本发明涉及医药领域，具体的说，本发明涉及一种治疗脂肪肝的药物组合物及其制备方法。
背景技术：
脂肪性肝病简称脂肪肝，是一种由各种原因引起的肝细胞内脂肪堆积，以肝细胞脂肪变性和脂质蓄积为主要特征的临床病理综合征。美国流行病学调查显示非酒精性脂肪肝发病率接近20％，远超丙型肝炎和酒精性肝病的发病率。随着肥胖、糖尿病的全球流行，日本和中国等亚洲国家的发病率己接近欧美国家水平。脂肪肝是由多种原因引起的肝脏脂肪性病变，当肝细胞内脂质积聚超过肝湿质量的5％或以上的肝细胞在光镜可见脂肪小滴，其是一种可逆性病变，只要早期诊断和及时治疗，一般可恢复正常。但也有研究认为，无论成因如何，均有部分脂肪肝可发展为肝纤维化，甚至肝硬化。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种治疗脂肪肝的药物组合物。
本发明的目的在于还提供一种治疗脂肪肝的药物组合物的制备方法。
为了实现本发明的目的，本发明提供一种治疗脂肪肝的药物组合物，所述药物组合物包含下列结构式的化合物：
优选地，所述药物组合物包含：15mg的下列结构式的化合物、500mg的填充剂、100mg的崩解剂、60mg的矫味剂、20mg的助流剂和5mg的润滑剂：
优选地，所述的填充剂选自预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、微晶纤维素，以及它们的混合物。
优选地，所述的崩解剂选自微晶纤维素、低取代-羟丙基纤维素、交链羧甲基纤维素钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基淀粉钠、吐温-80、十二烷基硫酸钠，以及它们的混合物。
优选地，所述的矫味剂选自甜菊素、阿斯巴坦、甘草甜素、糖精钠，以及它们的混合物。
优选地，所述的润滑剂和助流剂选自硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶、十二烷基硫酸镁、十二烷基硫酸钠、硬脂酸，以及它们的混合物。
本发明还提供一种治疗脂肪肝的药物组合物的制备方法，该方法包括下列步骤：
步骤a：室温下，向2,4-二羟基-3-硝基吡啶的冰醋酸中慢慢滴加溴素，约5分钟加完，升温至70℃反应0.5小时，反应完毕，冷却，将反应液倒入碎冰中，搅拌15分钟，过滤，水洗，干燥得到5-溴-2,4-二羟基-3-硝基吡啶；
步骤b：0℃下，向5-溴-2,4-二羟基-3-硝基吡啶的无水乙腈中滴加草酰氯和dmf，加完升室温反应5小时，反应完毕，余物倒入冰水中，搅拌15分钟，过滤，水洗，干燥得到5-溴-4-氯-2-羟基-3-硝基吡啶；
步骤c：室温下，向5-溴-4-氯-2-羟基-3-硝基吡啶的dmf和2-氨基苯酚中加入碳酸铯，加完加热至100℃反应6小时，反应完毕，冷却，加入水，用乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，余物经硅胶柱进行色谱纯化，用乙酸乙酯/石油醚梯度10-30％洗脱，得到4-硝基-10h苯并[b]吡啶并[3,4-e][1,4]恶嗪-3-醇；
步骤d：0℃下，向4-硝基-10h苯并[b]吡啶并[3,4-e][1,4]恶嗪-3-醇的无水dmf溶液中加入60％nah，加完继续反应0.5小时，滴加溴乙酸甲酯，加完加热至80℃反应2小时，反应完毕，冷却，加水稀释，用乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，余物经硅胶柱进行色谱纯化，用乙酸乙酯/石油醚梯度10-30％洗脱，得到白色固体2-((4-硝基-10h-苯并[b]吡啶并[3,4-e][1,4]恶嗪-3-基)氧基)乙酸甲酯；
