硫辛酸胆碱酯组合物和生产生物相容性眼科制剂的方法与流程

本发明一般涉及眼科用硫辛酸胆碱酯组合物和生产生物相容性、稳定和无刺激性滴眼剂的方法。将本文的组合物关注为用于眼部障碍(但不限于)的疗法，例如老视眼、干眼、白内障和老年性黄斑变性。II.发明背景硫辛酸胆碱酯(LACE)是R-α-硫辛酸的化学合成衍生物。硫辛酸、也称作硫辛酸(thiocticacid)是8碳脂肪酸，其带有连接第6和第8碳以形成1，2-二硫戊环环的二硫键。该酸形成光学异构体，其中的异构体R-α-硫辛酸是最具有生物活性的。将硫辛酸胆碱酯(LACE，化学结构，参见图1)设计成可透过生物膜，同时并入阳离子胆碱首基。尽管硫辛酸无法透入角膜，但是硫辛酸的胆碱酯衍生物可透入角膜，其被角膜酯酶水解并且转化成生物活性硫辛酸。已经将LACE配制成眼科用溶液，将其作为滴眼液每日施用2次以治疗老视眼。由硫辛酸和胆碱组成的前药的LACE是治疗老视眼的一种独特分子。硫辛酸(LA)是活性成分且胆碱首基用于辅助透入眼。施用滴眼液后，LA与胆碱之间的键被泪膜和角膜中的酯酶水解。游离硫辛酸进入眼且最终到达晶状体。在那里它被内源性氧化还原酶还原成二氢硫辛酸，然后导致表浅的狭长晶状体细胞内的细胞溶质蛋白质水解。这种蛋白质裂解使得胞质溶胶自由流动并且逆转与年龄相关性晶状体硬化相关的氧化过程。预期由LACE制备的眼科用溶液能够调节和改善具有老视眼即与年龄相关的调节缺失的人的近距视觉焦点。老视眼是与年龄相关的聚焦于邻近物体的能力缺失；这种病症因晶状体显微结构的生理学改变导致，从而造成带来视觉对象在焦点下的晶状体焦距和曲率自动调节中的灵活性缺失。这种病症由矫正镜片矫正。已经报道硫辛酸胆碱酯(“LACE”)(参见例如美国专利US8,410,462)可以修补近距视觉。支持这种请求的是离体研究，其证实晶状体软化可以使用蛋白质二硫键还原剂二硫苏糖醇(DTT)在人供体晶状体中和在小鼠中使用硫辛酸以药理学方式诱导。使LACE制剂出现问题的一个问题在于通过二硫戊环键开环以形成危害该分子活性的氧化性种类而使其不稳定的倾向。在室温下，LACE会迅速降解为氧化性种类(参见“HPLCChromatogramofLACEOphthalmicSolutionwithDegradationProducts”，参见图2)。即使储存在冷藏温度下，也会早至1周内发生快速氧化，从而危害分子作为药物产品的用途。对于作为药物产品尽可能充分利用的LACE眼科用溶液(也称作EV06眼科用溶液)而言，水性制剂在储存和使用期间稳定化是至关重要的。使LACE眼科用溶液的药物研发混乱的另一个问题在于在家兔刺激模型中体内观察到的眼表面刺激的发生率。本发明详述了导致或引起眼部刺激的意外参数以及消除或最小化这些参数的过程。这些参数与制剂组成或药物物质的性质无关，而上述这些因素通常与眼部刺激有关或归因于眼部刺激。本文所述的组合物和方法描述了长期稳定眼科用LACE制剂的方法。还描述了在某些工艺条件下配制的LACE制剂刺激性原因的意外发现。鉴定为产生最终的舒适眼科用溶液(EV06眼科用溶液)的关键因素的关键工艺参数也并非显而易见。最终的工艺条件将降解种类的形成减少到最低限度并且将归因于眼部刺激的种类的形成减少到最低限度。III.附图描述图1：硫辛酸胆碱酯的化学结构。图2：混合8.1分钟、1、3和4小时时的LACE胶束种类，制剂KW-LACE-01-86-2。图3：混合8.1分钟、6、8和24小时时的LACE胶束种类，制剂KW-LACE-01-86-2。图4：在冷藏温度下混合时胶束LACE种类(由箭头表示的峰)最高。图5A：高胶束LACE浓度(由HPLC上7.9-8.5分钟之间的峰表示)与“团簇的”LACE氯化物API相关。图5B：较低的胶束LACE(由箭头表示的峰)与未团簇的LACEAPI相关。图6：丙氨酸和pH的作用。图7是比较如下变量的制剂图：(a)对照(原始)与对照+0.25％氯化钠、对照+0.25％氯化钠、w/o甘油；(b)对照(原始)与对照、w/o苯扎氯铵(BAC)；(c)对照(原始)与不含甘油的原始制剂。图8显示在57℃下亚硫酸盐对LACE稳定性的影响。制备pH4和4.5的浓度为0.05％亚硫酸盐(■，▲)和0.1％亚硫酸盐(x)的包含亚硫酸盐的制剂。添加亚硫酸盐无法稳定原始制剂(◆)。图9进一步探查了消除苯扎氯铵的潜在稳定作用。不含苯扎氯铵的全部制剂变化形式均优于对照原始制剂(pH4.5)。制剂变化形式为在pH4、4.5的无BAC组合物(▲，■)、无甘油/无BAC+0.9％氯化钠(x)、在pH4和4.5的无BAC+0.05％亚硫酸盐(●，■)。图10：消除甘油对LACE稳定性的影响。图11：缓冲的组合物对LACE稳定性的影响。图12A：刺激性记分(在家兔刺激模型中)与通过HPLC-UV测定的％LACE胶束种类的相关性。图12B：刺激性记分(在家兔刺激模型中)与通过HPLC-ELSD测定的％LACE胶束种类的相关性。图13：甘油重量摩尔渗透压浓度标准曲线。IV.发明概述本发明实现了两个主要目标：(a)产生在2-5℃的冷藏储存温度下稳定至少1年的LACE眼科用溶液；和(b)产生和优化了用于制备对眼无刺激性的LACE眼科用溶液的工艺参数。