一种负载微肽纳米脂质体及其制备、应用以及使用方法与流程

本发明属于化妆品技术领域，具体地说，尤其涉及一种负载微肽纳米脂质体及其制备、应用以及使用方法。

背景技术

脂质体是人工制备的依靠磷脂分子间疏水作用在水中自发形成的封闭囊状结构，功效成分包裹在脂质体内部，脂质体制备简单，对机体无毒，无免疫原性，进入体内后主要被网格细胞吞噬，因此，可以提高有效成分利用率。微肽能够刺激表皮细胞生长因子受体之酪氨酸磷酸化，达到修补增生的效果，从而以新生的细胞代替衰老和死亡的细胞，使皮肤富有光滑和弹性，达到抗衰老效果。绞股蓝具有良好的抗衰老、抗氧化性以及优良的降血脂功效，属于天然植物，对人体无毒副作用。目前尚未有将两者结合应用于脂质体中，而且脂质体一般为大单层脂质体，一般体积较大，无法适用于包裹大分子生物活性物质，容易产生包封率低的问题，同时微肽体外稳定性差，易失活、生物利用度低。

技术实现要素：

本发明目的在于提供一种包裹方式独特、抗衰老性强、稳定性强的负载微肽纳米脂质体及其制备、应用以及使用方法。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：

一种负载微肽纳米脂质体，包括以下重量份的各组分：微肽30～50份、卵磷脂150～200份、胆固醇30～60份、可溶性蛋白多糖15～25份、葡萄糖15～25份、绞股蓝提取物30～50份、透明质酸钠1～10份、甘露糖15～25份、烟酰胺1～50份、甘油45～55份、保护剂5～25份、葡糖荃酸15～25份。

优选的，所述微肽为寡肽-1、寡肽-3、寡肽-5中的一种或几种。

优选的，所述微肽为在10000～20000转/分的速度下，经匀浆机高速剪切、细化后颗粒粒径达到纳米级的干粉或浓缩液。

优选的，所述保护剂为丁二醇、丙二醇中的一种或两种。

优选的，所述负载微肽纳米脂质体可制为冻干精华、霜剂、乳液、固态面膜、普通面膜、精华液或洗面奶。

一种负载微肽纳米脂质体的制备方法，包括以下步骤：

(1)按重量份数计，将150～200份卵磷脂和30～60份胆固醇加入旋转蒸发瓶内，再向旋转蒸发瓶内加入3～5倍原料总量的氯仿搅拌溶解，搅拌1～2小时后减压旋转蒸发，直至氯仿完全回收，制得脂质体膜；

(2)将脂质体膜溶于乙醚中，利用微波制成平均粒径为40～400nm的单室脂质体溶液a；

(3)向微肽中加入重蒸去离子水，再加入绞股蓝提取物和透明质酸钠，搅拌混合均匀后制成复合微肽溶液b，将复合微肽溶液b缓慢加入单室脂质体溶液a中，同时加入保护剂，混合均匀后水合离心分离，取上层清液冷冻干燥，制得包裹复合微肽的脂质体；

(4)向包裹复合微肽的脂质体中加入磷酸缓冲液，搅拌均匀后，以10000～20000转/min的速度剪切处理3次，每次2～4min，获得纳米级脂质体溶液c；

(5)在纳米脂质体溶液c中加入甘油、可溶性蛋白多糖、葡萄糖、甘露糖、烟酰胺以及葡糖荃酸，并加入ph为7.4的磷酸盐缓冲溶液进行分散，于20℃～40℃下搅拌2～5h，制得混悬液d，低温下采用高压均质机均质3～5次，冷冻干燥后制得负载微肽纳米脂质体冻干粉。

优选的，所述步骤(3)中保护剂为丁二醇、丙二醇中的一种或几种。

优选的，所述步骤(3)在40～50℃下水合1～2h，降温至-20℃～-10℃进行冷冻，再于3500转/min～7000转/min下离心分离20～40min。

一种负载微肽纳米脂质体的应用方法，包括以下步骤：

(1)通过上述负载微肽纳米脂质体的制备方法制得负载微肽纳米脂质体冻干粉；

(2)向负载微肽纳米脂质体冻干粉中加入重蒸去离子水，水化后压入涂布机的料槽中，开启涂布装置，冷冻干燥后经涂布冲切，制得负载微肽纳米脂质体面膜。

一种负载微肽纳米脂质体的使用方法，其特征在于：采用上述负载微肽纳米脂质体的制备方法制得负载微肽纳米脂质体冻干粉，使用时，加入重蒸去离子水，震荡完全溶解后涂覆于皮肤表面或采用上述负载微肽纳米脂质体的应用方法制得的负载微肽纳米脂质体面膜，使用时，向其表面均匀喷入重蒸去离子水，充分溶解后将面膜涂覆于面部。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

