预防水产动物肝胆综合症的复合植物提取液及其制备方法与流程

本发明涉及一种预防水产动物肝胆综合症的复合植物提取液及其制备方法，属于水产动物疾病预防即渔药技术领域。

背景技术：

现代工农业的发展，使水产养殖动物完全处于有害物质的包围之中，如杀虫剂、杀藻剂、激素、硫酸铜等，对水产养殖动物健康均可能造成危害。肝脏作为水产养殖动物最主要的解毒器官，通过代谢途径，在一定的剂量范围内，可以使水产养殖动物免受有害物质的侵害。但是，如果进入体内的含量超过肝脏解毒的承受能力，肝胆负荷大，有毒物质未得及时排出，就有可能造成水产养殖动物的肝损伤。鱼虾的肝脏被称为“综合化工厂”。在代谢、胆汁生成、排泄、解毒、凝血、免疫、热量产生及水电解质调节中都起到非常重要的作用。研究表明，因营养、环境、药物等等影响，鱼虾蟹表现出来的各种病害都会伴随着肝胆等器官或多或少的病变。因此，针对水产动物，研发出一种能够充分发挥保肝利胆、解毒排毒作用，提高防病能力和增强免疫力的健康安全低毒高效的植物提取物能为水产动物健康生长提供基础。

技术实现要素：

为了解决上述问题，本发明提供一种预防水产动物肝胆综合症的复合草本植物提取液，用于治疗和预防水产动物肝胆综合症，缓解中毒，清热解毒，减少水产动物疾病的发生。

本发明提供一种预防水产动物肝胆综合症的复合草本植物提取液，其含有活性成分，所述活性成分由以下重量份的原料制成：茵陈5～15份、大黄4～10份、栀子1～4份、五味子1～4份、甘草1～4份、龙胆1～4份、当归1～4份、柴胡1～4份、水飞蓟1～4份、连翘1～4份。

进一步地，所述活性成分由以下重量份的原料制成：茵陈7～10份、大黄5～8份、栀子1.5～2.5份、五味子1.5～2.5份、甘草1.5～3份、龙胆1～2份、当归1～2份、柴胡1～2份、水飞蓟1～2份、连翘1～2份。

更进一步地，所述活性成分由以下重量份的原料制成：其活性成分由以下重量份的原料提取而制成：茵陈8份、大黄6份、栀子2份、五味子2份、甘草2份、龙胆1份、当归1份、柴胡1份、水飞蓟1份、连翘1份。

本发明提供的预防水产动物肝胆综合症的复合草本植物提取液的制备方法，包括如下步骤：

1)原料粉碎：对复配好的原料进行粉碎，得到粉末为20～100目；

2)植物浸提：粉碎好的草本植物粉用60％～90％v/v乙醇或水作为溶剂，1：10～20料液比，于60～80℃对植物中有效成分浸取，其中浸提时间为1～4h，过滤，得到滤液，即得到提取物，提取次数为3～6次，合并滤液，得到所述复合草本植物提取液。

本发明还提供一种水产动物饲料，其含有所述的预防水产动物肝胆综合症的复合草本植物提取液，其中，所述预防水产动物肝胆综合症的复合草本植物提取液在饲料中的添加量为5-20l/吨。

根据植物配伍原则，按君、臣、佐、使组方层次进行组合，相畏相杀、刚柔相济，达到减毒增效的作用。本发明选择“君”药为茵陈和大黄，均为保肝利胆高效明显，味苦性微寒；“臣”药为五味子、水飞蓟和龙胆，能辅助君药；“佐”药为栀子、柴胡和连翘，起到辅佐君药，协调臣药的作用；而“使”药则选择甘甜性平温的调和诸药的甘草和当归，从而达到降低毒性提高药效的作用。

茵陈为菊科植物滨蒿或茵陈蒿的干燥地上部分，具有明显的清热保肝利胆的功效，常用的保肝草本植物。

大黄是寥科植物掌叶大黄根及根茎，分布于陕西、甘肃东南部、青海、四川西部、云南西北部及西藏东部。气清香，味苦而微涩，嚼之粘牙，有砂粒感，有解毒的功效，其有效成分大黄素具有清除肝细胞的炎症，清除氧自由基，减轻脂质过氧化反应，具保护肝脏功能。

