药物涂层的制作方法

本申请是申请日为2014年04月01日、发明名称为“药物涂层”的中国发明专利申请no.201480019840.0(国际申请号为pct/jp2014/059665)的分案申请。

本发明涉及一种水不溶性药物的药物涂层，涉及一种呈现出水不溶性药物的特定结晶形态分型(morphologicalform)的药物涂层。

背景技术：

近年来，积极地进行了将药物涂布于球囊导管的药物洗脱球囊(drugelutingballoon；deb)的开发，有报告称其在再狭窄的治疗及预防方面有效。球囊涂布有包含药物及添加剂的涂层，在将血管扩张时，将球囊压靠于血管壁，使药物送达靶组织。

近年来，逐渐发现涂布于球囊表面的药物的形态分型(morphologicalform)对病变患部中来自球囊表面的药物的释放性、组织转移性具有影响，认为对药物的晶型或非晶质(无定形(amorphous))的控制是重要的。

专利文献1及2公开了采用利用溶剂蒸汽的退火(annealing)使涂布于球囊表面的药物的形态分型从非晶质(无定形)变化为晶形的方法。此外，专利文献2中记载了通过退火而得到的紫杉醇的晶形具有扇状及棒状或针状的形态，并记载了与扇状相比，棒状晶形的情况下药物的靶组织内浓度更高。

另外，专利文献3中记载了结晶水合形态的紫杉醇的涂料，记述了与非水合形态及非晶质相比，为结晶水合形态时，药物在病变患部的释放性及组织转移性更理想。

如上所述，虽然记述了含有结晶型紫杉醇的药物洗脱球囊显示出了良好的药物组织转移性，但并未提及结晶的详细形态分型和血管内狭窄抑制效果。

另一方面，含有结晶型紫杉醇的药物洗脱球囊存在根据情况而对靶组织显示出强毒性的担忧。因此，在近年来的药物洗脱球囊的开发中，要求开发出兼具药效(血管内狭窄抑制效果)高且毒性低这两种性能的药物洗脱球囊。在专利文献1～3中，完全没有提及毒性，另外，迄今仍未探明用于获得狭窄抑制效果高、且毒性低的性能的药物结晶形态分型。

综上所述，就现有技术中的具有涂布层的药物洗脱球囊而言，在治疗血管内狭窄部时，毒性少、狭窄抑制率高的效果不能说是充分的，期望毒性更低、狭窄抑制效果更高的医疗器具。

专利文献1：wo2010/124098号公报

专利文献2：日本特表2012-533338号公报

专利文献3：日本特表2012-514510号公报

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种具有水不溶性药物的形态分型(morphologicalform)的药物涂层及使用了该药物涂层的医疗器械，所述药物涂层在将药物涂布于医疗器械并送达至体内时，在病变患部的血管内狭窄抑制效果高。

本申请的发明人为解决上述课题而进行了锐意研究，结果发现，具有水不溶性药物的特定结晶形态分型的药物涂层是在病变患部的血管内狭窄抑制效果高的药物涂层。

即，本发明提供以下技术方案。

(1)一种药物涂层，其是在基材表面具有包含水不溶性药物的结晶的复数个长条体的形态分型的药物涂层，所述复数个长条体各自独立，且具有长轴，所述药物涂层的特征在于，所述长条体的长轴大体为直线状，且相对于所述长条体的长轴相交的基材平面形成规定范围的角度、优选形成45度～135度的范围的角度。

(2)如(1)所述的药物涂层，其中，所述长条体的至少顶端附近是中空的。

(3)如(1)或(2)所述的药物涂层，其中，所述长条体的与所述长轴垂直的面的截面形状为多边形。

(4)一种药物涂层，其是在基材表面无规地层叠有水不溶性药物的结晶中的扁平且细长的毛发状结晶的药物涂层，所述药物涂层的特征在于，所述结晶的长轴存在一部分弯曲成曲线状的部分，在同一晶面不混杂其它形状的结晶。

(5)如(4)所述的药物涂层，其中，所述水不溶性药物的结晶的表面进一步被非晶质(无定形)膜覆盖。

(6)一种药物涂层，其是含有水不溶性药物的结晶形态分型的药物涂层，所述药物涂层含有水不溶性药物的结晶粒子及由赋形剂形成的赋形剂粒子，所述水不溶性药物的结晶粒子规则性地配置于基材表面，所述赋形剂粒子不规则地配置于所述结晶粒子之间，所述药物涂层中，所述赋形剂的分子量小于水不溶性药物的分子量，所述赋形剂粒子在所述基材的每规定面积中所占的比例小于所述结晶粒子所占的比例，所述赋形剂粒子不形成基体。

