本发明属于医药技术领域，具体涉及一种含有柠檬苦素类化合物(及其药学上可接受的衍生物、酯、立体异构体、盐或前药)和双胍类化合物(或其药学上可接受的盐)的组合产品。本发明还涉及该组合产品在治疗和/或预防糖尿病、肥胖以及代谢综合症相关疾病的用途。
背景技术：
根据idf统计，2015年全球糖尿病患者约有4.15亿人，每11个人就有1人患有糖尿病。中国糖尿患者人数约1.1亿人，位居世界第一。预测到2040年，全球将会有6.42亿人患有糖尿病，中国糖尿病患者也将达到1.51亿。糖尿病需终身监测及治疗，如得不到良好控制，将会导致患者继发心血管疾病，失明、脑卒中、糖尿病肾病、糖尿病坏疽等并发症，严重危害人的健康和生命。
糖尿病中90％以上是ⅱ型糖尿病，以口服降糖药为主要治疗方式。目前，口服药物包括：磺酰脲类、双胍类、α糖苷酶抑制剂、噻唑烷二酮类、dpp-4抑制剂等为主，但由于所述口服降糖药物容易出现耐药性、低血糖以及肝肾毒性的严重副作用。例如，双胍类化合物具有降糖效果，但同时就现有的临床数据可知，对于已有肾脏功能损伤的患者或肾脏缺陷者，服用后会导致乳酸蓄积，引起乳酸酸中毒，具有一定毒副作用风险。双胍类化合物，例如，二甲双胍，常用其盐酸盐，为白色结晶或结晶性粉末；无臭。在水中易溶，在甲醇中溶解，在乙醇中微溶，在氯仿或乙醚中不溶。副作用主要为(1)恶心、呕吐、腹泻、腹痛、腹胀、消化不良、乏力等；(2)疲倦、体重减轻、头痛、头晕、味觉异常、皮疹、寒战、流感样症状、心悸、潮红等现象；(3)乳酸性酸中毒，表现为呕吐、腹痛、过度换气、意识障碍。
柠檬苦素类化合物主要存在于芸香科植物果实中，如枳实、脐橙、柑桔、香橙、柚等中。以果核(种子)中含量较高，果皮中含量较少(约万分之一至十万分之五)。从柑桔属植物中分离和鉴定的柠檬苦素类化合物约50多种。柠檬苦素类化合物具有抗肿瘤、昆虫拒食、抗病毒、镇痛、抗炎、催眠等多种生物活性。可用于功能性食品添加剂、抗癌食品、杀虫剂、饲料添加剂等。
考虑到双胍类化合物的降糖效果和副作用，亟需找到服用方式简单、效果良好、副作用低的药物组合产品。
技术实现要素：
本发明提供一种包含柠檬苦素类化合物和双胍类化合物的组合产品，以及该组合物用于预防或/和治疗糖尿病、肥胖以及代谢综合症相关疾病。本发明所提及的包含柠檬苦素类化合物和双胍类化合物的组合产品，相较相同剂量的作为单一疗法的双胍类化合物或柠檬苦素类化合物，可以显著提升降糖、降脂、减肥的治疗效果，具有协同增效作用。同时，降低了双胍类化合物的用量，降低副作用。
在本发明的第一方面，提供了一种包含柠檬苦素类化合物(或其药学上可接受的衍生物、其酯、其立体异构体、其盐或前药)，以及双胍类化合物(或其药学上可接受的盐)双胍类化的组合产品，或一种仅仅由柠檬苦素类化合物(或其药学上可接受的衍生物、其酯、其立体异构体、其盐或前药)，以及双胍类化合物(或其药学上可接受的盐)作为活性成分所组成的组合产品。
本发明所提及的柠檬苦素类化合物(limonoids)是一类高度氧化的具有4,4,8-三甲基-17-呋喃甾体骨架的化合物或其衍生物的总称(或可表达为由呋喃内酯多环核心结构上的变体构成，具有四个稠合六元环和一个呋喃环的化合物)。具体地，柠檬苦素类化合物的实例包括但不限于：柠檬苦素(limomin)、异柠檬内酯酸(isolimonicacid)、7α-柠檬苦醇、黄柏酮(obacunone)、宜昌橙苦素(ichangin)、宜昌根辛(ichangensin)、诺米林(nomilin)、脱乙酰诺米林(deacetylnomilin)、诺米林酸(nomilinacid)、脱乙酰诺米林酸(deacetrylnomilinacid)、枸橼苦素(citrusin)、异黄柏酮酸(isoobacunoicacid)等及其任何的糖苷衍生物。示例性柠檬苦素类化合物，即，柠檬苦素的结构式示于下文。
进一步地，本发明所提及的柠檬苦素类化合物的糖苷衍生物包括但不限于：柠檬苦素糖苷(limonin17-β-glucopyranoiside)，宜昌橙苦素糖苷(ichangin17-β-d-glucopyranoiside)，异柠檬内酯酸糖苷(isolimonicacid17-β-d-glucopyranoside)，脱乙酰基诺米林糖苷(deactylnomilin17-β-d-glucopyranosied)，诺米林糖苷(nomilin17-β-d-glucopyranoside)，黄柏酮糖苷(obacunone17-β-d-glucopynoside)，诺米林酸糖苷(nomilinicacid17-β-d-glucopyranosid)，脱乙酰基诺米林酸糖苷(deacetylnomilinicacid17-β-d-glucopyranosid)等。
在一些实施方式中，本发明所提及的柠檬苦素类化合物的存在形式呈单体或提取物的形式。单体是提取得到的或人工合成的，其来源可以商购，或通过本领域现有技术它们能够容易地制备和得到的。
本发明中所提及的双胍类化合物包括但不限于二甲双胍、丁双胍和苯乙双胍等。n，n-二甲基亚氨基二亚氨酸二酰胺经常被称作二甲双胍或1，1-二甲双胍。二甲双胍可以游离碱的形式存在，或者可以形成盐，包括其药学上可接受的盐，如盐酸盐(例如单盐酸盐)。本文所用的术语“二甲双胍”不限定于游离碱，还包括二甲双胍盐，如二甲双胍的药学上可接受的盐、二甲双胍的盐酸盐和单盐酸盐。
