具有微米级孔洞的阴道塞膜的制作方法

本发明涉及一种含羧甲基纤维素(carboxymethylcellulose，cmc)与透明质酸(hyaluronicacid，ha)之薄膜的医材用途，且特别涉及一种此薄膜用于制备阴道塞膜的用途。

背景技术：

传统上女性使用阴道膜剂时，须先将膜剂揉成团状，再将膜剂塞入阴道内。透过阴道膜剂中的有效成分来缓解阴道发炎所致的干涩、搔痒、红肿、疼痛、或灼热等不适感。目前市售的阴道膜剂可参考中国大陆发明专利公开号cn1650961号所述之「保妇康阴道膜剂」，其为由原料药与辅料制成，且原料药以莪朮油与冰片作为有效成分，并加入成膜材料、抗氧剂、保湿剂、与增塑剂等辅料共同制成的膜剂；成膜材料为淀粉、糊精、纤维素、明胶、虫胶、阿拉伯胶、琼脂、海藻酸、玉米蛋白、白芨、纤维素衍生物(如羧甲基纤维素钠)、聚乙烯胺类、聚乙烯氨基缩醛衍生物、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯吡啶衍生物、或聚乙烯醇中一者，常用的是聚乙烯醇。然而，这种市售产品有其缺点，如当成膜材料为聚乙烯醇时，此产品本身质地硬且保水性不佳，故在阴道内时，无法提供良好的保湿性，且于置入阴道过程中，会刮破外阴部或阴道的表皮，反而让发炎现象更严重。另外，目前市售膜剂产品中的成膜材料、保湿剂、与增塑剂不具备生物可吸收性，故于阴道内一段时间后，会呈水状自阴道流出，进而污染衣物并在穿着舒适度与后续清洁上造成使用者的困扰与麻烦。

由此，针对目前市售阴道膜剂的缺点提出改善，确实为本领域技术人员所积极解决的课题之一。

技术实现要素：

本发明之一目的在于提出一种新颖的阴道塞膜，其可解决目前市售阴道膜剂质地硬、保湿性不佳、与生物可吸收性低等特性所衍生的使用问题。

因此，本发明提出一种薄膜，用于制备阴道塞膜的用途，其中薄膜具有多个微米级孔洞，这些孔洞的直径为5至100μm，且薄膜包括：羧甲基纤维素以及透明质酸。

本发明所提出的薄膜可透过羧甲基纤维素与透明质酸的保水性质赋予阴道塞膜良好保水性，因此在阴道塞膜置于阴道内时，可保持阴道一段时间的湿润。此外，薄膜的成分组成与多微米级孔洞特性能增加膜的延展性与柔软性，于是阴道塞膜揉成团状置入阴道的过程不易伤害外阴部或阴道内表面与粘膜。另外，多微米级孔洞特性亦可增加薄膜表面积，因而所制备之阴道塞膜在阴道内时，可增加与液体(如水)的接触面积以提升有效成分的吸收与作用速度。而且，薄膜的成分组成为高生物可吸收的，故所制备之阴道塞膜在阴道内时，会自体吸收而不会自阴道排出。另外，薄膜整体具有抗发炎特性，所以阴道塞膜在阴道内时，可缓解发炎征状。综上，本发明所提出的薄膜确实具备作为阴道塞膜的极大潜力。

附图说明

图1a为一紫外光-可见光光谱图谱，比较小檗碱标准品与黄檗树皮萃取物的组成。

图1b为一紫外光-可见光光谱图谱，呈现黄檗萃取物-羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇多孔薄膜的组成；其中，文字「pe」代表黄檗萃取物，文字「cmc」代表羧甲基纤维素，文字「ha」代表透明质酸，文字「pvp」代表聚乙烯醇。

图2为一长条图，呈现不同样本中的小檗碱浓度；其中，文字「pe」代表黄檗萃取物，文字「cmc」代表羧甲基纤维素，文字「ha」代表透明质酸，文字「pvp」代表聚乙烯醇。

图3a为一扫描式电子显微镜照片图，呈现羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇多孔薄膜的表面外观，其中羧甲基纤维素与透明质酸的重量比为30：70。