LACE的化学结构显示两个降解点。一个是二硫戊环环的开环，而另一个是氧化和水解降解。如上所述，LACE与氧发生相互作用以快速生成氧化种类。在水中，LACE还对酯键水解敏感，从而生成硫辛酸和胆碱。水解的发生速率与温度相关；水解在较低温度和pH下较少。对储存在可透过的LDPE(低密度聚乙烯)滴眼瓶中的LACE眼科用溶液衍生物、也称作EV06眼科用溶液进行研究。本文描述了方法，即发明人已经研发了将储存期间混合的LACE溶液的氧化减少到最低限度。另外，与LACE的赋形剂混合物的研究确立了某些赋形剂作为稳定因素的关键程度、pH在稳定LACE在水中水解的作用以及重量摩尔渗透压浓度-调节剂例如氯化钠和甘油的作用。最重要的是，本发明描述了与柠檬酸盐、磷酸盐和硼酸盐相反，丙氨酸对LACE的稳定作用。在寻找引起刺激性的原因时，发现LACE在溶于水时会形成胶束和胶束聚集体，这对于两亲性质的化合物而言是常见的。正如定义的，形成胶束的化合物的实例是磷脂酰胆碱、聚乙二醇化磷脂酰胆碱、PEG-硬脂酸酯、山梨醇等。虽然由于分子的两亲性质，LACE的胶束形成现象并不令人意外，但这些聚集体在较低的温度下的形成是令人惊讶的。通过内部开发的RP-HPLC方法测定聚集体的存在。测定可以使用HPLC-UV(图3A)和HPLC-ELSD(图3B)进行。LACE水溶液在冷藏温度(2-5℃)下形成凝胶状结构。还期望这些胶束组件的数量和聚集随着形成胶束的药物的浓度的增加而增加。本发明人已将LACE的胶束聚集程度与眼表面刺激相关联，这是预料不到的且令人惊讶的结果，因为胶束媒介物通常被认为是用于不溶性化合物的药物递送系统。因此，这是首次报告的与胶束聚集体有关的刺激性的说明。一旦发现，这种现象需要通过复合方法来最小化，以与舒适度相关联。胶束聚集体的形成显然与配混温度相关(图4)。自组装物的形成是热力学现象，与有效降低表面自由能以实现最小能量状态相关。当LACE在较低温度(5℃)下在水中混合时，形成具有凝胶状稠度的聚集体。在冷藏温度下配制的组合物对眼有极端刺激性。聚集状态可以通过RP-HPLC方法定量(参见图3A-3B中所示的色谱图)。当通过大规模尺寸排阻色谱法(SEC)测定时，一系列研究实验证明不存在聚合物或寡聚体。其它研究测试了眼部刺激作为在环境空气存在下或在氮存在下进行的过程的函数。刺激与空气或氮气无关。当在室温下配制时，两者都同样舒适，不过，在空气存在下降解产物更高。当在室温下混合LACE时，通过HPLC方法定量的胶束聚集较低。LACE在室温下混合产生了舒适和无刺激性的溶液。另外预料不到的是胶束聚集体的“松解”。正如通过HPLC测定的，溶液在室温下在台面上保持平衡时，在LACE含水组合物中形成的聚集体可以“松解”。另外的实验表明，剧烈的混合实现了解聚。因此，证明这些种类不是具有共价键的永久性种类，而是LACE聚集体的自组装物，与在5℃相比较，其在室温下似乎具有较低的浓度。LACE水溶液在冷冻时形成粘性的稠度。这些解决方案在达到室温并在此温度下储存时，看起来又是同质性的解决方案，这进一步证实了自组装物的温度依赖性的理念。然而，一旦混合，则可以将LACE的无聚集体溶液在冷藏条件下储存以使氧化和水解降解最小化。通过稳定性研究确立LACE的理想储存温度为2-5℃，以便将降解情况的发生减少到最低限度。理想的配混条件被确定为在室温(22-25℃)下产生刺激性最小的溶液，且理想的储存条件被确定为2-5℃，以获得稳定的舒适的用于老视眼的LACE眼科用溶液。为了进一步有助于稳定由LACE制备的眼科用溶液，将氧清除剂小袋置于聚酯薄膜不透性小袋中，用LDPE眼用瓶防止氧化诱导的降解。广泛的稳定性研究表明EV06眼科用溶液实现了一年的稳定性。在本发明中还描述了稳定LACE的各种组合物的实施方案，包括其它类型的含水制剂，包括脂质体，为了稳定药物的主要目的混合的乳剂。V.发明详述A.术语的定义术语“EV06”、“LACE”或“硫辛酸胆碱酯”应当具有如图1中所示的化学结构。如本文所用，LACE制剂是指硫辛酸胆碱酯制剂。例如，LACE1.5％制剂是指具有制剂的1.5％硫辛酸胆碱酯重量的制剂。或者，EV06眼科用溶液1.5％是指含有1.5％硫辛酸胆碱酯组成的制剂。如本文所用，硫辛酸胆碱酯的“衍生物″应当理解为通过硫辛酸胆碱酯与无水药物赋形剂反应形成的任意的化合物或化合物的混合物，不包括硫辛酸和胆碱。如本文所用，术语“自组装物”表示为实现最稳定的能态的分子的热力学组装物。自组装物的实例是在水中形成的胶束，典型地由具有疏水性成分和亲水性成分的分子形成。分子的亲水性成分位于胶束表面上，而内部包含疏水性部分；对于LACE，胆碱首基位于胶束表面上。除非上下文中具体描述或从上下文中显而易见，否则，如本文所用，术语“赋形剂”是指药学上可接受的赋形剂。术语“治疗”是指以有效改善与疾病或障碍相关的病症、症状或参数的用量、方式或模式施用疗法。术语“预防”是指从患病中排除患者，导致患者保持长期不患疾病，或者阻止疾病进展，达到具有统计学显著性的程度或本领域技术人员可检测到的程度。术语“治疗有效量”是指导致预防受试者的眼部疾病或障碍(例如老视眼)的症状或延迟其发作或改善它们或获得期望的生物学结果的活性成分(例如LACE或其衍生物)的用量，所述生物学结果是例如改善的适应性幅度或另一种表示疾病状态的适合的参数。