本文中提供的是在有和/或无MEK抑制剂的情况下组合使用B-RAF和免疫检查点抑制剂治疗癌症的疗法，包括剂量方案。
发明背景
在2014年，美国会诊断估计76,100例新增黑素瘤病例，而且大约9,710名患者会死于该疾病(American Cancer Society 2013)。在2008年，全球的年龄标准化的黑素瘤发病率和死亡率分别是男性每100,000中9.5和1.8和女性每100,000中8.6和1.1。黑素瘤的发病率在澳洲(每100,000中42.4)和西欧(每100,000中10.6)在高加索人群中特别高。此外，黑素瘤的发病率持续升高；它在男性中比任何其它恶性升高更加迅速且在女性中比除肺癌以外的任何其它恶性更加迅速。在2005年发生黑素瘤的终生风险是大约55中一个，诊断时的中值年龄是59岁。就每例死亡的潜在寿命的年数损失而言，黑素瘤排位次于成人白血病。转移性黑素瘤占据所有新诊断黑素瘤病例的大约4％。然而，这个患者组的存活仍然极差，5年相对存活率为15.3％。
直到最近，转移性黑素瘤只有有限数目的疗法可用。认为达卡巴嗪(Dacarbazine)是标准一线疗法，响应率为5％-12％，中值无进展存活(PFS)小于2个月，且中值总体存活(OS)为6.4至9.1个月。组合化疗和化疗与干扰素(IFN)-阿尔法(IFN-α)或白介素-2(IL-2)组合在显示改善的响应率的同时并未导致改善的OS。更近地，已经调查了具有在转移性黑素瘤患者中改善结局的潜力的更新药剂。阻断细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)的人源化免疫球蛋白(Ig)G1单克隆抗体伊匹单抗(Ipilimumab)在2011年得到美国食品药品管理局(FDA)批准用于治疗不可切除的或转移性黑素瘤，这基于两项III期研究，即在先前未治疗的晚期黑素瘤患者中其与糖蛋白100(gp100)肽疫苗接种相比及其与达卡巴嗪组合与达卡巴嗪加安慰剂相比显示OS改善。在这些研究中，总体响应率(10.9％)和中值PFS(2.8个月)在历史上对达卡巴嗪观察到的范围内。然而，伊匹单抗加达卡巴嗪的3年存活率是20.8％，指示一个子集的患者经历持久临床。
在大约50％的皮肤黑素瘤中流行的V600突变型BRAF的特异性抑制剂维罗非尼(Vemurafenib)在2011年得到FDA批准用于治疗BRAFV600突变阳性，不可手术的，或转移性黑素瘤。在具有先前未治疗的具有BRAFV600E突变的转移性黑素瘤的患者中，与达卡巴嗪相比，维罗非尼展现死亡风险降低63％和PFS改善74％。维罗非尼的响应率是48％而达卡巴嗪是5％。更新后的OS和PFS结果继续展现维罗非尼治疗的临床好处。在中值随访为12.5个月的情况中，维罗非尼治疗与中值OS改善接近4个月(13.6对9.7个月)相关。这项分析中死亡的危害比是0.70(95％CI：0.57，0.87)，有利于维罗非尼。
尽管PFS和OS延长，在几乎所有用BRAF抑制剂治疗的患者中发生疾病复发。MEK抑制剂已经成为BRAF突变型黑素瘤治疗的额外治疗选项。MEK是BRAF/MEK/ERK信号传导途径的下游成分，认为它响应BRAF抑制而上调。另外的数据显示组合BRAF和MEK抑制能提供与BRAF抑制剂单一疗法相比更大的临床好处以及潜在降低BRAF抑制相关副作用。考比替尼(Cobimetinib)(GDC-0973，RO5514041，XL518)是一种MEK抑制剂，处于积极的临床调查且最近得到FDA批准。
最近，癌症免疫疗法在转移性黑素瘤中取得治疗进展。编程性死亡-1(PD-1)受体阻断性抗体纳武单抗(Nivolumab)和派姆单抗(Pembrolizumab)均在美国收到加快批准用于治疗具有不可切除的或转移性黑素瘤和伊匹单抗和(若BRAFV600突变阳性)BRAF抑制剂后的疾病进展的患者，视在确认性试验中验证临床好处而定(参见[派姆单抗]和[纳武单抗]美国包装插页)。阿特珠单抗(Atezolizumab)(也称作MPDL3280A)是一种人源化IgG1单克隆抗体，其靶向人编程性死亡配体1(PD-L1)且抑制它与其受体PD-1的相互作用。阿特珠单抗还阻断PD-L1对B7-1的结合，该相互作用据报告对T细胞提供另外的抑制性信号。
新疗法的目标中有组合在B-RAFV600突变体患者中用B-RAF和MEK抑制剂观察到的高响应率与免疫调控可能引发的延长的响应持续时间的挑战。通过维罗非尼和达拉非尼(Dabrafenib)抑制BRAFV600表现出对其它激酶具有相对较小影响，而且体外/体内建模提示BRAF抑制改善T淋巴细胞识别黑素瘤抗原且提高在黑素瘤肿瘤中观察到的CD4+和CD8+肿瘤浸润性淋巴细胞的数目。与BRAFV600E抑制形成对比，MEK抑制可能对T细胞具有负面影响。参见Luke,Journal American Journal of Hematology/Oncology 11(2):34-38(February 2015)。而且，PD-L1表达是针对BRAF抑制剂的抗性的机制，因为BRAF抗性细胞系表达高PD-L1，而且添加MEK抑制剂对PD-L1表达具有遏制效果。参见Kim et al.,Cancer Biol.Med 11(4):237-246(2014)。正在进行新疗法的继续开发，以及对会对患者提供最大治疗好处的最佳治疗方案(顺序组合)的追求。如此，临床试验仍然是晚期黑素瘤的初始治疗的一个有效选项。
发明概述
本文中提供的是在有或无MEK抑制剂的情况下包含B-RAF抑制剂和免疫检查点抑制剂的组合。本文中提供的是在个体中治疗癌症的方法，该方法包括第一对该个体施用有效量的B-RAF抑制剂和第二对该个体施用有效量的该B-RAF抑制剂和有效量的免疫检查点抑制剂。
本文中还提供的是提高癌症治疗的功效的方法，该方法包括第一对该个体施用有效量的B-RAF抑制剂和第二对该个体施用有效量的该B-RAF抑制剂和有效量的免疫检查点抑制剂。
本文中还提供的是在个体中治疗癌症的方法，其中癌症治疗包括第一对该个体施用有效量的B-RAF抑制剂和第二对该个体施用有效量的该B-RAF抑制剂和有效量的免疫检查点抑制剂，其中该癌症治疗具有与单独对该个体施用有效量的该B-RAF抑制剂和有效量的该免疫检查点抑制剂相比提高的功效。
在任何方法的一些实施方案中，该B-RAF抑制剂是丙烷-1-磺酸{3-[5-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羰基]-2,4-二氟-苯基}-酰胺或其药学可接受盐。在一些实施方案中，该B-RAF是派姆单抗，恩考非尼(Encorafenib)，或维罗非尼。在一些实施方案中，该B-RAF抑制剂是维罗非尼。在任何方法的一些实施方案中，该B-RAF抑制剂的第一施用和第二施用是以约960mg每天两次，约720mg每天两次，和/或约480mg每天两次的剂量。在任何方法的一些实施方案中，该B-RAF抑制剂的第一施用是以比该B-RAF抑制剂的第二施用要大的剂量。在任何方法的一些实施方案中，该B-RAF抑制剂的第一施用包含该B-RAF抑制剂的第一剂量和第二剂量且该第一剂量比该第二剂量要大。在任何方法的一些实施方案中，该B-RAF抑制剂的第一施用是约28天或约56天。在任何方法的一些实施方案中，该B-RAF抑制剂的第一施用包含该B-RAF抑制剂的第一剂量和第二剂量，该第一剂量比该第二剂量要大，且该第一剂量施用21天且该第二剂量施用7天。在任何方法的一些实施方案中，该B-RAF抑制剂口服施用。
在任何方法的一些实施方案中，该免疫检查点抑制剂是PD-1轴结合拮抗剂。在一些实施方案中，该PD-1轴结合拮抗剂是抗PD-L1抗体。在一些实施方案中，该抗PD-L1抗体是阿特珠单抗。在一些实施方案中，阿特珠单抗以约15mg/kg q3w，约20mg/kg q3w，约800mg q2w，或约1200mg q3w的剂量施用。在一些实施方案中，该免疫检查点抑制剂静脉内施用。
在任何方法的一些实施方案中，第一施用和第二施用进一步包含有效量的MEK抑制剂。在一些实施方案中，该MEK抑制剂是曲美替尼(Trametinib)，比尼替尼(Binimetinib)，或考比替尼(Cobimetinib)。在一些实施方案中，该MEK抑制剂是(S)-[3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)苯基][3-羟基-3-(哌啶-2-基)氮杂环丁烷-1-基]甲烷或其药学可接受盐。在一些实施方案中，该MEK抑制剂是(S)-[3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)苯基][3-羟基-3-(哌啶-2-基)氮杂环丁烷-1-基]甲烷，半富马酸。在一些实施方案中，该MEK抑制剂是考比替尼。在任何方法的一些实施方案中，该MEK抑制剂的第一施用和第二施用是以21天服药/7天停药日程表上的约60mg每天或21天服药/7天停药日程表上的约40mg每天的剂量。在任何方法的一些实施方案中，该MEK抑制剂的第一施用是约28天日程表。在任何方法的一些实施方案中，该MEK抑制剂口服施用。
在任何方法的一些实施方案中，该癌症是黑素瘤。在任何方法的一些实施方案中，该黑素瘤是不可切除的或转移性黑素瘤。在任何方法的一些实施方案中，该黑素瘤是B-RAF V600突变体黑素瘤。在任何方法的一些实施方案中，该B-RAF V600E突变体黑素瘤或B-RAF V600K突变体黑素瘤。
本文中进一步提供的是在个体中治疗黑素瘤的方法，该方法包括第一以28天日程表对该个体施用维罗非尼，其中维罗非尼以28天日程表上960mg一天两次施用21天，然后720mg一天两次施用7天的剂量施用和第二对该个体施用维罗非尼和阿特珠单抗，其中维罗非尼以720mg一天两次的剂量施用且阿特珠单抗以1200mg q3w的剂量施用。在一些实施方案中，维罗非尼作为片剂口服施用。在一些实施方案中，阿特珠单抗静脉内施用。在一些实施方案中，该癌症是黑素瘤。在一些实施方案中，该黑素瘤是不可切除的或转移性黑素瘤。在一些实施方案中，该黑素瘤是B-RAF V600突变体黑素瘤。在一些实施方案中，该B-RAF V600E突变体黑素瘤或B-RAF V600K突变体黑素瘤。
本文中还提供的是在个体中治疗黑素瘤的方法，该方法包括第一以28天日程表对该个体施用维罗非尼和考比替尼，其中维罗非尼以28天日程表上960mg一天两次施用21天，然后720mg一天两次施用7天的剂量施用且考比替尼以28天日程表上60mg每天21天服药和7天停药的剂量施用和第二对该个体施用维罗非尼，考比替尼，和阿特珠单抗，其中维罗非尼以720mg一天两次的剂量施用，考比替尼以60mg每天21天服药和7天停药的剂量施用，且阿特珠单抗以800mg q2w的剂量施用。在一些实施方案中，维罗非尼作为片剂口服施用。在一些实施方案中，考比替尼作为片剂口服施用。在一些实施方案中，阿特珠单抗静脉内施用。在一些实施方案中，该癌症是黑素瘤。在一些实施方案中，该黑素瘤是不可切除的或转移性黑素瘤。在一些实施方案中，该黑素瘤是B-RAF V600突变体黑素瘤。在一些实施方案中，该B-RAF V600突变体黑素瘤是B-RAF V600E突变体黑素瘤或B-RAF V600K突变体黑素瘤。
发明详述
I.定义
术语“RAF”和“RAF激酶”指三种RAF激酶的一个家族，它们是丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白质激酶。RAF激酶是A-Raf，BRAF和CRAF。RAF激酶涉及逆转录病毒的癌基因。RAF是Rapidly Accelerated Fibrosarcoma(迅速加速纤维肉瘤)的首字母缩写。
