本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种土茯苓提取物及其制备方法和用途。
背景技术：
高尿酸血症不仅是痛风的直接诱因，还与代谢综合征、ii型糖尿病、高血压、心血管疾病、慢性肾病等密切相关，是严重威胁人类健康的世界性公共卫生问题。尿酸是人体内嘌呤代谢的终产物，由于人体缺乏尿酸酶，不能降解尿酸为尿囊素，最终尿酸以尿酸盐形式由肾脏排出体外。研究表明，尿酸在肾脏中的排泄是在尿酸盐转运体的协助下进行的，尿酸盐转运体有尿酸重吸收转运体和尿酸排出转运体，当由于遗传、环境、饮食、内分泌等因素引起尿酸重吸收转运体功能增高或者尿酸排出转运体功能下降时，通过肾脏排出的尿酸减少，血尿酸水平就会上升，从而导致高尿酸血症。
目前降尿酸药物的作用主要是通过两种方式实现：一种是抑制尿酸合成，另一种是促进尿酸排泄。别嘌醇是目前应用最广的降尿酸药物。别嘌醇为竞争性黄嘌呤氧化酶抑制剂，通过抑制尿酸合成产生降尿酸作用。别嘌醇不良反应主要包括胃肠道症状、皮疹、肝功能损害、骨髓抑制等，应给予监测。大约5％患者不能耐受。
因此，研究和开发治疗高尿酸血症药物可以全面改善和提高人类的健康水平和生活素质，在中药中选择开发一种安全有效并且毒副作用较低的降尿酸的药物，具有极为广阔的市场前景，并能创造良好的社会和经济效益。
土茯苓是百合科植物光叶菝葜smilaxglabraroxb的干燥根茎。《中国药典2015版》记载其具有解毒除湿，通利关节之功效，用于梅毒及汞中毒所致的肢体拘挛，筋骨疼痛；湿热淋浊，带下，痈肿，瘰疬。该植物资源丰富，分布广泛，主产于广东、湖南、四川、安徽、浙江、湖北等地。土茯苓中含有黄酮、皂苷、鞣质、树脂、淀粉及有机酸等化学成分，其中黄酮类成分落新妇苷、花旗松素等具有重要的药理活性。另外，土茯苓是卫生部允许“药食两用”的中草药之一。
目前，关于土茯苓降尿酸活性有效部位及其制备方法和应用目前尚无相关文献报道。发明人通过研究发现，土茯苓提取物可降低模型小鼠血清尿酸水平，可用于防治高尿酸血症为主要功能的药品及保健食品。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种具有降尿酸作用的土茯苓提取物，同时提供了其制备方法及用途。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
本发明的土茯苓提取物中含有落新妇苷、新落新妇苷、异落新妇苷、新异落新妇苷，其总质量百分比在50％以上。
本发明的土茯苓提取物的制备方法的具体步骤如下：将土茯苓粉碎后用70％乙醇回流提取，收集醇提液，回收乙醇，得到流浸膏；用聚酰胺，最大上样量0.1g流浸膏/g聚酰胺，上样后静置2h，先用2bv水洗脱，2bv10％乙醇除杂质，最后50％乙醇洗脱收集4bv，旋干，得到土茯苓提取物。
将土茯苓干燥药材粉碎后用7-10倍重量的70％乙醇煎煮2小时，2次。
所述的聚酰胺柱选自60-100目的聚酰胺。
更具体制备步骤如下：
(1)取土茯苓根茎切片药材35-65℃烘箱干燥，放入容器中，加入体积百分浓度为70％乙醇水溶液(每g土茯苓加7ml)，常压回流提取120分钟，重复提取2次；过滤，合并滤液；
