本发明具体涉及2-甲基丁酸乙酯在制备抗微小隐孢子虫药物中的应用。
背景技术：
隐孢子虫(Cryptosporidium)呈世界性分布。感染人和大多数哺乳动物的为微小隐孢子虫(Cryptosporidiumparvum)。隐孢子虫是一种重要的引起人和动物腹泻的机会性致病原虫。严重感染者，小肠绒毛表面可出现凹陷、萎缩，变短变粗，或融合、移位和脱落；可导致消化吸收障碍和腹泻。
免疫功能正常者感染本虫后，常表自限性腹泻，粪便呈水样，量大，可有腹部痉挛性疼痛，恶心、厌食、发热和全身不适等症状。免疫功能异常的病人，疾病的发作多为渐进性，但腹泻的程度往往更为严重，粪便量可达5-10L。如果患者的免疫缺陷状况得不到纠正，感染便不能够清除。腹泻可长期甚或终生持续下去。继而导致营养吸收障碍，甚至出现肠道外组织器官，如肺脏和胆道系统感染。隐孢子虫是艾滋病人合并肠道感染的常见病原体，感染后常常危及患者的生命。
目前，对于本病的治疗尚无理想的有效药物。文献报道大蒜素、巴龙霉素治疗，有一定疗效。
2-甲基丁酸乙酯(化学名为：甲基-2-丁酸乙酯，二氢草莓酸乙酯；该化合物的分子式是C7H14O2，分子量130.19，CAS登录号：7452-79-1，其化学结构如式(Ⅰ)所示。
2-甲基丁酸乙酯是具有水果香气(类似苹果皮，菠萝皮和未成熟的梅子皮香气)的一种按照GB 2760-96规定为允许使用的食用香料，主要用以配制苹果、草莓、葡萄、覆盆子、芒果等热带水果型香精，在最终加香食品中浓度约为0.5～5mg/kg，为美国香味料和萃取物制造者协会(FEMA)GRAS认证目录中化合物(一般公认的安全类添加剂)。
目前为止尚未有2-甲基丁酸乙酯具有抗微小隐孢子虫作用的报导，通过2-甲基丁酸乙酯已知的性质无法推断其是否具有抗微小隐孢子虫的作用。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供2-甲基丁酸乙酯在制备抗微小隐孢子虫药物的应用。
本发明首次发现了2-甲基丁酸乙酯具有抑制抗微小隐孢子虫的作用，可以利用2-甲基丁酸乙酯、2-甲基丁酸乙酯的立体异构体、2-甲基丁酸乙酯的水合物、2-甲基丁酸乙酯的药学上可接受的盐等来制备治疗和/或预防和/或辅助治疗微小隐孢子虫作用的增殖性疾病。由于2-甲基丁酸乙酯是食品级香精的组成成分，为美国香味料和萃取物制造者协会(FEMA)GRAS认证目录中化合物(一般公认的安全类添加剂)，对人和动物体无毒副作用，安全环保。
本发明通过将2-甲基丁酸乙酯与可接受的辅料，制成散剂，添加至饲料中，混匀，按日常饲料量喂食小白鼠，2-甲基丁酸乙酯的添加量为每100kg饲料中添加5g 2-甲基丁酸乙酯；或将2-甲基丁酸乙酯制成2-甲基丁酸乙酯水溶性粉剂，溶于水中，按日常饮水量喂食小白鼠，2-甲基丁酸乙酯的添加量为每100kg水中溶于2.5g 2-甲基丁酸乙酯。通过动物感染实验证实添加2-甲基丁酸乙酯可使抗微小隐孢子虫排卵囊量降低89％以上，具有较好的抗隐孢子虫作用。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本说明作进一步的说明，但并不局限如此。
实施例1
2-甲基丁酸乙酯散剂的制备：取5g 2-甲基丁酸乙酯(含量不低于99％)和95g淀粉混匀，即可。