(7)如(1)～(6)中任一项所述的药物涂层，其中，所述水不溶性药物为雷帕霉素、紫杉醇、多西他赛或依维莫司。

(8)一种医疗器械，在所述医疗器械的表面，具备(1)～(7)中任一项所述的药物涂层，所述医疗器械在体内送达时为缩径送达，在局部扩径从而从所述药物涂层释放药物。

(9)一种药物送达方法，包括以下步骤：将上述(8)所述的医疗器械送达至管腔内的步骤；将所述医疗器械具备的可扩张部分沿径向扩张的步骤；和使所述可扩张部分具有的药物涂层在所述管腔内发挥作用的步骤。

根据本发明，可以提供一种在病变患部的血管内狭窄抑制效果高、及/或毒性低的用于药物洗脱性医疗器械的药物涂层。

附图说明

图1是表示实施例1中制作的药物涂层的表面的扫描电子显微镜(以下有时称为sem)图像的图。图1a是在实施例1中制作的药物涂层的基材表面观察到的结晶的2000倍sem图像。图1b是在实施例1中制作的其它部分的基材表面观察到的结晶的1000倍sem图像。图1c是在实施例1中制作的其它部分的基材表面观察到的结晶的400倍sem图像。图1d是在实施例1中制作的药物涂层的与基材表面垂直的截面观察到的结晶的4000倍sem图像。

图2是表示在实施例2中制作的药物涂层的基材表面观察到的结晶的2000倍sem图像的图。

图3a是表示在实施例3中制作的药物涂层的基材表面观察到的结晶的2000倍sem图像的图。图3b是在实施例3中制作的药物涂层的与基材表面垂直的截面观察到的结晶的4000倍sem图像。

图4是表示在实施例4中制作的药物涂层的基材表面观察到的结晶的2000倍sem图像的图。

图5是表示在实施例5中制作的药物涂层的基材表面观察到的结晶的2000倍sem图像的图。

图6a是表示在实施例6中制作的药物涂层的基材表面观察到的结晶的2000倍sem图像的图。图6b是表示在实施例6中制作的药物涂层的其它部分的基材表面观察到的结晶的400倍sem图像的图。

图7是表示在比较例1的invatecjapan公司的市售药物洗脱球囊(in.pact)的药物涂层的基材表面观察到的结晶的2000倍sem图像的图。

图8是表示对猪冠状动脉的血管内狭窄的抑制效果的血管内狭窄率(％)的图表。

具体实施方式

本发明是基于下述发现而完成的：在将药物涂布于医疗器械并送达至体内时、在病变患部的毒性低且狭窄抑制效果高的药物涂层具有水不溶性药物的特定结晶形态。

优选地，可举出以下结晶形态。

(1)包含中空长条体结晶形态分型的层

具有含有中空长条体结晶的形态分型的层，是复数个包含水不溶性药物的结晶的具有长轴的长条体以刷状存在于基材表面的药物涂层。复数个长条体在基材表面上呈圆周状地配置为刷状。上述长条体各自独立地存在，具有一定长度，其长度部分的一端(基端)固定于基材表面。上述长条体不与相邻的长条体形成复合结构，没有连接。上述结晶的长轴大体为直线状。上述长条体相对于其长轴相交的基材平面形成规定的角度。所谓规定的角度，是指45度～135度的范围。优选地，可举出70度～110度的范围作为规定的角度；较优选地，可举出80度～100度的范围作为规定的角度。更优选的是，上述长条体的长轴相对于基材表面形成约90度的角度。上述长条体的至少顶端附近是中空的。上述长条体的与长条体的长轴成直角(垂直)的面上的截面具有中空。就该具有中空的长条体而言，长条体的与长轴成直角(垂直)的面上的截面为多边形。该多边形例如为四边形、五边形、六边形等。因此，长条体形成为长条多面体，所述长条多面体具有前端(或前端面)和基端(或基端面)，前端(或前端面)与基端(或基端面)之间的侧面由复数个大体为平面的面构成。该结晶形态分型构成基材表面中某平面的整体或至少一部分。例如，包含中空长条体结晶形态分型的层是具有图1～图5的sem图像所示的结晶形态分型的层。

具有包含中空长条体结晶的形态分型的层的特征如下。

1)是复数个独立的具有长轴的长条体(棒状体)，所述长条体为中空。长条体为棒状。

2)是具有长轴的长条体，为多面体(长条体的与长轴垂直的面上的截面为多边形)的情况居多。上述长条体结晶的50体积％以上为长条多面体。多面体的侧面主要为四面体。上述长条多面体也有时具有以顶点沿长轴方向延伸的凹角形成的复数个面(槽)。这里所谓的凹角是指，长条体的与长轴垂直的面上的截面即多边形的内角中的至少一个是大于180度的角。

3)具有长轴的长条体为长条多边体的情况居多。在与长轴垂直的截面观察时，该截面为多边形，以四边形、五边形、六边形的形状可见。

4)就复数个独立的具有长轴的长条体而言，复数个长条体以使其长轴相对于基材表面形成规定范围的角度、优选为45度～135度的范围的方式并列竖立，即，复数个独立的具有长轴的长条体在基材表面上大体均匀地林立。林立的区域在基材表面沿周向及轴向延伸，大体均匀地形成。各自独立的长条体相对于基材表面的角度在规定范围内可以各自不同，也可以相同。

