CD31SHED作为分子靶标用于炎症成像的制作方法

本发明涉及炎症部位的分子成像，特别是用于确定受试者是否患有炎性病况或者处于患有或发展炎性病况的风险中，以及用于监测抗炎治疗后炎性病况程度的变化。

背景技术：

炎症部位的成像是诊断炎性病况的有用工具。炎症中高水平的葡萄糖代谢已经促进了使用¹⁸f-fdg(2-脱氧-2-¹⁸f-氟代-d-葡萄糖)pet。然而，¹⁸f-fdg的特异性差，且其在心脏、肺和脑中的高生理摄取限制了其使用。因此，需要用于成像炎症组织的更特异性的靶标。

cd31是由白细胞、血小板和内皮细胞组成型表达的跨膜糖蛋白受体。它由单链分子组成，所述单链分子包含六个ig样细胞外结构域、短跨膜区段和细胞质尾，所述胞质尾包含充当基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(itim)的两个重要的基于酪氨酸的基序(围绕y663和y686)。cd31的结构在下表1中显示。

表1：cd31的结构

由于同嗜性和抑制性功能，cd31在循环稳态中发挥了关键作用。在促炎情况下，受体的同嗜性部分由于切割而丧失，活化细胞表达cd31的截短形式。wo2010/000756确实公开了cd31在活化的/记忆t淋巴细胞上在第五和第六细胞外ig样结构域间脱落，而wo2013/152919公开了活化的血小板也表达在第六细胞外结构域和近膜序列间截短的cd31。然后cd31的这两种类型的脱落的细胞外序列(称为“可溶性cd31”)释放到循环中，在此它们与健康内皮细胞生产的cd31的可溶性剪接变体共同呈递。脱落后仍锚定在膜上的剩余的小的cd31胞外域称为“cd31^shed”。wo2010/000756和wo2013/152919公开了基于检测个体生物样品中所述可溶性cd31而诊断血栓形成或自身免疫病症的方法。

wo2010/000741公开了对应于cd31胞外域的近膜氨基酸的肽，其能够通过特异性靶向活化的白细胞和血小板上的cd31^shed来挽救cd31的生理免疫调节功能。此类肽可用于治疗血栓形成或自身免疫病症。wo2013/190014进一步公开了在细胞外cd31的膜近端部分内的8个氨基酸的特定肽，其可用于治疗血栓形成或炎性病症并显示更适合药物开发的物理化学性质。

仍然需要成像和诊断炎性病况的可靠方案。

技术实现要素：

本发明人令人预想不到地发现，cd31^shed本身可以用作诊断炎性病况的分子靶标，特别是通过允许炎症部位的分子成像。实际上，令人惊奇地发现，cd31^shed以使用标记的cd31^shed配体时允许获得可检测信号的量存在于活化的细胞上，而对应于活化的循环细胞和未涉及炎症的其它器官或细胞上存在的cd31^shed的噪声信号微乎其微，从而产生了好的信噪比。他们确实在炎症动物模型中体内证明，向所述动物施与特异于cd31^shed的放射性标记的cd31^shed配体允许定位炎症部位，这归因于放射性标记的cd31^shed配体与表达cd31^shed的活化细胞的特异性结合及其随后在炎症部位的富集，而剩余的放射性标记的cd31^shed配体从动物体内快速清除。

在该上下文中，本发明人使用了序列seqidno：6的肽p8ri，其由经由peg间隔物偶联到hynic(6-肼吡啶-3-羧酸)并用99mtc放射性标记的d-对映异构体氨基酸组成。发现所述放射性标记的cd31^shed配体在体外和体内都稳定并特异于cd31^shed，与血浆蛋白仅有非常低的结合。

因此，能够特异性结合cd31^shed的标记的cd31^shed配体，特别是小肽，可用作炎症分子成像的示踪物。

因此，本发明的一个目的在于标记的cd31^shed配体，其包含cd31^shed配体和至少一种成像标记，优选至少一种放射性核素。

所述cd31^shed配体优选是：

a)肽，其选自由以下组成的组：

(i)由通过序列seqidno:1的氨基酸579至601所定义的序列的3至15个氨基酸的片段组成的肽，

(ii)由非人哺乳动物cd31中对应于序列seqidno:1的氨基酸579至601的序列的3至15个氨基酸的片段组成的肽，

(iii)由与肽(i)的序列具有至少70％同一性的序列组成的3至15个氨基酸的肽，

(iv)由肽(i)、(ii)或(iii)的逆反(retro-inverso)序列组成的肽，和

(v)肽(i)、(ii)、(iii)或(iv)，其包含至少一种或者至少一种其它化学修饰，

或

b)所述肽a)的肽模拟物。

(v)的cd31^shed配体优选包含至少一个d-对映异构体形式的氨基酸。

cd31^shed配体优选选自由以下组成的组：序列seqidno:2的肽、序列seqidno:3的肽、序列seqidno:4的肽、序列seqidno:5的肽、由d-对映异构体氨基酸组成的序列seqidno:6的肽、序列seqidno:7的肽和由d-对映异构体氨基酸组成的序列seqidno:8的肽。

优选的cd31^shed配体是序列seqidno:5的肽或由d-对映异构体氨基酸组成的序列seqidno:6的肽。

标记的cd31^shed配体的放射性核素优选地可以通过分子成像技术检测，如正电子发射断层扫描(pet)、单光子发射计算机断层扫描(spect)、spect和/或pet的混合形式，或其组合。

例如，放射性核素是锝-99m(99mtc或^99mtc)、镓-67(⁶⁷ga)、镓-68(⁶⁸ga)、钇-90(⁹⁰y)、铟-111(¹¹¹in)、铼-186(¹⁸⁶re)、氟-18(¹⁸f)、铜-64(⁶⁴cu)或铊-201(²⁰¹ti)。

优选的标记的cd31^shed配体包含作为cd31^shed配体的由d-对映异构体氨基酸组成的序列seqidno：6的肽和作为放射性核素的99mtc。

在一个优选的实施方案中，cd31^shed配体与hynic(6-肼吡啶-3-羧酸)偶联，任选地经由至少一个间隔物。

本发明的另一个目的涉及如上所定义的标记的cd31^shed配体，用作用于成像炎症部位的分子成像剂，特别是用于确定受试者是否患有炎性病况，是否处于患有炎性病况的风险中或是否处于抗炎治疗后炎性病况复发的风险中，或用于监测炎性病况的治疗效果。本发明还涉及如上所定义的标记的cd31^shed配体作为分子成像剂，特别是用于成像炎症部位的分子成像剂的用途。

本发明的另一个目的涉及一种方法，优选一种体外方法，其用于确定受试者是否患有炎性病况，是否处于患有炎性病况的风险中或是否处于抗炎治疗后炎性病况复发的风险中，或用于监测炎性病况的治疗效果，其中所述方法包括：

用如上所定义的标记的cd31^shed配体检测获自受试者的生物样品中细胞表面上cd31^shed的存在。

本发明的另一个目的涉及cd31^shed，用作用于成像炎症部位的分子成像剂，更特别地，用于确定受试者是否患有炎性病况，是否处于患有炎性病况的风险中，是否处于抗炎治疗后炎性病况复发的风险中，或用于监测炎性病况的治疗效果。本发明还涉及cd31^shed用作分子成像剂，特别是用于成像炎症部位的分子成像剂的用途。

炎性病况

炎性病况存在于大量疾病中。例如，免疫系统经常涉及到炎性病况中，如在变态反应和一些肌病中所证实的，其中许多免疫系统病症导致了异常炎症。

如本说明书通篇所用，术语“炎性病况”包括但不限于慢性炎性病况，免疫病症，自身免疫病症，急性和慢性给予性同种免疫病况(grantalloimmunecondition)，急性和慢性感染驱动的炎性病况，炎症过程中具有病原学来源的非免疫性疾病，或其组合。

慢性炎性病况例如是炎性肠病、银屑病、特应性皮炎、脑淀粉样血管病和/或血管炎。

免疫病症例如是过敏症和/或肌病。

自身免疫病症例如是类风湿性关节炎(ra)、多发性硬化(ms)、炎性肠病(ibd)、系统性红斑狼疮(sle)、格雷夫氏病和/或糖尿病。

急性和慢性同种免疫病况例如是同种异体移植物排斥或移植物抗宿主病(gvhd)。

急性和慢性感染驱动的炎性病况包括脓毒性肉芽肿(脓肿)和/或脓毒性休克的形成。

炎症过程中具有病原学来源的非免疫性疾病例如是癌症、血栓形成、缺血和/或缺血-再灌注器官损伤(例如心脏和/或脑梗塞)动脉炎性病况(例如动脉粥样硬化血栓形成、动脉夹层和/或未愈合的/血栓形成的动脉瘤)和/或神经退行性疾病。

炎性病况例如选自由以下组成的组：类风湿性关节炎、多发性硬化症、过敏症、肌病、炎性肠病、银屑病、特应性皮炎、脑淀粉样血管病、血管炎、系统性红斑狼疮、格雷夫氏病、糖尿病、急性或慢性移植物排斥、癌症、血栓形成、动脉粥样硬化血栓形成、缺血性心脏和/或脑梗塞，和/或神经退行性疾病。

用于成像的、被诊断和/或治疗的受试者

在本发明的上下文中，“受试者”是人或非人哺乳动物。

术语“人”、“个体”或“患者”在本文中是同义词并且可以互换使用。

所述人可以是任何性别(例如男性或女性)以及任何年龄(例如婴儿、儿童、青少年、成年人、老年人)。

非人哺乳动物优选是小鼠、大鼠、猫、狗、兔、仓鼠、猪、绵羊、马或灵长类动物。

受试者可能患有炎性病况，怀疑患有炎性包括、处于具有炎性病况的风险中或处于炎性病况复发的风险中。

表述“处于具有炎性病况的风险中”、“处于患有炎性病况的风险中”和“处于发展炎性病况的风险中”在本文中是同义词。

在本发明的上下文中，“风险”涉及事件将在特定时间段内发生的概率，例如转变为炎性病况。

炎症成像

表述“炎症部位的成像”和“炎症的成像”在本文中是同义词。

炎症部位的成像允许定位受试者体内的发炎组织和/或发炎器官。

炎症部位的成像具有许多优点。

例如，炎症部位的成像允许诊断炎症病况，确认炎症病况，定位发炎的组织或器官，监测对治疗的反应，例如对抗炎治疗的反应，监测治疗的炎症副作用，预测发展炎性病况的风险和/或确定抗炎治疗后炎性病况复发的风险。

因此，炎症部位的成像可用于确定受试者是否患有炎性病况，是否处于患有炎性病况的风险中，是否处于抗炎治疗后炎性病况复发的风险中，或用于监测炎症病况治疗的效果。

需要分子成像靶标和/或分子成像剂来进行炎症成像。

如本文所用，术语“分子成像靶标”是指可通过使用分子成像技术进行检测的化合物。

如本文所用，术语“分子成像剂”是指可通过使用分子成像技术用于检测特定生物元件，特别是分子成像靶标的化合物。

分子成像剂优选是共价或非共价偶联于成像标记的试剂。

在本发明的上下文中，分子成像剂用于体内或体外检测cd31^shed，例如在受试者的血液样品中。

cd31^shed用作分子成像靶标

因此，本发明涉及cd31^shed，用作炎症部位成像的分子成像靶标。

本发明还涉及cd31^shed作为炎症部位成像的分子成像靶标的用途。

本发明特别涉及cd31^shed，用作成像炎症部位，特别是体内炎症部位的方法中的分子成像靶标。

如本文所用，“cd31^shed”是指在cd31跨膜糖蛋白受体脱落后仍锚定在内皮细胞、血小板或白细胞膜上的剩余的小cd31胞外域。

活化的内皮细胞、血小板和白细胞表面上的cd31^shed至少缺少cd31的第1至第5细胞外ig样结构域。

活化的血小板和活化的内皮细胞表面上的cd31^shed缺少cd31的第1至第5细胞外ig样结构域和第6细胞外ig样结构域的至少一部分。

活化的白细胞表面上的cd31^shed缺少第1至第5细胞外ig样结构域，但包含第6细胞外ig样结构域。

本发明还涉及的cd31^shed，用于如上定义的用途、方法中、优选体内方法中，用于确定受试者是否患有炎性病况，是否处于患有炎性病况的风险中，是否处于抗炎治疗后复发炎性病况的风险中，或用于监测炎性病况治疗的效果。

