烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在制备治疗炎性痛药物中的应用的制作方法

本发明属于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的应用，具体涉及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在制备治疗炎性痛药物中的应用。

背景技术：

炎性痛是由创伤、细菌或病毒感染以及外科手术等引起的外周组织损伤导致的炎症引起，主要特征是受损组织对热刺激和机械刺激的敏感性增加。炎性疼痛病程长且治愈困难，患者在精神上、身心上遭受极大的痛苦，严重影响了患者的生活质量，并给患者带来了沉重的经济负担。由于其病因多样，发病机制复杂而导致发病率高，难治愈已经成为临床医疗最具挑战的难题之一。目前，药物治疗是控制症状的最常用也是最主要的手段。按照其作用特点和机制可以分为中枢神经系统镇痛药和解热抗炎镇痛药两大类。中枢神经系统镇痛药的代表是阿片类受体的激动剂，其代表药为吗啡，但由于成瘾性等副作用限制了其在临床上的应用。解热抗炎镇痛药，又称为非甾体类抗炎药，具有抗炎、解热作用，其中镇痛作用主要部位在外周，并且作用机制主要是通过阻断体内环氧合酶(cox)，从而抑制前列腺素(prostaglandin，pg)的生物合成，减弱炎症反应和疼痛作用的发挥，其代表为阿司匹林、吲哚美辛等。但由于非甾体抗炎药对炎性痛效果不明显，副作用较多限制了其临床应用。因此，研究炎性疼痛产生的病因和病理，寻找和开发新型镇痛药，不仅成为疼痛医学研究的热点和难点，而且对于最终解决这一顽症，提高罹患人群的生活质量具有重要的临床意义和社会意义。

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(缩写为nad⁺)，在哺乳动物体内存在氧化型(nad⁺)和还原型(nadh)两种状态，氧化型(nad⁺)在260nm处具有最大紫外吸收光谱，通过各种脱氨酶，从底物中接受一个氢原子和一个电子，变成还原型(nadh)，在340nm处有最大吸收。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸参与细胞物质代谢、能量合成、细胞dna修复等多种生理活动，对机体免疫能力有重要作用。在健康状态下，人体内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸浓度稳定，维持各项细胞正常功能。体内的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸浓度决定了细胞衰老的过程和程度，浓度下降会加速细胞衰老的过程。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸主要存在于酵母细胞线粒体中，目前通常选用破壁和提纯的方法制备烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。

本发明人首次发现：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸对炎性痛具有一定的镇痛作用，基于上述发现经过进一步实验从而完成本发明。

技术实现要素：

本发明提供一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在制备治疗炎性痛药物以及作为活性成分制备治疗炎性痛药物中的应用。

本发明通过以下技术方案实现：

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在制备治疗炎性痛药物中的应用，所述的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的结构分子式为：

所述的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸作为活性成分在制备治疗炎性痛药物中的应用。

所述的炎性痛为福尔马林或完全弗氏佐剂诱导的炎症疼痛。

在制备治疗炎性痛药物时，所述的药物为片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、混悬剂、糖浆剂、肠溶制剂或注射剂。

所述的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸作为注射剂制备治疗炎性痛药物时，将烟酰胺腺嘌呤二核苷酸溶解于生理盐水中，采用鞘内注射、皮下注射、腹腔注射、静脉注射，浓度为8mmol/l到800mmol/l。

进一步地，采用鞘内注射的注射量为0.1ul/g-1ul/g；采用皮下注射的注射量为1ul/g-5ul/g；采用腹腔注射的注射量为1ul/g-200ul/g；采用静脉注射的注射量为1ul/g-100ul/g。

本发明中nad⁺通过依赖nad⁺的去乙酰化酶sirt1和sirt2参与调节福尔马林和完全弗氏佐剂(cfa)诱发的炎症痛，而sirt1和sirt2通过不同机制参与nad⁺对炎症痛的抑制作用，从而达到对炎性痛具有镇痛的作用。

附图说明

图1为鞘内注射烟酰胺腺嘌呤二核苷酸对福尔马林致小鼠舔足反应的影响；

图2为鞘内注射烟酰胺腺嘌呤二核苷酸对完全弗氏佐剂致小鼠足底炎症反应的影响；

图3为皮下注射烟酰胺腺嘌呤二核苷酸对完全弗氏佐剂致小鼠足底炎症反应的影响。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。

实施例1

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸对福尔马林引起的炎性痛有镇痛作用，下面通过药效学实验进一步说明烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在福尔马林引起的炎性痛中具有治疗作用。

实验动物为20gicr小鼠，购自同济大学实验动物中心，喂养条件：标准饲料，室温保持在(24±2)℃，湿度50-60％，每日光照与黑暗时间各12h，实验前，将动物置于实验环境适应3天。