除非另有说明，如本文中使用的，术语“B-RAF”指任何天然或变异(无论天然的或是合成的)B-RAF多肽。术语“野生型B-RAF”一般指包含天然发生B-RAF蛋白质的氨基酸序列的多肽。参见例如Uni.Prot No.P15056，11.16.15访问。术语“V600突变体B-RAF”或“V600突变体B-RAF”一般指包含氨基酸V600处的错义突变的b-Raf多肽，例如B-RAF V600E或B-RAF V600K。
感兴趣多肽的“拮抗剂”(可互换称作“抑制剂”)是干扰感兴趣多肽的活化或功能，例如部分或完全阻断，抑制，或中和由感兴趣多肽介导的生物学活性的分子。例如，多肽X的拮抗剂可以指部分或完全阻断，抑制，或中和由多肽X介导的生物学活性的任何分子。优选地，抑制剂是结合感兴趣多肽的小分子。在一个特定实施方案中，抑制剂具有约1,000nM或更少的对感兴趣多肽的结合亲和力(解离常数)。在另一个实施方案中，抑制剂具有约100nM或更少的对感兴趣多肽的结合亲和力。在另一个实施方案中，抑制剂具有约50nM或更少的对感兴趣多肽的结合亲和力。在一个特定实施方案中，抑制剂以1,000nM或更少的IC50抑制感兴趣多肽的信号传导。在另一个实施方案中，抑制剂以500nM或更少的IC50抑制感兴趣多肽的信号传导。在另一个实施方案中，抑制剂以50nM或更少的IC50抑制感兴趣多肽的信号传导。在某些实施方案中，拮抗剂将感兴趣多肽的表达水平或生物学活性降低或抑制至少约10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％或更多任一。
术语“PD-1轴结合拮抗剂”是指如下的分子，其抑制PD-1轴结合配偶与一种或多种它的结合配偶相互作用，从而去除源自PD-1信号传导轴上的信号传导的T细胞功能障碍–一项结果是恢复或增强T细胞功能(例如增殖，细胞因子生成，和/或靶细胞杀伤)。如本文中使用的，PD-1轴结合拮抗剂包括PD-1结合拮抗剂，PD-L1结合拮抗剂和PD-L2结合拮抗剂。
术语“PD-1结合拮抗剂”指如下的分子，其降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-1与一种或多种它的结合配偶(诸如PD-L1和/或PD-L2)相互作用的信号转导。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是抑制PD-1结合一种或多种它的结合配偶的分子。在一个特定方面，PD-1结合拮抗剂抑制PD-1结合PD-L1和/或PD-L2。例如，PD-1结合拮抗剂包括降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-1与PD-L1和/或PD-L2相互作用的信号转导的抗PD-1抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。在一个实施方案中，PD-1结合拮抗剂降低由或经由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白质介导的负面共刺激信号(经由PD-1介导信号传导)，从而使得功能障碍性T细胞不太功能障碍性(例如增强对抗原识别的效应器应答)。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是抗PD-1抗体。在一个具体实施方案中，PD-1结合拮抗剂是本文所述MDX-1106(纳武单抗)。在另一个具体实施方案中，PD-1结合拮抗剂是本文所述MK-3475(派姆单抗)。在另一个具体实施方案中，PD-1结合拮抗剂是本文所述CT-011(pidilizumab)。在另一个具体方面，PD-1结合拮抗剂是本文所述MEDI-0680(AMP-514)。在另一个具体方面，PD-1结合拮抗剂是本文所述PDR001。在另一个具体方面，PD-1结合拮抗剂是本文所述REGN2810。在另一个具体方面，PD-1结合拮抗剂是本文所述BGB-108。
术语“PD-L1结合拮抗剂”指如下的分子，其降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-L1与一种或多种它的结合配偶(诸如PD-1和/或B7-1)相互作用的信号转导。在一些实施方案中，PD-L1结合拮抗剂是抑制PD-L1结合它的结合配偶的分子。在一个特定方面，PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1结合PD-1和/或B7-1。在一些实施方案中，PD-L1结合拮抗剂包括降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-L1与一种或多种它的结合配偶(诸如PD-1和/或B7-1)相互作用的信号转导的抗PD-L1抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。在一个实施方案中，PD-L1结合拮抗剂降低由或经由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白质介导的负面共刺激信号(经由PD-L1介导信号传导)，从而使得功能障碍性T细胞不太功能障碍性(例如增强对抗原识别的效应器应答)。在一些实施方案中，PD-L1结合拮抗剂是抗PD-L1抗体。在一个具体方面，抗PD-L1抗体是本文所述MPDL3280A(阿特珠单抗)。在另一个具体方面，抗PD-L1抗体是本文所述MDX-1105。在仍有另一个具体方面，抗PD-L1抗体是本文所述YW243.55.S70。在仍有另一个具体方面，抗PD-L1抗体是本文所述MEDI4736(durvalumab)。在仍有另一个具体方面，抗PD-L1抗体是本文所述MSB0010718C(avelumab)。
术语“PD-L2结合拮抗剂”指如下的分子，其降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-L2与一种或多种它的结合配偶(诸如PD-1)相互作用的信号转导。在一些实施方案中，PD-L2结合拮抗剂是抑制PD-L2结合一种或多种它的结合配偶的分子。在一个特定方面，PD-L2结合拮抗剂抑制PD-L2结合PD-1。在一些实施方案中，PD-L2拮抗剂包括降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-L2与一种或多种它的结合配偶(诸如PD-1)相互作用的信号转导的抗PD-L2抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。在一个实施方案中，PD-L2结合拮抗剂降低由或经由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白质介导的负面共刺激信号(经由PD-L2介导信号传导)，从而使得功能障碍性T细胞不太功能障碍性(例如增强对抗原识别的效应器应答)。在一些实施方案中，PD-L2结合拮抗剂是免疫粘附素。
术语“小分子”指具有约2000道尔顿或更小，优选约500道尔顿或更小的分子量的任何分子。
“个体响应”或“响应”可使用指示对个体益处的任何终点评估，包括但不限于：(1)一定程度地抑制疾病进展(例如癌症进展)，包括减缓和完全阻滞；(2)缩小肿瘤尺寸；(3)抑制(即减轻，减缓或完全终止)癌细胞浸润入临近周围器官和/或组织；(4)抑制(即减轻，减缓或完全终止)转移；(5)一定程度地减轻与疾病或病症(例如癌症)有关的一种或多种症状；(6)无进展存活的长度延长；和/或(8)治疗后给定时间点的死亡率降低。
物质/分子(例如药物组合物)的“有效量”指在必需的剂量和时间段上有效实现期望的治疗或预防结果的量。
物质/分子的“治疗有效量”可根据诸如个体的疾病状态，年龄，性别和重量及该物质/分子在个体中引发期望应答的能力等因素而变化。治疗有效量还指物质/分子的治疗有益效果胜过任何有毒或有害效果的量。“预防有效量”指在必需的剂量和时间段上有效实现期望的预防结果的量。通常而非必然，由于预防剂量是在疾病之前或在疾病的早期用于受试者的，因此预防有效量将低于治疗有效量。
术语“药物配制剂”指其形式容许其中含有的活性成分的生物学活性是有效的，且不含对会施用该配制剂的受试者产生不可接受的毒性的别的成分的制剂。
“药学可接受载体”指药物配制剂中除了活性成分外对受试者无毒的成分。药学可接受载体包括但不限于缓冲剂，赋形剂，稳定剂，或防腐剂。
如本文中使用的，“药学可接受盐”指化合物的药学可接受有机或无机盐。
如本文中使用的，“治疗/处理”(及其语法变型)指试图改变所治疗个体的自然进程的临床干预，可以是为了预防或在临床病理学的进程中进行。治疗的期望效果包括但不限于预防疾病的发生或复发，缓解症状，削弱疾病的任何直接或间接病理学后果，预防转移，减缓疾病进展的速率，改善或减轻疾病状态，及免除或改善预后。在一些实施方案中，使用本发明的抗体来延迟疾病的形成或减缓疾病的进展。
“个体”或“受试者”指哺乳动物。哺乳动物包括但不限于驯养动物(例如牛，绵羊，猫，犬，和马)，灵长类(例如人和非人灵长类诸如猴)，兔，和啮齿类(例如小鼠和大鼠)。在某些实施方案中，个体或受试者是人。
术语“伴随”在本文中用于指施用两种或更多种治疗剂，给药的时间足够接近，其中各种治疗剂的效果在时间上交叠。在一些实施方案中，伴随施用是并行地，序贯地，和/或同时地。在一些实施方案中，并行施用包括在中止施用一种或多种药剂后继续施用一种或多种其它药剂的给药方案。
“降低或抑制”指引起20％，30％，40％，50％，60％，70％，75％，80％，85％，90％，95％，或更大的总体降低的能力。降低或抑制可以指所治疗的病症的症状，转移的存在或大小，或原发性肿瘤的大小。
术语“包装插页”用于指通常包括在治疗用产品的商业包装中的说明书，它们包含有关涉及此类治疗用产品应用的适应征，用法，剂量，施用，组合疗法，禁忌症和/或警告的信息。
“制品”是包含至少一种试剂，例如用于治疗疾病或病症(例如癌症)的药物或用于特异性检测本文所述生物标志物的探针的任何制造物(例如包装或容器)或试剂盒。在某些实施方案中，制造物或试剂盒以用于实施本文所述方法的单位推销，分销或销售。
如本领域技术人员理解的，本文中提述“约”某值或参数包括(且描述)针对该值或参数本身的实施方案。例如，提述“约X”的描述包括对“X”的描述。
应当理解，本文中描述的本发明的方面和实施方案包括由和/或基本上由各方面和实施方案“组成”。如本文中使用的，单数形式“一个”，“一种”和“所述/该”包括复数提及物，除非另外指示。
II.方法和用途
本文中提供的是利用B-RAF抑制剂(例如维罗非尼)和癌症免疫检查点抑制剂(例如抗PD1/抗PD-L1抗体)治疗癌症的方法。另外，本文中提供的是利用B-RAF抑制剂(例如维罗非尼)，MEK抑制剂(例如考比替尼)和免疫检查点抑制剂(例如PD1轴抑制剂)治疗癌症的方法。
本文中提供的是在个体中治疗癌症的方法，其包括第一对该个体施用有效量的B-RAF抑制剂和第二对该个体施用有效量的该B-RAF抑制剂和有效量的免疫检查点抑制剂(例如PD1轴抑制剂)。例如，本文中提供的是在个体中治疗癌症的方法，其包括第一对该个体施用有效量的维罗非尼和第二对该个体施用有效量的维罗非尼和有效量的抗PD1/抗PD-L1抗体(例如阿特珠单抗)。
