白藜芦醇用于制备治疗或缓解慢性气道炎症性疾病用药物的用途的制作方法

本发明涉及白藜芦醇的一种新用途，具体来说，涉及白藜芦醇用于制备治疗或缓解慢性气道炎症性疾病(如哮喘、慢性阻塞性肺疾患)用药物的用途。

背景技术：

支气管哮喘(简称哮喘)是一种常见病，全球约有3亿哮喘患者，我国也有约2000万人患有哮喘，并且发病率仍在逐年上升，由于哮喘病情反复发作，加之医疗费用昂贵，造成其家庭和社会沉重负担，成为严重影响人类健康和生活质量的疾病之一。西医的抗炎、解痉，吸入糖皮质激素等药物对发作期哮喘作用明显，但长期使用存在严重的耐药性及药物副作用等。文献资料表明哮喘的发病机制可能是氧化还原稳态的异常即抗氧化能力的下降，ros等氧自由基生成增多而导致的对组织细胞的不可逆损伤，即通常所说的氧应激反应。但临床上尙没有针对于抗氧化机制治疗哮喘的药物，探寻哮喘的发病病机，寻求更加安全有效的治疗方式仍是现在有待解决的问题。因此，从抗氧化治疗哮喘中进行挖掘和深入研究，不但可以进一步明确哮喘发病机制，探讨和发现有效防治方法，而且对降低哮喘治疗的临床副作用，提高人民的生活质量都具有十分重要的意义。

氧化应激是哮喘形成的重要病理机制之一。机体受到的氧化应激刺激有内源性和外源性两种途径，通过产生的氧自由基对细胞和分子造成多种形式的损伤。哮喘患者体内氧化水平升高，抗氧化水平降低。氧化应激能够产生脂质过氧化，造成上皮细胞损伤，参与气道高反应性，促使气道重塑，激活核转录因子，继而活化炎性细胞及细胞因子，进一步参与气道炎症反应。白藜芦醇具有抗氧化、抗衰老、抗癌、调节糖脂代谢等重要生物学功效。近年来，白藜芦醇在哮喘治疗中的作用也越来越受到学者们的关注。

由于白藜芦醇良好的抗氧化作用，白藜芦醇的体内外研究报道涉及领域广泛。基于白藜芦醇的营养保健品也在市面上销售，但仍缺乏可行的临床科学验证。事实上，现有的随机临床试验认为白藜芦醇对人类的疾病的治疗效果非常有限，大多存在用药浓度过高，用药时间过短等问题。很多体外非生理代谢研究结果都很难在临床试验得到验证。我们猜测这可能与白藜芦醇生物利用度低，稳定性差相关，用药浓度过大与长期使用的矛盾等因素相关。

技术实现要素：

本发明的目的是解决白藜芦醇无法有效用于治疗哮喘等慢性气道炎症性疾病的问题，提供了一种包含白藜芦醇的吸入剂，采用吸入方式局部给药治疗或缓解疾病，取得了满意的疗效。

为达到上述目的，本发明提供了白藜芦醇用于制备治疗或缓解慢性气道炎症性疾病(如哮喘、慢性阻塞性肺疾患)用药物的用途。

较佳地，所述药物的制剂为雾化剂。

较佳地，所述药物的制剂还包含医学上可接受的药用辅料。

较佳地，所述药物的制剂为粉剂或雾化液滴。

较佳地，白藜芦醇以吸入的方式给药。

较佳地，白藜芦醇的吸入方式选择：定量吸入，干粉吸入或雾化吸入等的任意一种。

较佳地，雾化剂的用量为：0.03mg/kg/d-30mg/kg/d。

较佳地，雾化剂的用量为：0.3mg/kg/d。

本发明还提供了一种以白藜芦醇为有效成分与药学上可接受的载体组成的组合物在制备防治慢性气道炎症性疾病(哮喘、慢性阻塞性肺疾患)药物中的应用。

较佳地，所述的组合物以吸入方式给药。

白藜芦醇(3-4'-5-trihydroxystilbene)是一种非黄酮类多酚化合物，分子式为c14h12o3，分子量为228.25。白藜芦醇的纯品外观为无色针状结晶，无味，难溶于水,易溶于乙醚、三氯甲烷、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等有机溶剂，熔点256～258℃，升华温度261℃。其化学式如下：

