本发明涉及中药
技术领域：
，具体涉及一种具有抗癌作用的蟾酥提取物及其制备方法。
背景技术：
：蟾酥是蟾蜍耳后腺及表皮腺体的分泌物，白色乳状液体或浅黄色浆液，有毒。蟾酥提取浆液，干燥，上色，密封保存后可以入药。具有解毒、镇痛、开窍、抗肿瘤等多种功能而被广泛应用。但现有上市的药物中主要还是以蟾酥提取物等作为有效成分，但对于提取物中的有效成分种类以及各成分的含量并不明确，这严重影响蟾酥制剂的质量控制以及用药安全。因此，开发一种有效成分种类以及含量明确、且抗癌效果好的蟾酥提取物具有重要的意义。技术实现要素：本发明所要阶级的技术问题是，提供一种具有抗癌作用的蟾酥提取物，所述的蟾酥提取物抗癌效果显著，且其中的有效成分种类以及含量明确。本发明所要解决的上述技术问题，通过以下技术方案予以实现：一种具有抗癌作用的蟾酥提取物，其含有蟾蜍毒素类有效成分，所述蟾蜍毒素类有效成分中含有如下重量份的成分：沙蟾毒精30～60份；华蟾酥毒基30～60份；远华蟾蜍精10～25份；蟾毒它灵25～50份；华蟾毒它灵20～50份；蟾毒灵25～50份；酯蟾毒配基15～40份；嚏根草配基8～20份。优选地，所述蟾蜍毒素类有效成分中含有如下重量份的成分：沙蟾毒精35～60份；华蟾酥毒基35～60份；远华蟾蜍精12～22份；蟾毒它灵28～46份；华蟾毒它灵20～35份；蟾毒灵25～45份；酯蟾毒配基18～28份；嚏根草配基8～15份。进一步优选地，所述蟾蜍毒素类有效成分中含有如下重量份的成分：沙蟾毒精45～50份；华蟾酥毒基45～50份；远华蟾蜍精15～20份；蟾毒它灵35～40份；华蟾毒它灵24～30份；蟾毒灵32～37份；酯蟾毒配基20～25份；嚏根草配基10～13份。优选地，所述的蟾蜍毒素类有效成分占蟾酥提取物总重量的10％以上(比如，可以是20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％)。进一步优选地，所述的蟾蜍毒素类有效成分占蟾酥提取物总重量的30％以上。更进一步优选地，所述的蟾蜍毒素类有效成分占蟾酥提取物总重量的30～80％。优选地，所述的癌为肝癌、肺癌或鼻咽癌。上述具有抗癌作用的蟾酥提取物的制备方法，包含如下步骤：(1)取蟾酥用乙醇浸提，得乙醇提取物；(2)将乙醇提取物浓缩至无醇味，然后用非极性大孔树脂柱富集蟾蜍毒素类有效成分；所述的非极性大孔树脂柱富集蟾蜍毒素类有效成分的具体方法为：将乙醇提取物上样于非极性大孔树脂柱后，先用水洗脱除杂，再用体积分数为40％～95％的乙醇水溶液洗脱非极性大孔树脂柱；收集乙醇洗脱部位，浓缩、干燥即得所述的提取物。优选地，步骤(1)所述的乙醇为体积分数为50％以上的乙醇水溶液；步骤(1)所述的浸提是指采用浸渍法提取得到：具体为：取蟾酥加入8～15倍量的体积分数为50％以上的乙醇水溶液，在15～30℃下浸渍1～7天，过滤即得乙醇提取物。上述8～15倍量是指1g蟾酥加入8～15ml的乙醇。进一步优选地，步骤(1)所述的乙醇为体积分数为70％以上的乙醇水溶液；步骤(1)所述的浸提是指采用浸渍法提取得到：具体为：取蟾酥加入8～12倍量的体积分数为70％以上的乙醇水溶液，在15～30℃下浸渍3～5天，过滤即得乙醇提取物。优选地，步骤(2)中先用水洗脱除杂，再用体积分数为60％～80％的乙醇水溶液洗脱非极性大孔树脂柱。一种具有抗癌作用的药物，包含上述具有抗癌作用的蟾酥提取物。有益效果：本发明提供了一种抗癌效果显著的蟾酥提取物，所述的提取物中含有的沙蟾毒精、嚏根草配基、远华蟾蜍精、蟾毒它灵、华蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基以及酯蟾毒配基等有效成分能产生协同抗癌的效果；此外所述的提取物有效成分种类以及含量清楚，有利于提取物的质量控制以及用药安全。