如本文所用，术语“贮存稳定性”或“贮存稳定的”应当理解为在储存时基本上保持不变的组合物或活性成分(例如LACE或其衍生物)的属性或以它们为特征。测定这类贮存稳定性的方法是已知的，例如，可以通过HPLC测定贮存稳定性以确定在该制剂储存一定时间期限后制剂中保留或已经降解的组合物或活性成分(例如硫辛酸胆碱酯)的百分比。例如，贮存稳定的药物组合物可以指这样的组合物，正如通过HPLC测定的，在根据药品标准(ICH)储存后具有在该组合物中存在的至少90％(例如91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99％以上)的活性成分(例如硫辛酸胆碱酯)。如本文所用，术语化合物的“相对保留时间”或“RRT”可以使用等式“RRT＝(t2-t0)/(t1-t0)”计算，其中t0＝无效时间，t1＝硫辛酸胆碱酯保留时间，且t2＝化合物的保留时间，正如通过HPLC测定的。如本文所用，术语“受试者”一般是指动物(例如宠物)或人，包括健康人或具有某些疾病或障碍(例如老视眼)的患者。VI.LACE组合物和实施方案如本文所述，提出的本发明提供了如下实施方案：包含治疗有效量的硫辛酸胆碱酯、赋形剂、缓冲剂药物组合物和相容性的条件以及产生适合作为眼科用滴眼液的生物相容性(无刺激性)和稳定的溶液的方法和工艺。硫辛酸胆碱酯或其衍生物在药物组合物中的浓度可以是在占该组合物重量0.01-0.1％、0.1％-10％(例如0.1％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％或基于这些特定数值的任意范围)的任意浓度。在一些实施方案中，硫辛酸胆碱酯在药物组合物中的浓度为1％。在一些实施方案中，硫辛酸胆碱酯在药物组合物中的浓度为3％。在一些实施方案中，硫辛酸胆碱酯在药物组合物中的浓度为4％。LACE在组合物中的优选范围在1-3％。在该范围内，优选的组合物范围是1.5-4％。在另一个实施方案中，提出的本发明中的有效组合物是包含LACE和丙氨酸的水性制剂，其中丙氨酸的浓度为0.1-0.5％、0.5％-1％、1％-1.5％、1.5％-3％。在该范围内，优选的组合物是0.5％丙氨酸和1.5％LACE。在一个优选的实施方案中，有效的包含LACE和丙氨酸的组合物包含30-150ppm浓度的苯扎氯铵作为防腐剂。在另一个实施方案中，在LACE水性制剂中包括另外的防腐剂，例如聚季铵、SofZia，其浓度为经FDA批准用于人体应用的浓度。另外的防腐剂可以是2-苯乙醇、硼酸、乙二胺四乙酸二钠。在另一个实施方案中，包含LACE的眼科用溶液是不含防腐剂的单剂量无菌产品。由于以高浓度溶于水的LACE自我组装的胶束溶液可能显示出一些刺激性，所以赋予生物相容性溶液的方法可以为包封在脂质体中。在这种情况下，脂质体内部将包含LACE。脂质体通常与眼表面生物相容。在另一个实施方案中，所述药物组合物具有浓度为0.1％-10％的甘油。在一个优选的实施方案中，该组合物具有0.1-5％的甘油浓度。在一些实施方案中，所述防腐剂是苯扎氯铵，且所述生物化学能源是丙氨酸。在一些实施方案中，硫辛酸胆碱酯具有抗衡离子，其选自氯化物、溴化物、碘化物、硫酸根、甲磺酸根、硝酸根、马来酸根、乙酸根、柠檬酸根、富马酸根、富马酸氢根、酒石酸根(例如(+)-酒石酸根、(-)-酒石酸根或其混合物)、酒石酸氢根、琥珀酸根、苯甲酸根和氨基酸例如谷氨酸的阴离子。适合的缓冲剂可以是本领域已知可以达到药物组合物的期望的pH(例如本文所述)的任意种。非限制性实例包括磷酸盐缓冲液(例如一水合磷酸二氢钠、无水磷酸氢二钠)、乙酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液、硼酸盐缓冲液和HBSS(Hank平衡盐溶液)。缓冲剂的适合的用量可以便利地基于期望的pH计算。在本文所述的任意实施方案中，缓冲剂的用量为眼科用产品可接受的用量。然而，在一些实施方案中，所述药物组合物不包括缓冲剂。在一些实施方案中，用酸(例如盐酸)或碱(例如氢氧化钠)将水溶液或最终药物组合物的pH调整至期望的pH范围(例如如本文所述)。在另外的实施方案中，缓冲系统可以选自硼酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、钙缓冲液及其组合和混合物。在优选的实施方案中，缓冲液是氨基酸缓冲液。在另一个优选的实施方案中，氨基酸缓冲液包含丙氨酸。在一些实施方案中，硫辛酸胆碱酯具有抗衡离子，其选自氯化物、溴化物、碘化物、硫酸根、甲磺酸根、硝酸根、马来酸根、乙酸根、柠檬酸根、富马酸根、富马酸氢根、酒石酸根(例如(+)-酒石酸根、(-)-酒石酸根或其混合物)、酒石酸氢根、琥珀酸根、苯甲酸根和氨基酸例如谷氨酸的阴离子。另外的抗衡离子是硬脂酸根、丙酸根和糠酸根。在一些实施方案中，所述眼科用制剂具有4-8的pH。在一些实施方案中，所述眼科用制剂具有4.5的pH。在一些实施方案中，所述眼科用制剂包含至少一种选自生物化学能源、防腐剂、缓冲剂、张度剂、表面活性剂、粘度调节剂和抗氧化剂的成分。