5)各自独立的具有长轴的长条体，其长度部分的一端(基端)固定于基材表面。

6)关于接近基材表面的部分的形态，有时粒子状、短棒状、短曲线状的结晶层叠。具有长轴的长条体中，存在在基材表面直接或间接地具有长轴的长条体。因此，存在具有长轴的长条体林立于上述层叠之上的情况。

7)具有长轴的长条体的轴向长度优选为5μm～20μm，较优选为9μm～11μm，更优选为10μm左右。具有长轴的长条体的直径优选为0.01μm～5μm，较优选为0.05μm～4μm，更优选为0.1μm～3μm。

8)在包含中空长条体结晶形态分型的层的表面不混杂其它的形态分型(例如为无定形的板状形态分型)，作为结晶形态，50体积％以上、较优选70体积％以上形成为上述1)～7)的结晶形态分型。更优选几乎全部形成为7)的结晶形态分型。

9)中空长条体结晶形态分型中，也可能在含有构成结晶的水不溶性药物的药物涂层中存在其它化合物。这种情况下，该化合物被分配在林立于球囊基材表面上的复数个水不溶性药物的结晶(长条体)之间的空间而存在。关于构成药物涂层的物质比例，在该情况下，水不溶性药物的结晶占据远远大于其它化合物的体积。

10)中空长条体结晶形态分型中，构成结晶的水不溶性药物存在于球囊的基材表面上。在含有构成结晶的水不溶性药物的球囊基材表面上的药物涂层中，没有形成由赋形剂构成的基体。因此，构成结晶的水不溶性药物未附着于基体物质中。构成结晶的水不溶性药物也未被埋入基体物质中。

11)中空长条体结晶形态分型中，药物涂层可以含有水不溶性药物的结晶粒子及由赋形剂形成的赋形剂粒子，上述水不溶性药物的结晶粒子规则性地配置于基材表面，上述赋形剂粒子不规则地配置于上述结晶粒子之间。这种情况下，上述赋形剂的分子量小于水不溶性药物的分子量。因此，赋形剂粒子在基材的每规定面积中所占的比例小于上述结晶粒子所占的比例，上述赋形剂粒子不形成基体。这里，水不溶性药物的结晶粒子可以是上述长条体之一，赋形剂粒子以远远小于水不溶性药物的结晶粒子的状态存在，并且分散于水不溶性药物的结晶粒子之间，因此，有时无法在sem图像中观察到。

作为本发明特征的以下说明的扁平毛发状结晶形态分型，占药物涂层的至少一部分，或50体积％以上，或80体积％以上，(作为结晶形态占50体积％以上，较优选70体积％以上)，更优选占近100体积％。占近100体积％时，为不混杂复数种结晶形态分型的状态，仅存在单一的结晶形态分型。

(2)包含扁平毛发状结晶形态分型的层

一种药物涂层，其是在基材表面无规地层叠有水不溶性药物的结晶中的扁平且细长的毛发状结晶的药物涂层，该药物涂层中，上述结晶的长轴存在一部分弯曲成曲线状的部分，在同一晶面不混杂其它形态分型的结晶。存在无定形层和结晶层时，将结晶层上存在无定形膜的情况表达为“非同一晶面”。例如，包含扁平毛发状结晶形态分型的层是具有图6a所示的实施例6的结晶形态的层。

包含扁平毛发状结晶形态分型的层的特征如下。

1)为复数个具有长轴的毛发状结晶在宽度方向扁平地接合的形状，且不具有中空，为顶端尖细形状。

2)毛发状结晶的接合形状无规地层合于基材表面。长轴以沿基材表面倒伏的状态存在。

3)上述结晶的长轴存在一部分弯曲成曲线状的部分。

4)毛发状结晶的长轴方向上的长度优选为10μm～100μm，更优选为20μm左右，多数比上述中空长条体结晶形态分型长。

(3)包含在扁平毛发状结晶的表面存在无定形膜的形态分型的层

为上述扁平毛发状结晶的表面被非晶质(无定形)膜覆盖的药物涂层。包含在扁平毛发状结晶的表面存在无定形膜的形态分型的层中，在扁平毛发状结晶的上方存在无定形膜层，形成为结晶层和无定形(非晶质)层两层。例如，包含在扁平毛发状结晶的表面存在无定形膜的形态分型的层是具有图6b所示的实施例6的结晶形态的层。

具体而言，在某一面(存在结晶/非晶质的面)上，某结晶形态占至少一部分，或50体积％以上，或80体积％以上，(作为结晶形态占50体积％以上，较优选70体积％以上)，更优选不混杂复数种结晶形态，此外，也可以在某一面的外侧存在非晶质的膜。

