作为癌症疫苗的复制-缺陷型沙粒病毒颗粒和三-节段沙粒病毒颗粒的制作方法

对电子提交的序列表的引用本发明申请作为参考引入了作为标题为“13194-025-228_st25.txt”的文本文件与本发明申请一起提交的序列表，该文本文件于2017年10月31日生成并且大小为113千字节。1.简介本发明申请一般地涉及作为针对肿瘤病，如癌症的适合的疫苗的基因修饰的沙粒病毒。本文所述的沙粒病毒作为疫苗和/或用于治疗肿瘤病和/或用于在免疫疗法中使用可以是适合的。具体地，本文提供了通过与化疗剂组合施用基因修饰的沙粒病毒来治疗肿瘤病的方法和组合物，其中所述沙粒病毒已被工程化以包含编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。2.
背景技术：
：对于表达感兴趣的外源基因的重组负链rna病毒的产生已进行了长时间的研究。已对于其它病毒发表了不同的策略(garcia-sastre等人,1994,jvirol68(10):6254-6261；percy等人,1994,jvirol68(7):4486-4492；flickandhobom,1999,virology262(1):93-103；machado等人,2003,virology313(1):235-249)。过去，已显示有可能将其它外源基因引入到二-节段lcmv颗粒的基因组中(emonet等人,2009,pnas,106(9):3473-3478)。将两个感兴趣的外源基因插入lcmv的二-节段基因组中，从而导致产生了具有两个s节段和一个l节段的三-节段lcmv颗粒(r3lcmv)。在emonet等人,(2009)所发表的三-节段病毒中，np和gp两者均保持在它们各个在s节段中的天然位置中，并因此在它们位于侧接utr的天然启动子的控制下表达。2.1表达感兴趣的基因的复制-缺陷型沙粒病毒载体已报道了感染性、复制-缺陷型沙粒病毒作为载体用于抗原表达的使用(参见flatz等人,2010,nat.med.,16(3):339-345；flatz等人,2012,j.virol.,86(15),7760-7770)。这些感染性、复制-缺陷型沙粒病毒可以感染宿主细胞，即贴附至宿主细胞并将它们的遗传物质释放到宿主细胞中。然而，它们是复制-缺陷型的，即，由于编码病毒蛋白，如gp蛋白的开放阅读框架(orf)的缺失或功能性失活，因此所述沙粒病毒不能在非补体细胞中产生进一步的感染性子代颗粒。作为替代，所述orf被感兴趣的抗原的核苷酸序列替代。在flatz等人,2010中，作者使用感染性、复制-缺陷型沙粒病毒作为载体来表达ova(siinfekl表位)。在flatz等人,2012中，作者使用复制缺陷型沙粒病毒作为载体来表达hiv/sivenv。2.2表达感兴趣的基因的重组lcmv最近，已表明可以将感染性的沙粒病毒颗粒被工程化以包含具有在感染的细胞中扩增和表达其遗传物质的能力，但是不能在正常、未基因工程的细胞(即感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒)中产生进一步的子代的基因组(国际专利公开no.：wo2009/083210a1和国际公开no.：wo2014/140301a1)。最近公开的国际专利公开no.：wo2016/075250a1显示可以将沙粒病毒基因组节段被工程化以形成具有其开放阅读框架(“orf”)重排的三-节段沙粒病毒颗粒，其中所述沙粒病毒基因组节段在所述orf的野生型位置以外的位置具有病毒orf，其包含不会重组成有复制能力的二-节段沙粒病毒颗粒的一个l节段和两个s节段或者两个l节段和一个s节段。2.3癌症和化疗化学治疗广泛用于治疗癌症，并且通常在直接杀死肿瘤细胞中起作用，如通过干扰dna合成和复制。然而，化学治疗还已知具有严重的副作用并且并不总是有效的。需要更好的治疗选择来更有效地治疗癌症。3.发明概述本文提供了使用包含编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒颗粒治疗肿瘤病的方法和组合物。本文还提供了使用化疗剂治疗肿瘤病的方法和组合物。因此，在某些实施方式中，本文提供了使用包含编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒颗粒和化疗剂治疗肿瘤病的方法。另外，在某些实施方式中，本文提供了含有包含编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒颗粒和化疗剂的组合物。在某些实施方式中，本文所提供的沙粒病毒颗粒是感染性的复制缺陷型沙粒病毒颗粒。在某些实施方式中，将本文所提供的沙粒病毒颗粒被工程化以包含具有编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列和位于野生型orf位置以外的位置的至少一种沙粒病毒开放阅读框架(“orf”)的沙粒病毒基因组节段。在某些实施方式中，本文所提供的沙粒病毒颗粒是感染性的复制缺陷型沙粒病毒颗粒。在其它实施方式中，本文所提供的沙粒病毒颗粒是三-节段沙粒病毒颗粒，它可以是复制-缺陷型或有复制能力的。在其它实施方式中，当增殖时，本文所提供的三-节段沙粒病毒颗粒不会产生有复制能力的二-节段病毒颗粒。3.1感染性的复制缺陷型沙粒病毒颗粒在某些实施方式中，本文所提供的沙粒病毒颗粒是感染性的，即它能够使其遗传物质进入或注入到宿主细胞中。在某些更具体的实施方式中，如本文所提供的沙粒病毒颗粒是感染性的，即能够使其遗传物质进入或注入到宿主细胞中，然后使其遗传信息在所述宿主细胞内部扩增和表达。在某些实施方式中，将本文所提供的沙粒病毒颗粒被工程化为感染性的复制-缺陷型沙粒病毒颗粒，即它含有能够使其遗传信息在感染的细胞中扩增和表达，但是不能在非补体细胞中产生进一步感染性的子代颗粒的基因组。在某些实施方式中，本文提供了被工程化的沙粒病毒颗粒，其含有包含下列的基因组：编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列；和使其遗传信息在感染的细胞中扩增和表达，但是不能在非补体细胞中产生进一步感染性的子代颗粒的能力。在某些实施方式中，所述沙粒病毒颗粒是感染性的和复制缺陷型的。通过包含在本文所提供的沙粒病毒颗粒内的所述核苷酸序列所编码的肿瘤抗原或肿瘤相关抗原可以是一种或多种肿瘤抗原或肿瘤相关抗原，其选自：致癌病毒抗原、癌症-睾丸抗原、癌胚抗原、组织分化抗原、突变蛋白抗原、脂肪分化相关蛋白、aim-2、aldh1ai、bclx(l)、bing-4、calca、cd45、cpsf、细胞周期蛋白d1、dkki、enah(hmcna)、ga733(epcam)、epha3、ezh2、fgf5、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、g250/mn/caix、her-2/neu、ido1、igf2b3、il13rα2、小肠羧基酯酶、甲胎蛋白、激肽释放酶4、kif20a、lengsin、m-csf、mcsp、mdm-2、meloe、mmp-2、mmp-7、mucl、muc5ac、p53(非突变体)、pax5、pbf、prame、psma、rage、rage-1、rgs5、rhoc、rnf43、ru2as、分离蛋白1、sox1o、steap1(前列腺6次跨膜上皮抗原1)、存活素、端粒酶、vegf、wt1、egf-r、cea、cd20、cd33、cd52、melana/mart1、mart2、ny-eso-1、p53、magea1、magea3、mage-4、mage-5、mage-6、cdk4、α-辅肌动蛋白-4、artc1、bcr-abl、bcr-abl融合蛋白(b3a2)、b-raf、casp-5、casp-8、β-联蛋白、cdc27、cdk4、cdkn2a、clpp、coa-1、dek-can融合蛋白、eftud2、延伸因子2、etv6-aml、etv6-aml1融合蛋白、flt3-itd、fnl、gpnmb、ldlr-岩藻糖转移酶as融合蛋白、nfyc、ogt、os-9、pml-rarα融合蛋白、prdx5、ptprk、h-ras、k-ras(v-ki-ras2kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因)、n-ras、rbaf600、sirt2、snrpdl、ssx、ssx2、syt-ssxl或-ssx2融合蛋白、tgf-βrii、磷酸丙糖异构化酶、ormdm-2、lmp2、hpve6/e7、egfrviii(表皮生长因子变体iii)，个体遗传型，gd2，神经节糖苷g2)、ras-突变体、p53(突变体)、蛋白酶3(pr1)、酪氨酸酶、psa、htert、肉瘤易位断裂点、epha2、前列腺酸性磷酸酶pap、neo-pap、ml-iap、afp、erg(tmprss2ets融合基因)、na17、pax3、alk、雄激素受体、细胞周期蛋白b1、聚唾液酸、mycn、trp2、trp2-int2、gd3、岩藻糖基gm1、间皮素、psca、sle(a)、cyp1b1、plac1、gm3、boris、tn、globoh、ny-br-1、sart3、stn、碳酸酐酶ix、oy-tes1、精液蛋白17、lck、高分子量黑素瘤-相关抗原(hmwmaa)、akap-4、ssx2、xage1、b7h3、豆荚蛋白、tie2、page4、vegfr2、mad-ct-1、fap、pdgfr-β、mad-ct-2、for-相关抗原1、trp-1、gp100、ca-125、ca19-9、钙网膜蛋白、上皮细胞膜抗原(ema)、上皮细胞瘤抗原(eta)、cd19、cd34、cd99、cd117、嗜铬粒蛋白、细胞角蛋白、肌间线蛋白、胶质原纤维酸性蛋白(gfap)、巨囊性病液体蛋白(gcdfp-15)、hmb-45抗原、myo-d1、肌肉-特异性肌动蛋白(msa)、神经丝、神经元-特异性烯醇酶(nse)、胎盘碱性磷酸酶、突触素、甲状球蛋白、甲状腺转录因子-1、丙酮酸激酶m2型同工酶的二聚体形式(肿瘤m2-pk)、bagebage-1、cage、ctage、fate、gage、gage-1、gage-2、gage-3、gage-4、gage-5、gage-6、gage-7、hca661、hom-tes-85、magea、mageb、magec、na88、ny-sar-35、spanxb1、spa17、ssx、sycp1、tpte、碳水化合物/神经节糖苷gm2(癌胚抗原-免疫原性-1ofa-i-1)、gm3、ca15-3(ca27.29\bcaa)、ca195、ca242、ca50、cam43、cea、ebna、ef2、埃-巴二氏病毒抗原、hla-a2、hla-a11、hsp70-2、kiaao205、mum-1、mum-2、mum-3、i类肌球蛋白、gntv、herv-k-mel、lage-1、lage-2、(精液蛋白)sp17、scp-1、p15(58)、hom/mel-40、e2a-prl、h4-ret、igh-igk、myl-rar、tsp-180、p185erbb2、p180erbb-3、c-met、nm-23h1、tag-72、tag-72-4、ca-72-4、cam17.1、numa、13-联蛋白、p16、tage、ct7、43-9f、5t4、791tgp72、13hcg、bca225、btaa、cd68\kp1、co-029、htgp-175、m344、mg7-ag、mov18、nb\70k、ny-co-1、rcas1、sdccag16、ta-90、taal6、tlp、tps、cd22、cd27、cd30、cd70、前列腺特异性蛋白、tarp(t细胞受体γ可变阅读框架蛋白)、trp-p8、整合素αvβ3(cd61)、催乳激素或者ral-b、cd123、cll-1、cd38、cs-1、cd138和ror1。在某些实施方式中，所述核苷酸序列编码2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段。在某些实施方式中，通过包含在沙粒病毒内的核苷酸序列编码本文所提供的肿瘤抗原或肿瘤相关抗原的抗原性片段。在某些实施方式中，本文所提供的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒包含至少一个至少部分除去或功能上失活的沙粒病毒开放阅读框架(“orf”)。所述orf可以编码沙粒病毒颗粒的糖蛋白(“gp”)、核蛋白(“np”)、基质蛋白z(“z蛋白”)或者rna依赖的rna聚合酶l(“l蛋白”)。另外，在某些实施方式中，除去编码gp、np、z蛋白或l蛋白的至少一个orf或者用本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列替换。在某些实施方式中，仅除去编码gp、np、z蛋白和l蛋白的四个orf中的一个。因此，在某些实施方式中，除去编码gp的orf。在某些实施方式中，除去编码np的orf。在某些实施方式中，除去编码z蛋白的orf。在某些实施方式中，除去编码l蛋白的orf。在某些实施方式中，如本文所提供的包含编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒还包含编码至少一种免疫调节肽、多肽或蛋白质的至少一种核苷酸序列。在某些实施方式中，所述免疫调节肽、多肽或蛋白是钙网蛋白(crt)或其片段；泛素或其片段；粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)或其片段；恒定链(cd74)或其抗原性片段；结核分枝杆菌热休克蛋白70或其抗原性片段；单纯疱疹病毒1蛋白vp22或其抗原性片段；cd40配体或其抗原性片段；或者fms-相关酪氨酸激酶3(flt3)配体或其抗原性片段。在某些实施方式中，本文所提供的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒来源于特定沙粒病毒种，如淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(“lcmv”)、胡宁病毒(“junv”)或皮秦德病毒(“picv”)。换言之，编码感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒的基因组信息来源于沙粒病毒的特定种。因此，在某些实施方式中，所述感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒来源于lcmv。在其它实施方式中，所述感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒来源于junv。在其它实施方式中，所述感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒来源于picv。另外，在具体的实施方式中，所述lcmv是mp株、we株、armstrong株或armstrong克隆13株。在其它具体的实施方式中，所述junv是junv疫苗candid#1株或者junv疫苗xj克隆3株。在其它具体的实施方式中，所述picv是munchiquecoan4763分离株p18或者p2株。(a)用于治疗肿瘤病的方法在某些实施方式中，本文提供了治疗对象中肿瘤病的方法。这些方法可以包括与本文所提供的化疗剂组合，向对其有需要的对象施用本文所提供的沙粒病毒颗粒。在某些实施方式中，在所述方法中使用的沙粒病毒颗粒是感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒。因此，在某些实施方式中，将在所述方法中使用的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒被工程化以包含含有下列的基因组：(1)编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列；和(2)使其遗传信息在感染的细胞中扩增和表达，但是不能在非补体细胞中产生进一步感染性的子代颗粒的能力。在某些实施方式中，通过包含在本文所提供的沙粒病毒颗粒内的所述核苷酸序列所编码的肿瘤抗原或肿瘤相关抗原可以是一种或多种肿瘤抗原或肿瘤相关抗原，其选自：致癌病毒抗原、癌症-睾丸抗原、癌胚抗原、组织分化抗原、突变蛋白抗原、脂肪分化相关蛋白、aim-2、aldh1ai、bclx(l)、bing-4、calca、cd45、cpsf、细胞周期蛋白d1、dkki、enah(hmcna)、ga733(epcam)、epha3、ezh2、fgf5、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、g250/mn/caix、her-2/neu、ido1、igf2b3、il13rα2、小肠羧基酯酶、甲胎蛋白、激肽释放酶4、kif20a、lengsin、m-csf、mcsp、mdm-2、meloe、mmp-2、mmp-7、mucl、muc5ac、p53(非突变体)、pax5、pbf、prame、psma、rage、rage-1、rgs5、rhoc、rnf43、ru2as、分离蛋白1、sox1o、steap1(前列腺6次跨膜上皮抗原1)、存活素、端粒酶、vegf、wt1、egf-r、cea、cd20、cd33、cd52、melana/mart1、mart2、ny-eso-1、p53、magea1、magea3、mage-4、mage-5、mage-6、cdk4、α-辅肌动蛋白-4、artc1、bcr-abl、bcr-abl融合蛋白(b3a2)、b-raf、casp-5、casp-8、β-联蛋白、cdc27、cdk4、cdkn2a、clpp、coa-1、dek-can融合蛋白、eftud2、延伸因子2、etv6-aml、etv6-aml1融合蛋白、flt3-itd、fnl、gpnmb、ldlr-岩藻糖转移酶as融合蛋白、nfyc、ogt、os-9、pml-rarα融合蛋白、prdx5、ptprk、h-ras、k-ras(v-ki-ras2kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因)、n-ras、rbaf600、sirt2、snrpdl、ssx、ssx2、syt-ssxl或-ssx2融合蛋白、tgf-βrii、磷酸丙糖异构化酶、ormdm-2、lmp2、hpve6/e7、egfrviii(表皮生长因子变体iii)，个体遗传型，gd2，神经节糖苷g2)、ras-突变体、p53(突变体)、蛋白酶3(pr1)、酪氨酸酶、psa、htert、肉瘤易位断裂点、epha2、前列腺酸性磷酸酶pap、neo-pap、ml-iap、afp、erg(tmprss2ets融合基因)、na17、pax3、alk、雄激素受体、细胞周期蛋白b1、聚唾液酸、mycn、trp2、trp2-int2、gd3、岩藻糖基gm1、间皮素、psca、sle(a)、cyp1b1、plac1、gm3、boris、tn、globoh、ny-br-1、sart3、stn、碳酸酐酶ix、oy-tes1、精液蛋白17、lck、高分子量黑素瘤-相关抗原(hmwmaa)、akap-4、ssx2、xage1、b7h3、豆荚蛋白、tie2、page4、vegfr2、mad-ct-1、fap、pdgfr-β、mad-ct-2、for-相关抗原1、trp-1、gp100、ca-125、ca19-9、钙网膜蛋白、上皮细胞膜抗原(ema)、上皮细胞瘤抗原(eta)、cd19、cd34、cd99、cd117、嗜铬粒蛋白、细胞角蛋白、肌间线蛋白、胶质原纤维酸性蛋白(gfap)、巨囊性病液体蛋白(gcdfp-15)、hmb-45抗原、myo-d1、肌肉-特异性肌动蛋白(msa)、神经丝、神经元-特异性烯醇酶(nse)、胎盘碱性磷酸酶、突触素、甲状球蛋白、甲状腺转录因子-1、丙酮酸激酶m2型同工酶的二聚体形式(肿瘤m2-pk)、bagebage-1、cage、ctage、fate、gage、gage-1、gage-2、gage-3、gage-4、gage-5、gage-6、gage-7、hca661、hom-tes-85、magea、mageb、magec、na88、ny-sar-35、spanxb1、spa17、ssx、sycp1、tpte、碳水化合物/神经节糖苷gm2(癌胚抗原-免疫原性-1ofa-i-1)、gm3、ca15-3(ca27.29\bcaa)、ca195、ca242、ca50、cam43、cea、ebna、ef2、埃-巴二氏病毒抗原、hla-a2、hla-a11、hsp70-2、kiaao205、mum-1、mum-2、mum-3、i类肌球蛋白、gntv、herv-k-mel、lage-1、lage-2、(精液蛋白)sp17、scp-1、p15(58)、hom/mel-40、e2a-prl、h4-ret、igh-igk、myl-rar、tsp-180、p185erbb2、p180erbb-3、c-met、nm-23h1、tag-72、tag-72-4、ca-72-4、cam17.1、numa、13-联蛋白、p16、tage、ct7、43-9f、5t4、791tgp72、13hcg、bca225、btaa、cd68\kp1、co-029、htgp-175、m344、mg7-ag、mov18、nb\70k、ny-co-1、rcas1、sdccag16、ta-90、taal6、tlp、tps、cd22、cd27、cd30、cd70、前列腺特异性蛋白、tarp(t细胞受体γ可变阅读框架蛋白)、trp-p8、整合素αvβ3(cd61)、催乳激素或者ral-b、cd123、cll-1、cd38、cs-1、cd138和ror1。在某些实施方式中，所述核苷酸序列编码2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段。在某些实施方式中，通过包含在沙粒病毒内的核苷酸序列编码本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原的抗原性片段。在具体的实施方式中，所述肿瘤抗原选自gp100、trp1、trp2及其组合。在具体的实施方式中，所述肿瘤抗原是gp100。在具体的实施方式中，所述肿瘤抗原是trp1。在具体的实施方式中，所述肿瘤抗原是trp2。在某些实施方式中，本文提供了通过与复制-缺陷型沙粒病毒颗粒组合施用化疗剂来治疗对象中肿瘤病的方法。在某些实施方式中，所述化疗剂是烷化剂(例如，环磷酰胺)、铂-基治疗剂、抗代谢剂、局部异构酶抑制剂、细胞毒抗生素、插入剂、有丝分裂抑制剂、紫杉烷或其两种或更多种的组合。在某些实施方式中，所述烷化剂是氮芥、亚硝基脲、烷基磺酸盐、非经典烷化剂或者三氮烯。在某些实施方式中，所述化疗剂包括以下中的一个或多个：环磷酰胺、塞替派、氮芥(氮芥/氮芥)、乌拉莫司汀、美法仑、苯丁酸氮芥、异环磷酰胺、萘氮芥、胆磷酰胺、雌莫司汀、新恩比星、胆甾醇对苯乙酸氮芥、泼尼莫司汀、曲磷胺、乌拉莫司汀、苯达莫司汀、白消安、英丙舒凡、哌泊舒凡、卡莫司汀、洛莫司汀、吡葡亚硝脲、福莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀、链佐星、顺铂、卡铂、奈达铂、奥沙利铂、沙铂、四硝酸三铂、丙卡巴肼、六甲蜜胺、达卡巴嗪、米托唑胺、替莫唑胺、紫杉醇、多西他赛、长春碱、长春新碱、长春瑞滨、卡巴他赛、更生霉素(放线菌素d)、卡里奇霉素(calicheamicin)、达内霉素(dynemicin)、安吖啶、多柔比星(doxarubicin)、柔红霉素、表柔比星、米托蒽醌、伊达比星、吡柔比星、苯并多巴、卡波醌、米特多巴(meturedopa)、尤利多巴(uredopa)、六甲蜜胺、曲他胺、三乙烯磷酰胺、三乙烯硫代磷酰胺、三羟甲基蜜胺(trimethylolomelamine)、布拉他辛(bullatacin)、布拉它辛酮(bullatacinone)、喜树碱、拓扑替康、苔藓抑素、卡利斯汀(callystatin)、cc-1065、阿多来新、卡折来新、比折来新、念珠藻素、尾海兔素、倍癌毒素、kw-2189、cb1-tm1、艾榴塞洛素、水鬼蕉碱(pancratistatin)、匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)、海绵抑制素、氯屈膦酸、埃斯培拉霉素(esperamicin)、新制癌菌素发色团、阿克拉霉素(aclacinomysin)、安曲霉素、偶氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素c、卡柔比星(carabicin)、洋红霉素、嗜癌菌素、色霉素(chromomycinis)、地托比星、6-重氮-5-氧-l-正亮氨酸、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素、麦考酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素(potfiromycin)、嘌罗霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链佐星、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶(5-fu)、二甲叶酸、蝶罗呤、三甲曲沙、氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫唑嘌呤胺、硫鸟嘌呤、安西他滨、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氮尿苷、卡普睾酮、屈他雄酮丙酸酯、环硫雄醇、美雄烷、睾内酪、米托坦、曲洛司坦、亚叶酸、醋葡醛内酯、醛磷酰胺糖苷、氨基乙酰丙酸、恩尿嘧啶、贝斯布西(bestrabucil)、比生群、依达曲沙(edatraxate)、地磷酰胺(defofamine)、秋水仙胺、地吖醌、依氟鸟氨酸、依利醋铵、依托格鲁、硝酸镓、羟基脲、蘑菇多糖、氯尼达明(lonidainine)、美登素、安丝菌素、米托胍腙、莫比达摩(mopidanmol)、二胺硝吖啶(nitraerine)、喷司他丁、蛋氨氮芥(phenamet)、吡柔比星、洛索蒽醌、鬼臼酸、2-乙酰肼、psk多糖复合物、雷佐生、根霉素、西佐喃、锗螺胺、细交链孢菌酮酸、三亚胺醌、2,2',2”-三氯三乙胺；t-2毒素、疣孢霉素a(verracurina)、杆孢菌素a和蛇形菌素(anguidine)、氨基甲酸乙酯、长春地辛、甘露莫司汀、二溴甘露醇、二溴卫矛醇、哌泊溴烷、加西托星(gacytosine)、阿糖胞苷(“ara-c”)、依托泊苷(vp-16)、长春瑞滨、诺凡特龙(novantrone)、替尼泊苷、依达曲沙、氨基蝶呤、希罗达、伊班膦酸、伊立替康(例如、cpt-11)、局部异构酶抑制剂rfs2000、二氟甲基鸟氨酸(dmfo)、视黄酸、卡培他滨、普利霉素(plicomycin)、吉西他滨、长春瑞滨、反铂，以及任何上述化合物的药物可用的盐、酸或衍生物。在具体的实施方式中，所述化疗剂包括环磷酰胺。在某些实施方式中，所述氮芥是氮芥、环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、异环磷酰胺或白消安。在某些实施方式中，所述化疗剂使dna烷基化。在某些实施方式中，所述化疗剂使dna烷基化，从而导致形成链间交联(“icls”)。在某些实施方式中，本文提供了通过与复制-缺陷型沙粒病毒颗粒和抑制、降低或干扰阴性检查点调节因子活性的免疫检查点抑制剂组合施用化疗剂来治疗对象中肿瘤病的方法。在某些实施方式中，所述阴性检查点调节因子选自细胞毒t-淋巴细胞抗原-4(ctla-4)、cd80、cd86、细胞程序死亡1(pd-1)、细胞程序死亡配体1(pd-l1)、细胞程序死亡配体2(pd-l2)、淋巴细胞活化基因-3(lag-3；也称为cd223)、半乳凝素-3、b和t淋巴细胞衰减因子(btla)、t细胞膜蛋白3(tim3)、半乳凝素-9(gal9)、b7-h1、b7-h3、b7-h4、具有ig和itim域的t细胞免疫受体(tigit/vstm3/wucam/vsig9)、t细胞激活的v-域ig抑制剂(vista)、糖皮质激素-诱导的肿瘤坏死因子受体-相关(gitr)蛋白、疱疹病毒进入介导子(hvem)、ox40、cd27、cd28、cd137.cgen-15001t、cgen-15022、cgen-15027、cgen-15049、cgen-15052和cgen-15092。在某些实施方式中，所述免疫检查点抑制剂是抗pd-1抗体。在某些实施方式中，使用本文所提供的方法治疗的对象患有肿瘤病、对肿瘤病敏感或者具有患肿瘤病的风险。因此，在一些实施方式中，所述对象患有肿瘤病。在一些实施方式中，所述对象对肿瘤病敏感。在一些实施方式中，所述对象具有患肿瘤病的风险。在某些实施方式中，通过本文所提供的方法可治疗的对象的肿瘤病选自急性淋巴母细胞性白血病；急性淋巴细胞性淋巴瘤；急性淋巴细胞白血病；急性髓性白血病；急性髓细胞性白血病(成人/儿童)；肾上腺皮质癌；aids-相关癌症；aids-相关淋巴瘤；肛门癌；阑尾癌；星形细胞瘤；非典型畸胎样/横纹样瘤；基底细胞癌；胆管癌，肝外(肝胆管型肝癌)；膀胱癌；骨骨肉瘤/恶性纤维组织细胞瘤；脑癌(成人/儿童)；脑肿瘤，小脑星形细胞瘤(成人/儿童)；脑肿瘤，大脑星形细胞瘤/恶性神经胶质瘤脑肿瘤；脑肿瘤，室管膜瘤；脑肿瘤，成神经管细胞瘤；脑肿瘤，幕上原始神经外胚层瘤；脑肿瘤，视觉传导路和下丘脑神经胶质瘤；脑干神经胶质瘤；乳腺癌；支气管腺瘤/类癌；支气管肿瘤；伯基特淋巴瘤；儿童癌；胃肠类癌肿瘤；类癌瘤；成人癌瘤，未知原发位点；原发未知的癌瘤；中枢神经系统胚胎性瘤；中枢神经系统淋巴瘤，原发；宫颈癌；儿童肾上腺皮质癌；儿童癌症；儿童大脑星形细胞瘤；脊索瘤，儿童；慢性淋巴细胞性白血病；慢性粒性白血病；慢性粒细胞性白血病；慢性脊髓增生病；结肠癌；结肠直肠癌；颅咽管瘤；皮肤t-细胞淋巴瘤；促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤；肺气肿；子宫内膜癌；成室管膜细胞瘤；室管膜瘤；食道癌；尤文氏家族肿瘤中的尤因氏肉瘤；颅外生殖细胞肿瘤；性腺外生殖细胞肿瘤；肝外胆管癌；胆囊癌；胃(胃)癌；胃类癌瘤；胃肠类癌肿瘤；胃肠道间质瘤；生殖细胞肿瘤：颅外、性腺外或卵巢妊娠滋养细胞肿瘤；妊娠滋养细胞肿瘤，未知原发位点；神经胶质瘤；脑干神经胶质瘤；神经胶质瘤，儿童视觉传导路和下丘脑；毛细胞白血病；头颈癌；心癌；肝细胞(肝)癌；霍奇金淋巴瘤；舌癌；下丘脑和视觉传导路神经胶质瘤；眼内黑素瘤；胰岛细胞癌(内分泌胰腺)；卡波西肉瘤；肾癌(肾细胞癌)；郎格罕细胞组织细胞增生症；喉癌；唇和口腔癌；脂肪肉瘤；肝癌(原发)；肺癌，非小细胞；肺癌，小细胞；淋巴瘤，原发性中枢神经系统；瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症；男性乳腺癌；恶性骨纤维组织细胞瘤/骨肉瘤；成神经管细胞瘤；髓上皮瘤；黑素瘤；黑素瘤，眼内(眼)；梅克尔细胞癌；梅克尔细胞皮肤癌；间皮瘤；间皮瘤，成人恶性；转移性颈鳞癌，原发位点隐匿；口癌；多发性内分泌瘤综合征；多发性骨髓瘤/浆细胞瘤；阿利贝尔氏病，脊髓发育不良综合征；脊髓发育不良/骨髓增殖性疾病；粒细胞性白血病，慢性；骨髓性白血病，成人急性；骨髓性白血病，儿童急性；骨髓瘤，多发性(骨-骨髓癌)；脊髓增生病，慢性；鼻腔和鼻窦癌；鼻咽癌；成神经细胞瘤，非小细胞肺癌；非霍奇金淋巴瘤；寡枝神经胶质细胞瘤；口腔癌；口腔癌；口咽癌；骨肉瘤/恶性骨纤维组织细胞瘤；卵巢癌；卵巢上皮癌(表面上皮-间质肿瘤)；卵巢生殖细胞肿瘤；卵巢低度恶性潜能肿瘤；胰腺癌；胰腺癌，胰岛细胞；乳头状瘤病；鼻窦和鼻腔癌；甲状旁腺癌；阴茎癌；咽癌；嗜铬细胞瘤；松果体星形细胞瘤；松果体胚组织瘤；中分化松果体实质细胞瘤；成松果体细胞瘤和幕上原始神经外胚层瘤；垂体瘤；垂体腺瘤；浆细胞瘤/多发性骨髓瘤；胸膜肺胚细胞瘤；原发性中枢神经系统淋巴瘤；前列腺癌；直肠癌；肾细胞癌(肾癌)；肾盂和输尿管，移行细胞癌；涉及染色体15上的nut基因的呼吸道癌；成视网膜细胞瘤；横纹肌肉瘤，儿童；唾液腺癌；肉瘤，尤文氏家族肿瘤；塞扎里氏综合征；皮肤癌(黑素瘤)；皮肤癌(非黑素瘤)；小细胞肺癌；小肠癌软组织肉瘤；软组织肉瘤；脊髓瘤；鳞状细胞癌；颈鳞癌，原发位点隐匿，转移性；胃(胃)癌；幕上原始神经外胚层瘤；t细胞淋巴瘤，皮肤(阿利贝尔氏病和塞扎里氏综合征)；睾丸癌；咽喉癌；胸腺瘤；胸腺瘤和胸腺癌；甲状腺癌；甲状腺癌，儿童；肾盂和输尿管的移行细胞癌；尿道癌；子宫癌，子宫内膜；子宫肉瘤；阴道癌；外阴癌；和胚胎性癌肉瘤。在某些实施方式中，通过本文所提供的方法可治疗的对象的肿瘤病是黑素瘤。在具体的实施方式中，所述肿瘤病是黑素瘤并且所述化疗剂是环磷酰胺。在具体的实施方式中，所述肿瘤病是黑素瘤，所述肿瘤抗原选自gp100、trp1、trp2及其组合，并且所述化疗剂是环磷酰胺。在具体的实施方式中，所述肿瘤病是黑素瘤，所述肿瘤抗原是gp100，并且所述化疗剂是环磷酰胺。在具体的实施方式中，所述肿瘤病是黑素瘤，所述肿瘤抗原是trp2，并且所述化疗剂是环磷酰胺。在具体的实施方式中，所述肿瘤病是黑素瘤，所述肿瘤抗原是trp1，并且所述化疗剂是环磷酰胺。在更具体的实施方式中，所述肿瘤病是黑素瘤，所述肿瘤抗原是trp1，所述化疗剂是环磷酰胺，并且所述方法还包括施用抗pd-1抗体。在某些实施方式中，可以以多种不同组合施用在本文所提供的方法中使用的本文所提供的沙粒病毒颗粒和本文所提供的化疗剂。因此，在某些实施方式中，所述沙粒病毒颗粒和所述化疗剂是同时共施用的。在其它实施方式中，在施用所述化疗剂之前，施用所述沙粒病毒颗粒。在其它实施方式中，在施用所述化疗剂之后，施用所述沙粒病毒颗粒。所述沙粒病毒颗粒和所述化疗剂的施用之间的间隔是数小时、数日、数周或数月。因此，在一些实施方式中，间隔为约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约1周、约8天、约9天、约10天、约11天、约12天、约13天、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约9周、约10周、约11周、约12周、约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月或更长。在某些实施方式中，本文所提供的方法包括以治疗有效量施用本文所提供的沙粒病毒颗粒和本文所提供的化疗剂。因此，在某些实施方式中，本文提供了用于治疗对象中肿瘤病的方法，其包括向对其有需要的对象施用治疗有效量的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒和治疗有效量的化疗剂，其中所述沙粒病毒颗粒被工程化以包含含有下列的基因组：编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列；和使其遗传信息在感染的细胞中扩增和表达，但是不能在非补体细胞中产生进一步感染性的子代颗粒的能力。在某些实施方式中，本文提供了治疗对象中肿瘤病的方法，其包括向所述对象施用两种或更多种表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒。在更具体的实施方式中，本文所提供的方法包括向所述对象施用第一感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒，和经过一段时间以后，向所述对象施用第二感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒。在另一个实施方式中，所述第一感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒和所述第二感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒来源于不同的沙粒病毒种和/或包含编码不同的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。在某些实施方式中，与个性化医学组合使用本文所提供的方法和组合物。个性化医学通过使用来自患者的唯一遗传和/或表观遗传谱的信息来预测患者对不同疗法的反应并鉴别哪种疗法更可能有效来设法使患者受益。可以与本文所提供的方法和组合物组合使用以获得患者唯一的遗传和/或表观遗传谱的技术包括(但不限于)基因组测序、rna测序、基因表达分析和肿瘤抗原(例如，新抗原)、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的鉴别。在某些实施方式中，基于患者的遗传谱进行用于在本文所提供的方法和组合物中使用的沙粒病毒肿瘤抗原或肿瘤相关抗原的选择。在某些实施方式中，基于肿瘤或肿瘤细胞的遗传谱进行用于在本文所提供的方法和组合物中使用的沙粒病毒肿瘤抗原或肿瘤相关抗原的选择。在某些实施方式中，基于肿瘤或肿瘤细胞的遗传谱来进行用于在本文所提供的方法和组合物中使用的化疗剂的选择。在某些实施方式中，基于肿瘤或肿瘤细胞的遗传谱进行用于在本文所提供的方法和组合物中使用的沙粒病毒肿瘤抗原或肿瘤相关抗原的选择和化疗剂的选择。(b)药物组合物和试剂盒在某些实施方式中，本文提供了组合物，例如，药物、免疫原性或疫苗组合物，其包含本文所提供的沙粒病毒颗粒、本文所提供的化疗剂和药物可用的载体。因此，在一些实施方式中，本文提供了包含如本文所提供的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒、如本文所提供的化疗剂和药物可用的载体的药物组合物。在具体某些实施方式中，将所述沙粒病毒颗粒被工程化以包含含有下列基因组：(1)编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列；和(2)使其遗传信息在感染的细胞中扩增和表达，但是不能在非补体细胞中产生进一步感染性的子代颗粒的能力。在某些实施方式中，通过包含在本文所提供的沙粒病毒颗粒内的所述核苷酸序列所编码的肿瘤抗原或肿瘤相关抗原可以是一种或多种肿瘤抗原或肿瘤相关抗原，其选自：致癌病毒抗原、癌症-睾丸抗原、癌胚抗原、组织分化抗原、突变蛋白抗原、脂肪分化相关蛋白、aim-2、aldh1ai、bclx(l)、bing-4、calca、cd45、cpsf、细胞周期蛋白d1、dkki、enah(hmcna)、ga733(epcam)、epha3、ezh2、fgf5、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、g250/mn/caix、her-2/neu、ido1、igf2b3、il13rα2、小肠羧基酯酶、甲胎蛋白、激肽释放酶4、kif20a、lengsin、m-csf、mcsp、mdm-2、meloe、mmp-2、mmp-7、mucl、muc5ac、p53(非突变体)、pax5、pbf、prame、psma、rage、rage-1、rgs5、rhoc、rnf43、ru2as、分离蛋白1、sox1o、steap1(前列腺6次跨膜上皮抗原1)、存活素、端粒酶、vegf、wt1、egf-r、cea、cd20、cd33、cd52、melana/mart1、mart2、ny-eso-1、p53、magea1、magea3、mage-4、mage-5、mage-6、cdk4、α-辅肌动蛋白-4、artc1、bcr-abl、bcr-abl融合蛋白(b3a2)、b-raf、casp-5、casp-8、β-联蛋白、cdc27、cdk4、cdkn2a、clpp、coa-1、dek-can融合蛋白、eftud2、延伸因子2、etv6-aml、etv6-aml1融合蛋白、flt3-itd、fnl、gpnmb、ldlr-岩藻糖转移酶as融合蛋白、nfyc、ogt、os-9、pml-rarα融合蛋白、prdx5、ptprk、h-ras、k-ras(v-ki-ras2kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因)、n-ras、rbaf600、sirt2、snrpdl、ssx、ssx2、syt-ssxl或-ssx2融合蛋白、tgf-βrii、磷酸丙糖异构化酶、ormdm-2、lmp2、hpve6/e7、egfrviii(表皮生长因子变体iii)，个体遗传型，gd2，神经节糖苷g2)、ras-突变体、p53(突变体)、蛋白酶3(pr1)、酪氨酸酶、psa、htert、肉瘤易位断裂点、epha2、前列腺酸性磷酸酶pap、neo-pap、ml-iap、afp、erg(tmprss2ets融合基因)、na17、pax3、alk、雄激素受体、细胞周期蛋白b1、聚唾液酸、mycn、trp2、trp2-int2、gd3、岩藻糖基gm1、间皮素、psca、sle(a)、cyp1b1、plac1、gm3、boris、tn、globoh、ny-br-1、sart3、stn、碳酸酐酶ix、oy-tes1、精液蛋白17、lck、高分子量黑素瘤-相关抗原(hmwmaa)、akap-4、ssx2、xage1、b7h3、豆荚蛋白、tie2、page4、vegfr2、mad-ct-1、fap、pdgfr-β、mad-ct-2、for-相关抗原1、trp-1、gp100、ca-125、ca19-9、钙网膜蛋白、上皮细胞膜抗原(ema)、上皮细胞瘤抗原(eta)、cd19、cd34、cd99、cd117、嗜铬粒蛋白、细胞角蛋白、肌间线蛋白、胶质原纤维酸性蛋白(gfap)、巨囊性病液体蛋白(gcdfp-15)、hmb-45抗原、myo-d1、肌肉-特异性肌动蛋白(msa)、神经丝、神经元-特异性烯醇酶(nse)、胎盘碱性磷酸酶、突触素、甲状球蛋白、甲状腺转录因子-1、丙酮酸激酶m2型同工酶的二聚体形式(肿瘤m2-pk)、bagebage-1、cage、ctage、fate、gage、gage-1、gage-2、gage-3、gage-4、gage-5、gage-6、gage-7、hca661、hom-tes-85、magea、mageb、magec、na88、ny-sar-35、spanxb1、spa17、ssx、sycp1、tpte、碳水化合物/神经节糖苷gm2(癌胚抗原-免疫原性-1ofa-i-1)、gm3、ca15-3(ca27.29\bcaa)、ca195、ca242、ca50、cam43、cea、ebna、ef2、埃-巴二氏病毒抗原、hla-a2、hla-a11、hsp70-2、kiaao205、mum-1、mum-2、mum-3、i类肌球蛋白、gntv、herv-k-mel、lage-1、lage-2、(精液蛋白)sp17、scp-1、p15(58)、hom/mel-40、e2a-prl、h4-ret、igh-igk、myl-rar、tsp-180、p185erbb2、p180erbb-3、c-met、nm-23h1、tag-72、tag-72-4、ca-72-4、cam17.1、numa、13-联蛋白、p16、tage、ct7、43-9f、5t4、791tgp72、13hcg、bca225、btaa、cd68\kp1、co-029、htgp-175、m344、mg7-ag、mov18、nb\70k、ny-co-1、rcas1、sdccag16、ta-90、taal6、tlp、tps、cd22、cd27、cd30、cd70、前列腺特异性蛋白、tarp(t细胞受体γ可变阅读框架蛋白)、trp-p8、整合素αvβ3(cd61)、催乳激素或者ral-b、cd123、cll-1、cd38、cs-1、cd138和ror1。在某些实施方式中，所述核苷酸序列编码2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段。在某些实施方式中，通过包含在沙粒病毒内的核苷酸序列编码本文所提供的肿瘤抗原或肿瘤相关抗原的抗原性片段。在某些实施方式中，本文提供的组合物，包括药物、免疫原性或疫苗组合物，包含与复制-缺陷型沙粒病毒颗粒组合的化疗剂。在某些实施方式中，所述化疗剂是烷化剂(例如，环磷酰胺)、铂-基治疗剂、抗代谢剂、局部异构酶抑制剂、细胞毒抗生素、插入剂、有丝分裂抑制剂、紫杉烷或其两种或更多种的组合。在某些实施方式中，所述烷化剂是氮芥、亚硝基脲、烷基磺酸盐、非经典烷化剂或者三氮烯。在某些实施方式中，所述化疗剂包括以下中的一个或多个：环磷酰胺、塞替派、氮芥(氮芥/氮芥)、乌拉莫司汀、美法仑、苯丁酸氮芥、异环磷酰胺、萘氮芥、胆磷酰胺、雌莫司汀、新恩比星、胆甾醇对苯乙酸氮芥、泼尼莫司汀、曲磷胺、乌拉莫司汀、苯达莫司汀、白消安、英丙舒凡、哌泊舒凡、卡莫司汀、洛莫司汀、吡葡亚硝脲、福莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀、链佐星、顺铂、卡铂、奈达铂、奥沙利铂、沙铂、四硝酸三铂、丙卡巴肼、六甲蜜胺、达卡巴嗪、米托唑胺、替莫唑胺、紫杉醇、多西他赛、长春碱、长春新碱、长春瑞滨、卡巴他赛、更生霉素(放线菌素d)、卡里奇霉素(calicheamicin)、达内霉素(dynemicin)、安吖啶、多柔比星(doxarubicin)、柔红霉素、表柔比星、米托蒽醌、伊达比星、吡柔比星、苯并多巴、卡波醌、米特多巴(meturedopa)、尤利多巴(uredopa)、六甲蜜胺、曲他胺、三乙烯磷酰胺、三乙烯硫代磷酰胺、三羟甲基蜜胺(trimethylolomelamine)、布拉他辛(bullatacin)、布拉它辛酮(bullatacinone)、喜树碱、拓扑替康、苔藓抑素、卡利斯汀(callystatin)、cc-1065、阿多来新、卡折来新、比折来新、念珠藻素、尾海兔素、倍癌毒素、kw-2189、cb1-tm1、艾榴塞洛素、水鬼蕉碱(pancratistatin)、匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)、海绵抑制素、氯屈膦酸、埃斯培拉霉素(esperamicin)、新制癌菌素发色团、阿克拉霉素(aclacinomysin)、安曲霉素、偶氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素c、卡柔比星(carabicin)、洋红霉素、嗜癌菌素、色霉素(chromomycinis)、地托比星、6-重氮-5-氧-l-正亮氨酸、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素、麦考酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素(potfiromycin)、嘌罗霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链佐星、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶(5-fu)、二甲叶酸、蝶罗呤、三甲曲沙、氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫唑嘌呤胺、硫鸟嘌呤、安西他滨、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氮尿苷、卡普睾酮、屈他雄酮丙酸酯、环硫雄醇、美雄烷、睾内酪、米托坦、曲洛司坦、亚叶酸、醋葡醛内酯、醛磷酰胺糖苷、氨基乙酰丙酸、恩尿嘧啶、贝斯布西(bestrabucil)、比生群、依达曲沙(edatraxate)、地磷酰胺(defofamine)、秋水仙胺、地吖醌、依氟鸟氨酸、依利醋铵、依托格鲁、硝酸镓、羟基脲、蘑菇多糖、氯尼达明(lonidainine)、美登素、安丝菌素、米托胍腙、莫比达摩(mopidanmol)、二胺硝吖啶(nitraerine)、喷司他丁、蛋氨氮芥(phenamet)、吡柔比星、洛索蒽醌、鬼臼酸、2-乙酰肼、psk多糖复合物、雷佐生、根霉素、西佐喃、锗螺胺、细交链孢菌酮酸、三亚胺醌、2,2',2”-三氯三乙胺；t-2毒素、疣孢霉素a(verracurina)、杆孢菌素a和蛇形菌素(anguidine)、氨基甲酸乙酯、长春地辛、甘露莫司汀、二溴甘露醇、二溴卫矛醇、哌泊溴烷、加西托星(gacytosine)、阿糖胞苷(“ara-c”)、依托泊苷(vp-16)、长春瑞滨、诺凡特龙(novantrone)、替尼泊苷、依达曲沙、氨基蝶呤、希罗达、伊班膦酸、伊立替康(例如、cpt-11)、局部异构酶抑制剂rfs2000、二氟甲基鸟氨酸(dmfo)、视黄酸、卡培他滨、普利霉素(plicomycin)、吉西他滨、长春瑞滨、反铂，以及任何上述化合物的药物可用的盐、酸或衍生物。在具体的实施方式中，所述化疗剂包括环磷酰胺。在某些实施方式中，所述氮芥是氮芥、环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、异环磷酰胺或白消安。在某些实施方式中，所述化疗剂使dna烷基化。在某些实施方式中，所述化疗剂使dna烷基化，从而导致形成链间交联(“icls”)。在某些实施方式中，本文提供的组合物，包括药物、免疫原性或疫苗组合物，包含化疗剂和抑制、降低或干扰阴性检查点调节因子活性的免疫检查点抑制剂。在某些实施方式中，所述阴性检查点调节因子选自细胞毒t-淋巴细胞抗原-4(ctla-4)、cd80、cd86、细胞程序死亡1(pd-1)、细胞程序死亡配体1(pd-l1)、细胞程序死亡配体2(pd-l2)、淋巴细胞活化基因-3(lag-3；也称为cd223)、半乳凝素-3、b和t淋巴细胞衰减因子(btla)、t细胞膜蛋白3(tim3)、半乳凝素-9(gal9)、b7-h1、b7-h3、b7-h4、具有ig和itim域的t细胞免疫受体(tigit/vstm3/wucam/vsig9)、t细胞激活的v-域ig抑制剂(vista)、糖皮质激素-诱导的肿瘤坏死因子受体-相关(gitr)蛋白、疱疹病毒进入介导子(hvem)、ox40、cd27、cd28、cd137.cgen-15001t、cgen-15022、cgen-15027、cgen-15049、cgen-15052和cgen-15092。在某些实施方式中，所述免疫检查点抑制剂是抗pd-1抗体。在某些实施方式中，可以在本文所述的方法中使用本文所提供的组合物，包括药物、免疫原性或疫苗组合物。因此，在某些实施方式中，所述组合物可以用于肿瘤病的治疗。在具体某些实施方式中，本文提供的组合物可以用于肿瘤病的治疗，所述肿瘤病选自急性淋巴母细胞性白血病；急性淋巴细胞性淋巴瘤；急性淋巴细胞白血病；急性髓性白血病；急性髓细胞性白血病(成人/儿童)；肾上腺皮质癌；aids-相关癌症；aids-相关淋巴瘤；肛门癌；阑尾癌；星形细胞瘤；非典型畸胎样/横纹样瘤；基底细胞癌；胆管癌，肝外(肝胆管型肝癌)；膀胱癌；骨骨肉瘤/恶性纤维组织细胞瘤；脑癌(成人/儿童)；脑肿瘤，小脑星形细胞瘤(成人/儿童)；脑肿瘤，大脑星形细胞瘤/恶性神经胶质瘤脑肿瘤；脑肿瘤，室管膜瘤；脑肿瘤，成神经管细胞瘤；脑肿瘤，幕上原始神经外胚层瘤；脑肿瘤，视觉传导路和下丘脑神经胶质瘤；脑干神经胶质瘤；乳腺癌；支气管腺瘤/类癌；支气管肿瘤；伯基特淋巴瘤；儿童癌；胃肠类癌肿瘤；类癌瘤；成人癌瘤，未知原发位点；原发未知的癌瘤；中枢神经系统胚胎性瘤；中枢神经系统淋巴瘤，原发；宫颈癌；儿童肾上腺皮质癌；儿童癌症；儿童大脑星形细胞瘤；脊索瘤，儿童；慢性淋巴细胞性白血病；慢性粒性白血病；慢性粒细胞性白血病；慢性脊髓增生病；结肠癌；结肠直肠癌；颅咽管瘤；皮肤t-细胞淋巴瘤；促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤；肺气肿；子宫内膜癌；成室管膜细胞瘤；室管膜瘤；食道癌；尤文氏家族肿瘤中的尤因氏肉瘤；颅外生殖细胞肿瘤；性腺外生殖细胞肿瘤；肝外胆管癌；胆囊癌；胃(胃)癌；胃类癌瘤；胃肠类癌肿瘤；胃肠道间质瘤；生殖细胞肿瘤：颅外、性腺外或卵巢妊娠滋养细胞肿瘤；妊娠滋养细胞肿瘤，未知原发位点；神经胶质瘤；脑干神经胶质瘤；神经胶质瘤，儿童视觉传导路和下丘脑；毛细胞白血病；头颈癌；心癌；肝细胞(肝)癌；霍奇金淋巴瘤；舌癌；下丘脑和视觉传导路神经胶质瘤；眼内黑素瘤；胰岛细胞癌(内分泌胰腺)；卡波西肉瘤；肾癌(肾细胞癌)；郎格罕细胞组织细胞增生症；喉癌；唇和口腔癌；脂肪肉瘤；肝癌(原发)；肺癌，非小细胞；肺癌，小细胞；淋巴瘤，原发性中枢神经系统；瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症；男性乳腺癌；恶性骨纤维组织细胞瘤/骨肉瘤；成神经管细胞瘤；髓上皮瘤；黑素瘤；黑素瘤，眼内(眼)；梅克尔细胞癌；梅克尔细胞皮肤癌；间皮瘤；间皮瘤，成人恶性；转移性颈鳞癌，原发位点隐匿；口癌；多发性内分泌瘤综合征；多发性骨髓瘤/浆细胞瘤；阿利贝尔氏病，脊髓发育不良综合征；脊髓发育不良/骨髓增殖性疾病；粒细胞性白血病，慢性；骨髓性白血病，成人急性；骨髓性白血病，儿童急性；骨髓瘤，多发性(骨-骨髓癌)；脊髓增生病，慢性；鼻腔和鼻窦癌；鼻咽癌；成神经细胞瘤，非小细胞肺癌；非霍奇金淋巴瘤；寡枝神经胶质细胞瘤；口腔癌；口腔癌；口咽癌；骨肉瘤/恶性骨纤维组织细胞瘤；卵巢癌；卵巢上皮癌(表面上皮-间质肿瘤)；卵巢生殖细胞肿瘤；卵巢低度恶性潜能肿瘤；胰腺癌；胰腺癌，胰岛细胞；乳头状瘤病；鼻窦和鼻腔癌；甲状旁腺癌；阴茎癌；咽癌；嗜铬细胞瘤；松果体星形细胞瘤；松果体胚组织瘤；中分化松果体实质细胞瘤；成松果体细胞瘤和幕上原始神经外胚层瘤；垂体瘤；垂体腺瘤；浆细胞瘤/多发性骨髓瘤；胸膜肺胚细胞瘤；原发性中枢神经系统淋巴瘤；前列腺癌；直肠癌；肾细胞癌(肾癌)；肾盂和输尿管，移行细胞癌；涉及染色体15上的nut基因的呼吸道癌；成视网膜细胞瘤；横纹肌肉瘤，儿童；唾液腺癌；肉瘤，尤文氏家族肿瘤；塞扎里氏综合征；皮肤癌(黑素瘤)；皮肤癌(非黑素瘤)；小细胞肺癌；小肠癌软组织肉瘤；软组织肉瘤；脊髓瘤；鳞状细胞癌；颈鳞癌，原发位点隐匿，转移性；胃(胃)癌；幕上原始神经外胚层瘤；t细胞淋巴瘤，皮肤(阿利贝尔氏病和塞扎里氏综合征)；睾丸癌；咽喉癌；胸腺瘤；胸腺瘤和胸腺癌；甲状腺癌；甲状腺癌，儿童；肾盂和输尿管的移行细胞癌；尿道癌；子宫癌，子宫内膜；子宫肉瘤；阴道癌；外阴癌；和胚胎性癌肉瘤。