一种治疗心肌损伤的药物组合物及其制备方法和用途与流程

本发明涉及医药领域，具体的说，本发明涉及一种治疗心肌损伤的药物组合物及其制备方法和用途。

背景技术：

心肌组织在较长时间缺血后恢复血液灌流，多数情况下，缺血后再灌注可使组织器官功能得到恢复，损伤的结构得到修复，患者病情好转康复；然而，有时反而出现比再灌注前更明显、更严重的损伤和功能障碍，包括收缩功能降低，冠脉流量下降及血管反应性改变，使心肌组织造成不可逆的损伤。本发明从损伤发生的机制出发，研制出治疗心肌损伤的药物组合物。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种治疗心肌损伤的药物组合物。

本发明的目的还在于提供一种治疗心肌损伤的药物组合物的制备方法和用途。

为了实现本发明的目的，本发明提供一种治疗心肌损伤的药物组合物，该药物组合物包含具有下式结构的活性成分：

优选地，所述活性成分在药物组合物中的含量为20-50％。

优选地，所述药物组合物还可以包含一种或多种药用辅料、稀释剂或者载体。

优选地，所述药用辅料可以是但不限于：乳化剂、黏合剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂。

优选地，所述药用辅料在药物组合物中的含量为30-70％。

本发明还提供一种治疗心肌损伤的药物组合物的制备方法，该方法包括下列步骤：

步骤a：0℃下，向2,4-二羟基-3-硝基吡啶的二氯甲烷中依次滴加草酰氯和5滴dmf，加完升室温反应4小时，反应完毕，加入二氯甲烷，依次用饱和碳酸氢钠溶液、水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到2-羟基-3-硝基-4-氯吡啶；

步骤b：室温下，向4-氯-1-甲基-3-硝基吡啶-2(1h)-酮的无水dmf中加入碳酸铯和2-溴苯酚，加完加热至100℃反应5小时，反应完毕，余物倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到4-氯-1-甲基-3-硝基吡啶-2(1h)-酮；

步骤c：室温下，向n²-苄基-3-硝基吡啶-2,4-二胺的冰醋酸中分批加入还原铁粉，加完加热至80℃反应2小时，反应完毕，冷却，减压浓缩，余物倒入水，用乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，余物经硅胶柱进行色谱纯化，用乙酸乙酯/石油醚梯度(5-30％)洗脱，得到4-(2-溴苯氧基)-1-甲基-3-硝基吡啶-2(1h)-酮；

步骤d：0℃下，向4-(2-溴苯氧基)-1-甲基-3-硝基吡啶-2(1h)-酮的冰醋酸溶液中加入还原铁粉，加完加热至120℃搅拌反应过夜，反应完毕，减压浓缩，余物加入饱和碳酸氢钠溶液，用乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，余物经硅胶柱进行色谱纯化，用乙酸乙酯/石油醚梯度10-30％洗脱，得到白色固体产物2-甲基-2,10-二氢-1h-苯并[b]吡啶并[3,4-e][1,4]恶嗪-1-酮。

本发明还提供化合物在制备治疗心肌损伤的药物中的用途，所述化合物的结构式为：

优选地，所述化合物制成药物组合物后其含量为20-50％。

本发明药物具有保护心肌细胞结构和功能的作用，此外还可以减轻缺血再灌注损伤，效果显著，可以作为心肌受损患者使用的药物。

附图说明

图1是各组ⅱ导联心电图σst段电压变化比较。

图2是各组心肌ck、ast、ldh-l和α-hbdh活性比较。

具体实施方式

以下进一步通过实施例建立心肌损伤模型来具体说明本发明药物的作用效果。

实验例1本发明药物的制备

路线：

步骤a：2-羟基-3-硝基-4-氯吡啶

0℃下，向2,4-二羟基-3-硝基吡啶(5.00g，0.032mol)的二氯甲烷(80ml)中依次滴加草酰氯(4.07，0.032mol)和5滴dmf，加完升室温反应4小时。反应完毕，加入二氯甲烷(100ml)，依次用饱和碳酸氢钠溶液、水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩得到产物(5.00g,89％)。

¹hnmr(400mhz,d6-dmso)δ6.59(d,1h),7.76(s,2h),12.50(br,1h)。

步骤b：4-氯-1-甲基-3-硝基吡啶-2(1h)-酮

室温下，向4-氯-1-甲基-3-硝基吡啶-2(1h)-酮(5.20g，0.028mol)的无水dmf(50ml)中加入碳酸铯(8.98g，0.028mol)和2-溴苯酚(4.77g，0.028mol)，加完加热至100℃反应5小时。反应完毕，余物倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩得到产物(5.20g,96％)。