上述中空长条体的形态分型、扁平毛发状的形态分型、在扁平毛发状结晶的表面存在无定形膜的形态分型的结晶层，在以药物涂层的形式将药物涂布于医疗器械的基材表面并送达至体内时，毒性低，且狭窄抑制效果高。作为其理由，发明人认为是具有某种特定结晶形态的药物在组织转移后的溶解性和组织内滞留性产生了影响。例如，为非晶质(无定形)时，由于溶解性高，因此即使转移至组织中，也会立刻被血流冲走，组织内滞留性短，无法获得良好的狭窄抑制效果。另一方面，就基于本发明的具有特定结晶形态的水不溶性药物而言，由于在药物转移至组织时，结晶的单一单元变小，所以向组织的渗透性良好，且具有良好的溶解性，因此，可以有效地发挥作用，从而抑制狭窄。另外，认为由于药物以大块的形态残留于组织的情况少，因此毒性降低。

特别地，包含中空长条体结晶形态分型的层为下述形态分型：复数个具有长轴的大体均匀的长条体有规则性地大体均匀地林立于基材表面。因此，转移至组织的结晶的大小(长轴方向上的长度)小至约10μm。因此，均匀地作用于病变患部，组织渗透性提高。另外，认为由于转移的结晶的尺寸小，所以过量的药物不会过长时间地滞留于患部，因此，能够不呈现毒性地显示出高的狭窄抑制效果。

〔水不溶性药物〕

水不溶性药物是指不溶于水或难溶于水的药物，具体而言，对水的溶解度在ph5～8时小于5mg/ml。其溶解度也可以小于1mg/ml，进一步地，也可以小于0.1mg/ml。水不溶性药物包含脂溶性药物。

几种优选的水不溶性药物的例子包括免疫抑制剂(例如包含环孢菌素的环孢菌素类)、雷帕霉素等免疫活性剂、紫杉醇等抗癌剂、抗病毒剂或抗菌剂、抗肿瘤剂、镇痛剂及抗炎剂、抗生素、抗癫痫剂、抗焦虑剂、抗麻痹剂、拮抗剂、神经元阻断剂、抗碱胆能剂及碱胆能剂、抗蕈毒碱剂及蕈毒碱剂、抗肾上腺素能剂、抗心率失常剂、抗高血压剂、激素剂以及营养剂。

水不溶性药物优选为选自由雷帕霉素、紫杉醇、多西他赛、依维莫司组成的组中的至少1种。本说明书中，所谓雷帕霉素、紫杉醇、多西它赛、依维莫司，只要具有同样的药效，则包含它们的类似物及/或它们的衍生物。例如，紫杉醇和多西他赛为类似物的关系。雷帕霉素和依维莫司为衍生物的关系。上述药物中，更优选紫杉醇。

水不溶性药物可以进一步含有赋形剂。赋形剂只要是作为医药被允许的物质就不受限定，例如，可以举出水溶性聚合物、糖、造影剂、柠檬酸酯、氨基酸酯、短链单羧酸的甘油酯、作为医药被允许的盐及表面活性剂等。

〔结晶层的制造方法〕

将水不溶性药物溶解于溶剂中，制造涂布溶液。将涂布溶液涂布于扩张的球囊，以使涂布溶液中的溶剂缓慢挥发。优选地，在使排出药物的分配管(dispensingtube)前端的侧面不断接触球囊导管表面的同时，从分配管的前端开口排出药物。沿相对于药物排出方向而言的反方向(逆向)，以长轴为中心旋转球囊导管。之后，使涂布后的球囊干燥，制造具有结晶层的药物涂层。

(将涂布溶液涂布于球囊的优选条件)

作为使用的溶剂，不受特别限定，可以举出四氢呋喃、乙醇、甘油(亦称为丙三醇或丙烷-1,2,3-三醇)、丙酮、甲醇、二氯甲烷、己烷、乙酸乙酯及水。其中，优选为四氢呋喃、乙醇、丙酮、水中的数种的混合溶剂。

＜医疗器械＞

本发明的医疗器械在其基材的表面上直接或经由底漆层等前处理层而具有上述药物涂层。药物涂层中的药物量没有特别限定，以0.1μg/mm²～10μg/mm²、优选为0.5μg/mm²～5μg/mm²、较优选为0.5μg/mm²～3.5μg/mm²、更优选为1.0μg/mm²～3.0μg/mm²的密度含有。

基材的形状、材质没有特别限定。可以是金属、树脂等材料的膜、板、线材、异形材料中的任一种，也可以是粒子状。

可使用的医疗器械没有限制。可以是任一种可移植或可插入的医疗器械。优选如下医疗器械：为长尺寸，在血液等的体腔内缩径从而以非扩张的状态被送达，在血管、组织等局部沿周向扩径，从药物涂层释放药物。因此，缩径送达后进行扩径从而应用于患部的医疗器械是具有扩张部的医疗器械。药物涂层设置于扩张部表面的至少一部分。即，药物至少被涂布于扩张部的外表面。

