一种中药提取物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用与流程

本发明涉及一种中药提取物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术：

传统中药治疗癌症的效果并不显著，通常中药是用作辅助治疗。目前常用于癌症治疗的中药有：山慈菇、斑螯、蜈蚣、蟾蜍、喜树、白花蛇舌草、紫衫、半枝莲、女贞子、长春花、猴头菇、灵芝、茯苓、人生、薏苡仁等。传统中药治疗癌症的效果不明显的主要原因在于，传统中药制备主要是高温水煮提取，而中药中许多有效的抗癌成分是高温不稳定的，或者水溶解性差，因此提取物中含量低、口服吸收性差。

夏枯草、女贞子、白花蛇舌草这三味中药常用语肿瘤和癌症的治疗，这些中药材中均含有五环三萜类化合物、植物甾醇和其他类有机小分子，这些有机小分子能减缓或抑制肿瘤干细胞增殖并诱导其分化。但这类中药在治疗肿瘤和癌症的临床运用中，效果并不明显，或者可以说基本没有作用，其原因是这些有机小分子在水溶液中和大部分常用的有机溶剂中溶解度极低，所以常规中药提取制剂中，有效成分难以达到有效作用量。

技术实现要素：

本发明采用95％乙醇溶剂，通过室温和高温多步萃取，促进有效成分的溶解，从而提取抗癌中药中的有效成分，提高提取物中有效抗癌成分的含量。结果表明通过本发明方法提取的抗癌中药粗提物能明显减缓或抑制肿瘤干细胞增殖并诱导其分化，可用于制备抗肿瘤药物。

本发明采用的技术方案是：

一种中药提取物的制备方法，所述方法为：

(1)夏枯草、女贞子、白花蛇舌草按质量比8～10:1～3:1(优选9:2:1)混合、研磨粉碎成粗粉；

(2)上述粗粉加入体积分数95％的乙醇，室温搅拌6～20小时(优选8～12小时)后过滤或抽滤，得到滤液a和药渣a；

(3)药渣a加入体积分数95％的乙醇，室温搅拌6～20小时(优选8～12小时)后，在70～80℃(优选75℃)温度下加热回流3～6小时(优选4小时)，然后保温70～75℃下快速加热过滤或抽滤，得到滤液b和药渣b；；

(4)滤液b冷却至室温后，析出胶状沉淀，室温下过滤或抽滤或高速离心，得到固态沉淀c为粗提物-i，得到的滤液c或上清液c加入步骤(3)的药渣b中，室温搅拌6～20小时(优选8～12小时)后，在70～80℃(优选75℃)温度下加热回流3～6小时(优选4小时)，然后保温70～75℃下快速加热过滤或抽滤，得到滤液d和药渣d，滤液d为粗提物-ii；

(5)将粗提物-i和粗提物-ii合并，真空干燥，得到所述中药提取物。

所述方法中，滤液a、药渣a、滤液b、药渣b、固态沉淀c、滤液c或上清液c、滤液d、要找d中的a、b、c、d只是用来区别表述不同步骤过程中的药渣、滤液等，不具备化学意义。

所述步骤(2)中，所述体积分数95％的乙醇的体积用量以粗粉的质量计为5～8l/kg，优选6l/kg。

所述步骤(3)中，所述体积分数95％的乙醇的体积用量以药渣a的质量计为7～10l/kg，优选8l/kg。

所述步骤(4)中，所述滤液c或上清液c的体积用量以药渣b的质量计为7～10l/kg，优选8l/kg。

所述室温一般是指20℃-30℃。

所述步骤(2)中过滤或抽滤得到的滤液a可以弃去或保留用于制备其它药物。

所述步骤(2)中的药渣a尽量抽干，除去残留液，或用体积分数95％的乙醇洗去残留溶液再抽干；洗涤剂的体积用量以药渣a的质量一般计为1l/kg。

所述步骤(5)中的药渣d弃去。

进一步，本发明的中药提取物的制备方法优选按以下步骤进行：

(1)夏枯草、女贞子、白花蛇舌草按质量比9:2:1混合、研磨粉碎成粗粉；

(2)上述粗粉加入体积分数95％的乙醇，室温搅拌6～20小时后过滤或抽滤，得到滤液a和药渣a；所述体积分数95％的乙醇的体积用量以粗粉的质量计为6l/kg；

(3)药渣a加入体积分数95％的乙醇，室温搅拌6～20小时后，在75℃加热回流4小时，然后保温75℃下快速加热过滤或抽滤，得到滤液b和药渣b；所述体积分数95％的乙醇的体积用量以药渣a的质量计为8l/kg；

(4)滤液b冷却至室温后，析出胶装沉淀，室温下过滤或抽滤或高速离心，得到固态沉淀c为粗提物-i，得到的滤液c或上清液c加入步骤(3)的药渣b中，室温搅拌6～20小时后，在75℃加热回流4小时，然后保温75℃下快速加热过滤或抽滤，得到滤液d和药渣d，药渣d弃去，滤液d为粗提物-ii；所述滤液c或上清液c的体积用量以药渣b的质量计为8l/kg；