本文还提供了可以用于实施本文所述的方法的试剂盒。因此，在某些实施方式中，本文所提供的试剂盒包含一个或多个容器和使用说明，其中所述一个或多个容器包含本文所提供的组合物(例如，药物、免疫原性或疫苗组合物)。在其它某些实施方式中，本文所提供的试剂盒包含容器，所述容器分别含有用于实施本文所述的方法的活性成分。因此，在某些实施方式中，本文所提供的试剂盒包含两个或更多个容器和使用说明，其中所述容器之一包含本文所提供的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒，另一个容器包含本文所提供的化疗剂。在具体的实施方式中，本文所提供的试剂盒包含两个或更多个容器和使用说明，其中所述容器之一包含本文所提供的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒，另一个容器包含本文所提供的化疗剂，其中所述沙粒病毒颗粒被工程化以包含含有下列的基因组：编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列；和使其遗传信息在感染的细胞中扩增和表达，但是不能在非补体细胞中产生进一步感染性的子代颗粒的能力。3.2具有非天然开放阅读框架的沙粒病毒颗粒在某些实施方式中，具有其基因组中其orf重排和编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒可以与本文所提供的方法和组合物一起使用，如与化疗剂组合。在具体的实施方式中，本文所提供的沙粒病毒颗粒包含已被工程化，从而在野生型位置以外的位置携带沙粒病毒orf的沙粒病毒基因组节段。因此，在某些具体的实施方式中，本文提供了沙粒病毒基因组节段，其包含：编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列；和处于所述orf的野生型位置以外的位置的至少一种沙粒病毒orf，其中所述orf编码沙粒病毒颗粒的糖蛋白(“gp”)、核蛋白(“np”)、基质蛋白z(“z蛋白”)或者rna依赖的rna聚合酶l(“l蛋白”)。本文还提供了已被工程化包含该沙粒病毒基因组节段的沙粒病毒颗粒。在某些实施方式中，本文所提供的沙粒病毒颗粒是感染性的，即它能够使其遗传物质进入或注入到宿主细胞中。在某些更具体的实施方式中，如本文所提供的沙粒病毒颗粒是感染性的，即能够使其遗传物质进入或注入到宿主细胞中，然后使其遗传信息在所述宿主细胞内部扩增和表达。在某些实施方式中，将本文所提供的沙粒病毒颗粒被工程化为感染性的复制-缺陷型沙粒病毒颗粒，即它含有能够使其遗传信息在感染的细胞中扩增和表达，但是不能在非补体细胞中产生进一步感染性的子代颗粒的基因组。通过包含在本文所提供的沙粒病毒基因组节段或沙粒病毒颗粒内的所述核苷酸序列所编码的肿瘤抗原或肿瘤相关抗原可以是一种或多种肿瘤抗原或肿瘤相关抗原，其选自：致癌病毒抗原、癌症-睾丸抗原、癌胚抗原、组织分化抗原、突变蛋白抗原、脂肪分化相关蛋白、aim-2、aldh1ai、bclx(l)、bing-4、calca、cd45、cpsf、细胞周期蛋白d1、dkki、enah(hmcna)、ga733(epcam)、epha3、ezh2、fgf5、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、g250/mn/caix、her-2/neu、ido1、igf2b3、il13rα2、小肠羧基酯酶、甲胎蛋白、激肽释放酶4、kif20a、lengsin、m-csf、mcsp、mdm-2、meloe、mmp-2、mmp-7、mucl、muc5ac、p53(非突变体)、pax5、pbf、prame、psma、rage、rage-1、rgs5、rhoc、rnf43、ru2as、分离蛋白1、sox1o、steap1(前列腺6次跨膜上皮抗原1)、存活素、端粒酶、vegf、wt1、egf-r、cea、cd20、cd33、cd52、melana/mart1、mart2、ny-eso-1、p53、magea1、magea3、mage-4、mage-5、mage-6、cdk4、α-辅肌动蛋白-4、artc1、bcr-abl、bcr-abl融合蛋白(b3a2)、b-raf、casp-5、casp-8、β-联蛋白、cdc27、cdk4、cdkn2a、clpp、coa-1、dek-can融合蛋白、eftud2、延伸因子2、etv6-aml、etv6-aml1融合蛋白、flt3-itd、fnl、gpnmb、ldlr-岩藻糖转移酶as融合蛋白、nfyc、ogt、os-9、pml-rarα融合蛋白、prdx5、ptprk、h-ras、k-ras(v-ki-ras2kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因)、n-ras、rbaf600、sirt2、snrpdl、ssx、ssx2、syt-ssxl或-ssx2融合蛋白、tgf-βrii、磷酸丙糖异构化酶、ormdm-2、lmp2、hpve6/e7、egfrviii(表皮生长因子变体iii)，个体遗传型，gd2，神经节糖苷g2)、ras-突变体、p53(突变体)、蛋白酶3(pr1)、酪氨酸酶、psa、htert、肉瘤易位断裂点、epha2、前列腺酸性磷酸酶pap、neo-pap、ml-iap、afp、erg(tmprss2ets融合基因)、na17、pax3、alk、雄激素受体、细胞周期蛋白b1、聚唾液酸、mycn、trp2、trp2-int2、gd3、岩藻糖基gm1、间皮素、psca、sle(a)、cyp1b1、plac1、gm3、boris、tn、globoh、ny-br-1、sart3、stn、碳酸酐酶ix、oy-tes1、精液蛋白17、lck、高分子量黑素瘤-相关抗原(hmwmaa)、akap-4、ssx2、xage1、b7h3、豆荚蛋白、tie2、page4、vegfr2、mad-ct-1、fap、pdgfr-β、mad-ct-2、for-相关抗原1、trp-1、gp100、ca-125、ca19-9、钙网膜蛋白、上皮细胞膜抗原(ema)、上皮细胞瘤抗原(eta)、cd19、cd34、cd99、cd117、嗜铬粒蛋白、细胞角蛋白、肌间线蛋白、胶质原纤维酸性蛋白(gfap)、巨囊性病液体蛋白(gcdfp-15)、hmb-45抗原、myo-d1、肌肉-特异性肌动蛋白(msa)、神经丝、神经元-特异性烯醇酶(nse)、胎盘碱性磷酸酶、突触素、甲状球蛋白、甲状腺转录因子-1、丙酮酸激酶m2型同工酶的二聚体形式(肿瘤m2-pk)、bagebage-1、cage、ctage、fate、gage、gage-1、gage-2、gage-3、gage-4、gage-5、gage-6、gage-7、hca661、hom-tes-85、magea、mageb、magec、na88、ny-sar-35、spanxb1、spa17、ssx、sycp1、tpte、碳水化合物/神经节糖苷gm2(癌胚抗原-免疫原性-1ofa-i-1)、gm3、ca15-3(ca27.29\bcaa)、ca195、ca242、ca50、cam43、cea、ebna、ef2、埃-巴二氏病毒抗原、hla-a2、hla-a11、hsp70-2、kiaao205、mum-1、mum-2、mum-3、i类肌球蛋白、gntv、herv-k-mel、lage-1、lage-2、(精液蛋白)sp17、scp-1、p15(58)、hom/mel-40、e2a-prl、h4-ret、igh-igk、myl-rar、tsp-180、p185erbb2、p180erbb-3、c-met、nm-23h1、tag-72、tag-72-4、ca-72-4、cam17.1、numa、13-联蛋白、p16、tage、ct7、43-9f、5t4、791tgp72、13hcg、bca225、btaa、cd68\kp1、co-029、htgp-175、m344、mg7-ag、mov18、nb\70k、ny-co-1、rcas1、sdccag16、ta-90、taal6、tlp、tps、cd22、cd27、cd30、cd70、前列腺特异性蛋白、tarp(t细胞受体γ可变阅读框架蛋白)、trp-p8、整合素αvβ3(cd61)、催乳激素或者ral-b、cd123、cll-1、cd38、cs-1、cd138和ror1。在某些实施方式中，所述核苷酸序列编码2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段。在某些实施方式中，通过包含在沙粒病毒内的核苷酸序列编码本文所提供的肿瘤抗原或肿瘤相关抗原的抗原性片段。因此，在某些实施方式中，本文提供了包含本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒基因组节段。在某些实施方式中，所述基因组节段被工程化以在所述orf的野生型位置以外的位置携带沙粒病毒orf。在一些实施方式中，所述沙粒病毒基因组节段选自：(i)s节段，其中编码np的orf受沙粒病毒5'utr的控制；(ii)s节段，其中编码z蛋白的orf受沙粒病毒5'utr的控制；(iii)s节段，其中编码l蛋白的orf受沙粒病毒5'utr的控制；(iv)s节段，其中编码gp的orf受沙粒病毒3'utr的控制；(v)s节段，其中编码l蛋白的orf受沙粒病毒3'utr的控制；(vi)s节段，其中编码z蛋白的orf受沙粒病毒3'utr的控制；(vii)l节段，其中编码gp的orf受沙粒病毒5'utr的控制；(viii)l节段，其中编码np的orf受沙粒病毒5'utr的控制；(ix)l节段，其中编码l蛋白的orf受沙粒病毒5'utr的控制；(x)l节段，其中编码gp的orf受沙粒病毒3'utr的控制；(xi)l节段，其中编码np的orf受沙粒病毒3'utr的控制；和(xii)l节段，其中编码z蛋白的orf受沙粒病毒3'utr的控制。在某些实施方式中，所述沙粒病毒3'utr是沙粒病毒s节段或者沙粒病毒l节段的3'utr。在某些实施方式中，所述沙粒病毒5'utr是沙粒病毒s节段或者沙粒病毒l节段的5'utr。在某些实施方式中，本文所提供的沙粒病毒颗粒包含第二沙粒病毒基因组节段，从而所述沙粒病毒颗粒包含s节段和l节段。在某些实施方式中，本文所提供的沙粒病毒颗粒是感染性的，即它能够使其遗传物质进入或注入到宿主细胞中。在某些更具体的实施方式中，如本文所提供的沙粒病毒颗粒是感染性的，即能够使其遗传物质进入或注入到宿主细胞中，然后使其遗传信息在所述宿主细胞内部扩增和表达。在某些实施方式中，所述沙粒病毒颗粒是感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒，其被工程化以含有能够使其遗传信息在感染的细胞中扩增和表达，但是不能在非补体细胞中产生进一步感染性的子代颗粒的基因组。在某些实施方式中，所述沙粒病毒颗粒是有复制能力的并且能够在正常，非基因工程细胞中产生进一步的感染性子代颗粒。在某些更具体的实施方式中，相对于所述有复制能力的颗粒所来源的野生型病毒，这种有复制能力的颗粒是减毒的。在某些实施方式中，本文所提供的沙粒病毒基因组节段，包括含有沙粒病毒基因组节段的沙粒病毒颗粒，包含至少一个至少部分除去或功能上失活的沙粒病毒orf。所述orf可以编码沙粒病毒颗粒的gp、np、z蛋白或l蛋白。另外，在某些实施方式中，除去编码gp、np、z蛋白或l蛋白的至少一个orf或者用本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列替换。在某些实施方式中，仅除去编码gp、np、z蛋白和l蛋白的四个orf中的一个。因此，在某些实施方式中，除去编码gp的orf。在某些实施方式中，除去编码np的orf。在某些实施方式中，除去编码z蛋白的orf。在某些实施方式中，除去编码l蛋白的orf。在某些实施方式中，本文所提供的沙粒病毒颗粒来源于特定沙粒病毒种，如淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(“lcmv”)、胡宁病毒(“junv”)或皮秦德病毒(“picv”)。换言之，编码沙粒病毒颗粒的基因组信息来源于沙粒病毒的特定种。因此，在某些实施方式中，所述沙粒病毒颗粒来源于lcmv。在其它实施方式中，所述沙粒病毒颗粒来源于junv。在其它实施方式中，所述沙粒病毒颗粒来源于picv。另外，在具体的实施方式中，所述lcmv是mp株、we株、armstrong株或armstrong克隆13株。在其它具体的实施方式中，所述junv是junv疫苗candid#1株或者junv疫苗xj克隆3株。在其它具体的实施方式中，所述picv是munchiquecoan4763分离株p18或者p2株。(a)三-节段沙粒病毒在某些实施方式中，包含编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的三-节段沙粒病毒颗粒可以与本文所提供的方法和组合物一起使用，如与化疗剂组合。因此，在某些实施方式中，本文所提供的沙粒病毒颗粒可以包含一个l节段和两个s节段或者两个l节段和一个s节段。在某些实施方式中，本文所提供的三-节段沙粒病毒颗粒不重组成有复制能力的二-节段沙粒病毒颗粒。因此，在某些实施方式中，在缺少i型干扰素受体、ii型干扰素受体和重组激活基因1(rag1)并且已用104pfu的三-节段沙粒病毒颗粒感染的小鼠中持续感染70天后，三-节段沙粒病毒颗粒的增殖不会导致产生有复制能力的二-节段颗粒。在某些实施方式中，本文所提供的三-节段沙粒病毒颗粒可以被工程化以改善遗传稳定性并确保持续的转基因表达。此外，在某些实施方式中，两个s节段或两个l节段的节段内重组使两个沙粒病毒orf在仅一个而不是两个单独的节段上联合，从而终止了病毒启动子的活性。在某些实施方式中，如本文所提供的三-节段沙粒病毒颗粒是感染性的，即它能够使其遗传物质进入或注入宿主细胞。在某些更具体的实施方式中，如本文所提供的三-节段沙粒病毒颗粒是感染性的，即能够使其遗传物质进入或注入到宿主细胞中，然后使其遗传信息在所述宿主细胞内部扩增和表达。在某些实施方式中，所述三-节段沙粒病毒颗粒是感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒，其被工程化以含有能够使其遗传信息在感染的细胞中扩增和表达，但是不能在非补体细胞中产生进一步感染性的子代颗粒的基因组。在某些实施方式中，所述三-节段沙粒病毒颗粒是有复制能力的并且能够在正常，非基因工程细胞中产生进一步的感染性子代颗粒。在某些更具体的实施方式中，相对于所述有复制能力的颗粒所来源的野生型病毒，这种有复制能力的颗粒是减毒的。通过包含在本文所提供的三-节段沙粒病毒颗粒内的所述核苷酸序列所编码的肿瘤抗原或肿瘤相关抗原可以是一种或多种肿瘤抗原或肿瘤相关抗原，其选自：致癌病毒抗原、癌症-睾丸抗原、癌胚抗原、组织分化抗原、突变蛋白抗原、脂肪分化相关蛋白、aim-2、aldh1ai、bclx(l)、bing-4、calca、cd45、cpsf、细胞周期蛋白d1、dkki、enah(hmcna)、ga733(epcam)、epha3、ezh2、fgf5、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、g250/mn/caix、her-2/neu、ido1、igf2b3、il13rα2、小肠羧基酯酶、甲胎蛋白、激肽释放酶4、kif20a、lengsin、m-csf、mcsp、mdm-2、meloe、mmp-2、mmp-7、mucl、muc5ac、p53(非突变体)、pax5、pbf、prame、psma、rage、rage-1、rgs5、rhoc、rnf43、ru2as、分离蛋白1、sox1o、steap1(前列腺6次跨膜上皮抗原1)、存活素、端粒酶、vegf、wt1、egf-r、cea、cd20、cd33、cd52、melana/mart1、mart2、ny-eso-1、p53、magea1、magea3、mage-4、mage-5、mage-6、cdk4、α-辅肌动蛋白-4、artc1、bcr-abl、bcr-abl融合蛋白(b3a2)、b-raf、casp-5、casp-8、β-联蛋白、cdc27、cdk4、cdkn2a、clpp、coa-1、dek-can融合蛋白、eftud2、延伸因子2、etv6-aml、etv6-aml1融合蛋白、flt3-itd、fnl、gpnmb、ldlr-岩藻糖转移酶as融合蛋白、nfyc、ogt、os-9、pml-rarα融合蛋白、prdx5、ptprk、h-ras、k-ras(v-ki-ras2kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因)、n-ras、rbaf600、sirt2、snrpdl、ssx、ssx2、syt-ssxl或-ssx2融合蛋白、tgf-βrii、磷酸丙糖异构化酶、ormdm-2、lmp2、hpve6/e7、egfrviii(表皮生长因子变体iii)，个体遗传型，gd2，神经节糖苷g2)、ras-突变体、p53(突变体)、蛋白酶3(pr1)、酪氨酸酶、psa、htert、肉瘤易位断裂点、epha2、前列腺酸性磷酸酶pap、neo-pap、ml-iap、afp、erg(tmprss2ets融合基因)、na17、pax3、alk、雄激素受体、细胞周期蛋白b1、聚唾液酸、mycn、trp2、trp2-int2、gd3、岩藻糖基gm1、间皮素、psca、sle(a)、cyp1b1、plac1、gm3、boris、tn、globoh、ny-br-1、sart3、stn、碳酸酐酶ix、oy-tes1、精液蛋白17、lck、高分子量黑素瘤-相关抗原(hmwmaa)、akap-4、ssx2、xage1、b7h3、豆荚蛋白、tie2、page4、vegfr2、mad-ct-1、fap、pdgfr-β、mad-ct-2、for-相关抗原1、trp-1、gp100、ca-125、ca19-9、钙网膜蛋白、上皮细胞膜抗原(ema)、上皮细胞瘤抗原(eta)、cd19、cd34、cd99、cd117、嗜铬粒蛋白、细胞角蛋白、肌间线蛋白、胶质原纤维酸性蛋白(gfap)、巨囊性病液体蛋白(gcdfp-15)、hmb-45抗原、myo-d1、肌肉-特异性肌动蛋白(msa)、神经丝、神经元-特异性烯醇酶(nse)、胎盘碱性磷酸酶、突触素、甲状球蛋白、甲状腺转录因子-1、丙酮酸激酶m2型同工酶的二聚体形式(肿瘤m2-pk)、bagebage-1、cage、ctage、fate、gage、gage-1、gage-2、gage-3、gage-4、gage-5、gage-6、gage-7、hca661、hom-tes-85、magea、mageb、magec、na88、ny-sar-35、spanxb1、spa17、ssx、sycp1、tpte、碳水化合物/神经节糖苷gm2(癌胚抗原-免疫原性-1ofa-i-1)、gm3、ca15-3(ca27.29\bcaa)、ca195、ca242、ca50、cam43、cea、ebna、ef2、埃-巴二氏病毒抗原、hla-a2、hla-a11、hsp70-2、kiaao205、mum-1、mum-2、mum-3、i类肌球蛋白、gntv、herv-k-mel、lage-1、lage-2、(精液蛋白)sp17、scp-1、p15(58)、hom/mel-40、e2a-prl、h4-ret、igh-igk、myl-rar、tsp-180、p185erbb2、p180erbb-3、c-met、nm-23h1、tag-72、tag-72-4、ca-72-4、cam17.1、numa、13-联蛋白、p16、tage、ct7、43-9f、5t4、791tgp72、13hcg、bca225、btaa、cd68\kp1、co-029、htgp-175、m344、mg7-ag、mov18、nb\70k、ny-co-1、rcas1、sdccag16、ta-90、taal6、tlp、tps、cd22、cd27、cd30、cd70、前列腺特异性蛋白、tarp(t细胞受体γ可变阅读框架蛋白)、trp-p8、整合素αvβ3(cd61)、催乳激素或者ral-b、cd123、cll-1、cd38、cs-1、cd138和ror1。在某些实施方式中，所述核苷酸序列编码2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段。在某些实施方式中，通过包含在三-节段沙粒病毒内的核苷酸序列编码本文所提供的肿瘤抗原或肿瘤相关抗原的抗原性片段。在某些实施方式中，本文提供了具有其基因组中其orf重排和本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的三-节段沙粒病毒。在具体的实施方式中，本文所提供的三-节段沙粒病毒颗粒已被工程化以在野生型位置以外的位置携带沙粒病毒orf。因此，在某些具体的实施方式中，本文提供了三-节段沙粒病毒，其包含：编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列；和处于所述orf的野生型位置以外的位置的至少一种沙粒病毒orf，其中所述orf编码沙粒病毒颗粒的gp、np、z蛋白或l蛋白。在某些实施方式中，包含在本文所提供的三-节段沙粒病毒颗粒中的两个s节段之一选自：(i)s节段，其中编码np的orf受沙粒病毒5'utr的控制；(ii)s节段，其中编码z蛋白的orf受沙粒病毒5'utr的控制；(iii)s节段，其中编码l蛋白的orf受沙粒病毒5'utr的控制；(iv)s节段，其中编码gp的orf受沙粒病毒3'utr的控制；(v)s节段，其中编码l蛋白的orf受沙粒病毒3'utr的控制；和(vi)s节段，其中编码z蛋白的orf受沙粒病毒3'utr的控制。在某些实施方式中，包含在本文所提供的三-节段沙粒病毒颗粒中的两个l节段之一选自：(i)l节段，其中编码gp的orf受沙粒病毒5'utr的控制；(ii)l节段，其中编码np的orf受沙粒病毒5'utr的控制；(iii)l节段，其中编码l蛋白的orf受沙粒病毒5'utr的控制；(iv)l节段，其中编码gp的orf受沙粒病毒3'utr的控制；(v)l节段，其中编码np的orf受沙粒病毒3'utr的控制；和(vi)l节段，其中编码z蛋白的orf受沙粒病毒3'utr的控制。在某些实施方式中，所述三-节段沙粒病毒颗粒3'utr是沙粒病毒s节段或者沙粒病毒l节段的3'utr。在其它实施方式中，所述三-节段沙粒病毒颗粒5'utr是沙粒病毒s节段或者沙粒病毒l节段的5'utr。在某些实施方式中，两个s节段包含：(i)分别编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的一个或两个核苷酸序列；或者(ii)一个或两个重复沙粒病毒orf；或者(iii)一个编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列和一个重复沙粒病毒orf。在某些实施方式中，两个l节段包含：(i)分别编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的一个或两个核苷酸序列；或者(ii)一个或两个重复沙粒病毒orf；或者(iii)一个编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列和一个重复沙粒病毒orf。在某些实施方式中，本文所提供的三-节段沙粒病毒颗粒包含至少一个至少部分除去或功能上失活的沙粒病毒orf。所述orf可以编码沙粒病毒颗粒的gp、np、z蛋白或l蛋白。另外，在某些实施方式中，除去编码gp、np、z蛋白或l蛋白的至少一个orf或者用本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列替换。在某些实施方式中，仅除去编码gp、np、z蛋白和l蛋白的四个orf中的一个。因此，在某些实施方式中，除去编码gp的orf。在某些实施方式中，除去编码np的orf。在某些实施方式中，除去编码z蛋白的orf。在某些实施方式中，除去编码l蛋白的orf。在某些实施方式中，本文所提供的沙粒病毒颗粒来源于特定沙粒病毒种，如淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(“lcmv”)、胡宁病毒(“junv”)或皮秦德病毒(“picv”)。换言之，编码沙粒病毒颗粒的基因组信息来源于沙粒病毒的特定种。因此，在某些实施方式中，所述沙粒病毒颗粒来源于lcmv。在其它实施方式中，所述沙粒病毒颗粒来源于junv。在其它实施方式中，所述沙粒病毒颗粒来源于picv。另外，在具体的实施方式中，所述lcmv是mp株、we株、armstrong株或armstrong克隆13株。在其它具体的实施方式中，所述junv是junv疫苗candid#1株或者junv疫苗xj克隆3株。在其它具体的实施方式中，所述picv是munchiquecoan4763分离株p18或者p2株。(b)用于治疗肿瘤病的方法在某些实施方式中，本文提供了治疗对象中肿瘤病的方法。这些方法可以包括向对其有需要的对象施用沙粒病毒颗粒，其包含与本文所提供的化疗剂组合的本文所提供的三-节段沙粒病毒颗粒。在某些实施方式中，在所述方法中使用的沙粒病毒颗粒是本文所提供的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒。在某些实施方式中，在所述方法中使用的沙粒病毒颗粒是本文所提供的三-节段沙粒病毒颗粒，其包括感染性、复制-缺陷型三-节段沙粒病毒颗粒或者有复制能力的三-节段沙粒病毒颗粒。因此，在某些实施方式中，在所述方法中使用的沙粒病毒颗粒，包括三-节段沙粒病毒颗粒是复制缺陷型的，其中所述三-节段沙粒病毒颗粒被工程化以包含含有下列的基因组：(1)编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列；和(2)使其遗传信息在感染的细胞中扩增和表达，但是不能在非补体细胞中产生进一步感染性的子代颗粒的能力。此外，在某些实施方式中，在所述方法中使用的三-节段沙粒病毒颗粒是有复制能力的，其中所述三-节段沙粒病毒颗粒被工程化以包含含有下列的基因组：(1)编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列；(2)使其遗传信息在感染的细胞中扩增和表达的能力；和(3)在正常、非基因工程细胞中产生进一步感染性的子代颗粒的能力。在某些实施方式中，通过包含在本文所提供的沙粒病毒颗粒，包括三-节段沙粒病毒颗粒内的所述核苷酸序列所编码的肿瘤抗原或肿瘤相关抗原可以是一种或多种肿瘤抗原或肿瘤相关抗原，其选自：致癌病毒抗原、癌症-睾丸抗原、癌胚抗原、组织分化抗原、突变蛋白抗原、脂肪分化相关蛋白、aim-2、aldh1ai、bclx(l)、bing-4、calca、cd45、cpsf、细胞周期蛋白d1、dkki、enah(hmcna)、ga733(epcam)、epha3、ezh2、fgf5、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、g250/mn/caix、her-2/neu、ido1、igf2b3、il13rα2、小肠羧基酯酶、甲胎蛋白、激肽释放酶4、kif20a、lengsin、m-csf、mcsp、mdm-2、meloe、mmp-2、mmp-7、mucl、muc5ac、p53(非突变体)、pax5、pbf、prame、psma、rage、rage-1、rgs5、rhoc、rnf43、ru2as、分离蛋白1、sox1o、steap1(前列腺6次跨膜上皮抗原1)、存活素、端粒酶、vegf、wt1、egf-r、cea、cd20、cd33、cd52、melana/mart1、mart2、ny-eso-1、p53、magea1、magea3、mage-4、mage-5、mage-6、cdk4、α-辅肌动蛋白-4、artc1、bcr-abl、bcr-abl融合蛋白(b3a2)、b-raf、casp-5、casp-8、β-联蛋白、cdc27、cdk4、cdkn2a、clpp、coa-1、dek-can融合蛋白、eftud2、延伸因子2、etv6-aml、etv6-aml1融合蛋白、flt3-itd、fnl、gpnmb、ldlr-岩藻糖转移酶as融合蛋白、nfyc、ogt、os-9、pml-rarα融合蛋白、prdx5、ptprk、h-ras、k-ras(v-ki-ras2kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因)、n-ras、rbaf600、sirt2、snrpdl、ssx、ssx2、syt-ssxl或-ssx2融合蛋白、tgf-βrii、磷酸丙糖异构化酶、ormdm-2、lmp2、hpve6/e7、egfrviii(表皮生长因子变体iii)，个体遗传型，gd2，神经节糖苷g2)、ras-突变体、p53(突变体)、蛋白酶3(pr1)、酪氨酸酶、psa、htert、肉瘤易位断裂点、epha2、前列腺酸性磷酸酶pap、neo-pap、ml-iap、afp、erg(tmprss2ets融合基因)、na17、pax3、alk、雄激素受体、细胞周期蛋白b1、聚唾液酸、mycn、trp2、trp2-int2、gd3、岩藻糖基gm1、间皮素、psca、sle(a)、cyp1b1、plac1、gm3、boris、tn、globoh、ny-br-1、sart3、stn、碳酸酐酶ix、oy-tes1、精液蛋白17、lck、高分子量黑素瘤-相关抗原(hmwmaa)、akap-4、ssx2、xage1、b7h3、豆荚蛋白、tie2、page4、vegfr2、mad-ct-1、fap、pdgfr-β、mad-ct-2、for-相关抗原1、trp-1、gp100、ca-125、ca19-9、钙网膜蛋白、上皮细胞膜抗原(ema)、上皮细胞瘤抗原(eta)、cd19、cd34、cd99、cd117、嗜铬粒蛋白、细胞角蛋白、肌间线蛋白、胶质原纤维酸性蛋白(gfap)、巨囊性病液体蛋白(gcdfp-15)、hmb-45抗原、myo-d1、肌肉-特异性肌动蛋白(msa)、神经丝、神经元-特异性烯醇酶(nse)、胎盘碱性磷酸酶、突触素、甲状球蛋白、甲状腺转录因子-1、丙酮酸激酶m2型同工酶的二聚体形式(肿瘤m2-pk)、bagebage-1、cage、ctage、fate、gage、gage-1、gage-2、gage-3、gage-4、gage-5、gage-6、gage-7、hca661、hom-tes-85、magea、mageb、magec、na88、ny-sar-35、spanxb1、spa17、ssx、sycp1、tpte、碳水化合物/神经节糖苷gm2(癌胚抗原-免疫原性-1ofa-i-1)、gm3、ca15-3(ca27.29\bcaa)、ca195、ca242、ca50、cam43、cea、ebna、ef2、埃-巴二氏病毒抗原、hla-a2、hla-a11、hsp70-2、kiaao205、mum-1、mum-2、mum-3、i类肌球蛋白、gntv、herv-k-mel、lage-1、lage-2、(精液蛋白)sp17、scp-1、p15(58)、hom/mel-40、e2a-prl、h4-ret、igh-igk、myl-rar、tsp-180、p185erbb2、p180erbb-3、c-met、nm-23h1、tag-72、tag-72-4、ca-72-4、cam17.1、numa、13-联蛋白、p16、tage、ct7、43-9f、5t4、791tgp72、13hcg、bca225、btaa、cd68\kp1、co-029、htgp-175、m344、mg7-ag、mov18、nb\70k、ny-co-1、rcas1、sdccag16、ta-90、taal6、tlp、tps、cd22、cd27、cd30、cd70、前列腺特异性蛋白、tarp(t细胞受体γ可变阅读框架蛋白)、trp-p8、整合素αvβ3(cd61)、催乳激素或者ral-b、cd123、cll-1、cd38、cs-1、cd138和ror1。在某些实施方式中，所述核苷酸序列编码2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段。在某些实施方式中，通过包含在沙粒病毒，包括三-节段沙粒病毒内的核苷酸序列编码本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原的抗原性片段。在具体的实施方式中，所述肿瘤抗原选自gp100、trp1、trp2及其组合。在具体的实施方式中，所述肿瘤抗原是gp100。在具体的实施方式中，所述肿瘤抗原是trp1。在具体的实施方式中，所述肿瘤抗原是trp2。在某些实施方式中，本文提供了通过与三-节段沙粒病毒颗粒组合施用化疗剂来治疗对象中肿瘤病的方法。在某些实施方式中，所述化疗剂是烷化剂(例如，环磷酰胺)、铂-基治疗剂、抗代谢剂、局部异构酶抑制剂、细胞毒抗生素、插入剂、有丝分裂抑制剂、紫杉烷或其两种或更多种的组合。在某些实施方式中，所述烷化剂是氮芥、亚硝基脲、烷基磺酸盐、非经典烷化剂或者三氮烯。在某些实施方式中，所述化疗剂包括以下中的一个或多个：环磷酰胺、塞替派、氮芥(氮芥/氮芥)、乌拉莫司汀、美法仑、苯丁酸氮芥、异环磷酰胺、萘氮芥、胆磷酰胺、雌莫司汀、新恩比星、胆甾醇对苯乙酸氮芥、泼尼莫司汀、曲磷胺、乌拉莫司汀、苯达莫司汀、白消安、英丙舒凡、哌泊舒凡、卡莫司汀、洛莫司汀、吡葡亚硝脲、福莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀、链佐星、顺铂、卡铂、奈达铂、奥沙利铂、沙铂、四硝酸三铂、丙卡巴肼、六甲蜜胺、达卡巴嗪、米托唑胺、替莫唑胺、紫杉醇、多西他赛、长春碱、长春新碱、长春瑞滨、卡巴他赛、更生霉素(放线菌素d)、卡里奇霉素(calicheamicin)、达内霉素(dynemicin)、安吖啶、多柔比星(doxarubicin)、柔红霉素、表柔比星、米托蒽醌、伊达比星、吡柔比星、苯并多巴、卡波醌、米特多巴(meturedopa)、尤利多巴(uredopa)、六甲蜜胺、曲他胺、三乙烯磷酰胺、三乙烯硫代磷酰胺、三羟甲基蜜胺(trimethylolomelamine)、布拉他辛(bullatacin)、布拉它辛酮(bullatacinone)、喜树碱、拓扑替康、苔藓抑素、卡利斯汀(callystatin)、cc-1065、阿多来新、卡折来新、比折来新、念珠藻素、尾海兔素、倍癌毒素、kw-2189、cb1-tm1、艾榴塞洛素、水鬼蕉碱(pancratistatin)、匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)、海绵抑制素、氯屈膦酸、埃斯培拉霉素(esperamicin)、新制癌菌素发色团、阿克拉霉素(aclacinomysin)、安曲霉素、偶氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素c、卡柔比星(carabicin)、洋红霉素、嗜癌菌素、色霉素(chromomycinis)、地托比星、6-重氮-5-氧-l-正亮氨酸、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素、麦考酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素(potfiromycin)、嘌罗霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链佐星、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶(5-fu)、二甲叶酸、蝶罗呤、三甲曲沙、氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫唑嘌呤胺、硫鸟嘌呤、安西他滨、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氮尿苷、卡普睾酮、屈他雄酮丙酸酯、环硫雄醇、美雄烷、睾内酪、米托坦、曲洛司坦、亚叶酸、醋葡醛内酯、醛磷酰胺糖苷、氨基乙酰丙酸、恩尿嘧啶、贝斯布西(bestrabucil)、比生群、依达曲沙(edatraxate)、地磷酰胺(defofamine)、秋水仙胺、地吖醌、依氟鸟氨酸、依利醋铵、依托格鲁、硝酸镓、羟基脲、蘑菇多糖、氯尼达明(lonidainine)、美登素、安丝菌素、米托胍腙、莫比达摩(mopidanmol)、二胺硝吖啶(nitraerine)、喷司他丁、蛋氨氮芥(phenamet)、吡柔比星、洛索蒽醌、鬼臼酸、2-乙酰肼、psk多糖复合物、雷佐生、根霉素、西佐喃、锗螺胺、细交链孢菌酮酸、三亚胺醌、2,2',2”-三氯三乙胺；t-2毒素、疣孢霉素a(verracurina)、杆孢菌素a和蛇形菌素(anguidine)、氨基甲酸乙酯、长春地辛、甘露莫司汀、二溴甘露醇、二溴卫矛醇、哌泊溴烷、加西托星(gacytosine)、阿糖胞苷(“ara-c”)、依托泊苷(vp-16)、长春瑞滨、诺凡特龙(novantrone)、替尼泊苷、依达曲沙、氨基蝶呤、希罗达、伊班膦酸、伊立替康(例如、cpt-11)、局部异构酶抑制剂rfs2000、二氟甲基鸟氨酸(dmfo)、视黄酸、卡培他滨、普利霉素(plicomycin)、吉西他滨、长春瑞滨、反铂，以及任何上述化合物的药物可用的盐、酸或衍生物。在具体的实施方式中，所述化疗剂包括环磷酰胺。在某些实施方式中，所述氮芥是氮芥、环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、异环磷酰胺或白消安。在某些实施方式中，所述化疗剂使dna烷基化。在某些实施方式中，所述化疗剂使dna烷基化，从而导致形成链间交联(“icls”)。在某些实施方式中，本文提供了通过与三-节段沙粒病毒颗粒和抑制、降低或干扰阴性检查点调节因子活性的免疫检查点抑制剂组合施用化疗剂来治疗对象中肿瘤病的方法。在某些实施方式中，所述阴性检查点调节因子选自细胞毒t-淋巴细胞抗原-4(ctla-4)、cd80、cd86、细胞程序死亡1(pd-1)、细胞程序死亡配体1(pd-l1)、细胞程序死亡配体2(pd-l2)、淋巴细胞活化基因-3(lag-3；也称为cd223)、半乳凝素-3、b和t淋巴细胞衰减因子(btla)、t细胞膜蛋白3(tim3)、半乳凝素-9(gal9)、b7-h1、b7-h3、b7-h4、具有ig和itim域的t细胞免疫受体(tigit/vstm3/wucam/vsig9)、t细胞激活的v-域ig抑制剂(vista)、糖皮质激素-诱导的肿瘤坏死因子受体-相关(gitr)蛋白、疱疹病毒进入介导子(hvem)、ox40、cd27、cd28、cd137.cgen-15001t、cgen-15022、cgen-15027、cgen-15049、cgen-15052和cgen-15092。在某些实施方式中，所述免疫检查点抑制剂是抗pd-1抗体。在某些实施方式中，使用本文所提供的方法治疗的对象患有肿瘤病、对肿瘤病敏感或者具有患肿瘤病的风险。因此，在一些实施方式中，所述对象患有肿瘤病。在一些实施方式中，所述对象对肿瘤病敏感。在一些实施方式中，所述对象具有患肿瘤病的风险。在某些实施方式中，通过本文所提供的方法可治疗的对象的肿瘤病选自急性淋巴母细胞性白血病；急性淋巴细胞性淋巴瘤；急性淋巴细胞白血病；急性髓性白血病；急性髓细胞性白血病(成人/儿童)；肾上腺皮质癌；aids-相关癌症；aids-相关淋巴瘤；肛门癌；阑尾癌；星形细胞瘤；非典型畸胎样/横纹样瘤；基底细胞癌；胆管癌，肝外(肝胆管型肝癌)；膀胱癌；骨骨肉瘤/恶性纤维组织细胞瘤；脑癌(成人/儿童)；脑肿瘤，小脑星形细胞瘤(成人/儿童)；脑肿瘤，大脑星形细胞瘤/恶性神经胶质瘤脑肿瘤；脑肿瘤，室管膜瘤；脑肿瘤，成神经管细胞瘤；脑肿瘤，幕上原始神经外胚层瘤；脑肿瘤，视觉传导路和下丘脑神经胶质瘤；脑干神经胶质瘤；乳腺癌；支气管腺瘤/类癌；支气管肿瘤；伯基特淋巴瘤；儿童癌；胃肠类癌肿瘤；类癌瘤；成人癌瘤，未知原发位点；原发未知的癌瘤；中枢神经系统胚胎性瘤；中枢神经系统淋巴瘤，原发；宫颈癌；儿童肾上腺皮质癌；儿童癌症；儿童大脑星形细胞瘤；脊索瘤，儿童；慢性淋巴细胞性白血病；慢性粒性白血病；慢性粒细胞性白血病；慢性脊髓增生病；结肠癌；结肠直肠癌；颅咽管瘤；皮肤t-细胞淋巴瘤；促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤；肺气肿；子宫内膜癌；成室管膜细胞瘤；室管膜瘤；食道癌；尤文氏家族肿瘤中的尤因氏肉瘤；颅外生殖细胞肿瘤；性腺外生殖细胞肿瘤；肝外胆管癌；胆囊癌；胃(胃)癌；胃类癌瘤；胃肠类癌肿瘤；胃肠道间质瘤；生殖细胞肿瘤：颅外、性腺外或卵巢妊娠滋养细胞肿瘤；妊娠滋养细胞肿瘤，未知原发位点；神经胶质瘤；脑干神经胶质瘤；神经胶质瘤，儿童视觉传导路和下丘脑；毛细胞白血病；头颈癌；心癌；肝细胞(肝)癌；霍奇金淋巴瘤；舌癌；下丘脑和视觉传导路神经胶质瘤；眼内黑素瘤；胰岛细胞癌(内分泌胰腺)；卡波西肉瘤；肾癌(肾细胞癌)；郎格罕细胞组织细胞增生症；喉癌；唇和口腔癌；脂肪肉瘤；肝癌(原发)；肺癌，非小细胞；肺癌，小细胞；淋巴瘤，原发性中枢神经系统；瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症；男性乳腺癌；恶性骨纤维组织细胞瘤/骨肉瘤；成神经管细胞瘤；髓上皮瘤；黑素瘤；黑素瘤，眼内(眼)；梅克尔细胞癌；梅克尔细胞皮肤癌；间皮瘤；间皮瘤，成人恶性；转移性颈鳞癌，原发位点隐匿；口癌；多发性内分泌瘤综合征；多发性骨髓瘤/浆细胞瘤；阿利贝尔氏病，脊髓发育不良综合征；脊髓发育不良/骨髓增殖性疾病；粒细胞性白血病，慢性；骨髓性白血病，成人急性；骨髓性白血病，儿童急性；骨髓瘤，多发性(骨-骨髓癌)；脊髓增生病，慢性；鼻腔和鼻窦癌；鼻咽癌；成神经细胞瘤，非小细胞肺癌；非霍奇金淋巴瘤；寡枝神经胶质细胞瘤；口腔癌；口腔癌；口咽癌；骨肉瘤/恶性骨纤维组织细胞瘤；卵巢癌；卵巢上皮癌(表面上皮-间质肿瘤)；卵巢生殖细胞肿瘤；卵巢低度恶性潜能肿瘤；胰腺癌；胰腺癌，胰岛细胞；乳头状瘤病；鼻窦和鼻腔癌；甲状旁腺癌；阴茎癌；咽癌；嗜铬细胞瘤；松果体星形细胞瘤；松果体胚组织瘤；中分化松果体实质细胞瘤；成松果体细胞瘤和幕上原始神经外胚层瘤；垂体瘤；垂体腺瘤；浆细胞瘤/多发性骨髓瘤；胸膜肺胚细胞瘤；原发性中枢神经系统淋巴瘤；前列腺癌；直肠癌；肾细胞癌(肾癌)；肾盂和输尿管，移行细胞癌；涉及染色体15上的nut基因的呼吸道癌；成视网膜细胞瘤；横纹肌肉瘤，儿童；唾液腺癌；肉瘤，尤文氏家族肿瘤；塞扎里氏综合征；皮肤癌(黑素瘤)；皮肤癌(非黑素瘤)；小细胞肺癌；小肠癌软组织肉瘤；软组织肉瘤；脊髓瘤；鳞状细胞癌；颈鳞癌，原发位点隐匿，转移性；胃(胃)癌；幕上原始神经外胚层瘤；t细胞淋巴瘤，皮肤(阿利贝尔氏病和塞扎里氏综合征)；睾丸癌；咽喉癌；胸腺瘤；胸腺瘤和胸腺癌；甲状腺癌；甲状腺癌，儿童；肾盂和输尿管的移行细胞癌；尿道癌；子宫癌，子宫内膜；子宫肉瘤；阴道癌；外阴癌；和胚胎性癌肉瘤。在某些实施方式中，通过本文所提供的方法可治疗的对象的肿瘤病是黑素瘤。在具体的实施方式中，所述肿瘤病是黑素瘤并且所述化疗剂是环磷酰胺。在具体的实施方式中，所述肿瘤病是黑素瘤，所述肿瘤抗原选自gp100、trp1、trp2及其组合，并且所述化疗剂是环磷酰胺。在具体的实施方式中，所述肿瘤病是黑素瘤，所述肿瘤抗原是gp100，并且所述化疗剂是环磷酰胺。在具体的实施方式中，所述肿瘤病是黑素瘤，所述肿瘤抗原是trp2，并且所述化疗剂是环磷酰胺。在具体的实施方式中，所述肿瘤病是黑素瘤，所述肿瘤抗原是trp1，并且所述化疗剂是环磷酰胺。在更具体的实施方式中，所述肿瘤病是黑素瘤，所述肿瘤抗原是trp1，所述化疗剂是环磷酰胺，并且所述方法还包括施用抗pd-1抗体。在某些实施方式中，可以将在本文所提供的方法中使用的本文所提供的沙粒病毒颗粒，包括三-节段沙粒病毒和化疗剂以多种不同组合施用。因此，在某些实施方式中，所述沙粒病毒颗粒和所述化疗剂是同时共施用的。在其它实施方式中，在施用所述化疗剂之前，施用所述沙粒病毒颗粒。在其它实施方式中，在施用所述化疗剂之后，施用所述沙粒病毒颗粒。所述沙粒病毒颗粒和所述化疗剂的施用之间的间隔可以是数小时、数日、数周或数月。因此，在一些实施方式中，间隔为约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约1周、约8天、约9天、约10天、约11天、约12天、约13天、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约9周、约10周、约11周、约12周、约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月或更长。在某些实施方式中，本文所提供的方法包括以治疗有效量施用本文所提供的沙粒病毒颗粒，包括三-节段沙粒病毒和本文所提供的化疗剂。因此，在某些实施方式中，本文提供了用于治疗对象中肿瘤病的方法，其包括：向对其有需要的对象施用治疗有效量的沙粒病毒颗粒和治疗有效量的化疗剂，其中所述沙粒病毒颗粒被工程化以含有包含下列的基因组节段：编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列；和处于所述orf的野生型位置以外的位置的至少一种沙粒病毒orf，其中所述orf编码沙粒病毒颗粒的gp、np、z蛋白或l蛋白。在某些实施方式中，本文提供了治疗对象中肿瘤病的方法，其包括向所述对象施用两种或更多种表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的本文所提供的沙粒病毒，包括三-节段沙粒病毒。在更具体的实施方式中，本文所提供的方法包括向所述对象施用第一沙粒病毒颗粒，和经过一段时间以后，向所述对象施用第二沙粒病毒颗粒。在另一个实施方式中，所述第一沙粒病毒颗粒和所述第二沙粒病毒颗粒来源于不同的沙粒病毒种和/或包含编码不同的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。在某些实施方式中，与个性化医学组合使用本文所提供的方法和组合物。个性化医学通过使用来自患者的唯一遗传和/或表观遗传谱的信息来预测患者对不同疗法的反应并鉴别哪种疗法更可能有效来设法使患者受益。可以与本文所提供的方法和组合物组合使用以获得患者唯一的遗传和/或表观遗传谱的技术包括(但不限于)基因组测序、rna测序、基因表达分析和肿瘤抗原(例如，新抗原)、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的鉴别。在某些实施方式中，基于患者的遗传谱进行用于在本文所提供的方法和组合物中使用的沙粒病毒肿瘤抗原或肿瘤相关抗原的选择。在某些实施方式中，基于肿瘤或肿瘤细胞的遗传谱进行用于在本文所提供的方法和组合物中使用的沙粒病毒肿瘤抗原或肿瘤相关抗原的选择。在某些实施方式中，基于肿瘤或肿瘤细胞的遗传谱来进行用于在本文所提供的方法和组合物中使用的化疗剂的选择。在某些实施方式中，基于肿瘤或肿瘤细胞的遗传谱进行用于在本文所提供的方法和组合物中使用的沙粒病毒肿瘤抗原或肿瘤相关抗原的选择和化疗剂的选择。在一个实施方式中，本文公开了用于治疗对象中肿瘤病的方法，其包括向对其有需要的对象施用沙粒病毒颗粒和化疗剂，其中所述沙粒病毒颗粒被工程化以包含含有下列的沙粒病毒基因组节段：(i)编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列；和(ii)处于所述orf的野生型位置以外的位置的至少一种沙粒病毒开放阅读框架(“orf”)，其中所述orf编码沙粒病毒颗粒的糖蛋白(“gp”)、核蛋白(“np”)、基质蛋白z(“z蛋白”)或者rna依赖的rna聚合酶l(“l蛋白”)。在某些实施方式中，所述肿瘤抗原或肿瘤相关抗原选自gp100、trp1和trp2。在某些实施方式中，所述化疗剂是环磷酰胺。在某些实施方式中，所述对象患有黑素瘤，对黑素瘤敏感或者处于患黑素瘤的风险。在某些实施方式中，所述沙粒病毒颗粒是包含一个l节段和两个s节段的三节段沙粒病毒颗粒。在某些实施方式中，所述两个s节段之一是s节段，其中编码gp的orf受沙粒病毒3'utr的控制。在某些实施方式中，所述两个s节段中的每一个包含编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。在某些实施方式中，所述沙粒病毒颗粒来源于lcmv。在具体的实施方式中，所述沙粒病毒颗粒来源于lcmv克隆13。在具体的实施方式中，所述沙粒病毒颗粒来源于lcmv株we。在具体的实施方式中，所述沙粒病毒颗粒来源于lcmv克隆13和株we。在一个实施方式中，本文公开了用于治疗对象中黑素瘤的方法，其包括向对其有需要的对象施用沙粒病毒颗粒和化疗剂，其中所述沙粒病毒颗粒被工程化以包含含有下列的沙粒病毒基因组节段：(i)编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列；和(ii)处于所述orf的野生型位置以外的位置的至少一种沙粒病毒开放阅读框架(“orf”)，其中所述orf编码所述沙粒病毒颗粒的糖蛋白(“gp”)、核蛋白(“np”)、基质蛋白z(“z蛋白”)或者rna依赖的rna聚合酶l(“l蛋白”)，其中所述肿瘤抗原或肿瘤相关抗原选自gp100、trp1和trp2，所述化疗剂是环磷酰胺，所述沙粒病毒颗粒来源于lcmv并且是包含一个l节段和两个s节段的三节段沙粒病毒颗粒，并且其中，在所述两个s节段中的一个中，编码gp的orf受沙粒病毒3'utr的控制，并且两个s节段中的每一个包含编码所述肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。(c)药物组合物和试剂盒在某些实施方式中，本文提供了组合物，例如，药物、免疫原性或疫苗组合物，其包含本文所提供的沙粒病毒颗粒，包括三-节段沙粒病毒颗粒、本文所提供的化疗剂和药物可用的载体。因此，在一些实施方式中，本文提供了包含如本文所提供的沙粒病毒颗粒、如本文所提供的化疗剂和药物可用的载体的药物组合物。在某些实施方式中，包含在所述组合物内的沙粒病毒颗粒是本文所提供的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒。在某些实施方式中，包含在所述组合物内的沙粒病毒颗粒是本文所提供的三-节段沙粒病毒颗粒，其包括感染性、复制-缺陷型三-节段沙粒病毒颗粒或者有复制能力的三-节段沙粒病毒颗粒。因此，在某些实施方式中，本文所提供的组合物，包括药物、免疫原性或疫苗组合物包含沙粒病毒颗粒，包括复制-缺陷型三-节段沙粒病毒颗粒，其中所述沙粒病毒颗粒被工程化以包含含有下列的基因组：(1)编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列；和(2)使其遗传信息在感染的细胞中扩增和表达，但是不能在非补体细胞中产生进一步感染性的子代颗粒的能力。此外，在某些实施方式中，本文所提供的组合物，包括药物、免疫原性或疫苗组合物包含有复制能力的三-节段沙粒病毒颗粒，其中所述沙粒病毒颗粒被工程化以包含含有下列的基因组：(1)编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列；(2)使其遗传信息在感染的细胞中扩增和表达的能力；和(3)在正常、非基因工程细胞中产生进一步感染性的子代颗粒的能力。