图3b为一扫描式电子显微镜照片图，呈现羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇多孔薄膜的表面外观，其中羧甲基纤维素与透明质酸的重量比为50：50。

图3c为一扫描式电子显微镜照片图，呈现羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇多孔薄膜的表面外观，其中羧甲基纤维素与透明质酸的重量比为60：40。

图3d为一扫描式电子显微镜照片图，呈现黄檗萃取物-羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇多孔薄膜的表面外观。

图4为一扫描式电子显微镜照片图，呈现羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇薄膜的表面外观。

图5为一曲线图，说明着不同薄膜的机械性质；其中，文字「pe」代表黄檗萃取物，文字「cmc」代表羧甲基纤维素，文字「ha」代表透明质酸，文字「pvp」代表聚乙烯醇，「比率」代表羧甲基纤维素与透明质酸间的重量比。

图6为一照片图，以呈现不同物质处理后之细胞的外观；其中，文字「pe」代表黄檗萃取物，文字「cmc」代表羧甲基纤维素，文字「ha」代表透明质酸，文字「pvp」代表聚乙烯醇。

图7为一长条图，显示不同物质处理后之细胞的一氧化氮生成率；其中，文字「pe」代表黄檗萃取物，文字「cmc」代表羧甲基纤维素，文字「ha」代表透明质酸，文字「pvp」代表聚乙烯醇，文字「l-name」代表nω-硝基-l-精氨酸甲酯。

图8为一长条图，显示不同物质处理过之金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径；其中，「比率」代表羧甲基纤维素、透明质酸、与聚乙烯醇间的重量比。

具体实施方式

为让本发明上述及/或其他目的、功效、特征更明显易懂，下文特举较佳实施方式，作详细说明于下：

本发明乃基于一种含羧甲基纤维素与透明质酸并具多个均匀分布之微米级孔洞的薄膜具备抗发炎能力之发现所完成的；而，孔洞直径较佳地为5至100μm，更佳地为5至20μm；羧甲基纤维素与透明质酸间的重量比较佳地为10：90至90：10，更佳地为30：70至60：40。依此，这种薄膜能缓解阴道发炎所致的征状，而阴道发炎的实例可以为但不限于细菌性阴道炎、念珠菌阴道炎、或滴虫感染阴道炎。此种薄膜尚具有保湿性、高延展与柔软性、及高生物相容性。保湿性可使薄膜赋予阴道湿润；高延展与柔软性能于薄膜揉成团状后置入阴道过程中避免刮伤外阴部或阴道内表面与粘膜，进而防止再发炎；高生物可吸收性可供薄膜为人体自体吸收不会自阴道排出。故，此薄膜可作为阴道塞膜，以于揉成团状后置于阴道内。依上说明，本发明之一实施方式提出一种上述薄膜用于制备阴道塞膜的用途。

于本实施方式中，在不影响薄膜的上述特性下，薄膜还可含有聚乙烯醇，以提升薄膜的成膜性。而，以羧甲基纤维素与透明质酸合计总重量为基准，聚乙烯醇较佳地占20重量％至50重量％。

于本实施方式中，薄膜又可含有一乳化剂，而乳化剂可于制备薄膜时造成油滴微粒或水滴微粒的形成，而所形成的微粒则与微米级孔洞的形成有关。而，乳化剂的实例可以为但不限于十二烷基硫酸钠(sodiumdodecylsulfate，sds)、辛烷基酚聚氯乙烯醚(polyoxyethyleneoctylphenolether)、吐温-20(tween-20)、吐温-60(tween-60)、吐温-80(tween-80)、采酮x-100(tritonx-100)、采酮x-45(tritonx-45)、采酮x-405(tritonx-405)、或月桂酰胺二乙醇胺(laurylamiddiethnolamine)。

