本发明涉及中药天然植物分子的应用技术领域，特别是涉及一种中药天然植物分子在制备具有美黑功效的产品中的应用。
背景技术：
美黑就是让皮肤变黑。随着时代的发展，人们对时尚的理解越来越多元化，白已经不是美丽的唯一体现了，越来越多的人追求古铜色或者小麦色肌肤。
晒日光浴为最简单的天然美黑方法，但是过度暴露于太阳会对皮肤造成损坏，并且已发现会导致皱纹、棕色斑、小脓疱以及皮质的、松懈的皮肤。最坏的情况下，过度暴露于太阳光会引起具有毁容性甚至致命性的皮肤癌。因此，越来越多的美黑相关产品应运而生。
现在市场上常用的美黑产品，其活性成分均为化学合成的药物，比如二羟基丙酮(dha)，其能够在不暴露于太阳光的条件下使皮肤变黑。dha是一种无色糖，其可与死亡地皮肤细胞在表皮的角质层中产生作用。皮肤细胞由于这种作用而变色从而获得太阳晒黑的外观。这种颜色改变通常持续约5～7天后便逐渐消退，因此，其美黑的效果并不理想。并且，有些化学合成的美黑产品也存在一定的引起皮肤癌的风险。
苦木酮(nigakinone)是一种生物碱，是苦木叶(ramulusetfoliumpicrasmae)中苦味的来源，苦木叶的苦味甚至比奎宁更强。苦木叶经常用作退热药和杀虫剂，也是治疗胃痛和刺激食欲的补充剂。
黄芪甲苷是一种常用的中药-黄芪内含有的具有生物活性的标志性化合物。根据中医理论，“气”是一种生命能量的形态，而黄芪则可以在我们的身体内促进“气”的循环，故此许多著名的古代中药药方均会加入不同比例的黄芪。
槲皮素-3-鼠李糖苷是由类黄酮槲皮素和脱氧糖鼠李糖形成的糖苷，含有几个酚基。槲皮素是一种非特异性蛋白激酶的抑制剂。
至目前为止，还没有关于中药天然植物分子在美黑产品中应用的相关报道。
技术实现要素：
基于此，本发明提供了一种中药天然植物分子的新应用。
具体技术方案如下：
中药天然植物分子在制备增强酪氨酸酶活性的产品中的应用。
中药天然植物分子在制备具有美黑功效的产品中应用。
在其中一些实施例中所述中药天然植物分子选自苦木酮、黄芪甲苷和槲皮素-3-鼠李糖苷中的至少一种。
在其中一些实施例中，所述产品为美容用品、药品或食品。所述美容用品可以是化妆品，所述食品可以是食品添加剂、饮料或营养强化剂。
本发明还提供了一种具有美黑功效的化妆品。
具体技术方案如下：
一种具有美黑功效的化妆品，所述化妆品中的活性成分包括有中药天然植物分子，所述中药天然植物分子选自苦木酮、黄芪甲苷和槲皮素-3-鼠李糖苷中的至少一种。
本发明还提供了一种具有美黑功效的药品。
具体技术方案如下：
一种具有美黑功效的药品，所述药品中的活性成分包括有中药天然植物分子，所述中药天然植物分子选自苦木酮、黄芪甲苷和槲皮素-3-鼠李糖苷中的至少一种。
本发明还提供了一种具有美黑功效的食品。
具体技术方案如下：
一种具有美黑功效的食品，所述食品中包括有中药天然植物分子，所述中药天然植物分子选自苦木酮、黄芪甲苷和槲皮素-3-鼠李糖苷中的至少一种。
本发明的发明人通过大量实验研究发现一些中药天然植物分子能够增强酪氨酸酶活性，可促进黑色素的生成，最终达到肤色变黑的效果，具有美黑的功效。其中，苦木酮、黄芪甲苷以及槲皮素-3-鼠李糖苷的美黑功效最为显著。
使用中药天然植物分子作为美黑的功效成分，应用在美容用品(比如化妆品)、药品或食品及其他外敷类大健康产品上能大幅减低因使用化学合成类美黑剂及过度日光浴而造成的皮肤癌的风险，且美黑效果显著，具有巨大的市场潜力。
附图说明
图1为中药天然植物分子苦木酮、黄芪甲苷及槲皮素-3-鼠李糖苷的化学结构；