步骤e：室温下，向2-((4-硝基-10h-苯并[b]吡啶并[3,4-e][1,4]恶嗪-3-基)氧基)乙酸甲酯的冰醋酸溶液中加入还原铁粉，加完加热至100℃反应5小时，反应完毕，冷却，减压浓缩，余物加水，用乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，余物经硅胶柱进行色谱纯化，用乙酸乙酯/石油醚梯度10-30％洗脱，得到白色固体2-((4-硝基-10h-苯并[b]吡啶并[3,4-e][1,4]恶嗪-3-基)氧基)乙酸甲酯。
本发明药物能降低脂肪肝大鼠血清tc、tg、ast、alt、alp及ldl-c水平，清除肝细胞内部分脂质积聚；其改善脂肪肝作用与阿昔莫司相当，但本发明药物各剂量组sod活力和mda水平与模型组相比稍有改善。本发明药物具有一定的降脂保肝作用，有望临床上进一步开发成新药。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1本发明药物的合成
路线：
步骤a：5-溴-2,4-二羟基-3-硝基吡啶
室温下，向2,4-二羟基-3-硝基吡啶(5.00g，0.032mol)的冰醋酸(80ml)中慢慢滴加溴素(6.14，0.038mol)，约5分钟加完，升温至70℃反应0.5小时。反应完毕，冷却，将反应液倒入碎冰中，搅拌15分钟。过滤，水洗，干燥得到产物(5.8g,77％)。
1hnmr(400mhz,d6-dmso)δ7.73(s,1h),11.9(br,1h),12.5(br,1h)。
步骤b：5-溴-4-氯-2-羟基-3-硝基吡啶
0℃下，向5-溴-2,4-二羟基-3-硝基吡啶(5.80g，0.025mol)的无水乙腈(50ml)中滴加草酰氯(1.09g，0.027mol)和dmf(0.1ml)，加完升室温反应5小时。反应完毕，余物倒入冰水中，搅拌15分钟。过滤，水洗，干燥得到产物(5.4g,86％)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.8(s,1h)，9.5(br,1h)。
步骤c：4-硝基-10h苯并[b]吡啶并[3,4-e][1,4]恶嗪-3-醇
室温下，向5-溴-4-氯-2-羟基-3-硝基吡啶(5.40g，0.021mol)的dmf(100ml)和2-氨基苯酚(2.33g，0.021mol)中加入碳酸铯(13.88g，0.042mol)，加完加热至100℃反应6小时。反应完毕，冷却，加入水(600ml)，用乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。余物经硅胶柱进行色谱纯化,用乙酸乙酯/石油醚梯度(10-30％)洗脱，得到产物(3.50g,67％)。
1hnmr(400mhz,d6-dmso)δ6.30(br,1h),6.75-6.78(m,1h),6.85-6.88(m,2h),7.05-7.08(m,1h),7.80(s,1h),10.60(br,1h)。
步骤d：2-((4-硝基-10h-苯并[b]吡啶并[3,4-e][1,4]恶嗪-3-基)氧基)乙酸甲酯
0℃下，向4-硝基-10h苯并[b]吡啶并[3,4-e][1,4]恶嗪-3-醇(3.50g,0.014mol)的无水dmf(50ml)溶液中加入60％nah(0.63g,0.16mol),加完继续反应0.5小时。滴加溴乙酸甲酯(2.18g,0.014mol)，加完加热至80℃反应2小时。反应完毕，冷却，加水稀释，用乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。余物经硅胶柱进行色谱纯化，用乙酸乙酯/石油醚梯度(10-30％)洗脱，得到白色固体产物(2.00g,44％)。