在某些实施方式中，包含在本文所提供的沙粒病毒颗粒内的通过所述核苷酸序列所编码的肿瘤抗原或肿瘤相关抗原可以是一种或多种肿瘤抗原或肿瘤相关抗原，其选自：致癌病毒抗原、癌症-睾丸抗原、癌胚抗原、组织分化抗原、突变蛋白抗原、脂肪分化相关蛋白、aim-2、aldh1ai、bclx(l)、bing-4、calca、cd45、cpsf、细胞周期蛋白d1、dkki、enah(hmcna)、ga733(epcam)、epha3、ezh2、fgf5、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、g250/mn/caix、her-2/neu、ido1、igf2b3、il13rα2、小肠羧基酯酶、甲胎蛋白、激肽释放酶4、kif20a、lengsin、m-csf、mcsp、mdm-2、meloe、mmp-2、mmp-7、mucl、muc5ac、p53(非突变体)、pax5、pbf、prame、psma、rage、rage-1、rgs5、rhoc、rnf43、ru2as、分离蛋白1、sox1o、steap1(前列腺6次跨膜上皮抗原1)、存活素、端粒酶、vegf、wt1、egf-r、cea、cd20、cd33、cd52、melana/mart1、mart2、ny-eso-1、p53、magea1、magea3、mage-4、mage-5、mage-6、cdk4、α-辅肌动蛋白-4、artc1、bcr-abl、bcr-abl融合蛋白(b3a2)、b-raf、casp-5、casp-8、β-联蛋白、cdc27、cdk4、cdkn2a、clpp、coa-1、dek-can融合蛋白、eftud2、延伸因子2、etv6-aml、etv6-aml1融合蛋白、flt3-itd、fnl、gpnmb、ldlr-岩藻糖转移酶as融合蛋白、nfyc、ogt、os-9、pml-rarα融合蛋白、prdx5、ptprk、h-ras、k-ras(v-ki-ras2kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因)、n-ras、rbaf600、sirt2、snrpdl、ssx、ssx2、syt-ssxl或-ssx2融合蛋白、tgf-βrii、磷酸丙糖异构化酶、ormdm-2、lmp2、hpve6/e7、egfrviii(表皮生长因子变体iii)，个体遗传型，gd2，神经节糖苷g2)、ras-突变体、p53(突变体)、蛋白酶3(pr1)、酪氨酸酶、psa、htert、肉瘤易位断裂点、epha2、前列腺酸性磷酸酶pap、neo-pap、ml-iap、afp、erg(tmprss2ets融合基因)、na17、pax3、alk、雄激素受体、细胞周期蛋白b1、聚唾液酸、mycn、trp2、trp2-int2、gd3、岩藻糖基gm1、间皮素、psca、sle(a)、cyp1b1、plac1、gm3、boris、tn、globoh、ny-br-1、sart3、stn、碳酸酐酶ix、oy-tes1、精液蛋白17、lck、高分子量黑素瘤-相关抗原(hmwmaa)、akap-4、ssx2、xage1、b7h3、豆荚蛋白、tie2、page4、vegfr2、mad-ct-1、fap、pdgfr-β、mad-ct-2、for-相关抗原1、trp-1、gp100、ca-125、ca19-9、钙网膜蛋白、上皮细胞膜抗原(ema)、上皮细胞瘤抗原(eta)、cd19、cd34、cd99、cd117、嗜铬粒蛋白、细胞角蛋白、肌间线蛋白、胶质原纤维酸性蛋白(gfap)、巨囊性病液体蛋白(gcdfp-15)、hmb-45抗原、myo-d1、肌肉-特异性肌动蛋白(msa)、神经丝、神经元-特异性烯醇酶(nse)、胎盘碱性磷酸酶、突触素、甲状球蛋白、甲状腺转录因子-1、丙酮酸激酶m2型同工酶的二聚体形式(肿瘤m2-pk)、bagebage-1、cage、ctage、fate、gage、gage-1、gage-2、gage-3、gage-4、gage-5、gage-6、gage-7、hca661、hom-tes-85、magea、mageb、magec、na88、ny-sar-35、spanxb1、spa17、ssx、sycp1、tpte、碳水化合物/神经节糖苷gm2(癌胚抗原-免疫原性-1ofa-i-1)、gm3、ca15-3(ca27.29\bcaa)、ca195、ca242、ca50、cam43、cea、ebna、ef2、埃-巴二氏病毒抗原、hla-a2、hla-a11、hsp70-2、kiaao205、mum-1、mum-2、mum-3、i类肌球蛋白、gntv、herv-k-mel、lage-1、lage-2、(精液蛋白)sp17、scp-1、p15(58)、hom/mel-40、e2a-prl、h4-ret、igh-igk、myl-rar、tsp-180、p185erbb2、p180erbb-3、c-met、nm-23h1、tag-72、tag-72-4、ca-72-4、cam17.1、numa、13-联蛋白、p16、tage、ct7、43-9f、5t4、791tgp72、13hcg、bca225、btaa、cd68\kp1、co-029、htgp-175、m344、mg7-ag、mov18、nb\70k、ny-co-1、rcas1、sdccag16、ta-90、taal6、tlp、tps、cd22、cd27、cd30、cd70、前列腺特异性蛋白、tarp(t细胞受体γ可变阅读框架蛋白)、trp-p8、整合素αvβ3(cd61)、催乳激素或者ral-b、cd123、cll-1、cd38、cs-1、cd138和ror1。在某些实施方式中，所述核苷酸序列编码2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段。在某些实施方式中，通过包含在沙粒病毒内的核苷酸序列编码本文所提供的肿瘤抗原或肿瘤相关抗原的抗原性片段。在某些实施方式中，本文提供的组合物，包括药物、免疫原性或疫苗组合物，包含化疗剂。在某些实施方式中，所述化疗剂是烷化剂(例如，环磷酰胺)、铂-基治疗剂、抗代谢剂、局部异构酶抑制剂、细胞毒抗生素、插入剂、有丝分裂抑制剂、紫杉烷或其两种或更多种的组合。在某些实施方式中，所述烷化剂是氮芥、亚硝基脲、烷基磺酸盐、非经典烷化剂或者三氮烯。在某些实施方式中，所述化疗剂包括以下中的一个或多个：环磷酰胺、塞替派、氮芥(氮芥/氮芥)、乌拉莫司汀、美法仑、苯丁酸氮芥、异环磷酰胺、萘氮芥、胆磷酰胺、雌莫司汀、新恩比星、胆甾醇对苯乙酸氮芥、泼尼莫司汀、曲磷胺、乌拉莫司汀、苯达莫司汀、白消安、英丙舒凡、哌泊舒凡、卡莫司汀、洛莫司汀、吡葡亚硝脲、福莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀、链佐星、顺铂、卡铂、奈达铂、奥沙利铂、沙铂、四硝酸三铂、丙卡巴肼、六甲蜜胺、达卡巴嗪、米托唑胺、替莫唑胺、紫杉醇、多西他赛、长春碱、长春新碱、长春瑞滨、卡巴他赛、更生霉素(放线菌素d)、卡里奇霉素(calicheamicin)、达内霉素(dynemicin)、安吖啶、多柔比星(doxarubicin)、柔红霉素、表柔比星、米托蒽醌、伊达比星、吡柔比星、苯并多巴、卡波醌、米特多巴(meturedopa)、尤利多巴(uredopa)、六甲蜜胺、曲他胺、三乙烯磷酰胺、三乙烯硫代磷酰胺、三羟甲基蜜胺(trimethylolomelamine)、布拉他辛(bullatacin)、布拉它辛酮(bullatacinone)、喜树碱、拓扑替康、苔藓抑素、卡利斯汀(callystatin)、cc-1065、阿多来新、卡折来新、比折来新、念珠藻素、尾海兔素、倍癌毒素、kw-2189、cb1-tm1、艾榴塞洛素、水鬼蕉碱(pancratistatin)、匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)、海绵抑制素、氯屈膦酸、埃斯培拉霉素(esperamicin)、新制癌菌素发色团、阿克拉霉素(aclacinomysin)、安曲霉素、偶氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素c、卡柔比星(carabicin)、洋红霉素、嗜癌菌素、色霉素(chromomycinis)、地托比星、6-重氮-5-氧-l-正亮氨酸、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素、麦考酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素(potfiromycin)、嘌罗霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链佐星、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶(5-fu)、二甲叶酸、蝶罗呤、三甲曲沙、氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫唑嘌呤胺、硫鸟嘌呤、安西他滨、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氮尿苷、卡普睾酮、屈他雄酮丙酸酯、环硫雄醇、美雄烷、睾内酪、米托坦、曲洛司坦、亚叶酸、醋葡醛内酯、醛磷酰胺糖苷、氨基乙酰丙酸、恩尿嘧啶、贝斯布西(bestrabucil)、比生群、依达曲沙(edatraxate)、地磷酰胺(defofamine)、秋水仙胺、地吖醌、依氟鸟氨酸、依利醋铵、依托格鲁、硝酸镓、羟基脲、蘑菇多糖、氯尼达明(lonidainine)、美登素、安丝菌素、米托胍腙、莫比达摩(mopidanmol)、二胺硝吖啶(nitraerine)、喷司他丁、蛋氨氮芥(phenamet)、吡柔比星、洛索蒽醌、鬼臼酸、2-乙酰肼、psk多糖复合物、雷佐生、根霉素、西佐喃、锗螺胺、细交链孢菌酮酸、三亚胺醌、2,2',2”-三氯三乙胺；t-2毒素、疣孢霉素a(verracurina)、杆孢菌素a和蛇形菌素(anguidine)、氨基甲酸乙酯、长春地辛、甘露莫司汀、二溴甘露醇、二溴卫矛醇、哌泊溴烷、加西托星(gacytosine)、阿糖胞苷(“ara-c”)、依托泊苷(vp-16)、长春瑞滨、诺凡特龙(novantrone)、替尼泊苷、依达曲沙、氨基蝶呤、希罗达、伊班膦酸、伊立替康(例如、cpt-11)、局部异构酶抑制剂rfs2000、二氟甲基鸟氨酸(dmfo)、视黄酸、卡培他滨、普利霉素(plicomycin)、吉西他滨、长春瑞滨、反铂，以及任何上述化合物的药物可用的盐、酸或衍生物。在具体的实施方式中，所述化疗剂包括环磷酰胺。在某些实施方式中，所述氮芥是氮芥、环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、异环磷酰胺或白消安。在某些实施方式中，所述化疗剂使dna烷基化。在某些实施方式中，所述化疗剂使dna烷基化，从而导致形成链间交联(“icls”)。在某些实施方式中，本文提供的组合物，包括药物、免疫原性或疫苗组合物，包含化疗剂和抑制、降低或干扰阴性检查点调节因子活性的免疫检查点抑制剂。在某些实施方式中，所述阴性检查点调节因子选自细胞毒t-淋巴细胞抗原-4(ctla-4)、cd80、cd86、细胞程序死亡1(pd-1)、细胞程序死亡配体1(pd-l1)、细胞程序死亡配体2(pd-l2)、淋巴细胞活化基因-3(lag-3；也称为cd223)、半乳凝素-3、b和t淋巴细胞衰减因子(btla)、t细胞膜蛋白3(tim3)、半乳凝素-9(gal9)、b7-h1、b7-h3、b7-h4、具有ig和itim域的t细胞免疫受体(tigit/vstm3/wucam/vsig9)、t细胞激活的v-域ig抑制剂(vista)、糖皮质激素-诱导的肿瘤坏死因子受体-相关(gitr)蛋白、疱疹病毒进入介导子(hvem)、ox40、cd27、cd28、cd137.cgen-15001t、cgen-15022、cgen-15027、cgen-15049、cgen-15052和cgen-15092。在某些实施方式中，所述免疫检查点抑制剂是抗pd-1抗体。在某些实施方式中，可以在本文所述的方法中使用本文提供的组合物，包括药物、免疫原性或疫苗组合物。因此，在某些实施方式中，所述组合物可以用于肿瘤病的治疗。在具体某些实施方式中，本文提供的组合物可以用于肿瘤病的治疗，所述肿瘤病选自急性淋巴母细胞性白血病；急性淋巴细胞性淋巴瘤；急性淋巴细胞白血病；急性髓性白血病；急性髓细胞性白血病(成人/儿童)；肾上腺皮质癌；aids-相关癌症；aids-相关淋巴瘤；肛门癌；阑尾癌；星形细胞瘤；非典型畸胎样/横纹样瘤；基底细胞癌；胆管癌，肝外(肝胆管型肝癌)；膀胱癌；骨骨肉瘤/恶性纤维组织细胞瘤；脑癌(成人/儿童)；脑肿瘤，小脑星形细胞瘤(成人/儿童)；脑肿瘤，大脑星形细胞瘤/恶性神经胶质瘤脑肿瘤；脑肿瘤，室管膜瘤；脑肿瘤，成神经管细胞瘤；脑肿瘤，幕上原始神经外胚层瘤；脑肿瘤，视觉传导路和下丘脑神经胶质瘤；脑干神经胶质瘤；乳腺癌；支气管腺瘤/类癌；支气管肿瘤；伯基特淋巴瘤；儿童癌；胃肠类癌肿瘤；类癌瘤；成人癌瘤，未知原发位点；原发未知的癌瘤；中枢神经系统胚胎性瘤；中枢神经系统淋巴瘤，原发；宫颈癌；儿童肾上腺皮质癌；儿童癌症；儿童大脑星形细胞瘤；脊索瘤，儿童；慢性淋巴细胞性白血病；慢性粒性白血病；慢性粒细胞性白血病；慢性脊髓增生病；结肠癌；结肠直肠癌；颅咽管瘤；皮肤t-细胞淋巴瘤；促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤；肺气肿；子宫内膜癌；成室管膜细胞瘤；室管膜瘤；食道癌；尤文氏家族肿瘤中的尤因氏肉瘤；颅外生殖细胞肿瘤；性腺外生殖细胞肿瘤；肝外胆管癌；胆囊癌；胃(胃)癌；胃类癌瘤；胃肠类癌肿瘤；胃肠道间质瘤；生殖细胞肿瘤：颅外、性腺外或卵巢妊娠滋养细胞肿瘤；妊娠滋养细胞肿瘤，未知原发位点；神经胶质瘤；脑干神经胶质瘤；神经胶质瘤，儿童视觉传导路和下丘脑；毛细胞白血病；头颈癌；心癌；肝细胞(肝)癌；霍奇金淋巴瘤；舌癌；下丘脑和视觉传导路神经胶质瘤；眼内黑素瘤；胰岛细胞癌(内分泌胰腺)；卡波西肉瘤；肾癌(肾细胞癌)；郎格罕细胞组织细胞增生症；喉癌；唇和口腔癌；脂肪肉瘤；肝癌(原发)；肺癌，非小细胞；肺癌，小细胞；淋巴瘤，原发性中枢神经系统；瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症；男性乳腺癌；恶性骨纤维组织细胞瘤/骨肉瘤；成神经管细胞瘤；髓上皮瘤；黑素瘤；黑素瘤，眼内(眼)；梅克尔细胞癌；梅克尔细胞皮肤癌；间皮瘤；间皮瘤，成人恶性；转移性颈鳞癌，原发位点隐匿；口癌；多发性内分泌瘤综合征；多发性骨髓瘤/浆细胞瘤；阿利贝尔氏病，脊髓发育不良综合征；脊髓发育不良/骨髓增殖性疾病；粒细胞性白血病，慢性；骨髓性白血病，成人急性；骨髓性白血病，儿童急性；骨髓瘤，多发性(骨-骨髓癌)；脊髓增生病，慢性；鼻腔和鼻窦癌；鼻咽癌；成神经细胞瘤，非小细胞肺癌；非霍奇金淋巴瘤；寡枝神经胶质细胞瘤；口腔癌；口腔癌；口咽癌；骨肉瘤/恶性骨纤维组织细胞瘤；卵巢癌；卵巢上皮癌(表面上皮-间质肿瘤)；卵巢生殖细胞肿瘤；卵巢低度恶性潜能肿瘤；胰腺癌；胰腺癌，胰岛细胞；乳头状瘤病；鼻窦和鼻腔癌；甲状旁腺癌；阴茎癌；咽癌；嗜铬细胞瘤；松果体星形细胞瘤；松果体胚组织瘤；中分化松果体实质细胞瘤；成松果体细胞瘤和幕上原始神经外胚层瘤；垂体瘤；垂体腺瘤；浆细胞瘤/多发性骨髓瘤；胸膜肺胚细胞瘤；原发性中枢神经系统淋巴瘤；前列腺癌；直肠癌；肾细胞癌(肾癌)；肾盂和输尿管，移行细胞癌；涉及染色体15上的nut基因的呼吸道癌；成视网膜细胞瘤；横纹肌肉瘤，儿童；唾液腺癌；肉瘤，尤文氏家族肿瘤；塞扎里氏综合征；皮肤癌(黑素瘤)；皮肤癌(非黑素瘤)；小细胞肺癌；小肠癌软组织肉瘤；软组织肉瘤；脊髓瘤；鳞状细胞癌；颈鳞癌，原发位点隐匿，转移性；胃(胃)癌；幕上原始神经外胚层瘤；t细胞淋巴瘤，皮肤(阿利贝尔氏病和塞扎里氏综合征)；睾丸癌；咽喉癌；胸腺瘤；胸腺瘤和胸腺癌；甲状腺癌；甲状腺癌，儿童；肾盂和输尿管的移行细胞癌；尿道癌；子宫癌，子宫内膜；子宫肉瘤；阴道癌；外阴癌；和胚胎性癌肉瘤。本文还提供了可以用于实施本文所述的方法的试剂盒。因此，在某些实施方式中，本文所提供的试剂盒包含一个或多个容器和使用说明，其中所述一个或多个容器包含本文所提供的组合物(例如，药物、免疫原性或疫苗组合物)。在其它某些实施方式中，本文所提供的试剂盒包含容器，所述容器分别含有用于实施本文所述的方法的活性成分。因此，在某些实施方式中，本文所提供的试剂盒包含两个或更多个容器和使用说明，其中所述容器之一包含本文所提供的沙粒病毒颗粒，包括三-节段沙粒病毒颗粒，另一个容器包含本文所提供的化疗剂。在具体的实施方式中，本文所提供的试剂盒包含两个或更多个容器和使用说明，其中所述容器之一包含本文所提供的沙粒病毒颗粒，包括三-节段沙粒病毒颗粒，另一个容器包含本文所提供的化疗剂，其中所述沙粒病毒颗粒被工程化以包含含有下列的基因组：编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列；和使其遗传信息在感染的细胞中扩增和表达，但是不能在非补体细胞中产生进一步感染性的子代颗粒的能力。此外，在某些实施方式中，所述容器之一包含三-节段沙粒病毒颗粒，其被工程化以包含含有下列的基因组：编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列；使其遗传信息在感染的细胞中扩增和表达的能力；和在正常、非基因工程细胞中产生进一步感染性的子代颗粒的能力。3.3惯例和缩写4.附图说明图1.野生型沙粒病毒基因组由短rna节段(1；～3.4kb)和大rna节段(2；～7.2kb)组成。短节段具有编码核蛋白(3)和糖蛋白(4)的开放阅读框架。大节段编码rna依赖的rna聚合酶l(5)和基质蛋白z(6)。野生型沙粒病毒可以通过使糖蛋白基因缺失，并且作为所述糖蛋白基因的替代，插入针对其诱导免疫应答的本文所述的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段(7)来产生复制-缺陷型疫苗载体。图2.二和三-节段lcmv的基因组组织的示意图。野生型lcmv的二-节段基因组由编码gp和np的一个s节段和编码z蛋白和l蛋白的一个l节段组成(i)。两节段均侧接各自的5'和3'utr。重组三-节段lcmv(r3lcmv)的基因组由一个l和两个s节段组成，其中其具有将感兴趣的基因(在本文中是gfp，其可以替代地为如本文所述的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段)插入所述s节段中的每一个中的一个位置。r3lcmv-gfp天然(nat)在它们的天然位置具有所有病毒基因(ii)，然而，r3lcmv-gfp人工(art)中的gporf人工邻接并且在3'utr的控制下表达(iii)。图3a-c.监测用b16f10肿瘤细胞肿瘤攻击后c57bl/6小鼠中的肿瘤生长(a)以及动物存活(b和c)。对于保持未处理(组1)、用环磷酰胺治疗(组2)、用载体混合物(r3lcmv-gp100、r3lcmv-trp1和r3lcmv-trp2中的每一个)治疗(组3)或者用环磷酰胺和载体混合物的组合治疗(组4)的c57bl/6小鼠显示了结果。符号代表每组三只小鼠(组1-3)或四只小鼠(组4)的平均值±sem。图4a-b.与仅用r3lcmv载体治疗的动物相比，在用环磷酰胺和r3lcmv-载体的组合治疗的小鼠中引起的(a)trp2-特异性cd8+t细胞或者(b)gp100-特异性cd8+t细胞的相对(左图)和绝对(右图)数目。图5.在第0天，用105rcvffu的r3lcmv-e7e6(组1)或者105rcvffu的r3picv-e7e6(组2)使c57bl/6小鼠(每组5只小鼠)静脉内免疫或者使c57bl/6小鼠保持未处理(组3)。在第13天，用105rcvffu的r3lcmv-e7e6对组1和2中的小鼠进行加强。组3的小鼠仍保持未处理。随后，通过四聚体染色(db-e7(49-57)-四聚体)，在第20(a)和42(b)天分析血液，并且在第51天分析测试动物脾脏(c)中e7-特异性cd8+t细胞的频率。图6.在实验第0天，用来源于用hpv16e6和e7以及c-ha-ras致癌基因共转化的小鼠原代上皮细胞的1×105个tc-1肿瘤细胞对雌性c57bl/6小鼠(对于实验组和缓冲液组，分别为每组n＝5或者n＝3只动物)皮下攻击。10天后(实验第10天)，用缓冲液(组1)或者105rcvffu的r3lcmv-e7e6(组2)或者105rcvffu的r3picv-e7e6(组3)使小鼠静脉内免疫。初免后14天(实验第24天)，组2和3中的小鼠接受105rcvffu的r3lcmv-e7e6的加强施用。随后，随时间监测肿瘤生长。显示了算术平均数+/-sem。箭头表示疫苗接种的时间点。图7a-b.在第0天将1×105个b16f10肿瘤细胞皮下植入c57bl/6小鼠。随后，将小鼠保持未处理(组1)，在第6天用2mg环磷酰胺(ctx)并且在第10、13、16、19和22天用分别为200μg的抗pd-1和抗ctla-4腹膜内治疗(组2)，在第6天用2mg环磷酰胺腹膜内治疗并且在第7天用1.2×105ffu(总计)的r3lcmv载体混合物(r3lcmv-gp100、r3lcmv-trp1和r3lcmv-trp2)静脉内注射(组3)，或者在第6天用环磷酰胺治疗，在第7天用r3lcmv-载体混合物治疗并且在第10、13、16、19和22天用抗pd-1和抗ctla-4治疗(组4)。监测肿瘤尺寸(a)和动物存活百分比(b)。5.发明的详细说明5.1复制-缺陷型沙粒病毒颗粒在某些实施方式中，与化疗剂组合的包含编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的复制-缺陷型沙粒病毒颗粒可以用作治疗肿瘤病，如癌症的免疫疗法。术语“瘤的”或“瘤”是指细胞或组织的异常新生物。这种异常新生物可以形成块，也称为肿瘤或瘤形成。瘤包括良性瘤、原位瘤、恶性瘤和具有不确定或未知作用的瘤。在某些实施方式中，使用本文所述的方法和组合物治疗的肿瘤病是癌症。本文提供了用于治疗和/或预防肿瘤病，如癌症的组合治疗。具体地，这些组合治疗包括与一种或多种化疗剂组合施用包含编码一个或多个肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒颗粒或病毒载体。这些基因修饰的病毒可以施用于对象以用于治疗肿瘤病，如癌症。本文所提供的沙粒病毒，包括编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的详细说明可见于5.1.(a)和5.1.(b)节。另外，在5.1.(c)节中更详细地描述了用于在本文所述的方法和组合物中使用的沙粒病毒颗粒或病毒载体的产生方法。除向对象施用沙粒病毒颗粒或病毒载体外，本文所提供的用于治疗肿瘤病的免疫疗法可以包括化疗剂。“化疗剂”是细胞毒抗癌剂，并且可以通过它们在细胞内的活性模式，例如，它们影响细胞周期的阶段进行分类(例如，有丝分裂抑制剂)。作为另外一种选择，化疗剂的特点可以基于交联dna、插入到dna中或通过影响核酸合成引起染色体畸变(例如，烷化剂)的能力以及其它作用机制。化疗剂的特点还可以基于化学组成或结构(例如，铂-基治疗剂)。因此，在某些实施方式中，本文提供了使用包含编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒颗粒或病毒载体和化疗剂治疗肿瘤病的方法和组合物。因此，在某些实施方式中，本文提供了使用包含编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒颗粒或病毒载体和化疗剂治疗肿瘤病的方法和组合物。另外，在某些实施方式中，本文提供了包含含有编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒颗粒或病毒载体和化疗剂的组合物。在某些实施方式中，本文所提供的沙粒病毒颗粒是感染性的复制缺陷型沙粒病毒颗粒。本文提供了使用沙粒病毒颗粒或病毒载体治疗肿瘤病，例如，非恶性肿瘤或癌症的方法。具体地，本文提供了治疗对象中肿瘤病，如癌症的方法，其包括向所述对象施用一种或多种表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒。在具体的实施方式中，本文提供了治疗对象中癌症的方法，其包括单独或与一种或多种化疗剂组合，向所述对象施用一种或多种表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒。在某些实施方式中，如本文所述，用表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒进行免疫提供了细胞毒性t细胞应答，这可以通过施用化疗剂提高。在5.1.(e)和5.1.(f)节中更详细地描述了使用沙粒病毒颗粒或病毒载体和本文所提供的化疗剂的方法和组合物。除与化疗剂组合向对象施用沙粒病毒颗粒或病毒载体外，本文所提供的用于治疗肿瘤病的免疫疗法还可以包括免疫检查点调节因子。术语“免疫检查点调节因子”(也称为“检查点调节因子”或者“检查点调控因子”)是指调节(例如，完全或部分降低、抑制、干扰、激活、刺激、提高、加强或支持)一个或多个检查点分子的功能的分子或化合物。因此，免疫检查点调节因子可以是免疫检查点抑制剂或免疫检查点激活剂。“免疫检查点抑制剂”是指抑制、降低或干扰阴性检查点调节因子活性的分子。在某些实施方式中，用于和本文所公开的方法和组合物一起使用的免疫检查点抑制剂可以直接抑制阴性检查点调节因子的活性，或者降低阴性检查点调节因子的表达，或者干扰阴性检查点调节因子与结合伴侣(例如，配体)的相互作用。用于和本文所公开的方法和组合物一起使用的免疫检查点抑制剂包括靶向阴性检查点调节因子的表达的蛋白质、多肽、肽、反义寡核苷酸、抗体、抗体片段或抑制性rna分子。“阴性检查点调节因子”是指在通过配体或反受体接合之后，通过向t细胞递送阴性信号来下调免疫应答(例如，t细胞激活)的分子。阴性-检查点调节因子的示例性功能是防止不成比例的免疫激活，最大程度减小附带损害和/或维持外周自耐受性。在某些实施方式中，阴性检查点调节因子是通过抗原递呈细胞表达的配体或受体。在某些实施方式中，阴性检查点调节因子是通过t细胞表达的配体或受体。在某些实施方式中，阴性检查点调节因子是通过抗原递呈细胞和t细胞两者表达的配体或受体。(a)感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒在某些实施方式中，本文所提供的基因修饰的沙粒病毒，其中所述沙粒病毒：·是感染性的；·不可以在非补体细胞(即，不表达从复制-缺陷型沙粒病毒中消失的功能性并导致其成为复制-缺陷型的细胞)中形成感染性的子代病毒；·能够复制其基因组并表达其遗传信息；和·编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段，可以与本文所提供的方法和组合物一起使用，如与化疗剂组合。本文所述的基因修饰的沙粒病毒是感染性的，即它可以附接至宿主细胞并将其遗传物质释放到宿主细胞中。本文所述的基因修饰的沙粒病毒是复制-缺陷型的，即所述沙粒病毒不能在非补体细胞中产生进一步的感染性子代颗粒。具体地，修饰所述沙粒病毒的基因组(例如，通过orf的除去或功能性失活)，从而具有修饰的基因组的病毒不再能产生感染性的子代病毒。非补体细胞是不提供已通过病毒基因组修饰从复制-缺陷型沙粒病毒中除去的功能性的细胞(例如，如果除去编码gp蛋白的orf或使其功能性失活，则非补体细胞不提供gp蛋白)。然而，本文所提供的基因修饰的沙粒病毒能够在补体细胞中产生感染性的子代病毒。补体细胞是(intrans)提供已通过病毒基因组修饰从复制-缺陷型沙粒病毒中除去的功能性的细胞(例如，如果除去编码gp蛋白的orf或使其功能性失活，则补体细胞的确提供gp蛋白)。可以通过技术人员已知的任何方法(例如，瞬时或稳定表达)来实现补体功能性(例如，gp蛋白)的表达。本文所述的基因修饰的沙粒病毒可以在已通过所述病毒感染的细胞中扩增并表达其遗传信息。本文所提供的基因修饰的沙粒病毒可以包括编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列，如(但不限于)5.1.(b)节中所述的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段。在某些实施方式中，本文提供了基因修饰的沙粒病毒，其中除去沙粒病毒基因组的orf或使其功能性失活，从而所得的病毒不可以在非补体细胞中产生进一步的感染性子代病毒。可以在补体细胞中(即，在表达已除去或功能性失活的沙粒病毒orf的细胞中)产生包含其中除去orf或使其功能性失活的基因修饰的基因组的沙粒病毒颗粒。一旦感染宿主细胞，则可以将所得沙粒病毒颗粒的遗传物质转移至宿主细胞，其中所述遗传物质可以表达和扩增。另外，本文所提供的基因修饰的沙粒病毒颗粒的基因组编码可以在宿主细胞中表达的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段。在某些实施方式中，所述沙粒病毒的orf缺失或功能性失活并被如本文所述的编码肿瘤抗原或肿瘤相关抗原的核苷酸所替代。在具体的实施方式中，编码沙粒病毒的糖蛋白gp的orf缺失或功能性失活。在某些实施方式中，基因的功能性失活消除了任何翻译产物。在某些实施方式中，功能性失活是指允许一定翻译的遗传变化，然后，翻译产物不再是功能性的并且不可以替代野生型蛋白。在某些实施方式中，消除编码沙粒病毒糖蛋白(gp)的orf以产生用于在本文所提供的方法和组合物中使用的复制-缺陷型沙粒病毒。在具体的实施方式中，复制-缺陷型沙粒病毒包含含有编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的基因组节段。因此，在某些实施方式中，本文所提供的基因修饰的沙粒病毒颗粒包含基因组节段，所述基因组节段a)具有存在于所述基因组节段的野生型形式中的orf的缺失或功能性失活；和b)编码(有义或反义)肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段。在某些实施方式中，通过插入复制-缺陷型沙粒病毒的基因组中的核苷酸所编码的抗原可以编码(例如)肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段或者肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的组合，其包括(但不限于)致癌病毒抗原、癌症-睾丸抗原、癌胚抗原、组织分化抗原、突变蛋白抗原、脂肪分化相关蛋白、aim-2、aldh1ai、bclx(l)、bing-4、calca、cd45、cpsf、细胞周期蛋白d1、dkki、enah(hmcna)、ga733(epcam)、epha3、ezh2、fgf5、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、g250/mn/caix、her-2/neu、ido1、igf2b3、il13rα2、小肠羧基酯酶、甲胎蛋白、激肽释放酶4、kif20a、lengsin、m-csf、mcsp、mdm-2、meloe、mmp-2、mmp-7、mucl、muc5ac、p53(非突变体)、pax5、pbf、prame、psma、rage、rage-1、rgs5、rhoc、rnf43、ru2as、分离蛋白1、sox1o、steap1(前列腺6次跨膜上皮抗原1)、存活素、端粒酶、vegf、wt1、egf-r、cea、cd20、cd33、cd52、gp100蛋白、melana/mart1、mart2、ny-eso-1、p53、magea1、magea3、mage-4、mage-5、mage-6、cdk4、α-辅肌动蛋白-4、artc1、bcr-abl、bcr-abl融合蛋白(b3a2)、b-raf、casp-5、casp-8、β-联蛋白、cdc27、cdk4、cdkn2a、clpp、coa-1、dek-can融合蛋白、eftud2、延伸因子2、etv6-aml、etv6-aml1融合蛋白、flt3-itd、fnl、gpnmb、ldlr-岩藻糖转移酶as融合蛋白、nfyc、ogt、os-9、pml-rarα融合蛋白、prdx5、ptprk、h-ras、k-ras(v-ki-ras2kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因)、n-ras、rbaf600、sirt2、snrpdl、ssx、ssx2、syt-ssxl或-ssx2融合蛋白、tgf-βrii、磷酸丙糖异构化酶、ormdm-2、lmp2、hpve6/e7、egfrviii(表皮生长因子变体iii)，个体遗传型，gd2，神经节糖苷g2)、ras-突变体、p53(突变体)、蛋白酶3(pr1)、酪氨酸酶、psa、htert、肉瘤易位断裂点、epha2、前列腺酸性磷酸酶pap、neo-pap、ml-iap、afp、erg(tmprss2ets融合基因)、na17、pax3、alk、雄激素受体、细胞周期蛋白b1、聚唾液酸、mycn、trp2、trp2-int2、gd3、岩藻糖基gm1、间皮素、psca、sle(a)、cyp1b1、plac1、gm3、boris、tn、globoh、ny-br-1、sart3、stn、碳酸酐酶ix、oy-tes1、精液蛋白17、lck、高分子量黑素瘤-相关抗原(hmwmaa)、akap-4、ssx2、xage1、b7h3、豆荚蛋白、tie2、page4、vegfr2、mad-ct-1、fap、pdgfr-β、mad-ct-2、for-相关抗原1、trp-1、ca-125、ca19-9、钙网膜蛋白、上皮细胞膜抗原(ema)、上皮细胞瘤抗原(eta)、cd19、cd34、cd99、cd117、嗜铬粒蛋白、细胞角蛋白、肌间线蛋白、胶质原纤维酸性蛋白(gfap)、巨囊性病液体蛋白(gcdfp-15)、hmb-45抗原、myo-d1、肌肉-特异性肌动蛋白(msa)、神经丝、神经元-特异性烯醇酶(nse)、胎盘碱性磷酸酶、突触素、甲状球蛋白、甲状腺转录因子-1、丙酮酸激酶m2型同工酶的二聚体形式(肿瘤m2-pk)、bagebage-1、cage、ctage、fate、gage、gage-1、gage-2、gage-3、gage-4、gage-5、gage-6、gage-7、hca661、hom-tes-85、magea、mageb、magec、na88、ny-sar-35、spanxb1、spa17、ssx、sycp1、tpte、碳水化合物/神经节糖苷gm2(癌胚抗原-免疫原性-1ofa-i-1)、gm3、ca15-3(ca27.29\bcaa)、ca195、ca242、ca50、cam43、cea、ebna、ef2、埃-巴二氏病毒抗原、hla-a2、hla-a11、hsp70-2、kiaao205、mum-1、mum-2、mum-3、i类肌球蛋白、gntv、herv-k-mel、lage-1、lage-2、(精液蛋白)sp17、scp-1、p15(58)、hom/mel-40、e2a-prl、h4-ret、igh-igk、myl-rar、tsp-180、p185erbb2、p180erbb-3、c-met、nm-23h1、tag-72、tag-72-4、ca-72-4、cam17.1、numa、13-联蛋白、p16、tage、ct7、43-9f、5t4、791tgp72、13hcg、bca225、btaa、cd68\kp1、co-029、htgp-175、m344、mg7-ag、mov18、nb\70k、ny-co-1、rcas1、sdccag16、ta-90、taal6、tlp、tps、cd22、cd27、cd30、cd70、前列腺特异性蛋白、tarp(t细胞受体γ可变阅读框架蛋白)、trp-p8、整合素αvβ3(cd61)、催乳激素或者ral-b、cd123、cll-1、cd38、cs-1、cd138和ror1。在5.1.(b)节中提供了本文所述的抗原的详细说明。用于和本文所提供的方法和组合物一起使用的沙粒病毒可以是旧世界病毒，例如，拉沙病毒、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(lcmv)、莫巴拉病毒、莫佩亚病毒或伊派病毒，或者新世界病毒，例如，阿马帕里病毒、弗莱克索病毒、关纳里托病毒、胡宁病毒、拉蒂诺病毒、马丘波病毒、奥利华斯病毒、帕腊南病毒、皮秦德病毒、皮里陶病毒、萨比亚病毒、塔卡里伯病毒、塔米阿米病毒、熊峡谷病毒或白水河病毒。野生型沙粒病毒基因组由短rna节段(～3.4kb)和大rna节段(～7.2kb)组成。短节段具有编码核蛋白np和糖蛋白gp基因的orf。大节段包含rna依赖的rna聚合酶l和基质蛋白z基因。野生型沙粒病毒可以通过将糖蛋白基因取代为一个或多个对其将引起免疫应答的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段来使得复制-缺陷型产生疫苗载体。如本文所述的表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段或者肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的组合的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒可以用于治疗(以免疫疗法方式)患有本文所述的肿瘤病的对象。已知沙粒病毒病和野生型沙粒病毒感染中的免疫抑制是由未被制止的病毒复制所产生的。通过例如使颗粒释放所需的z基因或者靶细胞感染所需的gp基因从它们的基因组上缺失，以终止沙粒病毒颗粒的复制(即产生感染性子代病毒颗粒的能力)，可以通过向例如疫苗受体施用的或者偶然传递给参与医学或生物技术应用的人或传递给动物的接种物的方式来限制感染细胞的总数。因此，终止沙粒病毒颗粒的复制防止了由于载体颗粒的故意或偶然传递所造成的病理发生。在本发明中，一个重要的方面在于出于表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的目的，以有益的方式利用上述复制终止的必要性。在某些实施方式中，通过其基因组的基因修饰使沙粒病毒颗粒成为复制缺陷型。这些对基因组的修饰可以包括：·orf(例如，编码gp、np、l或z蛋白的orf)的缺失；·orf(例如，编码gp、np、l或z蛋白的orf)的功能性失活。例如，这可以通过引入错义或无义突变来实现。；·orf序列的改变(例如，s1p切割位点与另一种蛋白酶的切割位点的交换)；·基因组节段之一的5'或3'端之一的突变；·基因间区(即，l或s基因组节段的基因间区)的突变。在某些实施方式中，本文所述的表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒是淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(lcmv)，其中通过用编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的orf取代编码gp蛋白的orf来修饰所述病毒的s节段。在某些实施方式中，野生型沙粒病毒载体基因组可以设计以至少保留两节段和/或基因间区(igr)的5'和3'非翻译区(utr)上的必需调控元件。不受理论束缚，感染细胞中用于基因表达的最小反式作用因子作为可以表达的orf保留在载体基因组中，然而与天然的相比，它们可以不同地布置在基因组中并且可以置于不同的启动子的控制下，或者可以从内部核糖体进入位点表达。在某些实施方式中，从内源沙粒病毒启动子之一(即s节段的5'utr、3'utr、l节段的5'utr、3'utr)转录编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核酸。在其它实施方式中，从可以通过病毒rna-依赖的rna聚合酶、通过细胞rna聚合酶i、rna聚合酶ii或rna聚合酶iii所阅读的异源引入的启动子序列表达编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核酸，如分别在病毒utr、28s核糖体rna启动子、β-肌动蛋白启动子或者5s核糖体rna启动子中天然发现的病毒启动子序列的复制。在某些实施方式中，通过它们自身或者作为通过融合至沙粒病毒蛋白质orf的通读来转录和翻译编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核糖核酸，并且可以通过在适当的位置，在病毒转录本序列中引入一个或多个，例如，2个、3个或4个内部核糖体进入位点来提高宿主细胞中蛋白质的表达。在某些实施方式中，所产生的编码一个或多个肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的载体可以基于具体的lcmv株。lcmv株包括克隆13、mp株、armca1371、arme-250、we、ubc、traub、pasteur、810885、ch-5692、marseille#12、hp65-2009、200501927、810362、811316、810316、810366、20112714、douglas、gr01、sn05、cabn和它们的衍生物。在某些实施方式中，所产生的编码一个或多个肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的载体可以基于lcmv克隆13。在其它实施方式中，所产生的编码一个或多个肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的载体可以基于lcmvmp株。在某些实施方式中，所产生的编码一个或多个肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的载体可以基于具体的胡宁病毒株。胡宁病毒株包括疫苗株xj13、xj#_44和candid#1以及人分离株iv4454。在某些实施方式中，所产生的编码一个或多个肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的载体基于胡宁病毒candid#1株。(b)肿瘤抗原、肿瘤相关抗原和抗原片段在某些实施方式中，具有本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒颗粒可以与本文所提供的方法和组合物一起使用，如与化疗剂组合。在某些实施方式中，用于和本文所述的方法和组合物一起使用的肿瘤抗原或肿瘤相关抗原是在赘生性细胞或肿瘤，如癌细胞或恶性肿瘤中或上表达的免疫原性蛋白。在某些实施方式中，用于和本文所述的方法和组合物一起使用的肿瘤抗原或肿瘤相关抗原是非特异性、突变、过表达或异常表达的蛋白质，其可以存在于赘生性细胞或肿瘤和正常细胞或组织两者上。在某些实施方式中，用于和本文所述的方法和组合物一起使用的肿瘤抗原或肿瘤相关抗原是限制于肿瘤细胞的肿瘤特异性抗原。在某些实施方式中，用于和本文所述的方法和组合物一起使用的肿瘤抗原是限制于癌细胞的癌症特异性抗原。在某些实施方式中，肿瘤抗原或肿瘤相关抗原可以显示出以下特征中的一种、两种、三种或更多种，包括全部：过表达/积累(即，通过正常和肿瘤组织两者表达，但在瘤形成中高度表达)、癌胚(即，通常仅在胎儿组织和在癌性体细胞中表达)、致癌病毒(即，通过致瘤转化病毒编码)、癌症-睾丸(即，仅通过癌细胞和成人生殖组织，例如，睾丸表达)、谱系-限制的(即，很大程度上通过单一癌组织分型表达)、突变的(即，仅在由于遗传突变或者转录中的变化所产生的肿瘤组织中表达)、翻译后改变的(例如，糖基化中的肿瘤-相关变化)或者个体基因型的(即，从b或t淋巴细胞的恶性无性增殖所发展的)。在某些实施方式中，用于和本文所述的方法和组合物一起使用的肿瘤抗原或肿瘤相关抗原包括来自肿瘤病的抗原，所述肿瘤病包括急性淋巴母细胞性白血病；急性淋巴细胞性淋巴瘤；急性淋巴细胞白血病；急性髓性白血病；急性髓细胞性白血病(成人/儿童)；肾上腺皮质癌；aids-相关癌症；aids-相关淋巴瘤；肛门癌；阑尾癌；星形细胞瘤；非典型畸胎样/横纹样瘤；基底细胞癌；胆管癌，肝外(肝胆管型肝癌)；膀胱癌；骨骨肉瘤/恶性纤维组织细胞瘤；脑癌(成人/儿童)；脑肿瘤，小脑星形细胞瘤(成人/儿童)；脑肿瘤，大脑星形细胞瘤/恶性神经胶质瘤脑肿瘤；脑肿瘤，室管膜瘤；脑肿瘤，成神经管细胞瘤；脑肿瘤，幕上原始神经外胚层瘤；脑肿瘤，视觉传导路和下丘脑神经胶质瘤；脑干神经胶质瘤；乳腺癌；支气管腺瘤/类癌；支气管肿瘤；伯基特淋巴瘤；儿童癌；胃肠类癌肿瘤；类癌瘤；成人癌瘤，未知原发位点；原发未知的癌瘤；中枢神经系统胚胎性瘤；中枢神经系统淋巴瘤，原发；宫颈癌；儿童肾上腺皮质癌；儿童癌症；儿童大脑星形细胞瘤；脊索瘤，儿童；慢性淋巴细胞性白血病；慢性粒性白血病；慢性粒细胞性白血病；慢性脊髓增生病；结肠癌；结肠直肠癌；颅咽管瘤；皮肤t-细胞淋巴瘤；促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤；肺气肿；子宫内膜癌；成室管膜细胞瘤；室管膜瘤；食道癌；尤文氏家族肿瘤中的尤因氏肉瘤；颅外生殖细胞肿瘤；性腺外生殖细胞肿瘤；肝外胆管癌；胆囊癌；胃(胃)癌；胃类癌瘤；胃肠类癌肿瘤；胃肠道间质瘤；生殖细胞肿瘤：颅外、性腺外或卵巢妊娠滋养细胞肿瘤；妊娠滋养细胞肿瘤，未知原发位点；神经胶质瘤；脑干神经胶质瘤；神经胶质瘤，儿童视觉传导路和下丘脑；毛细胞白血病；头颈癌；心癌；肝细胞(肝)癌；霍奇金淋巴瘤；舌癌；下丘脑和视觉传导路神经胶质瘤；眼内黑素瘤；胰岛细胞癌(内分泌胰腺)；卡波西肉瘤；肾癌(肾细胞癌)；郎格罕细胞组织细胞增生症；喉癌；唇和口腔癌；脂肪肉瘤；肝癌(原发)；肺癌，非小细胞；肺癌，小细胞；淋巴瘤，原发性中枢神经系统；瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症；男性乳腺癌；恶性骨纤维组织细胞瘤/骨肉瘤；成神经管细胞瘤；髓上皮瘤；黑素瘤；黑素瘤，眼内(眼)；梅克尔细胞癌；梅克尔细胞皮肤癌；间皮瘤；间皮瘤，成人恶性；转移性颈鳞癌，原发位点隐匿；口癌；多发性内分泌瘤综合征；多发性骨髓瘤/浆细胞瘤；阿利贝尔氏病，脊髓发育不良综合征；脊髓发育不良/骨髓增殖性疾病；粒细胞性白血病，慢性；骨髓性白血病，成人急性；骨髓性白血病，儿童急性；骨髓瘤，多发性(骨-骨髓癌)；脊髓增生病，慢性；鼻腔和鼻窦癌；鼻咽癌；成神经细胞瘤，非小细胞肺癌；非霍奇金淋巴瘤；寡枝神经胶质细胞瘤；口腔癌；口腔癌；口咽癌；骨肉瘤/恶性骨纤维组织细胞瘤；卵巢癌；卵巢上皮癌(表面上皮-间质肿瘤)；卵巢生殖细胞肿瘤；卵巢低度恶性潜能肿瘤；胰腺癌；胰腺癌，胰岛细胞；乳头状瘤病；鼻窦和鼻腔癌；甲状旁腺癌；阴茎癌；咽癌；嗜铬细胞瘤；松果体星形细胞瘤；松果体胚组织瘤；中分化松果体实质细胞瘤；成松果体细胞瘤和幕上原始神经外胚层瘤；垂体瘤；垂体腺瘤；浆细胞瘤/多发性骨髓瘤；胸膜肺胚细胞瘤；原发性中枢神经系统淋巴瘤；前列腺癌；直肠癌；肾细胞癌(肾癌)；肾盂和输尿管，移行细胞癌；涉及染色体15上的nut基因的呼吸道癌；成视网膜细胞瘤；横纹肌肉瘤，儿童；唾液腺癌；肉瘤，尤文氏家族肿瘤；塞扎里氏综合征；皮肤癌(黑素瘤)；皮肤癌(非黑素瘤)；小细胞肺癌；小肠癌软组织肉瘤；软组织肉瘤；脊髓瘤；鳞状细胞癌；颈鳞癌，原发位点隐匿，转移性；胃(胃)癌；幕上原始神经外胚层瘤；t细胞淋巴瘤，皮肤(阿利贝尔氏病和塞扎里氏综合征)；睾丸癌；咽喉癌；胸腺瘤；胸腺瘤和胸腺癌；甲状腺癌；甲状腺癌，儿童；肾盂和输尿管的移行细胞癌；尿道癌；子宫癌，子宫内膜；子宫肉瘤；阴道癌；外阴癌；和胚胎性癌肉瘤。在某些实施方式中，用于和本文所公开的方法和组合物一起使用的肿瘤抗原或者肿瘤相关抗原包括致癌病毒抗原、癌症-睾丸抗原、癌胚抗原、组织分化抗原、突变蛋白抗原、脂肪分化相关蛋白、aim-2、aldh1ai、bclx(l)、bing-4、calca、cd45、cpsf、细胞周期蛋白d1、dkki、enah(hmcna)、ga733(epcam)、epha3、ezh2、fgf5、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、g250/mn/caix、her-2/neu、ido1、igf2b3、il13rα2、小肠羧基酯酶、甲胎蛋白、激肽释放酶4、kif20a、lengsin、m-csf、mcsp、mdm-2、meloe、mmp-2、mmp-7、mucl、muc5ac、p53(非突变体)、pax5、pbf、prame、psma、rage、rage-1、rgs5、rhoc、rnf43、ru2as、分离蛋白1、sox1o、steap1(前列腺6次跨膜上皮抗原1)、存活素、端粒酶、vegf、wt1、egf-r、cea、cd20、cd33、cd52、melana/mart1、mart2、ny-eso-1、p53、magea1、magea3、mage-4、mage-5、mage-6、cdk4、α-辅肌动蛋白-4、artc1、bcr-abl、bcr-abl融合蛋白(b3a2)、b-raf、casp-5、casp-8、β-联蛋白、cdc27、cdk4、cdkn2a、clpp、coa-1、dek-can融合蛋白、eftud2、延伸因子2、etv6-aml、etv6-aml1融合蛋白、flt3-itd、fnl、gpnmb、ldlr-岩藻糖转移酶as融合蛋白、nfyc、ogt、os-9、pml-rarα融合蛋白、prdx5、ptprk、h-ras、k-ras(v-ki-ras2kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因)、n-ras、rbaf600、sirt2、snrpdl、ssx、ssx2、syt-ssxl或-ssx2融合蛋白、tgf-βrii、磷酸丙糖异构化酶、ormdm-2、lmp2、hpve6/e7、egfrviii(表皮生长因子变体iii)，个体遗传型，gd2，神经节糖苷g2)、ras-突变体、p53(突变体)、蛋白酶3(pr1)、酪氨酸酶、psa、htert、肉瘤易位断裂点、epha2、前列腺酸性磷酸酶pap、neo-pap、ml-iap、afp、erg(tmprss2ets融合基因)、na17、pax3、alk、雄激素受体、细胞周期蛋白b1、聚唾液酸、mycn、trp2、trp2-int2、gd3、岩藻糖基gm1、间皮素、psca、sle(a)、cyp1b1、plac1、gm3、boris、tn、globoh、ny-br-1、sart3、stn、碳酸酐酶ix、oy-tes1、精液蛋白17、lck、高分子量黑素瘤-相关抗原(hmwmaa)、akap-4、ssx2、xage1、b7h3、豆荚蛋白、tie2、page4、vegfr2、mad-ct-1、fap、pdgfr-β、mad-ct-2、for-相关抗原1、trp-1、gp100、ca-125、ca19-9、钙网膜蛋白、上皮细胞膜抗原(ema)、上皮细胞瘤抗原(eta)、cd19、cd34、cd99、cd117、嗜铬粒蛋白、细胞角蛋白、肌间线蛋白、胶质原纤维酸性蛋白(gfap)、巨囊性病液体蛋白(gcdfp-15)、hmb-45抗原、myo-d1、肌肉-特异性肌动蛋白(msa)、神经丝、神经元-特异性烯醇酶(nse)、胎盘碱性磷酸酶、突触素、甲状球蛋白、甲状腺转录因子-1、丙酮酸激酶m2型同工酶的二聚体形式(肿瘤m2-pk)、bagebage-1、cage、ctage、fate、gage、gage-1、gage-2、gage-3、gage-4、gage-5、gage-6、gage-7、hca661、hom-tes-85、magea、mageb、magec、na88、ny-sar-35、spanxb1、spa17、ssx、sycp1、tpte、碳水化合物/神经节糖苷gm2(癌胚抗原-免疫原性-1ofa-i-1)、gm3、ca15-3(ca27.29\bcaa)、ca195、ca242、ca50、cam43、cea、ebna、ef2、埃-巴二氏病毒抗原、hla-a2、hla-a11、hsp70-2、kiaao205、mum-1、mum-2、mum-3、i类肌球蛋白、gntv、herv-k-mel、lage-1、lage-2、(精液蛋白)sp17、scp-1、p15(58)、hom/mel-40、e2a-prl、h4-ret、igh-igk、myl-rar、tsp-180、p185erbb2、p180erbb-3、c-met、nm-23h1、tag-72、tag-72-4、ca-72-4、cam17.1、numa、13-联蛋白、p16、tage、ct7、43-9f、5t4、791tgp72、13hcg、bca225、btaa、cd68\kp1、co-029、htgp-175、m344、mg7-ag、mov18、nb\70k、ny-co-1、rcas1、sdccag16、ta-90、taal6、tlp、tps、cd22、cd27、cd30、cd70、前列腺特异性蛋白、tarp(t细胞受体γ可变阅读框架蛋白)、trp-p8、整合素αvβ3(cd61)、催乳激素或者ral-b、cd123、cll-1、cd38、cs-1、cd138和ror1。