本文中还提供的是在个体中治疗癌症的方法，其包括第一对该个体施用有效量的B-RAF抑制剂和有效量的MEK抑制剂，和第二对该个体施用有效量的该B-RAF抑制剂，有效量的该MEK抑制剂，和有效量的免疫检查点抑制剂(例如PD1轴抑制剂)。例如，本文中提供的是在个体中治疗癌症的方法，其包括第一对该个体施用有效量的维罗非尼和有效量的考比替尼和第二对该个体施用有效量的维罗非尼，有效量的考比替尼，和有效量的抗PD1/抗PD-L1抗体(例如阿特珠单抗)。
本文中提供的是提高癌症治疗的功效的方法，其包括第一对该个体施用有效量的B-RAF抑制剂和第二对该个体施用有效量的该B-RAF抑制剂和有效量的免疫检查点抑制剂(例如PD1轴抑制剂)。例如，本文中提供的是提高癌症治疗的功效的方法，其包括第一对该个体施用有效量的维罗非尼和第二对该个体施用有效量的维罗非尼和有效量的抗PD1/抗PD-L1抗体(例如阿特珠单抗)。在一些实施方案中，该方法提高免疫肿瘤CD8+T细胞浸润。在一些实施方案中，该方法提高PD-L1表达，例如如通过IHC测定的。
本文中进一步提供的是提高癌症治疗的功效的方法，其包括第一对该个体施用有效量的B-RAF抑制剂和有效量的MEK抑制剂，和第二对该个体施用有效量的该B-RAF抑制剂，有效量的该MEK抑制剂，和有效量的免疫检查点抑制剂(例如PD1轴抑制剂)。例如，本文中提供的是提高癌症治疗的功效的方法，其包括第一对该个体施用有效量的维罗非尼和有效量的考比替尼和第二对该个体施用有效量的维罗非尼，有效量的考比替尼，和有效量的抗PD1/抗PD-L1抗体(例如阿特珠单抗)。
本文中还提供的是在个体中治疗癌症的方法，其中癌症治疗包括第一对该个体施用有效量的B-RAF抑制剂和第二对该个体施用有效量的该B-RAF抑制剂和有效量的免疫检查点抑制剂(例如PD1轴抑制剂)，其中该癌症治疗具有与单独(独自并行施用)对该个体施用有效量的该B-RAF抑制剂和有效量的免疫检查点抑制剂(例如PD1轴抑制剂)相比提高的功效。例如，本文中提供的是在个体中治疗癌症的方法，其中癌症治疗包括第一对该个体施用有效量的维罗非尼和第二对该个体施用有效量的维罗非尼和有效量的抗PD1/抗PD-L1抗体(例如阿特珠单抗)，其中该癌症治疗具有与单独(独自并行施用)对该个体施用有效量的维罗非尼和有效量的该抗PD1/抗PD-L1抗体(例如阿特珠单抗)相比提高的功效。
本文中提供的是在个体中治疗癌症的方法，其中癌症治疗包括第一对该个体施用有效量的B-RAF抑制剂和有效量的MEK抑制剂，和第二对该个体施用有效量的该B-RAF抑制剂，有效量的该MEK抑制剂，和有效量的免疫检查点抑制剂(例如PD1轴抑制剂)，其中该癌症治疗具有与单独(独自并行施用)对该个体施用有效量的该B-RAF抑制剂，有效量的该MEK抑制剂，和有效量的免疫检查点抑制剂(例如PD1轴抑制剂)相比提高的功效。例如，本文中提供的是在个体中治疗癌症的方法，其中癌症治疗包括第一对该个体施用有效量的维罗非尼和有效量的考比替尼和第二对该个体施用有效量的维罗非尼，有效量的考比替尼和有效量的抗PD1/抗PD-L1抗体(例如阿特珠单抗)，其中该癌症治疗具有与单独(独自并行施用)对该个体施用有效量的维罗非尼，有效量的考比替尼，和有效量的该抗PD1/抗PD-L1抗体(例如阿特珠单抗)相比提高的功效。
在任何方法的一些实施方案中，第一施用是约7，14，21，28，35，42，49，或56天任一。在一些实施方案中，第一施用介于约21和35天之间。在一些实施方案中，第一施用是约28天。在一些实施方案中，第一施用是约56天。例如，在个体中治疗癌症的方法包括第一对该个体施用有效量的维罗非尼达28天和第二对该个体施用有效量的维罗非尼和有效量的抗PD1/抗PD-L1抗体(例如阿特珠单抗)。还有，例如，在个体中治疗癌症的方法包括第一对该个体施用有效量的维罗非尼和有效量的考比替尼达28天和第二对该个体施用有效量的维罗非尼，有效量的考比替尼，和有效量的抗PD1/抗PD-L1抗体(例如阿特珠单抗)。
在任何所述方法的一些实施方案中，依照任何上述实施方案的个体可以是人。
在任何方法的一些实施方案中，第一施用包含施用单一剂量的该B-RAF抑制剂和/或该MEK抑制剂。在任何方法的一些实施方案中，第一施用包含施用超过一个剂量的该B-RAF抑制剂和/或该MEK抑制剂。在一些实施方案中，第一施用包含施用第一剂量达约7，14，21，28，35，42，或49天任一，接着是第二剂量达约7，14，21，28，35，42，或49天任一。在一些实施方案中，第一施用包含施用第一剂量达约49天，接着是第二剂量达约7天任一。在一些实施方案中，第一施用包含施用第一剂量达约21天，接着是第二剂量达约7天任一。在任何方法的一些实施方案中，第一施用包含第一剂量的该B-RAF抑制剂和/或该MEK抑制剂，其比第二剂量要大。例如，在个体中治疗癌症的方法包括第一对该个体施用有效量的维罗非尼，其中维罗非尼以第一剂量施用达21天，接着是第二剂量达7天，和第二对该个体施用有效量的维罗非尼和有效量的抗PD1/抗PD-L1抗体(例如阿特珠单抗)。还有，例如，在个体中治疗癌症的方法包括第一对该个体施用有效量的维罗非尼和有效量的考比替尼，其中维罗非尼以第一剂量施用达21天，接着是第二剂量达7天，和第二对该个体施用有效量的维罗非尼，有效量的考比替尼，和有效量的抗PD1/抗PD-L1抗体(例如阿特珠单抗)。
在任何方法的一些实施方案中，上文记载的组合疗法涵盖组合施用(其中两种或更多种治疗剂包含在相同或分别的配制剂中)，和分开施用(在该情况中本发明的拮抗剂可以在别的治疗剂和/或佐剂施用之前，同时，序贯，并行和/或之后施用)。在一些实施方案中，组合疗法进一步包含放射疗法和/或别的治疗剂。
可以通过任何合适的手段，包括口服，胃肠外，肺内，和鼻内，及若期望用于局部治疗的话，损伤内施用来施用本文中描述的B-RAF抑制剂，MEK抑制剂和/或免疫检查点抑制剂。胃肠外输注包括肌肉内，静脉内，动脉内，腹膜内，或皮下施用。部分根据施用是短暂的还是长期的，给药可以通过任何合适的路径，例如通过注射，诸如静脉内或皮下注射进行。本文中涵盖各种给药日程表，包括但不限于单次施用或在多个时间点里的多次施用，推注施用，和脉冲输注。
在任何方法的一些实施方案中，有效量的该B-RAF，有效量的该MEK抑制剂，和/或有效量的该免疫检查点抑制剂的施用可以经由不同路径的施用和/或不同时间的施用发生。例如，该B-RAF抑制剂可以口服施用，例如口服一天两次。该MEK抑制剂可以口服施用，例如口服一天一次。在一些实施方案中，当第一施用包括B-RAF抑制剂和MEK抑制剂时，该B-RAF抑制剂和该MEK抑制剂伴随起作用。在一些实施方案中，当第二施用包括B-RAF抑制剂和免疫检查点抑制剂时，该B-RAF抑制剂和该免疫检查点抑制剂伴随起作用。在一些实施方案中，当第二施用包括B-RAF抑制剂，MEK抑制剂，和免疫检查点抑制剂时，该B-RAF抑制剂，该MEK抑制剂，和该免疫检查点抑制剂伴随起作用。在一些实施方案中，第一和第二施用伴随起作用。在一些实施方案中，第一施用和第二施用是顺序的。
本文中描述的B-RAF抑制剂，MEK抑制剂和/或免疫检查点抑制剂可以一种符合良好的医学实践的方式配制，确定剂量及施用。在此背景中考虑的因素包括在治疗的特定病症，在治疗的特定哺乳动物，个体患者的临床状态，病症原因，药剂递送部位，施用方法，施用日程以及其它为从业医生所知的因素。B-RAF抑制剂，MEK抑制剂和/或免疫检查点抑制剂无需但可任选地与一种或多种目前用于预防或治疗所述病症的药剂一起配制。这类其它药剂的有效量取决于配方中所存在的B-RAF抑制剂，MEK抑制剂和/或免疫检查点抑制剂的量，病症或治疗的类型，以及其它上述讨论的因素。这些药剂通常以相同的剂量使用并具有本文中所描述的施用途径，或以约1-99％的本文所描述的剂量使用，或以任何剂量并通过任何途径使用，所述剂量和途径是凭经验确定的/经临床测定合适的。
为了预防或治疗疾病，本文中描述的B-RAF抑制剂，MEK抑制剂和/或免疫检查点抑制剂(当单独或与一种或多种其它别的治疗剂联合使用时)的合适剂量应取决于所要治疗的疾病的类型，疾病的严重性和病程，施用B-RAF抑制剂，MEK抑制剂和/或免疫检查点抑制剂是出于预防还是治疗目的，之前的治疗，患者的临床史和对B-RAF抑制剂，MEK抑制剂和/或免疫检查点抑制剂的响应，以及主治医师的斟酌决定。B-RAF抑制剂，MEK抑制剂和/或免疫检查点抑制剂恰当地在一次或一系列的治疗中施用于患者。对于在数天或更长时间内的重复施用，根据状况，治疗一般将持续直至发生期望的对疾病症状的抑制。
在一些实施方案中，该B-RAF抑制剂(例如维罗非尼)每天或一天两次施用。在一些实施方案中，该B-RAF抑制剂(例如维罗非尼)以约960mg，720mg，480mg，或240mg任一的剂量一天两次施用。在一些实施方案中，第一施用包含以960mg一天两次的第一剂量，接着是720mg一天两次的第二剂量施用该B-RAF抑制剂(例如维罗非尼)。在一些实施方案中，第一施用包含以720mg一天两次的第一剂量，接着是480mg一天两次的第二剂量施用该B-RAF抑制剂(例如维罗非尼)。在一些实施方案中，第二施用包含以960mg一天两次的剂量施用该B-RAF抑制剂(例如维罗非尼)。在一些实施方案中，第二施用包含以720mg一天两次的剂量施用该B-RAF抑制剂(例如维罗非尼)。例如，在一些实施方案中，在个体中治疗癌症的方法包括第一对该个体施用B-RAF抑制剂(例如维罗非尼)达28天，其中B-RAF抑制剂(例如维罗非尼)以960mg一天两次施用达21天和以720mg一天两次施用达7天和第二对该个体施用720mg一天两次剂量的B-RAF抑制剂(例如维罗非尼)和有效量的抗PD1/抗PD-L1抗体(例如阿特珠单抗)。
在一些实施方案中，该MEK抑制剂(例如考比替尼)每天或一天两次施用。在一些实施方案中，该MEK抑制剂(例如考比替尼)以约60mg或20mg任一的剂量每天施用。在一些实施方案中，第一施用包含以60mg每天的第一剂量施用该MEK抑制剂(例如考比替尼)，21天服药和7天停药(21/7)。在一些实施方案中，第一施用包含以40mg每天的第一剂量施用该MEK抑制剂(例如考比替尼)，21天服药和7天停药(21/7)。在一些实施方案中，第二施用包含以60mg每天剂量施用该MEK抑制剂(例如考比替尼)，21天服药和7天停药(21/7)。在一些实施方案中，第二施用包含以40mg每天的剂量施用该MEK抑制剂(例如考比替尼)，21天服药和7天停药(21/7)。例如，在一些实施方案中，在个体中治疗癌症的方法包括第一对该个体施用B-RAF抑制剂(例如维罗非尼)和MEK抑制剂(例如考比替尼)达28天，其中B-RAF抑制剂(例如维罗非尼)以960mg一天两次施用21天和以720mg一天两次施用7天且MEK抑制剂(例如考比替尼)以60mg每天的剂量施用，21天服药和7天停药和第二对该个体施用720mg一天两次剂量的B-RAF抑制剂(例如维罗非尼)，60mg每天剂量的MEK抑制剂(例如考比替尼)，21天服药和7天停药和有效量的抗PD1/抗PD-L1抗体(例如阿特珠单抗)。
