一种白介素28A作为制备治疗银屑病药物中的应用的制作方法

本发明属于白介素28a的应用技术领域，尤其涉及白介素28a作为制备治疗银屑病药物的应用。

背景技术：

银屑病是一种常见的慢性、炎症性疾病，以皮肤改变为主要表现并可累及关节，病情严重时可降低患者生活质量，其发病率为2％。其病理变化表现为角质形成细胞的异常增殖、异常分化及局部炎症。

外用药物治疗是银屑病治疗中不可或缺的手段，同时使用润肤剂稳定病情，避免复发。目前治疗寻常型银屑病的外用药物有润肤剂、角质溶解剂、煤焦油、皮质类固醇激素、蒽林、卡泊三醇等。

白细胞介素，简称白介素，是指在白细胞或免疫细胞间相互作用的淋巴因子，它和血细胞生长因子同属细胞因子。两者相互协调，相互作用，共同完成造血和免疫调节功能。白细胞介素在传递信息，激活与调节免疫细胞，介导t、b细胞活化、增殖与分化及在炎症反应中起重要作用。

受试品白介素28a是iii型干扰素的一个亚型，白介素通过与受体复合物结合进行信号转导，主要激活jak-stat通路诱导抗病毒、抗增殖、抗癌及调控适应性免疫反应。在疾病治疗方面，利用白介素治疗慢性丙型肝炎已完成三期临床试验，临床药试编号为nct01598090(https://clinicaltrials.gov/ct2/show/nct01598090？term＝peginterferon+lambdarank＝2)。在治疗慢性丙型肝炎的临床实验中给药方式为皮下注射，证明了白介素具有可靠的系统用药安全性。

技术实现要素：

本发明的目的是在现有技术的基础上，提供一种能应用于银屑病方面的物质。

为达到上述目的，本发明的技术方案如下：

本发明提供了一种白介素28a作为制备治疗银屑病药物中的应用。

进一步地，白介素28a的剂型为按照药学常规方法制成的皮肤外用药剂型。

进一步地，皮肤外用药剂型为按照药学常规方法制成外用溶液剂、酊剂、醑剂、粉剂、洗剂、油剂、乳剂、软膏剂、糊剂、硬膏剂、涂膜剂或凝胶剂中的一种。

进一步地，皮肤外用药剂型为软膏剂。

进一步地，白介素28a的用量为1μg/day-5.0μg/day。

进一步地，白介素28a的用量为2μg/day。

另外，提供一种用于治疗银屑病的以药物组合物，以白介素28a为活性成分，辅以药学上可接收的基质形成。

进一步地，该药物组合物为按照药学常规方法制成的皮肤外用药剂型。更进一步地，皮肤外用药剂型为按照药学常规方法制成外用溶液剂、酊剂、醑剂、粉剂、洗剂、油剂、乳剂、软膏剂、糊剂、硬膏剂、涂膜剂或凝胶剂中的一种。

通过上述技术方案，本发明的有益效果是：

本发明中，白介素28a用于制备治疗银屑病药物时，其给药是安全的，由于银屑病的特殊性，一般将其支撑膏剂涂抹，效果更佳。

白介素28a的剂量可根据服用方式、病人的年龄、病情严重等因素而改变，使用量为1-5μg/次，一天一次。

白介素28a具有明显的抑制银屑病样表型出现的疗效，实验表明，白介素28a治疗组小鼠表现为背部皮肤红肿及鳞屑消退，h&e染色结果显示表皮厚度显著降低。我们进一步通过实验real-timepcr及westernblot在分子及蛋白水平上明确了白介素28a对银屑病样小鼠相关蛋白和因子的表达降低。白介素28a为治疗银屑病药物提供了潜在的应用前景。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明提供的实施例1中各组小鼠的银屑病症状图；

图2为本发明提供的实施例1中各组小鼠的h&e形态学观察图；

图3为本发明提供的实施例1中各组小鼠的表皮厚度测量图；

图4为本发明提供的实施例2中各组小鼠的银屑病症状图；

图5为本发明提供的实施例2中轻度用药组小鼠的h&e形态学观察图。

具体实施方式

为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。

白介素28a治疗银屑病的效果，通过以下试验证明。

实验例一、白介素28a对银屑病的治疗作用

(一)实验材料

1、实验动物

balb/c小鼠，雌性，6-8周龄，购买于第四军医大学实验动物中心，饲养于陕西省第四军医大学实验动物中心spf级动物房，先适应性饲养7天；实验室温度控制在20-25℃，湿度在50％-60％，自由饮水与进食。

2、实验药物与试剂

咪喹莫特(imq)：生产公司：inovapharmaceuticals(singapore)pte,limited，进口药品注册证号：h20160079，生产批号：gri015a。储存条件：25℃以下密闭保存，勿冷冻；