医疗器械的扩张部的材质优选具有一定程度的柔软性和一定程度的硬度，后者使得医疗器械在到达血管、组织等时能够扩张从而从其表面具有的药物涂层释放药物。具体而言，可以由金属、树脂等构成，但优选的是，设置药物涂层的扩张部的表面由树脂构成。作为构成扩张部表面的树脂，没有特别限定，但可以优选举出聚酰胺类。即，涂布药物的医疗器械扩张部的表面的至少一部分是聚酰胺类。作为聚酰胺类，只要为具有酰胺键的聚合物，则没有特别限制，可以举出例如聚己二酰丁二胺(尼龙46)、聚己内酰胺(尼龙6)、聚己二酰己二胺(尼龙66)、聚癸二酰己二胺(尼龙610)、聚十二烷二酰己二胺(尼龙612)、聚十一内酰胺(尼龙11)、聚十二内酰胺(尼龙12)等均聚物、己内酰胺/十二内酰胺共聚物(尼龙6/12)、己内酰胺/氨基十一烷酸共聚物(尼龙6/11)、己内酰胺/ω-氨基壬酸共聚物(尼龙6/9)、己内酰胺/己二酰己二胺共聚物(尼龙6/66)等共聚物、己二酸与间苯二甲胺的共聚物、或六亚甲基二胺与间,对苯二甲酸的共聚物等芳香族聚酰胺等。此外，聚酰胺弹性体也可以用作本发明的医疗用具的基材，所述聚酰胺弹性体是以尼龙6、尼龙66、尼龙11、尼龙12等为硬链段、以聚亚烷基二醇、聚醚或脂肪族聚酯等为软链段的嵌段共聚物。上述聚酰胺类可以单独使用1种，也可以并用2种以上。

作为具有扩张部的医疗器械，具体可以举出扩张部(支架)或具有扩张部(球囊)的长尺寸的导管。

对于本发明的球囊而言，优选地，在扩张时于其表面形成本发明的药物涂层，然后将球囊缠绕(折叠)并插入血管、体腔等，送达至组织、患部，在患部扩径从而释放药物。

实施例

以下，利用实施例、比较例来说明本发明，但本发明并不限定于这些实施例。

[药物洗脱球囊的制作或准备、或无药物涂布球囊的准备]

〈实施例1〉

(1)涂布溶液1的制备

量取l-丝氨酸乙酯盐酸盐(casno.26348-61-8)(56mg)及紫杉醇(casno.33069-62-4)(134.4mg)。向上述成分中分别加入无水乙醇(1.2ml)、四氢呋喃(1.6ml)、ro(reverseosmosis，反渗透膜)处理水(以下记作ro水)(0.4ml)并进行溶解，制备涂布溶液1。

(2)对球囊的药物涂布

准备扩张时尺寸为直径3.0×长度20mm(扩张部)的球囊导管(泰尔茂株式会社制，球囊(扩张部)的材料为尼龙弹性体)。将涂布溶液1以紫杉醇量成为约3μg/mm²的方式涂布于扩张的球囊，以使涂布溶液中的溶剂缓慢挥发。具体而言，在使排出药物的分配管前端的侧面不断接触球囊导管表面的同时，从分配管的前端开口排出药物。沿相对于药物排出方向而言的反方向(逆向)，以长轴为中心旋转球囊导管。调整分配管在球囊导管的轴向的移动速度及球囊的旋转速度，在旋转开始的同时，以0.053μl/秒排出药物，进行涂布。

之后，使涂布后的球囊干燥，制作药物洗脱球囊。

〈实施例2〉

(1)涂布溶液2的制备

量取l-丝氨酸乙酯盐酸盐(70mg)及紫杉醇(180mg)。向上述成分中分别加入无水乙醇(1.5ml)、丙酮(2.0ml)、四氢呋喃(0.5ml)、ro水(1ml)并进行溶解，制备涂布溶液2。

(2)对球囊的药物涂布

准备扩张时尺寸为直径3.0×长度20mm(扩张部)的球囊导管(泰尔茂株式会社制，球囊(扩张部)的材料为尼龙弹性体)。将涂布溶液2以紫杉醇量成为约3μg/mm²的方式涂布于扩张的球囊，以使涂布溶液中的溶剂缓慢挥发。具体而言，除了以0.088μl/秒排出药物以外，与实施例1记载的方法同样地进行涂布。

之后，使涂布后的球囊干燥，制作药物洗脱球囊。

〈实施例3〉

(1)涂布溶液3的制备

量取l-丝氨酸乙酯盐酸盐(70mg)及紫杉醇(168mg)。向上述成分中分别加入无水乙醇(1.5ml)、四氢呋喃(1.5ml)、ro水(1ml)并进行溶解，制备涂布溶液3。