在一些实施方式中，所述组合产品呈药物组合物的形式，且所述药物组合物是单元剂量形式。
在一些实施方式中，所述柠檬苦素类化合物(或其药学上可接受的衍生物、其酯、其立体异构体、其盐或前药)，以及双胍类化合物(或其药学上可接受的盐)各自呈单独的制剂形式。进一步地，所述柠檬苦素类化合物(或其药学上可接受的衍生物、其酯、其立体异构体、其盐或前药)，以及双胍类化合物(或其药学上可接受的盐)各自呈单独的单元剂量形式。进一步地，所述柠檬苦素类化合物(或其药学上可接受的衍生物、其酯、其立体异构体、其盐或前药)，以及双胍类化合物(或其药学上可接受的盐)可以同时或先后给药。
在一些实施方式中，所述双胍类化合物的量是10mg、20mg、40mg、50mg、75mg、100mg、150mg、200mg、250mg、300mg、375mg、500mg、750mg、1500mg、1875mg或2000mg，以及所述各量之间的范围，所述范围包括但不限于：10mg-20mg、10mg-40mg、10mg-50mg、10mg-75mg、10mg-100mg、10mg-150mg、10mg-200mg、10mg-250mg、10mg-300mg、10mg-375mg、10mg-500mg、10mg-750mg、10mg-1500mg、10mg-1875mg、10mg-2000mg、20mg-40mg、20mg-50mg、20mg-75mg、20mg-100mg、20mg-150mg、20mg-200mg、20mg-250mg、20mg-300mg、20mg-375mg、20mg-500mg、20mg-750mg、20mg-1500mg、20mg-1875mg、20mg-2000mg、40mg-50mg、40mg-75mg、40mg-100mg、40mg-150mg、40mg-200mg、40mg-250mg、40mg-300mg、40mg-375mg、40mg-500mg、40mg-750mg、40mg-1500mg、40mg-1875mg、40mg-2000mg、50mg-75mg、50mg-100mg、50mg-150mg、50mg-200mg、50mg-250mg、50mg-300mg、50mg-375mg、50mg-500mg、50mg-750mg、50mg-1500mg、50mg-1875mg、50mg-2000mg、75mg-100mg、75mg-150mg、75mg-200mg、75mg-250mg、75mg-300mg、75mg-375mg、75mg-500mg、75mg-750mg、75mg-1500mg、75mg-1875mg、75mg-2000mg、100mg-150mg、100mg-200mg、100mg-250mg、100mg-300mg、100mg-375mg、100mg-500mg、100mg-750mg、100mg-1500mg、100mg-1875mg、100mg-2000mg、150mg-200mg、150mg-250mg、150mg-300mg、150mg-375mg、150mg-500mg、150mg-750mg、150mg-1500mg、150mg-1875mg、150mg-2000mg、200mg-250mg、200mg-300mg、200mg-375mg、200mg-500mg、200mg-750mg、200mg-1500mg、200mg-1875mg、200mg-2000mg、250mg-300mg、250mg-375mg、250mg-500mg、250mg-750mg、250mg-1500mg、250mg-1875mg、250mg-2000mg、300mg-375mg、300mg-500mg、300mg-750mg、300mg-1500mg、300mg-1875mg、300mg-2000mg、375mg-500mg、375mg-750mg、375mg-1500mg、375mg-1875mg、375mg-2000mg、500mg-750mg、500mg-1500mg、500mg-1875mg、500mg-2000mg、750mg-1500mg、750mg-1875mg、750mg-2000mg和1875mg-2000mg。。
在一些实施方式中，所述柠檬苦素类化合物是10mg、20mg、40mg、50mg、75mg、100mg、150mg、200mg、250mg、300mg、375mg、500mg、750mg、1500mg、1875mg或2000mg，以及所述各剂量之间的量的范围，所述范围包括但不限于：10mg-20mg、10mg-40mg、10mg-50mg、10mg-75mg、10mg-100mg、10mg-150mg、10mg-200mg、10mg-250mg、10mg-300mg、10mg-375mg、10mg-500mg、10mg-750mg、10mg-1500mg、10mg-1875mg、10mg-2000mg、20mg-40mg、20mg-50mg、20mg-75mg、20mg-100mg、20mg-150mg