本发明涉及医药领域，具体的说，本发明涉及一种治疗类风湿关节炎的药物组合物及其制备方法和应用。
背景技术：
：类风湿关节炎(rheumatoidarthritis，ra)是一种慢性自身免疫性疾病，其主要病理特征是关节滑膜炎症及软骨与骨组织的破坏，临床表现为关节疼痛、僵硬、变形甚至活动受限等功能障碍而致残。据统计，全球ra的发病率占0.1％～1％，国内ra患病率0.32％～0.36％，其发病率居自身免疫性疾病的首位，未经治疗的ra患者2年致残率达70％，是人类丧失劳动力和致残的主要病因之一。临床上常用非甾体类抗炎药缓解症状，但长期服用存在副作用。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种治疗类风湿关节炎的药物组合物。本发明的目的还在于提供该药物组合物的制备方法和应用。为了实现本发明的目的，本发明提供一种治疗类风湿关节炎的药物组合物，所述药物组合物包含具有下式结构的化合物：优选地，所述药物组合物包含10-25mg的所述化合物、40-400mg的填充剂、30-250mg的崩解剂、10-200mg的矫味剂、2-50mg的助流剂和0.5-40mg的润滑剂。优选地，所述药物组合物可以制成任何一种药学上的常规剂型。本发明还提供一种治疗类风湿关节炎的药物组合物的制备方法，该方法包括下列步骤：步骤a：室温下，向3-氯-6-肼基哒嗪的二氧六环溶液中滴加原碳酸四甲酯，加完加热至100℃反应3小时，反应完毕，冷却，减压浓缩，余物倒入异丙醚中，搅拌15分钟，过滤收集固体得到6-氯-3-甲氧基-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪；步骤b：室温下，向6-氯-3-甲氧基-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪的正丁醇中滴加氨水，加完100℃封管反应12小时，反应完毕，冷却，减压浓缩，余物倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，余物经硅胶柱进行色谱纯化得到3-甲氧基-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-6-胺；步骤c：将3-甲氧基-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-6-胺的正丁醇中滴加50％氯乙醛水溶液，加完加热至120℃下反应8小时，反应完毕，减压浓缩，余物加水，用乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，余物经硅胶柱进行色谱纯化得到白色固体1-甲氧基咪唑并[1,2-b][1,2,4]三唑并[3,4-f]哒嗪。本发明还提供化合物在制备治疗类风湿关节炎的药物中的应用，所述化合物具有下列结构：本发明药物能够明显抑制类风湿关节炎患者关节滑膜的增生及炎性细胞的浸润，改善血管增生或血管翳形成及软骨侵蚀破坏，改善患者关节损伤，减轻关节肿胀，抑制血清中炎性细胞因子生成，从而对类风湿关节炎患者有较好的治疗作用。附图说明图1是对大鼠血清中炎性因子的影响。图2是对大鼠踝关节病理改变(he，×100)。图3是对大鼠病理评分。a.正常组；b.模型组；c.阳性对照组；d.本发明药物低剂量组；e.本发明药物中剂量组；f本发明药物高剂量组。具体实施方式为了使本领域普通技术人员更好的理解本发明药物的治疗效果和机制，以下结合实施例来详细说明。实验例1本发明药物的合成路线：步骤a：6-氯-3-甲氧基-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪室温下，向3-氯-6-肼基哒嗪(5.00g，0.035mol)的二氧六环(80ml)溶液中滴加原碳酸四甲酯(7.06g，0.052mol)。加完加热至100℃反应3小时。反应完毕，冷却，减压浓缩，余物倒入异丙醚中，搅拌15分钟，过滤收集固体得到产物(6.00g,94％)。1hnmr(400mhz,d6-dmso)δ4.25(s,3h),7.30(d,1h),8.22(d,1h)。步骤b：3-甲氧基-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-6-胺室温下，向6-氯-3-甲氧基-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪(6.00g，0.033mol)的正丁醇(60ml)中滴加氨水(20ml)。