本发明涉及一种三叶青抗菌液及其制备方法，属于抗菌液技术领域。
背景技术：
随着人们生活环境的改善，与各种致病病原微生物(细菌、真菌、酵母菌、藻类及病毒等)的接触仍不可避免，它们的传播和蔓延严重威胁着人类的健康，痱子、痘痘、蚊虫叮咬引起的瘙痒对皮肤黏膜有一定的刺激性，并容易使皮肤创伤而造成感染，从而引发各种疾病。如何有效控制有害细菌的生长和繁殖，显得十分有意义，而抗菌液能够在一定时间内，使某些致病微生物的生长或繁殖保持在必要水平以下的物质。抗菌液在生活中应用日益广泛，其中北美是使用抗菌剂最多的地区，占全球总用量的40％，其次是日本，占据20％，而日本的人均抗菌剂使用量最大，远超北美和欧洲。抗菌剂一般分为无机抗菌剂，有机抗菌剂和天然抗菌剂。无机抗菌剂具有耐热性、持续性、抗菌谱光等优点，但其价格较高，且抗菌的迟效性，不能像有机抗菌剂那样能快速杀死细菌。有机抗菌剂能有效抑制有害细菌、霉菌的产生与繁殖，见效快，但这类抗菌剂热稳定性较差，持久性差，而且通常毒性较大，长时间使用对人体有害。天然抗菌剂，是从天然植物中提取，在生产和使用过程中对人类和环境一般不产生污染危害，生物相溶性好，但抗菌功能有限，很难做到光谱长效。
申请号为201510253667.7的中国发明申请，公开了一种红花酊抗菌液及其制备方法，其特征在于：该抗菌液由下述质量百分比的原料制成：樟脑5-8g，冰片100-110g，细辛15-20g，黄连5-8g，莪术40-45g，三棱40-45g，血竭5-8g，红花40-45g，蟾酥4-6g，无水乙醇7-8kg，乙醚1.0-1.2kg，丙酮1.0-1.0kg，乙基纤维素18.5kg。以上抗菌液的配方组成中有低沸点的乙醚和丙酮存在，极易燃烧或者爆炸，在生产过程中存在极大安全隐患，应极力避免，因此不适宜推广使用。本发明涉及的一种三叶青抗菌液，属于天然抗菌剂，是从天然植物中提取，在生产和使用过程中对人类和环境一般不产生污染危害，生物相溶性好，适合工业化生产。经过科学组方配伍和先进制备工艺，无毒副作用，无环境污染，并克服了天然抗菌剂的抗菌功能有限、持续性差等缺点。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种抗菌效果好、安全性高、稳定性好及生产工艺先进的三叶青抗菌液及其制备方法，该抗菌液组方配伍合理，生产工艺可操作性程度高，是一种外用的天然抗菌剂，适用于皮肤表层抑菌，对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、堇色毛癣菌等有较好的杀灭作用，抑菌效果明显，对蚊虫叮咬，皮肤瘙痒有较好的消肿止痛止痒的功效，并能祛痱祛痘，对皮肤刺激性小。
为解决上述问题，本发明所采取的技术方案如下：
一种三叶青抗菌液，称取组分中各中药，粉碎，置中药提取灌中，加入6～10倍量的60-80％乙醇，将乙醇与粗粉混合后加温到50-70℃，恒温24-48小时，过滤后再次提取，合并两次滤液，用活性炭脱色，获得提取液。将0.2％-0.4％冰片加入提取液中，充分搅拌至冰片完全溶解，获得混合液，并调节乙醇浓度至35～45％，搅拌均匀后，将其密封静置24h，将静置液过滤，用灌装机进行灌装。
作为上述技术方案的改进，所述称取组分中各中药，粉碎，取4份三叶青，2份苦参，2份白鲜皮，2份黄芩，2份板蓝根，1份青蒿，1份半枝莲，2份地肤子，并粉碎成粗粉，过30目筛。
作为上述技术方案的改进，加入10倍量的70％乙醇，将乙醇与粗粉混合后加温到50℃，恒温48小时，过滤后再次提取，合并两次滤液，用活性炭脱色，获得提取液。
作为上述技术方案的改进，过滤后再次提取，加入8倍量70％乙醇，继续加热至50℃，恒温保持24小时，提取液用活性炭脱色。
作为上述技术方案的改进，脱色液加入0.2％冰片，充分搅拌至冰片溶解，加入纯净水，调整乙醇浓度至35％，密封静置24小时，过滤，获得棕黄色澄清液体，用灌装机灌装即得。
具体地，所述三叶青抗菌液的制备方法由以下步骤构成：