研究发现，白藜芦醇可以抑制脂多糖(lps)诱导的大鼠体内的炎症因子表达。而且，不论是在单核细胞u937还是气道上皮细胞a549，白藜芦醇均可以抑制nf-κb(nuclearfactorkappa-light-chain-enhancerofactivatedbcells，核转录因子k印pab)和ap-1(activatorprotein1,激活子蛋白-1)的激活。此外，白藜芦醇为sirt1(silentinformationregulator1，沉默信息调节因子2相关酶1)激活剂，能与sirt1结合并改变其构象，增强sirt1活性从而抑制依赖nf-κb的炎症介质释放。p38mapk(mitogenactivatedproteinkinase，分裂原激活的蛋白激酶)可被氧化应激和炎症介质如il-8、tnf-α激活继而磷酸化nf-κb，促进炎症因子基因表达。白藜芦醇能够有效降低il-8水平，并浓度依赖性抑制人气道平滑肌细胞p38mapk活性，发挥抗炎作用。虽然其抗炎的具体机制尚不明确，但是考虑到多酚类物质具有的抗氧化作用，因此很有可能通过与氧化还原敏感信号通路的相互作用来抑制炎症调控相关基因的表达。

本发明的主要技术效果如下：第一，首次证实白藜芦醇经吸入给药的方式具有明显的疗效。第二，吸入白藜芦醇可以减少药物用量，本发明的给药方式，用药的最小剂量(0.3mg/kg/d)是常规注射用量的百分之一，中剂量为常规注射剂量的十分之一，且都取得了良好的哮喘治疗效果。第三，吸入白藜芦醇相对于口服与注射用药可以提高局部药物浓度，直接作用于小鼠肺部，仅仅增加了哮喘小鼠的肺部药物浓度。相关研究表明，白藜芦醇口服后存在药物的首过效应，药物浓度仅有20％，口服后白藜芦醇迅速代谢为葡糖苷酸与硫酸盐缀合物，靶向到肺和支气管的药物浓度将更低。因此，高剂量的白藜芦醇静脉注射也很难达到吸入的肺部浓度。第四，吸入相对副作用小，药物直接作用于肺部，减少对其他脏器的损害，而白藜芦醇全身给药可能存在胃痉挛、腹泻和食欲下降等胃肠道反应以及关节疼痛，手臂、腿、手和脚的刺痛或麻木等关节不适感。

附图说明

图1为采用本发明的药剂组合物治疗哮喘小鼠后小鼠的体重变化(n＝40，即40只小鼠)。低剂量组采用白藜芦醇0.3mg/kg剂量雾化；中剂量组采用白藜芦醇3mg/kg剂量雾化；高剂量组采用白藜芦醇30mg/kg剂量雾化。

图2为采用本发明的药剂组合物治疗哮喘小鼠后小鼠的血清ige变化(n＝40，即40只小鼠)。低剂量组采用白藜芦醇0.3mg/kg剂量雾化；中剂量组采用白藜芦醇3mg/kg剂量雾化；高剂量组采用白藜芦醇30mg/kg剂量雾化。

图3为采用本发明治疗哮喘小鼠后的血清总抗氧化能力(t-aoc)变化(n＝40，即40只小鼠)。低剂量组采用白藜芦醇0.3mg/kg/d剂量雾化；中剂量组采用白藜芦醇3mg/kg/d剂量雾化；高剂量组采用白藜芦醇30mg/kg/d剂量雾化。

具体实施方式

以下结合实例与附图对本发明的技术方案作进一步地说明。

包含白藜芦醇的雾化剂的制备方法：

从selleck公司购入白藜芦醇单体，制剂说明书显示：白藜芦醇(3-4'-5-trihydroxystilbene)是一种非黄酮类多酚化合物，分子式为c14h12o3，分子量为228.24，-20℃保存三年，外观为无色针状结晶，无味，难溶于水与乙醇，易溶于二甲基亚砜(dmso)，熔点256～258℃，升华温度261℃。

采用白藜芦醇粉剂加入dmso配制成40μg/μl白藜芦醇原液，-20℃保存。高剂量组(30mg/kg/d)雾化液配制方式为：4.8ml生理盐水+0.12ml白藜芦醇原液；中剂量组(3mg/kg/d)雾化液配制方式为：4.8ml生理盐水+0.012ml白藜芦醇原液+0.108mldmso；低剂量组(0.3mg/kg/d)雾化液配制方式为：4.8ml生理盐水+0.0012ml白藜芦醇原液+0.1188mldmso；对照组雾化液配制方式为：4.8ml生理盐水+0.12mldmso。雾化发生器进行雾化。雾化前配制好雾化液，立即使用，以避免降解。