本发明还涉及cd31^shed，用于确定受试者是否患有炎性病况，是否处于患有炎性病况的风险中，是否处于抗炎治疗后复发炎性病况的风险中，或用于监测炎性病况治疗的效果，特别是在体内。

表述“炎性病况”和“炎症部位的成像”如上所定义。

cd31^shed配体

术语“cd31^shed配体”是指能够与cd31^shed特异性结合的任何化合物。

可以通过技术人员熟知的任何方法评估化合物与细胞表面上存在的cd31^shed的特异性结合。

例如，可以通过等离子体表面共振、流式细胞术或β成像仪测量特异性结合。

在优选的实施方案中，如下评估待测化合物与细胞表面上存在的cd31^shed的结合：待测化合物或作为阴性对照的不相关类似物与荧光探针(例如，荧光素)结合。将化合物以连续稀释(例如1、10、100μmol)与cd31+细胞(例如来自细胞系，例如jurkatt细胞，或原代细胞，例如外周血t细胞)于含有ca++和mg++的盐水缓冲液(hbss，培养基)中以10⁶细胞/ml的密度孵育。平行条件是在细胞激活剂存在下孵育(例如如果细胞是t淋巴细胞，则为tcr交联，例如1μg/ml抗cd3e抗体+20μg/ml次级f(ab')2片段)。在5或20分钟后，通过用冷缓冲液重复洗涤步骤终止反应。用多聚甲醛固定细胞并再次洗涤。使用流式细胞仪通过相对荧光信号检测待测化合物在个体细胞上的结合。与对照相比，在包含细胞活化剂的条件下与静息细胞相比，特定化合物的更大信号表明与cd31^shed的适当结合。

或者，测试待测化合物或作为阴性对照的不相关类似物与活化的内皮细胞(例如来自永生化细胞系的人血管的原代细胞)的结合。将细胞在i型胶原薄层上培养至汇合。为了活化，将细胞在培养基中用20ng/ml人重组tnfα孵育30分钟。通过用冷盐水缓冲液冲洗细胞来终止反应，并将细胞进行固定(例如在室温下用锌固定溶液10分钟)。在盐水缓冲液中进行大量冲洗后，用待测化合物或作为阴性对照的不相关类似物标记的活化的内皮细胞与荧光探针(例如荧光素)结合，并通过质膜染料(例如cellmask^tm)和核染色(例如hoechst33342)复染。使用荧光显微镜通过相对荧光信号检测待测化合物在个体细胞上的结合。与对照相比，在包含细胞活化剂的条件相比与静息细胞相比，特定化合物的更大信号表明与cd31^shed的适当结合。

cd31配体可以是肽、肽模拟物、化学化合物、抗体或适体。

因此，术语“抗体”用于指具有抗原结合区的任何抗体样分子，且该术语包括包含抗原结合结构域的抗体片段，例如fab'，fab，f(ab')2，单结构域抗体(dab或vhh)，tandabs二聚体，fv，scfv(单链fv)，dsfv，ds-scfv，fd，线性抗体，微抗体，双体抗体(diabody)，双特异性抗体片段，二体(bibody)，三体(tribody)(scfv-fab融合，分别为双特异性或三特异性)；sc-双体抗体；κ(λ)体(scfv-cl融合体)；dvd-ig(双可变域抗体，双特异性形式)；sip(小免疫蛋白，一种微抗体)；smip(“小模块免疫药物”scfv-fc二聚体；dart(ds-稳定的双体抗体“双重亲和力重新靶向”)；包含一个或多个cdr等的小抗体模拟物等等。用于制备和使用各种基于抗体的构建体和片段的技术是本领域熟知的。在一些实施方案中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体是非内化的。如本文所用，术语“非内化抗体”分别指抗体，其具有与细胞表面上存在的靶抗原结合的性质，并且当与其靶抗原结合时其不进入细胞并在溶酶体中降解。在一些实施方案中，异源多肽是轻免疫球蛋白链。在一些实施方案中，异源多肽是重免疫球蛋白链。在一些实施方案中，异源多肽是可以在天然缺乏轻链的骆驼科哺乳动物中发现的类型的抗体的重单重链可变结构域。

特别地，在本发明的上下文中，抗体是单结构域抗体。术语“单结构域抗体”具有其在本领域中的一般含义，并且是指可以在天然缺乏轻链的骆驼科动物哺乳动物中发现的类型的抗体的单重链可变结构域。这种单结构域抗体也称为vhh或对于(单)域抗体的一般描述，还参考上文引用的现有技术，以及ep0368684，ward等人(nature，1989年10月12日；341(6242)：544-6)，holt等人，trendsbiotechnol.，2003，21(11)：484-490；和wo06/030220，wo06/003388。可以认为单结构域抗体的氨基酸序列和结构包含四个框架区或“fr”，其在本领域和本文中分别称为“框架区1”或“fri”；称为“框架区2”或“fr2”；称为“框架区3”或“fr3”，并称为“框架区域4”或“fr4”；框架区被三个互补决定区或“cdr”中断，其在本领域分别称为“互补决定区”的“cdri”和“互补决定区1”，或“cdr2”和“互补决定区2”，或“cdr3”和“互补决定区2”。因此，单结构域抗体可以定义为具有下述通用结构的氨基酸序列：fri-cdri-fr2-cdr2-fr3-cdr3-fr4，其中fri至fr4分别指框架区1至4，并且其中cdri至cdr3指的是互补决定区1至3。在本发明的上下文中，单结构域抗体的氨基酸残基根据internationalimmunogenetics信息系统氨基酸编号(http://imgt.cines.fr/)给出的vh结构域的一般编号进行编号。

特别地，在本发明的上下文中，抗体是单链可变片段。术语“单链可变片段”或“scfv片段”是指单个折叠的多肽，其包含通过接头分子连接的抗体的vh和vl结构域。在这样的scfv片段中，vh和vl结构域的顺序可以为vh-接头-vl或vl-接头-vh。除了促进其产生之外，scfv片段可以含有通过间隔物与scfv连接的标签分子。因此，scfv片段包含涉及抗原识别但不涉及相应抗体的免疫原性恒定结构域的vh和vl结构域。

在本发明的一个实施方案中，cd31^shed配体是肽。

肽优选为wo2010/000741或wo2013/190014中公开的肽。

优选地，cd31^shed配体是合成肽。

“合成肽”意指肽不存在于活生物体内，例如人体内。

合成肽优选是纯化的。

合成肽可以是组合物或试剂盒的一部分。

肽可以选自由以下组成的组：

(i)由通过序列seqidno:1的氨基酸579至601所定义的序列的3至15个氨基酸的片段组成的肽，

(ii)由非人哺乳动物cd31中对应于序列seqidno:1的氨基酸579至601的序列的3至15个氨基酸的片段组成的肽，

(iii)由与肽(i)的序列具有至少70％同一性的序列组成的3至15个氨基酸的肽，

(iv)由肽(i)、(ii)或(iii)的逆反序列组成的肽，和

(v)肽(i)、(ii)、(iii)或(iv)，其包含至少一种或者至少一种其它化学修饰，优选至少一种d-对映异构体形式的氨基酸。

“片段”在本文中是指连续氨基酸的序列。例如，片段可以是3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸的片段。

序列seqidno：1的氨基酸579至601所定义的序列是序列seqidno：12。

因此，肽可以由序列seqidno：12的3至15个氨基酸的片段组成。

肽还可以由非人哺乳动物cd31中对应于序列seqidno：12的序列的3至15个氨基酸的片段组成。

非人哺乳动物cd31的非限制性实例是序列seqidno：9的鼠cd31，序列seqidno：10的牛cd31和序列seqidno：11的猪cd31。

本领域技术人员可以容易地鉴定非人哺乳动物cd31蛋白中对应于序列seqidno：1的氨基酸579至601的序列，即对应于序列seqidno：12的序列，例如通过进行序列seqidno：1与所述非人哺乳动物cd31蛋白序列之间的序列比对，例如与序列seqidno：9、seqidno：10和seqidno：11之一。

用于序列比对和确定序列同一性的方法是本领域熟知的，例如使用公众可获得的计算机软件，例如bioper1，blast，blast-2，cs-blast，fasta，align，align-2，lalign，jaligner，matcher或megalign(dnastar)软件和比对算法，如needleman-wunsch和smith-waterman算法。

根据本发明的cd31肽的序列优选衍生自人cd31或鼠cd31的序列。

肽也可以是由与肽(i)的序列、即与通过序列seqidno:1的氨基酸579至601所定义的序列的3至15个氨基酸的片段的序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％或至少90％同一性的序列组成的3至15个氨基酸的肽。

与4-6个氨基酸的给定序列具有至少70％同一性的肽序列与所述给定序列有至多一个氨基酸的不同。

与7-9个氨基酸的给定序列具有至少70％同一性的肽序列与所述给定序列有至多两个氨基酸的不同。

与10-13个氨基酸的给定序列具有至少70％同一性的肽序列与所述给定序列有至多三个氨基酸的不同。

与14或15个氨基酸的给定序列具有至少70％同一性的肽序列与所述给定序列有至多四个氨基酸的不同。

“与参考序列具有至少x％同一性的序列”是指本肽的氨基酸序列与参考序列相同或与参考序列的不同之处在于参考序列每100个氨基酸最多100-x个氨基酸改变。换言之，为了获得具有与参考氨基酸序列至少x％相同的氨基酸序列的多肽，目标序列中氨基酸残基的多达100-x％可以是插入的、删除的或用另一个氨基酸取代。

用于比较两条或更多条序列的同一性的方法是本领域熟知的。例如，wisconsinsequenceanalysispackage9.1版中可用的程序，例如程序bestfit和gap，可用于确定两条多肽序列之间的％同一性。bestfit使用smith和waterman的“局部同源性”算法，找到两条序列之间最佳的单相似区域。用于确定序列之间同一性的其他程序也是本领域已知的，例如needle程序，其基于needleman和wunsch算法，描述于needleman和wunsch(1970)j.molbiol.48:443-453,利用例如以下多肽序列比较参数：比较矩阵：blosum62,空位开放罚分：10和空位延伸罚分：0.5，末端空位罚分：假，末端空位开放罚分＝10，末端空位延伸罚分＝0.5；以及多核苷酸序列比较的以下参数：比较矩阵：dnafull；空位开放罚分：＝10，空位延伸罚分＝0.5，末端空位罚分：假，末端空位开放罚分＝10，末端空位延伸罚分＝0.5。

与参考序列相比，由与参考序列“至少70％、75％、80％、85％或90％同一性”的氨基酸序列组成的肽可以包含突变，例如缺失、插入和/或取代。

在取代的情况下，取代优选对应于如下表1中所示的保守取代。在优选的实施方案中，由与参考序列至少70％、75％、80％、85％或90％同一性的氨基酸序列组成的肽仅通过保守取代与参考序列不同。

表1

在另一个优选的实施方案中，由与参考序列至少70％，75％，80％，85％或90％同一性的氨基酸序列组成的肽对应于参考序列的天然存在的等位基因变体。

在又一优选实施方案中，由与参考序列至少70％、75％、80％、85％或90％同一性的氨基酸序列组成的肽对应于衍生自除参考序列之外的另一种非人哺乳动物物种的同源序列。

在优选实施方案中，由与参考序列至少70％、75％、80％、85％或90％同一性的氨基酸序列组成的肽通过保守取代与参考序列不同和/或对应于衍生自除参考序列之外的另一种非人哺乳动物物种的同源序列。

本文中表述“由肽(i)、(ii)或(iii)的逆反序列组成的肽”是指与肽(i)、(ii)或(iii)不同之处在于以下的肽：其分别与肽(i)、(ii)或(iii)的序列相比，其氨基酸的顺序反向，并且由d-氨基酸而不是天然存在的l-氨基酸组成。

氨基酸的d-对映异构体(也称为d-氨基酸)用与其相应的l-对映异构体(也称为l-氨基酸)相同的字母表示，但是为小写字母。因此，例如，精氨酸的l-对映异构体称为‘r’，而d-对映异构体称为‘r’。

优选地，肽可溶于有机或无机溶剂中。

在优选的实施方案中，肽可溶于水。更特别地，肽优选可溶于水和/或可溶于水性缓冲液例如三氟乙酸盐(例如在0.1％三氟乙酸盐溶液中)，nacl9g/l，pbs，tris或tris-磷酸盐。从药理学的观点来看，在水和水性缓冲液中的溶解度是特别有利的。由于这种溶解性，肽可以溶解在水性溶液中，例如浓度为等于、至少或至多1微摩尔、10微摩尔、50微摩尔、100微摩尔、500微摩尔、1mm、50mm或100mm。