取icr小鼠30只(雄性，20g左右)，随机分五组，每组6只，分别为：生理盐水组(鞘内注射，10ul)、吗啡组(鞘内注射，350nmol/l，10ul)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸组(sigma-aldrich公司，浓度分别是8mmol/l，80mm/l，800mmol/l，鞘内注射，10ul)，分别于给药后在所有小鼠右后足底注射5％的福尔马林溶液20ul，立即测量小鼠舔足时间，记录分为两个时相，i相为0-10min，ii相为10-45min，实验结果如图1所示，与生理盐水组相比，在i相和ii相中，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸组(80mmol/l和800mmol/l)与吗啡组(350nmol/l)降低了舔足时间，表明烟酰胺腺嘌呤二核苷酸具有抗炎性疼痛作用。

实施例2

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸对完全弗氏佐剂致小鼠炎症痛有镇痛作用，下面通过药效学实验进一步说明。

取icr小鼠18只(雄性，20g左右)，随机分两组，分别为生理盐水组(鞘内注射，10ul)，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸组(80mmol/l，鞘内注射，10ul)。小鼠足底注射完全弗氏佐剂第三天，分别鞘内给予生理盐水，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，采用常规的vonfrey纤维细丝利用upanddown法进行测量，分别测定给药后15min，30min，45min，1h，2h，3h，6h的机械阈值，结果如图2所示，与生理盐水组相比，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸组在15min-3h抑制了完全弗氏佐剂引起的炎性痛，表明烟酰胺腺嘌呤二核苷酸具有抗炎性疼痛的作用。

实施例3

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸对完全弗氏佐剂致小鼠炎症痛有镇痛作用，下面通过药效学实验进一步说明。

取icr小鼠18只(雄性，20g左右)，随机分两组。分别为生理盐水组(皮下注射，20ul)，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸组(80mmol/l，皮下注射，20ul)。小鼠足底注射完全弗氏佐剂第三天，分别脚掌皮下给予生理盐水，80mmol/l的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，采用常规的vonfrey纤维细丝利用upanddown法进行测量，分别测定给药后15min，30min，45min，1h，2h，3h，6h的机械阈值，结果如图3所示，与生理盐水组相比，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸组在45min和1h抑制了完全弗氏佐剂引起的炎性痛，表明烟酰胺腺嘌呤二核苷酸具有抗炎性疼痛的作用。

实施例4

取icr小鼠18只(雄性，20g左右)，随机分两组，分别为生理盐水组(鞘内注射，2ul)，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸组(80mm/l，鞘内注射，2ul)。小鼠足底注射完全弗氏佐剂第三天，分别鞘内给予生理盐水，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，采用常规的vonfrey纤维细丝利用upanddown法进行测量，分别测定给药后15min，30min，45min，1h，2h，3h，6h的机械阈值，与生理盐水组相比，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸组在15min-3h抑制了完全弗氏佐剂引起的炎性痛，表明烟酰胺腺嘌呤二核苷酸具有抗炎性疼痛的作用。

实施例5

本实施例取icr小鼠30只(雄性，20g左右)，随机分五组，每组6只，分别为：生理盐水组(皮下注射)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸两组，浓度分别是8mmol/l，800mmol/l，分别按5ul/g和1ul/g的用量进行皮下注射，给药后在所有小鼠右后足底注射5％的福尔马林溶液20ul，立即测量小鼠舔足时间，与生理盐水组相比，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸组降低了舔足时间，表明烟酰胺腺嘌呤二核苷酸具有抗炎性疼痛作用。

实施例6

取icr小鼠30只(雄性，20g左右)，随机分五组，每组6只，分别为：生理盐水组、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸组浓度分别是8mmol/l，800mmol/l，分别按200ul/g和1ul/g的用量进行腹腔注射，给药后在所有小鼠右后足底注射5％的福尔马林溶液20ul，立即测量小鼠舔足时间，与生理盐水组相比，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸组降低了舔足时间，表明烟酰胺腺嘌呤二核苷酸具有抗炎性疼痛作用。

实施例7

本实施例取icr小鼠30只(雄性，20g左右)，随机分五组，每组6只，分别为：生理盐水组(静脉注射)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸两组，浓度分别是8mmol/l，800mmol/l，分别按100ul/g和1ul/g的用量进行静脉注射，给药后在所有小鼠右后足底注射5％的福尔马林溶液20ul，立即测量小鼠舔足时间，与生理盐水组相比，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸组降低了舔足时间，表明烟酰胺腺嘌呤二核苷酸具有抗炎性疼痛作用。