、20mg-200mg、20mg-250mg、20mg-300mg、20mg-375mg、20mg-500mg、20mg-750mg、20mg-1500mg、20mg-1875mg、20mg-2000mg、40mg-50mg、40mg-75mg、40mg-100mg、40mg-150mg、40mg-200mg、40mg-250mg、40mg-300mg、40mg-375mg、40mg-500mg、40mg-750mg、40mg-1500mg、40mg-1875mg、40mg-2000mg、50mg-75mg、50mg-100mg、50mg-150mg、50mg-200mg、50mg-250mg、50mg-300mg、50mg-375mg、50mg-500mg、50mg-750mg、50mg-1500mg、50mg-1875mg、50mg-2000mg、75mg-100mg、75mg-150mg、75mg-200mg、75mg-250mg、75mg-300mg、75mg-375mg、75mg-500mg、75mg-750mg、75mg-1500mg、75mg-1875mg、75mg-2000mg、100mg-150mg、100mg-200mg、100mg-250mg、100mg-300mg、100mg-375mg、100mg-500mg、100mg-750mg、100mg-1500mg、100mg-1875mg、100mg-2000mg、150mg-200mg、150mg-250mg、150mg-300mg、150mg-375mg、150mg-500mg、150mg-750mg、150mg-1500mg、150mg-1875mg、150mg-2000mg、200mg-250mg、200mg-300mg、200mg-375mg、200mg-500mg、200mg-750mg、200mg-1500mg、200mg-1875mg、200mg-2000mg、250mg-300mg、250mg-375mg、250mg-500mg、250mg-750mg、250mg-1500mg、250mg-1875mg、250mg-2000mg、300mg-375mg、300mg-500mg、300mg-750mg、300mg-1500mg、300mg-1875mg、300mg-2000mg、375mg-500mg、375mg-750mg、375mg-1500mg、375mg-1875mg、375mg-2000mg、500mg-750mg、500mg-1500mg、500mg-1875mg、500mg-2000mg、750mg-1500mg、750mg-1875mg、750mg-2000mg和1875mg-2000mg。
在一些实施方式中，所述双胍类化合物选自二甲双胍、盐酸二甲双胍、丁双胍和苯乙双胍，且所述柠檬苦素类化合物选自下述的一个或多个：柠檬苦素、异柠檬内酯酸、7α-柠檬苦醇、黄柏酮、宜昌橙苦素、宜昌根辛、诺米林、脱乙酰诺米林、诺米林酸、脱乙酰诺米林酸、枸橼苦素、异黄柏酮酸及其任何的糖苷衍生物。
在一些实施方式中，所述组合产品还包含药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
在一些实施方式中，所述组合产品呈片剂、胶囊剂、颗粒剂、糖浆剂、粉剂、锭剂、药囊、扁囊剂、酏剂、混悬剂、乳剂、溶液、糖浆剂、气雾剂、软膏剂、乳膏剂和注射剂的形式。
在本发明的第二方面，提供了所述组合产品在制备药物中的用途，所述药物用于预防和/或治疗糖尿病、肥胖以及代谢综合症相关疾病。在一些实施方式中，所述糖尿病是i型糖尿病。在一些实施方式中，所述糖尿病是ii型糖尿病。
在本发明的第三方面，提供了将所述柠檬苦素类化合物(或其药学上可接受的衍生物、其酯、其立体异构体、其盐或前药)，以及双胍类化合物(或其药学上可接受的盐)联合给药以预防和/或治疗疾病的方法。在一些实施方式中，提供了将所述柠檬苦素类化合物(或其药学上可接受的衍生物、其酯、其立体异构体、其盐或前药)，以及双胍类化合物(或其药学上可接受的盐)联合给药，以预防和/或治疗糖尿病、肥胖以及代谢综合症相关疾病的方法。在一些实施方式中，提供了将所述柠檬苦素类化合物(或其药学上可接受的衍生物、其酯、其立体异构体、其盐或前药)，以及双胍类化合物(或其药学上可接受的盐)联合给药降低血糖的方法。在一些实施方式中，提供了将所述柠檬苦素类化合物(或其药学上可接受的衍生物、其酯、其立体异构体、其盐或前药)，以及双胍类化合物(或其药学上可接受的盐)联合给药改善胰岛素敏感性的方法。在一些实施方式中，提供了将所述柠檬苦素类化合物(或其药学上可接受的衍生物、其酯、其立体异构体、其盐或前药)，以及双胍类化合物(或其药学上可接受的盐)联合给药以改善瘦素敏感性的方法。在一些实施方式中，提供了将所述柠檬苦素类化合物(或其药学上可接受的衍生物、其酯、其立体异构体、其盐或前药)，以及双胍类化合物(或其药学上可接受的盐)联合给药以降低血清胆固醇、血清甘油三酯含量的方法。在一些实施方式中，提供了将所述柠檬苦素类化合物(或其药学上可接受的衍生物、其酯、其立体异构体、其盐或前药)，以及双胍类化合物(或其药学上可接受的盐)联合给药以降低体重的方法。