(1)称取各中药，粉碎，置中药提取灌中，加入乙醇，加热提取，提取液过滤后经活性炭脱色，加入冰片，充分搅拌，并调节醇浓度至合适范围，静置后过虑，包装，即得。
(2)所述步骤(1)中，取3-4份三叶青，1-2份苦参，1-2份白鲜皮，1-2份黄芩，1-2份板蓝根，1-2份青蒿，1-2份半枝莲，1-2份地肤子，并粉碎成粗粉，过30目筛。
(3)所述步骤(1)中，加入粗粉总量的6～10倍量的60-80％乙醇，将乙醇与粗粉混合后加温到50-70℃，恒温24-48小时，过滤后再次提取，合并两次滤液，用活性炭脱色，获得提取液；
(4)所述步骤(1)中，将0.2％-0.4％冰片加入提取液中，充分搅拌至冰片完全溶解，获得混合液，并调节乙醇浓度至35～45％，搅拌均匀后，将其密封静置24h；
(5)在所述步骤(1)中，将静置液过滤，用灌装机进行灌装，即得成品。
本发明与现有技术相比较，本发明的实施效果如下：
本发明采用乙醇作为溶剂，低温提取，在生产和使用过程中对人类和环境不产生污染危害，可操作性强，适合工业化生产；一种三叶青抗菌液，其组方配伍合理，各成分含有的多种抑菌、镇痛成分，相辅相成，发挥协同作用，克服了天然抗菌剂的抗菌功能有限、持续性差等缺点。
此外，本发明适用于皮肤表层抑菌，对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、堇色毛癣菌、同心性毛癣菌等有较好的杀灭作用，抑菌效果明显，对蚊虫叮咬，皮肤瘙痒有较好的消肿止痛止痒的功效，并能祛痱祛痘，对皮肤刺激性小。
具体实施方式
下面将结合具体的实施例来说明本发明的内容。
本发明所述的三叶青抗菌液的制备方法，由以下原料组成：3-4份三叶青，1-2份苦参，1-2份白鲜皮，1-2份黄芩，1-2份板蓝根，1-2份青蒿，1-2份半枝莲，1-2份地肤子，0.2-0.4％冰片，60-80％乙醇。
所述三叶青味微苦，性平，具有清热解毒、祛风化痰、活血止痛等功效，主治毒蛇咬伤、扁桃体炎、淋巴结结核、跌打损伤、小儿高热惊厥等疾病。
黄芩味苦，性寒，有清热燥湿，凉血安胎，泻火解毒等功效。黄芩对对痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、霍乱弧菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、葡萄球菌、溶血性链球菌等有抑制作用，在临床上抗菌性比黄连好，且不产生抗药性。
板蓝根味苦，性寒，有清热解毒、凉血利咽之功效，主要用于治疗温毒发斑、舌绛紫暗、烂喉丹痧等疾病。水浸液对枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、八联球菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、痢疾(志贺、弗氏)杆菌、肠炎杆菌等都有不同程度的抑制作用。
苦参味苦，性寒，有清热燥湿，杀虫，利尿之功。用于热痢，湿疹，湿疮，皮肤瘙痒，疥癣麻风等症。其醇提物对金黄色葡萄球菌有较强的抑菌作用；苦参水浸剂对堇色毛癣菌、同心性毛癣菌、许兰毛癣菌、奥杜盎小芽孢癣菌等有抑制作用。
白鲜皮味苦，性寒，具有清热燥湿，祛风解毒之功效。用于风热湿毒所致的风疹、湿疹、疥癣、黄疸、湿热痹。体外试验表明1:4的白鲜皮水浸液对多种致病真菌如堇色毛癣菌、同心性毛癣菌、许兰氏黄癣菌，均有不同程度的抑制作用。
地肤子味辛、苦，性寒，具有清热利湿，祛风止痒功效。用于阴痒带下，风疹，湿疹，皮肤瘙痒。水浸剂(1：3)在试管内对许兰氏黄癣菌，奥社盎氏小芽胞癣菌等皮肤真菌有抑制作用。水浸液用试管稀释法，1：3对许兰黄癣菌、奥杜盎小孢子菌及星形奴卡菌等均有抑制作用。
青蒿味苦、性寒，具有清虚热，除骨蒸，解暑热，截疟，退黄之功效。常用于温邪伤阴，夜热早凉，阴虚发热，骨蒸劳热，暑邪发热，疟疾寒热，湿热黄疸等病症的治疗。其水煎剂对多种细菌有抑制作用。
