本发明属于天然产物领域，具体涉及龙葵提取物及其分离提取方法和在制备消炎镇痛类药物中的应用。
背景技术：
龙葵(solanumnigruml.)，是一至多年生野生草本植物，广布世界各地，生于农田、荒地、田边及村庄附近。别名苦菜、苦葵、老鸦眼、天茄子，龙葵味苦，性寒，微甘，有小毒。归肺，肾二经。有清热解毒、活血化瘀、利水消肿、止咳祛痰的功效。主治感冒发烧、牙痛、湿疹、皮肤瘙痒症、高血压、慢性支气管炎、急性肾炎、泌尿系感染、癌性胸腹水、细菌性痢疾等。全草含生物碱，尤其是澳洲茄碱、澳洲茄边碱。生物碱的含量以果实最多。果实在成熟期时，生物碱的含量为4-6％。全草尚含皂甙，此外尚含维生素a和维生素c。龙葵可全草入药，可内服及外用。
近年来海内外药学家在原有的中医药理论的基础上对龙葵单味药的化学成分进行了进一步提纯分析，进行了大量的研究，获得了较为客观的信息，尤其是在抗肿瘤方面的研究。但总体来说对龙葵的药理实验刚刚进入初步阶段，尚未见对龙葵详细的消炎及镇痛方面有效成分或有效部位的报道。
龙葵在过去的研究利用上多为复方制剂，与其他食品、中药配合使用，未见单方使用，使用效果往往不大理想，增加了成本和不可控的成分；要对疾病起疗效，需要较大的剂量，而且起效时间较长。
技术实现要素：
为了解决现有技术中龙葵活性成分和有效部位不明确的问题，本发明的首要目的在于提供一种龙葵提取物的分离提取方法。
本发明的另一目的在于提供由上述方法制得的龙葵提取物。
本发明的再一目的在于提供上述的龙葵提取物在制备消炎镇痛类药物中的用途。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种龙葵提取物的分离提取方法，包括以下步骤：
将龙葵全株粉碎，加水或乙醇溶液，浸提若干次，浸提液过滤，合并滤液，浓缩成浸膏，即为龙葵提取物；
所述的浸提是常温浸提或加热浸提；
所述的加热浸提优选100℃以下浸提；
上述方法中，合并滤液后可以加入有机溶剂萃取，然后取有机溶剂层，再浓缩成浸膏；
所述的有机溶剂优选氯仿、乙酸乙酯或石油醚；
所述的石油醚优选石油醚-30、石油醚-60或石油醚-90。
上述的龙葵提取物具有消炎、镇痛功效，可用于制备消炎类或镇痛类药物；
所述的消炎类、镇痛类药物还包含可接受的辅料和其他起配伍协同作用的有效成分；
所述的消炎类、镇痛类药物可以为各种剂型，如片剂、颗粒剂、胶囊、滴丸、缓释剂、口服液、注射剂等。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
本发明的龙葵提取物，其分离提取方法简便、高效、节能，有效部位和活性成分明确，具有确切的消炎和镇痛功效，可用于制备相关用途的药物。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
一种龙葵提取物，由以下步骤制得：
龙葵全株粉碎，过20目筛，加水没过药材，加热至100℃后恒温提取1h，提取二次，过滤，合并滤液，浓缩成浸膏(黑色)，为龙葵提取物。
实施例2
一种龙葵提取物，由以下步骤制得：
龙葵全株粉碎，过40目筛，加水，室温下超声提取30分钟，提取三次，水提液过滤，合并滤液，滤液旋转蒸发除去溶剂，得棕黑色浸膏，为龙葵提取物。
实施例3
一种龙葵提取物，由以下步骤制得：
龙葵全株粉碎，不过筛，加水加热至60℃，恒温煎煮一天，提取两次，过滤，合并滤液，滤液加入氯仿萃取，静置，滤液分为两层，去水层，取氯仿层。旋蒸除去氯仿，得墨绿色浸膏，为龙葵提取物。
实施例4
一种龙葵提取物，由以下步骤制得：
龙葵全株粉碎，不过筛，加50％的乙醇溶液加热至60℃，恒温煎煮一天，提取两次，过滤，合并滤液，滤液加入乙酸乙酯萃取，静置，滤液分为两层，取乙酸乙酯层。旋蒸除去乙酸乙酯，得浸膏，为龙葵提取物。
实施例5
龙葵提取物的动物体内抑菌实验
1、实验动物：sd大鼠60只，体重130～150g，随机分成5个组，每组12只。设空白对照组、阳性对照组(即阿司匹林组)和龙葵提取物低、中、高剂量实验组。
2、样品来源与配制：
(1)高剂量组：实施例1所得的浸膏加生理盐水稀释成相当于生药含量200mg/ml，给药剂量相当于生药2000mg.kg体重。
(2)中剂量组：将高剂量组的样品加生理盐水稀释2倍，相当于生药含量100mg/ml，给药剂量相当于生药1000mg/kg体重。
(3)低剂量组：将高剂量组的样品加生理盐水稀释4倍，相当于生药含量40mg/ml，给药剂量相当于生药400mg/kg体重。