具体实施方式以下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例对本发明不做任何形式的限定。实施例1具有抗癌作用的蟾酥提取物的制备(1)取蟾酥100g加入1l体积分数为95％的乙醇水溶液，在25℃下浸渍3天，过滤即得乙醇提取物；(2)将乙醇提取物浓缩至无醇味，然后用非极性大孔树脂柱富集蟾蜍毒素类有效成分；所述的非极性大孔树脂柱富集蟾蜍毒素类有效成分的具体方法为：将乙醇提取物上样于非极性大孔树脂柱(d101大孔树脂柱)后，先用水洗脱除杂，再用80％的乙醇洗脱非极性大孔树脂柱；收集乙醇洗脱部位，浓缩、干燥即得所述的提取物。经检测，该实施例制备得到的提取物中蟾蜍毒素类有效成分占蟾酥提取物总重量的72％，其中，蟾蜍毒素类有效成分中含有如下重量份的具体成分：沙蟾毒精47份；华蟾酥毒基47份；远华蟾蜍精18份；蟾毒它灵38份；华蟾毒它灵27份；蟾毒灵36份；酯蟾毒配基24份；嚏根草配基12份。上述各成分的检测方法采用液相色谱进行检测，具体条件为：用agilentzorbaxsbc18(柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm)为色谱柱；以乙腈为流动相a，以0.1％乙酸铵溶液为流动相b，检测波长为296nm；柱温30℃，流速为1.0ml/min。采用梯度洗脱，梯度洗脱条件见表1：表1梯度洗脱条件时间(min)流动相a(％)流动相b(％)0～510905～1010→2390→7710～27237727～3223→3077→7032～44307044～4930→4070→6049～64406064～6940→6060→4069～906040实施例2具有抗癌作用的蟾酥提取物的制备(1)取蟾酥100g加入1l体积分数为95％的乙醇水溶液，在25℃下浸渍3天，过滤即得乙醇提取物；(2)将乙醇提取物浓缩至无醇味，然后用非极性大孔树脂柱富集蟾蜍毒素类有效成分；所述的非极性大孔树脂柱富集蟾蜍毒素类有效成分的具体方法为：将乙醇提取物上样于非极性大孔树脂柱(d101大孔树脂柱)后，先用水洗脱除杂，再用60％的乙醇洗脱非极性大孔树脂柱；收集乙醇洗脱部位，浓缩、干燥即得所述的蟾酥提取物。经检测，该实施例制备得到的提取物中蟾蜍毒素类有效成分占蟾酥提取物总重量的63％，其中，蟾蜍毒素类有效成分中含有如下重量份的具体成分：沙蟾毒精55份；华蟾酥毒基36份；远华蟾蜍精21份；蟾毒它灵45份；华蟾毒它灵26份；蟾毒灵27份；酯蟾毒配基20份；嚏根草配基13份。实施例3具有抗癌作用的蟾酥提取物的制备(1)取蟾酥100g加入1l体积分数为95％的乙醇水溶液，在25℃下浸渍3天，过滤即得乙醇提取物；(2)将乙醇提取物浓缩至无醇味，然后用非极性大孔树脂柱富集蟾蜍毒素类有效成分；所述的非极性大孔树脂柱富集蟾蜍毒素类有效成分的具体方法为：将乙醇提取物上样于非极性大孔树脂柱(d101大孔树脂柱)后，先用水洗脱除杂，再用40％的乙醇洗脱非极性大孔树脂柱；收集乙醇洗脱部位，浓缩、干燥即得所述的提取物。经检测，该实施例制备得到的提取物中蟾蜍毒素类有效成分占蟾酥提取物总重量的45％，其中，蟾蜍毒素类有效成分中含有如下重量份的具体成分：沙蟾毒精57份；华蟾酥毒基32份；远华蟾蜍精24份；蟾毒它灵47份；华蟾毒它灵22份；蟾毒灵26份；酯蟾毒配基16份；嚏根草配基18份。实施例4提取物抗癌活性测试取人肝癌细胞bel-7404、肺癌细胞a549以及鼻咽癌细胞cne置于培养基(rpmi1640培养基)中培养，癌细胞以10×103每孔加入96孔板中，在37℃含5％co2的培养箱中培养24小时后贴壁后吸去原来的培养基。