半枝莲味辛，性平，具有凉血解毒，散瘀止痛，消肿和清热利湿之功效，用于咽喉肿痛、毒蛇咬伤、跌打损伤、疔疮肿毒、水肿、黄疽等症。半枝莲50％煎剂用平板挖沟法，对金黄色葡萄球菌、福氏痢疾杆菌、伤寒杆菌、绿脓杆菌、大肠杆菌有抑制作用。
冰片味辛、性凉，具有开窍醒神，清热散毒，明目退翳的功效。外用能清热消肿、止痒止痛。
乙醇：在三叶青抗菌溶液中起到溶解有效成份的作用，也作为冰片的溶剂，使其便于加入溶剂中。
实施例1：
称取3份三叶青，1份苦参，1份白鲜皮，1份黄芩，1份板蓝根，1份青蒿，1份半枝莲，1份地肤子，分别碎成粗粉，过30目筛，置提取罐中，加入8倍量60％乙醇，加热至50℃，恒温保持24小时，放冷过滤，再加入6倍量60％乙醇，继续加热至50℃，恒温保持24小时，合并两次提取液，用活性炭脱色后加入0.2％冰片，充分搅拌至冰片溶解，加入纯净水，调整乙醇浓度至35％，密封静置24小时，过滤，获得棕黄色澄清液体，灌装即得。
实施例2：
称取3份三叶青，1份苦参，1份白鲜皮，1份黄芩，1份板蓝根，1份青蒿，1份半枝莲，1份地肤子，分别碎成粗粉，过30目筛，置提取罐中，加入8倍量70％乙醇，加热至50℃，恒温保持24小时，放冷过滤，再加入6倍量70％乙醇，继续加热至50℃，恒温保持24小时，合并两次提取液，用活性炭脱色后加入0.3％冰片，充分搅拌至冰片溶解，加入纯净水，调整乙醇浓度至40％，密封静置24小时，过滤，获得棕黄色澄清液体，灌装即得。
实施例3：
称取3份三叶青，1份苦参，1份白鲜皮，1份黄芩，1份板蓝根，1份青蒿，1份半枝莲，1份地肤子，分别碎成粗粉，过30目筛，置提取罐中，加入8倍量80％乙醇，加热至50℃，恒温保持24小时，放冷过滤，再加入6倍量80％乙醇，继续加热至50℃，恒温保持24小时，合并两次提取液，用活性炭脱色后加入0.4％冰片，充分搅拌至冰片溶解，加入纯净水，调整乙醇浓度至45％，密封静置24小时，过滤，获得棕黄色澄清液体，灌装即得。
实施例4：
称取3份三叶青，2份苦参，2份白鲜皮，2份黄芩，2份板蓝根，1份青蒿，1份半枝莲，2份地肤子，分别碎成粗粉，过30目筛，置提取罐中，加入8倍量60％乙醇，加热至50℃，恒温保持36小时，放冷过滤，再加入6倍量60％乙醇，继续加热至50℃，恒温保持36小时，合并两次提取液，用活性炭脱色后加入0.2％冰片，充分搅拌至冰片溶解，加入纯净水，调整乙醇浓度至35％，密封静置24小时，过滤，获得棕黄色澄清液体，灌装即得。
实施例5：
称取3份三叶青，2份苦参，2份白鲜皮，2份黄芩，2份板蓝根，1份青蒿，1份半枝莲，2份地肤子，分别碎成粗粉，过30目筛，置提取罐中，加入8倍量70％乙醇，加热至60℃，恒温保持36小时，放冷过滤，再加入6倍量70％乙醇，继续加热至60℃，恒温保持36小时，合并两次提取液，用活性炭脱色后加入0.3％冰片，充分搅拌至冰片溶解，加入纯净水，调整乙醇浓度至40％，密封静置24小时，过滤，获得棕黄色澄清液体，灌装即得。
实施例6：
称取3份三叶青，2份苦参，2份白鲜皮，2份黄芩，2份板蓝根，1份青蒿，1份半枝莲，2份地肤子，分别碎成粗粉，过30目筛，置提取罐中，加入8倍量80％乙醇，加热至70℃，恒温保持36小时，放冷过滤，再加入6倍量80％乙醇，继续加热至70℃，恒温保持36小时，合并两次提取液，用活性炭脱色后加入0.4％冰片，充分搅拌至冰片溶解，加入纯净水，调整乙醇浓度至45％，密封静置24小时，过滤，获得棕黄色澄清液体，灌装即得。
实施例7：
称取4份三叶青，2份苦参，2份白鲜皮，2份黄芩，2份板蓝根，1份青蒿，1份半枝莲，2份地肤子，分别碎成粗粉，过30目筛，置提取罐中，加入10倍量60％乙醇，加热至50℃，恒温保持48小时，放冷过滤，再加入8倍量60％乙醇，继续加热至50℃，恒温保持48小时，合并两次提取液，用活性炭脱色后加入0.2％冰片，充分搅拌至冰片溶解，加入纯净水，调整乙醇浓度至35％，密封静置24小时，过滤，获得棕黄色澄清液体，灌装即得。