在一些实施方案中，该抗PD1/抗PD-L1抗体(例如阿特珠单抗)每3周(q3w)或每2周(q2w)施用。在一些实施方案中，该抗PD1/抗PD-L1抗体(例如阿特珠单抗)以约15mg/kg q3w，约20mg/kg q3w，约800mg q2w，或约1200mg q3w的剂量每天施用。在一些实施方案中，第二施用包含以800mg q2w的剂量施用该抗PD1/抗PD-L1抗体(例如阿特珠单抗)。在一些实施方案中，第二施用包含以1200mg q3w的剂量施用该抗PD1/抗PD-L1抗体(例如阿特珠单抗)。例如，在一些实施方案中，在个体中治疗癌症的方法包括第一对该个体施用B-RAF抑制剂(例如维罗非尼)达28天，其中B-RAF抑制剂(例如维罗非尼)以960mg一天两次施用21天和以720mg一天两次施用7天和第二对该个体施用720mg一天两次剂量的B-RAF抑制剂(例如维罗非尼)和1200mg q3w剂量的抗PD1/抗PD-L1抗体(例如阿特珠单抗)。例如，在一些实施方案中，在个体中治疗癌症的方法包括第一对该个体施用B-RAF抑制剂(例如维罗非尼)和MEK抑制剂(例如考比替尼)达28天，其中B-RAF抑制剂(例如维罗非尼)以960mg一天两次施用21天和以720mg一天两次施用7天且MEK抑制剂(例如考比替尼)以60mg每天的剂量施用，21天服药和7天停药和第二对该个体施用720mg一天两次剂量的B-RAF抑制剂(例如维罗非尼)，60mg每天剂量的MEK抑制剂(例如考比替尼)，21天服药和7天停药和800mg q2w剂量的抗PD1/抗PD-L1抗体(例如阿特珠单抗)。
在任何方法的一些实施方案中，该癌症是黑素瘤。在一些实施方案中，该黑素瘤是不可切除的或转移性黑素瘤。在一些实施方案中，该黑素瘤是B-RAF V600突变体黑素瘤。在一些实施方案中，该B-RAF V600突变体黑素瘤是B-RAF V600E突变体黑素瘤。在一些实施方案中，该B-RAF V600突变体黑素瘤是B-RAF V600K突变体黑素瘤。
III.治疗组合物
本文中提供的是包含B-RAF抑制剂，MEK抑制剂，或免疫检查点抑制剂的组合。在某些实施方案中，该组合与包括单独施用B-RAF抑制剂，MEK抑制剂，或免疫检查点抑制剂或共施用(并行施用)B-RAF抑制剂，MEK抑制剂，或免疫检查点抑制剂的治疗相比提高功效。在某些实施方案中，如本文中描述的包含B-RAF抑制剂，MEK抑制剂，或免疫检查点抑制剂的组合与包括单独施用B-RAF抑制剂，MEK抑制剂，或免疫检查点抑制剂或共施用(并行施用)B-RAF抑制剂，MEK抑制剂，或免疫检查点抑制剂的治疗相比提高T细胞浸润和/或PD-L1表达水平。
在任何方法的一些实施方案中，本文中描述的方法可以使用B-RAF抑制剂。例示性BRAF抑制剂是本领域已知的且包括例如sorafenib，PLX4720，PLX-3603，派姆单抗(GSK2118436)，恩考非尼(LGX818)，GDC-0879，RAF265(Novartis)，XL281，ARQ736，BAY73-4506，维罗非尼及WO2007/002325，WO2007/002433，WO2009111278，WO2009111279，WO2009111277，WO2009111280和美国专利No.7,491,829中记载的那些。在一些实施方案中，该BRAF抑制剂是选择性BRAF抑制剂。在一些实施方案中，该BRAF抑制剂是BRAF V600的选择性抑制剂。在一些实施方案中，BRAF V600是BRAF V600E，BRAF V600K，和/或V600D。在一些实施方案中，BRAF V600是BRAF V600R。在一些实施方案中，该BRAF抑制剂是维罗非尼。在一些实施方案中，该BRAF抑制剂是维罗非尼。在一些实施方案中，B-RAF抑制剂是丙烷-1-磺酸{3-[5-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羰基]-2,4-二氟-苯基}-酰胺或其药学可接受盐。在一些实施方案中，该B-RAF抑制剂是维罗非尼。在一些实施方案中，该B-RAF抑制剂是派姆单抗。在一些实施方案中，该B-RAF抑制剂是恩考非尼。
维罗非尼(RG7204，PLX-4032，CAS登记号1029872-55-5)已显示出在多种癌细胞系(例如黑素瘤细胞系)中引起程序性细胞死亡。维罗非尼中断BRAF/MEK/ERK途径上的BRAF/MEK步骤–如果BRAF具有常见的V600E突变的话。维罗非尼在其癌症具有V600E BRAF突变(即在BRAF蛋白质的氨基酸位置编号600处，正常的缬氨酸被谷氨酸替换)的患者中起作用，例如FDA批准的黑素瘤患者。约60％的黑素瘤具有V600E BRAF突变。V600E突变存在于多种其它癌症中，包括淋巴瘤，结肠癌，黑素瘤，甲状腺癌和肺癌。维罗非尼具有下述结构：
(维罗非尼)(Genentech，Inc.)是在美国得到批准且指示用于治疗具有带有BRAF V600E突变(如通过FDA批准的测试检测的)的不可切除或转移性黑素瘤的患者的一种药物产品。(维罗非尼)不推荐用于缺乏BRAF V600E突变(野生型BRAF黑素瘤)的黑素瘤患者。ZELBORAF(维罗非尼)是一种激酶抑制剂，作为口服使用的240mg片剂可得。
在本文所述任何组合疗法方法的一些实施方案中，所述靶向治疗剂是MEK抑制剂。在一些实施方案中，该MEK抑制剂是MEK1抑制剂，MEK2抑制剂，和/或MEK1/2抑制剂。例示性MEK抑制剂包括但不限于曲美替尼(GSK 1120212)，MEK162，selumetinib(AZD 6244，ARRY-142886)，pimasertib(MSC1936369B，AS-703026，AS703026)，refametinib，考比替尼(GDC-0973)，BI-847325，GDC-0623，PD-325901，CI-1040，和PD035901。在一些实施方案中，该MEK抑制剂是selumetinib，pimasertib，考比替尼(GDC-0973)，GDC-0623，比尼替尼或曲美替尼。在某些实施方案中，该MEK抑制剂是考比替尼(GDC-0973)。
考比替尼(GDC-0973或XL518)是MEK的一种选择性抑制剂，还称作丝裂原活化的蛋白质激酶激酶(MAPKK)，它是在人肿瘤中频繁激活的RAS/RAF/MEK/ERK途径的一种关键成分。可以如国际专利申请公开号WO2007044515(A1)中所述制备GDC-0973。GDC-0973名称是(S)-(3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)苯基)(3-羟基-3-(哌啶-2-基)吖丁啶-1-基)甲酮，且具有下述结构：
在一些实施方案中，该MEK抑制剂是(S)-[3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)苯基][3-羟基-3-(哌啶-2-基)氮杂环丁烷-1-基]甲烷或其药学可接受盐。在一些实施方案中，该MEK抑制剂是(S)-[3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)苯基][3-羟基-3-(哌啶-2-基)氮杂环丁烷-1-基]甲烷，半富马酸。在一些实施方案中，该MEK抑制剂是考比替尼。
考比替尼是一种表现为白色至灰白色固体的富马酸盐且展现pH依赖性溶解度。COTELLIC(考比替尼)片剂作为用于口服施用的白色，圆形，包膜20mg片剂供应，一侧阴刻“COB”。每个20mg片剂含有22mg考比替尼富马酸盐，其对应于20mg考比替尼游离碱。COTELLIC的无活性组分是：片芯：微晶纤维素，乳糖单水合物，交联羧甲基纤维素钠，硬脂酸镁。涂料：聚乙烯醇，二氧化钛，聚乙二醇3350，滑石。
曲美替尼(GSK 1120212，CAS登记号871700-17-3)名称是N-(3-{3-环丙基-5-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-6,8-二甲基-2,4,7-三氧-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基}苯基)乙酰胺，且具有下述结构：
在任何方法的一些实施方案中，本文中描述的方法可以使用免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-1轴结合拮抗剂。在一些实施方案中，PD-1轴结合拮抗剂包括PD-1结合拮抗剂，PD-L1结合拮抗剂和PD-L2结合拮抗剂。PD-1(编程性死亡1)在本领域中也称作“编程性细胞死亡1”，“PDCD1”，“CD279”和“SLEB2”。一种例示性人PD-1显示于UniProtKB/Swiss-Prot登录号Q15116。PD-L1(编程性死亡配体1)在本领域中也称作“编程性细胞死亡1配体1”，“PDCD1LG1”，“CD274”，“B7-H”，和“PDL1”。一种例示性人PD-L1显示于UniProtKB/Swiss-Prot登录号Q9NZQ7.1。PD-L2(编程性死亡配体2)在本领域中也称作“编程性细胞死亡1配体2”，“PDCD1LG2”，“CD273”，“B7-DC”，“Btdc”，和“PDL2”。一种例示性人PD-L2显示于UniProtKB/Swiss-Prot登录号Q9BQ51。在一些实施方案中，PD-1，PD-L1，和PD-L2是人PD-1，PD-L1和PD-L2。
在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是抑制PD-1与其配体结合配偶结合的分子。在一个具体的方面，PD-1配体结合配偶是PD-L1和/或PD-L2。在另一个实施方案中，PD-L1结合拮抗剂是抑制PD-L1与其结合配偶结合的分子。在一个具体的方面，PD-L1结合配偶是PD-1和/或B7-1。在另一个实施方案中，PD-L2结合拮抗剂是抑制PD-L2与其结合配偶结合的分子。在一个具体的方面，PD-L2结合配偶是PD-1。拮抗剂可以是抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，或寡肽。
在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是抗PD-1抗体(例如人抗体，人源化抗体，或嵌合抗体)。在一些实施方案中，抗PD-1抗体选自下组：MDX-1106(纳武单抗)，MK-3475(派姆单抗)，CT-011(pidilizumab)，MEDI-0680(AMP-514)，PDR001，REGN2810，和BGB-108。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是免疫粘附素(例如包含融合至恒定区(例如免疫球蛋白序列的Fc区)的PD-L1或PD-L2的胞外或PD-1结合部分的免疫粘附素)。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是AMP-224。在一些实施方案中，该PD-L1结合拮抗剂是抗PD-L1抗体。在一些实施方案中，该抗PD-L1抗体选自下组：MPDL3280A，YW243.55.S70，MDX-1105，MEDI4736(durvalumab)，和MSB0010718C(avelumab)。抗体YW243.55.S70是WO 2010/077634中描述的抗PD-L1。MDX-1105，也称作BMS-936559，是WO2007/005874中描述的抗PD-L1抗体。MEDI4736是WO2011/066389和US2013/034559中描述的抗PD-L1单克隆抗体。MDX-1106，也称作MDX-1106-04，ONO-4538，BMS-936558，或纳武单抗，是一种在WO2006/121168中描述的抗PD-1抗体。MK-3475，也称作lambrolizumab，是一种在WO2009/114335中描述的抗PD-1抗体。CT-011，也称作hBAT，hBAT-1或pidilizumab，是一种在WO2009/101611中描述的抗PD-1抗体。AMP-224，也称作B7-DCIg，是一种在WO2010/027827和WO2011/066342中描述的PD-L2-Fc融合可溶性受体。