(2)滤液在300±100pa真空度下减压浓缩，使滤液无醇味，得到流浸膏；加入水，混悬，取上清液，将此上清液过60-100目聚酰胺柱，上样量与聚酰胺重量比例为1:10；在20-35℃，常压下，以1bv/h-8bv/h流速，用蒸馏水洗脱树脂，洗脱体积为2bv；在20-35℃，常压下，以1bv/h-8bv/h流速，用体积百分浓度为10％的乙醇水溶液洗脱树脂，洗脱体积为2bv；在20-35℃，常压下，以1bv/h-8bv/h流速，用体积百分浓度为50％的乙醇水溶液洗脱树脂，洗脱体积为4bv；收集50％乙醇洗脱液，浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到土茯苓提取物。
具有降尿酸作用的土茯苓提取物在制备高尿酸血症药物中的用途。
上述土茯苓提取物可以与药剂或者食品上认可的辅料，采用现代制剂技术，制成以土茯苓提取物为主的胶囊剂、片剂、散剂、口服液、软胶囊、丸剂、凝胶剂、缓释制剂等各种剂型。
本发明的有益效果是：本发明以土茯苓为依托，制备提取物，开发其功效，扩大土茯苓新的药用资源。发明人的实验表明：该土茯苓提取物能够显著降低模型小鼠的血清尿酸水平，可用于防治高尿酸血症为主要功能的药品和保健产品。
本发明有效部位的提取工艺简单，不需要高温高压和特殊设备，安全，易于操作且成本低。
本发明的积极效果如下：
本发明的优点是，将电化学应用于富含氮、磷的沼液的工业化处理，与生物处理等传统方法相比，本发明方法对外界环境条件要求小，常温常压下即可反应；反应设备一般较为简单，占地面积小，操作比较容易，管理方便，费用不高，并且适应性强，既可以作独立工艺进行水处理，也可以与其他工艺联合使用，如作为预处理或深度处理，便于在畜禽养殖场沼液中的氮磷深度处理中推广。
具体实施方式
下面的实施例是对本发明的进一步详细描述。
实施例1
本发明的具有降尿酸作用的土茯苓提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)取土茯苓根茎切片药材35-65℃烘箱干燥，放入圆底烧瓶中，加入体积百分浓度为70％乙醇水溶液(每g土茯苓加7ml)，常压回流提取120分钟，重复提取2次；过滤，合并滤液；
(2)滤液在300±100pa真空度下减压浓缩，使滤液无醇味，得到流浸膏。加入适量水，混悬，取上清液，将此上清液过聚酰胺柱(60-100目聚酰胺)，上样量与聚酰胺重量比例为1:10；在20-35℃，常压下，以1bv/h-8bv/h流速，用蒸馏水洗脱树脂，洗脱体积为2bv；在20-35℃，常压下，以1bv/h-8bv/h流速，用体积百分浓度为10％的乙醇水溶液洗脱树脂，洗脱体积为2bv；在20-35℃，常压下，以1bv/h-8bv/h流速，用体积百分浓度为50％的乙醇水溶液洗脱树脂，洗脱体积为4bv；收集50％乙醇洗脱液，浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到土茯苓提取物总黄酮，其中落新妇苷、新落新妇苷、异落新妇苷、新异落新妇苷的总含量在50％以上。
效果试验
土茯苓提取物经长期给药发现对氧嗪酸钾制备的高尿酸血症模型小鼠的血清尿酸水平具有显著地降低作用。
1实验材料与仪器
1.1km小鼠90只，体重20±2g，雄性，spf级，湖南斯莱克景达实验动物有限公司，批号scxk(湘)2016-0002。
1.2药物配制
1.2.1受试药土茯苓提取物总黄酮，用0.5％cmc-na配制成浓度为250mg/kg、125.0mg/kg和62.5mg/kg。
1.2.2阳性药别嘌醇片，规格100mg×200片，上海信谊万象药业有限公司，5mg/kg。
1.3仪器和试剂