于本实施方式中，薄膜另可含有一植物性油脂或水，植物性油脂可作为上述油滴微粒中的油类来源，而水可作为上述水滴微粒中的水来源。须再声明的是，植物性油脂或水透过乳化剂各别所形成的油滴微粒或水滴微粒与微米级孔洞的形成有关。更具体地说，植物性油脂透过乳化剂所形成的油滴微粒可于薄膜的制程中形成均匀分布的微米级孔洞。然而，形成孔洞的方法不应限于油滴微粒或水滴微粒的添加，如本领域的技术人员熟知之其他可形成孔洞的方式仍为本发明所涵盖的。而，植物性油脂的实例可以为但不限于无患子种仁油、橄榄油、杏仁油、或酪梨油。

于本实施方式中，薄膜还可含有一抗发炎成分，以提升薄膜的抗发炎能力。抗发炎成分的实例可以为但不限于小檗碱、黄檗的碱化与醚化产物、黄檗萃取物、莪朮油萃取物、苦蔘、或冰片萃取物。

黄檗树皮含有小檗碱，因此小檗碱可来自于黄檗萃取物、或黄檗的碱化与醚化产物。举例来说，自黄檗树皮分离出黄檗萃取物与残渣，黄檗萃取物含有小檗碱，残渣含有纤维素，可参考下文实施例改质成羧甲基纤维素。又举例来说，研磨黄檗树皮成粉状后，将粉状物碱化与醚化以取得黄檗的碱化与醚化产物。黄檗的碱化与醚化产物除了含有小檗碱外，还含有羧甲基纤维素。因此，以黄檗树皮为小檗碱的来源时，羧甲基纤维素亦可从黄檗树皮进行反应而取得。

于本实施方式中，薄膜还可含有一消毒成分，以提升薄膜的制菌效果或对薄膜防腐。消毒成分的实例可以为但不限于胍类(guanidine)化合物，其较佳地为醋酸氯己定(chlorhexidineacetate)、葡萄糖酸氯己定(chlorhexidinegluconate)、或聚六亚甲基双胍(poly(hexamethylenebiguanidine)，phmb)。此外，根据中华人民共和国国家标准gb26367-2010胍类消毒剂卫生标准，依薄膜的总体积为基准，消毒成分的含量为2至45g/l。

此外，于本发明之另一实施方式中，还提出一种上述薄膜的制备方法，其包括以下步骤：混合乳化剂、羧甲基纤维素、与透明质酸，以得到一含有透过乳化剂所形成之水滴微粒或油滴微粒的溶液；以及干燥所得到的溶液以得到此薄膜。如前所述，当所得到的溶液含有油滴微粒时，植物性油脂可于混合步骤中与其他成分混合。再者，须说明的是，在薄膜具有聚乙烯醇的条件下，其可于混合步骤中与其他成分混合。此外，须说明的是，在薄膜具有抗发炎成分的条件下，此成分可于混合步骤中与其他成分混合。而且，在薄膜具有消毒成分的条件下，其可于混合步骤中与其他成分混合。另外，须说明的是，水滴微粒或油滴微粒的尺寸相对于薄膜的微米级孔洞直径，因此水滴微粒或油滴微粒的尺寸较佳地为5至100μm，更佳地为5至20μm。

就以下述实施例，例示说明本发明以上实施方式：

《实施例1：黄檗萃取物-羧甲基纤维素的制备》

黄檗萃取物-羧甲基纤维素的制备改良自文献medprincpract.2006；15(5):373-8所述之方法，含高浓度小檗碱的黄檗树皮萃取物为参考同一文献所取得的。干燥残渣并将残渣研磨成粉状后，于室温下将粉状物浸置于5％氢氧化钠溶液约2小时，再将粉状物浸置于10％氢氧化钠溶液加热至90℃并持温约4小时。之后，以次氯酸钠(naclo)与过氧化氢间之重量比为3：4的溶液对得到的基质进行退色处理，再以水清洗退色后的基质。接着，以抽气过滤机干燥基质约2小时。于30℃下碱化基质约60分钟后，于70℃下以85％乙醇溶液醚化基质约150分钟。冷却反应后的基质后，以75％乙醇溶液清洗二次并经抽气过滤机干燥来取得纯羧甲基纤维素基质。最后，利用冷冻干燥机处理纯羧甲基纤维素基质与黄檗树皮萃取物的混合物约3小时以取得黄檗萃取物-羧甲基纤维素粉体。