(2)对球囊的药物涂布

准备扩张时尺寸为直径3.0×长度20mm(扩张部)的球囊导管(泰尔茂株式会社制，球囊(扩张部)的材料为尼龙弹性体)。将涂布溶液3以紫杉醇量成为约3μg/mm²的方式涂布于扩张的球囊，以使涂布溶液中的溶剂缓慢挥发。具体而言，除了以0.101μl/秒排出药物以外，与实施例1记载的方法同样地进行涂布。

之后，使涂布后的球囊干燥，制作药物洗脱球囊。

〈实施例4〉

(1)涂布溶液4的制备

量取l-丝氨酸乙酯盐酸盐(70mg)及紫杉醇(180mg)。向上述成分中分别加入无水乙醇(1.75ml)、四氢呋喃(1.5ml)、ro水(0.75ml)并进行溶解，制备涂布溶液4。

(2)对球囊的药物涂布

准备扩张时尺寸为直径3.0×长度20mm(扩张部)的球囊导管(泰尔茂株式会社制，球囊(扩张部)的材料为尼龙弹性体)。将涂布溶液4以紫杉醇量成为约3μg/mm²的方式涂布于扩张的球囊，以使涂布溶液中的溶剂缓慢挥发。具体而言，除了以0.092μl/秒排出药物以外，与实施例1记载的方法同样地进行涂布。

之后，使涂布后的球囊干燥，制作药物洗脱球囊。

〈实施例5〉

(1)涂布溶液5的制备

量取l-天冬氨酸二甲酯盐酸盐(casno.32213-95-9)(37.8mg)及紫杉醇(81mg)。向上述成分中分别加入无水乙醇(0.75ml)、四氢呋喃(0.96ml)、ro水(0.27ml)并进行溶解，制备涂布溶液5。

(2)对球囊的药物涂布

准备扩张时尺寸为直径3.0×长度20mm(扩张部)的球囊导管(泰尔茂株式会社制，球囊(扩张部)的材料为尼龙弹性体)。将涂布溶液5以紫杉醇量成为约3μg/mm²的方式涂布于扩张的球囊，以使涂布溶液中的溶剂缓慢挥发。具体而言，除了以0.055μl/秒排出药物以外，与实施例1记载的方法同样地进行涂布。

之后，使涂布后的球囊干燥，制作药物洗脱球囊。

〈实施例6〉

(1)涂布溶液6的制备

量取l-丝氨酸乙酯盐酸盐(56mg)及紫杉醇(134.4mg)。向上述成分中分别加入无水乙醇(0.4ml)、四氢呋喃(2.4ml)、ro水(0.4ml)并进行溶解，制备涂布溶液6。

(2)对球囊的药物涂布

准备扩张时尺寸为直径3.0×长度20mm(扩张部)的球囊导管(泰尔茂株式会社制，球囊(扩张部)的材料为尼龙弹性体)。将涂布溶液6以紫杉醇量成为约3μg/mm²的方式涂布于扩张的球囊，以使涂布溶液中的溶剂缓慢挥发。具体而言，除了以0.053μl/秒排出药物以外，与实施例1记载的方法同样地进行涂布。

之后，使涂布后的球囊干燥，制作药物洗脱球囊。

〈比较例1〉

准备市售品的球囊导管in.pact(invatecjapan公司)。比较例1的球囊是表面涂有紫杉醇的药物洗脱球囊。

〈比较例2〉

准备扩张时尺寸为直径3.0×长度20mm(扩张部)的球囊导管(泰尔茂株式会社制，球囊(扩张部)的材料为尼龙弹性体)。比较例2的球囊是未涂布药物的无药物涂布球囊。

[涂布于球囊的紫杉醇量的测定]

对于实施例1～6的药物洗脱球囊，通过以下步骤测定涂布于球囊的紫杉醇量。

1.方法

将制备的药物洗脱球囊浸于甲醇溶液中，之后，用振荡机振荡10分钟，提取涂布于球囊的紫杉醇。使用紫外可见吸光光度计，通过高效液相色谱法测定提取有紫杉醇的甲醇溶液在227nm处的吸光度，求出每个球囊的紫杉醇量([μg/balloon])。进一步地，从求得的紫杉醇量和球囊表面积算出球囊的每单位面积的紫杉醇量([μg/mm²])。

2.结果

得到了表1所示结果。另外，表1中，“球囊表面积”表示球囊的扩张时表面积(单位：mm²)，“球囊上的ptx量”列的“每个球囊”表示每1个球囊的紫杉醇量(单位：μg/球囊)，“球囊上的ptx量”列的“每单位面积”表示球囊的每1mm²表面积的紫杉醇量(单位：μg/mm²)。

如表1所示，实施例1～6中，涂布于球囊的紫杉醇量均为约3μg/mm²，能够将目标紫杉醇量涂布于球囊表面。

[表1]

表1

[药物洗脱球囊的药物涂层的扫描电子显微镜观察(sem)]