图2为实施例1中的不同浓度的中药天然植物分子对黑色素细胞生成黑色素的促进作用结果；
图3为实施例2中的不同浓度的中药天然植物分子对酪氨酸酶活性的增强作用结果；
图4为通过双倒数图使用米氏方程找出酶反应中的km和vmax的示意图；
图5为实施例2中的不同浓度的中药天然植物分子对酪氨酸酶活性的增强作用结果的双倒数图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明的中药天然植物分子的新应用做进一步详细的说明。
实施例1b16黑色素细胞黑色素生成实验
1、准备中药天然植物分子溶液：
分别称取如下中药天然植物分子：苦木酮、黄芪甲苷、槲皮素-3-鼠李糖苷，以dmso溶解并定溶在100mm；
把100mm的天然植物分子溶液分别用生物实验级别的纯净水稀释至100μm，10μm及1μm的天然植物分子溶液；
将经过稀释的中药天然植物分子溶液分别用于黑色素生成实验测试，同时以没有加入任何天然植物分子的溶液(dmso和水的比例与经过稀释的中药天然植物分子溶液相同)为空白对照。使用1nmα-melanocyte-stimulatinghormoneα-黑色素细胞刺激激素(α-msh)作为阳性对照。
2、准备b16黑色素细胞：
b16黑色素细胞(crl-6323tm；atcc，manassas，va)在5％co2和37℃的条件下进行培养，培养基为dulbecco'smodifiedeagle'smedium(dmem，invitrogen，carlsbad，ca)，并在该培养基中补充10％胎牛血清白蛋白和青霉素-链霉素(100u/ml)。只有在p8到p18之间的b16黑色素细胞可用于进行本实验。在4天内，黑色素细胞含成熟的黑色素体并会将黑色素分泌到培养基中，培养基在405nm的吸光度应约为0.5-0.7，倘若黑色素细胞未能达到这一吸光度标准则被认为是不适用于本实验筛选的目的。
3、黑色素生成实验：
按每个孔二万个将b16黑色素细胞接种在96孔培养板上，每孔加入步骤2所述的培养基100μl，并分别加入步骤1准备的1μm，10μm或100μm的包括苦木酮、黄芪甲苷及槲皮素-3-鼠李糖苷在内的中药天然植物分子溶液或者空白对照溶液或阳性对照溶液100μl，在5％co2和37℃的条件下培养2-4天。
在405nm处直接检测培养2-4天后的混合溶液的吸光度，并将吸光度转换为黑色素浓度。将实验组的结果与空白对照组进行比较，将实验组的黑色素浓度转换为空白对照组的黑色素浓度的倍数，结果如图2所示。由图中结果可以看出：100μm的苦木酮、黄芪甲苷及槲皮素-3-鼠李糖苷分子溶液具有显著的促进黑色素生成的效果。
实施例2酪氨酸酶活性实验
1、准备中药天然植物分子溶液：
分别称取如下中药天然植物分子：苦木酮、黄芪甲苷、槲皮素-3-鼠李糖苷，以dmso溶解并定溶在100mm；
把100mm的天然植物分子溶液分别用生物实验级别的纯净水稀释至100μm，10μm及1μm的天然植物分子溶液；
将经过稀释的中药天然植物分子溶液分别用于酪氨酸酶活性作用测试，同时以没有加入任何天然植物分子的溶液(dmso和水的比例与经过稀释的中药天然植物分子溶液相同)为空白对照。
2、酪氨酸酶活性测试：
