本发明涉及水产养殖病害防控技术领域，涉及一种淡水养殖鱼类水霉病药物配方及应用方法，具体涉及一种含磺基水杨酸为主要成分的杀菌剂，适合于所有淡水养殖鱼类及鱼卵水霉病的防治。。
背景技术：
水霉病是一种真菌——水霉菌寄生所感染的疾病，水霉菌对寄主无严格选择性，各种水产动物，从卵到各龄成体都可感染，在换水或搬运时鱼类体表受伤，水霉菌便乘机入侵，极易发生水霉病的传染并迅速蔓延，造成大量鱼死亡，危害特别严重，已成为水产养殖的主要疾病之一，给我国渔业生产造成了重大损失。长期以来，生产中一直以廉价的“孔雀石绿”作为有效地防治水霉病的药物。
孔雀石绿是一种合成的三苯甲烷类工业染料，自从证实孔雀石绿具有抗菌、杀虫等药效以来，许多国家将其广泛用作杀虫和杀菌剂。但自上世纪九十年代以来发现其具有致畸、致癌、致突变、高残留和高毒性等问题，我国于2002年5月将孔雀石绿列入《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》中，但是由于其抗菌效果好、价格低廉、对其副作用宣传力度不够等原因，在水产养殖中仍有违规使用的情况。没有在疗效和经济上与之相媲美的无公害药物一直不能问世，导致水产养殖中水霉病防治药物长期处于空白，使得我国淡水养殖生产上对该病的防治遇到了极大困难，而孔雀石绿的屡禁不止也给国人食品安全带来了极大的隐患。
因此，开发出安全、高效、经济的替代“孔雀石绿”的药物迫在眉睫，我们在国家大宗淡水鱼岗位体系支持下，经过试验研究，发现了由磺基水杨酸、咪康唑、溴硝醇组成的复方药物对水霉菌具有很好的抑制和杀灭效果。
技术实现要素：
本发明的目的是寻找一种利用现有技术的单品种药剂与辅料相互复配成为一种新型复方干粉剂，解决现有药物存在的上述问题，提供一种配方简单，成本低，使用方便，安全高效的药物，对水产动物在养殖中所出现的对水霉病起到预防和治疗的作用。生产符合食品药品安全要求的含磺基水杨酸为主要成分的复方干粉剂，成为“后孔雀石绿时代”防治水霉病的安全高效经济型药物。
本发明的另一目的是提供了防治水霉病复方干粉剂的制备方法。
本发明提供一种含有磺基水杨酸为主要成分的复方干粉剂，按重量百分比由以下组分组成：磺基水杨酸15-30％，溴硝醇5-15％，硝酸咪康唑8-20％，硅藻土55-70％。
本发明提供一种制备防治水产动物水霉病的复方干粉剂的方法，包括如下步骤：将15-30％磺基水杨酸和5-15％溴硝醇进行预混，得到两组分混合物；再将8-20％硝酸咪康唑加入上述预混物，充分混合，过100目筛网；最后将硅藻土加入上述混合物中，过200目筛网，制成防治水产动物水霉病的复方干粉剂。
具体实施方式
将磺基水杨酸和溴硝醇进行预混，得到两组分混合物；再将硝酸咪康唑加入上述预混物，充分混合，过100目筛网；最后将硅藻土加入上述混合物中，过目筛网。
试验过程中，研究人员发现其中各组分重量百分含量为磺基水杨酸15-30％，溴硝醇5-15％，硝酸咪康唑8-20％，硅藻土55-70％时干粉剂具有最佳效果，并以磺基水杨酸20％，溴硝醇10％，硝酸咪康唑10％，硅藻土60％为例给出具体试验数据。
1草鱼水霉病预防实验
材料与方法
1.1试验药物
复方干粉剂，按重量百分比由以下组分组成：磺基水杨酸20％，溴硝醇10％，硝酸咪康唑10％，硅藻土60％。
1.2试验用鱼
试验用草鱼购自上海金山良种场，草鱼规格为：体重40-55g/尾、体长18-26cm/尾。体表和解剖观察健康，暂养一周。
1.3菌株来源
水霉菌株为本实验室分离于江苏省吴江水产养殖良种场发病的草鱼头部(编号gh1)，保存于上海海洋大学国家水生动物病原库。
1.4饲养管理
用200l容积暂养缸饲养，增氧器24小时增氧；水源为经曝气、消毒和去氯处理后的自来水，ph为6.5～6.8，平均水温25℃，溶氧为9～12mg/l，其他指标符合渔业水质标准。饲养配制参照nrc营养标准。
1.5草鱼水霉病人工感染