在一些实施方式中，所述柠檬苦素类化合物(或其药学上可接受的衍生物、其酯、其立体异构体、其盐或前药)，以及双胍类化合物(或其药学上可接受的盐)可以混合成一个制剂中呈药物组合物的形式(优选地，剂量单元形式)给药；在一些实施方式中，所述柠檬苦素类化合物(或其药学上可接受的衍生物、其酯、其立体异构体、其盐或前药)，以及双胍类化合物(或其药学上可接受的盐)各自呈单独的制剂形式(优选地，各自呈单独的剂量单元形式)分别给药；在一些实施方式中，所述柠檬苦素类化合物(或其药学上可接受的衍生物、其酯、其立体异构体、其盐或前药)，以及双胍类化合物(或其药学上可接受的盐)同时给药；在一些实施方式中，所述柠檬苦素类化合物(或其药学上可接受的衍生物、其酯、其立体异构体、其盐或前药)，以及双胍类化合物(或其药学上可接受的盐)以一个紧接着另一个的方式先后给药；在一些实施方式中，所述柠檬苦素类化合物(或其药学上可接受的衍生物、其酯、其立体异构体、其盐或前药)，以及双胍类化合物(或其药学上可接受的盐)先后给药的时间间隔可为约30分钟、或约1小时、或约2小时、或约4小时、或约8小时、或约12小时。在一些实施方式中，可以根据需要，将所述呈药物组合物的形式(优选地，剂量单元形式)的含有所述柠檬苦素类化合物(或其药学上可接受的衍生物、其酯、其立体异构体、其盐或前药)，以及双胍类化合物(或其药学上可接受的盐)的本发明的组合产品，每天给药包括但不限于：1次、2次、3次、4次、5次或6次。在一些实施方式中，可以根据需要，将所述各自呈单独的制剂形式(优选地，各自呈单独的剂量单元形式)的含有所述柠檬苦素类化合物(或其药学上可接受的衍生物、其酯、其立体异构体、其盐或前药)，以及双胍类化合物(或其药学上可接受的盐)的本发明的组合产品，每天给药包括但不限于：1次、2次、3次、4次、5次或6次。
在本发明的第四方面，提供了制备呈药物组合物形式的组合产品的方法。为了提高作为药物的操作性或用于生命体时的吸收性等，优选根据常用方法，将柠檬苦素类化合物或其药学上可接受的衍生物、其酯、其立体异构体、其盐或前药以及双胍类化合物或其药学上可接受的盐，与药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂等药用辅料进行组合而实现制剂化，从而得到所述形式。
在本发明的第五方面，提供了一种药盒，所述药盒包含本文中所述的组合产品。
本说明书中通篇使用的术语“药学上可接受的盐”是指游离酸或游离碱的盐，通常通过将游离碱与合适的有机或无机酸反应或者通过将酸与合适的有机或无机碱反应而进行制备。该术语可以用于任何化合物，包括1，1-二甲基双胍和柠檬苦素类化合物(具有游离酸或游离碱的功能)等。代表性的盐包括：乙酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、溴化物、依地酸钙盐、樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、克拉维酸盐、柠檬酸盐、二盐酸盐、依地酸盐、乙二磺酸盐、丙酸酯月桂硫酸盐(estolate)、乙磺酸盐(esylate)、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、谷氨酸盐、甘苯砷酸盐(glycollylarsanilate)、己基间苯二酚酸盐(hexylresorcinate)、哈胺盐(hydrabamine)、氢溴酸盐、盐酸盐、羟萘酸盐、碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、月桂酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲溴酸盐、甲硝酸盐、甲硫酸盐、马来酸单钾盐、粘酸盐(mucate)、萘磺酸盐、硝酸盐、n-甲葡萄糖胺盐、草酸盐、巴莫酸盐(双羟萘酸盐)、棕榈酸盐、泛酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、钾盐、水杨酸盐、钠盐、硬脂酸盐、次乙酸盐、琥珀酸盐、丹宁酸盐、酒石酸盐、茶氯酸盐、对甲苯磺酸盐、三乙基碘盐(triethiodide)、三甲胺盐和戊酸盐。当酸性取代基存在时，例如-cooh，可以形成铵盐、吗啉盐、钠盐、钾盐、钡盐、钙盐等以供剂型使用。当碱性基团存在时(例如在柠檬苦素类化合物或1，1-二甲基双胍中)，例如氨基或碱性杂芳基如吡啶基，可形成酸性盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、三氯乙酸盐、乙酸盐、草酸盐、马来酸盐、丙酮酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、富马酸盐、扁桃酸盐、苯甲酸盐、肉桂酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苦味酸盐等。