易溶于水的本发明的cd31^shed配体可以通过存在至少一个带电荷的氨基酸(优选精氨酸(r)和/或赖氨酸(k))来获得，其中所述带电荷的氨基酸不包含在两个疏水性残基之间。

因此，在优选的实施方案中，根据本发明的cd31^shed配体包含至少一个带电荷的氨基酸，优选精氨酸和/或赖氨酸，其中所述带电荷的氨基酸不包含在两个疏水残基之间。

在更优选的实施方案中，所述带电荷的氨基酸位于序列的n末端或c末端。

例如，根据本发明的优选的cd31^shed配体的序列以基序rv(而不是例如vrv)开始。

在优选的实施方案中，肽对肽酶、特别真核肽酶具有抗性。

本文中“对肽酶具有抗性”是指通过反相高效液相色谱(rp-hplc)和质谱(ms)测定，在37℃下与哺乳动物血清孵育或在活的实验动物中注射时，cd31^shed配体保持未消化。旨在评估肽的血清稳定性的实验室测试被很好地标准化(参见例如jenssen和aspmo,2008,methodsmolbiol494,177-186)。高度肽酶抗性肽是那些在蛋白水解酶存在下保持未消化高达其原始质量的70％和/或显示半衰期超过240分钟的肽(参见例如kumarasinghe和hruby,2015,inpeptidechemistryanddrugdesign,b.m.dunn,ed.(hoboken,newjersey:wiley),pp.247-266)。

cd31^shed配体优选对血液中存在的肽酶具有抗性，例如可溶性肽酶或细胞表面存在的肽酶。

cd31^shed配体还可以包含至少一种或至少一种其他化学修饰，优选地用于改善其稳定性和/或生物利用度。

此类化学修饰通常旨在获得这样的肽，其具有增强的保护肽不受体内酶促降解的作用和/或增加的跨越膜屏障的能力，从而增加其半衰期和/或维持或改善其生物活性。根据本发明，可以使用本领域已知的任何化学修饰。

cd31^shed配体可以包含至少一种人工氨基酸，所述人工氨基酸优选选自由以下组成的组：d-对映异构体氨基酸、β-甲基氨基酸、α-取代的α-氨基酸和氨基酸类似物。

本文中“β-甲基氨基酸”是指侧链上有氨基甲基的丙氨酸的衍生物。该非蛋白原氨基酸(non-proteinogenicaminoacid)被归类为极性碱基。

本文中“α-取代的α-氨基酸”是指l-氨基酸的α碳上的基团(nh2)已经变成另一种非蛋白质基团(nonproteinaceousgroup)，例如甲基、芳基或酰基基团。

本文中“氨基酸类似物”是指天然氨基酸的任何其它人工类似物。

因此，cd31^shed配体可以包含至少一个d-对映异构体形式的氨基酸。例如，上述定义的cd31^shed配体的氨基酸中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个可以为d-对映异构体形式。

在一个实施方案中，cd31^shed配体由d-氨基酸组成。

cd31^shed配体还可以包含反向序列，即反向氨基酸链(从c末端到n末端)。肽的整个氨基酸序列是反向的，或者氨基酸序列的一部分可以是反向的。例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸的连续序列可以是反向的。在本文中称为‘反向’氨基酸是指序列中连续氨基酸序列的反向序列。

其它化学修饰包括但不限于：

-对肽的n末端和/或c末端的修饰，例如n末端甲基化，n末端酰化(优选乙酰化)或脱氨基，或将c末端羧基修饰为酰胺或醇基；

-在两个氨基酸之间的酰胺键处的修饰：在氮原子或连接两个氨基酸的酰胺键的α碳处的酰化(优选乙酰化)或烷基化(优选甲基化)；

-在连接两个氨基酸的酰胺键的α碳处的修饰，例如在连接两个氨基酸的酰胺键的α碳处的酰化(优选乙酰化)或烷基化(优选甲基化)；

-逆反，其中一个或多个天然存在的氨基酸(l-对映体)被相应的d-对映异构体取代，同时具有氨基酸链的反向(从c末端到n末端)；

-氮杂肽，其中一个或多个α碳被氮原子取代；β肽，其中一个或多个氨基酸的氨基与β碳而不是α碳键合，

-酯键(如α-羟基酸)，

-插入额外的亚甲基(例如β-和γ-氨基酸)，和/或

–类肽，寡尿素，芳基酰胺和/或寡聚酰肼。

cd31^shed配体包括通过天然过程(例如翻译后加工)或通过本领域熟知的化学修饰技术修饰的氨基酸。这些修饰在基础教科书和更详细的专著以及大量研究文献中有很好的描述。修饰可以发生在多肽的任何地方，包括肽主链、氨基酸侧链和氨基或羧基末端，应当理解，相同类型的修饰可以以相同或不同程度存在于给定多肽的多个位点。而且，给定多肽可以含有许多类型的修饰。多肽可以由于泛素化而有支链，并且它们可以是环状的，有或无支链。环状、支链和支链环状多肽可以由天然翻译后过程产生，或者可以通过合成方法产生。修饰包括乙酰化，酰化，adp-核糖基化，酰胺化(araidation)，黄素的共价连接，血红素部分的共价连接，核苷酸或核苷酸衍生物的共价连接，脂质或脂质衍生物的共价连接，磷脂酰肌醇的共价连接，交联，环化，二硫键形成，去甲基化，共价交联形成，胱氨酸形成，焦谷氨酸形成，甲酰化，γ-羧基化，糖基化，gp'i锚形成，羟基化，碘化，甲酰化，豆蔻酰化，氧化，蛋白水解加工，磷酸化，异戊烯化，外消旋化，硒化，硫酸化，转移-rna介导的氨基酸添加到蛋白质如精氨酸化，和泛素化。

在本发明的优选实施方案中，cd31^shed配体选自由以下组成的组：

(i)由通过序列seqidno:1的氨基酸579至601所定义的序列的3至15个氨基酸的片段组成的肽，所述片段包含seqidno:1的氨基酸579至581、氨基酸589至591、氨基酸599至601和/或氨基酸593至595，

(ii)由非人哺乳动物cd31中对应于序列seqidno:1的氨基酸579至601的序列的3至15个氨基酸的片段组成的肽，例如由序列seqidno:9的氨基酸568至590所定义的序列的3至15个氨基酸的片段，所述片段优选包含seqidno:9的氨基酸568至570、氨基酸578至580、氨基酸588至590和/或氨基酸582至584，

(iii)由与肽(i)的序列至少70％同一性、优选至少75％同一性、优选至少80％同一性、更优选至少85％同一性、又更优选至少90％同一性的序列组成的3至15个氨基酸的肽，

(iv)由肽(i)、(ii)或(iii)的逆反(retro-inverso)序列组成的肽，和

(v)肽(i)、(ii)、(iii)或(iv)，其包含至少一种或者至少一种其它化学修饰。

此类肽例如具有选自以下组成的组的序列：sstlavrvflapwkk(seqidno:13,seqidno:9的氨基酸576至590),stlavrvflapwkk(seqidno:14,seqidno:9的氨基酸577至590),tlavrvflapwkk(seqidno:15,seqidno:9的氨基酸578至590),lavrvflapwkk(seqidno:16,seqidno:9的氨基酸579至590),avrvflapwkk(seqidno:17,seqidno:9的氨基酸580至590),vrvflapwkk(seqidno:3,seqidno:9的氨基酸581至590),rvflapwkk(seqidno:18,seqidno:9的氨基酸582至590),vflapwkk(seqidno:19,seqidno:9的氨基酸583至590),flapwkk(seqidno:20,seqidno:9的氨基酸584至590),lapwkk(seqidno:2,seqidno:9的氨基酸585至590),apwkk(seqidno:21,seqidno:9的氨基酸586至590),pwkk(seqidno:22,seqidno:9的氨基酸587至590),wkk(seqidno:9的氨基酸588至590),skiltvrvilapwkk(seqidno:23,seqidno:1的氨基酸587至601),kiltvrvilapwkk(seqidno:24,seqidno:1的氨基酸588至601),iltvrvilapwkk(seqidno:25,seqidno:1的氨基酸589至601),ltvrvilapwkk(seqidno:26,seqidno:1的氨基酸590至601),tvrvilapwkk(seqidno:27,seqidno:1的氨基酸591至601),vrvilapwkk(seqidno:4,seqidno:1的氨基酸592至601),rvilapwkk(seqidno:28,seqidno:1的氨基酸593至601),vilapwkk(seqidno:29,seqidno:1的氨基酸594至601),ilapwkk(seqidno:30,seqidno:1的氨基酸595至601),ssmrtsprsstlavr(seqidno:31,seqidno:9的氨基酸568至582),ssmrtsprsstlav(seqidno:32,seqidno:9的氨基酸568至581),ssmrtsprsstla(seqidno:33,seqidno:9的氨基酸568至580),ssmrtsprsstl(seqidno:34,seqidno:9的氨基酸568至579),ssmrtsprsst(seqidno:35,seqidno:9的氨基酸568至578),ssmrtsprss(seqidno:36,seqidno:9的氨基酸568至577),ssmrtsprs(seqidno:37,seqidno:9的氨基酸568至576),ssmrtspr(seqidno:38,seqidno:9的氨基酸568至575),ssmrtsp(seqidno:39,seqidno:9的氨基酸568至574),ssmrts(seqidno:40,seqidno:9的氨基酸568至573),ssmrt(seqidno:41,seqidno:9的氨基酸568至572),ssmr(seqidno:42,seqidno:9的氨基酸568至571),ssm(seqidno:9的氨基酸568至570),nhassvprskiltvr(seqidno:43,seqidno:1的氨基酸579至593),nhassvprskiltv(seqidno:44,seqidno:1的氨基酸579至592),nhassvprskilt(seqidno:45,seqidno:1的氨基酸579至591),nhassvprskil(seqidno:46,seqidno:1的氨基酸579至590),nhassvprski(seqidno:47,seqidno:1的氨基酸579至589),nhassvprsk(seqidno:48,seqidno:1的氨基酸579至588),nhassvprs(seqidno:49,seqidno:1的氨基酸579至587),nhassvpr(seqidno:50,seqidno:1的氨基酸579至586),nhassvp(seqidno:51,seqidno:1的氨基酸579至585),nhassv(seqidno:52,seqidno:1的氨基酸579至584),nhass(seqidno:53,seqidno:1的氨基酸579至583),nhas(seqidno:54,seqidno:1的氨基酸579至582),nha(seqidno:1的氨基酸579至581),tsprsstlavrvfla(seqidno:55,seqidno:9的氨基酸572至586),sprsstlavrvfl(seqidno:56,seqidno:9的氨基酸573至585),prsstlavrvf(seqidno:57,seqidno:9的氨基酸574至584),rsstlavrv(seqidno:58,seqidno:9的氨基酸575至583),sstlavr(seqidno:59,seqidno:9的氨基酸576至582),stlav(seqidno:60,seqidno:9的氨基酸577至581),tla(seqidno:9的氨基酸578至580),svprskiltvrvila(seqidno:61,seqidno:1的氨基酸583至597),vprskiltvrvil(seqidno:62,seqidno:1的氨基酸584至596),prskiltvrvi(seqidno:63,seqidno:1的氨基酸585至595),rskiltvrv(seqidno:64,seqidno:1的氨基酸586至594),skiltvr(seqidno:65,seqidno:1的氨基酸587至593),kiltv(seqidno:66,seqidno:1的氨基酸588至592),ilt(seqidno:1的氨基酸589至591),rvf(seqidno:9的氨基酸582至584),rvfl(seqidno:67,seqidno:9的氨基酸582至585),rvfla(seqidno:68,seqidno:9的氨基酸582至586),rvflap(seqidno:69,seqidno:9的氨基酸582至587),rvflapw(seqidno:70,seqidno:9的氨基酸582至588),rvflapwk(seqidno:5,seqidno:9的氨基酸582至589),rvi(seqidno:1的氨基酸593至595),rvil(seqidno:71,seqidno:1的氨基酸593至596),rvila(seqidno:72,seqidno:1的氨基酸593至597),rvilap(seqidno:73,seqidno:1的氨基酸593至598),rvilapw(seqidno:74,seqidno:1的氨基酸593至599),rvilapwk(seqidno:7,seqidno:1的氨基酸593至600)。