在一些实施方案中，该PD-1轴结合拮抗剂是抗PD-L1抗体。在一些实施方案中，该抗PD-L1抗体能够抑制PD-L1和PD-1之间和/或PD-L1和B7-1之间的结合。在一些实施方案中，该抗PD-L1抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，该抗PD-L1抗体是选自下组的抗体片段：Fab，Fab’-SH，Fv，scFv，和(Fab’)2片段。在一些实施方案中，该抗PD-L1抗体是人源化抗体。在一些实施方案中，该抗PD-L1抗体是人抗体。
在本文中的方法中有用的抗PD-L1抗体的例子描述于PCT专利申请WO 2010/077634，WO 2007/005874，WO 2011/066389，和US 2013/034559，其通过援引收入本文。
抗PD-1抗体
在一些实施方案中，抗PD-1抗体是MDX-1106。“MDX-1106”的备选名称包括MDX-1106-04，ONO-4538，BMS-936558或纳武单抗。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是纳武单抗(CAS登记号：946414-94-4)。在仍有又一个实施方案中，提供一种分离的抗PD-1抗体，其包含包含来自SEQ ID NO:1的重链可变区氨基酸序列的重链可变区和/或包含来自SEQ ID NO:2的轻链可变区氨基酸序列的轻链可变区。在仍有又一个实施方案中，提供一种分离的抗PD-1抗体，其包含重链和/或轻链序列，其中：
(a)该重链序列与下述重链序列具有至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％序列同一性：
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQ ID NO:1)，和
(b)该轻链序列与下述轻链序列具有至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％序列同一性：
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:2)。
抗PD-L1抗体
在一些实施方案中，配制剂中的抗体在重和/或轻链序列中包含至少一个(例如至少两个，至少三个，或至少四个)色氨酸。在一些实施方案中，氨基酸色氨酸在抗体的HVR区，框架区和/或恒定区中。在一些实施方案中，抗体在HVR区中包含两个或三个色氨酸残基。在一些实施方案中，配制剂中的抗体是抗PD-L1抗体。PD-L1(编程性死亡配体1)，也称作PDL1，B7-H1，B7-4，CD274，和B7-H，是跨膜蛋白，而且它与PD-1的相互作用抑制T细胞活化和细胞因子生成。在一些实施方案中，本文所述抗PD-L1抗体结合人PD-L1。可用于本文所述方法的抗PD-L1抗体的例子记载于PCT专利申请WO 2010/077634 A1和美国专利No.8,217,149，其通过援引完整收入本文。
在一些实施方案中，抗PD-L1抗体能够抑制PD-L1和PD-1之间和/或PD-L1和B7-1之间的结合。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是选自下组的抗体片段：Fab，Fab’-SH，Fv，scFv，和(Fab’)2片段。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是人源化抗体。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是人抗体。
WO 2010/077634A1和US 8,217,149中描述的抗PD-L1抗体可用于本文所述方法。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体包含SEQ ID NO:3的重链可变区序列和/或SEQ ID NO:4的轻链可变区序列。在仍有又一个实施方案中，提供一种分离的抗PD-L1抗体，其包含重链可变区和/或轻链可变区序列，其中：
(a)该重链序列与下述重链序列具有至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％序列同一性：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:3)，和
(b)该轻链序列与下述轻链序列具有至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％序列同一性：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:4)。
在一个实施方案中，抗PD-L1抗体含有重链可变区，其包含HVR-H1，HVR-H2和HVR-H3序列，其中：
(a)HVR-H1序列是GFTFSX1SWIH(SEQ ID NO:5)；
(b)HVR-H2序列是AWIX2PYGGSX3YYADSVKG(SEQ ID NO:6)；
(c)HVR-H3序列是RHWPGGFDY(SEQ ID NO:7)；
进一步其中：X1是D或G；X2是S或L；X3是T或S。在一个具体的方面，X1是D；X2是S且X3是T。
在另一个方面，多肽进一步包含依照下式的HVR间并置的可变区重链框架序列：(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)。在又一个方面，框架序列自人共有框架序列衍生。在另一个方面，框架序列是VH亚组III共有框架。在又一个方面，至少一个框架序列如下：
HC-FR1是EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS(SEQ ID NO:8)
HC-FR2是WVRQAPGKGLEWV(SEQ ID NO:9)
HC-FR3是RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:10)
HC-FR4是WGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:11)。
在又一个方面，重链多肽与可变区轻链进一步组合，所述可变区轻链包含HVR-L1，HVR-L2和HVR-L3，其中：
(a)HVR-L1序列是RASQX4X5X6TX7X8A(SEQ ID NO:12)；
(b)HVR-L2序列是SASX9LX10S(SEQ ID NO:13)；
(c)HVR-L3序列是QQX11X12X13X14PX15T(SEQ ID NO:14)；
其中：X4是D或V；X5是V或I；X6是S或N；X7是A或F；X8是V或L；X9是F或T；X10是Y或A；X11是Y，G，F，或S；X12是L，Y，F或W；X13是Y，N，A，T，G，F或I；X14是H，V，P，T或I；X15是A，W，R，P或T。在又一个方面，X4是D；X5是V；X6是S；X7是A；X8是V；X9是F；X10是Y；X11是Y；X12是L；X13是Y；X14是H；X15是A。
在又一个方面，轻链进一步包含依照下式的HVR间并置的可变区轻链框架序列：(LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。在又一个方面，框架序列自人共有框架序列衍生。在又一个方面，框架序列是VLκI共有框架。在又一个方面，至少一个框架序列如下：
LC-FR1是DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO:15)
LC-FR2是WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO:16)
LC-FR3是GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO:17)
LC-FR4是FGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:18)。
在另一个实施方案中，提供了分离的抗PD-L1抗体或抗原结合片段，其包含重链和轻链可变区序列，其中：
(a)重链包含HVR-H1，HVR-H2和HVR-H3，其中进一步：
(i)HVR-H1序列是GFTFSX1SWIH(SEQ ID NO:5)，
(ii)HVR-H2序列是AWIX2PYGGSX3YYADSVKG(SEQ ID NO:6)
(iii)HVR-H3序列是RHWPGGFDY(SEQ ID NO:7)，且
(b)轻链包含HVR-L1，HVR-L2和HVR-L3，其中进一步：
(i)HVR-L1序列是RASQX4X5X6TX7X8A(SEQ ID NO:12)，
(ii)HVR-L2序列是SASX9LX10S(SEQ ID NO:13)，和
(iii)HVR-L3序列是QQX11X12X13X14PX15T(SEQ ID NO:14)
其中：X1是D或G；X2是S或L；X3是T或S；X4是D或V；X5是V或I；X6是S或N；X7是A或F；X8是V或L；X9是F或T；X10是Y或A；X11是Y，G，F，或S；X12是L，Y，F或W；X13是Y，N，A，T，G，F或I；X14是H，V，P，T或I；X15是A，W，R，P或T。在一个具体的方面，X1是D；X2是S且X3是T。在另一个方面，X4是D；X5是V；X6是S；X7是A；X8是V；X9是F；X10是Y；X11是Y；X12是L；X13是Y；X14是H；X15是A。在又一个方面，X1是D；X2是S且X3是T，X4是D；X5是V；X6是S；X7是A；X8是V；X9是F；X10是Y；X11是Y；X12是L；X13是Y；X14是H且X15是A。
在另一个方面，重链可变区包含如下的HVR间并置的一个或多个框架序列：(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)，并且轻链可变区包含如下的HVR间并置的一个或多个框架序列：(LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。在又一个方面，框架序列自人共有框架序列衍生。在又一个方面，重链框架序列自Kabat亚组I，II，或III序列衍生。在又一个方面，重链框架序列是VH亚组III共有框架。在又一个方面，一个或多个重链框架序列如SEQ ID NO:8，9，10和11所列。在又一个方面，轻链框架序列自Kabat κI，II，II或IV亚组序列衍生。在又一个方面，轻链框架序列是VLκI共有框架。在又一个方面，一个或多个轻链框架序列如SEQ ID NO:15，16，17和18所列。
