本发明属于生物技术领域，具体涉及一种牡蛎活性肽的制备方法。
背景技术：
牡蛎蕴含丰富的蛋白质、多肽、功能氨基酸等生理活性物质，其氨基酸组成均衡、水溶性好、稳定性高，且易于消化吸收。牡蛎含有多种功能，牡蛎的肝糖元存在与储藏能量的肝脏与肌肉中，与细胞的分裂、再生、红血球的活性化都有着很深的关系，可以提高肝功能，恢复疲劳，增强体力。在牡蛎中所含有的牛磺酸可以促进胆汁分泌，排除堆积在肝脏中的中性脂肪，提高肝脏的解毒作用。牡蛎体内含有大量制造精子所不可缺少的精氨酸、与微量元素亚铅。精氨酸是制造精子的主要成分，亚铅促进荷尔蒙的分泌。牡蛎中含有的氨基酸可以提高肝脏的机能、抑制乳酸的积蓄，帮助加快疲劳的恢复与体力的增进。牡蛎因为含有铁与铜，对于女性特有的铁缺乏性贫血的治疗是最相当有效的。另外，牡蛎含有大量、大多数人体内都缺乏的亚铅。因此食用牡蛎可以防止皮肤干燥，促进皮肤的新陈代谢，分解皮下黑色素，产生白里透红的娇嫩皮肤。牡蛎富含十分优良的蛋白质，肝糖元、维生素与矿物质、含有十八种以上的氨基酸，在这些氨基酸中富含可以合成抗酸化物质的谷胱甘肽的氨基酸(谷氨基酸、糖胶)。食用牡蛎后，在人体内合成谷胱甘肽，除去体内的活性酸素，提高免疫力，抑制衰老。牡蛎中含有的氨基酸，亚铅等矿物质和维生素，会使血液的循环得到改善，女性的大敌，冷血症与低血压也会得到改善
近年来多项研究表明，牡蛎肽具有抗菌、抗氧化、免疫调节、降血压等多种功能活性。尽管近年来诸多以牡蛎为原材料进行的活性肽研究屡见报道，然而这些报道中多中存在活性肽产率低、产品中蛋白和肽的含量低、制备过程复杂等问题；因此如何在制备牡蛎活性肽的过程中降低其致敏性和苦味，同时最大程度地保留活性肽的生理活性、提高牡蛎活性肽的产率及其蛋白和肽的含量是亟待解决的问题。
技术实现要素：
本发明第一目的在于提供一种具有潜阳补阴作用的中药组合物，其具有显著的潜阳补阴作用。
本发明的另一目的在于提供上述中药组合物的制备方法。
本发明的再一目的在于提供一种具有潜阳补阴作用的中药制剂。
本发明的又一目的在于提供所述中药组合物的用途。
本发明的具有潜阳补阴作用的中药组合物，由如下原料药制成：
牡蛎肽60-90重量份，
黄精5-30重量份，和
百合5-30重量份。
根据本发明的制备方法，优选地，所述中药组合物由如下原料药制成：
牡蛎肽70-85重量份，
黄精10-20重量份，和
百合10-20重量份。
根据上述的任一项所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，将所述牡蛎酶解得到酶解液，将黄精和百合粉加入牡蛎的酶解液中提取，所得提取液浓缩，干燥，得到所述中药组合物。
根据上述的任一项所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：
a、将干牡蛎粉碎，得到牡蛎粉；将所述牡蛎粉加入水，调节ph至8～9，浸泡18～24小时，固液分离，取上清液；
b、将所述上清液调节ph至4～6进行沉淀，固液分离，取固体部分；
c、将所述固体部分加入水，于75～100℃下加热15～30min，然后进行均质，得到混悬液；
d、将所述混悬液调节ph至5～10，加入酶制剂进行酶解；所述酶制剂由风味蛋白酶、胰蛋白酶和中性蛋白酶组成，且所述风味蛋白酶、胰蛋白酶与中性蛋白酶的重量比为2～3∶2～3∶1～2；酶解温度为40-65℃，酶解时间为2-6h，得到酶解液；
e、酶解结束之后，加入黄精和百合，浸提灭酶。将所述黄精和百合加入所述酶解液中，加热回流提取，过滤，得到混合液；
f、将所述混合液离心、浓缩、喷雾干燥，得到所述中药组合物。
根据所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，步骤b中，采用弱酸将所述上清液调节ph至4～6；所述弱酸选自醋酸、乳酸、柠檬酸中的至少一种。
根据所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，步骤e中，所述提灭酶的条件为：灭酶温度为90-125℃，灭酶时间为0.5-3h。
