及“包含”的任何形式)、“具有”(以及“具有”的任何形式)、“包括”(以及“包括”的任何形式)或“含有”(以及“含有”的任何形式)是包含性的或开放式的，并且不排除额外的、未列举的元素或方法步骤。

贯穿于本公开内容，多种出版物、专利和公开的专利说明书通过标识引用作为参考。所有的出版物、专利申请、专利和本文提及的其他参考文献都通过引用其全文明确地并入本文，其程度如同各自均通过单独引用而并入。在冲突的情况下，以包括定义的本说明书为准。

表1.官能化peg连接体

表2.密码子表

表3a.384种免疫标志物的实时rt-pcr

表3b.tr1转录物的实时rt-pcr

参考文献

1lieberman,s.&dilorenzo,t.acomprehensiveguidetoantibodyandt-cellresponsesintype1diabetes.tissueantigens62,359-377(2003).

2tsai,s.,shameli,a.&santamaria,p.cd8+t-cellsinautoimmunediabetes.adv.immunol.100,79-124(2008).

3santamaria,p.thelongandwindingroadtounderstandingandconqueringtype1diabetes.immunity32,437-445(2010).

4babbe,h.等人clonalexpansionsofcd8(+)tcellsdominatethetcellinfiltrateinactivemultiplesclerosislesionsasshownbymicromanipulationandsinglecellpolymerasechainreaction.j.exp.med.192,393-404(2000).

5zang,y.c.等人increasedcd8+cytotoxictcellresponsestomyelinbasicproteininmultiplesclerosis.j.immunol.172,5120-5127(2004).

6walter,u.&santamaria,p.cd8+tcellsinautoimmunity.curr.opin.immunol.17,624-631(2005).

7firestein,g.s.evolvingconceptsofrheumatoidarthritis.nature423,356-361(2003).

8sakaguchi,s.等人foxp3+cd25+cd4+naturalregulatorytcellsindominantself-toleranceandautoimmunedisease.immunol.rev.212,8-27(2006).

9miyara,m.等人functionaldelineationanddifferentiationdynamicsofhumancd4+tcellsexpressingthefoxp3transcriptionfactor.immunity30,899-911(2009).

10chen,q.,kim,y.c.,laurence,a.,punkosdy,g.a.&shevach,e.m.il-2controlsthestabilityoffoxp3expressionintgf-beta-inducedfoxp3+tcellsinvivo.j.immunol.186,6329-6337(2011).

11yang,x.p.等人opposingregulationofthelocusencodingil-17throughdirect,reciprocalactionsofstat3andstat5.nat.immunol.12,247-25(2011).

12marwaha,a.k.等人cuttingedge:increasedil-17-secretingtcellsinchildrenwithnew-onsettype1diabetes.j.immunol.185,3814-3818(2010).

13mcclymont,s.a.等人plasticityofhumanregulatorytcellsinhealthysubjectsandpatientswithtype1diabetes.j.immunol.186,3918-3926(2011).

14komatsu,n.等人heterogeneityofnaturalfoxp3+tcells:acommittedregulatoryt-celllineageandanuncommittedminorpopulationretainingplasticity.proc.natl.acad.sci.u.s.a.106,1903-1908(2009).

15zhou,l.,chong,m.m.&littman,d.r.plasticityofcd4+tcelllineagedifferentiation.immunity30,646-655(2009).

16zhou,x.等人instabilityofthetranscriptionfactorfoxp3leadstothegenerationofpathogenicmemorytcellsinvivo.nat.immunol.10,1000-1007(2009).

17komatsu,n.等人pathogenicconversionoffoxp3+tcellsintoth17cellsinautoimmunearthritis.nat.med.20,62-68(2014).

18bailey-bucktrout,s.l.等人self-antigen-drivenactivationinducesinstabilityofregulatorytcellsduringaninflammatoryautoimmuneresponse.immunity39,949-962(2013).

19bacchetta,r.等人highlevelsofinterleukin10productioninvivoareassociatedwithtoleranceinscidpatientstransplantedwithhlamismatchedhematopoieticstemcells.j.exp.med.179,493-502(1994).

20roncarolo,m.g.等人interleukin-10-secretingtype1regulatorytcellsinrodentsandhumans.immunol.rev.212,28-50(2006).

21gagliani,n.等人coexpressionofcd49bandlag-3identifieshumanandmousetregulatorytype1cells.nat.med.19,739-746(2013).

22mclarnon,a.ibd:regulatoryt-celltherapyisasafeandwell-toleratedpotentialapproachfortreatingrefractorycrohn'sdisease.naturerevgastroenterolhepatol9,559(2012).

23desreumaux,p.等人safetyandefficacyofantigen-specificregulatoryt-celltherapyforpatientswithrefractorycrohn'sdisease.gastroenterology143,1207-1217(2012).