在一些实施方案中，所述药物组合物包含抗氧化剂。在一些优选的实施方案中，所述抗氧化剂包含抗坏血酸盐。在另一个优选的实施方案中，所述抗氧化剂包含谷胱甘肽。适合的抗氧化剂可与是本领域已知的那些的任意种。非限制性实例包括抗坏血酸、L-抗坏血酸硬脂酸酯、α硫代甘油、乙二胺四乙酸、异抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、N-乙酰半胱氨酸、L-肉碱、柠檬酸、醋酸生育酚、二氯异氰尿酸钾、二丁基羟基甲苯、2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚、大豆卵磷脂、巯基乙酸钠、硫代苹果酸钠、天然维生素E、生育酚、ascorbylpasthyminate、焦亚硫酸钠、丁基羟基茴香醚、1，3-丁二醇、四[3-(3，5-二叔丁基-4-羟基苯基)]丙酸季戊四醇酯、没食子酸丙酯、2-巯基苯并咪唑和硫酸羟喹啉。抗氧化剂的适合的用量可以占该组合物重量的0.1％-5％(例如0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％或基于这些特定数值的任意范围)。在本文所述的任意实施方案中，所述抗氧化剂的用量为眼科可接受的。在一些实施方案中，在惰性气氛中，例如在高纯度氮气或氩气气氛中，通过混合制备药物组合物。在一个优选的实施方案中，在氮气与低于2ppm的氧气的气氛中混合药物组合物。在一些实施方案中，通过在20-25℃的温度下混合制备药物组合物。在一个优选的实施方案中，将固体LACE分子研磨成细粉。优选地，将固体LACE分子研磨成无团簇块的粉末。在一个实施方案中，粒径小于500微米。在另一个优选的实施方案中，粒径小于100微米。在一个优选的实施方案中，通过下列步骤制备药物组合物：开始给维持在室温(20-25℃)下的水溶液脱气，然后将赋形剂溶于溶液，随后在剧烈溶解下、在缓慢氮气吹扫气氛中分部分缓慢地加入固体LACE。在一个实施方案中，将所述药物组合物剧烈搅拌4小时至24小时。在一个优选的实施方案中，将所述药物组合物剧烈搅拌4小时至8小时。在另一个优选的实施方案中，将所述药物组合物剧烈搅拌8小时。通过任一方法制备的药物组合物可以具有至少3个月(例如3个月、6个月、9个月、1年或1年以上的贮存稳定性)。所述药物组合物在5℃下储存一定时间期限后还可以具有有利的药物相关降解物特性(例如总药物相关杂质或特定药物相关杂质的量)。用于测定制剂中药物相关降解物的量的分析工具(例如HPLC)是已知的。适合的生物化学上可接受的能源可以是本领域已知的那些的任意种。例如，生物化学可接受的能源可以通过作为能量代谢途径、特别是葡萄糖代谢途径的中间体通过参与有利于还原。适合的生物化学上可接受的能源的非限制性实例包括氨基酸或其衍生物(例如丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、2-酮戊二酸、谷氨酸和谷氨酰胺等)、糖或其代谢物(例如葡萄糖、葡萄糖-6-磷酸(G6P))、丙酮酸(例如丙酮酸乙酯、乳糖、乳酸盐或其衍生物)、脂质(例如脂肪酸或其衍生物，例如单酸甘油酯、甘油二酯和甘油三酯和磷脂)等(例如NADH)。生物化学可接受的能源的适合的量可以占该组合物重量的0.01％-5％(例如0.05％、0.1％、0.2％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％或基于这些特定数值的任意范围)。在一些实施方案中，生物化学能源为丙酮酸乙酯。在一些实施方案中，生物化学能源为丙氨酸。在一些实施方案中，丙酮酸乙酯或丙氨酸的量占该组合物重量的0.05％-5％(例如0.05％、0.1％、0.2％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％或基于这些特定数值的任意范围)。在一些实施方案中，丙氨酸的量占该组合物重量的0.5％。在本文所述的任意实施方案中，生物化学上可接受的能源的量为眼科可接受的量。适合的防腐剂可以是本领域已知的那些的任意种。非限制性实例包括苯扎氯铵(BAC)、cetrimonium、三氯叔丁醇、依地酸二钠(EDTA)、聚季铵-1聚环六亚甲基双胍(PHMB)、稳定的氧氯复合物过硼酸钠和药物组合物中防腐剂的适合的用量可以占该组合物重量的0.005％-0.1％(例如0.005、0.01、0.02％、0.05％、0.1％或基于这些特定数值的任意范围)。在一些实施方案中，所述防腐剂是苯扎氯铵。在一些实施方案中，苯扎氯铵的用量占该组合物重量的0.003％-0.1％(例如0.003、0.01、0.02％、0.05％、0.1％或基于这些特定数值的任意范围)。在一些实施方案中，苯扎氯铵的用量占该组合物重量的0.01％。在本文所述的任意实施方案中，所述防腐剂的用量为眼科可接受的。在一些实施方案中，所述药物组合物不含防腐剂。适合的张度剂可以是本领域已知的那些的任意种。非限制性实例包括氯化钠、氯化钾、甘露糖醇、葡萄糖、甘油、丙二醇及其混合物。张度剂在药物组合物中的适合的用量为可以实现200-460mOsm(例如260-360mOsm或260-320mOsm)的重量摩尔渗透压浓度的任意用量。