根据所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，步骤f中，将所述灭酶处理后的酶解液进行离心，离心液首先经板框压滤机过滤，再经陶瓷膜过滤，得到含活性肽的透过液；将所述含活性肽的透过液浓缩，喷雾干燥，从而得到所述中药组合物；所述喷雾干燥在80～105℃下进行；
根据所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，步骤f中，所述板框压滤机内含有组合过滤助剂，所述组合过滤助剂由活性炭、珍珠岩和硅藻土按照重量比6～7∶1～3∶3～4组成。
本发明还提供一种具有潜阳补阴作用的中药制剂，其特征在于，所述中药制剂采用上述方法制备中药组合物。
本发明制得的中药组合物用于制备具有潜阳补阴作用的药物或保健食品的用途。
本发明的制备方法工艺简单，成本低廉，并且对牡蛎的全组分进行利用，所得牡蛎活性肽多肽含量高，整个口感较好，苦味值较低，且加入黄精和百合，进一步增强了此中药组合物的功效，具有潜阳补阴、健运脾胃的功效。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于此。
<中药组合物>
本发明提供一种具有潜阳补阴作用的含牡蛎肽的中药组合物，其特征在于，所述组合物由如下原料药制成：
牡蛎60-90重量份，
黄精5-30重量份，和
百合5-30重量份。
优选的，根据上述的中药组合物，其特征在于，所述组合物由如下原料药制成：
牡蛎70-85重量份，
黄精10-20重量份，和
百合10-20重量份。
进一步来讲，根据所述的中药组合物，其特征在于，所述组合物由如下原料药制成：
牡蛎80重量份，黄精10重量份，和百合10重量份；或者
牡蛎75重量份，黄精13重量份，和百合12重量份；或者
牡蛎74重量份，黄精11重量份，和百合15重量份。
本发明中，牡蛎、黄精和百合均具有十分良好的潜阳补阴的功效。牡蛎肽相比于牡蛎更加利于消化吸收，且功效更加明显，可与百合，黄精等同用。在此组合物中，我们将牡蛎酶解为牡蛎肽，将大蛋白酶解为小分子物质和多肽，利于我们人体的肠道吸收，且发挥了肽的功效。
根据本发明的组合物配比，牡蛎肽作为主材，充分发挥其功效，黄精和百合作为辅助添加，进一步发挥其功效，丰富整个体系的营养价值，且能够改变组合物的口感和苦味。
黄精：黄精性甘，平。主治肺燥干咳、体虚乏力、心悸气短、久病津亏口干、糖尿病、高血压等病症。对治疗心血管疾病、结核病、慢性肝炎以及在抗菌、解毒、抗疲劳、抗衰老等方面均有较好作用。黄精主要成分有黄精多糖、甾体皂苷、蒽醌类化合物、生物碱、强心苷、木脂素、维生素和多种对人体有用的氨基酸等化合物。其中黄精多糖具有抗衰老作用，具有抗炎、抗病毒作用，对化学性肝损伤具有保护作用。黄精多糖可以通过改善脑功能来达到延缓衰老的目的，增强大脑的学习记忆功能，很有可能用于人老年性痴呆的预防和治疗。百合：百合是多年生的宿根草本植物，具有较好的药用价值和保健功能。百合鳞叶有润肺止咳、清心安神、益智健脑、补中益气、镇静助眠、滋补强壮、理脾健胃、清热解毒、止血解表、提高免疫力、升高白细胞、美容养颜等许多药用功效。百合是我国卫生部审批通过的首批药食两用植物。中国药典中专门叙述百合具有养阴润肺，清心安神功能。近年来，我国研究人员对百合的各种保健功能进行许多研究，研究表明，百合具有明显的助眠作用，与中医所说的清心安神是吻合的，杨梅香等取小白鼠灌胃给药20g/kg，观察对戊巴比妥钠的影响，结果表明，百合能显著增加戊巴比妥钠的睡眠时间及提高阀下剂量的睡眠率。
除了上面所描述的目的、特征和优点之外，本发明还有其它的目的、特征和优点。下面将对本发明作进一步详细的说明。
<制备方法>
根据本发明的第一种实施方式，所述中药组合物的制备方法包括：将所述牡蛎酶解得到酶解液，将黄精和百合粉加入牡蛎的酶解液中提取，所得提取液浓缩，干燥，得到所述中药组合物。
根据本发明的第一种实施方式，所述中药组合物的制备方法包括如下步骤：