桅子为茜草科植物桅子的果实，性味苦、寒、无毒，其主要成分为木质素类化合物，具有泻火解毒，清热利尿之功效。

五味子为木兰科植物的干燥成熟果实，含有多种木脂素类化合物，是保肝降酶的首选药材。用于治疗急性、慢性肝炎，有明显促进肝糖元生成、降低转氨酶、保护肝细胞等作用。

甘草是豆科植物甘草的根及根茎，具有中和缓急清热解毒，调和诸药的作用，用于缓解药物毒性，有效改善脂质代谢，促进胆固醇的排泄，降低肝损伤和肝病的发生。

当归是伞形科植物的根，具有挥发油、有机酸、多糖、藁本内酯、香豆素、黄酮、维生素、氨基酸、微量元素等成分，具有温补肝胆作用，能保护肝脏损伤，增强免疫，抑制病原微生物。

龙胆是龙胆科根及根茎，具有清热燥湿，泻肝定惊、健脾消食的作用，主要用于保肝、健胃、利胆、抗炎、抗菌等。

柴胡是伞形科植物的根，具有解表和里、疏散退热、疏肝解热的功效，主要用于肝炎、胆道感染、寒热交替等症状。

水飞蓟是菊科植物紫花水飞蓟的干燥果实，具有保护肝细胞膜、改善肝功能的作用，用于清热解毒，疏肝利胆。

连翘为木犀科植物的果实，其主要成分木脂素以及萜类，具有清热解毒，抗菌、抗氧化、抗病毒、保肝的作用。

本发明的优点和积极效果在于：

首先本发明能够预防水产动物肝胆综合症，能显著改善肝功能，降低肝胆疾病爆发率。

本发明将草本植物经萃取等工艺将其中有效成分提取出来，提高植物利用率并且更好地体现药效。

本发明选择对水产动物肝胆疾病治疗有显著效果的几种草本植物，并经过优化配比，利用溶剂萃取方法，将草本植物中的有效成分充分分解出来，有效克服了草本植物中有效成分被纤维物质包裹而无法被充分吸收利用的弊端，提高草本植物利用率，改善水产动物的适口性。目前该产品在水产养殖市场中对保肝利胆、增强免疫、改善体色等方面具有良好作用。

本发明选择均为保肝优良草本植物，将茵陈、大黄、栀子、五味子、甘草等植物混合提取物，从机理上消除氧自由基，减轻脂质过氧化反应，促进肝糖元生成，降低转氨酶，保护肝细胞，缓解药物毒性，有效保护肝脏。本发明能有效增强机体免疫力，促进吃料，改善体色，增强活力，促进生长。本发明为草本植物提取液，安全无毒副作用，不产生耐药性。