《实施例2：薄膜的制备》

用磁性搅拌器均匀混合前述得到的黄檗萃取物-羧甲基纤维素粉体、透明质酸钠、聚乙烯醇、吐温-80、与如无患子种仁油、橄榄油、杏仁油、或酪梨油等植物性油脂或水，以形成一含植物性油脂或水并透过吐温-80各所形成之微米级油滴微粒或水滴微粒的混合物。此外，若有需求，亦可于混合时混合上述物质与如醋酸氯己定、葡萄糖酸氯己定、或聚六亚甲基双胍等胍类消毒成分，以形成含植物性油脂或水并透过吐温-80各所形成之微米级油滴微粒或水滴微粒的混合物。取3ml混合物至一圆形模具内(直径：约60mm，深度：约15mm)。最后，将模具放至37℃烤箱内约3小时，以形成一干膜(若无使用胍类消毒成分时，后文称作「黄檗萃取物-羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇多孔薄膜」；反之，后文则称作「黄檗萃取物-羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇/胍类消毒成分多孔薄膜」)。此外，制备另一干膜，后文称作「羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇多孔薄膜」。此干膜的制备如上文黄檗萃取物-羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇多孔薄膜的制备所述，除以市售羧甲基纤维素取代黄檗萃取物-羧甲基纤维素粉体外。

《实施例3：小檗碱的检测》

小檗碱浓度于nanodrop紫外光-可见光分光光度计中用波长260nm的光测量，详细过程可参照photochemphotobiolsci.2009jul；8(7):970-4。小檗碱标准品的校正曲线从37.25至1000μg/ml中选出六个r值大于0.99之浓度点所取得的。测量前，将薄膜溶于二次蒸馏水，使得到的溶液浓度为500μg/ml。自校正曲线计算出自测试薄膜释放出的小檗碱含量。

如图1a所示，标准品的紫外光-可见光光谱有2个强波峰约位于250nm与350nm、及1个弱波峰约位于430nm。此外，黄檗树皮萃取物的光谱图谱与标准品相似，同样有2个强波峰约位于相同位置，而430nm的波峰较不明显。如图1b所示，位于250nm与350nm的波峰亦可于黄檗萃取物-羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇多孔薄膜的光谱观察到。

图2显示不同样本用波长260nm之紫外光的定量结果。黄檗萃取物-羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇多孔薄膜溶于水后，小檗碱自其释放出并可测得小檗碱浓度为660μg/ml。

《实施例4：薄膜表面的形貌分析》

为明显化形貌特征，镀上一层钯金(palladiumgold)于薄膜表面。以扫描式电子显微镜(scanningelectronmicroscope，sem)观察各样品的表面超微结构。

如图3a至3d所示，黄檗萃取物-羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇多孔薄膜与羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇多孔薄膜呈显不同表面形貌。就羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇多孔薄膜而言，羧甲基纤维素与透明质酸的重量比为30：70时，薄膜呈多孔性，而孔洞为微米级的，孔洞直径介于5至50μm，多数介于5至20μm，并具有规则形状；重量比为50：50时，薄膜亦呈多孔性，孔洞为微米级的，孔洞直径介于5至50μm，多数介于5至20μm，但其孔隙率较低；而重量比为60：40时，薄膜为光滑平坦呈多孔性的，孔洞同样为微米级的，孔洞直径介于5至50μm，多数介于5至20μm，但其孔隙率更低。自图3a至3c可知：羧甲基纤维素占的重量比越大，薄膜的孔隙率越低；反之亦然。另外，黄檗萃取物-羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇多孔薄膜的微米级孔洞为不规则的，且尺寸为5至100μm显然大于羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇多孔薄膜的孔洞。

图4呈现一羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇薄膜，其与前述羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇多孔薄膜不同的是：制程中未使用乳化剂、以及任何植物性油脂或水，故不会形成植物性油脂所形成的微米级油滴微粒或水所形成的微米级水滴微粒。因此，图3a至3c所示的薄膜含有乳化剂、及植物性油脂或水，图4所示的薄膜则不含，且相当光滑平坦不具有孔洞。综上可知，植物性油脂所形成的微米级油滴微粒或水所形成的微米级水滴微粒能调控薄膜之微米级孔洞的形成，且微粒尺寸亦可用来控制微米级孔洞的直径大小。