在本发明更优选的实施方案中，cd31^shed配体选自由以下组成的组：

(i)由通过序列seqidno:1的氨基酸579至601所定义的序列的3至15个氨基酸的片段组成的肽，所述片段包含seqidno:1的氨基酸579至582、氨基酸588至592、氨基酸598至601和/或氨基酸593至595，

(ii)非人哺乳动物cd31中对应于序列seqidno:1的氨基酸579至601的序列的3至15个氨基酸的片段组成的肽，例如由序列seqidno:9的氨基酸568至590所定义的序列的3至15个氨基酸的片段，所述片段优选包含seqidno:9的氨基酸568至571、氨基酸578至580、氨基酸587至590和/或氨基酸582至584，

(iii)与肽(i)的序列至少70％同一性、优选至少75％同一性、优选至少80％同一性、更优选至少85％同一性、又更优选至少90％同一性的序列组成的3至15个氨基酸的肽，

(iv)由肽(i)、(ii)或(iii)的逆反序列组成的肽，和

(v)肽(i)、(ii)、(iii)或(iv)，其包含至少一种或者至少一种其它化学修饰。

在优选的实施方案中，cd31^shed配体是包含反向和/或至少一种非天然氨基酸例如至少一种d-氨基酸的8氨基酸片段。此类肽确实保留了原始肽的活性或甚至表现出改善的活性。在旨在用于治疗用途的肽中并入非天然氨基酸可用于增加肽的稳定性，特别是体内稳定性。

在本发明的另一优选实施方案中，cd31^shed配体选自由以下组成的组的肽：序列seqidno:2的肽，序列seqidno:3的肽，序列seqidno:4的肽，序列seqidno:5的肽，由d-对映异构体氨基酸组成的序列seqidno:6的肽，序列seqidno:7的肽和由d-对映异构体氨基酸组成的序列seqidno:8的肽。

更优选的cd31^shed配体是序列seqidno:5的肽，或由d-对映异构体氨基酸组成的序列seqidno:6的肽。

cd31^shed配体可另外包含至少一种螯合剂。

螯合剂是与配体共价结合的分子，其允许络合射电金属(radiometal)。

通常，螯合剂可以是：6-肼吡啶-3-羧酸(hynic)，螯合肽如gly-gly-cys或基于his的序列(francesconi2004，waibel1999，an2011)，mag3enn-ter(okarvi2012,2004)，1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸(dota)，二亚乙基三胺五乙酸(dtpa)，1,4,7-三(羧甲基氮杂)环十二烷-10-氮杂乙酰胺(do3a)，次氮基三乙酸(nta)，d-青霉胺，2,3-二巯基琥珀酸，2,3-二巯基-1-丙磺酸，2,3-二巯基丙醇(bal)，三亚乙基四胺，四硫代钼酸铵阴离子，乙二胺四乙酸(edta)，2-(对-异硫氰苄基)-6-甲基二亚乙基三胺五乙酸(ib4m)或羟基吡啶酮(hopo)。

cd31^shed配体可以直接与螯合剂连接(例如螯合剂与侧氨基酸长链连接)或间接连接，例如通过至少一个间隔物。

优选的螯合剂是6-肼吡啶-3-羧酸(hynic)。

在这种情况下，cd31^shed配体的肽可以直接连接到hynic(例如hynic连接到侧氨基酸长链)或间接连接，例如通过至少一个间隔物连接。

间隔物例如包含至少一个peg(聚乙二醇)或由其组成，例如一个、两个或至少三个peg，更优选三个peg和/或至少一个脂肪族间隔物。

优选的cd31^shed配体是下式的化合物：

该化合物在下文中也称为hynic-p8ri。

cd31^shed配体可以通过本领域任何熟知的方法制备，例如化学合成，例如固相合成或液相合成，或基因工程。作为固相合成，例如，对应于待合成的肽的c末端的氨基酸与不溶于有机溶剂的支持物结合，并且通过交替重复的反应，一个反应是其中其氨基基团和侧链官能团被适当保护基团保护的氨基酸从c末端到n末端依次缩合，并且一个反应是其中与树脂或肽的氨基保护基团结合的氨基酸被释放，从而以这种方式延伸肽链。在合成所需肽后，将其进行去保护反应并从固相支持物上切下。对于boc方法，这样的肽切割反应可以用氟化氢或三氟甲烷磺酸进行，而对于fmoc方法用tfa进行。

根据所用保护基团的类型，固相合成方法主要分类为tboc方法和fmoc方法。通常使用的保护基团对于氨基包括tboe(叔丁氧基羰基)，cl-z(2-氯苄氧基羰基)，br-z(2-bromobenzyloyycarbonyl，2-溴苄基羰基)，bzl(苄基)，fmoc(9-芴基甲氧基羰基)，mbh(4,4'-二甲氧基二苯并二氢)(dimethoxydibenzhydryl))，mtr(4-甲氧基-2,3,6-三甲基苯磺酰基)，trt(三苯甲基)，tos(甲苯磺酰基)，z(苄氧基羰基)和clz-bzl(2,6-二氯苄基)；对于胍基包括no2(硝基)和pmc(2,2,5,7,8-五甲基苯并二氢吡喃-6-磺酰基)；和对于羟基包括tbu(叔丁基))。

或者，可以使用重组技术合成cd31^shed配体。

产生cd31^shed配体的方法可任选地包括纯化所述cd31^shed配体，化学修饰所述cd31^shed配体和/或将所述cd31^shed配体配制成药物组合物的步骤。

在一个实施方案中，cd31^shed配体是如上定义的肽的肽模拟物，即模拟所述肽的化合物。

“肽模拟物”是由或基本上由模拟给定肽的非肽结构元件组成的化合物，从而赋予所述化合物与所述肽等同或相似的生物活性。

肽模拟物优选可溶于有机或无机溶剂中。

与先前所述的肽一样，肽模拟物优选可溶于水。

设计和合成给定肽的肽模拟物的方法是本领域熟知的并包括例如在ripka和rich(curr.opin.chem.biol.1998；2(4):441-52)中和在patch和barron(curr.opin.chem.biol.2002；6(6):872-7)中所述。

成像标记

根据本发明的标记的cd31^shed配体包含至少一个成像标记。

所述成像标记可以是放射性核素或造影载体(contrastophor)。

如本文所用的术语“造影载体”是指造影剂，例如包含螯合剂。

可用于造影载体中的螯合剂的实例在下文“cd31^shed配体”部分中给出。

造影载体的非限制性实例是gd-dtpa(钆和dtpa的复合物)或gd-dota(钆和dota的复合物)。

造影剂优选用于mri(此后也称为“irm”或“磁共振成像”)。

如本文所用的术语“放射性核素”具有与放射性核素(radioactivenuclide)，放射性同位素(radioisotope)或放射活性同位素(radioactiveisotope)相同的含义。

放射性核素优选通过核医学分子成像技术检测，例如，正电子发射断层扫描(pet)，单光子发射计算机断层扫描(spect)，spect和/或pet的混合形式或其组合。

这里的单光子发射计算机断层扫描(spect)包括平面闪烁扫描(ps)。

spect和/或pet的混合形式例如是spect/ct，pet/ct，pet/irm或spect/irm。

spect和pet获取有关引入受试者体内的放射性核素浓度(或摄取)的信息。pet通过检测由发射正电子的放射性核素间接发射的γ射线对产生图像。pet分析导致目标区域(例如，脑，乳房，肝脏......)上身体的一系列薄层图像。可以将这些薄层图像组装为检查区域的三维展示。spect类似于pet，但spect中使用的放射性物质比pet中使用的放射性物质具有更长的衰减时间，并且发射单个而不是双伽马射线。尽管spect图像表现出较低的灵敏度并且不如pet图像详细，但spect技术比pet便宜得多并且提供不需要接近粒子加速器的优点。实际临床pet比spect具有更高的灵敏度和更好的空间分辨率，并且由于光子的高能量而具有精确衰减校正的优点；所以pet提供比spect更精确的定量数据。平面闪烁扫描(ps)与spect类似，因为它使用相同的放射性核素。但是，ps仅生成2d信息。

spect产生局部放射性示踪剂摄取的计算机生成的图像，而ct产生人体x射线密度的三维解剖图像。组合的spect/ct成像在单次检查期间提供获得的来自spect的顺序功能信息和来自ct的解剖学信息。ct数据还用于单光子发射数据的快速和最佳衰减校正。通过精确定位异常和/或生理示踪剂摄取的区域，spect/ct提高了灵敏度和特异性，也可以帮助实现精确的剂量测定估计以及指导介入程序或更好地定义外部束放射治疗的目标体积。使用单光子发射放射性示踪剂的伽马相机成像代表了程序的大部分。

在优选的实施方案中，放射性核素可通过spect或混合形式spect/ct检测。

放射性核素可以选自由以下组成的组：锝-99m(^99mtc)、镓-67(⁶⁷ga)、镓-68(⁶⁸ga)、钇-90(⁹⁰y)、铟-111(¹¹¹in)、铼-186(¹⁸⁶re)、氟-18(¹⁸f)、铜-64(⁶⁴cu)或铊-201(²⁰¹ti)。

优选的放射性核素是锝-99m(99mtc)。

标记的cd31^shed配体

因此，本发明特别涉及包含cd31^shed配体和至少一种成像标记的标记的cd31^shed配体。

cd31^shed配体和成像标记如以上在相同名称的部分中所定义。

标记的cd31^shed配体的放射化学比活性优选大于70gbq/μmol，更优选大于80gbq/μmol，更优选大于90gbq/μmol，例如大于100gbq/μmol。

标记的cd31^shed配体优选是稳定的。

标记的cd31^shed配体的稳定性可以通过本领域技术人员熟知的任何方法在体外和/或体内评估，例如通过测定放射化学试剂纯度(rcp)。

放射化学试剂纯度(rcp)可以通过高效液相色谱(hplc)和/或快速薄层色谱(itlc)评估，优选使用两种方法。

例如，可以在血浆中体外孵育标记的cd31^shed配体之后评估体外稳定性，优选在37℃下在人血浆中孵育，例如至少1小时，至少2小时，至少3小时或者至少4小时。

例如，在人或非人哺乳动物中施用标记的cd31^shed配体后，可以在所述人或非人哺乳动物尿液样品中评估体内稳定性，例如大鼠尿液。

标记的cd31^shed配体的体外和/或体内rcp优选大于80％，优选大于85％，例如大于89％。

活化的血小板、内皮细胞和白细胞对标记的cd31^shed配体的生物分布和特异性摄取可以在炎症模型中评估，例如在心脏炎症、脑炎症或血管炎症的大鼠模型中，例如实验性腹主动脉动脉瘤(aaa)，其通过局部输注弹性蛋白酶、然后静脉注射存在于人aaa中并且已知诱导aaa炎症的牙周细菌诱发。例如，在静脉内注射标记的cd31^shed配体后立即进行连续的全身采集(例如第一小时每10分钟)，例如使用混合形式的spect/ct相机(nanospect/ct，bioscaninc.)。

标记的cd31^shed配体与血浆蛋白的结合优选是低的，例如在37℃下在人血浆中孵育4小时后低于10％，更优选低于5％。

可以通过本领域技术人员熟知的任何方法评估对血浆蛋白的低结合，例如尺寸排阻色谱，例如在标记的cd31^shed配体在体外在血浆中，优选在人血浆中，在37℃孵育例如至少1小时、至少2小时、至少3小时或至少4小时后。

cd31^shed配体和成像标记可以共价或非共价连接。

cd31^shed配体和成像标记优选非共价连接。

当cd31^shed配体包含螯合剂时，cd31^shed配体优选通过所述螯合剂与成像标记连接，并且优选非共价连接。

标记的cd31^shed配体优选是放射性标记的cd31^shed配体。

因此，优选的标记的cd31^shed配体包含cd31^shed配体和至少一种放射性核素。

在本发明的一个优选实施方案中，标记的cd31^shed配体包含序列seqidno：6的肽，其由作为cd31^shed配体的d-对映体氨基酸和作为放射性核素的^99mtc组成。