在又一个具体的方面，抗体进一步包含人或鼠恒定区。在又一个方面，人恒定区选自下组：IgG1，IgG2，IgG2，IgG3，IgG4。在又一个具体的方面，人恒定区是IgG1。在又一个方面，鼠恒定区选自下组：IgG1，IgG2A，IgG2B，IgG3。在又一个方面，鼠恒定区是IgG2A。在又一个具体的方面，抗体具有降低的或最小的效应器功能。在又一个具体的方面，最小效应器功能源自“效应器较小(effector-less)的Fc突变”或无糖基化(aglycosylation)。在又一个实施方案中，效应器较小的Fc突变是恒定区中的N297A或D265A/N297A替代。
在又一个实施方案中，提供了抗PD-L1抗体，其包含重链和轻链可变区序列，其中：
(a)重链进一步包含与GFTFSDSWIH(SEQ ID NO:19)，AWISPYGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO:20)和RHWPGGFDY(SEQ ID NO:21)分别具有至少85％序列同一性的HVR-H1，HVR-H2和HVR-H3序列，或
(b)轻链进一步包含与RASQDVSTAVA(SEQ ID NO:22)，SASFLYS(SEQ ID NO:23)和QQYLYHPAT(SEQ ID NO:24)分别具有至少85％序列同一性的HVR-L1，HVR-L2和HVR-L3序列。
在一个具体的方面，序列同一性是86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％。
在另一个方面，重链可变区包含如下的HVR间并置的一个或多个框架序列：(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)，且轻链可变区包含如下的HVR间并置的一个或多个框架序列：(LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。在又一个方面，框架序列自人共有框架序列衍生。在又一个方面，重链框架序列自Kabat亚组I，II，或III序列衍生。在又一个方面，重链框架序列是VH亚组III共有框架。在又一个方面，一个或多个重链框架序列如SEQ ID NO:8，9，10和11所列。在又一个方面，轻链框架序列自KabatκI，II，II或IV亚组序列衍生。在又一个方面，轻链框架序列是VLκI共有框架。在又一个方面，一个或多个轻链框架序列如SEQ ID NO:15，16，17和18所列。
在又一个具体的方面，抗体进一步包含人或鼠恒定区。在又一个方面，人恒定区选自下组：IgG1，IgG2，IgG2，IgG3，IgG4。在又一个具体的方面，人恒定区是IgG1。在又一个方面，鼠恒定区选自下组：IgG1，IgG2A，IgG2B，IgG3。在又一个方面，鼠恒定区是IgG2A。在又一个具体的方面，抗体具有降低的或最小的效应器功能。在又一个具体的方面，最小效应器功能源自“效应器较小的Fc突变”或无糖基化。在又一个实施方案中，效应器较小的Fc突变是恒定区中的N297A或D265A/N297A替代。
在又一个实施方案中，提供了分离的抗PD-L1抗体，其包含重链和轻链可变区序列，其中：
(a)重链序列与下述重链序列具有至少85％序列同一性：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:25)，和/或
(b)轻链序列与下述轻链序列具有至少85％序列同一性：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:4)。
在一个具体的方面，序列同一性是86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％。在另一个方面，重链可变区包含如下的HVR间并置的一个或多个框架序列：(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)，且轻链可变区包含如下的HVR间并置的一个或多个框架序列：(LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。在又一个方面，框架序列自人共有框架序列衍生。在又一个方面，重链框架序列自Kabat亚组I，II，或III序列衍生。在又一个方面，重链框架序列是VH亚组III共有框架。在又一个方面，一个或多个重链框架序列如SEQ ID NO:8，9，10和WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:27)所列。
在又一个方面，轻链框架序列自KabatκI，II，II或IV亚组序列衍生。在又一个方面，轻链框架序列是VLκI共有框架。在又一个方面，一个或多个轻链框架序列如SEQ ID NO:15，16，17和18所列。
在又一个具体的方面，抗体进一步包含人或鼠恒定区。在又一个方面，人恒定区选自下组：IgG1，IgG2，IgG2，IgG3，IgG4。在又一个具体的方面，人恒定区是IgG1。在又一个方面，鼠恒定区选自下组：IgG1，IgG2A，IgG2B，IgG3。在又一个方面，鼠恒定区是IgG2A。在又一个具体的方面，抗体具有降低的或最小的效应器功能。在又一个具体的方面，最小的效应器功能源自原核细胞中的生成。在又一个具体的方面，最小的效应器功能源自“效应器较小的Fc突变”或无糖基化。在又一个实施方案中，效应器较小的Fc突变是恒定区中的N297A或D265A/N297A替代。
在又一个方面，重链可变区包含如下的HVR间并置的一个或多个框架序列：(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)，且轻链可变区包含如下的HVR间并置的一个或多个框架序列：(LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。在又一个方面，框架序列自人共有框架序列衍生。在又一个方面，重链框架序列自Kabat亚组I，II，或III序列衍生。在又一个方面，重链框架序列是VH亚组III共有框架。在又一个方面，一个或多个重链框架序列如下：
HC-FR1EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO:29)
HC-FR2WVRQAPGKGLEWVA(SEQ ID NO:30)
HC-FR3RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:10)
HC-FR4WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:27)。
在又一个方面，轻链框架序列自KabatκI，II，II或IV亚组序列衍生。在又一个方面，轻链框架序列是VLκI共有框架。在又一个方面，一个或多个轻链框架序列如下：
LC-FR1DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO:15)
LC-FR2WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO:16)
LC-FR3GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO:17)
LC-FR4FGQGTKVEIK(SEQ ID NO:28)。
在又一个具体的方面，抗体进一步包含人或鼠恒定区。在又一个方面，人恒定区选自下组：IgG1，IgG2，IgG2，IgG3，IgG4。在又一个具体的方面，人恒定区是IgG1。在又一个方面，鼠恒定区选自下组：IgG1，IgG2A，IgG2B，IgG3。在又一个方面，鼠恒定区是IgG2A。在又一个具体的方面，抗体具有降低的或最小的效应器功能。在又一个具体的方面，最小的效应器功能源自“效应器较小的Fc突变”或无糖基化。在又一个实施方案中，效应器较小的Fc突变是恒定区中的N297A或D265A/N297A替代。
在又一个实施方案中，提供了包含重链和轻链可变区序列的抗PD-L1抗体，其中：
(c)重链进一步包含与GFTFSDSWIH(SEQ ID NO:19)，AWISPYGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO:20)和RHWPGGFDY(SEQ ID NO:21)分别具有至少85％序列同一性的HVR-H1，HVR-H2和HVR-H3序列，和/或
(d)轻链进一步包含与RASQDVSTAVA(SEQ ID NO:22)，SASFLYS(SEQ ID NO:23)和QQYLYHPAT(SEQ ID NO:24)分别具有至少85％序列同一性的HVR-L1，HVR-L2和HVR-L3序列。
在一个具体的方面，序列同一性是86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％。
在另一个方面，重链可变区包含如下的HVR间并置的一个或多个框架序列：(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)，且轻链可变区包含如下的HVR间并置的一个或多个框架序列：(LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。在又一个方面，框架序列自人共有框架序列衍生。在另一个方面，重链框架序列自Kabat亚组I，II，或III序列衍生。在又一个方面，重链框架序列是VH亚组III共有框架。在又一个方面，一个或多个重链框架序列如SEQ ID NO:8，9，10和WGQGTLVTVSSASTK(SEQ ID NO:31)所列。
在又一个方面，轻链框架序列自KabatκI，II，II或IV亚组序列衍生。在又一个方面，轻链框架序列是VLκI共有框架。在又一个方面，一个或多个轻链框架序列如SEQ ID NO:15，16，17和18所列。在仍有又一个具体的方面，抗体进一步包含人或鼠恒定区。在又一个方面，人恒定区选自下组：IgG1，IgG2，IgG2，IgG3，IgG4。在又一个具体的方面，人恒定区是IgG1。在又一个方面，鼠恒定区选自下组：IgG1，IgG2A，IgG2B，IgG3。在又一个方面，鼠恒定区是IgG2A。在又一个具体的方面，抗体具有降低的或最小的效应器功能。在又一个具体的方面，最小的效应器功能源自“效应器较小的Fc突变”或无糖基化。在又一个方面，效应器较小的Fc突变是恒定区中的N297A或D265A/N297A替代。
在仍有又一个实施方案中，提供分离的抗PD-L1抗体，其包含重链和轻链可变区序列，其中：
(a)重链序列与下述重链序列具有至少85％序列同一性：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTK(SEQ ID NO:26)，或
(b)轻链序列与下述轻链序列具有至少85％序列同一性：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:4)。