白介素28a：做动物实验时，使用的是鼠源性白介素28a，由美国peprotech公司生产，产品编号为250-33。

由于小鼠与人的种属性不同，必须用鼠源性的药物进行动物实验。

(二)、试验方法

1.利用imq连续涂抹的方式进行银屑病小鼠造模，待小鼠出现银屑病样表型时，涂抹白介素28a软膏进行治疗，对照组为imq造模组、白介素28a软膏基质组及空白组，通过治疗组与对照组小鼠表型的比较，评估白介素28a的治疗作用。

2、分组与给药

将上述小鼠随机分为3组，分别为imq造模组、imq基质对照组和白介素28a实验组；

1)imq造模组：剃除小鼠背部毛发，连续7天在小鼠背部剃毛部位涂抹imq软膏构建银屑病小鼠动物模型，imq软膏使用剂量为(60mg:3mg)/只/天，通过表型的观察及后续he组织切片染色，鉴定造模是否成功。

这一组的目的是为了检验imq造模是否成功。

imq基质对照组：剃除小鼠背部毛发，连续4天在小鼠背部剃毛部位涂抹imq软膏构建银屑病小鼠动物模型，imq软膏使用剂量为(60mg:3mg)/只/天，，第5天开始早上涂抹白介素28a的药物基质，下午涂抹imq持续造模，连续涂抹基质3天，即第7天完成实验。这一组为了证明药物基质对小鼠模型的影响。即本组小鼠，只涂抹基质，而没有药物，单独设计药物基质组，用于消除基质对治疗效果的影响。

本组中，所述药物基质乳膏剂，比如乳化的凡士林。

3)白介素28a实验组：剃除小鼠背部毛发，连续4天在小鼠背部剃毛部位涂抹imq软膏构建银屑病小鼠动物模型，imq软膏使用剂量为(60mg：3mg)/只/天，第5天开始早上涂抹白介素28a药物，下午涂抹imq持续造模，连续治疗3天，即第7天完成实验。

本组实施例中，白介素28a药物制备为：将购买的白介素28a药物溶于水后制备成100μg/ml的贮存液，将白介素28a药物与基质混匀制备成白介素28a药膏(药膏浓度为10mg：2μg，即每10ml基质中含有2μg的白介素28a药物)，涂抹于小鼠背部。

通过比较白介素28a实验组与imq基质对照组表型的差异，评价白介素28a的治疗作用。

为了检测小鼠的正常生理状态，还设立空白对照组，即采用balb/c野生型小鼠，代表小鼠正常生理状态。

3、结论

参照附图1-3，图1-a为imq造模组，从图1-a可以看出，经过7天的造模后，小鼠已具有银屑病的症状，即小鼠背部皮肤有红斑，周围有炎性红晕，表面覆盖银白色鳞屑；

从图1-b可以看出，imq基质对照组，采用基质涂抹后，银屑病症状有所缓解，但小鼠背部仍可见红肿的炎症表型；

从图1-c可以看出，白介素28a实验组的小鼠，在涂抹白介素28a药物后，银屑病表型明显好转，相对于其它组小鼠的背部，本组小鼠背部红肿的炎症表型消失，没有白色鳞屑，基本趋于正常小鼠背部。

从图1-d可以看出，空白对照组小鼠背部皮肤正常，没有染银屑病，故也没有采取相应措施。

参照附图2a-2d中小鼠的h&e组织切片染色图可知，白介素28a实验组的小鼠表皮厚度降低。

对于上述小鼠的h&e组织切片染色图中，白色为背景色，深紫色为小鼠表皮厚度。

从图2-a为imq造模组中某一小鼠的h&e组织切片染色图。观察该图可知，经过7天的造模后，小鼠已具有银屑病的症状，故其h&e组织切片染色图中，小鼠的表皮厚度明显增加，此时变为92.5μm；

从图2-b为imq基质对照组中某一小鼠的h&e组织切片染色图。观察可知，采用基质涂抹后，银屑病症状虽有所缓解但仍有明显的症状，故其h&e组织切片染色图中，小鼠的表皮厚度比imq造模组小鼠的表皮厚度薄，为61.4μm；

从图2-c为白介素28a实验组中某一小鼠的h&e组织切片染色图。观察可知，在涂抹白介素28a药物后，银屑病表型明显好转，相对于前面2组小鼠的背部，本组小鼠表皮厚度明显降低，其表皮厚度为37.4μm。

从图2-d为空白对照组中某一小鼠的h&e组织切片染色图。观察可知，小鼠背部皮肤正常，没有染银屑病，其表皮厚度11.9μm，为正常小鼠的表皮厚度。

参照附图3即四组的表皮厚度统计图，采用了柱形统计图。小鼠表皮厚度的测量具体为：取各组小鼠背部皮肤，进行h&e染色，测量组织切片上的表皮厚度，然后通过统计学方法，计算出每组的小鼠平均表皮厚度。