标记的cd31^shed配体可另外包含至少一个共配体(co-ligand)，即与cd31^shed配体偶联的一个或多个配体，

共配体优选用于稳定与cd31^shed配体结合的成像标记。

例如，共配体可以是三(羟甲基)甲基甘氨酸、edda(乙二胺二乙酸)(edda)、氨基羧酸盐、膦或吡啶。

在一个实施方案中，标记的cd31^shed配体包含三(羟甲基)甲基甘氨酸和edda作为共配体，例如当放射性核素是99mtc时。

当使用至少一种共配体时，标记的cd31^shed配体包含含有所述共配体、所述cd31^shed配体和所述放射性核素的复合物，或由包含所述共配体、所述cd31^shed配体和所述放射性核素的复合物组成。

在本发明的一个实施方案中，cd31^shed配体是序列seqidno：6的肽，其由d-对映体氨基酸组成，其通过如上定义的间隔物与hynic偶联。

优选的标记的cd3^shed配体称为99mtc-hynic-p8ri，包括：

-下式的化合物：

和

-放射性核素99mtc。

hynic在锝和hynic的肼部分之间形成99mtc-n键。

标记的cd31^shed配体可以通过本领域技术人员熟知的常规方法制备。

在本文所述的方法和用途中，可以使用标记的cd31^shed配体本身或作为如下定义的药物组合物使用。

本文描述的方法和用途可以通过使用如下定义的试剂盒来进行。

标记的cd31^shed配体用作分子成像剂

本发明还涉及如上定义的标记的cd31^shed配体作为用于成像炎症部位的分子成像剂的用途。

因此，本发明还涉及如上定义的标记的cd31^shed配体，用作炎症部位成像的分子成像剂。

本发明特别涉及如上定义的标记的cd31^shed配体，用作检测、更特别是成像炎症部位的体内方法中的分子成像剂。

特别地，本发明涉及如上定义用途的标记的cd31^shed配体，其用于确定受试者是否患有炎性病况，是否处于患有炎性病况风险中，是否处于抗炎治疗后炎症病况复发的风险中，或者用于监测炎性病况治疗效果的方法优选体内方法中。

本发明还涉及如上定义用途的标记的cd31^shed配体，其中测定cd31^shed的存在、定位和/或量。标记的cd31^shed配体确实与cd31^shed结合。

cd31^shed的存在、定位和/或量由标记的cd31^shed配体的存在、定位和/或量确定，即由检测到的对应于所述标记的cd31^shed配体的成像标记的信号的存在、定位和/或量确定。

标记的cd31^shed配体的存在、定位和/或量可以通过平面闪烁扫描(ps)、正电子发射断层扫描(pet)、单光子发射计算机断层扫描(spect)，混合形式的spect/ct或它们的组合来确定。

优选静脉内使用或施用标记的cd31^shed配体。

标记的cd31^shed配体优选以足以获得可检测信号的量使用或施用，特别是静脉内注射的量。

对应于标记的cd31^shed配体的成像标记的信号优选在施用标记的cd31^shed配体后立即检测。

可以在受试者的整个身体中或仅在受试者的一部分中(特别是在受试者身体的仅一部分中)检测信号。

因此，本发明特别涉及如上定义的标记的cd31^shed配体，用于检测、更特别是成像炎症部位的方法中，其中所述方法包括：

-将所述标记的cd31^shed配体给予受试者，及

-对所述受试者或所述受试者身体的至少一部分成像，从而检测所述受试者或受试者身体的所述部分中标记的cd31^shed配体与cd31^shed的结合。

因此，本发明特别涉及如上定义的标记的cd31^shed配体，用于确定受试者是否患有炎性病况，是否处于患有炎性病况的风险中或是否处于抗炎治疗后炎性病况复发的风险中，或用于监测炎性病况治疗的功效的方法中，其中所述方法包括：

-将所述标记的cd31^shed配体施予受试者，及

-对所述受试者或所述受试者身体的至少一部分成像，从而检测所述受试者或受试者身体的所述部分中标记的cd31^shed配体与cd31^shed的结合。

本发明的分子成像剂代表了用于诊断或评估与cd31^shed相关的炎性病况的有力工具。

a)确定受试者是否患有炎性病况或处于患有炎性病况的风险中

在确定受试者是否患有炎性病况或处于患有炎性病况风险中的方法中，待诊断的受试者怀疑患有或可能患有炎性病况或患有炎性病况。确实可以进行该方法以确认受试者患有炎性病况和/或详细说明炎性病况的种类。

cd31^shed的存在、定位和/或量可表明受试者患有炎性病况。

cd31^shed的定位可进一步表明炎性病况的种类。

cd31^shed的量可进一步指示炎性病况的严重程度。

可以将cd31^shed的存在、定位和/或量与参考值或对照生物图像进行比较。当参考值或对照生物样品对应于健康受试者，特别是未患有炎性病况的受试者或一组健康受试者时，生物样品中检测到的大于参考值或对照图像的cd31^shed的存在、定位和/或量表明受试者患有或处于患有炎性病况的风险中。

b)确定抗炎治疗后炎性病况复发的风险

根据本发明的方法和用途还可用于跟踪抗炎治疗后炎性病况复发的风险。特别地，它们可用于在抗炎治疗后监测受试者。例如，这可以通过在所述治疗结束后重复该方法至少一次、优选两次来实现，以确定cd31^shed的存在、定位和/或量。增加的cd31^shed的存在、定位和/或量可能表明在抗炎治疗后炎性病况复发的高风险。稳定或减少的cd31^shed的存在、定位和/或量可表明在抗炎治疗后炎性病况复发的低风险。例如，在治疗结束时和治疗后至少一次产生生物样品和/或受试者或受试者的至少一部分的图像。治疗结束时和治疗后的图像的比较可以监测抗炎治疗后炎性病况复发的风险。

c)监测患有炎性病况的受试者对治疗的反应

根据本发明的方法和用途还可用于监测患有炎性病况的受试者对治疗的反应。例如，这可以通过重复该方法至少两次来实现，例如在治疗前一次且在治疗期间至少两次，或在治疗期间至少两次。例如，在治疗(例如抗炎治疗)之前和治疗期间至少一次产生生物样品和/或受试者或受试者的至少一部分的图像。治疗前和治疗期间图像的比较可以监测受试者对该特定治疗的反应。

cd31^shed增加的存在、定位和/或的量可以表明治疗不是或不再是有效的。cd31^shed稳定或减少的存在、定位和/或量可表明治疗是有效的。

表述“监测对治疗的反应”和“监测治疗的效果”在本文中是同义词。

所述治疗可以是治愈性或预防性治疗。

所述治疗可包括施用至少一种抗炎剂、至少一种免疫抑制剂、至少一种益生菌(即可赋予受试者健康益处的活微生物)、至少一种抗生素或其组合，或由其组成。

使用标记的cd31^shed配体作为分子成像剂的方法

本发明还涉及使用如上定义的标记的cd31^shed配体成像炎症部位的方法。

本发明还涉及用于确定受试者是否患有炎性病况，是否处于患有炎性病况的风险中或者是否处于抗炎治疗后炎性包括复发的风险中，或者用于监测受试者中炎性病况的治疗效果的方法，优选体外方法，其中所述方法包括用如上所定义的标记的cd31^shed配体检测受试者生物样品中细胞表面上cd31^shed的存在。

细胞优选是血小板、白细胞和/或内皮细胞。

“生物样品”在本文中是指能够含有内皮细胞、血小板或白细胞的任何样品，例如血液样品或其部分(例如血栓)或组织样品，例如活组织检查。

该方法可以包括提供来自受试者的生物样品的第一步骤。

本发明还涉及如上定义的方法，其中所述生物样品中细胞表面上cd31^shed的检测表明受试者患有炎性病况，处于患有或发展炎性病况的风险中或处于炎性病况复发的风险中。

本发明还涉及如上定义的方法，其中将所述生物样品中细胞表面上检测到的cd31^shed的量与参考值或对照生物样品进行比较。当参考值或对照生物样品对应于健康受试者，特别是未患有炎性病况的受试者或一组健康受试者时，生物样品中检测到的大于参考值或对照生物样品的cd31^shed的量表明受试者患有炎性病况，处于患有或发展炎性病况的风险中或处于炎性病况复发的风险中。

本发明还涉及如上定义的方法，其中通过与治疗前或治疗早期生物样品中检测到的量相比，所述生物样品中细胞表面上检测到的cd31^shed量的增加表明所述治疗无效，和/或其中通过与治疗前或治疗早期生物样品中检测到的量相比，所述生物样品中细胞表面上检测到的cd31^shed的稳定或减少的量表明所述治疗有效。

所述方法可以进一步包括确定细胞表面上cd31^shed的量。

所述生物样品中细胞表面上cd31^shed的检测优选通过成像技术进行。

如上所述的检测步骤包括使受试者的生物样品与作为分子成像剂的标记的cd31^shed配体，优选有效量的标记的cd31^shed配体接触。

本发明还涉及如上定义的方法，其中所述方法包括：

-使受试者的生物样品与标记的cd31^shed配体接触，及

-检测与cd31^shed结合的标记的cd31^shed配体，

从而检测生物样品中细胞表面上cd31^shed的存在。

接触优选在允许分子成像剂(1)到达可能表达cd31^shed的受试者细胞(优选内皮细胞、血小板和/或白细胞)和(2)与此类cd31^shed相互作用的条件下进行，使得相互作用导致分子成像剂与cd31^shed结合。在与标记的cd31^shed配体接触并且经过足够的时间以发生相互作用之后，通过如上公开的分子成像技术检测与受试者样品中存在的cd31^shed结合的分子成像剂。

“有效量”是足以使分子成像剂完成以下三种条件的量：(1)到达细胞，(2)与cd31^shed相互作用和(3)被检测到。

治疗炎性病况的方法

本发明还涉及预防和/或治疗有此需要的受试者的炎性病况的方法，其中所述方法包括，

-进行如上定义的用于确定受试者是否患有炎性病况，是否处于患有炎性病况的风险中，或是否处于抗炎治疗后炎性病况复发的风险中，或用于监测受试者炎性病况治疗的效果方法，

-当确定受试者患有炎性病况，处于患有炎性病况的风险中，或处于抗炎治疗后炎性病况复发的风险中，或治疗无效时，给予所述受试者以适当的治疗。

所述适当的治疗可包括施用至少一种抗炎剂，至少一种免疫抑制剂，至少一种益生菌(即可赋予受试者健康益处的活微生物)，至少一种抗生素，至少一种与活性成分连接的cd31^shed配体或其组合，或由其组成。

本发明还涉及预防和/或治疗有此需要的受试者中炎性病况的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用与活性成分连接的cd31^shed配体。

活性成分例如是药物，例如抗炎剂。因此，cd31^shed配体用作药物靶向剂，并且可以改善所述药物的效果。

包含分子成像剂的药物组合物

根据本发明的药物组合物包含至少一种标记的cd31^shed配体和至少一种药学上可接受的载体。

如本文所用，术语“药学上可接受的载体”是指载体介质，其不干扰活性成分(即分子成像剂)的生物活性的有效性，并且在施用浓度下对受试者没有过度毒性。该术语包括溶剂、分散介质/媒介、涂层、抗细菌剂和/或抗真菌剂、等渗剂、吸附延迟剂和它们的组合。这类用于药物活性物质的介质/媒介和/或药剂的使用是本领域熟知的。

药物组合物可以通过注射给药。对于注射给药，包含分子成像剂的药物组合物可以配制成无菌的水性(aqueous)溶液或非水性溶液，或者可选地作为配制成用于临时制备无菌可注射溶液的无菌粉末。药物组合物在制造和储存条件下应该是稳定的，并且必须防止微生物如细菌和真菌的污染作用。

用于通过注射施用的药学上可接受的载体(carrier)是溶剂或分散介质/媒介，例如水性溶液(例如，hank's液，醇/水性溶液或盐溶液)和非水性载体(例如丙二醇、聚乙二醇、植物油和可注射的有机酯，例如油酸乙酯)。可注射药物组合物还可含有肠胃外介质(vehicle)(例如氯化钠和林格氏葡萄糖)和/或静脉内介质(例如液体和营养补充剂)；以及其他常规的、药学上可接受的、无毒的赋形剂和添加剂，包括盐、缓冲剂和防腐剂，例如抗细菌剂和/或抗真菌剂(例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、thirmerosal等)。通过添加可延迟吸收的试剂(例如单硬脂酸铝和/或明胶)可以实现可注射组合物的延长吸收。本领域技术人员可以容易地确定各种组分的ph和浓度。