在某些实施方式中，肿瘤抗原或肿瘤相关抗原是新抗原。如本文所使用的“新抗原”是指通过肿瘤细胞中的突变所产生的抗原，并且该抗原通常不在正常细胞或组织中表达。不受理论束缚，由于健康组织通常不具有这些抗原，因此新抗原代表了优选的靶标。另外，不受理论束缚，在本发明的背景中，由于识别新抗原的t细胞可以不经历阴性胸腺选择，因此这些细胞可以对所述抗原具有高亲合力并且对肿瘤产生强烈的免疫应答，同时没有引起正常组织破坏和自身免疫损害的风险。在某些实施方式中，所述新抗原是mhci类-限制性新抗原。在某些实施方式中，所述新抗原是mhcii类-限制性新抗原。在某些实施方式中，患者肿瘤细胞中的突变导致产生了产生新抗原的新型蛋白质。在某些实施方式中，所述肿瘤抗原或肿瘤相关抗原可以是抗原直系同源物，例如，对人肿瘤抗原或肿瘤相关抗原的哺乳动物(即，非人灵长类、猪、狗、猫或马)。在某些实施方式中，通过包含在沙粒病毒内的核苷酸序列编码本文所述的肿瘤抗原或肿瘤相关抗原的抗原性片段。在某些实施方式中，当片段能够(i)在宿主(例如，小鼠、兔、山羊、驴或人)中引起抗体免疫应答，其中所产生的抗体特异性结合至在赘生性细胞(例如，癌细胞)中或上表达的免疫原性蛋白；和/或(ii)引起特异性t细胞免疫应答时，则它是抗原性的。在某些实施方式中，编码肿瘤抗原或肿瘤相关抗原的抗原性片段的核苷酸序列为8至100个核苷酸长度、15至100个核苷酸长度、25至100个核苷酸长度、50至200个核苷酸长度、50至400个核苷酸长度、200至500个核苷酸长度，或400至600个核苷酸长度、500至800个核苷酸长度。在其它实施方式中，所述核苷酸序列为750至900个核苷酸长度、800至100个核苷酸长度、850至1000个核苷酸长度、900至1200个核苷酸长度、1000至1200个核苷酸长度、1000至1500个核苷酸或10至1500个核苷酸长度、1500至2000个核苷酸长度、1700至2000个核苷酸长度、2000至2300个核苷酸长度、2200至2500个核苷酸长度、2500至3000个核苷酸长度、3000至3200个核苷酸长度、3000至3500个核苷酸长度、3200至3600个核苷酸长度、3300至3800个核苷酸长度、4000个核苷酸至4400个核苷酸长度、4200至4700个核苷酸长度、4800至5000个核苷酸长度、5000至5200个核苷酸长度、5200至5500个核苷酸长度、5500至5800个核苷酸长度、5800至6000个核苷酸长度、6000至6400个核苷酸长度、6200至6800个核苷酸长度、6600至7000个核苷酸长度、7000至7200个核苷酸长度、7200至7500个核苷酸长度或者7500个核苷酸长度。在一些实施方式中，所述核苷酸序列编码肽或多肽，其为5至10个氨基酸长度、10至25个氨基酸长度、25至50个氨基酸长度、50至100个氨基酸长度、100至150个氨基酸长度、150至200个氨基酸长度、200至250个氨基酸长度、250至300个氨基酸长度、300至400个氨基酸长度、400至500个氨基酸长度、500至750个氨基酸长度、750至1000个氨基酸长度、1000至1250个氨基酸长度、1250至1500个氨基酸长度、1500至1750个氨基酸长度、1750至2000个氨基酸长度、2000至2500个氨基酸长度或大于2500个或更多个氨基酸长度。在一些实施方式中，所述核苷酸序列编码不超过2500个氨基酸长度的多肽。在具体的实施方式中，所述核苷酸序列不含终止密码子。在某些实施方式中，所述核苷酸序列是密码子-优化的。在某些实施方式中，可以优化核苷酸组成、核苷酸对组成或两者。用于这些优化的技术在本领域中是已知的并且可以应用于优化肿瘤抗原或肿瘤相关抗原的核苷酸序列。可以通过取代糖蛋白gp、基质蛋白z、核蛋白np或聚合酶蛋白l的orf的核酸序列，将编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核酸序列引入感染性、复制-缺陷型沙粒病毒的基因组中。在其它实施方式中，将编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核酸序列融合至糖蛋白gp、基质蛋白z、核蛋白np或聚合酶蛋白l的orf中。一旦插入感染性、复制-缺陷型沙粒病毒的基因组中，编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列可以在四种沙粒病毒启动子(s节段的5'utr和3'utr，和l节段的5'utr和3'utr)和可以通过调控元件插入的核糖核酸的控制下转录和/或表达，所述调控元件可以通过病毒rna-依赖的rna聚合酶、细胞rna聚合酶i、rna聚合酶ii或rna聚合酶iii阅读，如分别在病毒utr、28s核糖体rna启动子、β-肌动蛋白启动子或者5s核糖体rna启动子中天然发现的病毒启动子序列的复制。可以分别通过它们自身或者作为通过融合至沙粒病毒orf和基因的通读，和/或与一个或多个，例如，2个、3个或4个内部核糖体进入位点结合来转录和/或表达编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核酸。在某些实施方式中，如本文所提供的包含编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒颗粒还包含编码至少一种免疫调节肽、多肽或蛋白质的至少一种核苷酸序列。在某些实施方式中，所述免疫调节肽、多肽或蛋白是钙网蛋白(crt)或其片段；泛素或其片段；粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)或其片段；恒定链(cd74)或其抗原性片段；结核分枝杆菌热休克蛋白70或其抗原性片段；单纯疱疹病毒1蛋白vp22或其抗原性片段；cd40配体或其抗原性片段；或者fms-相关酪氨酸激酶3(flt3)配体或其抗原性片段。在某些实施方式中，本文所提供的沙粒病毒颗粒包含基因组节段，所述基因组节段a)具有存在于所述基因组节段的野生型形式中的orf的去除或功能性失活；和b)编码(以有义或反义形式)：(i)本文所提供的一个或多个肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段，和(ii)本文所提供的一个或多个免疫调节肽、多肽或蛋白质。在某些实施方式中，本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列和本文所提供的编码免疫调节肽、多肽或蛋白质的核苷酸序列位于病毒基因组的相同位置上。在某些实施方式中，本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列和本文所提供的编码免疫调节肽、多肽或蛋白质的核苷酸序列位于病毒基因组的不同位置上。在某些实施方式中，本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列和本文所提供的编码免疫调节肽、多肽或蛋白质的核苷酸序列通过间隔序列分隔。在某些实施方式中，本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列和本文所提供的编码免疫调节肽、多肽或蛋白质的核苷酸序列通过内部核糖体进入位点或者编码蛋白酶切割位点的序列分隔。在某些实施方式中，本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列和本文所提供的编码免疫调节肽、多肽或蛋白质的核苷酸序列通过编码接头或自切割肽的核苷酸序列分隔。可以与本文所提供的组合物和方法一起使用技术人员已知的任何接头肽或自切割肽。肽接头的非限制性实例是gsg。自切割肽的非限制性实例是猪捷申病毒-12a肽、明脉扁刺蛾病毒(thoseaasignavirus)2a肽或者口蹄疫病毒2a肽。在某些实施方式中，本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段和本文所提供的免疫调节肽、多肽或蛋白直接融合在一起。在某些实施方式中，本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段和本文所提供的免疫调节肽、多肽或蛋白通过肽接头融合在一起。在某些实施方式中，本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段和本文所提供的免疫调节肽、多肽或蛋白通过自切割肽彼此分开。肽接头的非限制性实例是gsg。自切割肽的非限制性实例是猪捷申病毒-12a肽、明脉扁刺蛾病毒(thoseaasignavirus)2a肽或者口蹄疫病毒2a肽。在某些实施方式中，本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段和本文所提供的免疫调节肽、多肽或蛋白在相同沙粒病毒颗粒上表达。在某些实施方式中，本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段和本文所提供的免疫调节肽、多肽或蛋白在不同的沙粒病毒颗粒上表达。在某些实施方式中，本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段和本文所提供的免疫调节肽、多肽或蛋白在相同株的不同病毒上表达。在某些实施方式中，本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段和本文所提供的免疫调节肽、多肽或蛋白在不同株的不同病毒上表达。在某些实施方式中，所产生的编码一种或多种肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒包含本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的一个或多个核苷酸序列。在具体的实施方式中，通过如本文所述的多种一个或多个接头、间隔臂或切割位点分隔本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段。(c)表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒的产生通常，可以通过如对于lcmv所述的标准反向遗传学技术来重组产生用于在本文所提供的方法和组合物，如与化疗剂的组合中使用的沙粒病毒颗粒(l.flatz,a.bergthaler,j.c.delatorre,andd.d.pinschewer,procnatlacadsciusa103:4663-4668,2006；a.b.sanchezandj.c.delatorre,virology350:370,2006；e.ortiz-riano,b.y.cheng,j.c.delatorre,l.martinez-sobrido.jgenvirol.94:1175-88,2013)。为了产生用于和本发明一起使用的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒，可以使用这些技术，然而，如本文所述修饰恢复病毒的基因组。这些修饰可以为：i)将四种沙粒病毒orf(糖蛋白(gp)；核蛋白(np)；基质蛋白z；rna依赖的rna聚合酶l)中的一种或多种，例如，两种、三种或四种除去或功能性失活以防止在正常细胞中形成感染性颗粒，尽管仍允许基因在沙粒病毒载体-感染的宿主细胞中表达；和ii)可以引入编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸。可以如国际专利申请公开no.wo2009/083210(专利申请号pct/ep2008/010994)和国际专利申请公开no.wo2014/140301(专利申请号pct/ep2014/055144)中所述来产生如本文所述的感染性、复制-缺陷型病毒，以上每篇专利公开以其全部内容作为参考并入本文。一旦从cdna产生，则本文所提供的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒可以在补体细胞中增殖。补体细胞是提供已通过其基因组修饰从复制-缺陷型沙粒病毒中除去的功能性的细胞，例如，如果使编码gp蛋白的orf缺失或功能性失活，则补体细胞的确提供gp蛋白。由于沙粒病毒载体中一个或多个病毒基因的除去或功能性失活(在本文中，将以糖蛋白gp的缺失为例)，可以产生沙粒病毒载体并在反式(intrans)提供缺失病毒基因，例如，在本实例中的gp的细胞中扩增。通过用用于感兴趣的病毒基因表达的一个或多个质粒(补体质粒，称为c-质粒)转染哺乳动物细胞系，如bhk-21、hek293、vero等(在本文中将以bhk-21为例)，产生这些补体细胞系(此后称为c-细胞)。c-质粒表达在沙粒病毒载体中缺失的，受适合于在哺乳动物细胞中表达的一个或多个表达盒(例如，哺乳动物聚合酶ii启动子，如具有多腺苷酸化信号的cmv或ef1α启动子)控制而产生的病毒基因。另外，补体质粒具有哺乳动物选择标志物，例如，嘌罗霉素耐受性，其受适合于在哺乳动物细胞中基因表达的表达盒的控制，例如，如上所述的聚合酶ii表达盒，或者病毒基因转录本之后是内部核糖体进入位点，如脑心肌炎病毒之一，然后是哺乳动物耐受性标志物。对于在大肠杆菌(e.coli)中的产生，所述质粒还具有细菌选择标志物，如氨苄西林耐受性盒。将可以使用的细胞，例如，bhk-21、hek293、mc57g等保持培养并使用任何常用策略，如磷酸钙、脂质体-基规程或电穿孔，用补体质粒转染。几天后，以滴度浓度加入适合的选择试剂，例如，嘌罗霉素。分离存活的克隆并按照标准程序亚克隆，使用免疫印迹或流式细胞术程序，用抗感兴趣的病毒蛋白的抗体鉴别高表达c-细胞克隆。作为稳定转染的c-细胞的使用的替代，正常细胞的瞬时转染可以补足其中c-细胞将随后使用的每个步骤中的遗失病毒基因。另外，辅助病毒可以用于反式提供遗失的功能性。可以使用的质粒可以具有两种类型：i)两种质粒，称为tf质粒，其用于在c-细胞内胞内表达沙粒病毒的最小反式作用因子，在本实例中，其来源于(例如)lcmv的np和l蛋白；和ii)质粒，称为gs-质粒，其用于在c-细胞内胞内表达沙粒病毒载体基因组节段，例如，具有设计修饰的节段。tf-质粒在通常适合于哺乳动物细胞中蛋白表达的表达盒(例如，哺乳动物聚合酶ii启动子，如cmv或ef1α启动子，它们中的任一个优选地与多腺苷酸化信号结合)的控制下表达各个沙粒病毒载体的np和l蛋白。gs-质粒表达载体的小(s)和大(l)基因组节段。通常，可以使用聚合酶i-驱动的表达盒或者t7噬菌体rna聚合酶(t7-)驱动的表达盒，后者优选地具有3'-末端核糖酶以用于处理初级转录本以获得正确的末端。在使用t7-基系统的情况下，必须通过在回收过程中包含类似于tf-质粒所构建的其它表达质粒，从而提供t7，或者构建c-细胞以另外以稳定方式表达t7来在c-细胞中提供t7的表达。在某些实施方式中，tf和gs质粒可以是相同的，即可以通过来自一个质粒的t7、poli和polii启动子转录基因组序列和反式作用因子。对于沙粒病毒载体的回收，可以使用以下程序。第1天：用两个tf-质粒加两个gs-质粒的混合物转染通常在m6-孔板中处于80％汇合的c-细胞。在某些实施方式中，tf和gs质粒可以是相同的，即可以通过来自一个质粒的t7、poli和polii启动子转录基因组序列和反式作用因子。对此，可以使用任何常用策略，如磷酸钙、脂质体-基规程或者电穿孔。3-5天后：收获培养上清液(沙粒病毒载体制剂)，等分并根据使用前沙粒病毒载体应储存的时间，在4℃、-20℃或者-80℃储存。然后，通过免疫聚焦测定评价沙粒病毒载体制剂对c-细胞的感染性滴度。本发明还涉及细胞培养物中肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的表达，其中用表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒感染细胞培养物。当用于在培养细胞中表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段时，可以使用以下两个程序：i)以一个或多个，例如，两个、三个或四个感染复数(moi)，用本文所述的沙粒病毒载体制剂感染感兴趣的细胞类型，从而导致在感染后不久在所有细胞中产生肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段。ii)作为另外一种选择，可以使用较小的moi，并且可以对于它们的病毒驱动的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段表达水平来选择单个细胞克隆。随后，由于沙粒病毒载体的非溶胞性质，可以无限扩增单个克隆。不管方法如何，根据所产生的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的性质，随后可以从培养上清液或者从细胞本身收集(并纯化)肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段。然而，本发明不限于这两种策略，并且可以考虑使用感染性、复制-缺陷型沙粒病毒作为载体的其它肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的驱动表达方法。作为另外一种选择，可以使用由三种质粒组成的拯救系统：(1)第一质粒通过借助于聚合酶ii的转录和在转染细胞中的后续翻译来表达蛋白np；(2)第二质粒通过借助于聚合酶i的转录产生lcmv基因组的(负链)l-节段以及通过借助于聚合酶ii从相同模板以聚合酶i启动子的相反方向的转录产生l蛋白；(3)第三质粒通过借助于聚合酶i的转录产生lcmv基因组的s节段(编码抗原编码序列而不是lcmv糖蛋白)。将3μg每种质粒用于c-细胞的电穿孔，然后将细胞在6-孔板中接种并在37℃培育。在培育后，将来自转染的细胞和上清液与新鲜接种的c-细胞组合，并且在限定的感染后时间点收获载体并清除细胞和碎片。一旦已产生载体，则可以将编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核酸插入质粒，并且通过技术人员已知的任何技术从所述质粒转录感染性、复制-缺陷型载体的基因组节段。由于沙粒病毒载体中一个或多个病毒基因的除去或功能性失活(在本文中，将以糖蛋白gp的缺失为例)，可以产生沙粒病毒载体并在反式(intrans)提供缺失或功能性失活的病毒基因(例如，gp)的细胞中扩增。所得病毒本身是感染性的，但是由于缺少所述缺失或功能性失活的病毒基因(例如，gp)，因此不能在非补体细胞中产生进一步的感染性子代颗粒。所述补体细胞可以通过稳定转染、瞬时转染或者通过用表达缺失功能性的辅助病毒感染来提供缺失的功能性。在某些实施方式中，所述补体细胞提供了已从沙粒病毒载体基因组中缺失或功能性失活的病毒基因。在具体的实施方式中，所述补体细胞提供了来自与用于产生沙粒病毒载体基因组的病毒株相同的病毒株的病毒基因。在另一个实施方式中，所述补体细胞提供了来自与用于产生沙粒病毒载体基因组的病毒株不同的病毒株的病毒基因。例如，在所述补体细胞中所提供的病毒基因得自lcmv的mp株。在另一个实例中，在所述补体细胞中所提供的病毒基因得自lcmv的克隆13株。在另一个实例中，在所述补体细胞中所提供的病毒基因得自lcmv的we株。在具体的实施方式中，所述补体细胞提供了lcmv的mp株的gp，并且所述沙粒病毒载体包含如本文所述的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的orf来替代编码gp蛋白的orf。在更具体的实施方式中，所述补体细胞提供了lcmv的mp株的gp，并且所述沙粒病毒载体得自lcmv克隆13并且包含如本文所述的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的orf来代替编码gp蛋白的orf。在具体的实施方式中，所述补体细胞提供了lcmv的13株的gp，并且所述沙粒病毒载体包含如本文所述的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的orf来替代编码gp蛋白的orf。在更具体的实施方式中，所述补体细胞提供了lcmv的克隆13株的gp，并且所述沙粒病毒载体得自lcmvmp株并且包含如本文所述的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的orf来代替编码gp蛋白的orf。在具体的实施方式中，所述补体细胞提供了lcmv的we株的gp，并且所述沙粒病毒载体包含如本文所述的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的orf来替代编码gp蛋白的orf。在更具体的实施方式中，所述补体细胞提供了lcmv的we株的gp，并且所述沙粒病毒载体得自lcmv克隆13并且包含如本文所述的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的orf来代替编码gp蛋白的orf。在具体的实施方式中，所述补体细胞提供了lcmv的we株的gp，并且所述沙粒病毒载体包含如本文所述的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的orf来替代编码gp蛋白的orf。在更具体的实施方式中，所述补体细胞提供了lcmv的we株的gp，并且所述沙粒病毒载体得自lcmvmp株并且包含如本文所述的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的orf来代替编码gp蛋白的orf。(d)核酸、载体系统和细胞系在一个实施方式中，本文描述了作为本文所述的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒的大基因组节段(l节段)的cdna的核酸序列，其中所述基因组节段的一个orf缺失或功能性失活，并且所述基因组节段包含编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列，其可以与本文所提供的方法和组合物一起使用，如与化疗剂组合。在一个实施方式中，本文描述了编码本文所述的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒的短基因组节段(s节段)的核酸序列，其中所述基因组节段的一个orf缺失或功能性失活并且其中所述短基因组节段包含编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。在另一个实施方式中，本文描述了编码本文所述的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒的短基因组节段(s节段)的核酸序列，其中所述糖蛋白基因的orf缺失或功能性失活并且其中所述短基因组节段包含编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。在某些更具体的实施方式中，所述肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段是5.1.(b)节中所述的抗原。在某些实施方式中，本文所提供的核酸序列可以来源于lcmv的特定的株。lcmv株包括克隆13、mp株、armca1371、arme-250、we、ubc、traub、pasteur、810885、ch-5692、marseille#12、hp65-2009、200501927、810362、811316、810316、810366、20112714、douglas、gr01、sn05、cabn和它们的衍生物。在具体的实施方式中，所述核酸来源于lcmv克隆13。在其它具体的实施方式中，所述核酸来源于lcmvmp株。在更具体的实施方式中，本文提供了包含沙粒病毒基因组节段；和(ii)编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的核酸。在一个实施方式中，本文描述了包含一个或多个载体的载体系统，所述一个或多个载体共同组成了本文所述的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒的基因组。具体地，本文提供了载体系统，其中所述一个或多个载体包含两个沙粒病毒基因组节段，即本文所述的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒的l节段和s节段。这种载体系统可以包含(在一个或多个单独的dna分子上)：·一个沙粒病毒s基因组片段，其被修饰使得携带该经修饰的s基因组片段的沙粒病毒颗粒不能产生感染性子代病毒颗粒，和一个沙粒病毒l基因组片段，其包含编码(以有义或反义)肿瘤抗原，肿瘤相关抗原或其抗原片段的核苷酸序列；·一个沙粒病毒l基因组片段，其被修饰使得携带该经修饰的l基因组片段的沙粒病毒颗粒不能产生感染性子代病毒颗粒，和一个沙粒病毒s基因组片段，其包含编码(以有义或反义)肿瘤抗原，肿瘤相关抗原或其抗原片段的核苷酸序列；·一个沙粒病毒s基因组片段，其被修饰使得携带该经修饰的s基因组片段的沙粒病毒颗粒不能产生感染性子代病毒颗粒并且其中所述沙粒病毒s基因组节段包含编码(以有义或反义)肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段并且包含野生型沙粒病毒l基因组节段的核苷酸序列；或者·一个沙粒病毒l基因组片段，其被修饰使得携带该经修饰的l基因组片段的沙粒病毒颗粒不能产生感染性子代病毒颗粒并且其中所述沙粒病毒l基因组节段包含编码(以有义或反义)肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段并且包含野生型沙粒病毒s基因组节段的核苷酸序列。在某些实施方式中，本文描述了包含沙粒病毒(例如，lcmv)基因组节段的核酸序列，其中编码s基因组节段的gp的orf被编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列取代，所述肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段选自致癌病毒抗原、癌症-睾丸抗原、癌胚抗原、组织分化抗原、突变蛋白抗原、脂肪分化相关蛋白、aim-2、aldh1ai、bclx(l)、bing-4、calca、cd45、cpsf、细胞周期蛋白d1、dkki、enah(hmcna)、ga733(epcam)、epha3、ezh2、fgf5、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、g250/mn/caix、her-2/neu、ido1、igf2b3、il13rα2、小肠羧基酯酶、甲胎蛋白、激肽释放酶4、kif20a、lengsin、m-csf、mcsp、mdm-2、meloe、mmp-2、mmp-7、mucl、muc5ac、p53(非突变体)、pax5、pbf、prame、psma、rage、rage-1、rgs5、rhoc、rnf43、ru2as、分离蛋白1、sox1o、steap1(前列腺6次跨膜上皮抗原1)、存活素、端粒酶、vegf、wt1、egf-r、cea、cd20、cd33、cd52、gp100蛋白、melana/mart1、mart2、ny-eso-1、p53、magea1、magea3、mage-4、mage-5、mage-6、cdk4、α-辅肌动蛋白-4、artc1、bcr-abl、bcr-abl融合蛋白(b3a2)、b-raf、casp-5、casp-8、β-联蛋白、cdc27、cdk4、cdkn2a、clpp、coa-1、dek-can融合蛋白、eftud2、延伸因子2、etv6-aml、etv6-aml1融合蛋白、flt3-itd、fnl、gpnmb、ldlr-岩藻糖转移酶as融合蛋白、nfyc、ogt、os-9、pml-rarα融合蛋白、prdx5、ptprk、h-ras、k-ras(v-ki-ras2kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因)、n-ras、rbaf600、sirt2、snrpdl、ssx、ssx2、syt-ssxl或-ssx2融合蛋白、tgf-βrii、磷酸丙糖异构化酶、ormdm-2、lmp2、hpve6/e7、egfrviii(表皮生长因子变体iii)，个体遗传型，gd2，神经节糖苷g2)、ras-突变体、p53(突变体)、蛋白酶3(pr1)、酪氨酸酶、psa、htert、肉瘤易位断裂点、epha2、前列腺酸性磷酸酶pap、neo-pap、ml-iap、afp、erg(tmprss2ets融合基因)、na17、pax3、alk、雄激素受体、细胞周期蛋白b1、聚唾液酸、mycn、trp2、trp2-int2、gd3、岩藻糖基gm1、间皮素、psca、sle(a)、cyp1b1、plac1、gm3、boris、tn、globoh、ny-br-1、sart3、stn、碳酸酐酶ix、oy-tes1、精液蛋白17、lck、高分子量黑素瘤-相关抗原(hmwmaa)、akap-4、ssx2、xage1、b7h3、豆荚蛋白、tie2、page4、vegfr2、mad-ct-1、fap、pdgfr-β、mad-ct-2、for-相关抗原1、trp-1、ca-125、ca19-9、钙网膜蛋白、上皮细胞膜抗原(ema)、上皮细胞瘤抗原(eta)、cd19、cd34、cd99、cd117、嗜铬粒蛋白、细胞角蛋白、肌间线蛋白、胶质原纤维酸性蛋白(gfap)、巨囊性病液体蛋白(gcdfp-15)、hmb-45抗原、myo-d1、肌肉-特异性肌动蛋白(msa)、神经丝、神经元-特异性烯醇酶(nse)、胎盘碱性磷酸酶、突触素、甲状球蛋白、甲状腺转录因子-1、丙酮酸激酶m2型同工酶的二聚体形式(肿瘤m2-pk)、bagebage-1、cage、ctage、fate、gage、gage-1、gage-2、gage-3、gage-4、gage-5、gage-6、gage-7、hca661、hom-tes-85、magea、mageb、magec、na88、ny-sar-35、spanxb1、spa17、ssx、sycp1、tpte、碳水化合物/神经节糖苷gm2(癌胚抗原-免疫原性-1ofa-i-1)、gm3、ca15-3(ca27.29\bcaa)、ca195、ca242、ca50、cam43、cea、ebna、ef2、埃-巴二氏病毒抗原、hla-a2、hla-a11、hsp70-2、kiaao205、mum-1、mum-2、mum-3、i类肌球蛋白、gntv、herv-k-mel、lage-1、lage-2、(精液蛋白)sp17、scp-1、p15(58)、hom/mel-40、e2a-prl、h4-ret、igh-igk、myl-rar、tsp-180、p185erbb2、p180erbb-3、c-met、nm-23h1、tag-72、tag-72-4、ca-72-4、cam17.1、numa、13-联蛋白、p16、tage、ct7、43-9f、5t4、791tgp72、13hcg、bca225、btaa、cd68\kp1、co-029、htgp-175、m344、mg7-ag、mov18、nb\70k、ny-co-1、rcas1、sdccag16、ta-90、taal6、tlp、tps、cd22、cd27、cd30、cd70、前列腺特异性蛋白、tarp(t细胞受体γ可变阅读框架蛋白)、trp-p8、整合素αvβ3(cd61)、催乳激素或者ral-b、cd123、cll-1、cd38、cs-1、cd138和ror1。在某些实施方式中，本文描述了包含沙粒病毒(例如，lcmv)基因组节段的核酸序列，其中编码s基因组节段的gp的orf被编码一个或多个肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列(例如，以上段落中所列那些的一个或多个)取代。在另一个实施方式中，本文提供了细胞，其中所述细胞包含本节中上述的核酸或载体系统。本文还提供了来源于这些细胞的细胞系，包含这些细胞的培养物以及培养被核酸或载体系统感染的这些细胞的方法。在某些实施方式中，本文提供了细胞，其中所述细胞包含含有本文所述的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒的大基因组节段(l节段)的核酸，其中所述基因组节段的一个orf缺失或功能性失活，并且所述基因组节段包含编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。在其它实施方式中，本文提供了细胞，其中所述细胞包含含有本文所述的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒的短基因组节段(s节段)的核酸序列，其中所述基因组节段的一个orf缺失或功能性失活并且其中所述短基因组节段包含编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。在另一个实施方式中，本文提供了细胞，其中所述细胞包含本文所述的两个核酸或载体系统。本文还提供了来源于这些细胞的细胞系，包含这些细胞的培养物以及培养被核酸或载体系统感染的这些细胞的方法。(e)使用方法疫苗已成功用于预防和/或治疗传染性疾病，如用于脊髓灰质炎病毒和麻疹的那些。然而，在已确诊的慢性疾病，包括癌症的环境中的治疗性免疫尚不太成功。产生与化疗剂组合使用的沙粒病毒颗粒的能力代表了新型疫苗策略。在某些实施方式中，本文提供了治疗对象中肿瘤病的方法。这些方法可以包括向对其有需要的对象施用本文所提供的沙粒病毒颗粒和本文所提供的化疗剂。在某些实施方式中，在所述方法中使用的沙粒病毒颗粒是感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒。因此，在某些实施方式中，将在所述方法中使用的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒被工程化以包含含有下列的基因组：编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列；和使其遗传信息在感染的细胞中扩增和表达，但是不能在非补体细胞中产生进一步感染性的子代颗粒的能力。在一个实施方式中，本文提供了治疗对象中肿瘤病的方法，其包括向所述对象施用如本文所提供的一种或多种表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂。在具体的实施方式中，本文所述的用于治疗肿瘤病的方法包括向对其有需要的对象施用治疗有效量的如本文所提供的一种或多种表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂。所述对象可以是哺乳动物，如(但不限于)人、小鼠、大鼠、豚鼠、驯养动物，如(但不限于)母牛、马、绵羊、猪、山羊、猫、狗、仓鼠、驴。在具体的实施方式中，所述对象是人。在另一个实施方式中，本文提供了对对象中赘生性细胞或组织，如癌细胞或肿瘤引起免疫应答的方法，其包括向所述对象施用本文所提供的表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂。在另一个实施方式中，向其施用本文所提供的表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂的对象患有肿瘤病，对肿瘤病敏感或者具有患肿瘤病的风险。在另一个实施方式中，向其施用本文所提供的表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂的对象患有肿瘤病，对肿瘤病敏感或者具有患肿瘤病的风险，所述肿瘤病如癌症，或者显示出癌前组织病变。在另一个具体的实施方式中，向其施用本文所提供的表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂的对象诊断患有肿瘤病，如癌症，或者显示出癌前组织病变。在另一个实施方式中，向其施用本文所提供的表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂的对象患有肿瘤病，对肿瘤病敏感或者具有患肿瘤病的风险，所述肿瘤病选自，但不限于，急性淋巴母细胞性白血病；急性淋巴细胞性淋巴瘤；急性淋巴细胞白血病；急性髓性白血病；急性髓细胞性白血病(成人/儿童)；肾上腺皮质癌；aids-相关癌症；aids-相关淋巴瘤；肛门癌；阑尾癌；星形细胞瘤；非典型畸胎样/横纹样瘤；基底细胞癌；胆管癌，肝外(肝胆管型肝癌)；膀胱癌；骨骨肉瘤/恶性纤维组织细胞瘤；脑癌(成人/儿童)；脑肿瘤，小脑星形细胞瘤(成人/儿童)；脑肿瘤，大脑星形细胞瘤/恶性神经胶质瘤脑肿瘤；脑肿瘤，室管膜瘤；脑肿瘤，成神经管细胞瘤；脑肿瘤，幕上原始神经外胚层瘤；脑肿瘤，视觉传导路和下丘脑神经胶质瘤；脑干神经胶质瘤；乳腺癌；支气管腺瘤/类癌；支气管肿瘤；伯基特淋巴瘤；儿童癌；胃肠类癌肿瘤；类癌瘤；成人癌瘤，未知原发位点；原发未知的癌瘤；中枢神经系统胚胎性瘤；中枢神经系统淋巴瘤，原发；宫颈癌；儿童肾上腺皮质癌；儿童癌症；儿童大脑星形细胞瘤；脊索瘤，儿童；慢性淋巴细胞性白血病；慢性粒性白血病；慢性粒细胞性白血病；慢性脊髓增生病；结肠癌；结肠直肠癌；颅咽管瘤；皮肤t-细胞淋巴瘤；促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤；肺气肿；子宫内膜癌；成室管膜细胞瘤；室管膜瘤；食道癌；尤文氏家族肿瘤中的尤因氏肉瘤；颅外生殖细胞肿瘤；性腺外生殖细胞肿瘤；肝外胆管癌；胆囊癌；胃(胃)癌；胃类癌瘤；胃肠类癌肿瘤；胃肠道间质瘤；生殖细胞肿瘤：颅外、性腺外或卵巢妊娠滋养细胞肿瘤；妊娠滋养细胞肿瘤，未知原发位点；神经胶质瘤；脑干神经胶质瘤；神经胶质瘤，儿童视觉传导路和下丘脑；毛细胞白血病；头颈癌；心癌；肝细胞(肝)癌；霍奇金淋巴瘤；舌癌；下丘脑和视觉传导路神经胶质瘤；眼内黑素瘤；胰岛细胞癌(内分泌胰腺)；卡波西肉瘤；肾癌(肾细胞癌)；郎格罕细胞组织细胞增生症；喉癌；唇和口腔癌；脂肪肉瘤；肝癌(原发)；肺癌，非小细胞；肺癌，小细胞；淋巴瘤，原发性中枢神经系统；瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症；男性乳腺癌；恶性骨纤维组织细胞瘤/骨肉瘤；成神经管细胞瘤；髓上皮瘤；黑素瘤；黑素瘤，眼内(眼)；梅克尔细胞癌；梅克尔细胞皮肤癌；间皮瘤；间皮瘤，成人恶性；转移性颈鳞癌，原发位点隐匿；口癌；多发性内分泌瘤综合征；多发性骨髓瘤/浆细胞瘤；阿利贝尔氏病，脊髓发育不良综合征；脊髓发育不良/骨髓增殖性疾病；粒细胞性白血病，慢性；骨髓性白血病，成人急性；骨髓性白血病，儿童急性；骨髓瘤，多发性(骨-骨髓癌)；脊髓增生病，慢性；鼻腔和鼻窦癌；鼻咽癌；成神经细胞瘤，非小细胞肺癌；非霍奇金淋巴瘤；寡枝神经胶质细胞瘤；口腔癌；口腔癌；口咽癌；骨肉瘤/恶性骨纤维组织细胞瘤；卵巢癌；卵巢上皮癌(表面上皮-间质肿瘤)；卵巢生殖细胞肿瘤；卵巢低度恶性潜能肿瘤；胰腺癌；胰腺癌，胰岛细胞；乳头状瘤病；鼻窦和鼻腔癌；甲状旁腺癌；阴茎癌；咽癌；嗜铬细胞瘤；松果体星形细胞瘤；松果体胚组织瘤；中分化松果体实质细胞瘤；成松果体细胞瘤和幕上原始神经外胚层瘤；垂体瘤；垂体腺瘤；浆细胞瘤/多发性骨髓瘤；胸膜肺胚细胞瘤；原发性中枢神经系统淋巴瘤；前列腺癌；直肠癌；肾细胞癌(肾癌)；肾盂和输尿管，移行细胞癌；涉及染色体15上的nut基因的呼吸道癌；成视网膜细胞瘤；横纹肌肉瘤，儿童；唾液腺癌；肉瘤，尤文氏家族肿瘤；塞扎里氏综合征；皮肤癌(黑素瘤)；皮肤癌(非黑素瘤)；小细胞肺癌；小肠癌软组织肉瘤；软组织肉瘤；脊髓瘤；鳞状细胞癌；颈鳞癌，原发位点隐匿，转移性；胃(胃)癌；幕上原始神经外胚层瘤；t细胞淋巴瘤，皮肤(阿利贝尔氏病和塞扎里氏综合征)；睾丸癌；咽喉癌；胸腺瘤；胸腺瘤和胸腺癌；甲状腺癌；甲状腺癌，儿童；肾盂和输尿管的移行细胞癌；尿道癌；子宫癌，子宫内膜；子宫肉瘤；阴道癌；外阴癌；和胚胎性癌肉瘤。在另一个实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于患有肿瘤病，对肿瘤病敏感或者具有患肿瘤病的风险的任何年龄组的对象。在具体的实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于免疫系统受损的对象、怀孕的对象、经历器官或骨髓移植的对象、服用免疫抑制药物的对象、经历血液透析的对象、患有癌症的对象或者患有肿瘤病，对肿瘤病敏感或者具有患肿瘤病的风险的对象。在更具体的实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于患有肿瘤病，对肿瘤病敏感或者具有患肿瘤病的风险的0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17岁的儿童对象。在另一个具体实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于患有肿瘤病，对肿瘤病敏感或者具有患肿瘤病的风险的婴儿对象。在另一个具体的实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于患有肿瘤病，对肿瘤病敏感或者具有患肿瘤病的风险的0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月的婴儿对象。在另一个具体实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于患有肿瘤病，对肿瘤病敏感或者具有患肿瘤病的风险的老年对象。在更具体的实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90岁的年长对象。本文提供了在对肿瘤病敏感或者具有患肿瘤病的风险的对象中预防癌症的方法。在另一个实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于具有高癌症转移风险的对象。在具体的实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于具有新生儿免疫系统，并因此具有不成熟免疫系统的新生儿期的对象。在另一个实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于患有0期(即，原位肿瘤)、1期、2期、3期或4期癌症或其子类，如3a、3b或3c期癌症或其等价形式的对象。在另一个实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于患有处于选自下列的肿瘤、结节、转移(tnm)期的任意组合的癌症的对象，所述组合选自肿瘤t1、t2、t3和t4、以及结节n0、n1、n2或n3，转移m0和m1。癌症患者的成功治疗可以评价为延长预期存活、引起抗肿瘤免疫应答或者改善特定癌症特征。可以改善的癌症特征的实例包含肿瘤尺寸(例如，t0，或者t1-4)、转移状态(例如，m0、m1)、可观察的肿瘤个数、结节转移(例如，n0、n1-4、nx)，分级(即，1、2、3或4级)、期(例如，0、i、ii、iii或iv)、细胞上或体液中某些标志物的存在或浓度(例如，afp、b2m、β-hcg、bta、ca15-3、ca27.29、ca125、ca72.4、ca19-9、降钙素、cea、嗜铬粒蛋白a、egfr、激素受体、her2、hcg、免疫球蛋白、nse、nmp22、psa、pap、psma、s-100、ta-90和甲状球蛋白)和/或相关病变(例如，腹水或水肿)或者症状(例如，恶病质、发烧、厌食症或疼痛)。如果通过百分比可测量，则所述改善可以是至少5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80或者90％(例如，存活或者肿瘤的体积或线性尺寸)。在另一个实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于患有休眠癌症的对象(例如，所述对象处于缓解期)。因此，本文提供了预防癌症再激活的方法。本文还提供了降低癌症复发频率的方法。在另一个实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于患有复发性癌症的对象。在另一个实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于对癌症具有遗传倾向性的对象。在另一个实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于具有风险因素的对象。示例性的风险因素包括衰老、抽烟、日光暴露、辐射暴露、化学品暴露、家族史、酒精、不良饮食、缺少身体活动或者过重。在另一个实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于经受一种或多种类型癌症的对象。在其它实施方式中，可以靶向对使用本文所述的组合物的治疗敏感的任何类型的肿瘤病，如癌症。在另一个实施方式中，向对象施用表达所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物赋予了针对赘生性细胞或肿瘤，如癌细胞或肿瘤的细胞介导的免疫性(cmi)。不受理论束缚，在另一个实施方式中，表达所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物在宿主(例如，巨噬细胞)的抗原递呈细胞(apc)中感染并表达感兴趣的抗原以用于抗原在i和ii型主要组织相容性复合体(mhc)上的直接递呈。在另一个实施方式中，向对象施用表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物诱导了多功能ifn-γ和tnf-α，其共产生了大幅度的癌症特异性cd4+和cd8+t细胞应答(通过cd4+和cd8+t细胞产生ifn-γ，通过cd4+t细胞产生tnf-α)以治疗肿瘤病。在另一个实施方式中，施用表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂提高或改善了癌症治疗的一种或多种临床结局。这些结局的非限制性实例是整体存活期、无恶化存活期、发展时间、治疗失败时间、无事件存活期、下次治疗时间、整体反应率和反应持续时间。可以为与在没有这种治疗的情况下，患有相同肿瘤病的患者或患者组相比，至少约10％，至少约20％，至少约25％，至少约30％，至少约35％，至少约40％，至少约50％，至少约60％，至少约70％，至少约80％，至少约90％或以上的一种或多种临床结局的提高或改善。可以通过技术人员已知的任何测定来测量通过在对象中施用表达所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物所引起的针对赘生性细胞或肿瘤，包括癌细胞或肿瘤的细胞介导免疫(cmi)应答功能的变化，所述测定包括(但不限于)流式细胞术(参见，例如，perfettos.p.等人,natrevimmun.2004；4(8):648-55)、淋巴细胞增殖测定(参见，例如,bonillaf.a.等人,annallergyasthmaimmunol.2008；101:101-4；和hicksm.j.等人,amjclinpathol.1983；80:159-63)，测量淋巴细胞激活的测定，其包括在t淋巴细胞的细胞因子测量激活后确定表面标志物表达的变化(参见，例如,carusoa.等人,cytometry.1997；27:71-6)、elispot测定(参见，例如,czerkinskyc.c.等人,jimmunolmethods.1983；65:109-121；和hutchingsp.r.等人,jimmunolmethods.1989；120:1-8)，或者自然杀伤细胞细胞毒性测定(参见，例如,bonillaf.a.等人,annallergyasthmaimmunol.2005may；94(5suppl1):s1-63)。本文所公开的化疗剂可以为烷化剂(例如，环磷酰胺)、铂-基治疗剂、抗代谢剂、局部异构酶抑制剂、细胞毒抗生素、插入剂、有丝分裂抑制剂、紫杉烷或其两种或更多种的组合。在某些实施方式中，所述烷化剂是氮芥、亚硝基脲、烷基磺酸盐、非经典烷化剂或者三氮烯。在某些实施方式中，所述化疗剂包括以下中的一个或多个：环磷酰胺、塞替派、氮芥(氮芥/氮芥)、乌拉莫司汀、美法仑、苯丁酸氮芥、异环磷酰胺、萘氮芥、胆磷酰胺、雌莫司汀、新恩比星、胆甾醇对苯乙酸氮芥、泼尼莫司汀、曲磷胺、乌拉莫司汀、苯达莫司汀、白消安、英丙舒凡、哌泊舒凡、卡莫司汀、洛莫司汀、吡葡亚硝脲、福莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀、链佐星、顺铂、卡铂、奈达铂、奥沙利铂、沙铂、四硝酸三铂、丙卡巴肼、六甲蜜胺、达卡巴嗪、米托唑胺、替莫唑胺、紫杉醇、多西他赛、长春碱、长春新碱、长春瑞滨、卡巴他赛、更生霉素(放线菌素d)、卡里奇霉素(calicheamicin)、达内霉素(dynemicin)、安吖啶、多柔比星(doxarubicin)、柔红霉素、表柔比星、米托蒽醌、伊达比星、吡柔比星、苯并多巴、卡波醌、米特多巴(meturedopa)、尤利多巴(uredopa)、六甲蜜胺、曲他胺、三乙烯磷酰胺、三乙烯硫代磷酰胺、三羟甲基蜜胺(trimethylolomelamine)、布拉他辛(bullatacin)、布拉它辛酮(bullatacinone)、喜树碱、拓扑替康、苔藓抑素、卡利斯汀(callystatin)、cc-1065、阿多来新、卡折来新、比折来新、念珠藻素、尾海兔素、倍癌毒素、kw-2189、cb1-tm1、艾榴塞洛素、水鬼蕉碱(pancratistatin)、匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)、海绵抑制素、氯屈膦酸、埃斯培拉霉素(esperamicin)、新制癌菌素发色团、阿克拉霉素(aclacinomysin)、安曲霉素、偶氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素c、卡柔比星(carabicin)、洋红霉素、嗜癌菌素、色霉素(chromomycinis)、地托比星、6-重氮-5-氧-l-正亮氨酸、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素、麦考酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素(potfiromycin)、嘌罗霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链佐星、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶(5-fu)、二甲叶酸、蝶罗呤、三甲曲沙、氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫唑嘌呤胺、硫鸟嘌呤、安西他滨、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氮尿苷、卡普睾酮、屈他雄酮丙酸酯、环硫雄醇、美雄烷、睾内酪、米托坦、曲洛司坦、亚叶酸、醋葡醛内酯、醛磷酰胺糖苷、氨基乙酰丙酸、恩尿嘧啶、贝斯布西(bestrabucil)、比生群、依达曲沙(edatraxate)、地磷酰胺(defofamine)、秋水仙胺、地吖醌、依氟鸟氨酸、依利醋铵、依托格鲁、硝酸镓、羟基脲、蘑菇多糖、氯尼达明(lonidainine)、美登素、安丝菌素、米托胍腙、莫比达摩(mopidanmol)、二胺硝吖啶(nitraerine)、喷司他丁、蛋氨氮芥(phenamet)、吡柔比星、洛索蒽醌、鬼臼酸、2-乙酰肼、psk多糖复合物、雷佐生、根霉素、西佐喃、锗螺胺、细交链孢菌酮酸、三亚胺醌、2,2',2”-三氯三乙胺；t-2毒素、疣孢霉素a(verracurina)、杆孢菌素a和蛇形菌素(anguidine)、氨基甲酸乙酯、长春地辛、甘露莫司汀、二溴甘露醇、二溴卫矛醇、哌泊溴烷、加西托星(gacytosine)、阿糖胞苷(“ara-c”)、依托泊苷(vp-16)、长春瑞滨、诺凡特龙(novantrone)、替尼泊苷、依达曲沙、氨基蝶呤、希罗达、伊班膦酸、伊立替康(例如、cpt-11)、局部异构酶抑制剂rfs2000、二氟甲基鸟氨酸(dmfo)、视黄酸、卡培他滨、普利霉素(plicomycin)、吉西他滨、长春瑞滨、反铂，以及任何上述化合物的药物可用的盐、酸或衍生物。