附图说明

图1所示为应用例1试验前养殖池中虾形态。

图2所示为应用例1试验后养殖池中虾形态。

图3所示为应用例3试验前养殖池中河豚肝细胞结构。

图4所示为应用例3试验后养殖池中河豚肝细胞结构。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1

称取原料：茵陈5份、大黄4份、栀子2份、五味子2份、甘草2份、龙胆2份、当归2份、柴胡2份、水飞蓟2份、连翘2份。

该工艺具体步骤如下：

①原料粉碎：按重量配比称取对复配好的原料进行粉碎，得到粉末经20目过滤筛过滤；

②原料添加：粉碎好的草本植物粉与70％v/v乙醇溶剂混合均匀，其中料液比为1：10；

③植物浸提：于80℃对植物中有效成分浸取，其中浸提时间为2h，过滤，得到滤液，即得到提取物，提取次数为4次，合并滤液，得到保肝植物提取液。

实施例2

称取原料：茵陈10份、大黄8份、栀子1份、五味子1份、甘草1份、龙胆2份、当归2份、柴胡2份、水飞蓟2份、连翘2份。

该工艺具体步骤如下：

①原料粉碎：按重量配比称取对复配好的原料进行粉碎，得到粉末经20目过滤筛过滤；

②原料添加：粉碎好的草本植物粉与70％v/v乙醇溶剂混合均匀，其中料液比为1：10；

③植物浸提：于80℃对植物中有效成分浸取，其中浸提时间为2h，过滤，得到滤液，即得到提取物，提取次数为4次，合并滤液，得到保肝植物提取液。

实施例3

称取原料：茵陈10份、大黄8份、栀子1份、五味子1份、甘草1份、龙胆2份、当归2份、柴胡2份、水飞蓟2份、连翘2份。

该工艺具体步骤如下：

①原料粉碎：按重量配比称取对复配好的原料进行粉碎，得到粉末经20目过滤筛过滤；

②原料添加：粉碎好的草本植物粉与70％v/v乙醇溶剂混合均匀，其中料液比为1：20；

③植物浸提：于80℃对植物中有效成分浸取，其中浸提时间为2h，过滤，得到滤液，即得到提取物，提取次数为4次，合并滤液，得到保肝植物提取液。

实施例4

称取原料：茵陈15份、大黄10份、栀子1份、五味子1份、甘草2份、龙胆2份、当归1份、柴胡2份、水飞蓟1份、连翘1份。

该工艺具体步骤如下：

①原料粉碎：按重量配比称取对复配好的原料进行粉碎，得到粉末经20目过滤筛过滤；

②原料添加：粉碎好的草本植物粉与70％v/v乙醇溶剂混合均匀，其中料液比为1：10；

③植物浸提：于80℃对植物中有效成分浸取，其中浸提时间为2h，过滤，得到滤液，即得到提取物，提取次数为4次，合并滤液，得到保肝植物提取液。

实施例5

称取原料：茵陈15份、大黄10份、栀子1份、五味子1份、甘草2份、龙胆2份、当归1份、柴胡2份、水飞蓟1份、连翘1份。

该工艺具体步骤如下：

①原料粉碎：按重量配比称取对复配好的原料进行粉碎，得到粉末经20目过滤筛过滤；

②原料添加：粉碎好的草本植物粉与80％v/v乙醇溶剂混合均匀，其中料液比为1：10；

③植物浸提：于80℃对植物中有效成分浸取，其中浸提时间为2h，过滤，得到滤液，即得到提取物，提取次数为4次(其中溶剂前两次为80％v/v乙醇，后两次为水)，合并滤液，得到保肝植物提取液。

实施例6

称取原料：茵陈10份、大黄8份、栀子2份、五味子2份、甘草2份、龙胆1份、当归1份、柴胡1份、水飞蓟2份、连翘1份。

该工艺具体步骤如下：

①原料粉碎：按重量配比称取对复配好的原料进行粉碎，得到粉末经20目过滤筛过滤；

②原料添加：粉碎好的草本植物粉与80％v/v乙醇溶剂混合均匀，其中料液比为1：10；

③植物浸提：于80℃对植物中有效成分浸取，其中浸提时间为2h，过滤，得到滤液，即得到提取物，提取次数为4次(其中溶剂前两次为80％v/v乙醇后，两次为水)，合并滤液，得到保肝植物提取液。

实施例7

称取原料：茵陈8份、大黄6份、栀子2份、五味子2份、甘草2份。

该工艺具体步骤如下：

①原料粉碎：按重量配比称取对复配好的原料进行粉碎，得到粉末经20目过滤筛过滤；

②原料添加：粉碎好的草本植物粉与80％v/v乙醇溶剂混合均匀，其中料液比为1：20；

③植物浸提：于70℃对植物中有效成分浸取，其中浸提时间为2h，过滤，得到滤液，即得到提取物，提取次数为4次(其中溶剂前两次为80％v/v乙醇，后两次为水)，合并滤液，得到保肝植物提取液。

实施例8

称取原料：茵陈8份、大黄6份、栀子2份、五味子2份、甘草2份、龙胆1份、当归1份、柴胡1份、水飞蓟1份、连翘1份。

该工艺具体步骤如下：

①原料粉碎：按重量配比称取对复配好的原料进行粉碎，得到粉末经20目过滤筛过滤；

②原料添加：粉碎好的草本植物粉与80％v/v乙醇溶剂混合均匀，其中料液比为1：20；

③植物浸提：于70℃对植物中有效成分浸取，其中浸提时间为2h，过滤，得到滤液，即得到提取物，提取次数为4次(其中溶剂前两次为80％v/v乙醇后两次为水)，合并滤液，得到保肝植物提取液。

实施例9

称取原料：茵陈8份、大黄6份、栀子2份、五味子2份、甘草2份、龙胆1份、当归2份、柴胡1份、水飞蓟1份、连翘1份。

该工艺具体步骤如下：

①原料粉碎：按重量配比称取对复配好的原料进行粉碎，得到粉末经20目过滤筛过滤；

②原料添加：粉碎好的草本植物粉与80％v/v乙醇溶剂混合均匀，其中料液比为1：20；

③植物浸提：于70℃对植物中有效成分浸取，其中浸提时间为2h，过滤，得到滤液，即得到提取物，提取次数为4次(其中溶剂前两次为80％v/v乙醇后两次为水)，合并滤液，得到保肝植物提取液。