(5)将粗提物-i和粗提物-ii合并，真空干燥，得到所述中药提取物。

本发明还提供按上述制备方法制备得到的中药提取物。

所述中药提取物具有抗肿瘤活性，可用于制备抗肿瘤药物。并且对人体正常细胞物无干扰作用。

进一步，本发明提供的中药提取物可用于制备抗肠癌、肝癌或乳腺癌药物。

本发明提供的中药提取物可以直接制成胶囊或片剂等药物制剂，也可以加入人体可接受的药用辅料制成胶囊或片剂等药物制剂。

本发明的有益效果在于：本发明利用通过室温和高温多步萃取，有效地提取了夏枯草,女贞子,白花蛇舌草这三味中药抗癌成分，提取得到的中药提取物有较为明显的抗肿瘤活性，在浓度高于50μg/ml，对人肠癌细胞caco2和人肝癌细胞snu449有明显的减缓或抑制作用。对乳腺癌细胞mcf7在高浓度下略有作用。而且中药提取物在各个浓度下对正常成纤维细胞无明显作用，因此可以用于制备抗肿瘤药物。

附图说明

图1实施例1中的中药提取物的提取流程图。

图2mtt检测实施例1和对比例1的中药提取物对人正常成纤维细胞(fibroblast)，人乳腺癌细胞(mcf7),人肠癌细胞(caco2)和人肝癌细胞(snu449)增殖的影响曲线图，其中a图为比较例1的提取物，b图为实施例1的xnb921粗提物。

图3光学显微镜观察实施例1的提取物对人正常成纤维细胞(fibroblast)，人乳腺癌细胞(mcf7),人肠癌细胞(caco2)和人肝癌细胞(snu449)增殖生长影响的照片图。

具体实施方式

下面以具体实施例来对本发明的技术方案做进一步说明，但本发明的保护范围不限于此。

实施例1

图1显示了采用优选的实施方式制备夏枯草、女贞子、白花蛇舌草抗癌中药粗提物的过程。

详细步骤如下:

1)夏枯草,女贞子,白花蛇舌草(9:2:1重量比)研磨粉碎成粗粉(尽量磨碎)。

2)加6倍体积95％乙醇(每1公斤草药粗粉加6升95％乙醇),室温(20℃-30℃)搅拌过夜，过滤或抽滤。

3)弃去滤液a(或保留制备其它药物)。药渣a抽干(尽量抽干残留液，或用1倍体积95％乙醇洗去残留溶液后抽干)。

4)抽干后的药渣a加8倍体积95％乙醇(每1公斤药渣加8升95％乙醇),，室温(20℃-30℃)搅拌过夜；75℃加热回流4小时，75℃快速加热过滤或抽滤。

5)保留步骤4)得到的药渣b。步骤4)得到的滤液b冷却至室温(20℃-30℃)待胶状沉淀析出，室温过滤/抽滤或高速离心。所得沉淀c为粗提物‐i，所得滤液c或上清液c重新加入到步骤4)的药渣b中，重复步骤4)，即：药渣b加约8倍体积的滤液c或上清液c，室温(20℃-30℃)搅拌过夜；75℃加热回流4小时，75℃快速加热过滤或抽滤。

6)弃去药渣d。此滤液d为粗提物‐ii。

7)合并粗提物‐i和粗提物‐ii，混匀，真空干燥，此干燥物为中药提取物，记为xnb921粗提物。

比较例1

原料试剂和提取步骤同实施例1，只是步骤4)和步骤5)的75℃加热回流4小时改为室温下(20℃-30℃)提取4小时，同样制得提取物。

中药提取物(xnb921)的抗癌活性检测

由于粗提物和草药存在有效成份含量的差异,所以要对粗提物进行抗癌活性检测。采用mtt，台盼蓝(trypanblue),brdu等方法,测定粗提物对人正常细胞和人干细胞(例：hepatocytes,fibroblast,esc等)与及人癌细胞(例：hepg2,snu398,mcf7,mda231,caco2,imr32等癌细胞株)的细胞增殖和凋亡水平的影响。同时用光学显微镜观察粗提物对正常细胞和癌细胞形态变化的影响。

实验结果:

用比较例1在室温下(20℃-30℃)提取的粗提物(95％乙醇提取)和实施例1在75℃高温下提取的粗提物(xnb921),浓度从25μg/ml到200μg/ml,处理人正常成纤维细胞(fibroblast)和3种不同的癌细胞(人乳腺癌细胞mcf7,人肠癌细胞caco2和人肝癌细胞snu449)3天(72小时)；mtt测定结果显示,比较例1的提取物对正常成纤维细胞和3种不同的癌细胞均无作用(如图2中a图所示)。而实施例1的xnb921粗提物，在浓度高于50μg/ml，对人肠癌细胞caco2和人肝癌细胞snu449有明显的减缓或抑制作用。对乳腺癌细胞mcf7在高浓度下略有作用。但xnb921在各个浓度下对正常成纤维细胞无明显作用(如图2中b图所示)。

光学显微镜观察xnb921粗提物对正常细胞和癌细胞增殖和形态变化的结果如图3所示,xnb921粗提物对正常成纤维细胞无明显作用,对乳腺癌细胞mcf7略有作用,但对人肠癌细胞caco2和人肝癌细胞snu449的增殖有着明显的减缓或抑制作用,并诱导人肠癌细胞caco2和人肝癌细胞snu449分化。