a、将干牡蛎粉碎，得到牡蛎粉；将所述牡蛎粉加入水，调节ph至8～9，浸泡18～24小时，固液分离，取上清液；
b、将所述上清液调节ph至4～6进行沉淀，固液分离，取固体部分；
c、将所述固体部分加入水，于75～100℃下加热15～30min，然后进行均质，得到混悬液；
d、将所述混悬液调节ph至5～10，加入酶制剂进行酶解；所述酶制剂由风味蛋白酶、胰蛋白酶和中性蛋白酶组成，且所述风味蛋白酶、胰蛋白酶与中性蛋白酶的重量比为2～3∶2～3∶1～2；酶解温度为40-65℃，酶解时间为2-6h，得到酶解液；
e、酶解结束之后，加入黄精和百合，浸提灭酶。将所述黄精和百合加入所述酶解液中，加热回流提取，过滤，得到混合液；
f、将所述混合液离心、浓缩、喷雾干燥，得到所述中药组合物。
6.根据权利要求5所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，步骤d中，所述提灭酶的条件为：灭酶温度为90-125℃，灭酶时间为0.5-3h。
根据本发明的制备方法，步骤a中，所述牡蛎粉的粒径为2～75μm。所述牡蛎粉可以通过将干牡蛎进行超微粉碎，然后过筛得到，例如过200～600目筛。采用本发明的粒径的牡蛎粉，能够在后期的酶解步骤中有效提高酶解率，充分利用牡蛎中的蛋白成分。所述浸泡优选为在搅拌下进行浸泡，从而使牡蛎粉中的成分充分溶出。步骤a中，加水量为牡蛎粉重量的3～20倍，优选为5～10倍。优选地，在浸泡工序完成后，进行机械搅拌，从而使液体均匀，便于离心。
步骤a中，所述固液分离方法可以为过滤、离心等，并优选为离心分离。步骤a中，浸泡过程可以加热或在常温下进行，并优选在常温下进行。通常，碱液浸泡过程中需进行加热处理；而发明人发现，在常温下浸泡即可将牡蛎粉中的成分充分溶出，从而避免进行加热产生的额外能耗，且操作更方便。
根据本发明的制备方法，步骤b中，采用加热方法使蛋白质变性。在所述的加热条件下即能够实现牡蛎中的蛋白质成分完全变性，且有利于后续步骤中进行充分酶解，同时且避免了化学试剂对产品的污染。在加热变形后进行均质，进一步提高了酶解效率。
根据本发明的制备方法，步骤c中，将所述混悬液调节至ph5～10，优选为ph7～9，更优选为ph7～8。本发明中，将ph调节至上述弱碱性，更有利于本发明的酶制剂进行酶解。本发明中，酶制剂由风味蛋白酶、胰蛋白酶和中性蛋白酶按照重量比为2～3∶2～3∶1～2组成。根据本发明优选的实施方式，风味蛋白酶、胰蛋白酶和中性蛋白酶的重量比为2.3～2.8∶2.3～2.8∶1.2～1.7。根据本发明一个优选的实施方式，风味蛋白酶、胰蛋白酶和中性蛋白酶的重量比为2.5∶2.5∶1.4。本发明的酶解过程一次性加入上述酶制剂，并在上述ph条件下进行酶解，能够得到更佳酶解效果。本发明的酶制剂对于牡蛎中的蛋白质成分的酶解效率高，明显高于每种酶单用，且高于现有的牡蛎活性肽用酶。当风味蛋白酶、胰蛋白酶和中性蛋白酶的重量比为2.5∶2.5∶1.4时，酶解效率最高。根据本发明的制备方法，所述酶制剂的加入量可以为所述混悬液中固形物重量的0.1～2wt％，优选为0.3～1.5wt％，更优选为0.4～1.2wt％。本发明中，酶解温度为40～65℃，酶解时间为1.5～8h；优选地，酶解温度为45～60℃，酶解时间为2～6h。在上述酶制剂的加入量、酶解时间和温度下，牡蛎蛋白可实现有效酶解。
根据本发明的制备方法，步骤d中，所述黄精和百合可以以粉末形式加入所述酶解液中，从而提高提取率。加热回流提取时间为0.5～3小时，优选为1～2小时。所述过滤可采用常规过滤方法，从而滤去药渣，得到混合液。
根据本发明的制备方法，步骤e中，将所述混合液进行离心，离心液首先经板框压滤机过滤，再经陶瓷膜过滤，滤液浓缩，喷雾干燥，从而得到精制的含牡蛎活性肽的组合物。优选地，所述喷雾干燥操作在80～105℃进行，从而有效保持牡蛎活性肽的活性。