(4)阳性对照组采用阿司匹林：河北石家庄制药集团生产，批号：061114。
3、实验方法：鸡蛋清致大鼠足跖肿胀的影响。
4、实验过程：
每只大鼠按1g/kg体重腹腔注射乌拉坦进行麻醉，在各鼠的左右蹊部用碘酒消毒，75％乙醇脱碘后，各切开1cm长小口，用眼科镊子将已称重为30mg的灭菌脱脂棉球(直径6.5mm～8.5mm)一个植入皮下，每个棉球加青霉素、链霉素各0.1mg(溶于0.2ml生理盐水中)，以防感染，随即缝合皮肤。
实验前大鼠禁食不禁水12h，术后2h开始按1ml/100g体重灌胃给药，其中空白对照组给等体积蒸馏水，1次/d，共7d。在第8d杀死动物，打开原切口，将棉球连同周围结缔组织一起取出，剥出周围已包裹肉芽组织的棉球，剔除脂肪组织，在60℃烘箱放置12h后称重，减去原棉球重量即为肉芽肿净重。
5、实验结果：
由表1可见，龙葵提取物低、中、高剂量组的棉球肉芽肿净重与空白对照组比较，差异具有统计学意义(p<0.05或0.01)，说明龙葵提取物组能明显抑制大鼠棉球肉芽肿的形成，提示龙葵提取物具有一定的抗炎作用。
表1龙葵提取物对大鼠棉球肉芽肿的影响(x±s,n＝10)
与空白对照组比较：*p＜0.05；**p＜0.01
实验结果显示,本发明的龙葵提取物有明显的抗炎效果，其高剂量抗炎效果与阳性药阿司匹林相比没有明显差异。
实施例6
龙葵提取物的体外抑菌实验
1、菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、沙门氏菌、宋氏志贺氏菌、痢疾杆菌，都是本领域的常用菌种，购自中山大学微生物教研室。
2、样品来源与处理
(1)龙葵提取物：实施例4制得的浸膏，加生理盐水稀释，以生药量计浓度为0.5g/ml。
(2)黄连素药液：制备成浓度为0.1g/ml。
3、实验方法：采用体外抗菌法(二倍稀释法)进行实验
4、实验过程：
(1)孵化菌种：取大肠杆菌等用接种环接种于已灭菌的营养肉汤培养基中，在37℃恒温箱中培养18h。
(2)菌种度的稀释：取孵化后的菌种，稀释到200倍。
(3)药液浓度的确定：进行二倍稀释法。
(4)抗菌实验：各取经过稀释的菌液0.1ml分别接种于不同的实验组药液中，置于37℃培养箱培养24h，后分别从中吸取1ml加入9ml肉汤培养基中以稀释十倍，取此含菌和药液的培养基用肉汤培养基继续稀释10～107倍。将0.1ml各浓度的含菌和药液的肉汤培养基置平皿琼脂培养基上，共作3个平皿，用无菌涂棒，轻轻将菌液摊开，切勿将菌液碰到平皿的边缘，将平皿置37℃培养基培养20h，计算菌落数，取菌落数范围在30-300个的平皿进行菌落数计算，然后根据药物的稀释倍数计算出原含菌药液中的菌落数作为试验结果。
5、实验结果：
结果见下表。
表2抗菌试验结果(x±s)
实验结果表明，本龙葵制剂具有明显的抗菌效果。
实施例7
龙葵提取物的镇痛实验
1、实验动物：nih小鼠，雌雄各半，清洁级标准，共50只，体重18～22g，随机分成5组，每组10只。设模型对照组、阳性对照组和龙葵提取物的高、中、低三个剂量组。
2、样品来源与配制：
(1)高剂量组：实施例1所得的浸膏加生理盐水稀释成相当于生药含量200mg/ml，给药剂量相当于生药2000mg.kg体重。
(2)中剂量组：将高剂量组的样品加生理盐水稀释2倍，相当于生药含量100mg/ml，给药剂量相当于生药1000mg/kg体重。
(3)低剂量组：将高剂量组的样品加生理盐水稀释4倍，相当于生药含量40mg/ml，给药剂量相当于生药400mg/kg体重。
(4)阳性对照组采用阿司匹林：河北石家庄制药集团生产，批号：061114。
3、实验方法：醋酸至扭体实验
实验前小鼠禁食不禁水12h，然后各组小鼠按0.7ml/20g体重灌胃给药，其中模型对照组给等体积蒸馏水。给药后30min，腹腔注射0.6％醋酸溶液0.2ml，观察记录30min内扭体次数，并计算镇痛率。
镇痛率＝[(模型组扭体次数－给药组扭体次数)/模型组扭体次数]×100％
4、实验结果：
经统计，各剂量组镇痛结果见下表3。
表3各剂量组醋酸镇痛的实验(x±s,n＝10)
与模型对照组比较，**p＜0.01,*p＜0.05。
由表3可见，与正常组比较，龙葵提取物各剂量均具有明显的镇痛作用；其中，龙葵提取物高剂量组的效果与阳性对照组相当，说明本发明的龙葵提取物具有明显的镇痛作用。
综上所述，说明本发明的龙葵提取物具有很好的消炎和镇痛效果。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。