在具体的实施方式中，所述化疗剂包括环磷酰胺。在某些实施方式中，所述氮芥是氮芥、环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、异环磷酰胺或白消安。在某些实施方式中，所述化疗剂使dna烷基化。在某些实施方式中，所述化疗剂使dna烷基化，从而导致形成链间交联(“icls”)。在某些实施方式中，与抑制、降低或干扰阴性检查点调节因子活性的免疫检查点抑制剂结合使用本文所述的化疗剂。在某些实施方式中，所述阴性检查点调节因子选自细胞毒t-淋巴细胞抗原-4(ctla-4)、cd80、cd86、细胞程序死亡1(pd-1)、细胞程序死亡配体1(pd-l1)、细胞程序死亡配体2(pd-l2)、淋巴细胞活化基因-3(lag-3；也称为cd223)、半乳凝素-3、b和t淋巴细胞衰减因子(btla)、t细胞膜蛋白3(tim3)、半乳凝素-9(gal9)、b7-h1、b7-h3、b7-h4、具有ig和itim域的t细胞免疫受体(tigit/vstm3/wucam/vsig9)、t细胞激活的v-域ig抑制剂(vista)、糖皮质激素-诱导的肿瘤坏死因子受体-相关(gitr)蛋白、疱疹病毒进入介导子(hvem)、ox40、cd27、cd28、cd137.cgen-15001t、cgen-15022、cgen-15027、cgen-15049、cgen-15052和cgen-15092。在某些实施方式中，所述免疫检查点抑制剂是抗pd-1抗体。在某些实施方式中，优选地在多次注射(例如，至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18、20、25、30、40、45或50次注射)或者通过在多个位点(例如，至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12或14个位点)的连续输注(例如，使用泵)来施用表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂。在某些实施方式中，在6-个月、12-个月、24-个月或48-个月内以两次或多次不同的注射施用表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物。在某些实施方式中，在选择的日期通过第一剂量施用表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或其组合物，在所述第一剂量之后至少2个月施用第二剂量，并且在所述第一剂量之后6个月施用第三剂量。在一个实例中，在多个身体位点进行皮肤注射以减轻局部皮肤反应程度。在进行疫苗接种当天，患者在四肢中分别距最近邻注射位置相隔至少约5cm(例如，至少4.5、5、6、7、8、9cm)的针头入口，接受来自一个注射器的以3至5次单独皮内剂量注射(例如，至少0.4ml、0.2ml或者0.1ml)所施用的指定总剂量。在后续疫苗接种日，将注射位点以顺时针或逆时针方式转动至不同的四肢。在某些实施方式中，所述方法还包括本文所提供的沙粒病毒颗粒和化疗剂的共施用。在某些实施方式中，所述共施用是同时的。在另一个实施方式中，在施用所述化疗剂之前，施用所述沙粒病毒颗粒。在其它实施方式中，在施用所述化疗剂之后，施用所述沙粒病毒颗粒。在某些实施方式中，所述沙粒病毒颗粒和所述化疗剂施用之间的间隔为约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时或者约12小时。在某些实施方式中，所述沙粒病毒颗粒和所述化疗剂施用之间的间隔为约1天，约2天，约3天，约4天，约5天，约6天，约1周，约8天，约9天，约10天，约11天，约12天，约13天，约2周，约3周，约4周，约5周，约6周，约7周，约8周，约9周，约10周，约11周，约12周。在某些实施方式中，所述沙粒病毒颗粒和所述化疗剂施用之间的间隔为约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月或者约6个月。在一些实施方式中，所述方法还包括施用至少一种其它疗法。在另一个实施方式中，在治疗方案中以约1:1至1:1000的范围内的摩尔比，具体地包括：1:1的比例，1:2的比例，1:5的比例，1:10的比例，1:20的比例，1:50的比例，1:100的比例，1:200的比例，1:300的比例，1:400的比例，1:500的比例，1:600的比例，1:700的比例，1:800的比例，1:900的比例，1:1000的比例施用两种感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒。在某些实施方式中，本文提供了治疗肿瘤病的方法，其中作为“初免”首先施用第一感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒，并且作为“加强”施用第二感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒。所述第一和所述第二感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒可以表达相同或不同的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段。作为另外一种选择或者另外，在一些特定实施方式中，用来源于不同物种的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒进行所述“初免”和“加强”施用。在某些具体的实施方式中，用来源于lcmv的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒进行所述“初免”施用，并且用来源于胡宁病毒的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒进行所述“加强”施用。在某些具体的实施方式中，用来源于胡宁病毒的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒进行所述“初免”施用，并且用来源于lcmv的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒进行所述“加强”施用。在某些实施方式中，用来源于皮秦德病毒的沙粒病毒颗粒进行所述“初免”施用，并且用来源于lcmv的沙粒病毒颗粒进行所述“加强”施用。在某些实施方式中，用来源于皮秦德病毒的沙粒病毒颗粒进行所述“初免”施用，并且用来源于胡宁病毒的沙粒病毒颗粒进行所述“加强”施用。在某些实施方式中，用来源于lcmv的沙粒病毒颗粒进行所述“初免”施用，并且用来源于皮秦德病毒的沙粒病毒颗粒进行所述“加强”施用。在某些实施方式中，用来源于胡宁病毒的沙粒病毒颗粒进行所述“初免”施用，并且用来源于皮秦德病毒的沙粒病毒颗粒进行所述“加强”施用。在某些实施方式中，与免疫调节肽、多肽或蛋白的施用结合进行所述“初免”施用和/或所述“加强”施用。在某些实施方式中，与化疗剂的施用结合进行所述“初免”施用和/或所述“加强”施用。在某些实施方式中，施用表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的第一感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒，然后施用表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的第二感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒导致产生了比施用单一表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒更强的抗原特异性cd8+t细胞应答。在某些实施方式中，在第二施用之后，与第一施用相比，所述抗原特异性cd8+t细胞计数增加50％、100％、150％或200％。在某些实施方式中，施用表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的第三感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒导致产生了比施用两个连续的表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒更强的抗原特异性cd8+t细胞应答。在某些实施方式中，在第三施用之后，与第一施用相比，所述抗原特异性cd8+t细胞计数增加约50％、约100％、约150％，约200％或者约250％。在某些实施方式中，本文提供了用于治疗肿瘤病的方法，其包括施用两种或更多种沙粒病毒颗粒，其中所述两种或更多种沙粒病毒颗粒是同源的，并且其中每次施用之间的时间间隔为约1周，约2周，约3周，约4周，约5周，约6周，约7周，约8周，约3个月，约4个月，约5个月，约6个月，约7个月，约8个月，约9个月，约10个月，约11个月，约12个月，约18个月或者约24个月。在某些实施方式中，施用表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的第一感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒和表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的第二异源感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒引起了比施用表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的第一感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒和表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的第二同源感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒更强的cd8+t细胞应答。(f)组合物、施用和剂量在某些实施方式中，包含本文所提供的沙粒病毒颗粒的免疫原性组合物(例如，疫苗制剂)和药物组合物可以与本文所提供的方法和组合物一起使用，如与本文所提供的化疗剂组合。可以根据本领域中的标准程序配制这些疫苗、免疫原性组合物和药物组合物。在另一个实施方式中，本文提供了包含本文所述的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒，并且在某些实施方式中，包含本文所提供的化疗剂的组合物。这些组合物可以在治疗肿瘤病的方法中使用。在另一个具体的实施方式中，本文所提供的免疫原性组合物可以用于在施用所述组合物的宿主中引起免疫应答。本文所述的免疫原性组合物可以用作疫苗并因此可以作为药物组合物配制。在具体的实施方式中，在对象(例如，人对象)的肿瘤病的治疗中使用本文所述的免疫原性组合物。在其它实施方式中，所述疫苗、免疫原性组合物或药物组合物适合于兽医和/或人施用。在某些实施方式中，本文提供了包含如本文所述的沙粒病毒颗粒(或者不同的沙粒病毒颗粒的组合)的免疫原性组合物。在某些实施方式中，这种免疫原性组合物还包含药物可用的赋形剂。在某些实施方式中，这种免疫原性组合物还包含佐剂。用于与本文所述的组合物结合施用的佐剂可以在所述组合物施用之前施用，随所述组合物一起施用或在所述组合物施用后施用。在一些实施方式中，术语“佐剂”是指当与本文所述的组合物结合或者作为本文所述的组合物的一部分施用时，加强、提高和/或增强对感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒的免疫应答，但是当单独施用所述化合物时，对感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒不产生免疫应答的化合物。在一些实施方式中，所述佐剂对感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒产生免疫应答，但是不产生过敏症或者其它不良反应。佐剂可以通过几种机制提高免疫应答，包括(例如)淋巴细胞招募、b和/或t细胞刺激和巨噬细胞刺激。当本发明的疫苗或免疫原性组合物包含佐剂或者与一种或多种佐剂一起施用时，可以使用的佐剂包括(但不限于)矿物盐佐剂或矿物盐凝胶佐剂、颗粒佐剂、微颗粒佐剂、粘膜佐剂和免疫刺激性佐剂。佐剂的实例包括(但不限于)铝盐(白矾)(如氢氧化铝、磷酸铝和硫酸铝)、3-脱-o-酰单磷酰酯a(mpl)(参见gb2220211)、mf59(novartis)、as03(glaxosmithkline)、as04(glaxosmithkline)、聚山梨酯80(吐温80；iclamericas,inc.)、咪唑并吡啶化合物(参见国际专利申请no.pct/us2007/064857，其作为国际专利公开no.wo2007/109812公开)、咪唑喹喔啉化合物(参见国际专利申请no.pct/us2007/064858，其作为国际专利公开no.wo2007/109813公开)和皂苷，如qs21(参见kensil等人，疫苗设计：亚单位和佐剂方法(vaccinedesign:thesubunitandadjuvantapproach，powell&newman主编，plenumpress,ny,1995)；美国专利no.5057540)。在一些实施方式中，所述佐剂是弗氏佐剂(完全或不完全)。其它佐剂是水包油乳化液(如角鲨烯或花生油)，其任选地结合免疫刺激剂，如单磷酰酯a(参见stoute等人,n.engl.j.med.336,86-91(1997))。所述组合物单独或与药物可用的载体和/或化疗剂一起包含本文所述的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒。可以使用基因工程沙粒病毒颗粒的混悬液或分散体，特别是等渗水混悬液或分散体。所述药物组合物可以灭菌和/或可以包含赋形剂，例如，防腐剂、稳定剂、润湿剂和/或乳化剂、增溶剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂，并且以本身已知的方式制备，例如，通过常规分散和混悬方法制备。在某些实施方式中，这些分散体或混悬液可以包含粘度-调节剂。将所述混悬液或分散体保持在约2-8℃的温度，或者优选地对于更长时间的储存，可以将其冷冻，然后在使用前不久融化。对于注射，可以将疫苗或免疫原性制剂在水溶液，优选地在生理学相容的缓冲液，如汉克斯溶液、林格氏溶液或生理盐水缓冲液中制备。所述溶液可以含有配制试剂，如混悬、稳定和/或分散剂。在某些实施方式中，本文所述的组合物还包含防腐剂，例如，汞衍生物硫柳汞。在具体的实施方式中，本文所述的药物组合物包含0.001％至0.01％的硫柳汞。在其它实施方式中，本文所述的药物组合物不包含防腐剂。所述药物组合物包含约103至约1011个溶血灶形成单位的所述基因工程的沙粒病毒颗粒。用于肠胃外施用的单位剂量形式为(例如)安瓿瓶或小瓶，例如，含有约103至1010个溶血灶形成单位或者105至1015个物理颗粒的基因工程沙粒病毒颗粒的小瓶。在另一个实施方式中，通过以下途径将本文所提供的疫苗或免疫原性组合物施用于对象，所述途径包括(但不限于)口服、皮内、肌内、腹膜内、静脉内、局部、皮下、经皮、鼻内和吸入途径，和通过破皮(例如，使用分叉针将皮肤表层破皮)。具体地，可以使用皮下、肌内或静脉内途径。对于鼻内或通过吸入法的施用，可以借助于适合的抛射剂，例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它适合的气体，以气溶胶喷雾呈现的形式从增压包或雾化器中方便地递送用于根据本发明的用途的制剂。就加压气雾剂来说，可以通过设置阀门以递送计量的量来确定剂量单元。可以将在吸入器或吹药器中使用的(例如，明胶)胶囊和药筒配制成含有所述化合物和适合的粉末基剂(如乳糖或淀粉)的粉末混合物。活性成分的剂量取决于疫苗接种的类型以及对象，和他们的年龄、体重、个体状况、个体药物动力学数据和施用途径。在某些实施方式中，所述组合物可以以包含治疗有效量的沙粒病毒颗粒和/或治疗有效量的化疗剂的单一剂量施用于患者。在一些实施方式中，所述沙粒病毒颗粒可以以分别包含治疗有效量的沙粒病毒颗粒和化疗剂的单一剂量施用于患者。在某些实施方式中，将所述组合物作为单一剂量施用于所述患者，然后在3至6周后施用第二剂量。根据这些实施方式，可以在第二次接种后，以6至12个月的间隔向所述对象施用加强接种。在某些实施方式中，所述加强接种可以使用不同的沙粒病毒颗粒或其组合物。在一些实施方式中，可以重复如本文所述的相同组合物的施用并且间隔至少1天、2天、3天、4天、5天、10天、15天、30天、45天、2个月、75天、3个月或至少6个月。还提供了用于生产处于药物制剂形式的疫苗的沙粒病毒颗粒和化疗剂的方法和用途，所述疫苗包含沙粒病毒颗粒和化疗剂作为活性成分。还提供了用于在本文所述的肿瘤病的治疗中使用的本文所提供的沙粒病毒颗粒和本文所提供的化疗剂的组合。在某些实施方式中，所述组合处于相同药物组成。在某些实施方式中，所述组合未处于相同药物组成，如当单独施用所述沙粒病毒颗粒和化疗剂时。以本身已知的方式制备本发明申请所述的药物组合物，例如，通过常规混合和/或分散方法。本文还提供了可以用于实施本文所述的方法的试剂盒。在某些实施方式中，本文所提供的试剂盒可以包含一个或多个容器。这些容器可以适用于储存本文所提供的组合物(例如，药物、免疫原性或疫苗组合物)。试剂盒中还包含了使用说明书。这些说明书足够详细地描述了使用其中所含的组合物的治疗规程。例如，所述说明书可以包含如本文所提供的用于治疗肿瘤病的方法的剂量施用和施用说明。在某些实施方式中，本文所提供的试剂盒包含容器，所述容器分别含有用于实施本文所述的方法的活性成分。因此，在某些实施方式中，本文所提供的试剂盒包含两个或更多个容器和使用说明，其中所述容器之一包含本文所提供的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒，另一个容器包含本文所提供的化疗剂。在具体的实施方式中，本文所提供的试剂盒包含两个或更多个容器和使用说明，其中所述容器之一包含本文所提供的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒，另一个容器包含本文所提供的化疗剂。(g)测定用于测量沙粒病毒载体感染性的测定技术人员已知的任何测定可以用于测量沙粒病毒载体制剂的感染性。例如，可以通过“病灶形成单位测定”(ffu测定)来进行病毒/载体滴度的确定。简言之，将补体细胞，例如，表达lcmvgp蛋白的hek293细胞铺板并用不同稀释度的病毒/载体样品接种。在培育期之后，为了使细胞形成单层和使病毒贴附细胞，用甲基纤维素覆盖所述单层。当将所述板进一步培育时，原始感染细胞释放病毒子代。由于甲基纤维素覆盖，新病毒的扩散被限制在相邻的细胞。因此，每个感染性颗粒产生了圆形感染细胞区，其称为病灶。可以使用抗lcmv-np抗体和hrp-基显色反应使该病灶可见并由此可计数。可以以病灶形成单位/毫升(ffu/ml)来计算病毒/载体的滴度。为了确定具有转基因的载体的感染性滴度(ffu/ml)，通过使用各自的转基因-特异性抗体代替抗-lcmv-np抗体来修改该测定。血清elisa一旦动物(例如，小鼠、豚鼠)接种疫苗，则可以通过抗原-特异性血清elisa(酶联免疫吸附测定)进行体液免疫应答确定。简言之，用抗原(例如，重组蛋白)涂覆板，封闭以避免抗体的非特异性结合并与血清的连续稀释培育。培育后，可以(例如)使用酶-偶联的抗-物种(例如，小鼠、豚鼠)-特异性抗体(检测总igg或igg亚类)和后续显色反应来检测结合的血清-抗体。抗体滴度可以确定为(例如)终点几何平均滴度。还可以进行免疫捕获elisa(ic-elisa)(参见shanmugham等人,2010,clin.vaccineimmunol.17(8):1252-1260)，其中所述捕获剂交联至珠。还可以进行免疫捕获elisa(ic-elisa)(参见shanmugham等人,2010,clin.vaccineimmunol.17(8):1252-1260)，其中所述捕获剂交联至珠。arpe-19细胞中的中和测定通过使用来自atcc的arpe-19细胞和gfp-标签的病毒的下列细胞测定进行血清中所诱导的抗体的中和活性确定。另外，使用作为外源补体来源的补体血清。从用于中和之前一或两天，用6.5×103个细胞/孔(50μl/孔)在384孔板中接种开始测定。在无细胞的96-孔无菌组织培养板中，在37℃进行中和1h。在中和培育步骤后，将混合物加入至细胞并培育另外4天以用于通过酶标仪的gfp-检测。将阳性中和人血清用作每个板上的测定阳性对照以检查所有结果的可靠性。使用4参数逻辑曲线拟合确定滴度(ec50)。作为额外测试，用荧光显微镜检查孔。空斑减数测定简言之，可以通过使用用绿色荧光蛋白标签的复制-缺陷型lcmv进行lcmv的空斑减数(中和)测定，5％的兔血清可以用作外源补体来源，并且可以通过荧光显微镜对空斑计数。中和滴度可以定义为与对照(免疫前)血清样品相比，导致空斑50％、75％、90％或95％减少的最高血清稀释度。豚鼠肺成纤维细胞(gpl)中的中和测定简言之，在具有作为外源补体来源的添加的兔血清(1％)的gpl完全培养基中制备测试和对照(接种疫苗前)血清的连续稀释。稀释系列在1:40至1:5120之间。将血清稀释液与egfp标签的病毒(100-200pfu/孔)在37℃培育30min，然后转移到含有汇合的gpl细胞的12-孔板中。样品重复处理三次。在37℃培育2小时之后，用pbs清洗细胞，再次添加gpl完全培养基并在37℃/5％co2下培育5天。通过荧光显微镜使空斑显象，计数并与对照孔相比。将与对照相比，导致空斑数减少50％的血清稀释度指定为中和滴度。qpcr根据生产商所提供的规程，使用qiaamp病毒rna微型试剂盒(qiagen)分离lcmvrna基因组。使用iii一步qrt-pcr试剂盒(invitrogen)以及对lcmvnp编码区部分特异的引物和探针(fam报道子和nfq-mgb猝灭剂)，通过在steponeplus实时pcr系统(appliedbiosystems)上进行的定量pcr检测lcmvrna基因组当量。反应温度谱为：60℃，30min；95℃，2min；然后是95℃，15s，56℃，30s，循环45次。通过将样品结果与从通过分光光度法定量的对应于含有引物和探针结合位点的lcmvnp编码序列片段的体外-转录的rna片段的log10稀释系列所制备的标准曲线相比较来定量rna。豚鼠肺成纤维细胞(gpl)中的中和测定简言之，在具有作为外源补体来源的添加的兔血清(1％)的gpl完全培养基中制备测试和对照(接种疫苗前)血清的连续稀释。稀释系列在1:40至1:5120之间。将血清稀释液与egfp标签的病毒(100-200pfu/孔)在37℃培育30min，然后转移到含有汇合的gpl细胞的12-孔板中。样品重复处理三次。在37℃培育2小时之后，用pbs清洗细胞，再次添加gpl完全培养基并在37℃/5％co2下培育5天。通过荧光显微镜使空斑显象，计数并与对照孔相比。将与对照相比，导致空斑数减少50％的血清稀释度指定为中和滴度。免疫印迹在感染后指定的时间点，使用ripa缓冲液(thermoscientific)将在组织培养瓶中或悬浮生长的感染细胞溶胞，或者在无细胞-溶胞的情况下直接使用。将样品与还原剂和nupagelds样品缓冲液(novex)加热至99℃并保持10分钟，并在上样至4-12％sds-凝胶进行电泳之前冷却至室温。使用invitrogensiblot凝胶转移装置将蛋白在膜上印迹并通过丽春红染色显象。最终，用抗感兴趣的蛋白的一抗和碱性磷酸酶缀合的二抗，然后用1-步nbt/bcip溶液(invitrogen)染色来检测制剂。用于检测抗原-特异性cd8+t细胞增殖的mhc-肽多聚体染色测定技术人员已知的任何测定可以用于测试抗原-特异性cd8+t细胞应答。例如，可以使用mhc-肽四聚体染色测定(参见，例如,altmanj.d.等人,science.1996；274:94-96；和murali-krishnak.等人,immunity.1998；8:177-187)。简要地，所述测定包括以下步骤，将四聚体测定用于检测抗原特异性t细胞的存在。为了使t细胞检测对其特异的肽，必需识别肽以及对抗原特异性t细胞(通常荧光标记的)定制的mhc分子四聚体两者。然后，通过借助于荧光标记物的流式细胞术检测所述四聚体。用于检测抗原-特异性cd4+t细胞增殖的elispot测定技术人员已知的任何测定可以用于测试抗原-特异性cd4+t细胞应答。例如，可以使用elispot测定(参见，例如,czerkinskyc.c.等人,jimmunolmethods.1983；65:109-121；和hutchingsp.r.等人,jimmunolmethods.1989；120:1-8)。简要地，所述测定包括以下步骤：用抗细胞因子抗体涂覆免疫斑点板。在所述免疫斑点板中培育细胞。细胞分泌细胞因子，然后将其清洗掉。然后，用第二生物素化的-抗细胞因子抗体涂覆板，并用抗生物素蛋白-hrp系统显象。用于检测cd8+和cd4+t细胞应答的功能性的胞内细胞因子测定技术人员已知的任何测定可以用于测试cd8+和cd4+t细胞应答的功能性。例如，可以使用与流式细胞术结合的胞内细胞因子测定(参见，例如,sunim.a.等人,jimmunolmethods.1998；212:89-98；nomural.e.等人,cytometry.2000；40:60-68；和ghanekars.a.等人,clinicalanddiagnosticlaboratoryimmunology.2001；8:628-63)。简要地，所述测定包括以下步骤：通过特异性肽或蛋白的细胞激活，添加蛋白转运抑制剂(例如，布雷菲德菌素a)以将所述细胞因子保留在所述细胞内。清洗后，可以将抗其它细胞标志物的抗体添加至细胞。然后，将细胞固定并透性化。添加抗细胞因子抗体，并且可以通过流式细胞术分析细胞。用于确认病毒载体复制-缺陷的测定技术人员已知的确定感染性且有复制能力的病毒颗粒的浓度的任何测定也可以用于测量样品中的复制-缺陷型病毒颗粒。例如，使用非补体细胞的ffu测定可以用于该目的。此外，空斑-基测定是用于确定病毒样品中就空斑形成单位(pfu)而言的病毒浓度的标准方法。具体地，用不同稀释度的病毒感染非补体宿主细胞的汇合单层，并用半固体培养基，如琼脂覆盖以防止病毒感染无区别地扩散。当病毒成功感染并且本身在固定的细胞单层内的细胞中复制时，形成病毒空斑(参见，例如,kaufmann,s.h.；kabelitz,d.(2002).methodsinmicrobiologyvol.32:immunologyofinfection.academicpress.isbn0-12-521532-0)。根据所分析的病毒，空斑形成可以需要3-14天。通常对空斑手动计数，并且结合用于制备板的稀释因子，将所述结果用于计算每样品单位体积的空斑形成单位数目(pfu/ml)。pfu/ml结果代表了样品内感染性、有复制能力的颗粒的数目。用于病毒抗原表达的测定技术人员已知的任何测定可以用于测量病毒抗原的表达。例如，可以进行ffu测定。对于检测，使用了抗各自病毒抗原的单或多克隆抗体制剂(转基因-特异性ffu)。动物模型可以在动物模型中测试包含表达本文所述的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒或其组合物的疫苗的安全性、耐受性和免疫原有效性。在某些实施方式中，可以用于测试本文所使用的疫苗及其组合物的安全性、耐受性和免疫原有效性的动物模型包括小鼠、豚鼠、大鼠、猴子和黑猩猩。在优选的实施方式中，可以用于测试本文所使用的疫苗及其组合物的安全性、耐受性和免疫原有效性的动物模型包括小鼠。化疗剂测定已经设计了一些能够评价所提议的化疗剂的性质的测定。可以用于测试本文所公开的方法和组合物的肿瘤模型包括colon26(ct26)、mc38(小鼠结肠腺癌)、b16f10(b16)、lewislung(llc)、madison109(mad109)、emt-6(鼠乳腺癌)、4t1(4t1)(鼠乳腺癌)、hcmel3(鼠黑素瘤)、hgfxcdk4r24c/r24c(鼠黑素瘤)和(renca)(鼠肾癌)。在某些实施方式中，在这些模型系统中，可以通过将肿瘤细胞系皮下(例如，ct26、4t1、mad109、renca、llc或b16)或者脑内(例如，gl261、onc26m4)接种至啮齿类，例如，成年雌性小鼠中来产生“可移植肿瘤”。肿瘤可以发展预定时间段，例如，几天。这些肿瘤在同基因的具有免疫能力的啮齿类，例如，小鼠株中生长。例如，ct26、4t1、mad109和renca可以在balb/c小鼠中生长，llc、b16和gl261可以在c57bl/6小鼠中生长，onc26m4可以在fvbn小鼠中生长。可以通过将编码一些(例如，一个、两个、三个或更多个)致癌基因和编码一个或多个报道子，例如，荧光虫荧光素酶报道子的dna质粒脑内注射至新生c57bl/6或fvbn小鼠中以转化内源脑细胞来产生“自发肿瘤”。可以通过本领域中已知的技术，例如，生物发光成象来监测神经胶质瘤的生长。可以通过本领域中已知的技术监测皮下肿瘤的生长，例如，以给定时间间隔在三维空间中进行卡尺测量。5.2三-节段沙粒病毒颗粒在某些实施方式中，与化疗剂组合的包含编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的三-节段沙粒病毒颗粒可以用作治疗肿瘤病，如癌症的免疫疗法。术语“瘤的”或“瘤”是指细胞或组织的异常新生物。这种异常新生物可以形成块，也称为肿瘤或瘤形成。瘤包括良性瘤、原位瘤、恶性瘤和具有不确定或未知作用的瘤。在某些实施方式中，使用本文所述的方法和组合物治疗的肿瘤病是癌症。本文提供了用于治疗和/或预防肿瘤病，如癌症的组合治疗。具体地，这些组合治疗包括与一种或多种化疗剂组合施用包含编码一个或多个肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒颗粒或病毒载体。这些基因修饰的病毒可以施用于对象以用于治疗肿瘤病，如癌症。本文所提供的沙粒病毒，包括编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的详细说明可见于5.2.(a)、5.2.(b)和5.2.(c)节。在5.2.(a)节中描述了在非天然位置包含开放阅读框架的沙粒病毒。在5.2.(b)节中描述了三-节段沙粒病毒。可以与本发明的方法和组合物一起使用的肿瘤抗原可见于5.2.(c)节。另外，在5.2.(d)节中更详细地描述了用于在本文所述的方法和组合物中使用的沙粒病毒颗粒或病毒载体的产生方法。除向对象施用沙粒病毒颗粒或病毒载体外，本文所提供的用于治疗肿瘤病的免疫疗法可以包括化疗剂。“化疗剂”是细胞毒抗癌剂，并且可以通过它们在细胞内的活性模式，例如，它们影响细胞周期的阶段进行分类(例如，有丝分裂抑制剂)。作为另外一种选择，化疗剂的特点可以基于交联dna、插入到dna中或通过影响核酸合成引起染色体畸变(例如，烷化剂)的能力以及其它作用机制。化疗剂的特点还可以基于化学组成或结构(例如，铂-基治疗剂)。因此，在某些实施方式中，本文提供了使用包含编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒颗粒或病毒载体和化疗剂治疗肿瘤病的方法和组合物。因此，在某些实施方式中，本文提供了使用包含编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒颗粒或病毒载体和化疗剂用于治疗肿瘤病的方法。另外，在某些实施方式中，本文提供了包含含有编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列和化疗剂的沙粒病毒颗粒或病毒载体的组合物。在某些实施方式中，将本文所提供的沙粒病毒颗粒或病毒载体被工程化以包含具有编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列和位于野生型orf位置以外的位置的至少一种沙粒病毒开放阅读框架(“orf”)的沙粒病毒基因组节段。在某些实施方式中，本文所提供的沙粒病毒颗粒或病毒载体是感染性的复制缺陷型沙粒病毒颗粒或病毒载体。在其它实施方式中，本文所提供的沙粒病毒颗粒是三-节段沙粒病毒颗粒或病毒载体，它可以是复制-缺陷型或有复制能力的。在其它实施方式中，当增殖时，本文所提供的三-节段沙粒病毒颗粒或病毒载体不会产生有复制能力的二-节段病毒颗粒。在5.2.(f)和5.2.(g)节中更详细地描述了使用本文所提供的沙粒病毒颗粒或病毒载体和化疗剂的方法和组合物。除与化疗剂组合向对象施用沙粒病毒颗粒或病毒载体外，本文所提供的用于治疗肿瘤病的免疫疗法还可以包括免疫检查点调节因子。术语“免疫检查点调节因子”(也称为“检查点调节因子”或者“检查点调控因子”)是指调节(例如，完全或部分降低、抑制、干扰、激活、刺激、提高、加强或支持)一个或多个检查点分子的功能的分子或化合物。因此，免疫检查点调节因子可以是免疫检查点抑制剂或免疫检查点激活剂。“免疫检查点抑制剂”是指抑制、降低或干扰阴性检查点调节因子活性的分子。在某些实施方式中，用于和本文所公开的方法和组合物一起使用的免疫检查点抑制剂可以直接抑制阴性检查点调节因子的活性，或者降低阴性检查点调节因子的表达，或者干扰阴性检查点调节因子与结合伴侣(例如，配体)的相互作用。用于和本文所公开的方法和组合物一起使用的免疫检查点抑制剂包括靶向阴性检查点调节因子的表达的蛋白质、多肽、肽、反义寡核苷酸、抗体、抗体片段或抑制性rna分子。“阴性检查点调节因子”是指在通过配体或反受体接合之后，通过向t细胞递送阴性信号来下调免疫应答(例如，t细胞激活)的分子。阴性-检查点调节因子的示例性功能是防止不成比例的免疫激活，最大程度减小附带损害和/或维持外周自耐受性。在某些实施方式中，阴性检查点调节因子是通过抗原递呈细胞表达的配体或受体。在某些实施方式中，阴性检查点调节因子是通过t细胞表达的配体或受体。在某些实施方式中，阴性检查点调节因子是通过抗原递呈细胞和t细胞两者表达的配体或受体。(a)在非天然位置具有开放阅读框架的沙粒病毒在某些实施方式中，具有其orf重排和本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒可以与本文所提供的方法和组合物一起使用，如与化疗剂组合。在某些实施方式中，这些沙粒病毒是有复制能力和感染性的。因此，在某些实施方式中，本文提供了沙粒病毒基因组节段，其中将所述沙粒病毒基因组节段被工程化从而在其中在分离自orf野生型，如lcmv-mp(在本文中称为“野生型位置”)的病毒中存在各个基因的位置以外的位置(即，非天然位置)具有沙粒病毒orf以及本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。所述野生型沙粒病毒基因组节段和orf在本领域中是已知的。具体地，所述沙粒病毒基因组由s节段和l节段组成。所述s节段具有编码gp和np的orf。所述l节段编码l蛋白和z蛋白。两节段均侧接各自的5'和3'utr。在某些实施方式中，可以将所述沙粒病毒基因组节段被工程化以在野生型位置以外的位置携带两个或更多个沙粒病毒orf。在其它实施方式中，可以将所述沙粒病毒基因组节段被工程化以在野生型位置以外的位置携带两个沙粒病毒orf，或三个沙粒病毒orf，或四个沙粒病毒orf。在某些实施方式中，本文所提供的沙粒病毒基因组节段可以是：(xix)沙粒病毒s节段，其中编码np的orf受沙粒病毒5'utr的控制；(xx)沙粒病毒s节段，其中编码z蛋白的orf受沙粒病毒5'utr的控制；(xxi)沙粒病毒s节段，其中编码l蛋白的orf受沙粒病毒5'utr的控制；(xxii)沙粒病毒s节段，其中编码gp的orf受沙粒病毒3'utr的控制；(xxiii)沙粒病毒s节段，其中编码l蛋白的orf受沙粒病毒3'utr的控制；(xxiv)沙粒病毒s节段，其中编码z蛋白的orf受沙粒病毒3'utr的控制；(xxv)沙粒病毒l节段，其中编码gp的orf受沙粒病毒5'utr的控制；(xxvi)沙粒病毒l节段，其中编码np的orf受沙粒病毒5'utr的控制；(xxvii)沙粒病毒l节段，其中编码l蛋白的orf受沙粒病毒5'utr的控制；(xxviii)沙粒病毒l节段，其中编码gp的orf受沙粒病毒3'utr的控制；(xxix)沙粒病毒l节段，其中编码np的orf受沙粒病毒3'utr的控制；和(xxx)沙粒病毒l节段，其中编码z蛋白的orf受沙粒病毒3'utr的控制。在某些实施方式中，处于本文所述的沙粒病毒基因组节段的非天然位置的orf可以受沙粒病毒3'utr或者沙粒病毒5'utr的控制。在更具体的实施方式中，所述沙粒病毒3'utr是沙粒病毒s节段的3'utr。在另一个具体的实施方式中，所述沙粒病毒3'utr是沙粒病毒l节段的3'utr。在更具体的实施方式中，所述沙粒病毒5'utr是沙粒病毒s节段的5'utr。在其它具体的实施方式中，所述5'utr是l节段的5'utr。在其它实施方式中，处于本文所述的沙粒病毒基因组节段的非天然位置的orf可以受沙粒病毒保守末端序列元件(5'-和3'-末端19-20-nt范围)的控制(参见，例如,perez&delatorre,2003,jvirol.77(2):1184–1194)。在某些实施方式中，处于沙粒病毒基因组节段的非天然位置的orf可以受5'utr的启动子元件的控制(参见，例如,albarino等人,2011,jvirol.,85(8):4020-4)。在另一个实施方式中，处于沙粒病毒基因组节段的非天然位置的orf可以受3'utr的启动子元件的控制(参见，例如,albarino等人,2011,jvirol.,85(8):4020-4)。在更具体的实施方式中，所述5'utr的启动子元件是s节段或l节段的5'utr的启动子元件。在另一个具体的实施方式中，所述3'utr的启动子元件是s节段或l节段的3'utr的启动子元件。在某些实施方式中，处于沙粒病毒基因组节段的非天然位置的orf可以受截短的沙粒病毒3'utr或者截短的沙粒病毒5'utr的控制(参见，例如,perez&delatorre,2003,jvirol.77(2):1184–1194；albarino等人,2011,jvirol.,85(8):4020-4)。在更具体的实施方式中，所述截短的3'utr是沙粒病毒s节段或l节段的3'utr。在更具体的实施方式中，所述截短的5'utr是沙粒病毒s节段或l节段的5'utr。本文还提供了包含被工程化以具有位于所述orf的野生型位置以外的位置的orf的第一基因组节段和第二沙粒病毒基因组节段的沙粒病毒颗粒，从而所述沙粒病毒颗粒包含s节段和l节段。在具体的实施方式中，位于所述orf的野生型位置以外的位置的orf是沙粒病毒orf之一。在某些具体的实施方式中，所述沙粒病毒颗粒可以包含所有四个沙粒病毒orf的全部补体。在具体的实施方式中，所述第二沙粒病毒基因组节段已被工程化以在所述orf的野生型位置以外的位置具有orf。在另一个具体的实施方式中，所述第二沙粒病毒基因组节段可以是野生型基因组节段(即，包含位于所述野生型位置中的节段上的orf)。在某些实施方式中，所述第一沙粒病毒基因组节段是l节段，所述第二沙粒病毒基因组节段是s节段。在其它实施方式中，所述第一沙粒病毒基因组节段是s节段，所述第二沙粒病毒基因组节段是l节段。表1显示了包含在所述orf的野生型位置以外的位置具有orf的基因组节段和第二基因组节段的沙粒病毒颗粒的非限制性实例。表1沙粒病毒颗粒*位置1受沙粒病毒s节段5'utr的控制；位置2受沙粒病毒s节段3'utr的控制；位置3受沙粒病毒l节段5'utr的控制；位置4受沙粒病毒l节段3'utr的控制。位置1位置2位置3位置4gpnplzgpzlnpgpznplgplnpzgplznpnpgplznpgpzlnplgpznplzgpnpzgplnpzlgpzgplnpzgpnplznpgplznplgpzlnpgpzlgpnplnpgpzlnpzgplgpznplgpnpzlznpgplzgpnp本文还提供了已被工程化以在所述orf的野生型位置以外的位置具有orf并且具有本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒基因组节段的cdna。在更具体的实施方式中，本文提供了如表1所述的沙粒病毒基因组的cdna或cdna组。在某些实施方式中，被工程化以在所述orf的野生型位置以外的位置具有orf的沙粒病毒基因组节段的cdna是dna表达载体的一部分或将其引入dna表达载体。在具体的实施方式中，被工程化以在所述orf的野生型位置以外的位置具有orf的沙粒病毒基因组节段的cdna是帮助产生如本文所述的沙粒病毒基因组节段的dna表达载体的一部分或将其引入所述dna表达载体。在另一个实施方式中，可以将本文所述的cdna引入质粒。在5.2.(e)节中提供了cdna或核酸和表达系统的更详细说明。用于产生cdna的技术是分子生物学以及dna操纵和生产的常规和传统方法。可以使用技术人员已知的任何克隆技术。如在实验手册，如sambrookandrussell,molecularcloning:alaboratorymanual,第三版,coldspringharborlaboratoryn.y.(2001)中，对于技术人员熟知并且可用的技术。在某些实施方式中，将被工程化在所述orf的野生型位置以外的位置具有orf并且具有本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒基因组节段的cdna引入(例如，转染)到宿主细胞中。因此，在一些实施方式中，本文提供了宿主细胞，其包含被工程化以在所述orf的野生型位置以外的位置具有orf的沙粒病毒基因组节段的cdna(即，基因组节段的cdna)和本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。在其它实施方式中，本文所述的cdna是dna表达载体的一部分或者可以引入dna表达载体并引入宿主细胞。因此，在一些实施方式中，本文提供了包含引入载体的本文所述的cdna的宿主细胞。在其它实施方式中，将本文所述的沙粒病毒基因组节段引入宿主细胞。在某些实施方式中，本文描述了产生包含本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒基因组节段的方法，其中所述方法包括转录所述沙粒病毒基因组节段的cdna。在某些实施方式中，在所述沙粒病毒基因组节段的体外或体内转录期间，病毒聚合酶蛋白可以存在。在某些实施方式中，使用双向启动子进行所述沙粒病毒基因组节段的转录。在其它实施方式中，使用双向表达盒进行所述沙粒病毒基因组节段的转录(参见，例如,等人,2013,jgenvirol.,94(pt6):1175–1188)。在更具体的实施方式中，所述双向表达盒包含分别从对侧读至插入的沙粒病毒基因组节段的两个末端的聚合酶i和聚合酶ii启动子。在更具体的实施方式中，具有pol-i和pol-ii启动子的双向表达盒从对侧读至l节段和s节段在其它实施方式中，本文所述的沙粒病毒基因组节段的cdna的转录包含启动子。启动子的具体实例包括rna聚合酶i启动子、rna聚合酶ii启动子、rna聚合酶iii启动子、t7启动子、sp6启动子或t3启动子。在某些实施方式中，产生沙粒病毒基因组节段的方法还可以包括将包含本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒基因组节段的cdna引入宿主细胞。在某些实施方式中，产生沙粒病毒基因组节段的方法还可以包括将包含本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒基因组节段的cdna引入宿主细胞，其中所述宿主细胞表达用于产生所述沙粒病毒基因组节段的所有其它组分；和从所述宿主细胞的上清液纯化所述沙粒病毒基因组节段。这些方法是本领域技术人员熟知的。本文提供了用本文提供的核酸、载体和组合物感染的细胞系、培养物和培养所述细胞的方法。在5.2.(e)节中提供了本文所述的核酸、载体系统和细胞系的更详细说明。在某些实施方式中，如本文所述的沙粒病毒颗粒导致产生了感染性且有复制能力的沙粒病毒颗粒。在具体的实施方式中，本文所述的沙粒病毒颗粒是减毒的。在具体的实施方式中，所述沙粒病毒颗粒是减毒的，从而所述病毒保持至少部分能够传播并且可以体内复制，但是仅可以产生低病毒载量，从而导致非病原性的亚临床感染水平。这些减毒病毒可以用作免疫原性组合物。本文提供了包含在非天然位置具有orf的沙粒病毒的免疫原性组合物，如(g)节中所述。(i)在非天然位置具有开放阅读框架的复制-缺陷型沙粒病毒颗粒在某些实施方式中，本文提供了沙粒病毒颗粒，其中(i)orf处于所述orf的野生型位置以外的位置；和(ii)编码gp、np、z蛋白和l蛋白的orf已除去或功能性失活，从而所得病毒不能产生进一步的感染性子代病毒颗粒。可以在补体细胞(即，表达已缺失或功能性失活的沙粒病毒orf的细胞)中产生包含其中一个或多个orf已缺失或功能性失活的基因修饰的基因组的沙粒病毒颗粒。一旦感染宿主细胞，则可以将所得沙粒病毒颗粒的遗传物质转移至宿主细胞，其中所述遗传物质可以表达和扩增。另外，本文所述的基因修饰的沙粒病毒颗粒的基因组可以编码来自沙粒病毒颗粒以外的生物的异源orf。在某些实施方式中，所述沙粒病毒的orf缺失或功能性失活并被如本文所述的编码肿瘤抗原或肿瘤相关抗原的核苷酸序列所替代。在具体的实施方式中，编码沙粒病毒的糖蛋白gp的orf缺失或功能性失活。在某些实施方式中，基因的功能性失活消除了任何翻译产物。在某些实施方式中，功能性失活是指允许一定翻译的遗传变化，然后，翻译产物不再是功能性的并且不可以替代野生型蛋白。在某些实施方式中，除去编码gp、np、z蛋白和l蛋白的四个orf中的至少一个并用本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列替代。在另一个实施方式中，除去编码gp、np、z蛋白和l蛋白的至少一个orf、至少两个orf、至少三个orf或者至少四个orf并用本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列替代。在具体的实施方式中，仅除去编码gp、np、z蛋白和l蛋白的四个orf中的一个并用本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列替代。在更具体的实施方式中，除去编码沙粒病毒基因组节段的gp的orf。在另一个具体的实施方式中，除去编码沙粒病毒基因组节段的np的orf。在更具体的实施方式中，除去编码沙粒病毒基因组节段的z蛋白的orf。在另一个具体实施方式中，除去编码l蛋白的orf。因此，在某些实施方式中，本文所提供的沙粒病毒颗粒包含基因组节段，所述基因组节段(i)被工程化以在非天然位置具有orf；(ii)除去编码gp、np、z蛋白或l蛋白的orf；(iii)用本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列替代所除去的orf。在某些实施方式中，当能够(i)在宿主(例如，小鼠、兔、山羊、驴或人)中引起抗体免疫应答，其中所产生的抗体特异性结合至在赘生性细胞(例如，癌细胞)中或上所表达的免疫原性蛋白；和/或(ii)引起特异性t细胞免疫应答时，所述肿瘤抗原或肿瘤相关抗原的片段是抗原性的。在某些实施方式中，编码本文所提供的抗原性片段的核苷酸序列为8至100个核苷酸长度、15至100个核苷酸长度、25至100个核苷酸长度、50至200个核苷酸长度、50至400个核苷酸长度、200至500个核苷酸长度，或400至600个核苷酸长度、500至800个核苷酸长度。在其它实施方式中，编码本文所提供的抗原性片段的核苷酸序列为750至900个核苷酸长度、800至100个核苷酸长度、850至1000个核苷酸长度、900至1200个核苷酸长度、1000至1200个核苷酸长度、1000至1500个核苷酸或10至1500个核苷酸长度、1500至2000个核苷酸长度、1700至2000个核苷酸长度、2000至2300个核苷酸长度、2200至2500个核苷酸长度、2500至3000个核苷酸长度、3000至3200个核苷酸长度、3000至3500个核苷酸长度、3200至3600个核苷酸长度、3300至3800个核苷酸长度、4000个核苷酸至4400个核苷酸长度、4200至4700个核苷酸长度、4800至5000个核苷酸长度、5000至5200个核苷酸长度、5200至5500个核苷酸长度、5500至5800个核苷酸长度、5800至6000个核苷酸长度、6000至6400个核苷酸长度、6200至6800个核苷酸长度、6600至7000个核苷酸长度、7000至7200个核苷酸长度、7200至7500个核苷酸长度或7500个核苷酸长度。在一些实施方式中，所述核苷酸序列编码肽或多肽，其为5至10个氨基酸长度、10至25个氨基酸长度、25至50个氨基酸长度、50至100个氨基酸长度、100至150个氨基酸长度、150至200个氨基酸长度、200至250个氨基酸长度、250至300个氨基酸长度、300至400个氨基酸长度、400至500个氨基酸长度、500至750个氨基酸长度、750至1000个氨基酸长度、1000至1250个氨基酸长度、1250至1500个氨基酸长度、1500至1750个氨基酸长度、1750至2000个氨基酸长度、2000至2500个氨基酸长度或大于2500个或更多个氨基酸长度。在一些实施方式中，所述核苷酸序列编码不超过2500个氨基酸长度的多肽。在具体的实施方式中，所述核苷酸序列不含终止密码子。在某些实施方式中，所述核苷酸序列是密码子-优化的。在某些实施方式中，可以优化核苷酸组成、核苷酸对组成或两者。用于这些优化的技术在本领域中是已知的并且可以应用于优化本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。在某些实施方式中，所述沙粒病毒颗粒的生长和感染性不受本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的影响。本领域技术人员已知的技术可以用于产生包含被工程化以在野生型位置以外的位置具有沙粒病毒orf的沙粒病毒基因组节段和本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒颗粒。例如，反向遗传学技术可以用于产生这种沙粒病毒颗粒。在其它实施方式中，可以在补体细胞中产生复制-缺陷型沙粒病毒颗粒(即，被工程化以在野生型位置以外的位置具有沙粒病毒orf的沙粒病毒基因组节段，其中编码gp、np、z蛋白、l蛋白的orf已缺失)。在某些实施方式中，如本文所提供的包含如本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒颗粒或者沙粒病毒基因组节段还包含编码至少一种免疫调节肽、多肽或蛋白质的至少一种核苷酸序列。在某些实施方式中，所述免疫调节肽、多肽或蛋白是钙网蛋白(crt)或其片段；泛素或其片段；粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)或其片段；恒定链(cd74)或其抗原性片段；结核分枝杆菌热休克蛋白70或其抗原性片段；单纯疱疹病毒1蛋白vp22或其抗原性片段；cd40配体或其抗原性片段；或者fms-相关酪氨酸激酶3(flt3)配体或其抗原性片段。