1.方法

对于实施例1～5(图1～图5)、及实施例6(图6)的药物洗脱球囊，将干燥后的药物洗脱球囊切断为适当大小后，置于支承台上，从其上方进行铂蒸镀。另外，将比较例1的invatecjapan公司的市售药物洗脱球囊(in.pact)也同样地切断为适当大小后，置于支承台上，从其上方进行铂蒸镀。使用扫描电子显微镜(sem)观察这些铂蒸镀后的样品的药物涂层的表面及内部。

2.结果

在实施例的药物涂层中，观察到了中空长条体的形态分型、扁平毛发状的形态分型、在扁平毛发状结晶的表面存在无定形膜的形态分型的结晶层。

得到了图1～图6所示sem照片。图1～图5(即实施例1～5的sem照片)表示包含中空长条体的形态分型的层，可见约10μm长的中空长条体的均匀的紫杉醇结晶均匀地形成于球囊表面。这些中空长条体的紫杉醇结晶具有长轴，该具有长轴的长条体(约10μm)形成为相对于球囊表面大体成直角方向。长条体的直径约为2μm。另外，长条体的与长轴成直角的面上的截面为多边形。作为多边形，例如有为四边形的多边形。此外，这些紫杉醇的大体均匀的中空长条体结晶以同样的形态分型(结构及形状)均匀且紧密地(以同等程度的密度)形成于球囊的整个表面。

另一方面，实施例6的图6a及图6b的sem照片表示包含扁平毛发状的形态分型及在扁平毛发状结晶的表面存在无定形膜的形态分型的层，是扁平且细长的毛发状的紫杉醇的结晶。这些结晶的大小多为长20μm以上的较大尺寸，另外，长轴以沿球囊表面倒伏的状态存在(图6a)。此外，如图6b所示，包含扁平毛发状的形态分型的层的上层部还存在被无定形膜覆盖的区域。该区域中，在扁平的结晶结构的上方存在无定形膜层，形成为结晶和无定形(非晶质)的两层，显示出包含在扁平毛发状结晶的表面存在无定形膜的形态分型的层。

比较例1的图7是invatecjapan公司的市售药物洗脱球囊(in.pact)的药物涂层的sem照片。其在同一平面混杂有非晶质和结晶。整体大体为无定形，并观察到一部分类似针状结晶的结晶也混杂于同一平面。

[对猪冠状动脉的血管内狭窄抑制效果及血管重塑(vascularremodeling)的影响]

针对实施例1、6及比较例1(c1市售球囊)、比较例2(c2无药物涂布球囊)，通过以下步骤来评价对猪冠状动脉的血管内狭窄抑制效果及血管重塑的影响。

1.方法

将导丝(guidewire)与导引导管(guidingcatheter)一同从8fr.的鞘插入，在x射线透视下引导至猪的左及右冠状动脉开口部。

(2)实施各冠状动脉的造影(冠状动脉：左冠状动脉前降支(lad)、右冠状动脉(rca)、左冠状动脉回旋支(lcx))，利用qca软件测定造影所得的冠状动脉的血管直径。

(3)相对于血管直径，选择支架直径为1.2倍、且药物洗脱球囊的直径为1.3倍的部位，实施支架留置之后的操作。

(4)在选择的冠状动脉内将bms(裸金属支架，baremetalstent)支架(支架直径3mm×长度15mm)以1.2倍扩张30秒后，拔去支架留置用球囊导管。在支架留置部位将上述实施例1、6及比较例1、2中制作的具有药物涂层的药物洗脱球囊(球囊直径：3mm×长度20mm)以相对于血管直径为1.3倍扩张1分钟后，拔去球囊导管。

(5)药物洗脱球囊扩张结束后，将导引导管及鞘拔去，将颈动脉的中枢侧结扎后，对于颈部创口，使用手术用缝合线将剥离的肌肉之间缝合，用皮肤缝合用缝合器缝合皮肤。

(6)球囊扩张28日后，实施剖检。

[血管内狭窄率的计算方法]

依照以下步骤算出血管内狭窄率。

通过徕卡显微镜及病理图像系统获取血管图像。利用这些图像计量外弹性膜内面积、内弹性膜面积、内腔内面积、支架内面积。

面积狭窄率(％)以下述方式算出：

面积狭窄率＝(新生内膜面积/内弹性膜面积)×100。

[纤维蛋白沉积度的计算方法，纤维蛋白含量评分(fibrincontentscore)]

依据suzuki等人的方法(非专利文献1)在血管整周内评价纤维蛋白沉积度。

非专利文献1：suzukiy.,et.alstent-baseddeliveryofsirolimusreducesneointimalformationinaprocinecoronarymodel.circulation2001；1188-93