本发明中所指双胍类化合物的来源，可包括但不限于：盐酸二甲双胍单独片剂/胶囊、盐酸二甲双胍缓释片/胶囊、二甲双胍格列本脲片/胶囊、盐酸二甲双胍肠溶片/胶囊、二甲双胍格列吡嗪片/胶囊、利格列汀二甲双胍片/胶囊、沙格列汀二甲双胍缓释片/胶囊、二甲双胍格列齐特片/胶囊、二甲双胍格列酮片/胶囊、西格列汀二甲双胍片/胶囊、二甲双胍维格列汀片/胶囊、瑞格列奈二甲双胍片/胶囊、二甲双胍达格列净片/胶囊、二甲双胍坎格列净片/胶囊、二甲双胍恩格列净片/胶囊、二甲双胍利拉利汀片/胶囊、二甲双胍西他列汀片/胶囊、二甲双胍阿格列汀片/胶囊、二甲双胍吡格列酮片/胶囊等等。
实施例
下面通过具体的实施例、对照例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例、对照例仅仅是用于更详细具体地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
本发明实施例，选用了三种糖尿病小鼠模型和一种肥胖小鼠模型(所述模型是本领域技术人员公知的，或根据本领域常规的教科书、技术手册和科学文献容易获得的，包括但不限于实施例中所示例性描述的现有技术文献)，用以模拟人体不同糖尿病阶段的病理状况以及肥胖的病理状况。本实施例所提及的柠檬苦素类化合物的存在形式呈单体或提取物的形式。单体是提取得到的或人工合成的，其来源可以商购，或通过本领域现有技术能够容易地制备和得到它们。
实施例1
柠檬苦素类化合物、二甲双胍或其组合在小鼠胰岛β细胞损伤模型中对血糖的影响
在本实施例中，用链脲霉素(stz)造模icr小鼠得到小鼠胰岛β细胞损伤模型(参考现有技术文献：李楠等，松花粉对糖尿病肾病小鼠肾脏损伤的保护作用，科技导报，2014，32(4/5)：95-99)，完成动物降糖功效评价实验(该模型可以模拟i型、ii型糖尿病胰岛β细胞损伤状态)。柠檬苦素类化合物选择柠檬苦素、异柠檬内酯酸、柠檬苦素糖苷、异柠檬内酯酸糖苷，设置单独的二甲双胍给药组、柠檬苦素给药组、异柠檬内酯酸给药组、柠檬苦素糖苷给药组、异柠檬内酯酸糖苷给药组以及与二甲双胍复配的联合给药组。
实验饲养的条件：icr小鼠(20±2g)，6周龄，购自浙江省医学科学院，进行7天的预备饲养后进行实验饲养。应予说明，小鼠的饲养条件为温度23±1℃、湿度55±10％、上午7点～下午7点之间亮灯(其他时间关灯)、使小鼠自由摄取水和饲料。实验饲料使用小鼠生长稳定饲料(国标m2118)，动物的日常饲养管理由动物保障部负责，每日为动物提供足够的块料和新鲜的饮用水。
实验分组：取雄性小鼠，随机15只作为正常对照组，其余小鼠禁食12h后，150mg/kg剂量一次性腹腔注射stz，72h后选取血糖值为15-25mmol/l的小鼠无差异分组纳入实验，每组15只，给药2周后，取血检测指标。
灌胃剂量：柠檬苦素组每日灌胃给予0.02g/kg、异柠檬内酯酸组每日灌胃给予0.02g/kg、柠檬苦素糖苷每日灌胃给予0.02g/kg、异柠檬内酯酸糖苷每日灌胃给予0.02g/kg、二甲双胍组每日灌胃给予二甲双胍0.02g/kg，柠檬苦素二甲双胍联用组每日同时灌胃给予柠檬苦素0.01g/kg以及二甲双胍0.01g/kg，异柠檬内酯酸二甲双胍联用组每日同时灌胃给予异柠檬内酯酸0.01g/kg以及二甲双胍0.01g/kg，柠檬苦素糖苷二甲双胍联用组每日同时灌胃给予柠檬苦素糖苷0.01g/kg以及二甲双胍0.01g/kg，异柠檬内酯酸糖苷二甲双胍联用组每日同时灌胃给予异柠檬内酯酸糖苷0.01g/kg以及二甲双胍0.01g/kg，灌胃量为10ml/kg，正常组和模型组给予10ml/kg蒸馏水。2周后末次给药1h后剪尾测定血糖值(强生血糖仪)，求出各组的平均值。采用spss16.0软件进行统计分析，数据以平均值和标准偏差表示，前后数据采用t检验分析，p＜0.05认为有统计学意义。测试结果见下表1。
表1表示每天灌胃给药两周后，stz小鼠的血糖值
注*：经独立t检验，与模型组相比，差异极显著(p＜0.05)
**：经独立t检验，与模型组相比，差异极显著(p＜0.01)
实验结果讨论
从上述结果可知，与模型组相比，无论是单独给药还是与二甲双胍联用，柠檬苦素及其衍生物均能显著降低stz胰岛细胞损伤小鼠的血糖值。柠檬苦素及其衍生物与二甲双胍联用相对于单独用药效果均有显著提高，显示出协同增效的效果。此外，柠檬苦素及其衍生物与二甲双胍联用时，相较单独给药，在降糖效果相当的情况下，可有效降低二者的用药量，提高治疗方案的安全性，降低副作用。
实施例2
柠檬苦素类化合物、二甲双胍或其组合在ii型糖尿病小鼠模型中对血糖和瘦素的影响
在本实施例中，用db/db小鼠(品系名称bks.cg-dock7m+/+leprdb/nju)完成动物降糖功效评价实验(血糖值和瘦素)。柠檬苦素类化合物选择黄柏酮、异黄柏酮酸和黄柏酮糖苷，分别设置单独的二甲双胍给药组、黄柏酮给药组、异黄柏酮酸给药组、黄柏酮糖苷给药组以及分别与二甲双胍的联合给药组。
实验饲养的条件：作为ii型糖尿病发病模型小鼠，从南京模式生物所购买6周龄的spf级db/db小鼠，进行7天的预备饲养后进行实验饲养。应予说明，小鼠的饲养条件为温度23±1℃、湿度55±10％、上午7点～下午7点之间亮灯(其他时间关灯)、使小鼠自由摄取水和饲料。实验饲料使用小鼠生长稳定饲料(国标m2118)，动物的日常饲养管理由动物保障部负责，每日为动物提供足够的块料和新鲜的饮用水。