在某些实施方式中，根据本发明申请所使用的沙粒病毒基因组节段或沙粒病毒颗粒可以是旧世界病毒，例如，拉沙病毒、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(lcmv)、莫巴拉病毒、莫佩亚病毒或伊派病毒，或者新世界病毒，例如，阿马帕里病毒、弗莱克索病毒、关纳里托病毒、胡宁病毒、拉蒂诺病毒、马丘波病毒、奥利华斯病毒、帕腊南病毒、皮秦德病毒、皮里陶病毒、萨比亚病毒、塔卡里伯病毒、塔米阿米病毒、熊峡谷病毒或白水河病毒。在某些实施方式中，如本文所述的沙粒病毒颗粒适合于用作疫苗，并且提供了在肿瘤病，例如，癌症的疫苗接种和治疗中使用这种沙粒病毒颗粒的方法。在5.2.(f)节中提供了使用本文所述的沙粒病毒颗粒的方法的更详细说明。在某些实施方式中，如本文所述的沙粒病毒颗粒适合于用作药物组合物，并且提供了在肿瘤病，例如，癌症的接种疫苗和治疗中使用这种沙粒病毒颗粒的方法。在5.2.(g)节中提供了使用本文所述的沙粒病毒颗粒的方法的更详细说明。(b)三-节段沙粒病毒颗粒在某些实施方式中，具有其orf重排和本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的三-节段沙粒病毒颗粒可以与本文所提供的方法和组合物一起使用，如与化疗剂组合。在一个方面，本文提供了包含一个l节段和两个s节段或者两个l节段和一个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒。在某些实施方式中，所述三-节段沙粒病毒颗粒不重组成有复制能力的二-节段沙粒病毒颗粒。更具体地，在某些实施方式中，所述基因组节段中的两个(分别，例如，两个s节段或者两个l节段)不可以以获得可以替代两个亲代节段的单一病毒节段的方式重组。在具体的实施方式中，所述三-节段沙粒病毒颗粒包含处于所述orf的野生型位置以外的位置的orf和本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。在另一个具体的实施方式中，所述三-节段沙粒病毒颗粒包含所有四个沙粒病毒orf。因此，在某些实施方式中，所述三-节段沙粒病毒颗粒是有复制能力和感染性的。在其它实施方式中，所述三-节段沙粒病毒颗粒缺少所述四个沙粒病毒orf中的一个。因此，在某些实施方式中，所述三-节段沙粒病毒颗粒是感染性的，但是不能在非补体细胞中产生进一步的感染性子代。在某些实施方式中，编码本文所述的三-节段沙粒病毒颗粒的gp、np、z蛋白或l蛋白的orf可以受沙粒病毒3'utr或沙粒病毒5'utr的控制。在更具体的实施方式中，所述三-节段沙粒病毒3'utr是沙粒病毒s节段的3'utr。在另一个具体的实施方式中，所述三-节段沙粒病毒3'utr是三-节段沙粒病毒l节段的3'utr。在更具体的实施方式中，所述三-节段沙粒病毒5'utr是沙粒病毒s节段的5'utr。在其它具体的实施方式中，所述5'utr是l节段的5'utr。在其它实施方式中，本文所述的编码三-节段沙粒病毒颗粒的gp、np、z蛋白或l蛋白的orf可以受沙粒病毒保守末端序列元件(5'-和3'-末端19-20-nt范围)的控制(参见，例如,perez&delatorre,2003,jvirol.77(2):1184–1194)。在某些实施方式中，编码三-节段沙粒病毒颗粒的gp、np、z蛋白或l蛋白的orf可以受5'utr的启动子元件的控制(参见，例如,albarino等人,2011,jvirol.,85(8):4020-4)。在另一个实施方式中，编码三-节段沙粒病毒颗粒的gp、np、z蛋白或l蛋白的orf可以受3'utr的启动子元件的控制(参见，例如,albarino等人,2011,jvirol.,85(8):4020-4)。在更具体的实施方式中，5'utr的启动子元件是s节段或l节段的5'utr的启动子元件。在另一个具体的实施方式中，3'utr的启动子元件是s节段或l节段的3'utr的启动子元件。在某些实施方式中，编码三-节段沙粒病毒颗粒的gp、np、z蛋白或l蛋白的orf可以受截短的沙粒病毒3'utr或者截短的沙粒病毒5'utr的控制(参见，例如,perez&delatorre,2003,jvirol.77(2):1184–1194；albarino等人,2011,jvirol.,85(8):4020-4)。在更具体的实施方式中，所述截短的3'utr是沙粒病毒s节段或l节段的3'utr。在更具体的实施方式中，所述截短的5'utr是沙粒病毒s节段或l节段的5'utr。本文还提供了包含本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的三-节段沙粒病毒颗粒的cdna。在更具体的实施方式中，本文提供了如表2或表3所示的编码三-节段沙粒病毒颗粒的dna核苷酸序列或者dna核苷酸序列组。在某些实施方式中，编码所述三-节段沙粒病毒基因组的核酸是一个或多个dna表达载体的一部分或者引入了一个或多个dna表达载体。在具体的实施方式中，编码所述三-节段沙粒病毒颗粒基因组的核酸是帮助产生如本文所述的三-节段沙粒病毒颗粒的一个或多个dna表达载体的一部分或者被引入了所述一个或多个dna表达载体。在另一个实施方式中，可以将本文所述的cdna引入质粒。在5.2.(e)节中提供了cdna和表达系统的更详细说明。用于产生cdna的技术是分子生物学以及dna操纵和生产的常规和传统方法。可以使用技术人员已知的任何克隆技术。如在实验手册，如sambrookandrussell,molecularcloning:alaboratorymanual,第三版,coldspringharborlaboratoryn.y.(2001)中，对于技术人员熟知并且可用的技术。在某些实施方式中，将包含本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的三-节段沙粒病毒的cdna引入(例如，转染)到宿主细胞中。因此，在一些实施方式中，本文提供了宿主细胞，其包含三-节段沙粒病毒颗粒的cdna(即三-节段沙粒病毒颗粒的基因组节段的cdna)和本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。在其它实施方式中，本文所述的cdna是dna表达载体的一部分或者可以被引入dna表达载体并引入宿主细胞。因此，在一些实施方式中，本文提供了包含引入载体的本文所述的cdna的宿主细胞。在其它实施方式中，将本文所述的三-节段沙粒病毒基因组节段(即，l节段和/或s节段)引入宿主细胞。在某些实施方式中，本文描述了产生三-节段沙粒病毒颗粒的方法，其中所述方法包括转录包含本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的三-节段沙粒病毒颗粒的cdna。在某些实施方式中，在所述三-节段沙粒病毒颗粒的体外或体内转录期间，病毒聚合酶蛋白可以存在。在某些实施方式中，使用双向启动子进行所述沙粒病毒基因组节段的转录。在其它实施方式中，使用双向表达盒进行所述沙粒病毒基因组节段的转录(参见，例如,等人,2013,jgenvirol.,94(pt6):1175–1188)。在更具体的实施方式中，所述双向表达盒包含分别从对侧读至插入的沙粒病毒基因组节段的两个末端的聚合酶i和聚合酶ii启动子。在其它实施方式中，本文所述的沙粒病毒基因组节段的cdna的转录包含启动子。启动子的具体实例包括rna聚合酶i启动子、rna聚合酶ii启动子、rna聚合酶iii启动子、t7启动子、sp6启动子或t3启动子。在某些实施方式中，产生三-节段沙粒病毒颗粒的方法还可以包括将包含本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的三-节段沙粒病毒颗粒的cdna引入宿主细胞。在某些实施方式中，产生三-节段沙粒病毒颗粒的方法还可以包括将包含本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的三-节段沙粒病毒颗粒的cdna引入宿主细胞，其中所述宿主细胞表达用于产生所述三-节段沙粒病毒颗粒的所有其它组分；和从所述宿主细胞的上清液纯化所述三-节段沙粒病毒颗粒。这些方法是本领域技术人员熟知的。本文提供了用本文提供的核酸、载体和组合物感染的细胞系、培养物和培养所述细胞的方法。在5.2.(e)节中提供了本文所述的核酸、载体系统和细胞系的更详细说明。在某些实施方式中，如本文所述的三-节段沙粒病毒颗粒导致产生了感染性且有复制能力的沙粒病毒颗粒。在具体的实施方式中，本文所述的沙粒病毒颗粒是减毒的。在具体的实施方式中，所述三-节段沙粒病毒颗粒是减毒的，从而所述病毒保持至少部分有复制能力并且可以体内复制，但是仅可以产生低病毒载量，从而导致非病原性的亚临床感染水平。这些减毒病毒可以用作免疫原性组合物。在某些实施方式中，所述三-节段沙粒病毒颗粒具有和所述二-节段沙粒病毒颗粒相同的嗜性。本文还提供了包含如5.2.(g)节中所述的三-节段沙粒病毒颗粒的组合物。(i)包含一个l节段和两个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒本文提供了有复制能力的三-节段沙粒病毒颗粒。在某些具体的实施方式中，本文提供了复制缺陷型三-节段沙粒病毒颗粒。可以如国际专利公开no.：wo2016/075250a1和国际专利申请no.pct/ep2017/061865中所述来产生本文所提供的三-节段沙粒病毒颗粒，以上专利以其全部内容并入本文。在一个方面，本文提供了包含一个l节段和两个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒。在某些实施方式中，包含一个l节段和两个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒的增殖不会导致产生有复制能力的二-节段病毒颗粒。在具体的实施方式中，在缺少i型干扰素受体、ii型干扰素受体和重组激活基因(rag1)并且已用104pfu的所述三-节段沙粒病毒颗粒感染的小鼠中持续感染至少10天，至少20天，至少30天，至少40天，至少50天，至少60天，至少70天，至少80天，至少90天或至少100天后，包含一个l节段和两个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒的增殖不会导致产生有复制能力的二-节段病毒颗粒(参见5.2.(h)(vii)节)。在其它实施方式中，在传代至少10代，至少20代，至少30代，至少40代或至少50代之后，包含一个l节段和两个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒的增殖不会导致产生有复制能力的二-节段病毒颗粒。在它们各个野生型位置中具有全部病毒基因的三-节段沙粒病毒颗粒在本领域中是已知的(例如，emonet等人,2011j.virol.,85(4):1473；popkin等人,2011,j.virol,85(15):7928)。具体地，所述三-节段沙粒病毒基因由一个l节段和两个s节段组成，其中将本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列插入到每个s节段上的一个位置中。更具体地，一个s节段分别编码了gp和肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段。另一个s节段分别编码了肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段和np。所述l节段编码l蛋白和z蛋白。所有节段均侧接各自的5'和3'utr。在某些实施方式中，本文所提供的三-节段沙粒病毒颗粒的两个s节段的节间重组使两个沙粒病毒orf在一个而不是两个单独的节段上联合，从而产生了非功能性的启动子(即，所述结构的基因组节段：5'utr-------------5'utr或者3'utr-------------3'utr)，其中形成所述基因组一端的每个utr是同样基因组另一端的反向重复序列。在某些实施方式中，包含一个l节段和两个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒已被工程化以在所述orf的野生型位置以外的位置具有沙粒病毒orf并且具有本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。在其它实施方式中，已将包含一个l节段和两个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒被工程化以在野生型位置以外的位置携带两个沙粒病毒orf，或三个沙粒病毒orf，或四个沙粒病毒orf，或五个沙粒病毒orf，或六个沙粒病毒orf。在具体的实施方式中，包含一个l节段和两个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒包含所有四个沙粒病毒orf的全部补体。因此，在一些实施方式中，所述三-节段沙粒病毒颗粒是感染性且有复制能力的三-节段沙粒病毒颗粒。在具体的实施方式中，所述三-节段沙粒病毒颗粒的两个s节段已被工程化以在野生型位置以外的位置具有它们orf中的一个。在更具体的实施方式中，所述两个s节段包含所述s节段orf的全部补体。在某些具体的实施方式中，所述l节段已被工程化以在野生型位置以外的位置具有orf或者所述l节段可以是野生型基因组节段。在某些实施方式中，所述两个s节段之一可以是：(i)沙粒病毒s节段，其中编码z蛋白的orf受沙粒病毒5'utr的控制；(ii)沙粒病毒s节段，其中编码l蛋白的orf受沙粒病毒5'utr的控制；(iii)沙粒病毒s节段，其中编码np的orf受沙粒病毒5'utr的控制；(iv)沙粒病毒s节段，其中编码gp的orf受沙粒病毒3'utr的控制；(v)沙粒病毒s节段，其中编码l蛋白的orf受沙粒病毒3'utr的控制；和(vi)沙粒病毒s节段，其中编码z蛋白的orf受沙粒病毒3'utr的控制。在某些实施方式中，包含一个l节段和两个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒可以包含重复的orf(即两个野生型s节段orf，例如，gp或np)。在具体的实施方式中，包含一个l节段和两个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒可以包含一个重复的orf(例如，(gp、gp))或者两个重复的orf(例如，(gp、gp)和(np、np))。下表2a是包含一个l节段和两个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒的基因组组构的说明，其中所述三-节段沙粒病毒基因组中两个s节段的节间重组不会导致产生有复制能力的二-节段病毒颗粒并且终止了沙粒病毒的启动子活性(即，所产生的重组s节段由两个3'utr组成来替代3'utr和5'utr)。表2a包含一个l节段和两个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒位置1受沙粒病毒s节段5'utr的控制；位置2受沙粒病毒s节段3'utr的控制；位置3受沙粒病毒s节段5'utr的控制；位置4受沙粒病毒s节段3'utr的控制；位置5受沙粒病毒l节段5'utr的控制；位置6受沙粒病毒l节段3'utr的控制。*orf表示已插入本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。在某些实施方式中，位置1和位置2之间的igr可以是沙粒病毒s节段或l节段igr；位置2和3之间的igr可以是沙粒病毒s节段或l节段igr；和位置5和6之间的igr可以是沙粒病毒l节段igr。在具体的实施方式中，位置1和位置2之间的igr可以是沙粒病毒s节段igr；位置2和3之间的igr可以是沙粒病毒s节段igr；和位置5和6之间的igr可以是沙粒病毒l节段igr。在某些实施方式中，其它组合也是可能的。例如，包含一个l节段和两个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒，其中所述三-节段沙粒病毒基因组中两个s节段的节间重组不会导致产生有复制能力的二-节段病毒颗粒并且终止了沙粒病毒的启动子活性(即，所产生的重组s节段由两个5'utr组成来替代3'utr和5'utr)。在某些实施方式中，包含一个l节段和两个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒中的s节段和l节段的节间重组恢复了功能性节段，其通过仅一个节段上的两个病毒基因代替两个单独的节段。在其它实施方式中，包含一个l节段和两个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒中的s节段和l节段的节间重组不会导致产生有复制能力的二-节段病毒颗粒。下表2b是包含一个l节段和两个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒的基因组组构的说明，其中所述三-节段沙粒病毒基因组中的s节段和l节段的节间重组不会导致产生有复制能力的二-节段病毒颗粒并且终止了沙粒病毒的启动子活性(即，所产生的重组s节段由两个3'utr组成来替代3'utr和5'utr)。表2b包含一个l节段和两个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒位置1受沙粒病毒s节段5'utr的控制；位置2受沙粒病毒s节段3'utr的控制；位置3受沙粒病毒s节段5'utr的控制；位置4受沙粒病毒s节段3'utr的控制；位置5受沙粒病毒l节段5'utr的控制；位置6受沙粒病毒l节段3'utr的控制。*orf表示已插入本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。在某些实施方式中，位置1和位置2之间的igr可以是沙粒病毒s节段或l节段igr；位置2和3之间的igr可以是沙粒病毒s节段或l节段igr；和位置5和6之间的igr可以是沙粒病毒l节段igr。在具体的实施方式中，位置1和位置2之间的igr可以是沙粒病毒s节段igr；位置2和3之间的igr可以是沙粒病毒s节段igr；和位置5和6之间的igr可以是沙粒病毒l节段igr。在某些实施方式中，其它组合也是可能的。例如，包含一个l节段和两个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒，其中所述三-节段沙粒病毒基因组中两个s节段的节间重组不会导致产生有复制能力的二-节段病毒颗粒并且终止了沙粒病毒的启动子活性(即，所产生的重组s节段由两个5'utr组成来替代3'utr和5'utr)。在某些实施方式中，本领域技术人员可以构建具有如表2a和2b中所示以及如本文所述的组构的沙粒病毒基因组，然后使用如5.2.(h)节中所述的测定来确定所述三-节段沙粒病毒颗粒是否是遗传稳定的，即不会导致产生如本文所讨论的有复制能力的二-节段病毒颗粒。(ii)包含两个l节段和一个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒本文提供了有复制能力的三-节段沙粒病毒颗粒。在某些具体的实施方式中，本文提供了复制缺陷型三-节段沙粒病毒颗粒。可以如国际专利公开no.：wo2016/075250a1和国际专利申请no.pct/ep2017/061865中所述来产生本文所提供的三-节段沙粒病毒颗粒，以上专利以其全部内容并入本文。在一个方面，本文提供了包含两个l节段和一个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒。在某些实施方式中，包含两个l节段和一个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒的增殖不会导致产生有复制能力的二-节段病毒颗粒。在具体的实施方式中，在缺少i型干扰素受体、ii型干扰素受体和重组激活基因(rag1)并且已用104pfu的所述三-节段沙粒病毒颗粒感染的小鼠中持续感染至少10天，至少20天，至少30天，至少40天，或至少50天，至少60天，至少70天，至少80天，至少90天，至少100天后，包含两个l节段和一个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒的增殖不会导致产生有复制能力的二-节段病毒颗粒(参见5.2.(h)(vii)节)。在其它实施方式中，在传代至少10代，至少20代，至少30代，至少40代或至少50代之后，包含两个l节段和一个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒的增殖不会导致产生有复制能力的二-节段病毒颗粒。在某些实施方式中，本文所提供的三-节段沙粒病毒颗粒的两个l节段的节间重组使两个沙粒病毒orf在一个而不是两个单独的节段上联合，从而产生了非功能性的启动子(即，所述结构的基因组节段：5'utr-------------5'utr或者3'utr-------------3'utr)，其中形成所述基因组一端的每个utr是同样基因组另一端的反向重复序列。在某些实施方式中，包含两个l节段和一个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒已被工程化以在所述orf的野生型位置以外的位置具有沙粒病毒orf并且具有本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。在其它实施方式中，已将包含两个l节段和一个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒被工程化以在野生型位置以外的位置携带两个沙粒病毒orf，或三个沙粒病毒orf，或四个沙粒病毒orf，或五个沙粒病毒orf，或六个沙粒病毒orf。在具体的实施方式中，包含两个l节段和一个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒包含所有四个沙粒病毒orf的全部补体。因此，在一些实施方式中，所述三-节段沙粒病毒颗粒是感染性且有复制能力的三-节段沙粒病毒颗粒。在具体的实施方式中，所述三-节段沙粒病毒颗粒的两个l节段已被工程化以在野生型位置以外的位置具有它们orf中的一个。在更具体的实施方式中，所述两个l节段包含所述l节段orf的全部补体。在某些具体的实施方式中，所述s节段已被工程化以在野生型位置以外的位置具有其orf之一或者所述s节段可以是野生型基因组节段。在某些实施方式中，所述两个l节段之一可以是：(xxxi)l节段，其中编码gp的orf受沙粒病毒5'utr的控制；(xxxii)l节段，其中编码np的orf受沙粒病毒5'utr的控制；(xxxiii)l节段，其中编码l蛋白的orf受沙粒病毒5'utr的控制；(xxxiv)l节段，其中编码gp的orf受沙粒病毒3'utr的控制；(xxxv)l节段，其中编码np的orf受沙粒病毒3'utr的控制；和(xxxvi)l节段，其中编码z蛋白的orf受沙粒病毒3'utr的控制。在某些实施方式中，包含一个l节段和两个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒可以包含重复的orf(即两个野生型l节段orf，例如，z蛋白或l蛋白)。在具体的实施方式中，包含两个l节段和一个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒可以包含一个重复的orf(例如，(z蛋白，z蛋白))或者两个重复的orf(例如，(z蛋白，z蛋白)和(l蛋白，l蛋白))。下表3是包含两个l节段和一个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒的基因组组构的说明，其中所述三-节段沙粒病毒基因组中两个l节段的节间重组不会导致产生有复制能力的二-节段病毒颗粒并且终止了沙粒病毒的启动子活性(即，所述s节段由两个3'utr组成来替代3'utr和5'utr)。基于表3，可以对于由代替3'utr和5'utr的两个5'utr所组成的沙粒病毒颗粒的产生来预测类似的组合。表3包含两个l节段和一个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒*位置1受沙粒病毒l节段5'utr的控制；位置2受沙粒病毒l节段3'utr的控制；位置3受沙粒病毒l节段5'utr的控制；位置4受沙粒病毒l节段3'utr的控制；位置5受沙粒病毒s节段5'utr的控制；位置6受沙粒病毒s节段3'utr的控制。*orf表示已插入本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。在某些实施方式中，位置1和位置2之间的igr可以是沙粒病毒s节段或l节段igr；位置2和3之间的igr可以是沙粒病毒s节段或l节段igr；和位置5和6之间的igr可以是沙粒病毒l节段igr。在具体的实施方式中，位置1和位置2之间的igr可以是沙粒病毒l节段igr；位置2和3之间的igr可以是沙粒病毒l节段igr；和位置5和6之间的igr可以是沙粒病毒s节段igr。在某些实施方式中，其它组合也是可能的。在某些实施方式中，来自包含两个l节段和一个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒的l节段和s节段的节间重组恢复了功能性节段，其通过仅一个节段上的两个病毒基因代替两个单独的节段。在其它实施方式中，包含两个l节段和一个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒中的l节段和s节段的节间重组不会导致产生有复制能力的二-节段病毒颗粒。下表3b是包含两个l节段和一个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒的基因组组构的说明，其中所述三-节段沙粒病毒基因组中的l节段和s节段的节间重组不会导致产生有复制能力的二-节段病毒颗粒并且终止了沙粒病毒的启动子活性(即，所得重组的s节段由两个3'utr组成来替代3'utr和5'utr)。表3b包含两个l节段和一个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒*位置1受沙粒病毒l节段5'utr的控制；位置2受沙粒病毒l节段3'utr的控制；位置3受沙粒病毒l节段5'utr的控制；位置4受沙粒病毒l节段3'utr的控制；位置5受沙粒病毒s节段5'utr的控制；位置6受沙粒病毒s节段3'utr的控制。*orf表示已插入本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。位置1位置2位置3位置4位置5位置6npz*orfgpl*orfnpzgp*orf*orflnpz*orfgpl*orfnpzgp*orf*orflnpl*orfgpz*orfnplgp*orf*orfznpl*orfgpz*orfnplgp*orf*orfzgpz*orfnpl*orfgpznp*orf*orflgpz*orfnpl*orfgplnp*orf*orfzgpl*orfnpz*orfgplnp*orf*orfz在某些实施方式中，位置1和位置2之间的igr可以是沙粒病毒s节段或l节段igr；位置2和3之间的igr可以是沙粒病毒s节段或l节段igr；和位置5和6之间的igr可以是沙粒病毒l节段igr。在具体的实施方式中，位置1和位置2之间的igr可以是沙粒病毒l节段igr；位置2和3之间的igr可以是沙粒病毒l节段igr；和位置5和6之间的igr可以是沙粒病毒s节段igr。在某些实施方式中，其它组合也是可能的。在某些实施方式中，本领域技术人员可以构建具有如表3a和3b中所示以及如本文所述的组构的沙粒病毒基因组，然后使用如5.2.(h)节中所述的测定来确定所述三-节段沙粒病毒颗粒是否是遗传稳定的，即不会导致产生如本文所讨论的有复制能力的二-节段病毒颗粒。(iii)复制-缺陷型三-节段沙粒病毒颗粒在某些实施方式中，本文提供了三-节段沙粒病毒颗粒，其中(i)orf处于所述orf的野生型位置以外的位置；和(ii)已除去编码gp、np、z蛋白或l蛋白的orf或使其功能性失活，从而所产生的病毒不可以产生进一步的感染性子代病毒颗粒(即，是复制缺陷型的)。在某些实施方式中，所述第三沙粒病毒节段可以是s节段。在其它实施方式中，所述第三沙粒病毒节段可以是l节段。在更具体的实施方式中，所述第三沙粒病毒节段可以被工程化以在所述orf的野生型位置以外的位置具有orf或者所述第三沙粒病毒节段可以是野生型沙粒病毒基因组节段。在更具体的实施方式中，所述第三沙粒病毒节段缺乏编码gp、np、z蛋白或l蛋白的沙粒病毒orf。在某些实施方式中，三-节段基因组节段可以是s或l节段杂交体(即，可以是s节段和l节段的组合的基因组节段)。在其它实施方式中，所述杂交节段是包含l节段igr的s节段。在另一个实施方式中，所述杂交节段是包含s节段igr的l节段。在其它实施方式中，所述杂交节段是具有l节段igr的s节段utr。在另一个实施方式中，所述杂交节段是具有s节段igr的l节段utr。在具体的实施方式中，所述杂交节段是具有l节段igr的s节段5'utr或者具有l节段igr的s节段3'utr。在其它具体的实施方式中，所述杂交节段是具有s节段igr的l节段5'utr或者具有s节段igr的l节段3'utr。可以在补体细胞(即，表达已缺失或功能性失活的沙粒病毒orf的细胞)中产生包含其中一个或多个orf已缺失或功能性失活的基因修饰的基因组的三-节段沙粒病毒颗粒。一旦感染宿主细胞，则可以将所得沙粒病毒颗粒的遗传物质转移至宿主细胞，其中所述遗传物质可以表达和扩增。另外，本文所述的基因修饰的沙粒病毒颗粒的基因组可以包括本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。在某些实施方式中，除去编码gp、np、z蛋白和l蛋白的四个orf中的至少一个并用本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列替代。在另一个实施方式中，除去编码gp、np、z蛋白和l蛋白的至少一个orf、至少两个orf、至少三个orf或者至少四个orf并用本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列替代。在具体的实施方式中，仅除去编码gp、np、z蛋白和l蛋白的四个orf中的一个并用本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列替代。在更具体的实施方式中，除去编码沙粒病毒基因组节段的gp的orf。在另一个具体的实施方式中，除去编码沙粒病毒基因组节段的np的orf。在更具体的实施方式中，除去编码沙粒病毒基因组节段的z蛋白的orf。在另一个具体实施方式中，除去编码l蛋白的orf。在某些实施方式中，本文提供了包含一个l节段和两个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒，其中(i)orf处于所述orf的野生型位置以外的位置；和(ii)编码gp或np的orf已缺失或功能性失活，从而所产生的病毒是复制-缺陷型与非感染性的。在具体的实施方式中，除去一个orf并且用本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列将其替换。在另一个具体的实施方式中，除去两个orf并且用本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列将其替换。在其它具体的实施方式中，除去三个orf并且用本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列将其替换。在具体的实施方式中，除去编码gp的orf并且用本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列替换。在其它具体的实施方式中，除去编码np的orf并且用本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列替换。在更具体的实施方式中，除去编码np的orf和编码gp的orf并且用一个或两个本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列替换。因此，在某些实施方式中，所述三-节段沙粒病毒颗粒包含(i)一个l节段和两个s节段；(ii)位于在所述orf的野生型位置以外的位置的orf；(iii)一个或多个编码本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。在某些实施方式中，本文提供了包含两个l节段和一个s节段的三-节段沙粒病毒颗粒，其中(i)orf处于所述orf的野生型位置以外的位置；和(ii)编码z蛋白和/或l蛋白的orf已缺失或功能性失活，从而所产生的病毒是复制-缺陷型与非感染性的。在具体的实施方式中，除去一个orf并且用本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列将其替换。在另一个具体的实施方式中，除去两个orf并且用本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列将其替换。在具体的实施方式中，除去编码z蛋白的orf并且用本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列替换。在其它具体的实施方式中，除去编码l蛋白的orf并且用本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列替换。在更具体的实施方式中，除去编码z蛋白的orf和编码l蛋白的orf并且用本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列替换。因此，在某些实施方式中，所述三-节段沙粒病毒颗粒包含(i)两个l节段和一个s节段；(ii)位于在所述orf的野生型位置以外的位置的orf；(iii)本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。因此，在某些实施方式中，本文所提供的三-节段沙粒病毒颗粒包含三-节段沙粒病毒颗粒(即，一个l节段和两个s节段或者两个l节段和一个s节段)，所述三-节段沙粒病毒颗粒i)被工程化以在非天然位置具有orf；ii)除去编码gp、np、z蛋白或l蛋白的orf)；iii)用一个或多个编码本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列替换所除去的orf。在某些实施方式中，编码本文所提供的抗原性片段的核苷酸序列为8至100个核苷酸长度、15至100个核苷酸长度、25至100个核苷酸长度、50至200个核苷酸长度、50至400个核苷酸长度、200至500个核苷酸长度，或400至600个核苷酸长度、500至800个核苷酸长度。在其它实施方式中，编码本文所提供的抗原性片段的核苷酸序列为750至900个核苷酸长度、800至100个核苷酸长度、850至1000个核苷酸长度、900至1200个核苷酸长度、1000至1200个核苷酸长度、1000至1500个核苷酸或10至1500个核苷酸长度、1500至2000个核苷酸长度、1700至2000个核苷酸长度、2000至2300个核苷酸长度、2200至2500个核苷酸长度、2500至3000个核苷酸长度、3000至3200个核苷酸长度、3000至3500个核苷酸长度、3200至3600个核苷酸长度、3300至3800个核苷酸长度、4000个核苷酸至4400个核苷酸长度、4200至4700个核苷酸长度、4800至5000个核苷酸长度、5000至5200个核苷酸长度、5200至5500个核苷酸长度、5500至5800个核苷酸长度、5800至6000个核苷酸长度、6000至6400个核苷酸长度、6200至6800个核苷酸长度、6600至7000个核苷酸长度、7000至7200个核苷酸长度、7200至7500个核苷酸长度或者7500个核苷酸长度。在一些实施方式中，所述核苷酸序列编码肽或多肽，其为5至10个氨基酸长度、10至25个氨基酸长度、25至50个氨基酸长度、50至100个氨基酸长度、100至150个氨基酸长度、150至200个氨基酸长度、200至250个氨基酸长度、250至300个氨基酸长度、300至400个氨基酸长度、400至500个氨基酸长度、500至750个氨基酸长度、750至1000个氨基酸长度、1000至1250个氨基酸长度、1250至1500个氨基酸长度、1500至1750个氨基酸长度、1750至2000个氨基酸长度、2000至2500个氨基酸长度或者超过2500个或更多个氨基酸长度。在一些实施方式中，所述核苷酸序列编码不超过2500个氨基酸长度的多肽。在具体的实施方式中，所述核苷酸序列不含终止密码子。在某些实施方式中，所述核苷酸序列是密码子-优化的。在某些实施方式中，可以优化核苷酸组成、核苷酸对组成或两者。用于这些优化的技术在本领域中是已知的并且可以应用于优化本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。本文所提供的任何编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列可以包含在所述三-节段沙粒病毒颗粒内。在一个实施方式中，本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列能够引起免疫应答。在某些实施方式中，所述沙粒病毒颗粒的生长和感染性不受本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的影响。本领域技术人员已知的技术可以用于产生包含被工程化以在野生型位置以外的位置具有沙粒病毒orf的沙粒病毒基因组节段和本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒颗粒。例如，反向遗传学技术可以用于产生这种沙粒病毒颗粒。在其它实施方式中，可以在补体细胞中产生复制-缺陷型沙粒病毒颗粒(即，被工程化以在野生型位置以外的位置具有沙粒病毒orf的沙粒病毒基因组节段，其中编码gp、np、z蛋白、l蛋白的orf已缺失)。在某些实施方式中，包含如本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的本文所提供的三-节段沙粒病毒颗粒还包含编码至少一种免疫调节肽、多肽或蛋白质的至少一种核苷酸序列。在某些实施方式中，所述免疫调节肽、多肽或蛋白是钙网蛋白(crt)或其片段；泛素或其片段；粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)或其片段；恒定链(cd74)或其抗原性片段；结核分枝杆菌热休克蛋白70或其抗原性片段；单纯疱疹病毒1蛋白vp22或其抗原性片段；cd40配体或其抗原性片段；或者fms-相关酪氨酸激酶3(flt3)配体或其抗原性片段。用于和本文所提供的方法和组合物一起使用的沙粒病毒可以是旧世界病毒，例如，拉沙病毒、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(lcmv)、莫巴拉病毒、莫佩亚病毒或伊派病毒，或者新世界病毒，例如，阿马帕里病毒、弗莱克索病毒、关纳里托病毒、胡宁病毒、拉蒂诺病毒、马丘波病毒、奥利华斯病毒、帕腊南病毒、皮秦德病毒、皮里陶病毒、萨比亚病毒、塔卡里伯病毒、塔米阿米病毒、熊峡谷病毒或白水河病毒。在某些实施方式中，如本文所述的三-节段沙粒病毒颗粒适合于用作疫苗，并且提供了在肿瘤病，例如，癌症的疫苗接种和治疗中使用这种沙粒病毒颗粒的方法。在5.2.(f)节中提供了使用本文所述的沙粒病毒颗粒的方法的更详细说明。在某些实施方式中，如本文所述的三-节段沙粒病毒颗粒适合于用作药物组合物，并且提供了在肿瘤病，例如，癌症的接种疫苗和治疗中使用这种沙粒病毒颗粒的方法。在5.2.(g)节中提供了使用本文所述的沙粒病毒颗粒的方法的更详细说明。(c)肿瘤抗原、肿瘤相关抗原和抗原片段在某些实施方式中，具有本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒颗粒可以与本文所提供的方法和组合物一起使用，如与化疗剂组合。在某些实施方式中，用于和本文所述的方法和组合物一起使用的肿瘤抗原或肿瘤相关抗原是在赘生性细胞或肿瘤，如癌细胞或恶性肿瘤中或上表达的免疫原性蛋白。在某些实施方式中，用于和本文所述的方法和组合物一起使用的肿瘤抗原或肿瘤相关抗原是非特异性、突变、过表达或异常表达的蛋白质，其可以存在于赘生性细胞或肿瘤和正常细胞或组织两者上。在某些实施方式中，用于和本文所述的方法和组合物一起使用的肿瘤抗原或肿瘤相关抗原是限制于肿瘤细胞的肿瘤特异性抗原。在某些实施方式中，用于和本文所述的方法和组合物一起使用的肿瘤抗原是限制于癌细胞的癌症特异性抗原。在某些实施方式中，肿瘤抗原或肿瘤相关抗原可以显示出以下特征中的一种、两种、三种或更多种，包括全部：过表达/积累(即，通过正常和肿瘤组织两者表达，但在瘤形成中高度表达)、癌胚(即，通常仅在胎儿组织和在癌性体细胞中表达)、致癌病毒(即，通过致瘤转化病毒编码)、癌症-睾丸(即，仅通过癌细胞和成人生殖组织，例如，睾丸表达)、谱系-限制的(即，很大程度上通过单一癌组织分型表达)、突变的(即，仅在由于遗传突变或者转录中的变化所产生的肿瘤组织中表达)、翻译后改变的(例如，糖基化中的肿瘤-相关变化)或者个体基因型的(即，从b或t淋巴细胞的恶性无性增殖所发展的)。在某些实施方式中，用于和本文所述的方法和组合物一起使用的肿瘤抗原或肿瘤相关抗原包括来自肿瘤病的抗原，所述肿瘤病包括急性淋巴母细胞性白血病；急性淋巴细胞性淋巴瘤；急性淋巴细胞白血病；急性髓性白血病；急性髓细胞性白血病(成人/儿童)；肾上腺皮质癌；aids-相关癌症；aids-相关淋巴瘤；肛门癌；阑尾癌；星形细胞瘤；非典型畸胎样/横纹样瘤；基底细胞癌；胆管癌，肝外(肝胆管型肝癌)；膀胱癌；骨骨肉瘤/恶性纤维组织细胞瘤；脑癌(成人/儿童)；脑肿瘤，小脑星形细胞瘤(成人/儿童)；脑肿瘤，大脑星形细胞瘤/恶性神经胶质瘤脑肿瘤；脑肿瘤，室管膜瘤；脑肿瘤，成神经管细胞瘤；脑肿瘤，幕上原始神经外胚层瘤；脑肿瘤，视觉传导路和下丘脑神经胶质瘤；脑干神经胶质瘤；乳腺癌；支气管腺瘤/类癌；支气管肿瘤；伯基特淋巴瘤；儿童癌；胃肠类癌肿瘤；类癌瘤；成人癌瘤，未知原发位点；原发未知的癌瘤；中枢神经系统胚胎性瘤；中枢神经系统淋巴瘤，原发；宫颈癌；儿童肾上腺皮质癌；儿童癌症；儿童大脑星形细胞瘤；脊索瘤，儿童；慢性淋巴细胞性白血病；慢性粒性白血病；慢性粒细胞性白血病；慢性脊髓增生病；结肠癌；结肠直肠癌；颅咽管瘤；皮肤t-细胞淋巴瘤；促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤；肺气肿；子宫内膜癌；成室管膜细胞瘤；室管膜瘤；食道癌；尤文氏家族肿瘤中的尤因氏肉瘤；颅外生殖细胞肿瘤；性腺外生殖细胞肿瘤；肝外胆管癌；胆囊癌；胃(胃)癌；胃类癌瘤；胃肠类癌肿瘤；胃肠道间质瘤；生殖细胞肿瘤：颅外、性腺外或卵巢妊娠滋养细胞肿瘤；妊娠滋养细胞肿瘤，未知原发位点；神经胶质瘤；脑干神经胶质瘤；神经胶质瘤，儿童视觉传导路和下丘脑；毛细胞白血病；头颈癌；心癌；肝细胞(肝)癌；霍奇金淋巴瘤；舌癌；下丘脑和视觉传导路神经胶质瘤；眼内黑素瘤；胰岛细胞癌(内分泌胰腺)；卡波西肉瘤；肾癌(肾细胞癌)；郎格罕细胞组织细胞增生症；喉癌；唇和口腔癌；脂肪肉瘤；肝癌(原发)；肺癌，非小细胞；肺癌，小细胞；淋巴瘤，原发性中枢神经系统；瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症；男性乳腺癌；恶性骨纤维组织细胞瘤/骨肉瘤；成神经管细胞瘤；髓上皮瘤；黑素瘤；黑素瘤，眼内(眼)；梅克尔细胞癌；梅克尔细胞皮肤癌；间皮瘤；间皮瘤，成人恶性；转移性颈鳞癌，原发位点隐匿；口癌；多发性内分泌瘤综合征；多发性骨髓瘤/浆细胞瘤；阿利贝尔氏病，脊髓发育不良综合征；脊髓发育不良/骨髓增殖性疾病；粒细胞性白血病，慢性；骨髓性白血病，成人急性；骨髓性白血病，儿童急性；骨髓瘤，多发性(骨-骨髓癌)；脊髓增生病，慢性；鼻腔和鼻窦癌；鼻咽癌；成神经细胞瘤，非小细胞肺癌；非霍奇金淋巴瘤；寡枝神经胶质细胞瘤；口腔癌；口腔癌；口咽癌；骨肉瘤/恶性骨纤维组织细胞瘤；卵巢癌；卵巢上皮癌(表面上皮-间质肿瘤)；卵巢生殖细胞肿瘤；卵巢低度恶性潜能肿瘤；胰腺癌；胰腺癌，胰岛细胞；乳头状瘤病；鼻窦和鼻腔癌；甲状旁腺癌；阴茎癌；咽癌；嗜铬细胞瘤；松果体星形细胞瘤；松果体胚组织瘤；中分化松果体实质细胞瘤；成松果体细胞瘤和幕上原始神经外胚层瘤；垂体瘤；垂体腺瘤；浆细胞瘤/多发性骨髓瘤；胸膜肺胚细胞瘤；原发性中枢神经系统淋巴瘤；前列腺癌；直肠癌；肾细胞癌(肾癌)；肾盂和输尿管，移行细胞癌；涉及染色体15上的nut基因的呼吸道癌；成视网膜细胞瘤；横纹肌肉瘤，儿童；唾液腺癌；肉瘤，尤文氏家族肿瘤；塞扎里氏综合征；皮肤癌(黑素瘤)；皮肤癌(非黑素瘤)；小细胞肺癌；小肠癌软组织肉瘤；软组织肉瘤；脊髓瘤；鳞状细胞癌；颈鳞癌，原发位点隐匿，转移性；胃(胃)癌；幕上原始神经外胚层瘤；t细胞淋巴瘤，皮肤(阿利贝尔氏病和塞扎里氏综合征)；睾丸癌；咽喉癌；胸腺瘤；胸腺瘤和胸腺癌；甲状腺癌；甲状腺癌，儿童；肾盂和输尿管的移行细胞癌；尿道癌；子宫癌，子宫内膜；子宫肉瘤；阴道癌；外阴癌；和胚胎性癌肉瘤。在某些实施方式中，用于和本文所公开的方法和组合物一起使用的肿瘤抗原或者肿瘤相关抗原包括致癌病毒抗原、癌症-睾丸抗原、癌胚抗原、组织分化抗原、突变蛋白抗原、脂肪分化相关蛋白、aim-2、aldh1ai、bclx(l)、bing-4、calca、cd45、cpsf、细胞周期蛋白d1、dkki、enah(hmcna)、ga733(epcam)、epha3、ezh2、fgf5、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、g250/mn/caix、her-2/neu、ido1、igf2b3、il13rα2、小肠羧基酯酶、甲胎蛋白、激肽释放酶4、kif20a、lengsin、m-csf、mcsp、mdm-2、meloe、mmp-2、mmp-7、mucl、muc5ac、p53(非突变体)、pax5、pbf、prame、psma、rage、rage-1、rgs5、rhoc、rnf43、ru2as、分离蛋白1、sox1o、steap1(前列腺6次跨膜上皮抗原1)、存活素、端粒酶、vegf、wt1、egf-r、cea、cd20、cd33、cd52、melana/mart1、mart2、ny-eso-1、p53、magea1、magea3、mage-4、mage-5、mage-6、cdk4、α-辅肌动蛋白-4、artc1、bcr-abl、bcr-abl融合蛋白(b3a2)、b-raf、casp-5、casp-8、β-联蛋白、cdc27、cdk4、cdkn2a、clpp、coa-1、dek-can融合蛋白、eftud2、延伸因子2、etv6-aml、etv6-aml1融合蛋白、flt3-itd、fnl、gpnmb、ldlr-岩藻糖转移酶as融合蛋白、nfyc、ogt、os-9、pml-rarα融合蛋白、prdx5、ptprk、h-ras、k-ras(v-ki-ras2kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因)、n-ras、rbaf600、sirt2、snrpdl、ssx、ssx2、syt-ssxl或-ssx2融合蛋白、tgf-βrii、磷酸丙糖异构化酶、ormdm-2、lmp2、hpve6/e7、egfrviii(表皮生长因子变体iii)，个体遗传型，gd2，神经节糖苷g2)、ras-突变体、p53(突变体)、蛋白酶3(pr1)、酪氨酸酶、psa、htert、肉瘤易位断裂点、epha2、前列腺酸性磷酸酶pap、neo-pap、ml-iap、afp、erg(tmprss2ets融合基因)、na17、pax3、alk、雄激素受体、细胞周期蛋白b1、聚唾液酸、mycn、trp2、trp2-int2、gd3、岩藻糖基gm1、间皮素、psca、sle(a)、cyp1b1、plac1、gm3、boris、tn、globoh、ny-br-1、sart3、stn、碳酸酐酶ix、oy-tes1、精液蛋白17、lck、高分子量黑素瘤-相关抗原(hmwmaa)、akap-4、ssx2、xage1、b7h3、豆荚蛋白、tie2、page4、vegfr2、mad-ct-1、fap、pdgfr-β、mad-ct-2、for-相关抗原1、trp-1、gp100、ca-125、ca19-9、钙网膜蛋白、上皮细胞膜抗原(ema)、上皮细胞瘤抗原(eta)、cd19、cd34、cd99、cd117、嗜铬粒蛋白、细胞角蛋白、肌间线蛋白、胶质原纤维酸性蛋白(gfap)、巨囊性病液体蛋白(gcdfp-15)、hmb-45抗原、myo-d1、肌肉-特异性肌动蛋白(msa)、神经丝、神经元-特异性烯醇酶(nse)、胎盘碱性磷酸酶、突触素、甲状球蛋白、甲状腺转录因子-1、丙酮酸激酶m2型同工酶的二聚体形式(肿瘤m2-pk)、bagebage-1、cage、ctage、fate、gage、gage-1、gage-2、gage-3、gage-4、gage-5、gage-6、gage-7、hca661、hom-tes-85、magea、mageb、magec、na88、ny-sar-35、spanxb1、spa17、ssx、sycp1、tpte、碳水化合物/神经节糖苷gm2(癌胚抗原-免疫原性-1ofa-i-1)、gm3、ca15-3(ca27.29\bcaa)、ca195、ca242、ca50、cam43、cea、ebna、ef2、埃-巴二氏病毒抗原、hla-a2、hla-a11、hsp70-2、kiaao205、mum-1、mum-2、mum-3、i类肌球蛋白、gntv、herv-k-mel、lage-1、lage-2、(精液蛋白)sp17、scp-1、p15(58)、hom/mel-40、e2a-prl、h4-ret、igh-igk、myl-rar、tsp-180、p185erbb2、p180erbb-3、c-met、nm-23h1、tag-72、tag-72-4、ca-72-4、cam17.1、numa、13-联蛋白、p16、tage、ct7、43-9f、5t4、791tgp72、13hcg、bca225、btaa、cd68\kp1、co-029、htgp-175、m344、mg7-ag、mov18、nb\70k、ny-co-1、rcas1、sdccag16、ta-90、taal6、tlp、tps、cd22、cd27、cd30、cd70、前列腺特异性蛋白、tarp(t细胞受体γ可变阅读框架蛋白)、trp-p8、整合素αvβ3(cd61)、催乳激素或者ral-b、cd123、cll-1、cd38、cs-1、cd138和ror1。在某些实施方式中，肿瘤抗原或肿瘤相关抗原是新抗原。如本文所使用的“新抗原”是指通过肿瘤细胞中的突变所产生的抗原，并且该抗原通常不在正常细胞或组织中表达。不受理论束缚，由于健康组织通常不具有这些抗原，因此新抗原代表了优选的靶标。另外，不受理论束缚，在本发明的背景中，由于识别新抗原的t细胞可以不经历阴性胸腺选择，因此这些细胞可以对所述抗原具有高亲合力并且对肿瘤产生强烈的免疫应答，同时没有引起正常组织破坏和自身免疫损害的风险。在某些实施方式中，所述新抗原是mhci类-限制性新抗原。在某些实施方式中，所述新抗原是mhcii类-限制性新抗原。在某些实施方式中，患者肿瘤细胞中的突变导致产生了产生新抗原的新型蛋白质。在某些实施方式中，所述肿瘤抗原或肿瘤相关抗原可以是抗原直系同源物，例如，对人肿瘤抗原或肿瘤相关抗原的哺乳动物(即，非人灵长类、猪、狗、猫或马)。在某些实施方式中，通过包含在沙粒病毒内的核苷酸序列编码本文所述的肿瘤抗原或肿瘤相关抗原的抗原性片段。在某些实施方式中，当片段能够(i)在宿主(例如，小鼠、兔、山羊、驴或人)中引起抗体免疫应答，其中所产生的抗体特异性结合至在赘生性细胞(例如，癌细胞)中或上表达的免疫原性蛋白；和/或(ii)引起特异性t细胞免疫应答时，则它是抗原性的。在某些实施方式中，编码肿瘤抗原或肿瘤相关抗原的抗原性片段的核苷酸序列为8至100个核苷酸长度、15至100个核苷酸长度、25至100个核苷酸长度、50至200个核苷酸长度、50至400个核苷酸长度、200至500个核苷酸长度，或400至600个核苷酸长度、500至800个核苷酸长度。