按常规方法进行酪氨酸酶活性测试。酪氨酸酶活性测试是筛选美白或美黑药品的传统测试方法。酪氨酸会因为酪氨酸酶的作用而转化成左旋多巴(l-dopa)，再转化成为多巴色素(dopachrome)。多巴色素在492nm波长下有吸光度，故此可以量化及计算酪氨酸酶的活性。多巴色素只是暂存物，它会转化成黑色素(melanin)。人类皮肤上的黑色素是由黑色素细胞(melanocytes)所产生的多巴色素转化而成的。黑色素会渐渐地在黑色素细胞内的黑色素体(melanosome)内成熟，成熟后黑色素体便会沿着黑色素细胞的树突(dentrite)转移到角质细胞(keratinocytes)，使肤色变深。抑制酪氨酸酶活性能减少多巴色素及黑色素的产生，使肤色变得更淡更白。反之，增强酪氨酸酶活性能有效增加多巴色素及黑色素的产生，从而使肤色变得更深更黑。
由于酪氨酸酶可以将酪氨酸转化为多巴色素，因此在该测试中，多巴色素生成量越高，说明天然植物分子溶液对酪氨酸酶的刺激作用越好，酪氨酸酶的活性越高。测试结果如图3所示(各实验组相对于空白对照组的增强率)。由图3结果可知：不同浓度的苦木酮、黄芪甲苷及槲皮素-3-鼠李糖苷的溶液，对酪氨酸酶有不同程度的刺激作用，其中100μm的苦木酮、黄芪甲苷及槲皮素-3-鼠李糖苷分子溶液能显著增强酪氨酸酶的活性。
通过双倒数图展示如何使用米氏方程来找出酶反应中的km和vmax(见附图4)。从不同浓度的天然植物分子对酪氨酸酶增强作用的结果作双倒数图，然后找出相对的km和vmax，利用这些km和vmax随着天然植物分子浓度的变化，便可知道增强作用是属于哪一类的机理。如图5所示，通过双倒数图从不同浓度的天然植物分子对酪氨酸酶的刺激作用中，发现随着天然植物分子浓度的增加酪氨酸酶反应中的vmax开始增加而km则不变(non-competitive非竞争性)。km不变说明了天然植物分子不会影响酪氨酸与酪氨酸酶的正常结合，而vmax随着天然植物分子浓度增加表示天然植物分子能增强酪氨酸酶转化酪氨酸的活性。该机理明显地跟有致癌风险的α-msh的作用机理截然不同。α-msh是单纯通过细胞的信道来增加酪氨酸酶的表达数目，而天然植物分子则是增强酪氨酸的转化效率。因此，天然植物分子有很大潜力开发成安全性高的美黑产品。
由上述实验可知，本发明所述的包括苦木酮、黄芪甲苷及槲皮素-3-鼠李糖苷在内的天然植物分子可以通过对酪氨酸酶的刺激作用而起到美黑作用。可以用于制备各种美黑产品。
发明人进一步分析黄芪甲苷及槲皮素-3-鼠李糖苷具有美黑作用的原因可能如下：黄芪能抑制缺氧诱导因子1α(hif-1α)在常氧环境下的降解，并导致hif-1α的积累，致使细胞产生一个假的缺氧微环境。而沉积在皮肤表皮层基底的黑色素细胞一直位于多层皮肤中最缺氧的区域，黑色素细胞在皮肤的缺氧微环境中可以通过hif-1α和akt通路促进黑素生成。黄芪甲苷可能是通过抑制黑色素细胞中hif-1α降解的活性产生假的缺氧微环境，再通过akt-通道增加黑色素细胞内黑色素的生成而达到美黑效果。
槲皮素拥有激活雌激素受体的能力，激活雌激素受体可能与槲皮素-3-鼠李糖苷的美黑功效有关，因为酪氨酸酶是透过黑色素生成来使皮肤美黑，而wnt-通道是其中一个控制酪氨酸酶表达水平的信道，wnt-信道的受体frizzled又是其中一个雌激素受体。因此，槲皮素-3-鼠李糖苷、wnt-通道以及美黑效果三者之间可能是有关联性的。
本发明所公开的中药天然植物分子在美黑功效上的应用，与传统美黑方法相比，能大幅减低因使用化学合成类美黑剂及过度日光浴而造成的皮肤癌的风险。另外，原料成本大大降低，从而可降低产品价格，可广泛地用于药品、保健品、食品和美容产品中，具有巨大的市场潜力。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。