¹hnmr(400mhz,d6-dmso)δ3.54(s,3h),6.45(d,1h),7.65(d,1h)。

步骤c：4-(2-溴苯氧基)-1-甲基-3-硝基吡啶-2(1h)-酮

室温下，向n²-苄基-3-硝基吡啶-2,4-二胺(8.00g，0.033mol)的冰醋酸(80ml)中分批加入还原铁粉(5.49g，0.098mol)，加完加热至80℃反应2小时。反应完毕，冷却，减压浓缩，余物倒入水，用乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。余物经硅胶柱进行色谱纯化，用乙酸乙酯/石油醚梯度(5-30％)洗脱，得到产物(7.00g,78％)。

¹hnmr(400mhz,d6-dmso)δ3.49(s,3h),6.50(m,1h),6.70-6.77(m,2h),7.15-7.18(m,1h),7.45-7.48(m,1h),7.95(d,1h)。

步骤d：2-甲基-2,10-二氢-1h-苯并[b]吡啶并[3,4-e][1,4]恶嗪-1-酮

0℃下，向4-(2-溴苯氧基)-1-甲基-3-硝基吡啶-2(1h)-酮(7.00g,0.022mol)的冰醋酸(80ml)溶液中加入还原铁粉(6.01g,0.11mol)，加完加热至120℃搅拌反应过夜。反应完毕，减压浓缩，余物加入饱和碳酸氢钠溶液，用乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。余物经硅胶柱进行色谱纯化，用乙酸乙酯/石油醚梯度(10-30％)洗脱，得到白色固体产物(2.00g,43％)。

¹hnmr(400mhz,d6-dmso)δ3.5(s,3h),6.01(d,1h),6.71-6.73(m,1h),6.81-6.83(m,1h),7.30-7.32(m,1h),7.58-7.63(m,2h),10.3(br,1h)。

实验例2本发明药物治疗心肌损伤的效果

健康家兔30只，随机均分为假手术组、对照组和治疗组，每组10只。开胸后于冠状动脉左室支中1/2处穿线以备结扎，假手术组不结扎，放置100min；对照组结扎冠脉60min，解除结扎再灌注40min；治疗组于结扎冠脉20min时，经耳缘静脉滴注实施例1药物注射液(2mg/kg实施例1药物溶于100ml蒸馏水)2ml/kg，10min滴完，余同对照组。假手术组和对照组均按治疗组的给药方法在相同时点，给予等量的5％葡萄糖液。所有动物由右颈总动脉插管至左心室，连接rm-600型四道生理记录仪(日本光电)测量左室内压峰值(lvsp)、左室舒张末期压(lvedp)、左室内压最大变化速率(±dp/dtmax)，并同步记录肢体ⅱ导联心电图。各组于结扎冠脉100min时取心脏活杀。

检测指标

取左心室结扎线下缺血心肌，加入预冷的匀浆介质(0.25mo1/l蔗糖，0.025mo1/ltris-hcl，0.0001mol/ledta，ph7.5)，在冰浴中制成10％(w/v)组织匀浆，于4℃条件下离心(1800r/min，15min)，取上清液按试剂盒说明书测定组织蛋白含量、mda(丙二醛)含量、ck(肌酸激酶)、ast(谷草转氨酶)、ldh-l(乳酸脱氢酶)、α-hbdh(α-羟丁酸脱氢酶)、sod(超氧化物歧化酶)、gsh-px(谷胱甘肽过氧化物酶)、ca²⁺-atpase、na⁺-k⁺-atpase和mg²⁺-atpase活性，细胞内ca²⁺含量测定用钙离子电极法。

统计分析：各组数据均以表示，组内差异采用t检验。

心电图st段的改变

图1中：冠状动脉结扎后，心电图st段显著抬高，治疗组给药后各时点抬高的st段较对照组明显下段(p<0.01～0.001)。

本发明药物对心功能指标的影响

下表中：治疗组心功能指标与对照组比较均有明显改善，但与正常组比较心功能差(p<0.05～0.001)。

本发明药物对心肌ck、ast、ldh-l和α-hbdh活性的影响

图2显示：治疗组心肌组织中ck、ast、ldh-l和α-hbdh的活性明显高于对照组p<0.05～0.001)，但其活性仍低于正常组(p<0.05～0.01)。

本发明药物对心肌脂质过氧化反应及抗氧化酶系统的影响

从表中可以看出：治疗组心肌组织中mda含量明显低于对照组(p<0.01)，但仍高于正常组(p<0.05)，其sod，gsh-px活性显著高于对照组(p<0.05～0.01)，但gsh-px活性仍低于正常组(p<0.05)。

本发明药物对心肌ca²⁺含量、心肌atp酶活性的影响

从表中可以看出：

对照组和治疗组心肌ca²⁺含量与正常组比均明显增高(p<0.05～0.01)，但治疗组增高的幅度明显低于对照组(p<0.05)。

对照组心肌ca²⁺-atpase，na⁺-k⁺-atpase和mg²⁺-atpase活性均明显低于正常组和治疗组(p<0.01～0.001)，治疗组心肌na⁺-k⁺-atpase活性低于正常组(p<0.05)，而ca²⁺-atpase和mg²⁺-atpase活性与正常组比较无统计学差异。