在其它实施方式中，所述异源orf为750至900个核苷酸长度、800至100个核苷酸长度、850至1000个核苷酸长度、900至1200个核苷酸长度、1000至1200个核苷酸长度、1000至1500个核苷酸或10至1500个核苷酸长度、1500至2000个核苷酸长度、1700至2000个核苷酸长度、2000至2300个核苷酸长度、2200至2500个核苷酸长度、2500至3000个核苷酸长度、3000至3200个核苷酸长度、3000至3500个核苷酸长度、3200至3600个核苷酸长度、3300至3800个核苷酸长度、4000个核苷酸至4400个核苷酸长度、4200至4700个核苷酸长度、4800至5000个核苷酸长度、5000至5200个核苷酸长度、5200至5500个核苷酸长度、5500至5800个核苷酸长度、5800至6000个核苷酸长度、6000至6400个核苷酸长度、6200至6800个核苷酸长度、6600至7000个核苷酸长度、7000至7200个核苷酸长度、7200至7500个核苷酸长度或7500个核苷酸长度。在一些实施方式中，所述异源orf编码肽或多肽，其为5至10个氨基酸长度、10至25个氨基酸长度、25至50个氨基酸长度、50至100个氨基酸长度、100至150个氨基酸长度、150至200个氨基酸长度、200至250个氨基酸长度、250至300个氨基酸长度、300至400个氨基酸长度、400至500个氨基酸长度、500至750个氨基酸长度、750至1000个氨基酸长度、1000至1250个氨基酸长度、1250至1500个氨基酸长度、1500至1750个氨基酸长度、1750至2000个氨基酸长度、2000至2500个氨基酸长度或者大于2500个或更多个氨基酸长度。在一些实施方式中，所述核苷酸序列编码不超过2500个氨基酸长度的多肽。在具体的实施方式中，所述核苷酸序列不含终止密码子。在某些实施方式中，所述核苷酸序列是密码子-优化的。在某些实施方式中，可以优化核苷酸组成、核苷酸对组成或两者。用于这些优化的技术在本领域中是已知的并且可以应用于优化肿瘤抗原或肿瘤相关抗原的核苷酸序列。在某些实施方式中，所述沙粒病毒基因组节段、所述沙粒病毒颗粒或者所述三-节段沙粒病毒颗粒可以包含一个或多个编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。在其它实施方式中，所述沙粒病毒基因组节段、所述沙粒病毒颗粒或者所述三-节段沙粒病毒颗粒可以包含至少一个编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列，至少两个编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列，至少三个编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列或者更多个编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。在某些实施方式中，如本文所提供的包含编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒颗粒还包含编码至少一种免疫调节肽、多肽或蛋白质的至少一种核苷酸序列。在某些实施方式中，所述免疫调节肽、多肽或蛋白是钙网蛋白(crt)或其片段；泛素或其片段；粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)或其片段；恒定链(cd74)或其抗原性片段；结核分枝杆菌热休克蛋白70或其抗原性片段；单纯疱疹病毒1蛋白vp22或其抗原性片段；cd40配体或其抗原性片段；或者fms-相关酪氨酸激酶3(flt3)配体或其抗原性片段。在某些实施方式中，本文所提供的沙粒病毒颗粒包含基因组节段，所述基因组节段a)具有存在于所述基因组节段的野生型形式中的orf的去除或功能性失活；和b)编码(以有义或反义形式)：(i)本文所提供的一个或多个肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段，和(ii)本文所提供的一个或多个免疫调节肽、多肽或蛋白质。在某些实施方式中，本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列和本文所提供的编码免疫调节肽、多肽或蛋白质的核苷酸序列位于病毒基因组的相同位置上。在某些实施方式中，本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列和本文所提供的编码免疫调节肽、多肽或蛋白质的核苷酸序列位于病毒基因组的不同位置上。在某些实施方式中，本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列和本文所提供的编码免疫调节肽、多肽或蛋白质的核苷酸序列通过间隔序列分隔。在某些实施方式中，本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列和本文所提供的编码免疫调节肽、多肽或蛋白质的核苷酸序列通过内部核糖体进入位点或者编码蛋白酶切割位点的序列分隔。在某些实施方式中，本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列和本文所提供的编码免疫调节肽、多肽或蛋白质的核苷酸序列通过编码接头或自切割肽的核苷酸序列分隔。可以与本文所提供的组合物和方法一起使用技术人员已知的任何接头肽或自切割肽。肽接头的非限制性实例是gsg。自切割肽的非限制性实例是猪捷申病毒-12a肽、明脉扁刺蛾病毒(thoseaasignavirus)2a肽或者口蹄疫病毒2a肽。在某些实施方式中，本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段和本文所提供的免疫调节肽、多肽或蛋白直接融合在一起。在某些实施方式中，本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段和本文所提供的免疫调节肽、多肽或蛋白通过肽接头融合在一起。在某些实施方式中，本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段和本文所提供的免疫调节肽、多肽或蛋白通过自切割肽彼此分开。肽接头的非限制性实例是gsg。自切割肽的非限制性实例是猪捷申病毒-12a肽、明脉扁刺蛾病毒(thoseaasignavirus)2a肽或者口蹄疫病毒2a肽。在某些实施方式中，本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段和本文所提供的免疫调节肽、多肽或蛋白在相同沙粒病毒颗粒上表达。在某些实施方式中，本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段和本文所提供的免疫调节肽、多肽或蛋白在不同的沙粒病毒颗粒上表达。在某些实施方式中，本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段和本文所提供的免疫调节肽、多肽或蛋白在相同株的不同病毒上表达。在某些实施方式中，本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段和本文所提供的免疫调节肽、多肽或蛋白在不同株的不同病毒上表达。在某些实施方式中，所产生的编码一种或多种肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒包含本文所提供的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的一个或多个核苷酸序列。在具体的实施方式中，通过如本文所述的多种一个或多个接头、间隔臂或切割位点分隔本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段。(d)表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒和三-节段沙粒病毒颗粒的产生通常，可以通过如对于lcmv所述的标准反向遗传学技术来重组产生用于在本文所提供的方法和组合物，如与化疗剂的组合中使用的沙粒病毒颗粒(参见flatz等人,2006,procnatlacadsciusa103:4663-4668；sanchez等人,2006,virology350:370；ortiz-riano等人,2013,jgenvirol.94:1175-88，以上文献作为参考并入本文)。为了产生本文所提供的沙粒病毒颗粒，可以如下所述应用这些技术。可以如本文所述修饰所述病毒的基因组。(i)非天然位置开放阅读框架可以通过本领域技术人员已知的任何反向遗传学技术重组产生包含已被工程化，从而在所述orf的野生型位置以外的位置具有病毒orf并且具有编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的基因组节段的沙粒病毒颗粒。(a)感染性且有复制能力的沙粒病毒颗粒在某些实施方式中，产生沙粒病毒颗粒的方法包括(i)将第一沙粒病毒基因组节段的cdna转染到宿主细胞中；(ii)将第二沙粒病毒基因组节段的cdna转染到宿主细胞中；(iii)将表达沙粒病毒最小反式作用因子np和l的质粒转染到宿主细胞中；(iv)将所述宿主细胞维持在适合于病毒形成的情况下；和(v)收获所述沙粒病毒颗粒。在某些更具体的实施方式中，所述cdna包含在质粒内。一旦从cdna产生，则可以使沙粒病毒颗粒(例如，感染性且有复制能力)增殖。在某些实施方式中，所述沙粒病毒颗粒可以在使得所述病毒能够生长至允许如本文所述的病毒使用的滴度的任何宿主细胞中增殖。在一个实施方式中，所述宿主细胞使得所述沙粒病毒颗粒能够生长至与对于相应野生型所确定的那些相当的滴度。在某些实施方式中，所述沙粒病毒颗粒可以在宿主细胞中增殖。可以使用的宿主细胞的具体实例包括bhk-21、hek293、vero等。在具体的实施方式中，所述沙粒病毒颗粒可以在细胞系中增殖。在某些实施方式中，将所述宿主细胞保持培养并用一个或多个质粒转染。所述质粒表达在适合于在哺乳动物细胞中表达的一个或多个表达盒(例如，由聚合酶i启动子和终止子组成)的控制下所产生的沙粒病毒基因组节段。可以用于产生沙粒病毒颗粒的质粒可以包括：i)编码s基因组节段的质粒，例如，pol-is，ii)编码l基因组节段的质粒，例如，pol-il。在某些实施方式中，可以将编码指导病毒l和s节段胞内合成的沙粒病毒聚合酶的质粒引入到转染混合物中。例如，可以存在编码l蛋白的质粒和/或编码np的质粒(分别为pc-l和pc-np)。l蛋白和np是病毒rna转录和复制所必需的最小反式作用因子。作为另外一种选择，可以使用具有分别从对侧读至两个单独质粒的l和s节段cdna的pol-i和pol-ii启动子的表达盒进行病毒l和s节段以及np和l蛋白的胞内合成。在某些实施方式中，所述沙粒病毒基因组节段受启动子的控制。通常，可以使rna聚合酶i-驱动的表达盒、rna聚合酶ii-驱动的表达盒或者t7噬菌体rna聚合酶驱动的表达盒用。在某些实施方式中，编码沙粒病毒基因组节段的质粒可以是相同的，即，基因组序列和反式作用因子可以通过来自一个质粒的启动子转录。启动子的具体实例包括rna聚合酶i启动子、rna聚合酶ii启动子、rna聚合酶iii启动子、t7启动子、sp6启动子或t3启动子。另外，所述质粒可以具有哺乳动物选择标志物，例如，嘌罗霉素耐受性，其受适合于在哺乳动物细胞中基因表达的表达盒的控制，例如，如上所述的聚合酶ii表达盒，或者病毒基因转录本之后是内部核糖体进入位点，如脑心肌炎病毒之一，然后是哺乳动物耐受性标志物。对于在大肠杆菌(e.coli)中的产生，所述质粒还具有细菌选择标志物，如氨苄西林耐受性盒。可以使用任何常用策略，如磷酸钙、脂质体-基规程或电穿孔进行质粒对宿主细胞的转染。几天后，以滴度浓度加入适合的选择试剂，例如，嘌罗霉素。分离存活的克隆并按照标准程序亚克隆，使用免疫印迹或流式细胞术程序，用抗感兴趣的病毒蛋白的抗体鉴别高表达克隆。对于本文所述的沙粒病毒颗粒的回收，设想以下程序。第1天：如上所述，用质粒混合物转染通常在m6-孔板中处于80％汇合的细胞。对此，可以使用任何常用策略，如磷酸钙、脂质体-基规程或者电穿孔。3-5天后：收获培养上清液(沙粒病毒载体制剂)，等分并根据使用前沙粒病毒载体应储存的时间，在4℃、-20℃或者-80℃储存。通过免疫聚焦测定评价沙粒病毒载体制剂的感染性滴度。作为另外一种选择，在转染后第3-5天，可以将转染细胞和上清液传代至较大的容器(例如，t75组织培养瓶)，并在传代后长达5天收获培养上清液。本发明申请还涉及异源orf的表达，其中将编码基因组节段的质粒修饰以引入异源orf。可以使用限制性内切酶将异源orf引入质粒。(b)感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒可以如上所述拯救感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒。然而，一旦从cdna产生，则本文所提供的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒可以在补体细胞中增殖。补体细胞是提供已通过其基因组修饰从复制-缺陷型沙粒病毒中除去的功能性的细胞，例如，如果使编码gp蛋白的orf缺失或功能性失活，则补体细胞的确提供gp蛋白。由于沙粒病毒载体中一个或多个orf的除去或功能性失活(在本文中，将以糖蛋白gp的缺失为例)，则可以产生沙粒病毒载体并在反式(intrans)提供缺失病毒基因，例如，在本实例中的gp的细胞中扩增。通过用用于感兴趣的病毒基因表达的一个或多个质粒(补体质粒，称为c-质粒)转染细胞系，如bhk-21、hek293、vero等，产生这些补体细胞系(此后称为c-细胞)。c-质粒表达在沙粒病毒载体中缺失的，受适合于在哺乳动物细胞中表达的一个或多个表达盒(例如，哺乳动物聚合酶ii启动子，如具有多腺苷酸化信号的ef1α启动子)控制而产生的病毒基因。另外，补体质粒具有哺乳动物选择标志物，例如，嘌罗霉素耐受性，其受适合于在哺乳动物细胞中基因表达的表达盒的控制，例如，如上所述的聚合酶ii表达盒，或者病毒基因转录本之后是内部核糖体进入位点，如脑心肌炎病毒之一，然后是哺乳动物耐受性标志物。对于在大肠杆菌(e.coli)中的产生，所述质粒还具有细菌选择标志物，如氨苄西林耐受性盒。将可以使用的细胞，例如，bhk-21、hek293、mc57g等保持培养并使用任何常用策略，如磷酸钙、脂质体-基规程或电穿孔，用补体质粒转染。几天后，以滴度浓度加入适合的选择试剂，例如，嘌罗霉素。分离存活的克隆并按照标准程序亚克隆，使用免疫印迹或流式细胞术程序，用抗感兴趣的病毒蛋白的抗体鉴别高表达c-细胞克隆。作为稳定转染的c-细胞的使用的替代，正常细胞的瞬时转染可以补足其中c-细胞将随后使用的每个步骤中的遗失病毒基因。另外，辅助病毒可以用于反式提供遗失功能性。质粒可以具有两种类型：i)两个质粒，称为tf质粒，其用于在c-细胞内胞内表达沙粒病毒的最小反式作用因子，在本实例中，其来源于(例如)lcmv的np和l蛋白；和ii)质粒，称为gs-质粒，其用于在c-细胞内胞内表达沙粒病毒载体基因组节段，例如，具有设计修饰的节段。tf-质粒在通常适合于哺乳动物细胞中蛋白表达的表达盒(例如，哺乳动物聚合酶ii启动子，如cmv或ef1α启动子，它们中的任一个优选地与多腺苷酸化信号结合)的控制下表达各个沙粒病毒载体的np和l蛋白。gs-质粒表达载体的小(s)和大(l)基因组节段。通常，可以使用聚合酶i-驱动的表达盒或者t7噬菌体rna聚合酶(t7-)驱动的表达盒，后者优选地具有3'-末端核糖酶以用于处理初级转录本以获得正确的末端。在使用t7-基系统的情况下，必须通过在回收过程中包含类似于tf-质粒所构建的其它表达质粒，从而提供t7，或者构建c-细胞以另外以稳定方式表达t7来在c-细胞中提供t7的表达。在某些实施方式中，tf和gs质粒可以是相同的，即可以通过来自一个质粒的t7、poli和polii启动子转录基因组序列和反式作用因子。对于沙粒病毒载体的回收，可以使用以下程序。第1天：用两个tf-质粒加两个gs-质粒的混合物转染通常在m6-孔板中处于80％汇合的c-细胞。在某些实施方式中，tf和gs质粒可以是相同的，即可以通过来自一个质粒的t7、poli和polii启动子转录基因组序列和反式作用因子。对此，可以使用任何常用策略，如磷酸钙、脂质体-基规程或者电穿孔。3-5天后：收获培养上清液(沙粒病毒载体制剂)，等分并根据使用前沙粒病毒载体应储存的时间，在4℃、-20℃或者-80℃储存。然后，通过免疫聚焦测定评价沙粒病毒载体制剂对c-细胞的感染性滴度。作为另外一种选择，在转染后第3-5天，可以将转染细胞和上清液传代至较大的容器(例如，t75组织培养瓶)，并在传代后长达5天收获培养上清液。本发明还涉及抗原在细胞培养物中的表达，其中用表达抗原的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒感染所述细胞培养物。当用于在培养细胞中表达抗原时，可以使用以下两个程序：i)以一个或多个，例如，两个、三个或四个感染复数(moi)，用本文所述的沙粒病毒载体制剂感染感兴趣的细胞类型，从而导致在感染后不久在所有细胞中产生抗原。ii)作为另外一种选择，可以使用较小的moi，并且可以对于它们的病毒驱动的抗原表达水平来选择单个细胞克隆。随后，由于沙粒病毒载体的非溶胞性质，可以无限扩增单个克隆。不管方法如何，根据所产生的抗原性质，随后可以从培养上清液或者从细胞本身收集(并纯化)抗原。然而，本发明不限于这两种策略，并且可以考虑使用感染性、复制-缺陷型沙粒病毒作为载体的其它抗原驱动表达方法。(ii)三-节段沙粒病毒颗粒的产生可以通过本领域中已知的反向遗传学技术重组产生包含编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的三-节段沙粒病毒颗粒，所述反向遗传学技术(例如)如通过emonet等人,2008,pnas,106(9):3473-3478；popkin等人,2011,j.virol.,85(15):7928–7932所述的，其作为参考并入本文。如5.2(b)节中所述，可以改变本文所提供的三-节段沙粒病毒颗粒的产生。(a)感染性且有复制能力的三-节段沙粒病毒颗粒在某些实施方式中，产生所述三-节段沙粒病毒颗粒的方法包括(i)将一个l节段和两个s节段或者两个l节段和一个s节段的cdna转染到宿主细胞中；(ii)将表达沙粒病毒最小反式作用因子np和l的质粒转染到宿主细胞中；(iii)将所述宿主细胞维持在适合于病毒形成的情况下；和(iv)收获所述沙粒病毒颗粒。一旦从cdna产生，则可以使所述三-节段沙粒病毒颗粒(即，感染性且有复制能力)增殖。在某些实施方式中，三-节段沙粒病毒颗粒可以在使得所述病毒能够生长至允许如本文所述的病毒使用的滴度的任何宿主细胞中增殖。在一个实施方式中，所述宿主细胞使得所述三-节段沙粒病毒颗粒能够生长至与对于相应野生型所确定的那些相当的滴度。在某些实施方式中，所述三-节段沙粒病毒颗粒可以在宿主细胞中增殖。可以使用的宿主细胞的具体实例包括bhk-21、hek293、vero等。在具体的实施方式中，所述三-节段沙粒病毒颗粒可以在细胞系中增殖。在某些实施方式中，将所述宿主细胞保持培养并用一个或多个质粒转染。所述质粒表达在适合于在哺乳动物细胞中表达的一个或多个表达盒(例如，由聚合酶i启动子和终止子组成)的控制下所产生的沙粒病毒基因组节段。在具体的实施方式中，将所述宿主细胞保持培养并用一个或多个质粒转染。所述质粒表达在适合于在哺乳动物细胞中表达的一个或多个表达盒(例如，由聚合酶i启动子和终止子组成)的控制下所产生的病毒基因。可以用于产生包含一个l节段和两个s节段的三-节段沙粒病毒的质粒可以包括：i)分别编码s基因组节段的两个质粒，例如，pol-is，ii)编码l基因组节段的质粒，例如，pol-il。包含两个l节段和一个s节段的三-节段沙粒病毒所需的质粒为：i)分别编码l基因组节段的两个质粒，例如，pol-l，ii)编码s基因组节段的质粒，例如，pol-is。在某些实施方式中，可以将编码指导病毒l和s节段胞内合成的沙粒病毒聚合酶的质粒引入到转染混合物中。例如，编码l蛋白的质粒和/或编码np的质粒(分别为pc-l和pc-np)。l蛋白和np是病毒rna转录和复制所必需的最小反式作用因子。作为另外一种选择，可以使用具有分别从对侧读至两个单独质粒的l和s节段cdna的pol-i和pol-ii启动子的表达盒进行病毒l和s节段以及np和l蛋白的胞内合成。另外，所述质粒具有哺乳动物选择标志物，例如，嘌罗霉素耐受性，其受适合于在哺乳动物细胞中基因表达的表达盒的控制，例如，如上所述的聚合酶ii表达盒，或者病毒基因转录本之后是内部核糖体进入位点，如脑心肌炎病毒之一，然后是哺乳动物耐受性标志物。对于在大肠杆菌(e.coli)中的产生，所述质粒还具有细菌选择标志物，如氨苄西林耐受性盒。可以使用任何常用策略，如磷酸钙、脂质体-基规程或电穿孔进行通过质粒对bhk-21细胞的转染。几天后，以滴度浓度加入适合的选择试剂，例如，嘌罗霉素。分离存活的克隆并按照标准程序亚克隆，使用免疫印迹或流式细胞术程序，用抗感兴趣的病毒蛋白的抗体鉴别高表达克隆。通常，可以使用rna聚合酶i-驱动的表达盒、rna聚合酶ii-驱动的表达盒或者t7噬菌体rna聚合酶驱动的表达盒，后者优选地具有3'-末端核糖酶以用于处理初级转录本以获得正确的末端。在某些实施方式中，编码沙粒病毒基因组节段的质粒可以是相同的，即，基因组序列和反式作用因子可以通过来自一个质粒的t7、poli和polii启动子转录。对于三-节段沙粒病毒载体的回收，设想了以下程序。第1天：如上所述，用质粒混合物转染通常在m6-孔板中处于80％汇合的细胞。对此，可以使用任何常用策略，如磷酸钙、脂质体-基规程或者电穿孔。3-5天后：收获培养上清液(沙粒病毒载体制剂)，等分并根据使用前沙粒病毒载体应储存的时间，在4℃、-20℃或者-80℃储存。通过免疫聚焦测定评价沙粒病毒载体制剂的感染性滴度。作为另外一种选择，在转染后第3-5天，可以将转染细胞和上清液传代至较大的容器(例如，t75组织培养瓶)，并在传代后长达5天收获培养上清液。在某些实施方式中，提供了编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的表达，其中修饰编码所述基因组节段的质粒以引入编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。可以使用限制性内切酶将编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列引入所述质粒。(b)感染性的复制-缺陷型三-节段沙粒病毒颗粒可以如上所述拯救感染性的复制-缺陷型三-节段沙粒病毒颗粒。然而，一旦从cdna产生，则本文所提供的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒可以在补体细胞中增殖。补体细胞是提供已通过其基因组修饰从复制-缺陷型沙粒病毒中除去的功能性的细胞(例如，如果使编码gp蛋白的orf缺失或功能性失活，则补体细胞的确提供gp蛋白)。由于沙粒病毒载体中一个或多个orf的除去或功能性失活(在本文中，将以糖蛋白gp的缺失为例)，则可以产生沙粒病毒载体并在反式(intrans)提供缺失病毒基因，例如，在本实例中的gp的细胞中扩增。通过用用于感兴趣的病毒基因表达的一个或多个质粒(补体质粒，称为c-质粒)转染哺乳动物细胞系，如bhk-21、hek293、vero等(在本文中将以bhk-21为例)，产生这些补体细胞系(此后称为c-细胞)。c-质粒表达在沙粒病毒载体中缺失的，受适合于在哺乳动物细胞中表达的一个或多个表达盒(例如，哺乳动物聚合酶ii启动子，如具有多腺苷酸化信号的cmv或ef1α启动子)控制而产生的病毒基因。另外，补体质粒具有哺乳动物选择标志物，例如，嘌罗霉素耐受性，其受适合于在哺乳动物细胞中基因表达的表达盒的控制，例如，如上所述的聚合酶ii表达盒，或者病毒基因转录本之后是内部核糖体进入位点，如脑心肌炎病毒之一，然后是哺乳动物耐受性标志物。对于在大肠杆菌(e.coli)中的产生，所述质粒还具有细菌选择标志物，如氨苄西林耐受性盒。将可以使用的细胞，例如，bhk-21、hek293、mc57g等保持培养并使用任何常用策略，如磷酸钙、脂质体-基规程或电穿孔，用补体质粒转染。几天后，以滴度浓度加入适合的选择试剂，例如，嘌罗霉素。分离存活的克隆并按照标准程序亚克隆，使用免疫印迹或流式细胞术程序，用抗感兴趣的病毒蛋白的抗体鉴别高表达c-细胞克隆。作为稳定转染的c-细胞的使用的替代，正常细胞的瞬时转染可以补足其中c-细胞将随后使用的每个步骤中的遗失病毒基因。另外，辅助病毒可以用于反式提供遗失功能性。可以使用两种类型的质粒：i)两种质粒，称为tf质粒，其用于在c-细胞内胞内表达沙粒病毒的最小反式作用因子，在本实例中，其来源于(例如)lcmv的np和l蛋白；和ii)质粒，称为gs-质粒，其用于在c-细胞内胞内表达沙粒病毒载体基因组节段，例如，具有设计修饰的节段。tf-质粒在通常适合于哺乳动物细胞中蛋白表达的表达盒(例如，哺乳动物聚合酶ii启动子，如cmv或ef1α启动子，它们中的任一个优选地与多腺苷酸化信号结合)的控制下表达各个沙粒病毒载体的np和l蛋白。gs-质粒表达载体的小(s)和大(l)基因组节段。通常，可以使用聚合酶i-驱动的表达盒或者t7噬菌体rna聚合酶(t7-)驱动的表达盒，后者优选地具有3'-末端核糖酶以用于处理初级转录本以获得正确的末端。在使用t7-基系统的情况下，必须通过在回收过程中包含类似于tf-质粒所构建的其它表达质粒，从而提供t7，或者构建c-细胞以另外以稳定方式表达t7来在c-细胞中提供t7的表达。在某些实施方式中，tf和gs质粒可以是相同的，即可以通过来自一个质粒的t7、poli和polii启动子转录基因组序列和反式作用因子。对于沙粒病毒载体的回收，可以使用以下程序。第1天：用两个tf-质粒加两个gs-质粒的混合物转染通常在m6-孔板中处于80％汇合的c-细胞。在某些实施方式中，tf和gs质粒可以是相同的，即可以通过来自一个质粒的t7、poli和polii启动子转录基因组序列和反式作用因子。对此，可以使用任何常用策略，如磷酸钙、脂质体-基规程或者电穿孔。3-5天后：收获培养上清液(沙粒病毒载体制剂)，等分并根据使用前沙粒病毒载体应储存的时间，在4℃、-20℃或者-80℃储存。然后，通过免疫聚焦测定评价沙粒病毒载体制剂对c-细胞的感染性滴度。作为另外一种选择，在转染后第3-5天，可以将转染细胞和上清液传代至较大的容器(例如，t75组织培养瓶)，并在传代后长达5天收获培养上清液。本发明还涉及抗原在细胞培养物中的表达，其中用表达抗原的感染性、复制-缺陷型三-节段沙粒病毒感染所述细胞培养物。当用于在培养细胞中表达cmv抗原时，可以使用以下两个程序：iii)以一个或多个，例如，两个、三个或四个感染复数(moi)，用本文所述的沙粒病毒载体制剂感染感兴趣的细胞类型，从而导致在感染后不久在所有细胞中产生肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段。iv)作为另外一种选择，可以使用较小的moi，并且可以对于它们的病毒驱动的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段表达水平来选择单个细胞克隆。随后，由于沙粒病毒载体的非溶胞性质，可以无限扩增单个克隆。不管方法如何，根据所产生的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或抗原性片段的性质，随后可以从培养上清液或者从细胞本身收集(并纯化)肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段。然而，本发明不限于这两种策略，并且可以考虑使用感染性、复制-缺陷型沙粒病毒作为载体的其它肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的驱动表达方法。(e)核酸、载体系统和细胞系在某些实施方式中，本文提供了包含如本文所述的沙粒病毒基因组节段或三-节段沙粒病毒颗粒的或由其组成的cdna，其可以与本文所提供的方法和组合物一起使用，如与化疗剂组合。(i)非天然位置开放阅读框架在一个实施方式中，本文提供了编码如5.2.(a)节中所述的沙粒病毒基因组节段的核酸。在更具体的实施方式中，本文提供了如表1所示的dna核苷酸序列或dna核苷酸序列组。5.2.(a)节中还提供了包含这些核酸的宿主细胞。在具体的实施方式中，本文提供了被工程化以在所述orf的野生型位置以外的位置具有orf并且具有编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒基因组节段的cdna，其中所述沙粒病毒基因组节段编码了如5.2.(a)节所述的异源orf。在一个实施方式中，本文提供了编码被工程化以在所述orf的野生型位置以外的位置具有orf并且具有编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒基因组节段的dna表达载体系统。具体地，本文提供了dna表达载体系统，其中一个或多个载体编码两个沙粒病毒基因组节段，即本文所述的沙粒病毒颗粒的l节段和s节段。该载体系统可以编码编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。在另一个实施方式中，本文提供了已被工程化从而在野生型位置以外的位置具有orf并且具有作为dna表达系统的一部分或引入dna表达系统的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒s节段的cdna。在其它实施方式中，本文提供了已被工程化从而在野生型位置以外的位置具有orf并且具有作为dna表达系统的一部分或引入dna表达系统的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒l节段的cdna。在某些实施方式中，沙粒病毒基因组节段的cdna已被工程化，从而(i)在所述orf的野生型位置以外的位置具有orf；和(ii)已除去编码gp、np、z蛋白或l蛋白的orf或用编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列将其替换。在某些实施方式中，本文所提供的cdna可以来源于lcmv的特定的株。lcmv株包括克隆13、mp株、armca1371、arme-250、we、ubc、traub、pasteur、810885、ch-5692、marseille#12、hp65-2009、200501927、810362、811316、810316、810366、20112714、douglas、gr01、sn05、cabn和它们的衍生物。在具体的实施方式中，所述cdna来源于lcmv克隆13。在其它具体的实施方式中，所述cdna来源于lcmvmp株。在某些实施方式中，所产生的编码如本文所述的沙粒病毒颗粒或三-节段沙粒病毒颗粒的载体可以基于具体的lcmv株。lcmv株包括克隆13、mp株、armca1371、arme-250、we、ubc、traub、pasteur、810885、ch-5692、marseille#12、hp65-2009、200501927、810362、811316、810316、810366、20112714、douglas、gr01、sn05、cabn和它们的衍生物。在某些实施方式中，如本文所述的沙粒病毒颗粒或三-节段沙粒病毒颗粒可以基于lcmv克隆13。在其它实施方式中，所产生的编码如本文所述的沙粒病毒颗粒或三-节段沙粒病毒颗粒的载体是lcmvmp株。在另一个实施方式中，本文提供了细胞，其中所述细胞包含本节中上述的cdna或载体系统。本文还提供了来源于这些细胞的细胞系，包含这些细胞的培养物以及培养所感染的这些细胞的方法。在某些实施方式中，本文提供了细胞，其中所述细胞包含已被工程化从而在所述orf的野生型位置以外的位置具有orf并且具有编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒基因组节段的cdna。在一些实施方式中，所述细胞包含s节段和/或l节段。(ii)三-节段沙粒病毒颗粒在一个实施方式中，本文提供了编码如5.2.(b)节中所述的三-节段沙粒病毒颗粒的核酸。在更具体的实施方式中，本文提供了(例如)如表2或表3中所示的dna核苷酸序列或dna核苷酸序列组。5.2(b)节中还提供了包含这些核酸的宿主细胞。在具体的实施方式中，本文提供了由已被工程化以在所述orf的野生型位置以外的位置具有orf的三-节段沙粒病毒颗粒的cdna所组成的cdna。在其它实施方式中，所述三-节段沙粒病毒颗粒的cdna已被工程化，从而(i)在所述orf的野生型位置以外的位置具有沙粒病毒orf；和(ii)其中所述三-节段沙粒病毒颗粒编码如5.2(b)节中所述的异源orf。在一个实施方式中，本文提供了共同编码包含如本文所述的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的三-节段沙粒病毒颗粒的dna表达载体系统。具体地，本文提供了dna表达载体系统，其中一个或多个载体编码三个沙粒病毒基因组节段，即本文所述的三-节段沙粒病毒颗粒的一个l节段和两个s节段或者两个l节段和一个s节段。该载体系统可以编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段。在另一个实施方式中，本文提供了已被工程化从而在野生型位置以外的位置具有orf并且具有作为dna表达系统的一部分或引入dna表达系统的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列的沙粒病毒s节段的cdna。在其它实施方式中，沙粒病毒l节段的cdna已被工程化从而在野生型位置以外的位置具有orf并且具有作为dna表达系统的一部分或引入dna表达系统的编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。在某些实施方式中，三-节段沙粒病毒颗粒的cdna已被工程化，从而(i)在所述orf的野生型位置以外的位置具有orf；和(ii)已除去编码gp、np、z蛋白或l蛋白的orf或用编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列将其替换。在某些实施方式中，本文所提供的cdna可以来源于lcmv的特定的株。lcmv株包括克隆13、mp株、armca1371、arme-250、we、ubc、traub、pasteur、810885、ch-5692、marseille#12、hp65-2009、200501927、810362、811316、810316、810366、20112714、douglas、gr01、sn05、cabn和它们的衍生物。在具体的实施方式中，所述cdna来源于lcmv克隆13。在其它具体的实施方式中，所述cdna来源于lcmvmp株。在某些实施方式中，所产生的编码如本文所述的沙粒病毒颗粒或三-节段沙粒病毒颗粒的载体可以基于具体的lcmv株。lcmv株包括克隆13、mp株、armca1371、arme-250、we、ubc、traub、pasteur、810885、ch-5692、marseille#12、hp65-2009、200501927、810362、811316、810316、810366、20112714、douglas、gr01、sn05、cabn和它们的衍生物。在某些实施方式中，如本文所述的沙粒病毒颗粒或三-节段沙粒病毒颗粒可以基于lcmv克隆13。在其它实施方式中，所产生的编码如本文所述的沙粒病毒颗粒或三-节段沙粒病毒颗粒的载体是lcmvmp株。在另一个实施方式中，本文提供了细胞，其中所述细胞包含本节中上述的cdna或载体系统。本文还提供了来源于这些细胞的细胞系，包含这些细胞的培养物以及培养所感染的这些细胞的方法。在某些实施方式中，本文提供了细胞，其中所述细胞包含所述三-节段沙粒病毒颗粒的cdna。在一些实施方式中，所述细胞包含s节段和/或l节段。(f)使用方法疫苗已成功用于预防和/或治疗传染性疾病，如用于脊髓灰质炎病毒和麻疹的那些。然而，在已确诊的慢性疾病，包括癌症的环境中的治疗性免疫尚不太成功。产生与化疗剂组合使用的沙粒病毒颗粒的能力代表了新型疫苗策略。在某些实施方式中，本文提供了治疗对象中肿瘤病的方法。这些方法可以包括向对其有需要的对象施用本文所提供的沙粒病毒颗粒和本文所提供的化疗剂。在某些实施方式中，在所述方法中使用的沙粒病毒颗粒是本文所提供的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒。在某些实施方式中，在所述方法中使用的沙粒病毒颗粒是本文所提供的三-节段沙粒病毒颗粒，其包括感染性、复制-缺陷型三-节段沙粒病毒颗粒或者有复制能力的三-节段沙粒病毒颗粒。因此，在某些实施方式中，在所述方法中使用的沙粒病毒颗粒，包括三-节段沙粒病毒颗粒是复制-缺陷型的，其中所述沙粒病毒颗粒被工程化以包含含有下列的基因组：(1)编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列；和(2)使其遗传信息在感染的细胞中扩增和表达，但是不能在非补体细胞中产生进一步感染性的子代颗粒的能力。此外，在某些实施方式中，在所述方法中使用的三-节段沙粒病毒颗粒是有复制能力的，其中所述沙粒病毒颗粒被工程化以包含含有下列的基因组：(1)编码肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列；(2)使其遗传信息在感染的细胞中扩增和表达的能力；和(3)在正常、非基因工程细胞中产生进一步感染性的子代颗粒的能力。在一个实施方式中，本文提供了治疗对象中肿瘤病的方法，其包括向所述对象施用如本文所提供的一种或多种表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂。在具体的实施方式中，本文所述的用于治疗肿瘤病的方法包括向对其有需要的对象施用治疗有效量的如本文所提供的一种或多种表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂。所述对象可以是哺乳动物，如(但不限于)人、小鼠、大鼠、豚鼠、驯养动物，如(但不限于)母牛、马、绵羊、猪、山羊、猫、狗、仓鼠、驴。在具体的实施方式中，所述对象是人。在另一个实施方式中，本文提供了对对象中赘生性细胞或组织，如癌细胞或肿瘤引起免疫应答的方法，其包括向所述对象施用本文所提供的表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂。在另一个实施方式中，向其施用本文所提供的表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂的对象患有肿瘤病，对肿瘤病敏感或者具有患肿瘤病的风险。在另一个实施方式中，向其施用本文所提供的表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂的对象患有肿瘤病，对肿瘤病敏感或者具有患肿瘤病的风险，所述肿瘤病如癌症，或者显示出癌前组织病变。在另一个具体的实施方式中，向其施用本文所提供的表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂的对象诊断患有肿瘤病，如癌症，或者显示出癌前组织病变。在另一个实施方式中，向其施用本文所提供的表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂的对象患有肿瘤病，对肿瘤病敏感或者具有患肿瘤病的风险，所述肿瘤病选自，但不限于，急性淋巴母细胞性白血病；急性淋巴细胞性淋巴瘤；急性淋巴细胞白血病；急性髓性白血病；急性髓细胞性白血病(成人/儿童)；肾上腺皮质癌；aids-相关癌症；aids-相关淋巴瘤；肛门癌；阑尾癌；星形细胞瘤；非典型畸胎样/横纹样瘤；基底细胞癌；胆管癌，肝外(肝胆管型肝癌)；膀胱癌；骨骨肉瘤/恶性纤维组织细胞瘤；脑癌(成人/儿童)；脑肿瘤，小脑星形细胞瘤(成人/儿童)；脑肿瘤，大脑星形细胞瘤/恶性神经胶质瘤脑肿瘤；脑肿瘤，室管膜瘤；脑肿瘤，成神经管细胞瘤；脑肿瘤，幕上原始神经外胚层瘤；脑肿瘤，视觉传导路和下丘脑神经胶质瘤；脑干神经胶质瘤；乳腺癌；支气管腺瘤/类癌；支气管肿瘤；伯基特淋巴瘤；儿童癌；胃肠类癌肿瘤；类癌瘤；成人癌瘤，未知原发位点；原发未知的癌瘤；中枢神经系统胚胎性瘤；中枢神经系统淋巴瘤，原发；宫颈癌；儿童肾上腺皮质癌；儿童癌症；儿童大脑星形细胞瘤；脊索瘤，儿童；慢性淋巴细胞性白血病；慢性粒性白血病；慢性粒细胞性白血病；慢性脊髓增生病；结肠癌；结肠直肠癌；颅咽管瘤；皮肤t-细胞淋巴瘤；促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤；肺气肿；子宫内膜癌；成室管膜细胞瘤；室管膜瘤；食道癌；尤文氏家族肿瘤中的尤因氏肉瘤；颅外生殖细胞肿瘤；性腺外生殖细胞肿瘤；肝外胆管癌；胆囊癌；胃(胃)癌；胃类癌瘤；胃肠类癌肿瘤；胃肠道间质瘤；生殖细胞肿瘤：颅外、性腺外或卵巢妊娠滋养细胞肿瘤；妊娠滋养细胞肿瘤，未知原发位点；神经胶质瘤；脑干神经胶质瘤；神经胶质瘤，儿童视觉传导路和下丘脑；毛细胞白血病；头颈癌；心癌；肝细胞(肝)癌；霍奇金淋巴瘤；舌癌；下丘脑和视觉传导路神经胶质瘤；眼内黑素瘤；胰岛细胞癌(内分泌胰腺)；卡波西肉瘤；肾癌(肾细胞癌)；郎格罕细胞组织细胞增生症；喉癌；唇和口腔癌；脂肪肉瘤；肝癌(原发)；肺癌，非小细胞；肺癌，小细胞；淋巴瘤，原发性中枢神经系统；瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症；男性乳腺癌；恶性骨纤维组织细胞瘤/骨肉瘤；成神经管细胞瘤；髓上皮瘤；黑素瘤；黑素瘤，眼内(眼)；梅克尔细胞癌；梅克尔细胞皮肤癌；间皮瘤；间皮瘤，成人恶性；转移性颈鳞癌，原发位点隐匿；口癌；多发性内分泌瘤综合征；多发性骨髓瘤/浆细胞瘤；阿利贝尔氏病，脊髓发育不良综合征；脊髓发育不良/骨髓增殖性疾病；粒细胞性白血病，慢性；骨髓性白血病，成人急性；骨髓性白血病，儿童急性；骨髓瘤，多发性(骨-骨髓癌)；脊髓增生病，慢性；鼻腔和鼻窦癌；鼻咽癌；成神经细胞瘤，非小细胞肺癌；非霍奇金淋巴瘤；寡枝神经胶质细胞瘤；口腔癌；口腔癌；口咽癌；骨肉瘤/恶性骨纤维组织细胞瘤；卵巢癌；卵巢上皮癌(表面上皮-间质肿瘤)；卵巢生殖细胞肿瘤；卵巢低度恶性潜能肿瘤；胰腺癌；胰腺癌，胰岛细胞；乳头状瘤病；鼻窦和鼻腔癌；甲状旁腺癌；阴茎癌；咽癌；嗜铬细胞瘤；松果体星形细胞瘤；松果体胚组织瘤；中分化松果体实质细胞瘤；成松果体细胞瘤和幕上原始神经外胚层瘤；垂体瘤；垂体腺瘤；浆细胞瘤/多发性骨髓瘤；胸膜肺胚细胞瘤；原发性中枢神经系统淋巴瘤；前列腺癌；直肠癌；肾细胞癌(肾癌)；肾盂和输尿管，移行细胞癌；涉及染色体15上的nut基因的呼吸道癌；成视网膜细胞瘤；横纹肌肉瘤，儿童；唾液腺癌；肉瘤，尤文氏家族肿瘤；塞扎里氏综合征；皮肤癌(黑素瘤)；皮肤癌(非黑素瘤)；小细胞肺癌；小肠癌软组织肉瘤；软组织肉瘤；脊髓瘤；鳞状细胞癌；颈鳞癌，原发位点隐匿，转移性；胃(胃)癌；幕上原始神经外胚层瘤；t细胞淋巴瘤，皮肤(阿利贝尔氏病和塞扎里氏综合征)；睾丸癌；咽喉癌；胸腺瘤；胸腺瘤和胸腺癌；甲状腺癌；甲状腺癌，儿童；肾盂和输尿管的移行细胞癌；尿道癌；子宫癌，子宫内膜；子宫肉瘤；阴道癌；外阴癌；和胚胎性癌肉瘤。在另一个实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于患有肿瘤病，对肿瘤病敏感或者具有患肿瘤病的风险的任何年龄组的对象。在具体的实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于免疫系统受损的对象、怀孕的对象、经历器官或骨髓移植的对象、服用免疫抑制药物的对象、经历血液透析的对象、患有癌症的对象或者患有肿瘤病，对肿瘤病敏感或者具有患肿瘤病的风险的对象。在更具体的实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于患有肿瘤病，对肿瘤病敏感或者具有患肿瘤病的风险的0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17岁的儿童对象。在另一个具体实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于患有肿瘤病，对肿瘤病敏感或者具有患肿瘤病的风险的婴儿对象。在另一个具体的实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于患有肿瘤病，对肿瘤病敏感或者具有患肿瘤病的风险的0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月的婴儿对象。在另一个具体实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于患有肿瘤病，对肿瘤病敏感或者具有患肿瘤病的风险的老年对象。在更具体的实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90岁的年长对象。本文提供了在对肿瘤病敏感或者具有患肿瘤病的风险的对象中预防癌症的方法。在另一个实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于具有高癌症转移风险的对象。在具体的实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于具有新生儿免疫系统，并因此具有不成熟免疫系统的新生儿期的对象。在另一个实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于患有0期(即，原位肿瘤)、1期、2期、3期或4期癌症或其子类，如3a、3b或3c期癌症或其等价形式的对象。在另一个实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于患有处于选自下列的肿瘤、结节、转移(tnm)期的任意组合的癌症的对象，所述组合选自肿瘤t1、t2、t3和t4、以及结节n0、n1、n2或n3，转移m0和m1。癌症患者的成功治疗可以评价为延长预期存活、引起抗肿瘤免疫应答或者改善特定癌症特征。可以改善的癌症特征的实例包含肿瘤尺寸(例如，t0，或者t1-4)、转移状态(例如，m0、m1)、可观察的肿瘤个数、结节转移(例如，n0、n1-4、nx)，分级(即，1、2、3或4级)、期(例如，0、i、ii、iii或iv)、细胞上或体液中某些标志物的存在或浓度(例如，afp、b2m、β-hcg、bta、ca15-3、ca27.29、ca125、ca72.4、ca19-9、降钙素、cea、嗜铬粒蛋白a、egfr、激素受体、her2、hcg、免疫球蛋白、nse、nmp22、psa、pap、psma、s-100、ta-90和甲状球蛋白)和/或相关病变(例如，腹水或水肿)或者症状(例如，恶病质、发烧、厌食症或疼痛)。如果通过百分比可测量，则所述改善可以是至少5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80或者90％(例如，存活或者肿瘤的体积或线性尺寸)。在另一个实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于患有休眠癌症的对象(例如，所述对象处于缓解期)。因此，本文提供了预防癌症再激活的方法。本文还提供了降低癌症复发频率的方法。在另一个实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于患有复发性癌症的对象。在另一个实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于对癌症具有遗传倾向性的对象。在另一个实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于具有风险因素的对象。示例性的风险因素包括衰老、抽烟、日光暴露、辐射暴露、化学品暴露、家族史、酒精、不良饮食、缺少身体活动或者过重。在另一个实施方式中，将表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂施用于经受一种或多种类型癌症的对象。在其它实施方式中，可以靶向对使用本文所述的组合物的治疗敏感的任何类型的肿瘤病，如癌症。在另一个实施方式中，向对象施用表达所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物赋予了针对赘生性细胞或肿瘤，如癌细胞或肿瘤的细胞介导的免疫性(cmi)。不受理论束缚，在另一个实施方式中，表达所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物在宿主(例如，巨噬细胞)的抗原递呈细胞(apc)中感染并表达感兴趣的抗原以用于抗原在i和ii型主要组织相容性复合体(mhc)上的直接递呈。在另一个实施方式中，向对象施用表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物诱导了多功能ifn-γ和tnf-α，其共产生了大幅度的癌症特异性cd4+和cd8+t细胞应答(通过cd4+和cd8+t细胞产生ifn-γ，通过cd4+t细胞产生tnf-α)以治疗肿瘤病。在另一个实施方式中，施用表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂提高或改善了癌症治疗的一种或多种临床结局。这些结局的非限制性实例是整体存活期、无恶化存活期、发展时间、治疗失败时间、无事件存活期、下次治疗时间、整体反应率和反应持续时间。一种或多种临床结局的提高或改善可以为与在没有这种治疗的情况下，患有相同肿瘤病的患者或患者组相比，至少约10％，至少约20％，至少约25％，至少约30％，至少约35％，至少约40％，至少约50％，至少约60％，至少约70％，至少约80％，至少约90％或以上。可以通过技术人员已知的任何测定来测量通过在对象中施用表达所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物所引起的针对赘生性细胞或肿瘤，包括癌细胞或肿瘤的细胞介导免疫(cmi)应答功能的变化，所述测定包括(但不限于)流式细胞术(参见，例如，perfettos.p.等人,natrevimmun.2004；4(8):648-55)、淋巴细胞增殖测定(参见，例如，bonillaf.a.等人,annallergyasthmaimmunol.2008；101:101-4；和hicksm.j.等人,amjclinpathol.1983；80:159-63)，测量淋巴细胞激活的测定，其包括在t淋巴细胞的细胞因子测量激活后确定表面标志物表达的变化(参见，例如，carusoa.等人,cytometry.1997；27:71-6)、elispot测定(参见，例如，czerkinskyc.c.等人,jimmunolmethods.1983；65:109-121；和hutchingsp.r.等人,jimmunolmethods.1989；120:1-8)，或者自然杀伤细胞细胞毒性测定(参见，例如，bonillaf.a.等人,annallergyasthmaimmunol.2005may；94(5suppl1):s1-63)。本文所述的化疗剂可以为烷化剂(例如，环磷酰胺)、铂-基治疗剂、抗代谢剂、局部异构酶抑制剂、细胞毒抗生素、插入剂、有丝分裂抑制剂、紫杉烷或其两种或更多种的组合。在某些实施方式中，所述烷化剂是氮芥、亚硝基脲、烷基磺酸盐、非经典烷化剂或者三氮烯。