在一些实施方案中，提供分离的抗PD-L1抗体，其包含重链和轻链可变区序列，其中该轻链可变区序列与SEQ ID NO:4的氨基酸序列具有至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％序列同一性。在一些实施方案中，提供分离的抗PD-L1抗体，其包含重链和轻链可变区序列，其中该重链可变区序列与SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％序列同一性。在一些实施方案中，提供分离的抗PD-L1抗体，其包含重链和轻链可变区序列，其中该轻链可变区序列与SEQ ID NO:4的氨基酸序列具有至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，或100％序列同一性，且该重链可变区序列与SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，或100％序列同一性。在一些实施方案中，可以在重和/或轻链N端删除，替代或修饰一个，两个，三个，四个或五个氨基酸残基。
在仍有又一个实施方案中，提供分离的抗PD-L1抗体，其包含重链和轻链序列，其中：
(a)该重链序列与下述重链序列具有至少85％序列同一性：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:32)，和/或
(b)该轻链序列与下述轻链序列具有至少85％序列同一性：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:33)。
在一些实施方案中，提供分离的抗PD-L1抗体，其包含重链和轻链序列，其中该轻链序列与SEQ ID NO:33的氨基酸序列具有至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，或至少99％序列同一性。在一些实施方案中，提供分离的抗PD-L1抗体，其包含重链和轻链序列，其中该重链序列与SEQ ID NO:32的氨基酸序列具有至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，或至少99％序列同一性。在一些实施方案中，提供分离的抗PD-L1抗体，其包含重链和轻链序列，其中该轻链序列与SEQ ID NO:33的氨基酸序列具有至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，或至少99％序列同一性且该重链序列与SEQ ID NO:32的氨基酸序列具有至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，或至少99％序列同一性。
在一些实施方案中，分离的抗PD-L1抗体是无糖基化的。抗体的糖基化通常是N连接的或O连接的。N连接指碳水化合物模块附着至天冬酰胺残基的侧链。三肽序列天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸(其中X是除脯氨酸以外的任何氨基酸)是碳水化合物模块酶促附着至天冬酰胺侧链的识别序列。如此，这些三肽序列任一在多肽中的存在创建潜在的糖基化位点。O连接的糖基化指糖N-乙酰基半乳糖胺，半乳糖，或木糖之一附着至羟基氨基酸，最常见丝氨酸或苏氨酸，尽管也可以使用5-羟基脯氨酸或5-羟基赖氨酸。通过改变氨基酸序列，使得去除上文所述三肽序列(用于N连接的糖基化位点)之一，方便地实现自抗体去除糖基化位点。可以通过将糖基化位点内的天冬酰胺，丝氨酸或苏氨酸残基用另一种氨基酸残基(例如甘氨酸，丙氨酸或保守替代)替代来进行改变。
在本文中的任何实施方案中，分离的抗PD-L1抗体能结合人PD-L1(例如UniProtKB/Swiss-Prot登录号Q9NZQ7.1中所示人PD-L1)或其变体。
在仍有又一个实施方案中，提供了分离的核酸，其编码本文中描述的任何抗体。在一些实施方案中，核酸进一步包含适合于表达核酸的载体，所述核酸编码先前描述的任何抗PD-L1抗体。在又一个具体的方面，载体在适合于表达核酸的宿主细胞中。在又一个具体的方面，宿主细胞是真核细胞或原核细胞。在又一个具体的方面，真核细胞是哺乳动物细胞，诸如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。
可以使用本领域中已知的方法，例如通过如下的方法生成抗体或其抗原结合片段，所述方法包括在适合于生成此类抗体或片段的条件下培养含有核酸的宿主细胞，并回收抗体或片段，所述核酸编码适合于表达的形式的先前描述的任何抗PD-L1抗体或抗原结合片段。
V.药物配制剂
可以通过与一种或多种任选的药学可接受载体(Remington’s Pharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编(1980))一起配制以冻干配制剂或水性溶液形式制备如本文中所描述的B-RAF的拮抗剂(例如维罗非尼)，MEK的拮抗剂(例如考比替尼)和/或PD1轴抑制剂(例如阿特珠单抗)的药物配制剂。一般地，药学可接受载体在所采用的剂量和浓度对接受者是无毒的，而且包括但不限于缓冲剂，诸如磷酸盐，柠檬酸盐，和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如氯化十八烷基二甲基苄基铵；氯化己烷双胺；苯扎氯铵，苄索氯铵；酚，丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烃基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清清蛋白，明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸，谷氨酰胺，天冬酰胺，组氨酸，精氨酸或赖氨酸；单糖，二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖，甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖类，诸如蔗糖，甘露醇，海藻糖或山梨醇；成盐相反离子，诸如钠；金属复合物(例如Zn-蛋白质复合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如聚山梨酯(例如TWEENTM)，泊洛沙姆(例如PLURONICSTM)或聚乙二醇(PEG)。活性药物成分还可包载于例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊中(例如分别是羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)，在胶状药物投递系统中(例如脂质体，清蛋白微球体，微乳剂，纳米颗粒和纳米胶囊)，或在粗滴乳状液中。本文中的例示性的药学可接受载体进一步包含间质药物分散剂诸如可溶性中性活性透明质酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如人可溶性PH-20透明质酸酶糖蛋白，诸如rHuPH20(Baxter International,Inc.)。某些例示性的sHASEGP和使用方法，包括rHuPH20记载于美国专利公开文本No.2005/0260186和2006/0104968。在一个方面，将sHASEGP与一种或多种别的糖胺聚糖酶诸如软骨素酶组合。
特别地，用于体内施用的配制剂必须是无菌的。此类无菌性可通过穿过无菌滤膜过滤容易地实现。化合物通常能作为固体组合物，冻干配制剂或作为水溶液来贮存。
包含本文中描述的B-RAF的拮抗剂(例如维罗非尼)，MEK的拮抗剂(例如考比替尼)和/或PD1轴抑制剂(例如阿特珠单抗)的药物配制剂可以以与优良医学实践一致的方式即量，浓度，日程表，疗程，媒介和施用路径来进行配制，定剂量和施用。在此语境中考虑的因素包括所治疗的具体病症，所治疗的具体哺乳动物，患者个体的临床状况，病症的起因，药剂的投递部位，施用的方法，施用的日程表，和医学从业人员知道的其它因素。要施用的化合物的“治疗有效量”会由此类考虑因素决定。此类技术披露于Remington’s Pharmaceutical Sciences。
可以制备包含本文中描述的B-RAF的拮抗剂(例如维罗非尼)，MEK的拮抗剂(例如考比替尼)和/或PD1轴抑制剂(例如阿特珠单抗)的持续释放制剂。持续释放制剂的合适的例子包括含有本文中描述的B-RAF的拮抗剂(例如维罗非尼)，MEK的拮抗剂(例如考比替尼)和/或PD1轴抑制剂(例如阿特珠单抗)的固体疏水性聚合物的半透性基质，该基质为成形商品形式，例如膜，或微胶囊。持续释放基质的例子包括聚酯，水凝胶(例如，聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)，或聚(乙烯醇))，聚丙交酯(US 3773919)，L-谷氨酸和L-谷氨酸γ-乙基酯的共聚物，不可降解的乙烯乙酸乙烯酯，可降解的乳酸-乙醇酸共聚物，诸如由乳酸-乙醇酸共聚物和乙酸亮丙瑞林组成的可注射微球体(LUPRON )和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。
本文中描述的B-RAF的拮抗剂(例如维罗非尼)或MEK的拮抗剂(例如考比替尼)的配制剂可适合于口服施用，例如，可以制备成各自含有预定量的该B-RAF的拮抗剂(例如维罗非尼)或该MEK的拮抗剂(例如考比替尼)的离散单元，诸如丸剂，胶囊剂，扁囊剂或片剂。对于B-RAF拮抗剂维罗非尼，配制剂可包含片芯，其包含一种或多种琥珀酸乙酸羟丙甲纤维素，交联羧甲基纤维素钠，二氧化硅胶体，硬脂酸镁，和羟基丙基纤维素。在一些实施方案中，片芯可涂布涂料，其包含一种或多种聚乙烯醇，二氧化钛，聚乙二醇3350，滑石，和红氧化铁。在一些实施方案中，B-RAF拮抗剂维罗非尼可以240mg片剂配制。维罗非尼具有化学名丙烷-1-磺酸{3-[5-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羰基]-2,4-二氟-苯基}-酰胺。对于MEK的拮抗剂(例如考比替尼)，配制剂可包含片芯，其包含一种或多种微晶纤维素，乳糖单水合物，交联羧甲基纤维素钠，硬脂酸镁。在一些实施方案中，片芯可涂布涂料，其包含一种或多种聚乙烯醇，二氧化钛，聚乙烯。在一些实施方案中，MEK拮抗剂考比替尼可以20mg片剂配制。在一些实施方案中，20mg片剂含有22mg考比替尼富马酸盐，其对应于20mg考比替尼游离碱。本文中描述的PD1轴抑制剂(例如阿特珠单抗)的配制剂可适合于IV施用。
可以将配制剂包装在单剂(unit-dose)或多剂(multi-dose)容器中，例如密封的安瓿和管形瓶，而且可以将其在冷冻干燥(冻干)条件下贮存，在临使用前仅需要添加无菌液体载剂，例如水以便注射。即时注射的溶液和悬浮液自先前所述种类的无菌粉末，颗粒和片剂制备。优选的单位剂量配制剂为那些含有如本文中上文所述每日剂量或单位每日亚剂量或其合适的部分的活性组分的。
VI.制品
在本发明的另一个方面，提供了含有上文所述可用于治疗，预防和/或诊断病症的材料的制品。所述制品包括容器和所述容器上或与所述容器相连的标签或包装插页。合适的容器包括例如药瓶，管形瓶，注射器，IV溶液袋，泡罩包，等。所述容器可以用多种材料制成，诸如玻璃或塑料。所述容器装有独自或与另一组合物组合有效治疗，预防和/或诊断所述疾患的组合物，而且可以具有无菌存取口(例如所述容器可以是静脉内溶液袋或带有皮下注射针可刺穿的塞子的管形瓶)。所述组合物中的至少一种活性药剂是本文所述B-RAF的拮抗剂(例如维罗非尼)，MEK的拮抗剂(例如考比替尼)和/或PD1轴抑制剂(例如阿特珠单抗)。所述标签或包装插页指明该组合物用于治疗选择的疾患。此外，制品可包括(a)其中装有组合物的第一容器，其中所述组合物包括B-RAF的拮抗剂(例如维罗非尼)；和(b)其中装有组合物的第二容器，其中所述组合物包括PD1轴抑制剂(例如阿特珠单抗)。此外，制品可包括(a)其中装有组合物的第一容器，其中所述组合物包括B-RAF的拮抗剂(例如维罗非尼)；(b)其中装有组合物的第二容器，其中所述组合物包括MEK的拮抗剂(例如考比替尼)；和(c)其中装有组合物的第三容器，其中所述组合物包括PD1轴抑制剂(例如阿特珠单抗)。