多功能酶标仪，tecan，spark10m；分析天平，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司，bsa245；hh-4数显恒温水浴锅，邦西仪器科技(上海)有限公司；紫外分光光度计，日本shimadzu，uv-2550；sigma3-18k高速冷冻离心机；尿酸试剂盒，南京建成生物工程研究所，20170523；黄嘌呤氧化酶试剂盒，南京建成生物工程研究所，20170526；肌酐试剂盒，南京建成生物工程研究所，20170606；尿素氮试剂盒，南京建成生物工程研究所，20170503
2实验方法
将小鼠随机分为6组，空白组、模型组、别嘌呤组、土茯苓总黄酮高、中、低剂量组，每组15只，于每日上午9点灌胃氧嗪酸钾造模，空白组灌胃等体积的cmc-na。1h后，各给药组给予相应剂量的药物，空白组与模型组给予等量的cmc-na。持续给药7天。第5天时，每组取7只小鼠上代谢笼，适应1天后，于第6日开始收集24h的尿液，并于第7日取血前12h禁食。第7日末次给药1h后进行摘眼球取血，血液静置1h后，离心取血清(4000r/min，15min，4℃)，用试剂盒测定血清尿酸值、尿素氮值和肌酐值。取血后立即进行解剖，将肝脏、肾脏取出，生理盐水冲洗后，用滤纸吸干，置于-80℃环境下保存备用。
肝脏黄嘌呤氧化酶的测定取出部分肝脏称重，按1：9的比例加入生理盐水，在冰台上研磨匀浆，将匀浆液以3000r/min的速度离心10min，取上清液装于10ml离心管中，按试剂盒说明书步骤用比色法测定各组分肝脏黄嘌呤氧化酶浓度。
24h尿尿酸、尿肌酐的测定将第7d收集的24h尿液离心，取上清液，测量尿液体积，将尿液做适当稀释，按试剂盒说明书步骤测定尿尿酸、尿肌酐值。
3实验结果
3.1小鼠血清尿酸、尿素氮、肌酐测定结果
结果显示模型组血清尿酸值对比空白组显著上升，p<0.01，说明高尿酸血症模型成功，阳性药、高、中剂量组血清尿酸值相对于模型组均显著下降，p<0.01。低剂量组相对于模型组血清尿酸值也有一定程度的下降，p<0.05。而模型组血清尿素氮相对于空白组有明显的上升，p<0.01。给药组高剂量和中剂量组则表现出了较好的降低血清尿素氮的作用，p<0.01。在血清肌酐方面，阳性组和低剂量组对比空白组均显著下降，p<0.01。综上，土茯苓总黄酮表现出了良好的降低高尿酸血症小鼠的血清尿酸值作用，同时对血清尿素氮以及肌酐值均有一定的抑制作用。以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。
表1小鼠血清尿酸、尿素氮、肌酐值对比(x±s，n＝15)
与空白对照组比：**p＜0.01；各给药组与模型组比：##p＜0.01，#p＜0.05
3.2小鼠肝脏黄嘌呤氧化酶、尿尿酸、尿肌酐的测定结果
黄嘌呤氧化酶是生成尿酸的前体酶，能够催化次黄嘌呤生成黄嘌呤，进而生成尿酸，由表中所示模型组肝脏黄嘌呤氧化酶、尿尿酸、尿肌酐对比空白组活性均明显上升，p<0.01或p<0.05，说明模型成功。阳性组与中剂量药物组对比模型组能够显著降低黄嘌呤氧化酶活性，p<0.05，表明药物组能够对肝脏黄嘌呤氧化酶产生一定的抑制作用。样品高剂量及中剂量组对比模型组，均能显著降低尿尿酸及尿肌酐值，p<0.01。说明药物给药组对高尿酸血症小鼠尿尿酸及尿肌酐值均有较好的抑制作用。
表2小鼠黄嘌呤氧化酶、尿尿酸、尿肌酐值对比(x±s，n＝7)
与空白对照组比：**p＜0.01；各给药组与模型组比：##p＜0.01，#p＜0.05
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。