实验分组：选用雄性db/db小鼠(20±2g)，每组18只雄性小鼠进行试验。实验分组为正常对照组(db/m，n＝18)，模型组(db/db，n＝18)，黄柏酮组(db/db，n＝18)，异黄柏酮酸组(db/db，n＝18)，黄柏酮糖苷组(db/db，n＝18)，二甲双胍组(db/db，n＝18)，黄柏酮二甲双胍联用组(db/db，n＝18)，异黄柏酮酸二甲双胍联用组(db/db，n＝18)，黄柏酮糖苷二甲双胍联用组(db/db，n＝18)。
灌胃剂量：黄柏酮组每日灌胃给予黄柏酮0.04g/kg、异黄柏酮酸组每日灌胃给予异黄柏酮酸0.04g/kg、黄柏酮糖苷组每日灌胃给予黄柏酮糖苷0.04g/kg、二甲双胍组每日灌胃给予二甲双胍0.04g/kg，黄柏酮二甲双胍联用组每日同时灌胃给予黄柏酮0.02g/kg以及二甲双胍0.02g/kg，异黄柏酮酸二甲双胍联用组每日同时灌胃给予异黄柏酮酸0.02g/kg以及二甲双胍0.02g/kg，黄柏酮糖苷二甲双胍联用组每日同时灌胃给予黄柏酮糖苷0.02g/kg以及二甲双胍0.02g/kg，灌胃量为10ml/kg，正常组和模型组给予10ml/kg蒸馏水。2周后末次给药1h后剪尾测定血糖值(强生血糖仪)，并且眼眶内眦取血，酶联免疫吸附法(elisa)测定血清瘦素水平，求出各组的平均值。采用spss16.0软件进行统计分析，数据以平均值和标准偏差表示，前后数据采用t检验分析，p＜0.05认为有统计学意义。测试结果见下表2。
表2表示每天灌胃给药两周后，db/db小鼠的血糖值和瘦素
注**：经独立t检验，与模型组相比，差异极显著(p＜0.01)
*：经独立t检验，与模型组相比，差异极显著(p＜0.05)
实验结果讨论
从上述结果可知，与模型组相比，无论是单独给药还是与二甲双胍联用，黄柏酮及其衍生物均能显著降低db/db糖尿病小鼠的血糖值。黄柏酮及其衍生物与二甲双胍联用相对于单独用药效果均有显著提高，显示出协同增效的效果。此外，黄柏酮及其衍生物与二甲双胍联用时，相较单独给药，在降糖效果相当的情况下，可有效降低二者的用药量，提高治疗方案的安全性，降低副作用。
同时，黄柏酮及其衍生物为代表的柠檬苦素类化合物能显著提升瘦素敏感性，特别是在联合二甲双胍使用时，能明显改善瘦素体内的利用效率，改善机体糖代谢机能，改善糖尿病小鼠糖代谢的相关功能。
实施例3
柠檬苦素类化合物、二甲双胍或其组合在小鼠胰岛β细胞损伤模型中对血糖的影响
在本实施例中，用链脲霉素(stz)造模icr小鼠得到小鼠胰岛β细胞损伤模型(参考现有技术文献：李楠等，松花粉对糖尿病肾病小鼠肾脏损伤的保护作用，科技导报，2014，32(4/5)：95-99)，完成动物降糖功效评价实验(该模型可以模拟i型、ii型糖尿病胰岛β细胞损伤状态)。柠檬苦素类化合物选择宜昌橙苦素、宜昌根辛、宜昌橙苦素糖苷，设置单独的二甲双胍给药组、宜昌橙苦素给药组、宜昌根辛给药组、宜昌橙苦素糖苷给药组以及与二甲双胍复配的联合给药组。
实验饲养的条件：icr小鼠(20±2g)，6周龄，购自浙江省医学科学院，进行7天的预备饲养后进行实验饲养。应予说明，小鼠的饲养条件为温度23±1℃、湿度55±10％、上午7点～下午7点之间亮灯(其他时间关灯)、使小鼠自由摄取水和饲料。实验饲料使用小鼠生长稳定饲料(国标m2118)，动物的日常饲养管理由动物保障部负责，每日为动物提供足够的块料和新鲜的饮用水。
实验分组：取雄性小鼠，随机15只作为正常对照组，其余小鼠禁食12h后，150mg/kg剂量一次性腹腔注射stz，72h后选取血糖值为15-25mmol/l的小鼠无差异分组纳入实验，每组15只，给药2周后，取血检测指标。
灌胃剂量：宜昌橙苦素组每日灌胃给予0.1g/kg、宜昌根辛组每日灌胃给予0.1g/kg、宜昌橙苦素糖苷每日灌胃给予0.1g/kg、二甲双胍组每日灌胃给予二甲双胍0.1g/kg，宜昌橙苦素二甲双胍联用组每日同时灌胃给予宜昌橙苦素0.05g/kg以及二甲双胍0.05g/kg，宜昌根辛二甲双胍联用组每日同时灌胃给予宜昌根辛0.05g/kg以及二甲双胍0.05g/kg，宜昌橙苦素糖苷二甲双胍联用组每日同时灌胃予宜昌橙苦素糖苷0.05g/kg以及二甲双胍0.05g/kg，灌胃量为10ml/kg，正常组和模型组给予10ml/kg蒸馏水。2周后末次给药1h后剪尾测定血糖值(强生血糖仪)，求出各组的平均值。采用spss16.0软件进行统计分析，数据以平均值和标准偏差表示，前后数据采用t检验分析，p＜0.05认为有统计学意义。测试结果见下表3。
表3表示每天灌胃给药两周后，stz小鼠的血糖值
注**：经独立t检验，与模型组相比，差异极显著(p＜0.01)
*：经独立t检验，与模型组相比，差异极显著(p＜0.05)
实验结果讨论
从上述结果可知，与模型组相比，无论是单独给药还是与二甲双胍联用，上述三种柠檬苦素类化合物均能显著降低stz胰岛细胞损伤模型小鼠的血糖值。与二甲双胍联用时，相对于单独用药效果均有显著提高，与正常小鼠血糖值相近，显示出协同增效的效果。此外，上述三种柠檬苦素类化合物与二甲双胍联用时，相较单独给药，在降糖效果相当的情况下，可有效降低二者的用药量，提高治疗方案的安全性，降低副作用。
实施例4