挑取保藏于试管内的水霉菌丝接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基(购自国药集团)培养皿上，25℃培养72小时，使其铺满整个培养皿。取适量培养好的水霉用用研钵研碎倒入用于感染的玻璃缸(20l)水中。将若干事先用水煮开的玉米粒放入该玻璃缸水体内观察72小时，观察到的90％玉米粒有水霉生长，及判定玻璃缸水体中有水霉存在，待用于感染试验，有手术刀片将草鱼背鳍下方两侧鳞片去掉，在肌肉出刮开一厘米左右的小口，将刮伤后的草鱼放入有水霉存在的用于感染的玻璃缸水中，每个感染缸放入10尾草鱼。养殖水温由25℃降至18℃左右，进行水霉病人工感染。
1.6草鱼水霉病预防实验
1.6.1泼洒方式用药预防水霉病
上述草鱼进行人工感染前，对草鱼进行泼洒方式用药预防水霉病实验。根据体外实验设置3个复方干粉制剂药物泼洒浓度：0.5、1.0、1.5mg/l。每个药物浓度设三个组，同时设置三个空白平行组及孔雀石绿0.2mg/l浓度组三个平行组。每个组放用于感染的草鱼10尾，观察一周。
1.6.2浸泡方式用药预防水霉病
上述草鱼进行人工感染前，对草鱼进行浸泡方式用药预防水霉病实验。根据体外实验结果设置3个复方干粉制剂药物浸泡浓度：5、10、15mg/l，每次浸泡一小时，每天浸泡两次。每个药物浓度设三个平行组，同时设置三个空白平行组及孔雀石绿2mg/l浓度浸泡0.5小时组三个平行组。每组放置用于感染的草鱼10尾，观察一周。
1.7数据分析
根据农业部《渔药临床实验技术规范》进行药效(保护率)评价。保护率公式如下：
保护率＝(阳性对照组发病死亡数-药物试验组发病死亡数)/阳性对照组发病死亡数×100％。
结果：
预防实验结果表明复方干粉制剂的两种用药方式无论是泼洒还是浸泡对水霉病均有较好预防作用。泼洒方式用药浓度在仅有1.0mg/l对草鱼水霉病平均保护率为98％。浸泡方式用药在10mg/l浓度时对草鱼的平均保护率也可达到96％。见表1、表2
表1复方干粉制剂泼洒方式用药对草鱼水霉病的预防效果
表2复方干粉制剂浸泡方式用药对草鱼水霉病的预防效果
2草鱼水霉病治疗试验
2.1投药方式：(1)直接泼洒到水体中，浓度为15ppm；(2)药物浸泡治疗，浓度为25-40ppm。。
在上海市金山区选取池塘分别为：对照组20亩、治疗组23亩。在同一个养殖场分别设置对照组、治疗组。治疗组选在5月水霉病爆发的池塘。治疗组在试验前已经进行采样，送至上海海洋大学国家水生动物病原库进行分子生物学和形态学检测确定为真菌性水霉病，治疗组发病面积在60％以上。
实验结果表明，直接泼洒对照池塘在疾病高发季节，平均发病率为40-70％，死亡率在50％以上；治疗组池塘经过两次药物泼洒后，症状基本消失，体表水霉菌消退恢复为正常体色，治愈率达到90％以上，死亡率为0，有效率100％。治疗组池塘水体利用水霉菌lamp快速检测方法检测水中水霉孢子数，水霉孢子定量为小于10个/ml，明显低于水霉病爆发所需孢子。
治疗组经每天药物浸泡两次，每次半小时，连续3天后，症状消失，治愈率达到95％以上，死亡率为0，有效率100％。
对比例
为了更好的评价该复方制剂的疗效，试验选择了孔雀石绿作为对照的药物。在预防方面，由于无法准确判断鱼塘水霉病的爆发，我们选择了实验室条件感染水霉病并进行预防实验：泼洒方式复方制剂0.5mg/l浓度时对草鱼保护率为73％，孔雀石绿0.2mg/l浓度时保护率为76％。浸泡方式复方制剂和孔雀石绿在浓度分别为15mg/l和5mg/l时保护率均可达到100％；在治疗方面我们选择了水霉爆发鱼塘进行实际治疗实验，复方制剂的治愈率在直接泼洒和浸泡两种给药方式下均可达到90％以上，与孔雀石绿治疗水霉病效果相当。
综上可见，在预防和治疗的两种用药方式上复方制剂的保护率和治愈率均接近或达到孔雀石绿的水平，同时克服了孔雀石绿具有致畸、致癌、致突变、高残留和高毒性等的缺点。本发明提供的药物以磺基水杨酸为主要成分，添加抗真菌药物硝酸咪康唑和溴硝醇相互复配成为干粉剂，解决了硝酸咪康唑不易溶解的问题，其成分稳定性高，杀菌力强，安全，有效，稳定；且生产工艺流程简单，推广成本和使用成本低。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明保护的范围之内。