本发明中，所述板框压滤机内含有组合过滤助剂，所述组合过滤助剂由活性炭、珍珠岩和硅藻土组成，且活性炭、珍珠岩和硅藻土的重量比6～7∶1～3∶3～4。根据本发明的一个优选的实施方式，所述组合过滤助剂中活性炭、珍珠岩和硅藻土的重量比6.5∶2.5∶3.5。根据本发明的另一个优选的实施方式，所述组合过滤助剂中活性炭、珍珠岩和硅藻土的重量比6.7∶2.8∶3.3。发明人发现，现有方法制备的牡蛎活性肽带有异味，并具有苦味，口感差；多种过滤助剂单用均难以同时将二者脱除。本发明的过滤助剂能够有效除去牡蛎本身带有的异味和苦味，且经过本发明的过滤助剂处理后，酶解液中油脂类成分被脱除，因而前期无需进行繁琐的脱脂操作，简化了工艺流程。本发明中，所述陶瓷膜的孔径可以为20～500nm，更优选为20～300mm。采用这样的陶瓷膜孔径，能够实现酶解液的进一步精制。优选地，所述喷雾干燥操作在80～105℃进行，从而有效保持牡蛎活性肽的活性。
需要指出的是，通常，肽的喷雾干燥操作在120～140℃进行，一般认为这样的干燥温度对于肽的活性影响不大。然而，发明人发现，现有的喷雾干燥的温度明显影响肽的活性。而本发明中，优选地，所述喷雾干燥操作在80～105℃进行，从而有效保持牡蛎活性肽的活性。
<中药制剂>
本发明的中药制剂包含上述的中药组合物，还可以包含药学上可接受的辅料。所述中药制剂的给药方式可以选用口服。所述中药剂型可以选自粉剂、片剂、丸剂中的任一种。该中药制剂具有显著的潜阳补阴作用，且服用方便。
<用途>
本发明的中药组合物可用于制备具有潜阳补阴作用的药物或保健食品。
以下对本发明的实施例进行详细说明，但是本发明的保护范围不受此限制。
实施例1
将牡蛎80重量份、黄精10重量份和百合10重量份混合，加水作为溶剂加热回流提取，提取次数为3次，每次加水量为牡蛎、黄精和百合总重量的5倍，每次提取时间为2小时，提取液过滤，合并，浓缩，干燥，得到中药组合物a。
实施例2
a、将干牡蛎进行超微粉碎，过400目筛，得到牡蛎粉82重量份；将牡蛎粉加入牡蛎粉重量5倍量的水，混合，用氢氧化钠溶液调节至ph8，浸泡18h；机械搅拌，离心，取上清液；
b、将上清液，于90℃下加热25min，然后进行均质，得到混悬液；
c、将所述混悬液调节ph至8，加入酶制剂进行酶解，得到酶解液；该酶制剂由风味蛋白酶、胰蛋白酶和中性蛋白酶按照2.5∶2.5∶1.4组成；酶制剂的用量为混悬液中固形物重量的0.5wt％；酶解温度为50℃，酶解时间为2h；
d、酶解结束之后，将黄精11重量份和百合7重量份加入所述酶解液中，加热回流提取，提取时间为2h，过滤，得到混合液；
e、将所述混合液离心，离心液经板框压滤机过滤，板框压滤机内含有过滤助剂，过滤助剂由活性炭、珍珠岩和硅藻土按照重量比6.5∶2.5∶3.5组成；再经孔径为400nm的陶瓷膜过滤，滤液浓缩，在中低温喷雾干燥塔内于85℃喷雾干燥，得到含牡蛎活性肽的中药组合物。
实施例3
将实施例1制得的中药组合物82重量份、乳糖16重量份、微晶纤维素1重量份、硬脂酸镁1重量份，过筛、称量、混合、制粒、压片。
实施例4
将实施例1制得的中药组合物82重量份、乳清蛋白粉8重量份、抗性糊精5重量份、麦芽糊精2重量份、结晶果糖2重量份、菊粉1重量份，经过过筛、称量、混合、包装得到粉剂。
对比例1
除了将实施例1中步骤b的醋酸溶液替换为盐酸溶液，其他步骤与对比文件1相同。
对比例2
除了将实施例3中步骤e的喷雾干燥温度设置为135℃，其他步骤与实施例3相同。
测定实施例2和对比例1～2中牡蛎活性肽中多肽含量，结果见表1。
肽的含量测定方法为：根据gb/t22492大豆肽粉中肽含量的测定方法进行。
苦味评价方法为：取1g牡蛎活性肽加入10ml温水中搅拌均匀，将稀释倍数计为苦味值，计算20人的平均苦味值，结果见表2。
腥味评价方法为：评价方法为：0-无腥味；1-略有腥味；2-腥味较弱；3-有腥味；4-腥味一般；5-腥味偏重；6-腥味较重；7-腥味很重计算20人的平均腥味值，结果见表2。
表1
表2
本发明并不限于上述实施方式，在不背离本发明的实质内容的情况下，本领域技术人员可以想到的任何变形、改进、替换均落入本发明的范围。