在一些实施方案中，所述药物组合物为等渗组合物。在一些实施方案中，张度剂(例如氯化钠)的量占该组合物重量的0.1％-5％(例如0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％或基于这些特定数值的任意范围)。在本文所述的任意实施方案中，所述张度剂的用量为眼科可接受的。适合的表面活性剂可以是本领域已知的那些的任意种，包括离子型表面活性剂和非离子型表面活性剂。有用的非离子型表面活性剂的非限制性实例包括聚氧化乙烯脂肪酸酯(例如聚山梨醇酯80[聚(氧化乙烯)油酸山梨坦]、聚山梨醇酯60[聚(氧化乙烯)硬脂山梨坦]、聚山梨醇酯40[聚(氧化乙烯)棕榈山梨坦]、聚(氧化乙烯)月桂山梨坦、聚(氧化乙烯)三油酸山梨坦或聚山梨醇酯65[聚(氧化乙烯)三硬脂山梨坦])、聚氧乙烯氢化蓖麻油(例如聚氧化乙烯氢化蓖麻油10、聚氧化乙烯氢化蓖麻油40、聚氧化乙烯氢化蓖麻油50或聚氧化乙烯氢化蓖麻油60)、聚氧乙烯聚氧丙烯二醇(例如聚氧乙烯(160)聚氧丙烯(30)二醇[普卢兰尼克F681]、聚氧乙烯(42)聚氧丙烯(67)二醇[普卢兰尼克P123]、聚氧乙烯(54)聚氧丙烯(39)二醇[普卢兰尼克P85]、聚氧乙烯(196)聚氧丙烯(67)二醇[普卢兰尼克F1271]或聚氧乙烯(20)聚氧丙烯(20)二醇[普卢兰尼克L-441])、聚氧乙烯(40)单硬脂酸酯、蔗糖脂肪酸酯及其组合。在一些实施方案中，所述表面活性剂为聚山梨醇酯80。表面活性剂在药物组合物中的适合的用量可以占该组合物重量的0.01％-5％(例如0.05、0.1、0.2％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％或基于这些特定数值的任意范围)。在一些实施方案中，所述表面活性剂为聚山梨醇酯80，且聚山梨醇酯80的用量可以占该组合物重量的0.05％-5％(例如0.05、0.1、0.2％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％或基于这些特定数值的任意范围)。在一些实施方案中，聚山梨醇酯80的用量占该组合物重量的0.5％。在本文所述的任意实施方案中，所述表面活性剂的用量为眼科可接受的。然而，在一些实施方案中，所述药物组合物不含表面活性剂。适合的粘度调节剂可以是本领域已知的那些的任意种。非限制性实例包括卡波姆凝胶、纤维质剂(例如羟丙基甲基纤维素)、聚卡波菲、聚乙烯醇、葡聚糖、明胶甘油、聚乙二醇、泊洛沙姆407、聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮及其混合物。粘度调节剂的适合的用量占该组合物重量的0.1％-5％(例如0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％或基于这些特定数值的任意范围)。在本文所述的任意实施方案中，所述粘度调节剂的用量是眼科可接受的。在一些实施方案中，所述药物组合物不含粘度调节剂(例如聚合物粘度调节剂，例如羟丙基甲基纤维素)。在一些实施方案中，所述药物组合物的特征在于下列的一项或多项：(a)具有占该组合物重量的0.1％-10％(例如0.1％、1.0％、1.5％、3％、4％、5％或基于这些特定数值的任意范围)的硫辛酸胆碱酯浓度；(b)具有占该组合物重量的0.003％-0.1％(例如0.01％)的防腐剂(例如苯扎氯铵)浓度；(c)具有占该组合物重量的0.1％-5％(例如0.5％)的生物化学能源(例如丙氨酸)；和(d)具有占该组合物重量的0.5％-5％(例如2.7％)的甘油浓度。在一些实施方案中，所述药物组合物主要由1-3％重量的甘油、0.5％重量的丙氨酸、0.005-0.01％重量的苯扎氯铵、1-3％重量的硫辛酸胆碱酯和水组成，其中该药物组合物的pH为4.3-4.7。在一个实施方案中，将所述眼科用组合物施用于受试者的每只眼，每日1次、每日2次、每日3次和每日4次。在一些实施方案中，本发明还提供了用于储存包含在水溶液中的活性成分的药物组合物的系统，其中所述活性成分(例如硫辛酸胆碱酯或其衍生物)对水溶液中的水解敏感。在一个优选的实施方案中，将所述药物组合物储存在LDPE眼科用滴瓶中，该瓶在填充过程中用氮气覆盖，加帽，然后包装在第二层聚酯薄膜中，其为包含氧气吸收剂的不透气的小袋。在另一个实施方案中，所述滴瓶或单元为聚对苯二甲酸乙酯(PET)。在另一个实施方案中，所述滴瓶由具有低透气性的材料构成。在另一个实施方案中，滴瓶可以由具有低透气性的任意材料构成。在另一个实施方案中，所述滴瓶可以为通过吹填密封技术填充的单位剂量。在一个实施方案中，将所述药物组合物储存在2-5℃下3个月至2年时间期限。VII.治疗方法包含硫辛酸胆碱酯或其衍生物(例如如本文所述)可以用于治疗或预防与氧化损伤相关的疾病或障碍的方法中。与氧化损伤相关的疾病或障碍是已知的。在一些实施方案中，本发明提供了治疗有需要的受试者中的眼病的方法，包括向该受试者的眼施用治疗有效量的本文所述的任意药物组合物。