1.造模方法：

40只健康雌性清洁级balb/c小鼠，4～6周龄，平均体重为(20±2)g，均购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。采用随机数字表分为正常组、哮喘组、高剂量组，中剂量组,低剂量组。每组8只。除对照组用0.9％nacl溶液外，均进行ova造模。小鼠分别于第1天和第14天腹腔内注射200μl致敏液致敏；模型组、高剂量组、中剂量组、低剂量组分别于第14、25、26、27天用50μl激发液滴鼻激发，对照组使用等量0.9％nacl溶液滴鼻。第28～35天，高剂量组小鼠予白藜芦醇30mg/kg/d雾化吸入，中剂量组小鼠予白藜芦醇3mg/kg/d雾化吸入，低剂量组小鼠予白藜芦醇0.3mg/kg/d雾化吸入。哮喘组、正常组小鼠予等量0.9％nacl溶液雾化。雾化时间为每组30min。第33～35天哮喘组、高剂量组、中剂量组、低剂量组小鼠均使用50μl激发液滴鼻激发，正常组采用等量0.9％nacl溶液滴鼻。第33～35天小鼠于滴鼻后雾化。所有小鼠均与最后一次雾化24h后进行动物组织取材。

2.实验结果

1)体重变化

如图1所示，体重为造模结束后各组小鼠的体重变化。可见，哮喘组小鼠体重明显减轻，而雾化组小鼠体重较哮喘组增高(中剂量组效果最好)，体重是一个辅助的指标，是从侧面反映白藜芦醇可能是通过治疗哮喘，缓解哮喘小鼠的不适感，改善哮喘小鼠的生活质量(*p<0.05，**p<0.01)。

2)血清ige变化

试验后，小鼠的血清ige变化如图2所示。血清ige是引起i型变态反应的主要抗体，ige升高提示哮喘造模成功。该血清是小鼠实验结束后眼球取血，离心后取血清进行elisa检测(enzymelinkedimmunosorbentassay,酶联免疫吸附测定)而得，哮喘小鼠血清ige较对照组明显升高，说明哮喘小鼠造模成功，而雾化组则可以明显降低哮喘小鼠血清ige水平(*p<0.05，**p<0.01)。

3)t-aoc变化

治疗哮喘小鼠后，取得小鼠的血清总抗氧化能力(t-aoc)变化如图3所示。t-aoc是实验结束后取小鼠血清测得的小鼠总抗氧化能力，哮喘组总抗氧化能力明显减弱，而白藜芦醇雾化吸入后抗氧化能力较哮喘组明显增强(*p<0.05，**p<0.01)。

吸入方式包含：定量吸入，干粉吸入或雾化吸入。其中定量吸入方式是利用操作过程中液化气体在突然减压瞬间急剧氧化而将白藜芦醇切割成微粒并分散在空气中，由患者吸入呼吸道和肺内的一种方法。干粉吸入是指将白藜芦醇粉末或白藜芦纳米颗粒装填于一药物储库中，患者通过吸入器吸气，将粉末分散成雾状后吸入气管或肺部发挥疗效；雾化吸入是指将白藜芦醇溶液雾化成微小颗粒，吸入鼻咽喉部和呼吸道及肺部，使药物沉积在病灶以治疗疾病的方法，可以包括超声雾化吸入，压缩雾化吸入，蒸汽雾化吸入等，更适用于不能配合及哮喘重度加重患者。

本发明的高剂量组相当于常规静脉注射的剂量。本发明以高剂量组与低剂量组相比较，结果均显示低剂量组的疗效优于高剂量组或无明显差异，证明了白藜芦醇雾化吸入治疗哮喘的可行性，疗效显著，也证明了吸入治疗哮喘的作用原理之一是抗氧化应激作用。

综上所述，本发明采用雾化吸入白藜芦醇方式治疗哮喘，具有明显的疗效，且可大幅减少白藜芦醇用量；而且，采用本发明的吸入白藜芦醇的方式，相对于口服与注射用药可以提高局部药物浓度，即，仅增加了哮喘小鼠的肺部药物浓度，直接作用于小鼠肺部，目标明确，副作用小，药物直接作用于肺部，减少对其他脏器的损害，药物损失少。

尽管本发明的内容已经通过上述优选实施例作了详细介绍，但应当认识到上述的描述不应被认为是对本发明的限制。在本领域技术人员阅读了上述内容后，对于本发明的多种修改和替代都将是显而易见的。因此，本发明的保护范围应由所附的权利要求来限定。