在某些实施方式中，所述化疗剂包括以下中的一个或多个：环磷酰胺、塞替派、氮芥(氮芥/氮芥)、乌拉莫司汀、美法仑、苯丁酸氮芥、异环磷酰胺、萘氮芥、胆磷酰胺、雌莫司汀、新恩比星、胆甾醇对苯乙酸氮芥、泼尼莫司汀、曲磷胺、乌拉莫司汀、苯达莫司汀、白消安、英丙舒凡、哌泊舒凡、卡莫司汀、洛莫司汀、吡葡亚硝脲、福莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀、链佐星、顺铂、卡铂、奈达铂、奥沙利铂、沙铂、四硝酸三铂、丙卡巴肼、六甲蜜胺、达卡巴嗪、米托唑胺、替莫唑胺、紫杉醇、多西他赛、长春碱、长春新碱、长春瑞滨、卡巴他赛、更生霉素(放线菌素d)、卡里奇霉素(calicheamicin)、达内霉素(dynemicin)、安吖啶、多柔比星(doxarubicin)、柔红霉素、表柔比星、米托蒽醌、伊达比星、吡柔比星、苯并多巴、卡波醌、米特多巴(meturedopa)、尤利多巴(uredopa)、六甲蜜胺、曲他胺、三乙烯磷酰胺、三乙烯硫代磷酰胺、三羟甲基蜜胺(trimethylolomelamine)、布拉他辛(bullatacin)、布拉它辛酮(bullatacinone)、喜树碱、拓扑替康、苔藓抑素、卡利斯汀(callystatin)、cc-1065、阿多来新、卡折来新、比折来新、念珠藻素、尾海兔素、倍癌毒素、kw-2189、cb1-tm1、艾榴塞洛素、水鬼蕉碱(pancratistatin)、匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)、海绵抑制素、氯屈膦酸、埃斯培拉霉素(esperamicin)、新制癌菌素发色团、阿克拉霉素(aclacinomysin)、安曲霉素、偶氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素c、卡柔比星(carabicin)、洋红霉素、嗜癌菌素、色霉素(chromomycinis)、地托比星、6-重氮-5-氧-l-正亮氨酸、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素、麦考酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素(potfiromycin)、嘌罗霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链佐星、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶(5-fu)、二甲叶酸、蝶罗呤、三甲曲沙、氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫唑嘌呤胺、硫鸟嘌呤、安西他滨、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氮尿苷、卡普睾酮、屈他雄酮丙酸酯、环硫雄醇、美雄烷、睾内酪、米托坦、曲洛司坦、亚叶酸、醋葡醛内酯、醛磷酰胺糖苷、氨基乙酰丙酸、恩尿嘧啶、贝斯布西(bestrabucil)、比生群、依达曲沙(edatraxate)、地磷酰胺(defofamine)、秋水仙胺、地吖醌、依氟鸟氨酸、依利醋铵、依托格鲁、硝酸镓、羟基脲、蘑菇多糖、氯尼达明(lonidainine)、美登素、安丝菌素、米托胍腙、莫比达摩(mopidanmol)、二胺硝吖啶(nitraerine)、喷司他丁、蛋氨氮芥(phenamet)、吡柔比星、洛索蒽醌、鬼臼酸、2-乙酰肼、psk多糖复合物、雷佐生、根霉素、西佐喃、锗螺胺、细交链孢菌酮酸、三亚胺醌、2,2',2”-三氯三乙胺；t-2毒素、疣孢霉素a(verracurina)、杆孢菌素a和蛇形菌素(anguidine)、氨基甲酸乙酯、长春地辛、甘露莫司汀、二溴甘露醇、二溴卫矛醇、哌泊溴烷、加西托星(gacytosine)、阿糖胞苷(“ara-c”)、依托泊苷(vp-16)、长春瑞滨、诺凡特龙(novantrone)、替尼泊苷、依达曲沙、氨基蝶呤、希罗达、伊班膦酸、伊立替康(例如、cpt-11)、局部异构酶抑制剂rfs2000、二氟甲基鸟氨酸(dmfo)、视黄酸、卡培他滨、普利霉素(plicomycin)、吉西他滨、长春瑞滨、反铂，以及任何上述化合物的药物可用的盐、酸或衍生物。在具体的实施方式中，所述化疗剂包括环磷酰胺。在某些实施方式中，所述氮芥是氮芥、环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、异环磷酰胺或白消安。在某些实施方式中，所述化疗剂使dna烷基化。在某些实施方式中，所述化疗剂使dna烷基化，从而导致形成链间交联(“icls”)。在某些实施方式中，与抑制、降低或干扰阴性检查点调节因子活性的免疫检查点抑制剂组合使用本文所述的化疗剂。在某些实施方式中，所述阴性检查点调节因子选自细胞毒t-淋巴细胞抗原-4(ctla-4)、cd80、cd86、细胞程序死亡1(pd-1)、细胞程序死亡配体1(pd-l1)、细胞程序死亡配体2(pd-l2)、淋巴细胞活化基因-3(lag-3；也称为cd223)、半乳凝素-3、b和t淋巴细胞衰减因子(btla)、t细胞膜蛋白3(tim3)、半乳凝素-9(gal9)、b7-h1、b7-h3、b7-h4、具有ig和itim域的t细胞免疫受体(tigit/vstm3/wucam/vsig9)、t细胞激活的v-域ig抑制剂(vista)、糖皮质激素-诱导的肿瘤坏死因子受体-相关(gitr)蛋白、疱疹病毒进入介导子(hvem)、ox40、cd27、cd28、cd137.cgen-15001t、cgen-15022、cgen-15027、cgen-15049、cgen-15052和cgen-15092。在某些实施方式中，所述免疫检查点抑制剂是抗pd-1抗体。在某些实施方式中，优选地在多次注射(例如，至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18、20、25、30、40、45或50次注射)或者通过在多个位点(例如，至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12或14个位点)的连续输注(例如，使用泵)来施用表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物和本文所提供的化疗剂。在某些实施方式中，在6-个月、12-个月、24-个月或48-个月内以两次或多次不同的注射施用表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物。在某些实施方式中，在选择的日期通过第一剂量施用表达本文所提供的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒或其组合物，在所述第一剂量之后至少2个月施用第二剂量，并且在所述第一剂量之后6个月施用第三剂量。在一个实例中，在多个身体位点进行皮肤注射以减轻局部皮肤反应程度。在进行疫苗接种当天，患者在四肢中分别距最近邻注射位置相隔至少约5cm(例如，至少4.5、5、6、7、8、9cm)的针头入口，接受来自一个注射器的以3至5次单独皮内剂量注射(例如，至少0.4ml、0.2ml或者0.1ml)所施用的指定总剂量。在后续疫苗接种日，将注射位点以顺时针或逆时针方式转动至不同的四肢。在某些实施方式中，所述方法还包括本文所提供的沙粒病毒颗粒和化疗剂的共施用。在某些实施方式中，所述共施用是同时的。在另一个实施方式中，在施用所述化疗剂之前，施用所述沙粒病毒颗粒。在其它实施方式中，在施用所述化疗剂之后，施用所述沙粒病毒颗粒。在某些实施方式中，所述沙粒病毒颗粒和所述化疗剂施用之间的间隔为约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时或者约12小时。在某些实施方式中，所述沙粒病毒颗粒和所述化疗剂施用之间的间隔为约1天，约2天，约3天，约4天，约5天，约6天，约1周，约8天，约9天，约10天，约11天，约12天，约13天，约2周，约3周，约4周，约5周，约6周，约7周，约8周，约9周，约10周，约11周，约12周。在某些实施方式中，所述沙粒病毒颗粒和所述化疗剂施用之间的间隔为约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月或者约6个月。在一些实施方式中，所述方法还包括施用至少一种其它疗法。在另一个实施方式中，在治疗方案中以约1:1至1:1000的范围内的摩尔比，具体地包括：1:1的比例，1:2的比例，1:5的比例，1:10的比例，1:20的比例，1:50的比例，1:100的比例，1:200的比例，1:300的比例，1:400的比例，1:500的比例，1:600的比例，1:700的比例，1:800的比例，1:900的比例，1:1000的比例施用两次沙粒病毒颗粒。在某些实施方式中，本文提供了治疗肿瘤病的方法，其中作为“初免”首先施用第一沙粒病毒颗粒，并且作为“加强”施用第二沙粒病毒颗粒。所述第一和所述第二沙粒病毒颗粒可以表达相同或不同的肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段。作为另外一种选择或者另外，在一些特定实施方式中，用来源于不同物种的沙粒病毒颗粒进行所述“初免”和“加强”施用。在某些具体的实施方式中，用来源于lcmv的沙粒病毒颗粒进行所述“初免”施用，并且用来源于胡宁病毒的沙粒病毒颗粒进行所述“加强”施用。在某些具体的实施方式中，用来源于胡宁病毒的沙粒病毒颗粒进行所述“初免”施用，并且用来源于lcmv的沙粒病毒颗粒进行所述“加强”施用。在某些实施方式中，用来源于皮秦德病毒的沙粒病毒颗粒进行所述“初免”施用，并且用来源于lcmv的沙粒病毒颗粒进行所述“加强”施用。在某些实施方式中，用来源于皮秦德病毒的沙粒病毒颗粒进行所述“初免”施用，并且用来源于胡宁病毒的沙粒病毒颗粒进行所述“加强”施用。在某些实施方式中，用来源于lcmv的沙粒病毒颗粒进行所述“初免”施用，并且用来源于皮秦德病毒的沙粒病毒颗粒进行所述“加强”施用。在某些实施方式中，用来源于胡宁病毒的沙粒病毒颗粒进行所述“初免”施用，并且用来源于皮秦德病毒的沙粒病毒颗粒进行所述“加强”施用。在某些实施方式中，与免疫调节肽、多肽或蛋白的施用组合进行所述“初免”施用和/或所述“加强”施用。在某些实施方式中，与化疗剂的施用组合进行所述“初免”施用和/或所述“加强”施用。在某些实施方式中，施用表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的第一沙粒病毒颗粒，然后施用表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的第二沙粒病毒颗粒导致产生了比施用单一表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒更强的抗原特异性cd8+t细胞应答。在某些实施方式中，在第二施用之后，与第一施用相比，所述抗原特异性cd8+t细胞计数增加50％、100％、150％或200％。在某些实施方式中，施用表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的第三沙粒病毒颗粒导致产生了比施用两个连续的表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的沙粒病毒颗粒更强的抗原特异性cd8+t细胞应答。在某些实施方式中，在第三施用之后，与第一施用相比，所述抗原特异性cd8+t细胞计数增加约50％、约100％、约150％，约200％或者约250％。在某些实施方式中，本文提供了用于治疗肿瘤病的方法，其包括施用两种或更多种沙粒病毒颗粒，其中所述两种或更多种沙粒病毒颗粒是同源的，并且其中每次施用之间的时间间隔为约1周，约2周，约3周，约4周，约5周，约6周，约7周，约8周，约3个月，约4个月，约5个月，约6个月，约7个月，约8个月，约9个月，约10个月，约11个月，约12个月，约18个月或者约24个月。在某些实施方式中，施用表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的第一沙粒病毒颗粒和表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的第二异源沙粒病毒颗粒引起了比施用表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的第一沙粒病毒颗粒和表达肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的第二同源沙粒病毒颗粒更强的cd8+t细胞应答。(g)组合物、施用和剂量在某些实施方式中，包含本文所提供的沙粒病毒颗粒的免疫原性组合物(例如，疫苗制剂)和药物组合物可以与本文所提供的方法和组合物一起使用，如与化疗剂组合。可以根据本领域中的标准程序配制这些疫苗、免疫原性组合物和药物组合物。在另一个实施方式中，本文提供了包含本文所述的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒，并且在某些实施方式中，包含本文所提供的化疗剂的组合物。这些组合物可以在治疗肿瘤病的方法中使用。在另一个具体的实施方式中，本文所提供的免疫原性组合物可以用于在施用所述组合物的宿主中引起免疫应答。本文所述的免疫原性组合物可以用作疫苗并因此可以作为药物组合物配制。在具体的实施方式中，在对象(例如，人对象)的肿瘤病的治疗中使用本文所述的免疫原性组合物。在其它实施方式中，所述疫苗、免疫原性组合物或药物组合物适合于兽医和/或人施用。在某些实施方式中，本文提供了包含如本文所述的沙粒病毒颗粒(或者不同的沙粒病毒颗粒的组合)的免疫原性组合物。在某些实施方式中，这种免疫原性组合物还包含药物可用的赋形剂。在某些实施方式中，这种免疫原性组合物还包含佐剂。用于与本文所述的组合物组合施用的佐剂可以在所述组合物施用之前施用，随所述组合物一起施用或在所述组合物施用后施用。在一些实施方式中，术语“佐剂”是指当与本文所述的组合物结合或者作为本文所述的组合物的一部分施用时，加强、提高和/或增强对感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒的免疫应答，但是当单独施用所述化合物时，对感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒不产生免疫应答的化合物。在一些实施方式中，所述佐剂对感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒产生免疫应答，但是不产生过敏症或者其它不良反应。佐剂可以通过几种机制提高免疫应答，包括(例如)淋巴细胞招募、b和/或t细胞刺激和巨噬细胞刺激。当本发明的疫苗或免疫原性组合物包含佐剂或者与一种或多种佐剂一起施用时，可以使用的佐剂包括(但不限于)矿物盐佐剂或矿物盐凝胶佐剂、颗粒佐剂、微颗粒佐剂、粘膜佐剂和免疫刺激性佐剂。佐剂的实例包括(但不限于)铝盐(白矾)(如氢氧化铝、磷酸铝和硫酸铝)、3-脱-o-酰单磷酰酯a(mpl)(参见gb2220211)、mf59(novartis)、as03(glaxosmithkline)、as04(glaxosmithkline)、聚山梨酯80(吐温80；iclamericas,inc.)、咪唑并吡啶化合物(参见国际专利申请no.pct/us2007/064857，其作为国际专利公开no.wo2007/109812公开)、咪唑喹喔啉化合物(参见国际专利申请no.pct/us2007/064858，其作为国际专利公开no.wo2007/109813公开)和皂苷，如qs21(参见kensil等人，疫苗设计：亚单位和佐剂方法(vaccinedesign:thesubunitandadjuvantapproach，powell&newman主编，plenumpress,ny,1995)；美国专利no.5057540)。在一些实施方式中，所述佐剂是弗氏佐剂(完全或不完全)。其它佐剂是水包油乳化液(如角鲨烯或花生油)，其任选地结合免疫刺激剂，如单磷酰酯a(参见stoute等人,n.engl.j.med.336,86-91(1997))。所述组合物单独或与药物可用的载体和/或化疗剂一起包含本文所述的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒。可以使用基因工程沙粒病毒颗粒的混悬液或分散体，特别是等渗水混悬液或分散体。所述药物组合物可以灭菌和/或可以包含赋形剂，例如，防腐剂、稳定剂、润湿剂和/或乳化剂、增溶剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂，并且以本身已知的方式制备，例如，通过常规分散和混悬方法制备。在某些实施方式中，这些分散体或混悬液可以包含粘度-调节剂。将所述混悬液或分散体保持在约2-8℃的温度，或者优选地对于更长时间的储存，可以将其冷冻，然后在使用前不久融化。对于注射，可以将疫苗或免疫原性制剂在水溶液，优选地在生理学相容的缓冲液，如汉克斯溶液、林格氏溶液或生理盐水缓冲液中制备。所述溶液可以含有配制试剂，如混悬、稳定和/或分散剂。在某些实施方式中，本文所述的组合物还包含防腐剂，例如，汞衍生物硫柳汞。在具体的实施方式中，本文所述的药物组合物包含0.001％至0.01％的硫柳汞。在其它实施方式中，本文所述的药物组合物不包含防腐剂。所述药物组合物包含约103至约1011个溶血灶形成单位的所述基因工程的沙粒病毒颗粒。用于肠胃外施用的单位剂量形式为(例如)安瓿瓶或小瓶，例如，含有约103至1010个溶血灶形成单位或者105至1015个物理颗粒的基因工程沙粒病毒颗粒的小瓶。在另一个实施方式中，通过以下途径将本文所提供的疫苗或免疫原性组合物施用于对象，所述途径包括(但不限于)口服、皮内、肌内、腹膜内、静脉内、局部、皮下、经皮、鼻内和吸入途径，和通过破皮(例如，使用分叉针将皮肤表层破皮)。具体地，可以使用皮下、肌内或静脉内途径。对于鼻内或通过吸入法的施用，可以借助于适合的抛射剂，例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它适合的气体，以气溶胶喷雾呈现的形式从增压包或雾化器中方便地递送用于根据本发明的用途的制剂。就加压气雾剂来说，可以通过设置阀门以递送计量的量来确定剂量单元。可以将在吸入器或吹药器中使用的(例如，明胶)胶囊和药筒配制成含有所述化合物和适合的粉末基剂(如乳糖或淀粉)的粉末混合物。活性成分的剂量取决于疫苗接种的类型以及对象，和他们的年龄、体重、个体状况、个体药物动力学数据和施用途径。在某些实施方式中，所述组合物可以以包含治疗有效量的沙粒病毒颗粒和/或治疗有效量的化疗剂的单一剂量施用于患者。在一些实施方式中，所述沙粒病毒颗粒可以以分别包含治疗有效量的沙粒病毒颗粒和化疗剂的单一剂量施用于患者。在某些实施方式中，将所述组合物作为单一剂量施用于所述患者，然后在3至6周后施用第二剂量。根据这些实施方式，可以在第二次接种后，以6至12个月的间隔向所述对象施用加强接种。在某些实施方式中，所述加强接种可以使用不同的沙粒病毒颗粒或其组合物。在一些实施方式中，可以重复如本文所述的相同组合物的施用并且间隔至少1天、2天、3天、4天、5天、10天、15天、30天、45天、2个月、75天、3个月或至少6个月。在某些实施方式中，包含沙粒病毒颗粒的疫苗、免疫原性组合物或者药物组合物可以用作活接种疫苗。用于活沙粒病毒颗粒的示例性剂量可以在10-100或以上pfu活病毒/剂量之间改变。在一些实施方式中，适合的沙粒病毒颗粒或三-节段沙粒病毒颗粒的剂量为102、5×102、103、5×103、104、5×104、105、5×105、106、5×106、107、5×107、108、5×108、1×109、5×109、1×1010、5×1010、1×1011、5×1011或1012pfu，并且可以以所需频率间隔向对象施用1次、2次、3次或更多次。在另一个实施方式中，配制活沙粒病毒，从而0.2-ml剂量含有106.5-107.5个荧光聚焦单位的活沙粒病毒颗粒。在另一个实施方式中，配制灭活疫苗，从而使其含有约15μg至约100μg，约15μg至约75μg，约15μg至约50μg，或者约15μg至约30μg沙粒病毒还提供了用于生产处于药物制剂形式的疫苗的沙粒病毒颗粒和化疗剂的方法和用途，所述疫苗包含沙粒病毒颗粒和化疗剂作为活性成分。还提供了用于在本文所述的肿瘤病的治疗中使用的本文所提供的沙粒病毒颗粒和本文所提供的化疗剂的组合。在某些实施方式中，所述组合处于相同药物组成。在某些实施方式中，所述组合未处于相同药物组成，如当单独施用所述沙粒病毒颗粒和化疗剂时。以本身已知的方式制备本发明申请所述的药物组合物，例如，通过常规混合和/或分散方法。本文还提供了可以用于实施本文所述的方法的试剂盒。在某些实施方式中，本文所提供的试剂盒可以包含一个或多个容器。这些容器可以适用于储存本文所提供的组合物(例如，药物、免疫原性或疫苗组合物)。试剂盒中还包含了使用说明书。这些说明书足够详细地描述了使用其中所含的组合物的治疗规程。例如，所述说明书可以包含如本文所提供的用于治疗肿瘤病的方法的剂量施用和施用说明。在某些实施方式中，本文所提供的试剂盒包含容器，所述容器分别含有用于实施本文所述的方法的活性成分。因此，在某些实施方式中，本文所提供的试剂盒包含两个或更多个容器和使用说明，其中所述容器之一包含本文所提供的感染性、复制-缺陷型沙粒病毒颗粒，另一个容器包含本文所提供的化疗剂。(h)测定(i)沙粒病毒检测测定熟练的技术人员可以使用本领域中已知的技术检测如本文所述的沙粒病毒基因组节段或者三-节段沙粒病毒颗粒。例如，可以通过对沙粒病毒特异的引物使用rt-pcr来检测和定量已被工程化在所述orf的野生型位置以外的位置具有orf的沙粒病毒基因组节段或者三-节段沙粒病毒颗粒。免疫印迹、elisa、放射免疫测定、免疫沉淀、免疫细胞化学或者与facs结合的免疫细胞化学可以用于定量沙粒病毒基因组节段或者三-节段沙粒病毒颗粒的基因产物。(ii)测量感染性的测定技术人员已知的任何测定可以用于测量沙粒病毒载体制剂的感染性。例如，可以通过“病灶形成单位测定”(ffu测定)来进行病毒/载体滴度的确定。简言之，将补体细胞，例如，mc57细胞铺板并用不同稀释度的病毒/载体样品接种。在培育期之后，为了使细胞形成单层和使病毒贴附细胞，用甲基纤维素覆盖所述单层。当将所述板进一步培育时，原始感染细胞释放病毒子代。由于甲基纤维素覆盖，新病毒的扩散被限制在相邻的细胞。因此，每个感染性颗粒产生了圆形感染细胞区，其称为病灶。可以使用抗lcmv-np抗体或者沙粒病毒颗粒或三-节段沙粒病毒颗粒所表达的另一种蛋白和hrp-基显色反应使该病灶可见并由此可计数。可以以病灶形成单位/毫升(ffu/ml)来计算病毒/载体的滴度。(iii)沙粒病毒颗粒的生长可以通过本领域中已知的或者本文所述的任何方法(例如，细胞培养物)评价本文所述的沙粒病毒颗粒的生长。可以通过将本文所述的沙粒病毒颗粒的连续稀释接种到细胞培养物(例如，vero细胞或者bhk-21细胞)中来确定病毒生长。在将病毒培育指定时间后，使用标准方法分离所述病毒。(iv)血清elisa一旦动物(例如，小鼠、豚鼠)接种疫苗，则可以通过抗原-特异性血清elisa(酶联免疫吸附测定)进行体液免疫应答确定。简言之，用抗原(例如，重组蛋白)涂覆板，封闭以避免抗体的非特异性结合并与血清的连续稀释培育。培育后，可以(例如)使用酶-偶联的抗-物种(例如，小鼠、豚鼠)-特异性抗体(检测总igg或igg亚类)和后续显色反应来检测结合的血清-抗体。抗体滴度可以确定为(例如)终点几何平均滴度。还可以进行免疫捕获elisa(ic-elisa)(参见shanmugham等人,2010,clin.vaccineimmunol.17(8):1252-1260)，其中所述捕获剂交联至珠。(v)测量诱导抗体中和活性的测定通过使用来自atcc的arpe-19细胞和gfp-标签的病毒的下列细胞测定进行血清中中和抗体的确定。另外，使用作为外源补体来源的补体豚鼠血清。从用于中和之前一或两天，用6.5×103个细胞/孔(50μl/孔)在384孔板中接种开始测定。在无细胞的96-孔无菌组织培养板中，在37℃进行中和1。在中和培育步骤后，将混合物加入至细胞并培育另外4天以用于通过酶标仪的gfp-检测。将阳性中和人血清用作每个板上的测定阳性对照以检查所有结果的可靠性。使用4参数逻辑曲线拟合确定滴度(ec50)。作为额外测试，用荧光显微镜检查孔。(a)空斑减数测定简言之，可以通过使用用绿色荧光蛋白标签的有复制能力的或者复制-缺陷型lcmv进行lcmv的空斑减数(中和)测定，5％的兔血清可以用作外源补体来源，并且可以通过荧光显微镜对空斑计数。中和滴度可以定义为与对照(免疫前)血清样品相比，导致空斑50％、75％、90％或95％减少的最高血清稀释度。根据生产商所提供的规程，使用qiaamp病毒rna微型试剂盒(qiagen)分离qpcrlcmvrna基因组。使用iii一步qrt-pcr试剂盒(invitrogen)以及对lcmvnp编码区部分或者沙粒病毒颗粒或三-节段沙粒病毒颗粒的另一个基因组延伸特异的引物和探针(fam报道子和nfq-mgb猝灭剂)，通过在steponeplus实时pcr系统(appliedbiosystems)上进行的定量pcr检测lcmvrna基因组当量。反应温度谱可以是：60℃，30min；95℃，2min；然后是95℃，15s，56℃，30s，循环45次。可以通过将样品结果与从通过分光光度法定量的对应于含有引物和探针结合位点的lcmvnp编码序列片段或者沙粒病毒颗粒或三-节段沙粒病毒颗粒的另一个基因组延伸的体外-转录的rna片段的log10稀释系列所制备的标准曲线相比较来定量rna。(b)豚鼠肺成纤维细胞(gpl)中的中和测定简言之，在具有作为外源补体来源的添加的兔血清(1％)的gpl完全培养基中制备测试和对照(接种疫苗前)血清的连续稀释。稀释系列在1:40至1:5120之间。将血清稀释液与egfp标签的病毒(100-200pfu/孔)在37℃培育30min，然后转移到含有汇合的gpl细胞的12-孔板中。样品重复处理三次。在37℃培育2小时之后，用pbs清洗细胞，再次添加gpl完全培养基并在37℃/5％co2下培育5天。通过荧光显微镜使空斑显象，计数并与对照孔相比。将与对照相比，导致空斑数减少50％的血清稀释度指定为中和滴度。(c)免疫印迹在感染后指定的时间点，使用ripa缓冲液(thermoscientific)将在组织培养瓶中或悬浮生长的感染细胞溶胞，或者在无细胞-溶胞的情况下直接使用。将样品与还原剂和nupagelds样品缓冲液(novex)加热至99℃并保持10分钟，并在上样至4-12％sds-凝胶进行电泳之前冷却至室温。使用invitrogensiblot凝胶转移装置将蛋白在膜上印迹并通过丽春红染色显象。最终，用抗感兴趣的蛋白的一抗和碱性磷酸酶缀合的二抗，然后用1-步nbt/bcip溶液(invitrogen)染色来检测制剂。(d)用于检测抗原-特异性cd8+t细胞增殖的mhc-肽多聚体染色测定技术人员已知的任何测定可以用于测试抗原-特异性cd8+t细胞应答。例如，可以使用mhc-肽四聚体染色测定(参见，例如，altmanj.d.等人,science.1996；274:94-96；和murali-krishnak.等人,immunity.1998；8:177-187)。简要地，所述测定包括以下步骤，将四聚体测定用于检测抗原特异性t细胞的存在。为了使t细胞检测对其特异的肽，必需识别肽以及对t细胞(通常荧光标记的)的限定抗原特异性和mhc单倍体定制的mhc分子四聚体两者。然后，通过借助于荧光标记物的流式细胞术检测所述四聚体。(e)用于检测抗原-特异性cd4+t细胞增殖的elispot测定。技术人员已知的任何测定可以用于测试抗原-特异性cd4+t细胞应答。例如，可以使用elispot测定(参见，例如，czerkinskyc.c.等人,jimmunolmethods.1983；65:109-121；和hutchingsp.r.等人,jimmunolmethods.1989；120:1-8)。简要地，所述测定包括以下步骤：用抗细胞因子抗体涂覆免疫斑点板。在所述免疫斑点板中培育细胞。细胞分泌细胞因子，然后将其清洗掉。然后，用第二生物素化的-抗细胞因子抗体涂覆板，并用抗生物素蛋白-hrp系统显象。(f)用于检测cd8+和cd4+t细胞应答的功能性的胞内细胞因子测定技术人员已知的任何测定可以用于测试cd8+和cd4+t细胞应答的功能性。例如，可以使用与流式细胞术结合的胞内细胞因子测定(参见，例如，sunim.a.等人,jimmunolmethods.1998；212:89-98；nomural.e.等人,cytometry.2000；40:60-68；和ghanekars.a.等人,clinicalanddiagnosticlaboratoryimmunology.2001；8:628-63)。简要地，所述测定包括以下步骤：通过特异性肽或蛋白的细胞激活，添加蛋白转运抑制剂(例如，布雷菲德菌素a)以将所述细胞因子保留在所述细胞内。在限定培育期(通常5小时)之后是清洗步骤，并且可以将抗其它细胞标志物的抗体加入所述细胞。然后，将细胞固定并透性化。添加荧色物-缀合的抗细胞因子抗体，并且可以通过流式细胞术分析细胞。(g)用于确认病毒载体复制-缺陷的测定技术人员已知的确定感染性且有复制能力的病毒颗粒的浓度的任何测定也可以用于测量样品中的复制-缺陷型病毒颗粒。例如，使用非补体细胞的ffu测定可以用于该目的。此外，空斑-基测定是用于确定病毒样品中就空斑形成单位(pfu)而言的病毒浓度的标准方法。具体地，用不同稀释度的病毒感染非补体宿主细胞的汇合单层，并用半固体培养基，如琼脂覆盖以防止病毒感染无区别地扩散。当病毒成功感染并且本身在固定的细胞单层内的细胞中复制时，形成病毒空斑，并且扩散至周围细胞(参见，例如，kaufmann,s.h.；kabelitz,d.(2002).methodsinmicrobiologyvol.32:immunologyofinfection.academicpress.isbn0-12-521532-0)。根据所分析的病毒，空斑形成可以需要2-14天。通常对空斑手动计数，并且结合用于制备板的稀释因子，将所述结果用于计算每样品单位体积的空斑形成单位数目(pfu/ml)。pfu/ml结果代表了样品内感染性、有复制能力的颗粒的数目。当使用c-细胞时，相同测定可以用于滴定复制-缺陷型沙粒病毒颗粒或者三-节段沙粒病毒颗粒。(vi)用于病毒抗原表达的测定技术人员已知的任何测定可以用于测量病毒抗原的表达。例如，可以进行ffu测定。对于检测，使用了抗各自病毒抗原的单或多克隆抗体制剂(转基因-特异性ffu)。(vii)动物模型为了研究本文所述的沙粒病毒颗粒的重组和感染性，可以使用体内动物模型。在某些实施方式中，可以用于研究三-节段沙粒病毒颗粒的重组和感染性的动物模型包括小鼠、豚鼠、兔和猴子。在优选的实施方式中，可以用于研究沙粒病毒的重组和感染性的动物模型包括小鼠。在更具体的实施方式中，可以用于研究沙粒病毒颗粒的重组和感染性的小鼠为对i类干扰素受体、ii型干扰素受体和重组激活基因1(rag1)三重-缺陷型的。在某些实施方式中，动物模型可以用于确定沙粒病毒的感染性和转基因稳定性。在一些实施方式中，病毒rna可以分离自动物模型的血清。技术是本领域技术人员易于所知的。病毒rna可以反转录，并且具有沙粒病毒orf的cdna可以通过基因-特异性引物pcr-扩增。流式细胞术也可以用于研究沙粒病毒的感染性和转基因稳定性。(a)化疗剂测定已经设计了一些能够评价所提议的化疗剂的性质的测定。可以用于测试本文所公开的方法和组合物的肿瘤模型包括colon26(ct26)、mc38(小鼠结肠腺癌)、b16f10(b16)、lewislung(llc)、madison109(mad109)、emt-6(鼠乳腺癌)、4t1(4t1)(鼠乳腺癌)、hcmel3(鼠黑素瘤)、hgfxcdk4r24c/r24c(鼠黑素瘤)和(renca)(鼠肾癌)。在某些实施方式中，在这些模型系统中，可以通过将肿瘤细胞系皮下(例如，ct26、4t1、mad109、renca、llc或b16)或者脑内(例如，gl261、onc26m4)接种至啮齿类，例如，成年雌性小鼠中来产生“可移植肿瘤”。肿瘤可以发展预定时间段，例如，几天。这些肿瘤在同基因的具有免疫能力的啮齿类，例如，小鼠株中生长。例如，ct26、4t1、mad109和renca可以在balb/c小鼠中生长，llc、b16和gl261可以在c57bl/6小鼠中生长，onc26m4可以在fvbn小鼠中生长。可以通过将编码一些(例如，一个、两个、三个或更多个)致癌基因和编码一个或多个报道子，例如，荧光虫荧光素酶报道子的dna质粒脑内注射至新生c57bl/6或fvbn小鼠中以转化内源脑细胞来产生“自发肿瘤”。可以通过本领域中已知的技术，例如，生物发光成象来监测神经胶质瘤的生长。可以通过本领域中已知的技术监测皮下肿瘤的生长，例如，以给定时间间隔在三维空间中进行卡尺测量。5.3异源初免-加强在某些实施方式中，本文提供了涉及使用本文所述的复制-缺陷型病毒或者三-节段有复制能力的病毒(参见部分5.1和5.2)的异源初免/加强的方法和组合物。在具体的实施方式中，在没有同时进行的化疗或者没有同时使用免疫检查点调节因子的治疗的情况下进行这种异源初免/加强治疗方案。在其它实施方式中，在起始在本节中所述的异源初免/加强方案之前，已进行了化疗和/或使用免疫检查点调节因子的疗法。在其它实施方式中，要使用异源初免/加强方案治疗的患者先前未通过化疗和/或使用免疫检查点调节因子的疗法治疗本病况，并且也未同时通过化疗和/或使用免疫检查点调节因子的疗法进行治疗。在某些实施方式中，用多个和/或连续异源初免/加强方案治疗患者。在某些实施方式中，所述异源初免/加强方案包括施用如本文所述的第一沙粒病毒-来源的构建体，然后施用如本文所述的第二沙粒病毒-来源的构建体。在具体的实施方式中，所述第一和所述第二沙粒病毒-基构建体包含编码相同肿瘤抗原、肿瘤相关抗原或其抗原性片段的核苷酸序列。肿瘤抗原或肿瘤-相关抗原可以是5.1.(a)、5.1.(b)、5.2.(a)、5.2.(b)或者5.2.(c)节中所列的抗原。在具体的实施方式中，两种沙粒病毒-来源的构建体包含编码致癌病毒抗原，如hpv抗原，如hpv16e7/e6融合体(例如，如wo2015/082570中所述，其以其全部内容并入本文)的核苷酸序列。在某些实施方式中，至少相隔1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或者至少14天；至少相隔1、2、3、4、5、6、7或者至少8周；至少相隔1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或者至少12个月施用所述第一和所述第二沙粒病毒-基构建体。在某些实施方式中，至多相隔1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或者至多14天；至多相隔1、2、3、4、5、6、7或者至多8周；至多相隔1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或者至多12个月施用所述第一和所述第二沙粒病毒-基构建体。在某些实施方式中，所述第一沙粒病毒-基构建体具有如图1所示的基因组组织(即，gp蛋白的开放阅读框架缺失或功能性失活并且被肿瘤抗原或肿瘤-相关抗原或者致癌病毒抗原的开放阅读框架替换)或者如图2对于r3lcmv-gfp人工所列的所示，除了所述病毒具有肿瘤抗原或肿瘤-相关抗原或致癌病毒抗原的开放阅读框架，而不是编码gfp的开放阅读框架。在某些实施方式中，所述第二沙粒病毒-基构建体具有如图1所示的基因组组织(即，gp蛋白的开放阅读框架缺失或功能性失活并且被肿瘤抗原或肿瘤-相关抗原或者致癌病毒抗原的开放阅读框架替换)或者如图2对于r3lcmv-gfp人工所列的所示，除了所述病毒具有肿瘤抗原或肿瘤-相关抗原或致癌病毒抗原的开放阅读框架，而不是编码gfp的开放阅读框架。在具体的实施方式中，所述第一和所述第二沙粒病毒-基构建体具有如图1所示的基因组组织(即，gp蛋白的开放阅读框架缺失或功能性失活并且被肿瘤抗原或肿瘤-相关抗原或者致癌病毒抗原的开放阅读框架替换)或者如图2对于r3lcmv-gfp人工所列的所示，除了所述病毒具有肿瘤抗原或肿瘤-相关抗原或致癌病毒抗原的开放阅读框架，而不是编码gfp的开放阅读框架。在具体的实施方式中，所述第一和所述第二沙粒病毒-基构建体具有如图2对于r3lcmv-gfp人工所列的所示的基因组组织，除了所述病毒具有肿瘤抗原或肿瘤-相关抗原或致癌病毒抗原(如hpv16e7/e6融合蛋白)的开放阅读框架，而不是编码gfp的开放阅读框架。此外，所述第一沙粒病毒-基疫苗来源于皮秦德、胡宁或lcmv；并且所述第二沙粒病毒-基疫苗来源于皮秦德、胡宁或lcmv(但是不同于所述第一构建体的病毒主链)。在更具体的实施方式中，所述第一构建体(初免)来源于皮秦德病毒，所述第二构建体(加强)来源于lcmv。可以作为如本文所述的病毒颗粒施用所述第一和所述第二构建体。在某些实施方式中，本文提供了试剂盒，其中所述试剂盒包含本文所提供的治疗方案的两种或更多种组分。例如，在一个实施方式中，该试剂盒包含(i)具有如本文所述的病毒颗粒(例如，包括编码感兴趣的抗原的开放阅读框架的沙粒冰毒-基构建体)；和(ii)具有化疗剂的容器。在另一个实施方式中，该试剂盒包含(i)具有第一病毒颗粒的容器(用于“初免”)；和(ii)具有第二病毒构建体的容器(用于“加强”)；和任选地(iii)具有化疗剂的容器。6.等价内容本文所公开的病毒、核酸、方法、宿主细胞和组合物不限于本文所述的具体实施方式的范围。的确，除所述那些之外，根据以上描述和附图，对于本领域技术人员来说，所述病毒、核酸、方法、宿主细胞和组合物的多种修改将变得显而易见。这些改变旨在处于所附权利要求的范围内。在本文中引用了多个出版物、专利和专利申请，以上出版物、专利和专利申请的公开内容以其全部内容作为参考并入。7.序列表4中的序列是可以与本文所述的方法和组合物一起使用的说明性氨基酸序列和核苷酸序列。在一些情况下，dna序列用于描述病毒基因组节段的rna序列。可以容易地从dna序列推断出rna序列。表48.实施例8.1实施例1：r3lcmv治疗和化疗之间的影响在b16f10小鼠黑素瘤模型中评价了r3lcmv治疗和低-剂量化疗(环磷酰胺治疗)之间的潜在协同作用。在第0天，将1×105个b16f10肿瘤细胞皮下植入到c57bl/6小鼠中。随后，将小鼠保持未处理(组1)、在第6天用2mg环磷酰胺腹膜内治疗(组2)、在第7天静脉内注射2.1×105pfu(总计)的载体混合物(分别为7×104pfu的r3lcmv-gp100、r3lcmv-trp1和r3lcmv-trp2)(组3)，或者用环磷酰胺(第6天)和r3lcmv-载体混合物(第7天)的组合治疗(组4)。r3lcmv构建体的基因组组织基本如图2中对于r3lcmv-gfpart所示的，除了所述构建体具有编码感兴趣的抗原，即gp100、trp1和trp2的开放阅读框架来替代gfp开放阅读框架。监测肿瘤攻击后的肿瘤生长(图3a)以及动物的存活(图3b和c)。符号代表每组三只小鼠(组1-3)或四只小鼠(组4)的平均值±sem。使用r3lcmv载体混合物的治疗对肿瘤生长的影响比单独的化疗更大。通过化疗和使用r3lcmv载体混合物的治疗的组合实现了最佳肿瘤控制，表明两种组合治疗显示出协同作用。在实验第15和22天，通过四聚体染色和流式细胞术分析来分析测试动物血液中t细胞的频率。结果表明与仅用r3lcmv载体治疗的动物相比，在用环磷酰胺和r3lcmv-载体的组合治疗的小鼠中引起了相对(图4a，左图)和绝对(图4a，右图)数目更高的trp2-特异性cd8+t细胞。在对于gp100-特异性cd8+t细胞的这种实验中，未观察到这种协同作用(图4b)。8.2实施例2：hcmel3模型中r3lcmv治疗和化疗之间的影响在hcmel3小鼠黑素瘤模型中评价了r3lcmv治疗和低-剂量化疗(环磷酰胺治疗)之间的潜在协同作用。hcmel3肿瘤细胞来源于原代hgf-cdk4r24c黑素瘤。在第0天，将hcmel3肿瘤细胞(4×105个细胞)皮下植入c57bl/6小鼠。当所有肿瘤可触知时，用2mg环磷酰胺(ctx)腹膜内治疗组3和4中的小鼠。在第16天，用7×104rcvffur3lcmv-trp2静脉内注射组2和3中的小鼠。用1×105rcvffur3picv-trp2静脉内免疫组4中的小鼠。r3lcmv构建体的基因组组织基本如图2中对于r3lcmv-gfpart所示的，除了所述构建体具有编码感兴趣的抗原，即trp2的开放阅读框架来替代gfp开放阅读框架。监测肿瘤攻击后的肿瘤生长。通过四聚体染色分析测试动物血液中trp2-特异性cd8+t细胞的频率。8.3实施例3：hgfxcdk4r24c/r24c小鼠中r3lcmv治疗和化疗之间的影响hgfxcdk4r24c/r24c模型是其中小鼠出现了对人黑素瘤显示出一些相似性的自发肿瘤的同基因模型(landsberg等人,autochthonousprimaryandmetastaticmelanomasinhgf-cdk4r24cmiceevadet-cell-mediatedimmunesurveillance.2010；bald等人,immunecell-poormelanomasbenefitfrompd-1blockadeaftertargetedtypeiifnactivation,2014)。在hgfxcdk4r24c/r24c小鼠模型中评价了r3lcmv治疗和低-剂量化疗(环磷酰胺治疗)之间的潜在协同作用。小鼠保持未处理(组1)，当肿瘤可触知时(约第60天)，用2mg环磷酰胺腹膜内治疗(组2)，当肿瘤可触知时(约第60天)，用载体混合物(r3lcmv-gp100、r3lcmv-trp1和r3lcmv-trp2)静脉内注射(组3)，或者用环磷酰胺和r3lcmv-载体混合物的组合治疗(组4)。r3lcmv构建体的基因组组织基本如图2中对于r3lcmv-gfpart所示的，除了所述构建体具有编码感兴趣的抗原，即gp100、trp1和trp2的开放阅读框架来替代gfp开放阅读框架。监测肿瘤生长以及动物存活。在实验第15和22天，通过四聚体染色和流式细胞术分析来分析测试动物血液中t细胞的频率。8.4实施例4：使用异源初免-加强的r3lcmv治疗和化疗之间的影响重复实施例1和2(b16f10和hcmel3小鼠模型两者)中的实验以确定使用以下载体与化疗(环磷酰胺)：r3lcmv/r3lcmv、r3junv/r3lcmv和r3picv/r3lcmv的组合进行异源初免-加强疫苗接种后的免疫应答。8.5实施例5：异源初免-加强为了研究同源相对于异源初免-加强免疫的免疫原性，在(i)在同源初免-加强背景中，用r3lcmv-e7e6(来自人乳头状瘤病毒16型(hpv16)的表达抗原e7和e6的有复制能力的lcmv载体)的两次施用治疗的小鼠和(ii)在异源初免-加强背景中，用r3picv-e7e6(表达e7和e6抗原的有复制能力的皮秦德病毒载体)初免，用r3lcmv-e7e6加强的动物之间比较了对抗原-特异性cd8+t细胞应答的诱导。图5显示了该实验的结果：在第0天，用105rcvffu的r3lcmv-e7e6(组1)或者105rcvffu的r3picv-e7e6(组2)使c57bl/6小鼠(每组5只小鼠)静脉内免疫或者使c57bl/6小鼠保持未处理(组3)。r3lcmv构建体的基因组组织基本如图2中对于r3lcmv-gfpart所示的，除了所述构建体具有编码感兴趣的抗原，即e7e6(它是hpv的e6和e7蛋白的融合蛋白)的开放阅读框架来替代gfp开放阅读框架。在第13天，用105rcvffu的r3lcmv-e7e6对组1和2中的小鼠进行加强。组3的小鼠仍保持未处理。随后，通过四聚体染色(db-e7(49-57)-四聚体)，在第20和42天分析血液，并且在第51天分析测试动物脾脏中e7-特异性cd8+t细胞的频率。各个结果表明在用表达e7抗原的有复制能力的沙粒病毒载体处理的测试组1和2的动物中引起了有效且持久的抗原-特异性cd8+t细胞应答。与仅使用r3lcmv-e7e6的同源免疫(组1)相比，通过使用与r3lcmv-e7e6结合的r3picv-e7e6的异源初免-加强组合(组2)引起了显著更高的cd8+t细胞频率。还就它们在tc-1小鼠肿瘤模型中的抗肿瘤效力分析和比较了同源和异源初免-加强疫苗接种方案(lin等人,1996,cancerres.；56(1):21-6)。在具有tc-1肿瘤的小鼠中比较了在施用(i)两次剂量的r3lcmv-e7e6(同源初免-加强)或者(ii)一次剂量的r3picv-e7e6，然后一次剂量的r3lcmv-e7e6(异源初免-加强)之后的肿瘤生长抑制水平。图6显示了这些实验的结果：在实验第0天，用来源于用hpv16e6和e7以及c-ha-ras致癌基因共转化的小鼠原代上皮细胞的1×105个tc-1肿瘤细胞对雌性c57bl/6小鼠(对于实验组和缓冲液组，分别为每组n＝5或者n＝3只动物)皮下攻击。10天后(实验第10天)，用缓冲液(组1)或者105rcvffu的r3lcmv-e7e6(组2)或者105rcvffu的r3picv-e7e6(组3)使小鼠静脉内免疫。初免后14天(实验第24天)，组2和3中的小鼠接受105rcvffu的r3lcmv-e7e6的加强施用。随后，随时间监测肿瘤生长。显示了算术平均数+/-sem。箭头表示疫苗接种的时间点。各自结果表明与对照组相比，在用表达hpve7和e6抗原的有复制能力的沙粒病毒载体处理的所有组中，肿瘤生长显著迟延。在以异源初免-加强方式用与r3lcmv-e7e6组合的r3picv-e7e6处理的测试组中观察到了较高水平的肿瘤生长控制。8.6实施例6：b16f10小鼠黑素瘤模型中rlcmv治疗、化疗和免疫检查点抑制剂治疗之间的影响在b16f10小鼠黑素瘤模型中评价了rlcmv治疗、低-剂量化疗(环磷酰胺治疗)和免疫检查点抑制剂(抗pd-1)治疗之间的潜在协同作用。图7显示了实验结果。在第0天将1×105个b16f10肿瘤细胞皮下植入c57bl/6小鼠。随后，将小鼠保持未处理(组1)，在第6天用2mg环磷酰胺(ctx)并且在第10、13、16、19和22天用分别为200μg的抗pd-1和抗ctla-4腹膜内治疗(组2)，在第6天用2mg环磷酰胺腹膜内治疗并且在第7天用1.2×105ffu(总计)的r3lcmv载体混合物(r3lcmv-gp100、r3lcmv-trp1和r3lcmv-trp2)静脉内注射(组3)，或者在第6天用环磷酰胺治疗，在第7天用r3lcmv-载体混合物治疗并且在第10、13、16、19和22天用抗pd-1和抗ctla-4治疗(组4)。各个结果表明通过将检查点抑制剂治疗与化疗和r3lcmv的组合相结合不可以对肿瘤生长抑制实现额外的作用。序列表<110>霍欧奇帕生物科技有限公司<120>作为癌症疫苗的复制-缺陷型沙粒病毒颗粒和三-节段沙粒病毒颗粒<130>105020pc<140>tba<141>onevendateherewith<150>us62/417,865<151>2016-11-04<150>us62/417,891<151>2016-11-04<160>22<170>patentinversion3.5<210>1<211>7229<212>dna<213>人工序列<220><223>淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒克隆13节段l(genbank:dq361066.1)<400>1gcgcaccggggatcctaggcgtttagttgcgctgtttggttgcacaactttcttcgtgag60gctgtcagaagtggacctggctgatagcgatgggtcaaggcaagtccagagaggagaaag120gcaccaatagtacaaacagggccgaaatcctaccagataccacctatcttggccctttaa180gctgcaaatcttgctggcagaaatttgacagcttggtaagatgccatgaccactaccttt240gcaggcactgtttaaaccttctgctgtcagtatccgacaggtgtcctctttgtaaatatc300cattaccaaccagattgaagatatcaacagccccaagctctccacctccctacgaagagt360aacaccgtccggccccggccccgacaaacagcccagcacaagggaaccgcacgtcaccca420acgcacacagacacagcacccaacacagaacacgcacacacacacacacacacacccaca480cgcacgcgcccccaccaccggggggcgcccccccccggggggcggccccccgggagcccg540ggcggagccccacggagatgcccatcagtcgatgtcctcggccaccgacccgcccagcca600atcgtcgcaggacctccccttgagtctaaacctgccccccactgtttcatacatcaaagt660gctcctagatttgctaaaacaaagtctgcaatccttaaaggcgaaccagtctggcaaaag720cgacagtggaatcagcagaatagatctgtctatacatagttcctggaggattacacttat780ctctgaacccaacaaatgttcaccagttctgaatcgatgcaggaagaggttcccaaggac840atcactaatcttttcatagccctcaagtcctgctagaaagactttcatgtccttggtctc900cagcttcacaatgatattttggacaaggtttcttccttcaaaaagggcacccatctttac960agtcagtggcacaggctcccactcaggtccaactctctcaaagtcaatagatctaatccc1020atccagtattcttttggagcccaacaactcaagctcaagagaatcaccaagtatcaaggg1080atcttccatgtaatcctcaaactcttcagatctgatatcaaagacaccatcgttcacctt1140gaagacagagtctgtcctcagtaagtggaggcattcatccaacattcttctatctatctc1200acccttaaagaggtgagagcatgataaaagttcagccacacctggattctgtaattggca1260cctaaccaagaatatcaatgaaaatttccttaaacagtcagtattattctgattgtgcgt1320aaagtccactgaaattgaaaactccaataccccttttgtgtagttgagcatgtagtccca1380cagatcctttaaggatttaaatgcctttgggtttgtcaggccctgcctaatcaacatggc1440agcattacacacaacatctcccattcggtaagagaaccacccaaaaccaaactgcaaatc1500attcctaaacataggcctctccacatttttgttcaccacctttgagacaaatgattgaaa1560ggggcccagtgcctcagcaccatcttcagatggcatcatttctttatgagggaaccatga1620aaaattgcctaatgtcctggttgttgcaacaaattctcgaacaaatgattcaaaatacac1680ctgttttaagaagttcttgcagacatccctcgtgctaacaacaaattcatcaaccagact1740ggagtcagatcgctgatgagaattggcaaggtcagaaaacagaacagtgtaatgttcatc1800ccttttccacttaacaacatgagaaatgagtgacaaggattctgagttaatatcaattaa1860aacacagaggtcaaggaatttaattctgggactccacctcatgttttttgagctcatgtc1920agacataaatggaagaagctgatcctcaaagatcttgggatatagccgcctcacagattg1980aatcacttggttcaaattcactttgtcctccagtagccttgagctctcaggctttcttgc2040tacataatcacatgggtttaagtgcttaagagttaggttctcactgttattcttcccttt2100ggtcggttctgctaggacccaaacacccaactcaaaagagttgctcaatgaaatacaaat2160gtagtcccaaagaagaggccttaaaaggcatatatgatcacggtgggcttctggatgaga2220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