在一些实施方案中，所述眼病是老视眼、干眼、白内障、黄斑变性(包括老年性黄斑变性)、视网膜病变(包括糖尿病视网膜病变)、青光眼或眼部炎症。在一些实施方案中，所述眼病为老视眼。用于治疗或预防本文的眼病的方法的药物组合物的适合的用量可以为任意的治疗有效量。在一些实施方案中，该方法包括向受试者的眼施用一定用量的药物组合物，该用量可有效地将晶状体的适应幅度增加至少0.1屈光度(D)(例如0.1、0.2、0.5、1、1.2、1.5、1.8、2、2.5、3或5屈光度)。在一些实施方案中，该方法包括向受试者的眼施用1-5滴(约40uL/滴)的药物组合物。在一些实施方案中，用所述药物组合物将受试者的眼每日治疗1、2、3、4或5次或5次以上，每次使用1-5滴(约40μL/滴)。在一些实施方案中，用所述药物组合物将受试者的晶状体或眼每次治疗1、2、3、4或5滴或5滴以上。在一些实施方案中，用本文的药物组合物将受试者的晶状体或眼每日治疗2次或3次，每次使用1或2滴(约40uL/滴)。该方法包括可以对任意年龄的患者进行的预防方法。该方法还包括对任意年龄的患者、特别是对20-75岁的患者进行的治疗方法。下列实施例是示例性的，但不限制请求保护的实施方案的范围。实施例实施例1表1：硫辛酸胆碱酯(LACE)的一般性质实施例2与LACE加工溶液的混合时间相关的胶束种类动力学本部分中所述的实验表明，LACE胶束种类在25℃下稳定并且在延长混合时间内减少。结果表明这些自组装系统诸如胶束和胶束聚集体的种类特征的可逆性。通过分子的自发性自组装形成的胶束被平衡系统的总自由能驱动。本实验显示了该平衡状态随混合期限的延长而实现的动力学。目标：○通过确认生长的胶束种类已经稳定来建立过程-时间框架。○建立“保持时间”。方法：○在用起泡的氮气使媒介物脱氧后，在25℃下制备两批200-g批量的1.5％LACE。在LACE溶解过程中氮气持续起泡。○照此使用GMP批号#2(G2-14LAC)制备一批，其中有明显团簇块，使用已经研磨成细粉的G2-14LAC样品、应用研钵和研杵制备另一批。○在LACE溶解和pH调整后，在恒定氮气覆盖下将各批量搅拌24小时，维持溶解的氧在～1.6ppm(相对于8.2ppm饱和溶解度)。在1h、3h、4h、6h、8h、9h和24h时间点，用注射器取出约5-15mL并且无菌填充入滴瓶(5mL/瓶)，在瓶中无氮气覆盖(仪器处于该批量的使用中)。○将所有时间点的样品稀释至10mg/g，且然后注射用于RP-HPLC分析，其中ELSD检测在从该批量溶液中取出的30分钟内。○在24-小时时间点后，无菌过滤批量溶液，并且分成两个～50mL部分-一部分保持在5℃，另一个50-mL部分保持在25℃。将所有部分用吹入容器的氮气覆盖。○再经过24-小时保持时间结束时，将每部分填充入的滴眼瓶，瓶中有氮气覆盖。对溶出的观察结果○将G2-14LAC的团簇部分加入到制剂KW-LACE-01-86-1中，历时约5分钟，而团簇块的一些需要再经过20分钟以溶解。○将粉状的G2-14LAC加入到制剂KW-LACE-01-86-2中，历时约15分钟，因为每个装满的软膏刀聚集成漂浮在表面上的薄片材料，其无法即刻分散。因此，加入另一部分，直到前述部分被拖入涡旋为止。任意一个部分溶解所估计的时间约为10分钟，而全部工序需要约25分钟。结果○RT＝8分钟时的峰(与胶束种类相关)在来自第一个取样时间点的两种制剂中是明显的。○在8min的％面积中的两批之间不存在一致性差异。尽管第二批使用粉状LACE形成的峰(胶束种类)在一些时间点具有胶束种类的较高水平。○8min的峰％面积在24小时时明显减小，如下表中所示。○对于两批，最终pH都为4.54。表2：通过充分混合的LACE胶束种类的形成和松团的动力学结果表明在8.1分钟时的LACE胶束种类随混合时间的延长而减少到最低限度。在8.1分钟时的峰随更长的混合时间而显著减小。还测定了每种溶液的硫辛酸胆碱酯降解物。如上所述，LACE的降解机制是氧化和水解，从而产生氧化和水解的种类。表3：作为混合函数的EV06眼科用溶液的杂质(相关物质)分析数据显示LACE的降解产物随混合时间延长而上升。因此，用于混合EV06眼科用溶液的最终工艺条件包括最长8小时以得到具有最少降解物的无刺激性溶液。实施例3混合温度与存在的胶束LACE种类的相关性图4中所示的数据是在氩气气氛中和冷藏条件下配制的LACE氯化物溶液。该溶液对于眼表面具有极端的刺激性。胶束种类百分比为主要LACEAPI峰的8-10％(箭头表示的胶束种类，在保留时间7.9-8.1分钟)，即通常在室温下混合的溶液中无法观察的浓度。实施例4团簇块与胶束LACE种类形成的相关性图5A是由具有固体“团簇块”的LACE批料制备的EV06眼科用溶液的RP-HPLC氯化物色谱图。由这批API(活性药物成分，固体LACE药物物质)制备的溶液显示胶束LACE种类(箭头所示)的百分比(10-15％)高于由许多粉状的API制备的溶液(图5B)。因此，尽管两种溶液看起来完全溶解，但由非团簇块API配制的溶液具有较低浓度的胶束LACE种类。当与眼部刺激相关时，图5A中所示的溶液在家兔模型中具有更高的刺激评分。这导致了在配混之前加入去团簇块程序来提供粉状材料。