辽东楤木根总皂苷抗淋巴瘤的医药用途的制作方法

本发明涉及天然药物领域，具体涉及辽东楤木根总皂苷的医药用途，即用于治疗恶性淋巴瘤。

背景技术：

恶性淋巴瘤,也称为淋巴瘤,是一种原发于淋巴结和(或)结外淋巴组织的淋巴细胞恶性肿瘤，是我国最常见的十大恶性肿瘤之一。根据《中国肿瘤登记年报》公布的数据，2003年-2013年，恶性淋巴瘤的发病率约为5/10万。淋巴瘤主要分为霍奇金淋巴瘤(HL)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)两大类。尤其NHL病理类型复杂，绝大多数患者治疗效果差，预后不良。如弥漫大B细胞淋巴瘤及伯基特淋巴瘤均为高侵袭性NHL，治疗效果极差。目前淋巴瘤治疗的主要手段有化疗、放疗、生物靶向治疗及骨髓移植等，每一种治疗手段对机体的伤害都是显而易见的，且费用支出很大，给患者家庭及国家带来了很大地经济负担。因此，寻找高效、低毒、价廉的治疗手段显得尤为迫切。

基于上述目的，申请人通过检索大量研究资料，发现辽东楤木根中含有多种化学活性成分，具有广泛的药理作用。辽东楤木(Aralia elata Seem)又称龙牙楤木、刺龙牙等，为五加科楤木属多年生落叶灌木，主要分布在中国的东北地区、俄罗斯、韩国及日本，为药食同源类植物。其幼芽及嫩叶含有丰富的氨基酸及微量元素，可以食用；其根是主要药用部位，具有温中和胃、舒肝解郁、祛风除湿、活血止痛功效。辽东楤木根总皂苷是将其根部活性成分进行提取纯化而得到的皂苷类物质，具有体内及体外双重抗肿瘤作用。复习文献资料发现，有关楤木抗肿瘤作用的研究主要集中在针对各种癌症方面，而楤木对于淋巴瘤抑制作用的研究目前尚未见报道。

技术实现要素：

本发明公开了辽东楤木根总皂苷的医药用途，即对于人恶性淋巴瘤的治疗用途，可用来制备抗淋巴瘤的药物。

本发明中选用的淋巴瘤细胞为人伯基特淋巴瘤细胞。

本发明药物用途的积极效果为：根据实验数据表明，楤木根总皂苷对于Daudi细胞表现出显著增殖抑增制作用，与对照组比较有统计学差异。而在预实验中，我们以Namalwa细胞(人伯基特淋巴瘤细胞)作为研究对象，亦显示楤木根总皂苷具有较好地增殖抑制作用。辽东楤木根可以按传统方法煎服，亦可以提取活性物质(总皂苷)服用。并通过实验研究可以对总皂苷进一步细化分析并提纯，以制成中成药针剂使用。

附图说明

图1：楤木根总皂苷处理6h后对Daudi细胞增殖的影响。

图2：楤木根总皂苷处理24h后对Daudi细胞增殖的影响。

图3：楤木根总皂苷处理48h后对Daudi细胞增殖的影响。

图4：50mg/L楤木根总皂苷在不同时间段对Daudi细胞增殖的影响。

图5：100mg/L楤木根总皂苷在不同时间段对Daudi细胞增殖的影响。

下面结合药效学实验对辽东楤木根总皂苷抗淋巴瘤Daudi细胞的作用做详细阐述。

具体实施方式

本实施例提供了一种辽东楤木根总皂苷的医药用途，即对于人恶性淋巴瘤的治疗用途，所需药效学实验所用样品如下：

待测样品：Daudi细胞，属于人B淋巴细胞系高侵袭性非霍奇金淋巴瘤(NHL)。由中国科学院细胞库/干细胞库提供。

药品及试剂：楤木根总皂苷为淡黄色粉末，纯度75％，由南京中医药大学药学院提供；胎牛血清，购自美国Gibco公司；DMSO(二甲基亚砜)；四甲基偶氮唑盐(MTT)，购自国药集团化学试剂有限公司。