加完100℃封管反应12小时。反应完毕，冷却，减压浓缩，余物倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。余物经硅胶柱进行色谱纯化得到产物(4.20g,78％)。1hnmr(400mhz,d6-dmso)δ4.23(s,3h),7.20(d,1h),8.12(d,1h)。步骤c：1-甲氧基咪唑并[1,2-b][1,2,4]三唑并[3,4-f]哒嗪将3-甲氧基-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-6-胺(4.20g，0.025mol)的正丁醇(60ml)中滴加50％氯乙醛水溶液(19.96g，0.13mol)。加完加热至120℃下反应8小时。反应完毕，减压浓缩，余物加水，用乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。余物经硅胶柱进行色谱纯化得到白色固体产物(2.50g,52％)1hnmr(400mhz,d6-dmso)δ4.26(s,3h),7.33(d,1h),7.55(d,1h),8.12(d,1h),8.50(d,1h)。实验例2本发明药物治疗类风湿关节炎的效果类风湿关节炎大鼠模型的建立大鼠适应性喂养1周后，随机选取10只大鼠作为正常组，其余参考文献(stuartjm，cremerma，townesas,etal.typeⅱcollagen-inducedarthritisinrats.passivetransferwithserumandevidencethatigganticollagenantibodiescancausearthritis[j].expmed,1982,155(1):1-16.)造模。取2g·l-1牛ⅱ型胶原置于4℃冰箱中过夜。与含有3.5g·l-1卡介苗的完全弗氏佐剂(cfa)等体积混合，充分研磨至乳白色黏稠液体，使之乳化，胶原终质量浓度为1g·l-1。于大鼠的背部2或3点及尾根部1处进行皮内注射胶原乳化剂0.3ml。14d后按初次致炎的方法和剂量重复致炎，正常组注射等剂量的生理盐水。风寒湿刺激条件:自致炎第1天起，将致炎大鼠置于5～7℃水中，水深2cm，伴以3档风力，站立其中20min，每天1次，连续14d。定期观察大鼠的一般情况、关节肿胀程度、颜色、关节活动情况等变化。动物分组及给药致炎15d，根据关节炎指数(ai)≥4筛选模型建立成功的50只大鼠，随机分为模型组、阳性对照组(雷公藤多苷4mg/kg)、本发明药物低、中、高剂量(2、4、8mg/kg)组，每组10只。灌胃给药，连续28d。正常组和模型组按10ml/kg灌胃生理盐水。检测指标大鼠体重：致炎前起，每周称量并记录大鼠体重。关节肿胀率：致炎前起，每周用自制关节容积测量器测量大鼠踝关节容积，并计算出肿胀率，肿胀率＝(vt－v0)/v0，其中v0为造模前的容积，vt为造模后的容积。ai：致炎第10d起，每周按大鼠多发性关节炎全身5级评分法对病变程度进行评分，0分，正常；1分，足趾关节红肿；2分，多个趾关节或趾跖关节肿胀；3分，踝关节以下的足爪肿胀；4分，全部足爪肿胀。累计四肢关节炎积分为每只大鼠的关节炎指数，最高为16分。血清炎症因子：致炎35d从各组大鼠的球后静脉丛取血，收集全血，待凝固后离心取血清，于-80℃冰箱保存。采用elisa试剂盒测定各组大鼠血清中tnf-α和il-6水平。关节病理切片制备及病理评分：致炎42d处死大鼠，留取右踝关节固定，脱钙，常规苏木素伊红(he)染色。光镜下观察各组大鼠关节滑膜的病理变化，并进行评分。0分，关节结构正常，关节间隙均匀，滑膜组织无炎症、增生，无软骨及骨破坏；1分，关节结构基本完整，滑膜增生，血管增加，少量炎细胞浸润，可见轻度软骨表层破坏；2分，关节间隙基本正常，形成血管翳，大量炎性细胞浸润，软骨侵蚀破坏明显，无骨破坏；3分，关节结构破坏，大量血管翳形成，广泛软骨侵蚀及骨破坏。统计学方法采用spss19.0统计软件，计量数据以表示，组间进行单因素方差分析，方差齐则采用lsd进行比较，方差不齐则采用秩和检验，p<0.05为差异具有统计学意义。