图3中，横坐标分别表示对应的四组，比如a为imq造模组，b为imq基质对照组，c为白介素28a实验组，d为空白对照组；纵坐标标识每组的小鼠平均表皮厚度，由图可知，a组(imq造模组)中的小鼠平均表皮厚度70μm左右，b组(imq基质对照组)中的小鼠平均表皮厚度55μm左右，c组(白介素28a实验组)中的小鼠平均表皮厚度35μm左右，d组(空白对照组)中的小鼠平均表皮厚度15μm左右。通过上述数据明显可知，白介素28a实验组效果明显，即银屑病表型明显得到好转。

通过图3明显看出，空白对照组表皮厚度最薄(其接近正常)，imq造模组厚度最大，即有明显的银屑病表皮增厚的症状；而白介素28a实验组厚度与对照组相比降低，并具有统计学意义，即白介素28a可以改善小鼠银屑病表皮增厚的表型。通过图3可以看出，患有银屑病时，小鼠表皮厚度大于60μm，而银屑病好了后，小鼠表皮厚度小于40μm，两者相差具有统计学意义(p＜0.0001)。实验表明，白介素28a对银屑病小鼠有明显治疗作用。

实验例二、不同剂量白介素28a对银屑病的治疗作用

(一)实验材料

1、实验动物

balb/c小鼠，雌性，6-8周龄，购买于第四军医大学实验动物中心，饲养于陕西省第四军医大学实验动物中心spf级动物房，先适应性饲养7天；实验室温度控制在20-25℃，湿度在50％-60％，自由饮水与进食。

2、实验药物与试剂

咪喹莫特(imq)：生产公司：inovapharmaceuticals(singapore)pte,limited，进口药品注册证号：h20160079，生产批号：gri015a。储存条件：25℃以下密闭保存，勿冷冻；

白介素28a：做动物实验时，使用的是鼠源性白介素28a，由美国peprotech公司生产，产品编号为250-33。

由于小鼠与人的种属性不同，必须用鼠源性的药物进行动物实验。

(二)、试验方法

1.利用imq连续涂抹的方式进行银屑病小鼠造模，待所有小鼠均感染银屑病样表型时，将其分组；

2、分组与给药

将所有银屑病造模成功的小鼠分为两组，即轻度用药组和重度用药组，其中：轻度用药组的用药量为：0.25μg/day/moμse；重度用药组的用量为：2.0μg/day/moμse。

轻度用药组：imq连续造模4天，第5天开始早上涂抹白介素28a药物，用药量为：0.25μg/day/moμse，即每只小鼠每天涂抹0.25μg的白介素28a药物；下午涂抹imq持续造模。连续涂抹3天。

重度用药组：imq连续造模4天，第5天开始早上涂抹白介素28a药物，用药量为：2.0μg/day/moμse，即每只小鼠每天涂抹0.25μg的白介素28a药物；下午涂抹imq持续造模。连续涂抹3天。

本实施例中，白介素28a药物的制备方法为：将购买的白介素28a药物溶于水后制备成100μg/ml的贮存液，将白介素28a药物与基质混匀制备成白介素28a药膏(药膏浓度为10mg：2μg，即每10ml基质中含有2μg的白介素28a药物)，涂抹于小鼠背部。

针对轻度用药组和重度用药组，将重度用药组的药物通过水稀释八倍，即得轻度用药组的药物；

或者用相同药膏浓度的药物药时，先确定轻度用药组的用药量，然后重度用药组为轻度用药组用量的八倍。

参照附图4-a，为轻度用药组的小鼠，通过附图明显看出，小鼠背部仍有红肿的炎症表型即少量的鳞屑，即治疗效果不明显；参照附图4-b，为重度用药组的小鼠，其背部银屑病明显改善，通过图中观察，明显看出小鼠背部皮肤光滑，无鳞屑和红斑。即对银屑病已治愈有治疗作用。

参照附图5-a，为本实施例中轻度用药组中某一小鼠的背部皮肤he组织切片染色后的形态学观察图，通过附图可知，此时，小鼠背部的表皮厚度为62.4μm，说明小鼠的银屑病基本没有改善，也就是说该剂量时，小鼠的银屑病治疗效果差。

而附图5-b则为重度用药组小鼠的背部皮肤he组织切片染色后的形态学观察图，通过附图可知，此时，小鼠背部的表皮厚度为35.5μm，与轻度用药组相比，小鼠的表皮厚度明显降低，故重度用药组效果明显。

3、结论

通过对比可知，每只小鼠每天涂抹2.0μg的白介素28a药物，对于银屑病具有明显的治疗效果。

由于银屑病属于皮肤病，其组织病理学就是h&e染色的图片，而本实施例中，通过h&e染色表明表皮高剂量治疗后小鼠表皮厚度显著降低，具有显著的治疗效果。

上述实施例中，还可以将白介素28a药物按照药学常规方法制备为溶剂型、酊剂、醑剂、粉剂、洗剂、油剂、乳剂、软膏、糊剂、硬膏、涂膜剂或凝胶中的一种。由于银屑病为皮肤病，采用口服药等不如直接涂抹皮肤外用药效果明显，且皮肤病大多以涂剂、软膏剂等为主。

以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。