散剂的用法用量：将上述100g散剂拌100kg饲料的比例添加，按日常食量喂食。
实施例2
2-甲基丁酸乙酯水溶性粉剂的制备：由于2-甲基丁酸乙酯不溶于水，利用药用辅料2羟丙基-β-环糊精制备可溶性粉。取2.5g 2-甲基丁酸乙酯(含量不低于99％)，按照1:2摩尔比称取2羟丙基-β-环糊精50g，加入200ml无水乙醇，搅拌6小时，减压蒸发至干，即可。
水溶性粉剂的用法用量：将上述52.5g粉剂溶于100升水的比例添加，按正常饮水量喂食。
下面结合具体的实验说明2-甲基丁酸乙酯的抗微小隐孢子虫中的效果。
实验材料：
对照药物：文献报道的具有抗微小隐孢子虫效果的巴龙霉素(98％，上海抚生生物技术有限公司，批号001010)，使用量为5mg/kg体重。
2-甲基丁酸乙酯组：实施例1的2-甲基丁酸乙酯散剂，实施例2的2-甲基丁酸乙酯水溶性粉剂。
微小隐孢子虫卵囊：微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)广东株卵囊，由广东省农业科学院动物卫生研究所保存，使用前在SPF级昆明鼠体内复壮。
小鼠：SPF级昆明鼠，6周龄，雄性；由南方医科大学实验动物中心提供，饲养于SPF动物舍内；自由采食和饮用纯净水；试验前观察小鼠有无隐孢子虫病临床症状及连续2d检查粪便有无隐孢子虫卵囊，备用。
饲料：由南方医科大学实验动物中心提供。
实验方法：
分组：按试验分组及处理将50只SPF级昆明鼠，随机分成5组，每组10只，并适当调整使每组小鼠总体重大致相等。
处理：除第I(空白对照)组外，其余各组小鼠均经口灌服微小隐孢子虫卵囊l×105个/只；除第I组和第Ⅱ(阳性对照)组外，其余各组小鼠均于感染后立即饲喂或饮用含抗隐孢子虫药物的饲料或水，其中，第Ⅲ组饲喂含巴龙霉素的饲料，第Ⅳ组饲喂实施例1的2-甲基丁酸乙酯散剂与饲料制成的2-甲基丁酸乙酯拌料，第Ⅴ组饮用实施例2的2-甲基丁酸乙酯水溶性粉剂与饮水制成的2-甲基丁酸乙酯饮水，各组饮水和饲料的用量均相同。试验小鼠的分组情况见表1。
表1试验小鼠分组
每天观察并记录小鼠的精神状况、粪便情况等；对死亡小鼠称重，剖检。
药效判定方法主要依据感染后卵囊减少率；如下进行：感染后第3天开始每日收集粪便，连续监测15天。每日取粪便淘洗，260目筛过滤，滤液经3000r/min离心10min，弃上清加15mL饱和蔗糖溶液，摇匀，1200/min离心10min；离心后立即小心沾取上层清夜20uL于红细胞计数板上，显微镜(10×40倍)观察卵囊并计数。
实验结果：
临床症状观察：
接种微小隐孢子虫卵囊的对照组第3天，小鼠出现精神沉郁，被毛粗乱，第4天起腹泻症状明显，期间未见小鼠死亡。
分别计算各组的平均每只小鼠排卵囊数及卵囊减少率，结果见表2所示。
表2各组抗隐孢子虫效果
由表2可知，第Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组的平均每只小鼠排卵囊数均低于第Ⅱ组，第Ⅳ、Ⅴ组的平均每只小鼠排卵囊数明显低于第Ⅲ组，故实验证实2-甲基丁酸乙酯可使微小隐孢子虫感染后的卵囊数减少86％以上，饮水组效果好于饲料添加组，具有较好的抗微小隐孢子虫作用，且明显优于巴龙霉素。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。