本发明药物对大鼠一般情况及体重(g)的影响致炎7～9d，类风湿关节炎大鼠皮内注射部位出现铜币大小的溃疡、化脓病灶，持续10d左右开始结痂愈合形成瘢痕；致炎10d，足趾皮肤发红、发热，轻度肿胀，第14天再次致炎，足背及踝关节肿胀明显，部分出现关节僵硬，活动量减少，易激惹，饮食减少，体重增长缓慢，甚至下降，毛发失去光泽，甚至脱毛。与正常组比较，模型组大鼠的体重显著降低(p<0.01)，之后又缓慢上升。自给药14d开始，各治疗组体重较模型组明显升高(p<0.05，p<0.01)。结果见下表。注：与正常组比较1)p<0.05，2)p<0.01；与模型组比较3)p<0.05，4)p<0.01。本发明药物对大鼠关节肿胀率的影响致炎14d，模型组大鼠踝关节肿胀水平较正常组显著升高(p<0.01)，提示模型复制成功，高峰出现在第28d左右，之后肿胀有减轻趋势。第28天后，治疗组大鼠的关节肿胀率较模型组明显降低(p<0.05)随着本发明药物剂量的提高可见关节肿胀有缓解的趋势，阳性对照组与本发明药物各组间无明显差异。结果见下表。组别d10d14d21d28d35d42正常组0.12±0.050.22±0.050.25±0.040.31±0.050.34±0.060.39±0.07模型组0.14±0.050.46±0.241.27±0.312)1.32±0.322)1.19±0.282)1.09±0.252)阳性对照0.15±0.030.38±0.241.12±0.291.05±0.293)0.87±0.234)0.78±0.154)低剂量组0.14±0.050.43±0.241.09±0.251.08±0.153)0.89±0.133)0.79±0.174)中剂量组0.14±0.050.35±0.191.06±0.251.03±0.263)0.85±0.244)0.75±0.184)高剂量组0.15±0.050.43±0.281.07±0.351.03±0.583)0.83±0.244)0.74±0.254)注：与正常组比较1)p<0.05，2)p<0.01；与模型组比较3)p<0.05，4)p<0.01。本发明药物对大鼠ai的影响模型组大鼠的ai升高，至35d左右达到高峰。本发明药物各组随着剂量的提高和时间延长ai有下降趋势，给药35d后，治疗组ai较模型组明显降低(p<0.05)。结果见下表。组别d10d14d21d28d35d42模型组2.78±1.936.69±2.5210.78±2.8711.63±2.9911.78±3.2611.09±3.24阳性对照2.69±1.546.55±3.039.39±2.699.78±2.818.86±2.423)7.39±1.884)低剂量组2.55±1.146.55±3.119.47±3.059.93±3.298.69±3.313)7.47±3.654)中剂量组2.47±1.356.63±2.939.69±2.7010.01±2.558.93±2.823)7.32±3.144)高剂量组2.47±1.106.51±3.129.39±3.329.93±3.428.93±3.453)7.24±3.384)注：与正常组比较1)p<0.05，2)p<0.01；与模型组比较3)p<0.05，4)p<0.01。本发明药物对大鼠血清中tnf-α和il-6含量的影响见图1致炎35d，模型组大鼠血清中tnf-α和il-6与正常组比较显著升高(p<0.05)；与模型组比较，本发明药物低、中、高剂量组大鼠血清中tnf-α和il-6水平明显下降(p<0.05)，且各组间无明显差异。本发明药物对大鼠踝关节病理改变的影响正常组大鼠的踝关节结构完整，关节面光滑，无滑膜增生及炎性细胞浸润。模型组可见关节结构破坏，大量的滑膜组织增生，排列紊乱，腔内炎细胞浸润明显，以淋巴细胞、巨噬细胞和白细胞浸润为主，有丰富的血管翳形成，可见广泛的软骨侵蚀破坏，脱核甚至脱落，可见骨破坏，提示模型复制成功。给药干预后，本发明药物低剂量组和雷公藤组关节滑膜组织增生较模型组明显减轻，血管增生和血管翳形成大大减少，关节软骨变性、坏死或剥脱减轻，骨破坏明显减少。本发明药物中、高剂量组滑膜组织可见轻度增生，少量炎性细胞浸润，未观察到血管翳形成，关节软骨表面尚光滑，软骨侵蚀显著减少，未见骨破坏。结果见图2。与模型组比较，各治疗组大鼠踝关节病理评分明显降低(p<0.05)，本发明药物高剂量组能显著改善软骨的损伤程度(p<0.01)。结果见图3。当前第1页12