无菌可注射溶液可以通过将活性化合物(即分子成像剂)和其他成分掺入所需量的适当溶剂中，然后通过例如过滤和/或辐照对所得混合物进行灭菌来制备。

通常，分子成像剂(或包含其的药物组合物)的剂量将根据诸如受试者年龄、性别和体重以及怀疑影响患者的特定炎性病况、疾病程度、待检查身体的组织和/或成像标记的灵敏度等因素而变化。还应考虑诸如禁忌症、疗法和其他变量的因素以调节待施用的分子成像剂的剂量。然而，这可以由训练有素的医生容易地实现。

通常，一种合适剂量的分子成像剂，即标记的cd31^shed配体或包含其的药物组合物，对应于足以允许存在于受试者中的任何相关cd31^shed的分子成像的最低量的分子成像剂或药物组合物。为了使该剂量最小化，优选施用是静脉内、肌内、腹膜内或皮下，并且优选在待检查部位的近端。

试剂盒

本发明还提供了一种试剂盒，其包含用于实施本发明的方法和用途的物质。

在某些实施方案中，试剂盒包含至少一种如上所述的cd31^shed配体和至少一种成像标记，优选至少一种放射性核素，以及任选的将所述cd31^shed配体和所述成像标记优选放射性核素结合以形成本发明的标记的cd31^shed配体的说明书。

放射性核素优选是短寿命的放射性核素，例如锝-99m(99mtc)、镓-67(67ga)、钇-90(90y)、铟-111(111in)、铼-186(186re)和铊-201(201ti)，更优选99mtc。

此外，试剂盒还包含至少一种共配体，例如三(羟甲基)甲基甘氨酸和/或乙二胺二乙酸(edda)。

此外，试剂盒还包含以下一种或多种：标记缓冲剂、标记试剂、纯化缓冲剂、纯化试剂、纯化装置、注射介质和/或注射试剂。用于使用这些缓冲剂、试剂和/或用于进行制备程序和/或给药的不同步骤的装置(means)的说明书可以包括在试剂盒中。

试剂盒中包含的不同组分可以以固体(例如冻干的)或液体形式提供。

试剂盒可任选地包含用于每种单独组分的不同容器(例如小瓶、安瓿、试管、烧瓶或瓶子)。每种组分通常适合以等份形式存在于各自容器中或以浓缩形式提供。还可以提供适合于进行制备方法的某些步骤的其他容器。试剂盒的各个容器优选保持密闭以进行商业销售。

在某些实施方案中，试剂盒还包含用于使用其组分以如本文所述进行炎性病况的成像的说明书，特别是用于确定受试者是否患有炎性病况，是否处于患有或发展炎性病况的风险中，或处于抗炎治疗后炎性病况复发的风险中，如本文所述。

使用本发明试剂盒的说明书可以包括用于从cd31^shed配体和成像标记制备标记的cd31^shed配体的说明书，关于由此获得的分子成像剂的剂量和给药方式的说明书，用于进行cd3^shed检测的说明书，和/或用于解释所得结果的说明书。试剂盒还可以包含由管理药物或生物制品的制造、使用或销售的政府机构规定的形式的通知。

通过参考以下实施例和附图来进一步说明本发明。

本文引用的所有参考文献，包括期刊文章或摘要，公开的或未公开的专利申请，授权专利或任何其他参考文献，均通过引用整体并入本文，包括引用的参考文献中呈现的所有数据、表格、图形和文本。

附图简要说明

图1：99mtc-hynic-p8ri与三(羟甲基)甲基甘氨酸(a)和作为共配体的三(羟甲基)甲基甘氨酸/edda(b)的放射性高效液相色谱(hplc)。乙腈级分的hplc分析显示具有三(羟甲基)甲基甘氨酸/edda的主要物质(specie)(tr＝10.1分钟)，相比之下三(羟甲基)甲基甘氨酸具有多物质的谱。

图2：99mtc-hynic-p8ri与三(羟甲基)甲基甘氨酸/edda作为共配体的放射-hplc稳定性研究。a：在人血浆中孵育4小时后的血浆稳定性。b：注射74mbq99mtc-hynic-p8ri与作为共配体的三(羟甲基)甲基甘氨酸/edda后1小时在大鼠膀胱中收集的尿液的放射-hplc色谱图。对于a和b，乙腈级分中的峰(tr＝10.1min)对应于初始物质，没有降解迹象。

图3：每周接受龈紫单胞菌(porphyromonasgingivalis)注射的腹主动脉瘤(aaa)的雄性wistar大鼠中[99mtc]edda/hynic-p8ri的spect/ct图像。在74mbq示踪剂注射后30分钟和aaa手术后21天获得图像。示出了腹部区域的轴向(a)、冠向(b)和径向(c)平面。观察到通过肾脏(b中的白色箭头)和膀胱(c中的白色箭头)的示踪剂消除。可以在aaa的位置观察到[99mtc]edda/hynic-p8ri的局部摄取(a、b、c中的黑色箭头)。

图4：在右后肢炎症模型中，对于锝-99m放射性标记的巯替肽(n＝3)和p8ri注射的大鼠(n＝3)，在大腿的相同区域中测量的右后肢和左后肢之间的平均计数比率的比较。简而言之，在wistar大鼠右后肢肌内注射松节油，同时用盐水类似地注射对侧大腿。在48小时后并在注射80mbq的[99mtc]-hynic-peg3-p8ri或[99mtc]-巯替肽后30分钟进行spect/ct采集。使用mann-withneyu检验实现两组之间的比较，p值小于0.05被认为是显著的。

序列的简要描述

seqidno：1对应于人cd31的序列。

seqidno：2对应于衍生自人或鼠cd31的6氨基酸肽的序列lapwkk。

seqidno：3对应于衍生自鼠cd31的10氨基酸肽的序列vrvflapwkk，也称为pepregcd31。

seqidno：4对应于衍生自人cd31的10氨基酸肽的序列vrvilapwkk。

seqidno：5对应于衍生自鼠cd31的8氨基酸肽的序列rvflapwk，也称为p8f。

seqidno：6对应于8氨基酸肽的序列kwpalfvr，也称为p8ri，其具有seqidno：5的反向序列并由d-氨基酸组成。

seqidno：7对应于衍生自人cd31的8氨基酸肽的序列rvilapwk。

seqidno：8对应于具有seqidno：7的反向序列并由d-氨基酸组成的8氨基酸肽的序列kwpalivr。

seqidno：9对应于鼠cd31的序列。

seqidno：10对应于牛cd31的序列。

seqidno：11对应于猪cd31的序列。

seqidno：12对应于序列seqidno：1的氨基酸579至601。

序列seqidno：13至74如上所定义。

具体实施方式

实施例

材料和方法

1、材料

试剂购自sigma-aldrichcorporation，除非另有说明并按原样使用。在固相上合成p8ri(h-kwpalfvr-oh)，通过rp-hplc/ms分析其纯度>85％。通过使用fmoc化学法的固相肽合成制备hynic-p8ri(rp-hplc纯化后产率52％，rp-hplc纯度96％)。

na^99mtco4^-从商业⁹⁹mo/^99mtc发生器(tekcis，iba分子，法国)获得。

2、分析方法

2.1hplc

将与berthold放射测量检测器耦合的dionexultimate3000系统用于rp-hplc分析。使用ace3c18,3μ,150x4.6mm柱,流速为1ml/min，uv检测波长为220nm，使用以下流动相，a：0.1％tfa/水)，b乙腈(acn)。梯度为：0-2分钟23％b，2-20分钟23-50％b，20-23分钟50-100％b，23-25分钟100-23％b，25-28分钟23％b。

2.2薄层色谱法

使用radiochromatogaph(minigita，raytest，德国)进行tlc。固定相是硅胶(itlc-sg，agilenttechnologies，usa)，并且使用不同的流动相。mek用于测定游离的^99mtco4^-(rf＝1)的量，抗凝血剂柠檬酸葡萄糖溶液(acd-a，baxterinternational，usa)用于确定非肽结合的^99mtc-共配体和^99mtco4^-(rf＝1)，60％acn用于确定^99mtc-胶体(rf＝0)。

3、^99mtc放射性标记

3.1三(羟甲基)甲基甘氨酸作为共配体

在橡胶密封的n2吹扫的小瓶中，将20μg的hynic-p8ri与500μl的三(羟甲基)甲基甘氨酸溶液(40mg/ml，在pbs1x缓冲液ph7.2中)，80μl的锡(ii)溶液(1mg/ml，在hcl0.1n中)，1gbq^99mtco4^-洗脱液和pbsqs3ml总体积于室温(rt)下一起孵育30分钟。

3.2edda作为共配体

在橡胶密封的n2吹扫的小瓶中，将20μg的hynic-p8ri与500μl的edda溶液(20mg/ml，在naoh0.1n中)，80μl的锡(ii)溶液(1mg/ml，在hcl0.1n中)，1gbq^99mtco4^-洗脱液和pbs1xqs3ml总体积于室温下一起孵育30分钟。

3.3三(羟甲基)甲基甘氨酸/edda交换标记

除了在反应小瓶中加入500μledda溶液(20mg/ml，在naoh0.1n中)并在100℃下加热10分钟之外，与三(羟甲基)甲基甘氨酸作为共配体的过程相同。

4、纯化过程

通过使用用10ml乙醇、然后是10ml水和5ml空气预活化的c18sep-pak柱(sep-pakc18pluslightcartridge，waters，usa)实现纯化。将放射性标记制剂通过柱并用8ml水洗涤后，用80％acn洗脱放射性标记的肽，然后真空蒸发acn。

5、体外稳定性研究

在以100pmol/ml的浓度孵育0分钟、30分钟、1小时、2小时和4小时后，在37℃下在新鲜人血浆中评估^99mtc复合物的稳定性。接下来，用甲醇沉淀血浆样品并离心(20000g，10分钟)。收集上清液并过滤(millex-gv0.22μmpvdf，merckmillipore，德国)，然后通过放射-hplc评估。

6、体内稳定性研究

将74mbq的99mtc-hynic-p8ri(用三(羟甲基)甲基甘氨酸/edda作为共配体获得)注射到雄性wistar大鼠中。1小时后，处死大鼠并使用注射器直接从膀胱收集尿液，并在0.22μm过滤(millex-gv0.22μmpvdf，merckmillipore，德国)后通过放射-hplc进行分析。

7、蛋白质结合

在37℃下在新鲜人血浆中孵育0分钟、30分钟、1小时、2小时和4小时后测定纯化的放射性标记的肽的蛋白质结合，并在尺寸排阻色谱后进行分析(illustramicrosping-50columns，sephadexg-50，gehealthcare，uk)。将g-50柱以2000xg预旋转1分钟，然后加入20μl混合物并将柱以2000xg离心2分钟。通过在γ-计数器(cobraii，packardbioscience)中测量柱和洗脱液来估计放射性标记的肽的蛋白质结合。同时，将放射性标记的肽在pbs1x中于37℃孵育1小时作为对照。

8、实验模型

8.1、腹主动脉瘤(aaa)模型

在实验室建立的大鼠血管炎症模型：通过局部输注弹性蛋白酶，然后静脉注射存在于人aaa(龈紫单胞菌)中并已知诱导aaa炎症的牙周细菌诱导实验性腹主动脉瘤(aaa)(delbosc等,2011,plosone6(4):e18679.doi:10.1371/journal.pone.0018679)。

8.2、后肢炎症模型

通过在右后肢肌内注射松节油(150μl)诱导大鼠后肢炎症模型，而在左后肢注射盐水溶液(150μl)(对侧对照)。

9、spect/ct成像-aaa模型

在通过阴茎静脉静脉内注射74mbq的放射性标记的hynic-p8ri(使用三(羟甲基)甲基甘氨酸/edda获得)后，立即用专用于小动物的混合形式spect/ct相机(nanospect/ct，bioscaninc.)进行连续的全身采集(第一小时是每10分钟)。

10、x射线ct扫描仪、spect和spect/ct采集-右后肢炎症

在分别注射80mbq的99mtc-hynic-p8ri(用三(羟甲基)甲基甘氨酸/edda作为共配体获得)和^99mtc-巯替肽后30分钟进行采集。

结果

1、放射性标记

6-肼吡啶-3-羧酸(hynic)通过3(peg)间隔物与p8ri肽的n-末端氨基酸偶联，得到hynic-p8ri。

然后通过使用三(羟甲基)甲基甘氨酸、edda或三(羟甲基)甲基甘氨酸/edda作为共配体以高比活性(>71gbq/μmol)标记hynic-p8ri。标记产率从65.5％到98.3％不等，如表2所示。选择三(羟甲基)甲基甘氨酸/edda交换标记策略是因为如通过hplc分析所表明的高标记产率以及产生单一主要物质(参见图1)。