柠檬苦素类化合物、二甲双胍或其组合在ii型糖尿病小鼠模型中对血糖和胰岛素的影响
在本实施例中，柠檬苦素类化合物选择诺米林、脱乙酰诺米林、诺米林酸、脱乙酰诺米林酸糖苷，分别设置单独的二甲双胍给药组、诺米林给药组、脱乙酰诺米林给药组、诺米林酸给药组、脱乙酰诺米林酸糖苷给药组以及分别与二甲双胍联合给药组。
实验饲养的条件：作为ii型糖尿病发病模型小鼠，从南京模式生物所购买6周龄的spf级db/db小鼠，进行7天的预备饲养后进行实验饲养。应予说明，小鼠的饲养条件为温度23±1℃、湿度55±10％、上午7点～下午7点之间亮灯(其他时间关灯)、使小鼠自由摄取水和饲料。实验饲料使用小鼠生长稳定饲料(国标m2118)，动物的日常饲养管理由动物保障部负责，每日为动物提供足够的块料和新鲜的饮用水。
诺米林、脱乙酰诺米林、诺米林酸、脱乙酰诺米林酸糖苷
实验分组：选用雄性db/db小鼠(20±2g)，每组18只雄性小鼠进行试验，饮水瓶每周灭菌处理一次。实验分组为正常对照组(db/m，n＝18)，模型组(db/db，n＝18)，诺米林组(db/db，n＝18)，脱乙酰诺米林组(db/db，n＝18)，诺米林酸组(db/db，n＝18)，脱乙酰诺米林酸糖苷组(db/db，n＝18)，二甲双胍组(db/db，n＝18)，诺米林联用组(db/db，n＝18)，脱乙酰诺米林联用组(db/db，n＝18)，诺米林酸联用组(db/db，n＝18)，脱乙酰诺米林酸糖苷联用组(db/db，n＝18)。
灌胃剂量：诺米林组每日灌胃给予诺米林0.2g/kg、脱乙酰诺米林组每日灌胃给予脱乙酰诺米林0.2g/kg、诺米林酸组每日灌胃给予诺米林酸0.2g/kg、脱乙酰诺米林酸糖苷组每日灌胃给予脱乙酰诺米林酸糖苷0.2g/kg、二甲双胍组每日灌胃给予二甲双胍0.2g/kg、诺米林联合用药组每日同时灌胃给予诺米林0.1g/kg以及二甲双胍0.1g/kg，诺米林酸联合用药组每日同时灌胃给予诺米林酸0.1g/kg以及二甲双胍0.1g/kg，脱乙酰诺米林联合用药组每日同时灌胃给予脱乙酰诺米林0.1g/kg以及二甲双胍0.1g/kg，脱乙酰诺米林酸糖苷联合用药组每日同时灌胃给予脱乙酰诺米林酸糖苷0.1g/kg以及二甲双胍0.1g/kg，灌胃量为10ml/kg，正常组和模型组给予10ml/kg蒸馏水。2周后末次给药1h后剪尾测定血糖值(强生血糖仪)，并且眼眶内眦取血，酶联免疫吸附法(elisa)测定血清胰岛素水平，求出各组的平均值。采用spss16.0软件进行统计分析，数据以平均值和标准偏差表示，前后数据采用t检验分析，p＜0.05认为有统计学意义。测试结果见下表4。
表4表示每天灌胃给药两周后，db/db小鼠的血糖值和胰岛素
注**：经独立t检验，与模型组相比，差异极显著(p＜0.01)
*：经独立t检验，与模型组相比，差异极显著(p＜0.05)
实验结果讨论
从上述结果可知，与模型组相比，无论是单独给药还是与二甲双胍联用，诺米林及其衍生物均能显著降低db/db糖尿病小鼠的血糖值。诺米林及其衍生物与二甲双胍联用相对于单独用药效果均有显著提高，显示出协同增效的效果。此外，诺米林及其衍生物与二甲双胍联用时，相较单独给药，在降糖效果相当的情况下，可有效降低二者的用药量，提高治疗方案的安全性，降低副作用。
同时，诺米林及其衍生物为代表的柠檬苦素类化合物能显著提升胰岛素敏感性，特别是在联合二甲双胍使用时，能明显改善胰岛素体内的利用效率，改善机体糖代谢机能，改善糖尿病小鼠糖代谢的相关功能。
实施例5
柠檬苦素类化合物、二甲双胍或其组合在小鼠ii型糖尿病胰岛受损肥胖模型中对血糖的影响
在本实施例中，用链脲霉素(stz)小剂量多次造模，icr小鼠连续高脂饮食后，得到小鼠ii型糖尿病胰岛受损肥胖模型(参考现有技术文献：张继媛等，三种植物提取物对ⅱ型糖尿病小鼠糖脂代谢改善作用研究，食品与机械，2016，32(12)：142-147)。柠檬苦素类化合物选择诺米林糖苷、脱乙酰基诺米林糖苷、诺米林酸糖苷，设置单独的二甲双胍给药组、诺米林糖苷给药组、脱乙酰基诺米林糖苷给药组、诺米林酸糖苷给药组以及与二甲双胍复配的联合给药组。
实验饲养的条件：icr小鼠(20±2g)，6周龄，购自浙江省医学科学院，进行7天的预备饲养后进行实验饲养。应予说明，小鼠的饲养条件为温度23±1℃、湿度55±10％、上午7点～下午7点之间亮灯(其他时间关灯)、使小鼠自由摄取水和饲料。实验饲料使用小鼠生长稳定饲料(国标m2118)，动物的日常饲养管理由动物保障部负责，每日为动物提供足够的块料和新鲜的饮用水。
实验分组：取雄性小鼠，随机15只作为正常对照组，其余小鼠高脂饮食(高脂饲料配方：胆固醇1％、蛋黄粉10％、猪油10％、基础饲料79％以建立肥胖小鼠模型)连续四周，连续三天35mg/kg剂量腹腔注射stz，1周后禁食禁水24h，测定空腹血糖，选取血糖值为15-25mmol/l的小鼠无差异分组纳入实验，继续高脂饮食，每组15只，给药3周后，取血检测指标。
