本发明涉及一种从中药姜黄中提取抗前列腺增生物质的方法，属于中药提取技术领域。
背景技术：
前列腺增生症(benignprostatichyperplasia，bph)是老年男性的常见病，表现为排尿踌躇、尿频、尿急、夜尿增多、尿潴留等症状，并可能引发尿路感染、膀胱结石、甚至肾功能损害等症状，严重影响患者的正常生活。流行病学统计数字表明，男性在40岁之前的发病率较低，50岁以后发病率开始提高，60岁时发病率即可达到50%，而在80岁时发病率可达近90%。随着我国老龄化社会的加重，对此病的治疗显得尤为迫切。
前列腺的增大主要是由间质和腺体成分增生，并以两种不同的方式引起膀胱出口梗阻，一种是因增生形成肿块压迫引起的静力性梗阻，另一种是由包括膀光颈、前列腺平滑肌组织在内的间质和前列腺包膜收缩引起的动力性梗阻。究其原因可能与上皮细胞及间质细胞凋亡减少而过度增殖有关
目前，西医治疗此病主要采用激素疗法，包括雌激素疗法和雄性激素抑制剂，效果较差，且有明显的副作用。中医药对前列腺增生症的认识和治疗历史久远，而且也取得了一定的效果，因此从中药中发现治疗前列腺增生的有效成分或有效提取物是治疗前列腺增生创新药物发现一个有效途径。
姜黄为姜科植物姜黄（curcumalonga）的干燥根茎。辛、苦，温。归脾、肝经。具有破血行气，通经止痛的功能。用于胸胁刺痛，胸壁心痛，痛经经闭，癥瘕，风湿肩臂疼痛，跌扑肿痛。人们已从姜黄属植物中分离了约190余种化合物，主要为挥发油类物质及姜黄素类物质。
姜黄素有很好的抗肿瘤作用。可以有效地抑制肿瘤细胞的增殖，增加肿瘤细胞的凋亡，使肿瘤数目减少同时可以缩小肿瘤的体积，在一定程度上可以逆转癌细胞的恶性表型。其机制主要为诱导、促发癌细胞的凋亡，抑制初生及发展阶段的肿瘤细胞以及对恶性肿瘤细胞的诱导分化作用。姜黄挥发油可以增强免疫并且具有抗肿瘤的作用。主要机制为促进了癌细胞的凋亡，调节免疫反应，在治疗癌细胞的过程中，体现了较好的安全性，因此，姜黄挥发油是治疗肿瘤的有效物质，姜黄为一种较为安全的抗肿瘤药物。目前，有研究表明姜黄中的姜黄素具有抑制前列腺增生细胞的增殖，促进前列腺增生细胞凋亡的作用。然而，不同方法提取的姜黄提取物对前列腺增生症的效果差别较大，姜黄素是否是唯一的活性成分，其他提取物质是否具有抑制前列腺增生作用尚不明确，建立适当的方法提取对前列腺增生有效的姜黄提取物，对药材的综合利用和开发有重要意义，也可为开发治疗前列腺增生的药物提供基础。
技术实现要素：
针对现有技术中不同方法提取的姜黄提取物对前列腺增生症的效果差别较大等问题，本发明提供一种从中药姜黄中提取有效抗前列腺增生物质的方法。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。
一种制备抗前列腺增生姜黄提取物的方法，采用以下步骤：
（1）姜黄粉碎为姜黄粉，加乙醇提取，得乙醇提取物；
（2）将乙醇提取物先以乙醚提取，再以正丁醇提取；
（3）将步骤（2）中乙醚提取物与正丁醇提取物混合，即得抗前列腺增生的姜黄提取物。
优选地，上述制备抗前列腺增生姜黄提取物的方法，采用以下步骤：
a）姜黄饮片粉碎为姜黄粉，加入乙醇提取，过滤后滤液回收乙醇，得总提液；
b）将步骤a）所得总提液，加水分散得分散液，分散液先以乙醚萃取，得乙醚萃取液，剩余液以水饱和正丁醇萃取，得正丁醇萃取液；
c）将乙醚萃取液和正丁醇萃取液分别回收溶剂，低温干燥并粉碎，合并两种萃取物，混匀，得抗前列腺增生的姜黄提取物。
步骤b）中，所述分散液，每毫升相当于含姜黄1g。