表2：使用不同共配体的99mtc-hynic-p8ri的标记产率

人血浆中的体外稳定性揭示了99mtc复合物的高稳定性，而没有显著释放放射性标记的杂质或放射性标记的肽降解。在孵育4小时后，rcp(放射化学试剂纯度)优于89％(参见图2a)。通过放射-hplc分析对大鼠尿液的体内稳定性研究显示一种主要物质，其以对应于注射的放射性示踪剂的保留时间排出。该结果表明99mtc-hynic-p8ri可以不变地排出(参见图2b)。

3、蛋白质结合

如通过尺寸排阻色谱法测定的，发现使用三(羟甲基)甲基甘氨酸/edda共配体交换标记策略时蛋白质结合水平非常低(孵育4小时后<5％)。该发现表明99mtc-hynic-p8ri可能是亲水性化合物。

4、spect/ct成像-aaa模型

在aaa大鼠中注射99mtc-hynic-p8ri(用三(羟甲基)甲基甘氨酸/edda作为共配体获得)后30分钟进行采集后获得代表性的spect和ct图像，如图3所示。生物分布的模式显示了几乎排他性的肾脏摄取和排泄。有趣的是，在对应于aaa的位置的主动脉路径上存在放射性示踪剂的局部摄取。

5、x射线ct扫描仪、spect和spect/ct采集-右后肢炎症模型

在使用松节油的大鼠右后肢炎症模型中进一步评估^99mtc-hynic-p8ri。

巯替肽是肾功能的非特异性标志物，并且由于其接近肽p8ri的生物分布模式(特别是低分子量和快速清除)而用作阴性对照。

在该模型中，与注射锝-99m放射性标记的巯替肽的对照组相比，注射松节油的后肢和注射盐水的后肢之间的锝-99m放射性标记的p8ri摄取比率更高，从而证实p8ri与炎症部位的特异性结合(见图4)。

结论

[99mtc]edda/hynic-p8ri的rcp>93％(hplc和itlc)，而无需任何纯化，比活性>71gbq/μmol。降解的放射性标记肽没有显著释放(rcp>89％)，并且放射性示踪剂与血浆蛋白的结合非常低(孵育4小时后<5％)。在体内，示踪剂的血液清除几乎排他性地是肾脏，注射后1小时在肾脏和膀胱中具有峰值活性，这对应于hplc上未改变形式的肽。此外，在动物中注射后30分钟可检测到aaa对^99mtc-hynic-p8ri的摄取，以及在免疫组织化学上与活化的血小板和白细胞的相关联。还在右后肢炎症模型炎症部位中特异性检测到^99mtc-hynic-p8ri。通过特异性靶向参与表达截短的cd31(cd31^shed)的炎症并具有快速血液清除的活化细胞，放射性标记的p8ri构成炎症成像中有用的新方法。

序列表

<110>法国国家健康和医学研究院（inserm）

巴斯德研究院（institutpasteur）

巴黎公共救济院（assistancepublique-hopitauxdeparis）

巴黎大学迪德罗特第七分校（universiteparisdiderot-paris7）

巴黎第十三大学（universiteparis13）

<120>cd31shed作为分子靶标用于炎症成像

<130>cv-1109/pct

<150>ep16305516.3

<151>2016-05-03

<160>74

<170>siposequencelisting1.0

<210>1

<211>738

<212>prt

<213>人(homosapiens)

<220>

<221>信号

<222>(1)..(27)

<220>

<221>结构域

<222>(28)..(601)

<223>细胞外结构域

<220>

<221>结构域

<222>(34)..(121)

<223>第一ig样结构域

<220>

<221>结构域

<222>(145)..(233)

<223>第二ig样结构域

<220>

<221>结构域

<222>(236)..(315)

<223>第三ig样结构域

<220>

<221>结构域

<222>(328)..(401)

<223>第四ig样结构域

<220>

<221>结构域

<222>(424)..(493)

<223>第五ig样结构域

<220>

<221>结构域

<222>(499)..(591)

<223>第六ig样结构域

<220>

<221>结构域

<222>(592)..(601)

<223>近膜结构域

<220>

<221>结构域

<222>(602)..(620)

<223>跨膜结构域

<220>

<221>结构域

<222>(621)..(738)

<223>胞质结构域

<400>1

metglnproargtrpalaglnglyalathrmettrpleuglyvalleu

151015

leuthrleuleuleucysserserleugluglyglngluasnserphe

202530

thrileasnservalaspmetlysserleuproasptrpthrvalgln

354045

asnglylysasnleuthrleuglncysphealaaspvalserthrthr

505560

serhisvallysproglnhisglnmetleuphetyrlysaspaspval

65707580

leuphetyrasnilesersermetlysserthrglusertyrpheile

859095

progluvalargiletyraspserglythrtyrlyscysthrvalile

100105110

valasnasnlysglulysthrthralaglutyrglnleuleuvalglu

115120125

glyvalproserproargvalthrleuasplyslysglualailegln

130135140

glyglyilevalargvalasncysservalprogluglulysalapro

145150155160

ilehisphethrileglulysleugluleuasnglulysmetvallys

165170175

leulysargglulysasnserargaspglnasnphevalileleuglu

180185190

pheprovalglugluglnaspargvalleuserpheargcysglnala

195200205

argileileserglyilehismetglnthrsergluserthrlysser

210215220

gluleuvalthrvalthrgluserpheserthrprolysphehisile

225230235240

serprothrglymetilemetgluglyalaglnleuhisilelyscys

245250255

thrileglnvalthrhisleualaglnglupheprogluileileile

260265270

glnlysasplysalailevalalahisasnarghisglyasnlysala

275280285

valtyrservalmetalametvalgluhisserglyasntyrthrcys

290295300

lysvalgluserserargileserlysvalserserilevalvalasn

305310315320

ilethrgluleupheserlysprogluleugluserserphethrhis

325330335

leuaspglnglygluargleuasnleusercysserileproglyala

340345350

proproalaasnphethrileglnlysgluaspthrilevalsergln

355360365

thrglnaspphethrlysilealaserlysseraspserglythrtyr

370375380

ilecysthralaglyileasplysvalvallyslysserasnthrval

385390395400

glnilevalvalcysglumetleuserglnproargilesertyrasp

405410415

alaglnphegluvalilelysglyglnthrilegluvalargcysglu

420425430

serileserglythrleuproilesertyrglnleuleulysthrser

435440445

lysvalleugluasnserthrlysasnserasnaspproalavalphe

450455460

lysaspasnprothrgluaspvalglutyrglncysvalalaaspasn

465470475480

cyshisserhisalalysmetleusergluvalleuargvallysval

485490495

ilealaprovalaspgluvalglnileserileleuserserlysval

500505510

valgluserglygluaspilevalleuglncysalavalasnglugly

515520525

serglyproilethrtyrlysphetyrargglulysgluglylyspro

530535540

phetyrglnmetthrserasnalathrglnalaphetrpthrlysgln

545550555560

lysalaserlysgluglngluglyglutyrtyrcysthralapheasn

565570575

argalaasnhisalaserservalproargserlysileleuthrval

580585590

argvalileleualaprotrplyslysglyleuilealavalvalile

595600605

ileglyvalileilealaleuleuileilealaalalyscystyrphe

610615620

leuarglysalalysalalysglnmetprovalglumetserargpro

625630635640

alavalproleuleuasnserasnasnglulysmetseraspproasn

645650655

metglualaasnserhistyrglyhisasnaspaspvalargasnhis

660665670

alametlysproileasnaspasnlysgluproleuasnseraspval

675680685

glntyrthrgluvalglnvalserseralagluserhislysaspleu

690695700

glylyslysaspthrgluthrvaltyrsergluvalarglysalaval

705710715720

proaspalavalgluserargtyrserargthrgluglyserleuasp

725730735

glythr

<210>2

<211>6

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>源自鼠或人的cd31肽

<400>2

leualaprotrplyslys

15

<210>3

<211>10

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>源自小鼠的cd31肽

<400>3

valargvalpheleualaprotrplyslys

1510

<210>4

<211>10

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>源自人的cd31肽

<400>4

valargvalileleualaprotrplyslys

1510

<210>5

<211>8

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>源自鼠的cd31肽

<400>5

argvalpheleualaprotrplys

15

<210>6

<211>8

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>源自鼠的cd31肽

<400>6

lystrpproalaleuphevalarg

15

<210>7

<211>8

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>源自人的cd31肽

<400>7

argvalileleualaprotrplys

15

<210>8

<211>8

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>源自人的cd31序列

<400>8

lystrpproalaleuilevalarg

15

<210>9

<211>727

<212>prt

<213>小家鼠(musmusculus)

<400>9

metleuleualaleuglyleuthrleuvalleutyralaserleugln

151015

alaglugluasnserphethrileasnserilehismetgluserleu

202530

prosertrpgluvalmetasnglyglnglnleuthrleuglucysleu

354045

valaspileserthrthrserlysserargserglnhisargvalleu

505560

phetyrlysaspaspalametvaltyrasnvalthrserarggluhis

65707580

thrglusertyrvalileproglnalaargvalphehisserglylys

859095

tyrlyscysthrvalmetleuasnasnlysglulysthrthrileglu

100105110

tyrgluvallysvalhisglyvalserlysprolysvalthrleuasp

115120125

lyslysgluvalthrgluglyglyvalvalthrvalasncysserleu

130135140

glngluglulysproproilephephelysileglulysleugluval

145150155160

glythrlysphevallysargargileasplysthrserasngluasn

165170175

phevalleumetglupheproileglualaglnasphisvalleuval

180185190

pheargcysglnalaglyileleuserglyphelysleuglngluser

195200205

gluproileargserglutyrvalthrvalglngluserpheserthr

210215220

prolysphegluilelysproproglymetileilegluglyaspgln

225230235240

leuhisileargcysilevalglnvalthrhisleuvalglngluphe

245250255

thrgluileileileglnlysasplysalailevalalathrserlys

260265270

glnserserglualavaltyrservalmetalametvalglutyrser

275280285

glyhistyrthrcyslysvalgluserasnargileserlysalaser

290295300

serilemetvalasnilethrgluleupheprolysprolysleuglu

305310315320

pheserserserargleuaspglnglygluleuleuaspleusercys

325330335

servalserglythrprovalalaasnphethrileglnlysgluglu

340345350

thrvalleuserglntyrglnasnpheserlysilealaglugluser

355360365

aspserglyglutyrsercysthralaglyileglylysvalvallys

370375380

argserglyleuvalproileglnvalcysglumetleuserlyspro

385390395400

serilephehisaspalalyssergluileilelysglyhisalaile

405410415

glyilesercysglnsergluasnglythralaproilethrtyrhis

420425430

leumetlysalalysserasppheglnthrleugluvalthrserasn

435440445

aspproalathrphethrasplysprothrargaspmetglutyrgln

450455460

cysargalaaspasncyshisserhisproalavalphesergluile

465470475480

leuargvalargvalilealaprovalaspgluvalvalileserile

485490495

leuserserasngluvalglnserglyserglumetvalleuargcys

500505510

servallysgluglythrserproilethrpheglnphetyrlysglu

515520525

lysgluaspargprophehisglnalavalvalasnaspthrglnala

530535540

phetrphisasnlysglnalaserlyslysglngluglyglntyrtyr

545550555560

cysthralaserasnargalasersermetargthrserproargser

565570575

serthrleualavalargvalpheleualaprotrplyslysglyleu

580585590

ilealavalvalvalileglyvalvalilealathrleuilevalala

595600605

alalyscystyrpheleuarglysalalysalalysglnlysproval

610615620

glumetserargproalaalaproleuleuasnserasnserglulys

625630635640

ilesergluproservalglualaasnserhistyrglytyraspasp

645650655

valserglyasnaspalavallysproileasnglnasnlysasppro

660665670

glnasnmetaspvalglutyrthrgluvalgluvalserserleuglu

675680685

prohisglnalaleuglythrargalathrgluthrvaltyrserglu

690695700

ilearglysvalaspproasnleumetgluasnargtyrserargthr

705710715720

gluglyserleuasnglythr

725

<210>10

<211>739

<212>prt

<213>牛(bostaurus)