然后空白组再加入含10％胎牛血清的rpmi1640培养基；药物处理组加入含有0.01～100μg/ml待测药物的rpmi1640培养基；阳性对照组加入含有0.01～100μg/ml顺铂的rpmi1640培养基；继续培养48h后，再加入浓度5mg/ml的mtt，继续培养4h，吸去上清液，加入100μldmso，暗处放置10min，利用酶标仪(sunrise公司)在570nm下测定吸光值，并根据吸光值计算细胞存活情况，每个处理设6个重复孔。细胞存活率(％)＝δod药物处理组/δod空白组×100。再根据剂量效应曲线计算细胞半抑制浓度(ic50)，结果见表2。药物处理组分别为：药物处理组1为沙蟾毒精；药物处理组2为嚏根草配基；药物处理组3为远华蟾蜍精；药物处理组4为蟾毒它灵；药物处理组5为华蟾毒它灵；药物处理组6为蟾毒灵；药物处理组7为华蟾酥毒基；药物处理组8为酯蟾毒配基；药物处理组9为按如下重量份的成分组成的混合物：沙蟾毒精47份、华蟾酥毒基47份、远华蟾蜍精18份、蟾毒它灵38份、华蟾毒它灵27份、蟾毒灵36份、酯蟾毒配基24份以及嚏根草配基12份；药物处理组10为按如下重量份的成分组成的混合物：沙蟾毒精55份、华蟾酥毒基36份、远华蟾蜍精21份、蟾毒它灵45份、华蟾毒它灵26份、蟾毒灵27份、酯蟾毒配基20份以及嚏根草配基13份。药物处理组11为按如下重量份的成分组成的混合物：沙蟾毒精57份、华蟾酥毒基32份、远华蟾蜍精24份、蟾毒它灵47份、华蟾毒它灵22份、蟾毒灵26份、酯蟾毒配基16份以及嚏根草配基18份。药物处理组12为实施例1制备得到的蟾酥提取物。药物处理组13为实施例2制备得到的蟾酥提取物。药物处理组14为实施例3制备得到的蟾酥提取物。表2.药物组合物对癌细胞的ic50测试结果从表2实验组1～8的数据可以看出，蟾酥提取物中的沙蟾毒精、嚏根草配基、远华蟾蜍精、蟾毒它灵、华蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基以及酯蟾毒配基对肝癌细胞bel-7404、肺癌细胞a549以及鼻咽癌细胞cne均有一定的抑制作用，但其抑制作用远远不及阳性对照药顺铂。从实验组9～11中的数据可以看出，沙蟾毒精、嚏根草配基、远华蟾蜍精、蟾毒它灵、华蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基以及酯蟾毒配基按本发明提取物中的重量份配比混合后组成的混合物，其对肝癌细胞bel-7404、肺癌细胞a549以及鼻咽癌细胞cne的抑制作用大幅提升，均优于阳性对照药顺铂。这说明沙蟾毒精、嚏根草配基、远华蟾蜍精、蟾毒它灵、华蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基以及酯蟾毒配基按本发明提取物中的重量份配比混合后能够产生明显的协同抗癌作用。因此，也可说明提取物中只要含有按本发明提取物中的重量份配比的沙蟾毒精、嚏根草配基、远华蟾蜍精、蟾毒它灵、华蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基以及酯蟾毒配基，均具有良好的抗癌效果。尤其是抗肝癌、肺癌以及鼻咽癌。从实验组12～14中的数据可以看出，本发明实施例1～3制备得到的具有抗癌作用的蟾酥提取物其具有明显的抗癌效果，且其对肝癌细胞bel-7404、肺癌细胞a549以及鼻咽癌细胞cne的抑制作用均大于其中的任意单体；这是由于，提取物中含有的沙蟾毒精、嚏根草配基、远华蟾蜍精、蟾毒它灵、华蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基以及酯蟾毒配基产生协同抗癌的效果。由于本发明所述的具有抗癌作用的蟾酥提取物效果显著，因此，以提取物作为抗癌药物使用时，可以显著减少提取物的使用量；克服了现有技术中使用提取物作为药物时，需要大剂量使用提取物的不足。此外，本发明所述的提取物，其有效成分种类以及配比明确，有利于提取物的质量控制以及用药安全。当前第1页12