灌胃剂量：诺米林糖苷组每日灌胃给予0.5g/kg、脱乙酰基诺米林糖苷组每日灌胃给予0.5g/kg、诺米林酸糖苷每日灌胃给予0.5g/kg、二甲双胍组每日灌胃给予二甲双胍0.5g/kg，诺米林糖苷二甲双胍联用组每日同时灌胃给予诺米林糖苷0.25g/kg以及二甲双胍0.25g/kg，脱乙酰基诺米林糖苷二甲双胍联用组每日同时灌胃给予脱乙酰基诺米林糖苷0.25g/kg以及二甲双胍0.25g/kg，诺米林酸糖苷二甲双胍联用组每日同时灌胃给予诺米林酸糖苷0.25g/kg以及二甲双胍0.25g/kg，灌胃量为10ml/kg，正常组和模型组给予10ml/kg蒸馏水。2周后末次给药1h后剪尾测定血糖值(强生血糖仪)，求出各组的平均值。采用spss16.0软件进行统计分析，数据以平均值和标准偏差表示，前后数据采用t检验分析，p＜0.05认为有统计学意义。测试结果见下表5。
表5表示每天灌胃给药三周后，stz小鼠的血糖值
注**：经独立t检验，与模型组相比，差异极显著(p＜0.01)
*：经独立t检验，与模型组相比，差异极显著(p＜0.05)
实验结果讨论
从上述结果可知，与模型组相比，无论是单独给药还是与二甲双胍联用，上述三种柠檬苦素类糖苷均能显著降低stzii型糖尿病模型小鼠的血糖值。与二甲双胍联用时，相对于单独用药效果均有显著提高，与正常小鼠血糖值相近，显示出协同增效的效果。此外，上述三种柠檬苦素类糖苷与二甲双胍联用时，相较单独给药，在降糖效果相当的情况下，可有效降低二者的用药量，提高治疗方案的安全性，降低副作用。
实施例6
柠檬苦素类化合物、二甲双胍或其组合在肥胖小鼠模型中对体重、甘油三酯和总胆固醇的影响
本实施例用icr小鼠完成动物降脂减肥功效评价实验(体重、血清胆固醇、血清甘油三酯)。
在本实施例中，柠檬苦素类化合物选择诺米林，分别设置单独的二甲双胍给药组、诺米林给药组以及二甲双胍和诺米林联合给药组(设置剂量组a和b)。
实验饲养的条件：icr小鼠，从浙江医科院动物中心购买。雌雄各半，体重(20±2g)，基础饲料由浙江医科院动物中心提供。应予说明，小鼠的饲养条件为温度23±1℃、湿度55±10％、上午7点～下午7点之间亮灯(其他时间关灯)、使小鼠自由摄取水和饲料。动物的日常饲养管理由动物保障部负责，每日为动物提供足够的填料和新鲜的饮用水。
将icr小鼠按体重随机分为正常组、高脂饲料组，正常组从实验开始至结束用普通饲料喂养，其余动物均喂高脂饲料(高脂饲料配方：胆固醇1％、蛋黄粉10％、猪油10％、基础饲料79％以建立肥胖小鼠模型)，3周后测量体重，高脂饲料组动物体重高于正常对照组，经t检验，数据差异具有显著意义，造模成功(数据未显示)。将确定已形成肥胖模型的小鼠分为模型对照组(n＝15)，诺米林对照组(n＝15)，二甲双胍组(n＝15)，诺米林和二甲双胍联用剂量组a(n＝15)，诺米林和二甲双胍联用剂量组b(n＝15)。
灌胃剂量：诺米林组每日灌胃给予诺米林0.1g/kg、二甲双胍组每日灌胃给予二甲双胍0.1g/kg，联用剂量组a每日同时灌胃给予诺米林0.05g/kg以及二甲双胍0.05g/kg，联用剂量组b每日同时灌胃给予诺米林0.1g/kg以及二甲双胍0.1g/kg，灌胃量为10ml/kg，正常组和模型组给予10ml/kg蒸馏水。2周后，称重，眼眶取血，测定血清总胆固醇和甘油三酯水平，求出各组的平均值。采用spss16.0软件进行统计分析，数据以平均值和标准偏差表示，前后数据采用t检验分析，p＜0.05认为有统计学意义。测试结果见下表6。
表6表示每天灌胃给药两周后，icr小鼠的体重增长率、血清甘油三酯、总胆固醇值
注**：经独立t检验，与模型组相比，差异极显著(p＜0.01)
*：经独立t检验，与模型组相比，差异极显著(p＜0.05)
实验结果讨论
从上述结果可知，与模型组相比，联用剂量组a和高剂量组的体重增长率均远低于模型组，且效果优于单独给药组，且剂量组b效果更佳，同时发现两个药物具有协同增效的效果；联用剂量组a在体重增长率、血清总胆固醇、血清甘油三酯等指标基本相当的情况下，有效地降低了阳性对照药二甲双胍的用量，降低了副作用，增加了治疗方案的安全性。因此，柠檬苦素类化合物与双胍类化合物的联合使用可以有效提高降脂减肥的效果。
实施例7
含有诺米林和二甲双胍的组合产品的片剂的制备方法
在本实施例中，示例性提供了本发明的组合产品(诺米林和二甲双胍)的片剂的制备方法。单个片剂含有下述成分：诺米林50mg，盐酸二甲双胍400mg，羟丙基甲基纤维素的用量为20mg，羧甲基纤维素钠的用量为30mg，微晶纤维素的用量为20mg，硬脂酸镁5.2mg，欧巴代20.8mg，共计1000片。
所述制备方法包括以下步骤：
a)将50g诺米林溶解于5l50％乙醇中；
b)将原、辅料分别过100目筛，备用；
c)称取400g盐酸二甲双胍、20g羟丙基甲基纤维素、30g羧甲基纤维素钠、20g微晶纤维素置流化床中，设置进风风量500±50m3/h、进风温度90±5℃、产品温度70±5℃，进行热熔制粒；
d)将诺米林溶液喷入流化床中，设置雾化压力1.0±0.2bar、喷液速度30±10hz，进行一步制粒；
e)将制好的颗粒过1.0mm圆孔筛网进行干整粒；
f)加入5.2g硬脂酸镁，混合5min；
g)用17×8.5mm椭圆形冲压片，压力为15kn；
h)用20.8g欧巴代85f32004以1:4溶于蒸馏水中,包衣锅设置参数为：片床温度40±2℃，出风温度48±2℃，雾化压力0.6mpa，锅速7rpm，喷量120g/min。完成包薄膜衣。