纤维蛋白含量评分的评分内容如下所述。

1分：在血管内局限性地确认到纤维蛋白，或纤维蛋白在接近支架的支承物(strut)的能观察到的血管整周的小于25％的范围内中度沉积。

2分：纤维蛋白在血管整周的大于25％的范围内中度沉积，或纤维蛋白在支承物附近与支承物之间的能观察到的血管整周的小于25％的范围内重度沉积。

3分：纤维蛋白在能观察到的血管整周的大于25％的范围内重度沉积。

需要说明的是，评分全部为针对各血管算出支架留置部位的近位、中位、远位3处的平均值。

[内皮化评分计算方法，内皮化评分(endothelializationscore)]

内皮化评分的内容如下所述。

1分：能观察到的血管内腔整周的小于25％被覆有内皮细胞。

2分：能观察到的血管内腔整周的25％至小于75％被覆有内皮细胞。

3分：能观察到的血管内腔整周的75％以上被覆有内皮细胞。

需要说明的是，评分全部为针对各血管算出支架留置部位的近位、中位、远位3处的平均值。

2.关于猪冠状动脉的血管内狭窄抑制效果的结果

依照上述步骤算出血管内狭窄率。得到了表2所示结果。表2中，实施例/比较例之列的1、6为实施例，c1～c2为比较例。

另外，图8表示猪冠状动脉的血管内狭窄抑制效果中的、实施例1、6及比较例c1～c2的血管狭窄率的图表。图8中，横轴表示实施例或比较例，数字1、6分别是指实施例1、6，带字母的数字c1～c2分别是指比较例1(c1)、2(c2)。另外，纵轴表示血管的面积狭窄率(单位：％)。

就比较例2(c2)而言，作为无药物处置对照而用无药物涂布球囊进行了处置的血管的面积狭窄率为38.9％。用实施例6的药物洗脱球囊进行了处置的血管的面积狭窄率为20.6％，与无药物处置对照相比，确认到了显著的狭窄抑制效果。另一方面，用比较例1的市售的药物洗脱球囊(in.pact)进行了处置的血管的面积狭窄率为30.4％，可见较之无药物涂布球囊降低的倾向，但推测在效果上有充分的改善余地。

与此相对，用实施例1的本发明药物释放球囊进行了处置的血管的面积狭窄率为16.8％，与无药物处置对照及比较例1(c1)的in.pact相比，确认到了显著的狭窄抑制效果。另外，显示出了比实施例6更强的效果，得到了最优异的狭窄抑制效果。

从上述结果可知，与市售的药物洗脱球囊相比，实施例1、6的本发明的具有紫杉醇结晶形态分型的药物涂层的药物洗脱球囊能够获得显著良好的狭窄抑制效果。

[表2]

表2

3.关于猪冠状动脉的支架留置后的血管重塑的结果(毒性)

作为对猪冠状动脉的支架留置后的血管重塑的影响(毒性)，观察了纤维蛋白含量评分(fibrincontentscore)及内皮化评分(endothelializationscore)。结果示于表3。需要说明的是，就纤维蛋白含量评分而言，评分的数字越大，表示纤维蛋白的沉积度越大，不理想；另一方面，就内皮化评分而言，评分的数字越小，表示越没有被内皮细胞被覆，不理想。表3中，实施例/比较例之列的1、6为实施例，c1、c2为比较例。

关于用比较例2(c2)的作为无药物处置对照的无药物涂布球囊进行了处置的血管的纤维蛋白含量评分及内皮化评分，由于没有由药物产生的效果，因此没有对血管重塑的影响(毒性)，评分分别为1.00±0.00和3.00±0.00。

比较例1(c1)的纤维蛋白含量评分及内皮化评分分别为1.27±0.15和2.80±0.11，与无药物涂布球囊几乎为同等程度。对此，推测由于由药物产生的狭窄抑制效果小，因此对血管重塑的影响(毒性)也小。

另一方面，用实施例6的本发明药物洗脱球囊进行了处置的血管的纤维蛋白含量评分及内皮化评分分别为2.61±0.16和1.78±0.17，表明与比较例1(c1)及比较例2(c2)相比对血管重塑的影响大。可以认为其原因是，与比较例1(c1)及比较例2(c2)相比，实施例6的本发明药物洗脱球囊的狭窄抑制效果更强。

与此相对，用实施例1的本发明药物洗脱球囊进行了处置的血管的纤维蛋白含量评分及内皮化评分分别为1.53±0.17和2.87±0.09，对血管重塑的影响(毒性)与比较例1(c1)的市售品为同等程度，由此可知，尽管能够得到高的狭窄抑制效果，但毒性却极低。

从上述结果可知，实施例6的本发明的具有紫杉醇结晶形态分型的药物涂层的药物洗脱球囊具有显著良好的狭窄抑制效果。此外，确认到了实施例1的本发明的具有紫杉醇结晶形态分型的药物涂层的药物洗脱球囊在具有显著良好的狭窄抑制效果的同时，也几乎没有对血管重塑的影响(毒性)，是在有效性及副作用(毒性)两方面非常优异的药物洗脱球囊。

[表3]

表3