步骤b）中，乙醚或水饱和正丁醇萃取次数均为3-4次，每次萃取的用量为分散液体积的2倍。
优选地，上述制备抗前列腺增生姜黄提取物的方法，采用以下步骤：
a）姜黄粉碎为姜黄粉，加入乙醇提取，过滤后滤液回收乙醇，得总提液，干燥得姜黄总提物；
b）将姜黄总提物，用乙醚提取，过滤，得乙醚提取液；滤渣用正丁醇提取，过滤，得正丁醇提取液；
c）将乙醚提取液和正丁醇提取液合并，回收溶剂，然后进行干燥，得抗前列腺增生的姜黄提取物。
步骤b）中，乙醚或正丁醇的提取次数优选为3-4次，每次加入溶剂的量优选为提取时姜黄的重量2倍。
步骤b）中，乙醚或正丁醇的提取方式优选为加热回流。
可选地，姜黄粉的细度为10-40目。
可选地，加入乙醇为姜黄粉8-40体积倍。
可选地，乙醇的浓度为50%-95%（v/v），优选为75%（v/v）；提取次数为1-5次。
乙醇提取的方法优选为加热回流，提取温度优选为不高于80℃，回流时间为2-4h。
步骤a）、c）和c）中的干燥方法选为烘干温度为不高于60℃。
本发明具有以下优点：
本发明的姜黄提取物，提取方法简单易行，溶剂可回收，成本低；获得的提取物抗前列腺增生活性优于姜黄素及其他提取方法获得的姜黄提取物。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明，但本发明不受下述实施例的限制。
实施例1抗前列腺增生姜黄提取物的提取。
（1）取姜黄饮片，粉碎至可过10目筛，取50.00g姜黄粉加75%乙醇溶液加热回流2次，第一次加10倍量75%乙醇溶液，提取2h，过滤；第二次加8倍量75%乙醇溶液，提取1h，过滤，合并滤液，蒸至无醇味，加水调节至50ml，得总提液；
（2）将上述总提液用乙醚萃取4次，每次100ml，合并乙醚萃取液，回收乙醚，得乙醚萃取物；下层继续用水饱和正丁醇萃取4次，每次100ml，正丁醇液合并，回收正丁醇，得正丁醇萃取物；
（3）将上述乙醚萃取物和正丁醇萃取物合并，60℃烘干，粉碎，得抗前列腺增生的姜黄提取物s1。
实施例2姜黄素、姜黄挥发油的提取和姜黄水提物、姜黄醇提液的制备。
（1）姜黄素：购买于陕西永源生物技术有限公司，纯度95%，批号20160512。
（2）姜黄挥发油的提取和姜黄水提物的制备
称取姜黄粉末50.00g，置于圆底烧瓶中，并安装挥发油提取器，加热回流提取二次，第一次加10倍量水，提取2小时；第二次加8倍量水，提取1小时，合并提取液，滤过，浓缩并用水定容至200ml，得姜黄水提液；同时得到挥发油2.1ml。
（3）姜黄醇提液、乙醚提取液、正丁醇提取液的制备
称取两份姜黄粗粉，每份50.00g，每份以75%乙醇加热回流提取二次，第一次加10倍量溶剂，提取2小时；第二次加8倍量溶剂，提取1小时，合并提取液，滤过，得到两份提取液；
取一份蒸去部分溶剂，加75%乙醇，定容到200ml，得姜黄75%乙醇提取液；
另一份乙醚萃取4次，每次100ml，合并乙醚萃取液，蒸去部分溶剂，加乙醚，定容到200ml，得乙醚提取液；
下层继续用水饱和正丁醇萃取4次，每次100ml，正丁醇液合并，蒸去部分溶剂，加正丁醇，定容到200ml，得正丁醇提取液；
将正丁醇萃取后的残液，蒸去部分溶剂，加水，定容到200ml，得剩余液。
实施例3不同姜黄提取物对前列腺增生的活性。
3.1姜黄素含量测定
采用高效液相色谱法测定75%乙醇提取液、乙醚提取液、正丁醇提取液中的姜黄素的含量，各提取液中姜黄素含量换算成姜黄中的含量。