实施例5赋形剂与LACE的相容性研究概述这些实验的目的在于通过制剂组成和微环境(例如pH)中的系统性变化来提取出制剂中可能的不稳定变量。硫辛酸和任何硫辛酸衍生物会在热、光和氧气中发生降解和聚合，导致二硫戊环开环。因此，可诱导氧化自由基断裂的赋形剂的存在可能是不稳定因素。制剂表格1和2系统地研究了制剂中已经存在的赋形剂的作用，以此作为可能的不稳定因素。在这些实验中用于LACE的制剂包含纯化水中的药物物质、丙氨酸、甘油、苯扎氯铵，其中加入1N氢氧化钠或1N盐酸以达到4.4-4.6之间的pH和290-300mOsm/kg的渗透压。本文中描述的实验是用于鉴定可以稳定LACE眼科用溶液的赋形剂的相容性研究。制剂表格#1测试了以下(a)-(e)中给出的变量。制剂在氮气吹扫的手套箱中制备并无菌过滤。所有制剂在57℃的加速条件下进行测试并且通过HPLC测试以用于测定在T＝0、3.5天和7天时的含量和杂质。在表格#1中测试了总计19个制剂。(a)pH的作用：在pH3.5、4和5下制备制剂，并且与在pH4.5下的对照制剂比较。正如图6中所示，LACE降解速率在3.5-5的所有pH水平下均等同。(b)丙氨酸的作用：通过与原始制剂(对照)比较降解速率推定制剂中丙氨酸的作用。正如图6中所示，不存在丙氨酸显然加速了LACE的降解速率。因此，丙氨酸是EV06眼科用制剂中的关键赋形剂。(c)苯扎氯铵和甘油的作用：据推测，甘油中包含的过氧化物可催化氧化；类似地，据推测，由于自由基断裂和随后的氧化，BAC可能会使药物物质失去稳定性。如图7中所示，不含苯扎氯铵的制剂的稳定性明显高于对照。不含甘油的原型的稳定性也高于对照。此外，加入到制剂中的氯化钠(替代甘油，调节重量摩尔渗透压浓度)显然具有不稳定作用(也显示在图7中)。在使用甘油、氯化钠、亚硫酸盐和pH组合的不同组合与不含苯扎氯铵的所有变化形式的实验中，显然所有不含苯扎氯铵的制剂的稳定性均明显高于对照(图5)。图7和9中的实验表明，消除LACE中的苯扎氯铵可以稳定制剂。对于EV06眼科用组合物，使苯扎氯铵含量最小化至50ppm可能具有主要的稳定因素。氯化钠表现出不稳定作用，因此认为甘油在最终EV06组合物中作为张度剂更加适合。(d)亚硫酸盐的作用：用亚硫酸盐进行了各种实验(图8)，其中使用了不同水平的亚硫酸盐。在各种pH值(4，4.5)和浓度下将亚硫酸盐作为抗氧化剂加入到制剂中(图8)。亚硫酸盐的存在显然没有显著改善LACE的稳定性。目前尚不清楚是否存在有害作用，因为制剂中0.1％的亚硫酸盐与对照相当。(e)甘油的作用：通过甘油的系统性消除，在各种制剂组合中研究了甘油的作用。如图7和10所示，不含甘油的组合显然比对照更稳定。然而，由于氯化钠的高度去稳定作用，所以选择甘油作为张度调节的关键赋形剂。(f)缓冲剂的作用：测试了各种缓冲的组合物。乙酸盐缓冲液和乙酸盐+硼酸显然稳定制剂。实验a)HPLC方法设置：HPLC测定由50分钟流动相梯度组成，所述流动相梯度由如下构成：(A)0.05M磷酸二氢钠、0.005M1-庚磺酸钠盐、0.2％v/v三乙胺，用磷酸调节至pH4.5；和(B)乙腈。所用的分析柱为YMCPackODSAQP/NAQ125052546WT；分析检测波长为225nm。b)制剂制剂经过精心制备以确保LACEAPI不暴露于氧气或热。在手套袋内，在惰性N2气氛下将API等分入洁净的玻璃瓶中，并将其用锡纸包裹储存在-20℃的冰箱中，直到使用时为止。制剂用高纯度赋形剂和无菌玻璃器皿制备。所有赋形剂均在储备溶液中预先制备并且在加入API和最终pH调节之前混合在一起。将制剂制表在附录A中。II.结果和讨论图6是在57℃下％LACEAPI与天数关系的示意图(在T＝0、3.5天和7天内)，其系统性地比较了在pH3.5、4、4.5(原始)、5下制备的制剂和对照w/o丙氨酸。甚至在T＝0时，制剂w/o丙氨酸已经降解了相当的API含量。正如图6中所示，在这些条件下在pH3.5-5制剂是等同的。图7是比较如下变量的制剂的示意图：(a)对照(原始)与对照+0.25％氯化钠、对照+0.25％氯化钠、w/o甘油；(b)对照(原始)与对照、w/o苯扎氯铵；(c)对照(原始)与不含甘油的原始制剂。正如在图7中观察到的，将氯化钠添加到原始制剂中无法稳定该制剂。图8显示亚硫酸盐在57℃对LACE稳定性的作用。制备浓度为0.05％亚硫酸盐(■，▲)和0.1％亚硫酸盐(x)在pH4和4.5的包含亚硫酸盐的制剂。添加亚硫酸盐无法稳定原始制剂(◆)。图9进一步阐明了消除苯扎氯铵的潜在稳定作用。全部不含苯扎氯铵的制剂变化形式均优于对照原始制剂(pH4.5)。制剂变化形式为在pH4、4.5不含BAC(▲，■)、无甘油/无BAC+0.9％氯化钠(x)、在pH4和4.5无BAC+0.05％亚硫酸盐(●，■)的组合物。图7和10比较不同的组合物中作为pH、亚硫酸盐和氯化钠函数的消除甘油的作用。在氯化钠和亚硫酸盐存在下无甘油、在氯化钠和亚硫酸盐存在下无-BAC制剂(+)和无甘油w/BAC制剂(＊)优于原始制剂(◆)。图11阐明了各种缓冲的组合物对LACE稳定性的作用。将原始的制剂(pH4.5)与乙酸盐缓冲组合物(■，x，＊，●)和硼酸盐pH7.5比较。作为抗氧化剂加入的依地酸钠无法稳定制剂。