1hnmr(400mhz,d6-dmso)δ3.9(s,3h),5.10(s,2h),6.00(br,1h),6.74-6.77(m,1h),6.82-6.85(m,2h),7.04-7.07(m,1h),7.85(s,1h)。
步骤e：2-((4-硝基-10h-苯并[b]吡啶并[3,4-e][1,4]恶嗪-3-基)氧基)乙酸甲酯
室温下，向2-((4-硝基-10h-苯并[b]吡啶并[3,4-e][1,4]恶嗪-3-基)氧基)乙酸甲酯(2.00g,0.0063mol)的冰醋酸(20ml)溶液中加入还原铁粉(1.76g,0.032mol),加完加热至100℃反应5小时。反应完毕，冷却，减压浓缩，余物加水，用乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。余物经硅胶柱进行色谱纯化，用乙酸乙酯/石油醚梯度(10-30％)洗脱，得到白色固体产物(1.00g,62％)。
1hnmr(400mhz,d6-dmso)δ4.82(s,2h),6.05(br,1h),6.72-6.75(m,1h),6.83-6.87(m,2h),7.02-7.05(m,1h),7.70(s,1h),10.90(br,1h)。
实施例2本发明药物对于脂肪肝的治疗效果
选择雄性wistar大鼠，适应性饲养1周后，随机分为正常对照组、模型组、阳性对照(阿昔莫司)组、本发明药物(实施例1药物)低剂量组、中剂量组、高剂量组，每组10只。每组大鼠均自由摄水，正常对照组给予基础饲料，其余5组给予高脂饲料(含88.8％基础饲料、10％猪油、1％胆固醇、0.2％甲基硫氧嘧啶)，连续饲喂5周。从实验第6周末起，各组大鼠仍如前法饲喂，正常对照组、模型组用生理盐水1ml灌胃；阳性药物组50mg/100g、本发明药物低剂量组0.05mg/100g、中剂量组0.1mg/100g、高剂量组0.2mg/100g灌胃，一天一次，连续给药4周。于末次灌胃后24h处死，取血取肝并进行相应指标检测。
观察大鼠精神、活动、饮食、皮毛、体质量变化。处死大鼠后肉眼观察肝脏脂肪情况并计量肝指数(肝湿质量与体质量之比)。门静脉采血分离血清，采用全自动化分析仪测定tg、tc、ldl-c,hdl-c,alt、ast、alp水平。取大鼠1/5肝脏组织用预冷生理盐水冲洗表面血污后置于少量生理盐水中固定。sod活力采用氮蓝四唑(nbt)比色法，mda含量测定采用硫代巴比妥酸法，通过检测吸光度，制备标准曲线，计算各组大鼠肝组织sod活力和mda水平。采用spss17.0统计软件包进行数据分析，资料以
高脂饲料饲喂大鼠前期食量大于正常对照组，体质量增加较快，后期食量减小，活动量减少。本发明药物各组食量、活动量均明显优于模型组(p<0.05)。本发明药物高剂量组大鼠体质量明显轻于模型组(p<0.05)。处死大鼠后取肝组织肉眼观察，发现正常对照组肝组织色泽正常，呈暗红色，切面无油腻感；模型组大鼠肝脏肥大、表面发黄，切面油腻。本发明药物高剂量组和阳性对照组肝组织略偏大，大部分色泽暗红，接近正常表现。各组体质量、肝湿质量及肝指数情况，见表1。
表1各组体质量、肝湿质量与肝指数比较
注：*与模型组比较，p<0.05。
与模型组相比，本发明药物高剂量组和阳性对照组tc和ast、tg、ldl-c、alt、alp水平均明显下降(p<0.05)，本发明药物中剂量组水平也明显下降(p<0.05)；本发明药物低剂量组生化指标亦有所下降，但差异无统计学意义。本发明药物各剂量组hdl-c水平与模型组比较差异无统计学意义(p>0.05)。见表2。
表2各组血清脂质的比较
注：*与模型组比较，p<0.05。
本发明药物各剂量组sod活力及mda水平随剂量增大有轻度改善，但与模型组比较差异无统计学意义(p>0.05)。见表3。
表3各组血清sod活力及mda水平比较