《实施例5：机械性质测试》

测量前，薄膜裁切成15x20mm的矩形片材。机械性质测试为于万能试验机采astmd638-08标准法所执行的。简言之，将样品的二宽度固定为5mm。拉伸速度设定为30mm/min并施加载重至样品，直到断裂为止。拉伸强度以力量的最大值表示。

如图5所示，这些薄膜均具备柔软性。就羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇多孔薄膜而言，随透明质酸所占的量增加，薄膜的极限强度降低。具体地说，在羧甲基纤维素与透明质酸的重量比为30：70、50：50、及60：40时，极限强度各为1.57±0.37kgf、2.06±0.13kgf、与2.36±0.13kgf。另随透明质酸所占的量增加，薄膜的极限位移增加。具体地说，在羧甲基纤维素与透明质酸的重量比为30：70、50：50、及60：40时，极限位移各为12.04±2.14mm、11.78±1.22mm、与10.76±0.69mm。再者，黄檗萃取物-羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇多孔薄膜的极限强度与极限位移分别为1.42±0.32kgf与11.75±1.57mm。在考量柔软特质的前提下，形变能力较强度为重要的。咸知透明质酸对伤口愈合有助益，且于此悉知透明质酸的含量对薄膜孔洞性有正向帮助，而可增加薄膜的表面积以增加有效成分的作用面积，故后续的生物功能测试用羧甲基纤维素与透明质酸间之重量比为30：70的羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇多孔薄膜。

《实施例6：抗发炎测试》

以每孔4x10⁵个的细胞浓度将巨噬细胞raw264.7种植于96孔盘内，并于温度37℃与二氧化碳浓度5％下培养于培养箱内。24小时后，以1μg/ml取自大肠杆菌菌株055:b5的脂多醣体(lipopolysaccharide，lps)与薄膜溶解物刺激细胞。以1mm的nω-硝基-l-精氨酸甲酯(nω-nitro-l-argininemethylesterhydrochloride，l-name)作为正控制组。细胞raw264.7所产生的一氧化氮浓度为利用griess分析测得的。简言之，等量griess试剂与培养液混合，并于微量盘式分析仪以530nm的光检测颜色变化。以一氧化氮生成抑制率表示抗发炎能力。

如图6所示，脂多醣体处理细胞后，呈现明显形态改变。黄檗萃取物-羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇多孔薄膜与羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇多孔薄膜培养过的细胞未因脂多醣体而有形态上的变化。然而，如图7所示，黄檗萃取物-羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇多孔薄膜与羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇多孔薄膜均会影响细胞的一氧化氮释放。以空白对照组为基准，nω-硝基-l-精氨酸甲酯可使一氧化氮生成率减少至8.56％；换言之，nω-硝基-l-精氨酸甲酯的一氧化氮生成抑制率为91.44％。此外，羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇多孔薄膜可让一氧化氮生成率减少至54.11％，黄檗萃取物-羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇多孔薄膜可使一氧化氮生成率减少至39.73％。上述结果表示羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇多孔薄膜与黄檗萃取物-羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇多孔薄膜均具备优异的抗发炎能力。

《实施例7：抗菌测试》

测试前，薄膜裁切成等面积圆片，并贴附于金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)菌丛上48小时。接着，分析各菌丛中形成的抑菌圈直径。

如图8所示，可看出不同羧甲基纤维素、透明质酸、与聚乙烯醇间之重量比的羧甲基纤维素/透明质酸/聚乙烯醇/胍类消毒成分多孔薄膜均具有抗金黄色葡萄球菌的功效。

惟以上所述者，仅为本发明之较佳实施例，但不能以此限定本发明实施之范围；故，凡依本发明申请专利范围及发明说明书内容所作之简单的等效改变与修饰，皆仍属本发明专利涵盖之范围内。