应用例1应用于漳浦地区的南美白对虾养殖

福建省漳州市漳浦佛昙地区的南美白对虾养殖塘，土塘40亩，水深1.5米，放苗18天，为转肝敏感期，即虾摄食饵料转换期，肝负担可能加重。这期间是对虾完善肝胰腺功能的时期，肝胰腺负荷加重易发病(萎缩、发红、发白、肿大、坏死等)。所以转肝期的养护至关重要。从而选取本试验塘中的虾，用肉眼观察养殖场中虾体如图1，肝脏颜色偏棕黄色，肝组织不饱满，轮廓相对清晰，无明显白膜。

按照实施例1配方应用于池塘配合饲料搅拌均匀后投喂对虾，用量为1升提取液拌80kg饲料，连续使用5天。停用第二天后分析可见，与不用的对照池塘相比，使用的池塘中对虾摄食量增加，胃肠填充增多，肝脏转肝薄膜明显，体色增亮，活力明显增强，如图2。

另外，测定肝胰脏的超氧化物歧化酶(sod)、溶菌酶(lsz)、丙二醛(mda)、谷丙转移酶(alt)的活力可用于分析保肝效果，其中溶菌酶体现抵抗细菌感染的重要酶，超氧化物歧化酶是机体清除体内氧自由基的主要酶，丙二醛为抗氧化性能评估指标，谷丙转移酶(alt)为组织病变后转氨酶活力增高，为肝功能是否正常的重要指标。

测试前后分别取50尾虾，取其肝胰脏，利用试剂盒检测分析sod、lsz、mda和alt四种酶活力，结果如表1所示，与使用前对比，试验后虾肝胰脏中mda和alt降低，而sod和lsz有一定程度升高，表明本发明实施例1的配方对对虾的肝胰脏起到较好的保护作用。

表1对虾肝胰脏各种酶活力测定结果

应用例2应用于阳江地区的南美白对虾养殖

广东省阳江市平岗地区的南美白对虾，土塘面积4.5亩，天气高温炎热，投喂饲料虾吃料慢，提料台餐后2小时仍有饲料剩余，有出现跳塘，提料台观察对虾发现肝脏、虾体微红，并有红须红尾现象。按照实施例4配方应用于池塘配合饲料搅拌均匀后投喂对虾，用量为1升提取液拌100kg饲料，连续使用5天。停用第二天后分析可见，与不用的池塘对比，提料台餐后1.5小时已无饲料，使用的池塘对虾虾肝脏体色明显转好，吃料加快，活力强。

应用例3应用于江门地区的暗纹东方鲀养殖

广东省江门市新会地区的暗纹东方鲀，土塘10亩，河豚肝脏发黄，肝细胞出现不同程度的水肿，个体差异较大，空泡较多，肝小叶结构不清晰(肝细胞结构如图3)。按照实施例8配方应用于池塘配合饲料搅拌均匀后投喂河豚，用量为1升提取液拌100kg饲料，连续使用5天。该品使用后河豚肝脏恢复正常，河豚肝细胞大小差异得到极大的改善，水肿消失，肝细胞饱满，肝小叶结构清晰(肝细胞结构如图4)。

应用例4应用于漳州地区的对虾养殖

随机选取福建漳州漳浦、诏安、云霄、东山、龙海等地区的对虾养殖池中不同程度发生肝胆综合症的池塘进行配方优化测试试验。分别投喂添加本发明不同配方的复合植物提取液的饲料，用量为1升提取液拌100kg饲料，连续投喂7天。阴性对照塘为不添加测试产品的空白对照，而阳性对照塘添加市场已有效果产品(大黄50份、黄柏30份、黄连20份、黄连20份、穿心莲50份、栀子50份、茵陈蒿70份、甘草20份、vc10份、ve3份、氯化胆碱20份、葡萄糖醛酸内酯10份、滑石粉4份)。

与阴性对照相比，使用本发明的复合植物提取液以及阳性对照产品，每天对虾死亡明显减少，使用一周后基本得到较好的恢复。而本发明的复合植物提取液更有效果，且养殖动物能更快得到恢复(表2)。由实施例1-9配方治疗效果可知，根据茵陈、大黄、栀子、五味子、甘草、龙胆、当归、柴胡、水飞蓟、连翘等的不同配比，不同料液比，溶剂浓度以及提取温度等对对虾肝胆综合症的治疗效果，以实施案例8的组合为最佳方案，能够高效控制对虾肝胆综合症。

表2复合植物提取液对虾的肝胆综合症的治疗效果

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。