乙酸盐缓冲剂和乙酸盐缓冲剂+硼酸显然优于对照制剂。概括而言，消除苯扎氯铵显然持续增强了稳定性。消除甘油也是积极步骤。已知甘油具有残留存在的甲醛，其偶然导致API降解。有意义地，添加依地酸盐或亚硫酸盐不具有积极作用。另一种抗氧化剂例如抗坏血酸钠可能具有积极作用。表4：相容性实验制剂实施例6：眼部刺激与胶束LACE种类百分比的相关性图12A和12B一般提供了众多混合的批量中刺激与胶束LACE种类的相关性的快照。实施例7用甘油对重量摩尔渗透压浓度的调整方法用于包含药物的制剂的必需重量摩尔渗透压浓度范围在280-320mOsm/kg。优选地，要求所有LACE制剂在290-310mOsm/Kg内。由于LACE对重量摩尔渗透压浓度做出贡献，所以每种制剂将具有可变的甘油浓度以实现必需的重量摩尔渗透压浓度。I.概述：最终调整的组合物表5：具有调整的甘油浓度的EV06眼科用溶液的最终组成II.实验细节：A.包含甘油的安慰剂制备一系列安慰剂。所有安慰剂和随后制备的包含LACE的溶液包含如下可变量的甘油：●0.5％(5mg/g)丙氨酸●0.005％(0.05mg/g)苯扎氯铵●少量1N氢氧化钠、1N盐酸以便将pH调整至4.5●注射用水(加入至最终重量)表6：包含甘油的安慰剂(甘油浓度的作用)甘油百分比重量摩尔渗透压浓度(mOsm/kg)0.5％1141.0％1721.5％2332.0％2922.5％354B.包含LACE的制剂基于上述甘油重量摩尔渗透压浓度标准曲线(参见表6)和对于每种1％LACE显示另外的44-55mOsm/kg(平均值48mOsm/kg)的申请人观察结果，制备一系列溶液以证实LACE实际的渗透贡献。总重量摩尔渗透压浓度的目标为300mOsm/kg。表7：EV06组合物的甘油浓度这些数据表明，LACE对重量摩尔渗透压浓度的作用在一定程度上大于预期，对于每一1％约为57-60mOsm/kg。因此，制备具有适度改变的目标重量摩尔渗透压浓度的不含LACE的全系列溶液，且由此目标甘油含量不同。使用与安慰剂中使用相同的丙氨酸/苯扎氯铵pH4.5储备溶液制备全部溶液，使得最终组成恒定为：0.5％(5mg/g)丙氨酸0.005％(0.05mg/g)苯扎氯铵少量1N氢氧化钠、1N盐酸以便将pH调整至4.5注射用水(加入至每种制剂的最终重量为5.0g)表8：EV06组合物的重量摩尔渗透压浓度的调整C.无菌制剂基于这些实验结果，制备每种制剂的无菌过滤的10.0-g批量，其具有如下目标组成，并且将它们包装在无菌滴眼瓶中(2mL/瓶)：表9：EV06组合物的最终组合物表格LACE浓度甘油(％)丙氨酸(％)苯扎氯铵(％)0％2.07％0.5％0.005％1％136％0.5％0.005％2％1.07％0.5％0.005％2.5％0.80％0.5％0.005％3.0％0.53％0.5％0.005％实施例8LACE药物组合物的制备方法制备LACE药物组合物的方法如下：○在室温下，将80％批量重量的注射用水(WFI)加入到玻璃混合容器中。用氮气吹扫水以达到≤10ppm氧。○逐步加入丙氨酸、甘油和BAC并且混合至溶解为止。○用HCI或NaOH将pH调整至4.4-4.6。○用研钵和研杵在氮气气氛中研磨LACE以松团并且在混合的同时缓慢加入。○加入脱氧的注射用水以达到最终批量目标重量。○将批量混合总计8小时以确保完全分散和溶解。○如果需要，用NaOH或HCI将pH调整至4.4-4.6。○如果需要，用甘油将重量摩尔渗透压浓度调整至290-310。○混合8小时后，通过胶囊SHC0.5/0.2μm无菌滤器将EV06原料药产品溶液无菌过滤入保温袋。○通过离心或冰浴将保温袋中的原料药产品溶液保持在5℃。○进行过滤始沸点测试以确保滤器的完整性。○将无菌过滤的原料药溶液无菌转移至100级室内并且填充入预先灭菌的瓶中。○在氮气覆盖气氛中将无菌尖端和帽施加到瓶上。○将密封瓶转移至托盘上，借助于氮气吹扫包装入袋并且即刻转移至5℃储存。实施例9LACE制剂的稳定性研究早期制剂原型包含乙二胺四乙酸钠和0.01％苯扎氯铵。使用和不使用这些赋形剂的稳定性研究表明，依地酸钠不能稳定LACE。存在过量苯扎氯铵会使药物稍不稳定。因此，最终制剂不含依地酸钠和0.005％苯扎氯铵。通过微生物测试，目前制剂组合物中0.004％苯扎氯铵显示出作为药物产品中的防腐剂是有效的。为了进一步稳定药物制剂，使用瓶装EV06眼科用溶液在存在拉链锁、不透蒸气箔袋中包含的除氧袋存在和不存在下对中等规模R&D批次进行系统稳定性研究(5℃、25℃和40℃)。在密封在可重复密封箔袋中的氧气清除袋存在下，在5℃下储存的产品瓶在12个月时显示出稳定性。在整个研发过程中实施了额外的预防措施，以稳定最终制剂免于由于暴露于环境氧气和非冷藏条件而降解。在氮气气氛中处理药物物质(排除氧气并使湿度降至最低)并在氮气保护下混合以实现氧气暴露最小化。混合后，将产品填充入不透气的保温袋中并在冷藏条件下储存，直至随后装瓶。将包含散装溶液的保温袋在填充期间保持冷却。将氮气覆盖层置于每个瓶中的药物溶液上，以使氧暴露最小化。表10：EV06眼科用溶液(3.0％)的稳定性相关化合物：LA＝R-α-硫辛酸(USP标准)。当前第1页1 2 3