实施例8：
称取4份三叶青，2份苦参，2份白鲜皮，2份黄芩，2份板蓝根，1份青蒿，1份半枝莲，2份地肤子，分别碎成粗粉，过30目筛，置提取罐中，加入10倍量70％乙醇，加热至60℃，恒温保持48小时，放冷过滤，再加入8倍量70％乙醇，继续加热至60℃，恒温保持48小时，合并两次提取液，用活性炭脱色后加入0.3％冰片，充分搅拌至冰片溶解，加入纯净水，调整乙醇浓度至40％，密封静置24小时，过滤，获得棕黄色澄清液体，灌装即得。
实施例9：
称取4份三叶青，2份苦参，2份白鲜皮，2份黄芩，2份板蓝根，1份青蒿，1份半枝莲，2份地肤子，分别碎成粗粉，过30目筛，置提取罐中，加入10倍量80％乙醇，加热至70℃，恒温保持48小时，放冷过滤，再加入8倍量80％乙醇，继续加热至70℃，恒温保持48小时，合并两次提取液，用活性炭脱色后加入0.3％冰片，充分搅拌至冰片溶解，加入纯净水，调整乙醇浓度至45％，密封静置24小时，过滤，获得棕黄色澄清液体，灌装即得。
本发明所述三叶青抗菌液多次皮肤刺激试验：
试验方法：将新西兰家兔的背部脊柱两侧被毛剪掉，去毛范围各位3cm×3cm，涂敷面积2.5cm×2.5cm，取受试物涂敷在一侧皮肤上，另一侧作为对照，在涂抹后4h，用水或无刺激的适宜溶剂清洗，除去残留物；每天涂敷1次，连续涂敷14d；在每次涂抹后24h观察结果，按规范中的相关要求进行评分和分级；微量便于受试物的涂抹和结果观察，必要时应剪毛；对照区的处理方法通试验区。
试验结果，见表1：
表1受试物对家兔多次皮肤刺激性试验结果
结果表明受试物对家兔多次皮肤刺激性检验结果为无刺激性，未见其他毒性。
中和剂鉴定试验和细菌定量杀灭试验：
器材：
①试验菌株：大肠杆菌8099、金黄色葡萄球菌atcc6538由中国工业微生物种保藏管理中心提供，第4-8代新鲜斜面培养物；
②中和剂：d/e肉汤；
③其他：浓度为3％的有机干扰物，标准硬水等。
方法：
①检测依据：中和剂鉴定试验及定量杀灭试验按照卫生部《消毒技术规范》(2002版)2.1.1.5.5和2.1.1.7.4条；
②中和剂鉴定试验：以该试验样品4倍稀释液和大肠杆菌作用0.5min。试验温度19℃-21℃，试验重复3次；
③定量杀灭试验：以该试验样品原液，作用时间分别为2.5min、5min、7.5min，试验温度19℃-21℃，试验重复3次。
结果：
①中和剂鉴定试验，3次重复试验中，3、4、5三组间回收菌落误差分别为9.77％、10.90％、5.97％。结果见表2。
表2中和剂鉴定试验结果
注：阴性对照均无菌生长。
②对试验结果的杀灭效果
经3次重复试验，结果表明该发明一种三叶青抗菌液对大肠杆菌作用2.5min，杀灭对数值>5.00；对金黄色葡萄球菌作用2.5min、5min、7.5min，平均杀灭对数值分别为2.36、3.95，>5.00。结果见表3。
表3三叶青抗菌液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的杀灭效果
结论：
①：经3次重复试验，结果表明d/e肉汤中和剂可中和三叶青抗菌液中的杀菌成分，且中和剂及中和产物对试验菌生长及培养基无明显影响。表明该中和剂适用于该试验样品对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的定量杀灭试验。
②：经3次重复试验表明，该发明的三叶青抗菌液对悬液中的大肠杆菌作用2.5min，杀灭对数值>5.00；对金黄色葡萄球菌作用2.5min、5min、7.5min，平均杀灭对数值分别为2.36、3.95，>5.00。
以上内容是结合具体的实施例对本发明所作的详细说明，不能认定本发明具体实施仅限于这些说明。对于本发明所属技术领域的技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明保护的范围。