本发明的此实施方案中的制品还可包括指示所述组合物可用于治疗特定疾患(诸如癌症或黑素瘤，例如V600突变体不可切除的或转移性黑素瘤)的包装插页。包装插页可以指通常包括在治疗用产品的商业包装中的说明书，它们包含有关涉及此类治疗用产品应用的适应征，用法，剂量，施用，禁忌症和/或警告的信息。或者/另外，所述制品可进一步包括第二(或第三或第四)容器，其中装有药学可接受的缓冲液，诸如注射用抑菌水(BWFI)，磷酸盐缓冲盐水，林格(Ringer)氏溶液和右旋糖溶液。它可进一步包括从商业和用户立场出发需要的其它材料，包括其它缓冲液，稀释剂，滤器，针头，和注射器。
虽然为了清楚理解的目的已经通过举例说明较为详细地描述了前述发明，但是描述和例子不应解释为限制本发明的范围。通过援引明确完整收录本文中引用的所有专利和科学文献的公开内容。
实施例
以下是本发明的方法和组合物的实施例。应当理解，鉴于上文提供的一般描述，可以实施各种其它实施方案。
实施例1
材料和方法
患者纳入标准：患者必须达到下述标准对于进入研究才是适格的：签署知情同意表，年龄≥18岁，和转移性或IIIc期不可切除的黑素瘤的组织学或细胞学证明文件，带有BRAFV600突变(任何错义类型)，如通过在临床实验室改进方案(CLIA)认证的实验室或同等机构实施的BRAF V600突变测试评估的。原发性肿瘤的起源可以是皮肤，粘膜，或肢端位置但不是葡萄膜起源的。如果能排除葡萄膜黑素瘤的话，具有未知的原发性肿瘤的患者可以是适格的，而且取决于与医学监督员讨论。ECOG性能状态为0或1，血液学和终末器官功能适当，由第1天之前14天内获得的下述实验室结果定义：嗜中性细胞(ANC≥1500个细胞/μL)，WBC计数>2500个细胞/μL且<15,000个细胞/μL，淋巴细胞计数≥500个细胞/μL(或在当地实验室正常限度内)，血小板计数≥100,000个细胞/μL，血红蛋白≥9.0g/dL，总胆红素≤1.5×ULN(下述例外：可以招收具有血清胆红素水平≤3×ULN的具有已知的吉尔伯特病的患者)，AST和ALT≤2.0×ULN，ALP≤2.5×ULN(下述例外：具有有证明文件的肝或骨转移的患者：第1天之前14天内ALP≤5×ULN)，肌酸酐清除率≥30mL/min，INR和aPTT≤1.5×ULN，和依照RECIST v1.1的可测量疾病。
患者排除标准：会排除达到任何下述标准的患者，不得进入研究：为了不可切除的，局部晚期，或转移性黑素瘤接受在先系统性抗癌症法(例如生物制剂或其它靶向疗法，化疗，调查性抗癌剂，或激素疗法)，除了：在第1天之前中断至少28天的辅助设置中的IFN疗法，在第1天之前中断至少28天的IL-2疗法，在第1天之前中断至少28天的疫苗疗法，意图作为抗癌疗法的草药疗法必须在第1天之前中断≥7天，接受在先免疫调控剂，包括PD-1或PD-L1靶向疗法或CTLA-4靶向疗法，包括伊匹单抗，适用上文先前的排除标准中指出的上述例外，接受在先MAPK抑制剂途径药剂，包括MEK激酶抑制剂和BRAF激酶抑制剂，在第1天之前28天内的重大手术规程或预期研究过程期间需要重大手术规程，在第1天之前≤7天的放射疗法，尚未解决至≤1级的来自在先抗癌症疗法的不良事件，脱发除外，当前严重的，不受控制系统性疾病(包括但不限于临床上显著的心血管，肺，或肾病)，癌症除外，已知的临床上显著的肝病，包括活动性病毒性，酒精性，或其它肝炎，硬化，脂肪肝，和遗传性肝病，活动性或未治疗的CNS转移，如筛选和CNS转移的在先评估期间通过计算机断层扫描术(CT)或磁共振成像(MRI)评估确定的。注意：具有治疗过的无症状CNS转移的历史的患者是适格的，前提是他们达到所有下述标准：没有转移至脑干，中脑，桥，髓质，或视觉装置(视神经和交叉)10mm内，柔脑脊膜病也排除，CNS定向疗法完成后改善的射线照相术证明且没有CNS定向疗法完成和筛选射线照相研究之间的期中进展的证据，没有颅内出血的历史，没有地塞米松作为CNS疾病的疗法的现行要求；容许稳定剂量的抗惊厥药，在第1天之前28天内无立体定向辐射或全脑辐射，筛选CNS射线照相研究自放射疗法完成起≥4周且自皮质类固醇中断起≥2周，排除具有活动性恶性(除BRAF突变型黑素瘤以外)或过去3年内的先前恶性的患者，具有切除的黑素瘤，切除的BCC，切除的cuSCC，切除的原位黑素瘤，切除的宫颈原位癌瘤，切除的乳腺原位癌瘤，或具有相似结局的其它恶性(取决于与医学监督员的讨论)的患者除外，在先异基因骨髓移植或在先实体器官移植，自身免疫性疾病的历史，包括但不限于重症肌无力，肌炎，自身免疫性肝炎，系统性红斑狼疮，类风湿性关节炎，炎性肠病，与抗磷脂综合征有关的血管血栓形成，韦格纳氏肉芽肿病，斯耶格伦氏综合症，格林-巴利综合征，多发性硬化症，血管炎，或肾小球肾炎(服用稳定剂量的甲状腺替代激素的具有自身免疫相关甲状腺功能减退症的历史的患者对于这项研究可以是适格的，而且服用稳定胰岛素方案的具有受控1型糖尿病的患者对于这项研究可以是适格的)，特发性肺纤维化(包括肺炎)的历史，肺毒性的风险，或筛选胸部CT扫描上活动性肺炎的证据，HIV感染的历史，具有活动性乙型肝炎(定义为在筛选时具有阳性乙型肝炎表面抗原[HBsAg]测试)的患者，活动性丙型肝炎，结核病，等。
研究设计：阿特珠单抗与两种靶向治疗(维罗非尼单一疗法和维罗非尼+考比替尼组合疗法)组合在具有BRAFV600突变阳性转移性黑素瘤的先前未治疗的患者中的开放标签，多中心，Ib期研究。阿特珠单抗静脉内施用的剂量水平固定于15或20mg/kg q3w任一，或1200mg q3w或800mg q2w任一的固定剂量，取决于分支/分队。对于靶向治疗，所有维罗非尼剂量会是PO BID，而所有考比替尼剂量会是21天服药/7天停药日程表上的PO QD。日程表可在启动与阿特珠单抗的组合治疗之前含有由在有或无60mg考比替尼的情况下起始剂量960mg维罗非尼的靶向治疗组成的试行期。与靶向剂的组合治疗期期间靶向治疗的初始分队起始剂量水平会是720mg维罗非尼和60mg考比替尼(基于来自正在进行的考比替尼+阿特珠单抗的GP28363研究的结果)。
缩写：A＝阿特珠单抗；BID＝每天两次；C＝考比替尼；MTD＝最大耐受剂量；q2w＝每2周；q3w＝每3周；QD＝每天一次；V＝维罗非尼。注意：所有V剂量给药都是BID；所有C剂量给药都是21天服药/7天停药日程表上的QD；A剂量给药是15mg/kg q3w或1200mg q3w仅伴有V和800mg q2w伴有V+C。注意：C和V经由口服给药来给予而A通过IV来施用。
分队1：V以720mg BID+A以20mg/kg q3w并行开始。最初建议没有试行期；然而，在分队1中V+A并行开始中观察到毒性之后引入试行期(尽管没有观察到DLT)。
分队2：56天试行，V以960mg BID达49天，然后V以720mg BID达7天，接着：V以720mg BID+A以15mg/kg q3w。分队4中试行期的长度(28天)是基于分队2(56天试行)和分队3(28天试行)中测试的方案的耐受性选择的。
分队3：28天试行，V以960mg BID达21天，然后V以720mg BID达7天，接着：V以720mg BID+A以1200mg q3w。
分队4：28天试行V+C(V 21天以960mg BID和7天V以720mg BID+C 60mg QD 21/7)，接着：V以720mg BID+C以60mg QD 21/7+A以800mg q2w，28天周期。分队4中试行期的长度(28天)是基于分队2(56天试行)和分队3(28天试行)中测试的方案的耐受性选择的。
扩充分队A：V+A。招收患者入分队3方案的扩充：28天仅维罗非尼试行(21天以960mg BID和7天以720mg BID)，接着是包括V以720mg BID和A以1200mg q3w给药的治疗的21天周期。
扩充分队B：V+C+A。招收患者入分队4方案的扩充：28天V+C试行(V 21天以960mg BID和7天V以720mgBID+C以60mg QD 21/7)，接着：V以720mg BID+C以60mg QD 21/7和A以800mg q2w，28天周期。
任何上述分队中的患者可基于不良事件的方案要求而具有剂量调整，维罗非尼剂量降低至480mg BID和/或考比替尼降低至40mg QD 21/7。
结果
下文表1提供患者的基线特征。这项Ib期剂量放大研究展现维罗非尼+阿特珠单抗组合疗法在治疗BRAFV600转移性黑素瘤中有前途的抗肿瘤活性和耐受性。治疗导致肿瘤响应可评估的16/16名(100％)患者具有靶损害中的SLD降低。对于全部患者，中值响应持续时间是20.9个月且中值无进展存活是10.9个月。
与并行起点相比，对交错维罗非尼+阿特珠单抗起点观察到更大的耐受性。分队1中并行施用维罗非尼和阿特珠单抗的客观响应率导致1/3完全响应和0/3部分响应，总体响应率为33％。分队2中施用维罗非尼和阿特珠单抗之前试行(run-in)56天维罗非尼的客观响应率导致1/8完全响应和5/8部分响应，总体响应率为75％。分队3中施用维罗非尼和阿特珠单抗之前试行28天维罗非尼的客观响应率导致1/6完全响应和5/6部分响应，总体响应率为100％。分队3中更高的ORR可能指示试行的理想日程表会是28天(在两个扩充分队中均包括)。如下文表2中所示，总体上说交错剂量给药与并行剂量给药相比得到更好耐受。
将组织样品针对CD8+T细胞以及PD-L1表达染色。单独维罗非尼治疗提高免疫肿瘤CD8+T细胞浸润(数据未显示)。单独维罗非尼或维罗非尼与阿特珠单抗组合任一治疗提高肿瘤浸润性免疫细胞以及肿瘤细胞上的PD-L1表达(数据未显示)。
在10名患者中试行维罗非尼和考比替尼，接着施用维罗非尼，考比替尼和阿特珠单抗的分队4中的初始早期发现(到2015年9月为止)显示8名患者具有总共12例G3相关AE和1例G4相关AE，它们是可管理的且一般可逆的。12例3级相关事件中的6例是在试行期(在添加阿特珠单抗之前)。事件包括皮疹，光敏感性，腹泻，贫血，蜂窝织炎和LFT升高。具体而言，3名患者具有3级ALT或AST升高：2名患者在试行期中(用剂量调整解决了)，而1名患者在周期2中，用包括维罗非尼剂量降低至480mg BID和/或考比替尼降低至40mg QD 21/7的剂量调整解决了。有1名患者由于G3AST/ALT/胆红素和G4ALT的AE(归于阿特珠单抗和维罗非尼)而中断研究药物治疗。在到2015年9月为止分队4中施用维罗非尼，考比替尼和阿特珠单抗之前用维罗非尼和考比替尼治疗的9名可评估患者中，7/9名患者中的最好响应是部分响应，1/9中的最好响应是疾病稳定，而1/9中的最好响应是疾病进展。在早期数据中对维罗非尼，考比替尼和阿特珠单抗看到90％的疾病控制率。这项研究正在进行且会在扩充分队中招收总共20名患者要用维罗非尼，考比替尼和阿特珠单抗的三重组合治疗和另外10名患者要用维罗非尼和阿特珠单抗治疗。