24roncarolo,m.g.,gregori,s.,lucarelli,b.,ciceri,f.&bacchetta,r.clinicaltoleranceinallogeneichematopoieticstemcelltransplantation.immunol.rev.241,145-163(2011).

25tsai,s.等人reversalofautoimmunitybyboostingmemory-likeautoregulatorytcells.immunity32,568-580(2010).

26clemente-casares,x.,tsai,s.,yang,y.&santamaria,p.peptide-mhc-basednanovaccinesforthetreatmentofautoimmunity:a"onesizefitsall"approach？j.mol.med.89,733-742(2011).

27stratmann,t.等人susceptiblemhcalleles,notbackgroundgenes,selectanautoimmunetcellreactivity.j.clin.invest.112,902-914(2003).

28mukherjee,r.,wagar,d.,stephens,t.,le-chan,e.&singh,b.identificationofcd4+tcell-specificepitopesofislet-specificglucose-6-phosphatase-catalyticsubunit-relatedprotein:anovelbetacellautoantigenintype1diabetes.j.immunol.174,5306-5315(2005).

29kamanaka,m.等人expressionofinterleukin-10inintestinallymphocytesdetectedbyaninterleukin-10reporterknockintigermouse.immunity25,941-952(2006).

30yoshizaki,a.等人regulatorybcellscontrolt-cellautoimmunitythroughil-21-dependentcognateinteractions.nature491,264-268(2012).

31onoda,t.等人humancd4+centralandeffectormemorytcellsproduceil-21:effectoncytokine-drivenproliferationofcd4+tcellsubsets.int.immunol.19,1191-1199(2007).

32pot,c.等人cuttingedge:il-27inducesthetranscriptionfactorc-maf,cytokineil-21,andthecostimulatoryreceptoricosthatcoordinatelyacttogethertopromotedifferentiationofil-10-producingtr1cells.j.immunol.183,797-801(2009).

33spensieri,f.等人humancirculatinginfluenza-cd4+icos1+il-21+tcellsexpandaftervaccination,exerthelperfunction,andpredictantibodyresponses.proc.natl.acad.sci.u.s.a.110,14330-14335(2013).

34hale,j.s.等人distinctmemorycd4+tcellswithcommitmenttotfollicularhelper-andthelper1-celllineagesaregeneratedafteracuteviralinfection.immunity38,805-817(2013).

35sato,k.等人markedinductionofc-mafproteinduringth17celldifferentiationanditsimplicationinmemorythcelldevelopment.j.biol.chem.286,14963-14971(2011).

36saraiva,m.等人interleukin-10productionbyth1cellsrequiresinterleukin-12-inducedstat4transcriptionfactoranderkmapkinaseactivationbyhighantigendose.immunity31,209-219(2009).

37verdaguer,j.等人spontaneousautoimmunediabetesinmonoclonaltcellnonobesediabeticmice.j.exp.med.186,1663-1676(1997).

38wang,j.等人insiturecognitionofautoantigenasanessentialgatekeeperinautoimmunecd8+tcellinflammation.proc.natl.acad.sci.u.s.a.107,9317-9322(2010).

39amrani,a.等人progressionofautoimmunediabetesdrivenbyaviditymaturationofat-cellpopulation.nature406,739-742(2000).

40stratmann,t.等人thei-ag7mhcclassiimoleculelinkedtomurinediabetesisapromiscuouspeptidebinder.j.immunol.165,3214-3225(2000).

41yang,j.等人islet-specificglucose-6-phosphatasecatalyticsubunit-relatedprotein-reactivecd4+tcellsinhumansubjects.j.immunol.176,2781-2789(2006).

42holst,j.等人generationoft-cellreceptorretrogenicmice.nat.protoc.1,406-417(2006).

43yoshida,k.等人evidenceforsharedrecognitionofapeptideligandbyadiversepanelofnon-obesediabeticmice-derived,islet-specific,diabetogenictcellclones.int.immunol.14,1439-1447(2002).

44reijonen,h.等人detectionofgad65-specifict-cellsbymajorhistocompatibilitycomplexclassiitetramersintype1diabeticpatientsandat-risksubjects.diabetes51,1375-1382(2002).

45yang,j.等人cd4+tcellsfromtype1diabeticandhealthysubjectsexhibitdifferentthresholdsofactivationtoanaturallyprocessedproinsulinepitope.j.autoimmun.31,30-41(2008).

46moore,a.,grimm,j.,han,b.&santamaria,p.trackingtherecruitmentofdiabetogeniccd8+tcellstothepancreasinrealtime.diabetes53,1459-1466(2004).

47giuliani,f.等人additiveeffectofthecombinationofglatirameracetateandminocyclineinamodelofms.j.neuroimmunol.158,213-221(2005).

48leavenworth,j.w.,tang,x.,kim,h.j.,wang,x.&cantor,h.ameliorationofarthritisthroughmobilizationofpeptide-specificcd8+regulatorytcells.j.clin.invest.123,1382-1389(2013).