色谱条件及系统适用性：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-4%冰醋酸溶液（48:52）为流动相；检测波长为430nm。理论塔板数按姜黄素峰计算，不得于4000。
测定结果如表1所示。
3.2灌胃液的制备
称取姜黄素以少量水分散，并滴加5滴吐温-80，超声处理10min，再加水稀释，制成相当于原药材0.25g/ml的灌胃液。
75%乙醇提取液蒸去乙醇，残留物加适量的淀粉，并滴加5滴吐温-80，加适量水，超声处理10min，再加水定容至200ml，制成相当于原药材0.25g/ml的小鼠灌胃液；乙醚提取液、正丁醇提取液和剩余液以相同的方法制备灌胃液。
挥发油加适量水及吐温-80充分研磨，形成乳浊液，加水至200ml，得灌胃液；姜黄水提取液直接用作为灌胃液。
取实施例1中制备的姜黄提取物s1，研细，滴加5滴吐温-80，加水分散，超声处理10min后定容至200ml，得灌胃液。
对照药物灌胃液的配制如下：取40粒癃闭舒胶囊（石家庄科迪药业有限公司，批号140609）的内容物12g，研细，滴加5滴吐温-80，加水分散，定容至200ml，即得。
3.4丙酸睾酮溶液的配制
取丙酸睾酮注射液与注射用大豆油按1:1的比例配制成注射用雄激素溶液（12.5mg/ml）。
3.5灌胃及测定小鼠前列腺系数
小鼠按体重均衡和随机的原则分成11组，分别为空白对照组、模型组、对照药物组、姜黄挥发油、姜黄水提物、姜黄素、姜黄75%乙醇提取物组、姜黄乙醚提取物组、姜黄正丁醇提取物组、s1组，每组11只。除去空白对照组，其余各组每只小鼠按5mg/(kg/次)的剂量背部皮下注射丙酸睾酮油溶液。每隔一天注射一次，空白对照组同样每隔一天注射一次等体积大豆油。同时，各组灌胃姜黄不同溶剂提取物（灌胃剂量根据2015版《中国药典》姜黄的人的最大剂量9g/d的20倍剂量进行灌胃），癃闭舒组按胶囊内容物人用剂量的20倍即0.6g/(kg/d)进行灌胃，空白对照组及模型组灌胃等比例的水溶液，连续给药28天，第29天，脱颈椎处死小鼠（处死前十二小时停止喂食，但不禁水），称量小鼠体重，迅速解剖小鼠，观察前列腺状态，取出完整前列腺组织，称前列腺重量，计算前列腺系数，结果见表1。
表1各提取物中姜黄素含量及对小鼠前列腺系数的影响
注：与空白对照组比较*p<0.01；与模型组比较#p<0.01。
由试验结果可知，姜黄抗前列腺增生的成分不仅是姜黄素，姜黄素含量较小的正丁醇提取物具有与姜黄素含量较高的乙醚提取物组的抗前列腺增生作用相当，且比姜黄素含量较高的乙醇提取物效果要好。乙醚提取物与正丁醇提取物的混合物效果更好，而纯姜黄素组效果则较差，提取的剩余液前列腺系数与模型组无显著差异，几乎无活性物质。以上结果说明，采用本发明提供的方法制备的姜黄提取物对姜黄中抗前列腺增生成分提取完全、充分。
实施例4抗前列腺增生姜黄提取物的提取。
（1）取姜黄饮片，粉碎至可过10目筛，取50.00g姜黄粉加75%乙醇溶液加热回流2次，第一次加10倍量75%乙醇溶液，提取2h，过滤；第二次加8倍量75%乙醇溶液，提取1h，过滤，合并滤液，蒸至无醇味，得乙醇总提液，60℃蒸出乙醇，54℃烘干，粉碎，得姜黄总提物；
（2）将上述姜黄总提物的粉末加乙醚回流提取2次，每次加乙醚100ml，提取1小时，过滤，合并提取液，回收乙醚，得乙醚提取物；残渣继续用正丁醇提取2次，每次加正丁醇100ml，提取1小时，过滤，合并提取液，回收正丁醇，得正丁醇提取物；
（3）将上述乙醚提取物和正丁醇提取物合并，60℃烘干，粉碎，得抗前列腺增生的姜黄提取物s2。