<400>10

metglnleuargtrpthrglnargglymetmettrpleuglyalaleu

151015

leuthrleuleuleucysserserleulysglyglngluasnserphe

202530

thrileasnserilehismetglnileleuprohisserthrvalgln

354045

asnglygluasnleuthrleuglncysleuvalaspvalserthrthr

505560

serargvallysproleuhisglnvalleuphetyrlysaspaspval

65707580

leuleuhisasnvalserserargargasnthrglusertyrleuile

859095

prohisvalargvalcysaspserglyargtyrlyscysasnvalile

100105110

leuasnasnlysglulysthrthrproglutyrgluvaltrpvallys

115120125

glyvalseraspproargvalthrleuasplyslysgluvalileglu

130135140

glyglyvalvalvalvalasncysservalprogluglulysalapro

145150155160

valhisphethrileglulysphegluleuasnileargglyalalys

165170175

lyslysargglulysthrserglnasnglnasnphevalthrleuglu

180185190

phethrvalglugluglnaspargthrileargpheglncysglnala

195200205

lysilepheserglyserasnvalgluserserargproileglnser

210215220

aspleuvalthrvalarggluserpheserasnprolysphehisile

225230235240

ileprogluglylysvalmetgluglyaspaspleuglnvallyscys

245250255

thrvalglnvalthrhisglnalaglnserpheprogluileileile

260265270

glnlysasparggluilevalalahisasnserleusersergluala

275280285

valtyrservalmetalathrthrgluhisasnglyasntyrthrcys

290295300

lysvalglualaserargileserlysvalserservalvalvalasn

305310315320

valthrgluleupheserlysprolysleugluserseralathrhis

325330335

leuaspglnglygluaspleuasnleuleucysserileproglyala

340345350

proproalaasnphethrileglnlysglyglymetthrvalsergln

355360365

thrglnasnphethrlysargvalserglutrpaspserglyleutyr

370375380

thrcysvalalaglyvalglyargvalphelysargserasnthrval

385390395400

glnilethrvalcysglumetleuserlysproserilephehisasp

405410415

serargsergluvalilelysglyglnthrilegluvalsercysgln

420425430

servalasnglythralaproilephetyrglnleuserasnthrser

435440445

lysprovalalaasnglnservalglyserasnlysproalailephe

450455460

argvallysprothrlysaspvalglutyrcyscysseralaaspasn

465470475480

cyshisserhisserlysmetphesergluvalleuargvallysval

485490495

ilealaprovalaspglualaglnleuvalvalleulysglygluval

500505510

gluproglygluproilevalphetyrcysservalasngluglyser

515520525

pheproilethrtyrlysphetyrlysglulysgluserlysprophe

530535540

tyrglnaspthrileasnalathrglnilemettrphislysthrthr

545550555560

alaserlysglutyrgluglyglntyrtyrcysthralaserasnarg

565570575

alaasnleuserlyshisvalileglnserasnthrleuthrvalarg

580585590

valtyrleuproleuglulysglyleuilealavalvalvalilegly

595600605

valileilevalthrleuvalleuglyalalyscystyrpheleulys

610615620

lysalalysalalysglnmetprovalglumetserargproalaval

625630635640

proleuleuasnserasnasnglulysthrleuseraspalaglythr

645650655

glualaasparghistyrglytyrasngluaspvalglyasnhisala

660665670

metlysproleuasngluasnlysgluproleuthrleuaspvalglu

675680685

tyrthrgluvalgluvalthrserprogluprohisglnglyleugly

690695700

thrlysglythrgluthrgluthrvaltyrsergluilearglysala

705710715720

aspproaspphevalgluasnargtyrserargthrgluglyserleu

725730735

aspglyser

<210>11

<211>740

<212>prt

<213>野猪(susscrofa)

<400>11

metargleuargtrpthrglnglyglyasnmettrpleuglyvalleu

151015

leuthrleuglnleucysserserleugluglyglngluasnserphe

202530

thrileasnserilehismetglumetleuproglyglngluvalhis

354045

asnglygluasnleuthrleuglncysilevalaspvalserthrthr

505560

serservallysproglnhisglnvalleuphetyrlysaspaspval

65707580

leuphehisasnvalserserthrlysasnthrglusertyrpheile

859095

serglualaargvaltyrasnserglyargtyrlyscysthrvalile

100105110

leuasnasnlysglulysthrthralaglutyrlysvalvalvalglu

115120125

glyvalserasnproargvalthrleuasplyslysgluvalileglu

130135140

glyglyvalvallysvalthrcysservalprogluglulyspropro

145150155160

valhispheileileglulysphegluleuasnvalargaspvallys

165170175

glnargargglulysthralaasnasnglnasnservalthrleuglu

180185190

phethrvalglugluglnaspargvalileleuphesercysglnala

195200205

asnvalilepheglythrargvalgluileseraspservalargser

210215220

aspleuvalthrvalarggluserpheserasnprolysphehisile

225230235240

serprolysglyvalileilegluglyaspglnleuleuilelyscys

245250255

thrileglnvalthrhisglnalaglnserpheprogluileileile

260265270

glnlysasplysgluilevalalahisserargasnglysergluala

275280285

valtyrservalmetalathrvalgluhisasnserasntyrthrcys

290295300

lysvalglualaserargileserlysvalserserilemetvalasn

305310315320

ilethrgluleupheserargprolysleulysserseralathrarg

325330335

leuaspglnglygluserleuargleutrpcysserileproglyala

340345350

proproglualaasnphethrileglnlysglyglymetmetmetleu

355360365

glnaspglnasnleuthrlysvalalasergluargaspserglythr

370375380

tyrthrcysvalalaglyileglylysvalvallysargserasnglu

385390395400

valglnilealavalcysglumetleuserlysproserilephehis

405410415

aspserglysergluvalilelysglyglnthrilegluvalsercys

420425430

glnserileasnglythrserproilesertyrglnleuleulysgly

435440445

seraspleuleualaserglnasnvalserserasngluproalaval

450455460

phelysaspasnprothrlysaspvalglutyrglncysilealaasp

465470475480

asncyshisserhisalaglymetproserlysvalleuargvallys

485490495

valilealaprovalglugluvallysleuserileleuleuserglu

500505510

gluvalgluserglyglnalailevalleuglncysservallysglu

515520525

glyserglyproilethrtyrlysphetyrlysglulysgluasnlys

530535540

prophehisglnvalthrleuasnaspthrglnalailetrphislys

545550555560

prolysalaserlysaspglngluglyglntyrtyrcysleualaser

565570575

asnargalathrproserlysasnpheleuglnserasnileleuala

580585590

valargvaltyrleualaprotrplyslysglyleuilealavalval

595600605

valilealavalileilealavalleuleuleuglyalaargphetyr

610615620

pheleulyslysserlysalalysglnmetprovalglumetcysarg

625630635640

proalaalaproleuleuasnserasnasnglulysthrleuserasp

645650655

proasnthrglualaasnarghistyrglytyrasngluaspvalgly

660665670

asnhisalametlysproleuasngluasnlysgluproleuthrleu

675680685

aspvalglutyrthrgluvalgluvalthrserprogluprohisarg

690695700

glyleuglythrlysglythrgluthrvaltyrsergluilearglys

705710715720

alaaspproaspleuvalgluasnargtyrserargthrgluglyser

725730735

leuaspglythr

740

<210>12

<211>23

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>源自人的cd31肽

<400>12

asnhisalaserservalproargserlysileleuthrvalargval

151015

ileleualaprotrplyslys

20

<210>13

<211>15

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>13

serserthrleualavalargvalpheleualaprotrplyslys

151015

<210>14

<211>14

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>14

serthrleualavalargvalpheleualaprotrplyslys

1510

<210>15

<211>13

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>15

thrleualavalargvalpheleualaprotrplyslys

1510

<210>16

<211>12

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>16

leualavalargvalpheleualaprotrplyslys

1510

<210>17

<211>11

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>17

alavalargvalpheleualaprotrplyslys

1510

<210>18

<211>9

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>18

argvalpheleualaprotrplyslys

15

<210>19

<211>8

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>19

valpheleualaprotrplyslys

15

<210>20

<211>7

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>20

pheleualaprotrplyslys

15

<210>21

<211>5

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>21

alaprotrplyslys

15

<210>22

<211>4

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>22

protrplyslys

1

<210>23

<211>15

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>23

serlysileleuthrvalargvalileleualaprotrplyslys

151015

<210>24

<211>14

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>24

lysileleuthrvalargvalileleualaprotrplyslys

1510

<210>25

<211>13

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>25

ileleuthrvalargvalileleualaprotrplyslys

1510

<210>26

<211>12

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>26

leuthrvalargvalileleualaprotrplyslys

1510

<210>27

<211>11

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>27

thrvalargvalileleualaprotrplyslys

1510

<210>28

<211>9

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>28

argvalileleualaprotrplyslys

15

<210>29

<211>8

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>29

valileleualaprotrplyslys

15

<210>30

<211>7

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>30

ileleualaprotrplyslys

15

<210>31

<211>15

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>31

sersermetargthrserproargserserthrleualavalarg

151015

<210>32

<211>14

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>32

sersermetargthrserproargserserthrleualaval

1510

<210>33

<211>13

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>33

sersermetargthrserproargserserthrleuala

1510

<210>34

<211>12

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>34

sersermetargthrserproargserserthrleu

1510

<210>35

<211>11

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>35

sersermetargthrserproargserserthr

1510

<210>36

<211>10

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>36

sersermetargthrserproargserser

1510

<210>37

<211>9

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>37

sersermetargthrserproargser

15

<210>38

<211>8

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>38

sersermetargthrserproarg

15

<210>39

<211>7

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>39

sersermetargthrserpro

15

<210>40

<211>6

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>40

sersermetargthrser

15

<210>41

<211>5

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>41

sersermetargthr

15

<210>42

<211>4

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>42

sersermetarg

1

<210>43

<211>15

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>43

asnhisalaserservalproargserlysileleuthrvalarg

151015

<210>44

<211>14

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>44

asnhisalaserservalproargserlysileleuthrval

1510

<210>45

<211>13

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>45

asnhisalaserservalproargserlysileleuthr

1510

<210>46

<211>12

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>46

asnhisalaserservalproargserlysileleu

1510

<210>47

<211>11

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>47

asnhisalaserservalproargserlysile

1510

<210>48

<211>10

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>48

asnhisalaserservalproargserlys

1510

<210>49

<211>9

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>49

asnhisalaserservalproargser

15

<210>50

<211>8

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>50

asnhisalaserservalproarg

15

<210>51

<211>7

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>51

asnhisalaserservalpro

15

<210>52

<211>6

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>52

asnhisalaserserval

15

<210>53

<211>5

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>53

asnhisalaserser

15

<210>54

<211>4

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>54

asnhisalaser

1

<210>55

<211>15

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>55

thrserproargserserthrleualavalargvalpheleuala

151015

<210>56

<211>13

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>56

serproargserserthrleualavalargvalpheleu

1510

<210>57

<211>11

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>57

proargserserthrleualavalargvalphe

1510

<210>58

<211>9

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>58

argserserthrleualavalargval

15

<210>59

<211>7

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>59

serserthrleualavalarg

15

<210>60

<211>5

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>60

serthrleualaval

15

<210>61

<211>15

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>61

servalproargserlysileleuthrvalargvalileleuala

151015

<210>62

<211>13

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>62

valproargserlysileleuthrvalargvalileleu

1510

<210>63

<211>11

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>63

proargserlysileleuthrvalargvalile

1510

<210>64

<211>9

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>64

argserlysileleuthrvalargval

15

<210>65

<211>7

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>65

serlysileleuthrvalarg

15

<210>66

<211>5

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>66

lysileleuthrval

15

<210>67

<211>4

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>67

argvalpheleu

1

<210>68

<211>5

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>68

argvalpheleuala

15

<210>69

<211>6

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>69

argvalpheleualapro

15

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<211>7

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>70

argvalpheleualaprotrp

15

<210>71

<211>4

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>71

argvalileleu

1

<210>72

<211>5

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>72

argvalileleuala

15

<210>73

<211>6

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>73

argvalileleualapro

15

<210>74

<211>7

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<220>

<223>肽

<400>74

argvalileleualaprotrp

15