一、进行细胞培养：将用于实验的Daudi细胞株培养在含10％胎牛血清的培养基中，置于温度为37℃，含有5％CO2的细胞培养箱中培养，每1～2天传代1次。取对数生长期生长状态良好的细胞用于试验。

二、运用MTT法检测辽东楤木根总皂苷对Daudi细胞增殖的抑制作用：取对数生长期的Daudi细胞，调整细胞密度为1.5×10⁴个/ml，种于U型96孔板。

分为空白组、溶剂对照组及药物处理组。其中，空白组中加入同等体积培养基，溶剂对照组中加入同等体积DMSO，药物处理组中加入楤木根总皂苷，其中楤木根总皂苷的终浓度分别为3.125、6.25、12.5、25、50、100、200mg/L，依次标注为1～7组，每组6个复孔，在温度为37℃，含有5％CO2饱和相对湿度的培养箱中培养6h、24、48h后，每孔加入5mg/ml的MTT10μl，并继续培养4h，3000rpm离心10min后，使用1ml注射器小心吸取上层培养基。每孔加入150μl DMSO，在酶标仪λ＝570nm下检测每孔的吸光度值(OD值)，计算细胞增殖抑制率。实验重复三遍。

三、统计分析：采用SPSS13.0软件、GraphPad软件对数据进行处理分析、作图，结果均以表示，多组均数比较采用单因素方差分析。结果如表1、图1-5所示。

表1：辽东楤木根总皂苷对Daudi细胞的增殖抑制作用

与对应时间段DMSO组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

结果显示，与对照组比较，当楤木根总皂苷浓度在25mg/L时，培养6h即对Daudi细胞增殖表现出显著抑制作用，与DMSO组比较，＊p＜0.05，＊＊p＜0.01，＊＊＊p＜0.001，如图1所示；培养24h抑制作用不明显，与对照组比较，＊p＜0.05，＊＊＊p＜0.001，如图2所示；培养48h再次显示显著抑制作用，与DMSO组比较，＊p＜0.05，＊＊＊p＜0.001，如图3所示。因此，浓度25mg/L对Daudi细胞增殖抑制作用并不稳定。当浓度在50mg/L～100mg/L时，3个时间段均表现出显著增殖抑增制作用，与对照组比较有统计学差异。当浓度增加至200mg/L时，增殖抑制作用并没有相应增加。

总之50mg/L～100mg/L是最好的药物浓度。50mg/L浓度组3个时间段抑制率比较后显示，培养24h和培养6h之间抑制率无明显差异(P＞0.05),培养48h和培养6h比较抑制率有显著差异(P＜0.01)，48h和24h之间无明显差异,见图4。100mg/L浓度组3个时间段抑制率比较后显示，培养24h和6h之间抑制率有极显著差异差异(P＜0.001)，48h和6h之间有极显著差异差异(P＜0.001)，但48h和24h之间无明显差异，见图5。从图4、5曲线趋势可见，随着楤木根总皂苷作用时间的延长，其抑制作用亦逐渐增强，表现出时间依赖性。当浓度为50mg/L时，培养48h能显示明显抑制作用；当浓度提高至100mg/L时，培养24h即能显示明显抑制作用，延长培养时间(48h)并不能显著增加抑制率。所以100mg/L浓度作用24h显示的抑制作用最佳。因此，不难看出，楤木根总皂苷对于Daudi细胞表现出显著增殖抑增制作用，与对照组比较有统计学差异。

而在预实验中，我们以Namalwa细胞(人伯基特淋巴瘤细胞)作为研究对象，亦显示楤木根总皂苷具有较好地增殖抑制作用。辽东楤木根可以按传统方法煎服，亦可以提取活性物质(总皂苷)服用。并通过实验研究可以对总皂苷进一步细化分析并提纯，以制成中成药针剂使用。