1、本发明中采用独特的包裹方式，从外到内依次为脂质体壁材和芯材，芯材为脂质体包裹的相互交替的微肽、透明质酸钠和绞股蓝提取物，利用脂质体隔绝性，使微肽得到良好包封，避免发生氧化、降低活性，同时微肽、绞股蓝提取物以及透明质酸钠相互交融，同时释放功能性因子，功效相互辅助叠加，令效果最优化，同时利用脂质体载药性，使微肽得到缓慢释放，便于其透过细胞膜被人体吸收，降低皮肤氧化性，实现皮肤抗衰老和修复的目的，利用绞股蓝提取物进一步加强抗衰老以及降低血糖、血脂，达到药妆效果，利用透明质酸钠加强保湿效果；

2、本发明中负载微肽的纳米脂质体为干粉状或者固化于丝质面膜材料中，提升了无菌包装和运输的便捷性，使用时加入重蒸去离子水即可，加强了使用的便捷性，而且避免了采用液体面膜的方式，使微肽易发生质变的问题，增强了微肽的稳定性；

3、本发明中采用纳米脂质体与外包溶液混合制备的方式，较一般先单独制备外包溶液，再进行混合的制备方式，不仅精简了反应过程，而且最大程度地保证微肽、绞股蓝提取物以及透明质酸钠的包裹率，防止多步反应带来的包裹率下降的问题，令产物结构稳定化，促进人体皮肤吸收率，同时，本发明中功能组分为生物提取物，对人体无毒副作用。

附图说明

图1是本发明中微肽的质谱分子量分析图；

图2是本发明中寡肽的质谱分子量分析图；

图3是本发明实施例1中负载微肽纳米脂质体的透射电镜照片；

图4是本发明实施例2中负载寡肽纳米脂质体的透射电镜照片；

图5是本发明实施例1中负载微肽纳米脂质体面膜的透射电镜照片；

图6是本发明实施例2中负载寡肽纳米脂质体面膜的透射电镜照片；

图7是本发明实施例1中负载微肽纳米脂质体面膜加水后的透射电镜照片；

图8是本发明实施例2中负载寡肽纳米脂质体面膜加水后的透射电镜照片。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式，进一步阐明本发明，应理解这些实施方式仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。

一种负载微肽纳米脂质体，包括以下重量份的各组分：微肽30～50份、卵磷脂150～200份、胆固醇30～60份、可溶性蛋白多糖15～25份、葡萄糖15～25份、绞股蓝提取物30～50份、透明质酸钠1～10份、甘露糖15～25份、烟酰胺1～50份、甘油45～55份、保护剂5～25份、葡糖荃酸15～25份，所述微肽为寡肽-1、寡肽-3、寡肽-5中的一种或几种，所述微肽为在10000～20000转/分的速度下，经匀浆机高速剪切、细化后颗粒粒径达到纳米级的干粉或浓缩液，所述保护剂为丁二醇、丙二醇中的一种或两种，所述负载微肽纳米脂质体可制为冻干精华、霜剂、乳液、固态面膜、普通面膜、精华液或洗面奶。

本发明中微肽为表皮细胞生长因子，是人体内的一种活性物质，能够促进表皮细胞组织内多种细胞的生长分裂，使表皮细胞变得饱满，提升胶原蛋白的

本发明中微肽的制备方法，包括以下步骤：将动物鄂下腺组织破碎，调节其ph值至弱酸性，进行搅拌得到匀浆液；将匀浆液冷冻后再解冻，离心分离；再将上清液过滤、超滤后，制得微肽精华液，再经真空干燥后制得微肽干粉。

本发明中利用卵磷脂和胆固醇制备脂质体膜，卵磷脂使脂质体具有较低的相转变温度，胆固醇使脂质体具有良好的流动性以及低粘滞性。

下面采用具体实施例对本发明负载微肽纳米脂质体及其制备方法等作进一步的详细描述。

实施例1

(1)将150份卵磷脂和30份胆固醇加入旋转蒸发瓶内，再向旋转蒸发瓶内加入3倍的卵磷脂和胆固醇总量的氯仿搅拌溶解，搅拌1～2小时后减压旋转蒸发，直至氯仿完全回收，制得脂质体膜；

(2)将脂质体膜溶于乙醚中，利用微波制成平均粒径为40～400nm的单室脂质体溶液a；

(3)向30份微肽中加入重蒸去离子水，再加入30份绞股蓝提取物和1份透明质酸钠，搅拌混合均匀后制成复合微肽溶液b，将复合微肽溶液b缓慢加入单室脂质体溶液a中，同时加入丁二醇、丙二醇，混合均匀后在40～50℃下水合1～2h，降温至-20℃～-10℃进行冷冻，再于3500转/min～7000转/min下离心分离20～40min，取上层清液冷冻干燥，制得包裹复合微肽的脂质体；

(4)向包裹复合微肽的脂质体中加入磷酸缓冲液，搅拌均匀后，以10000～20000转/min的速度剪切处理3次，每次2～4min，获得纳米级脂质体溶液c；

(5)在纳米脂质体溶液c中加入45份甘油、15份可溶性蛋白多糖、15份葡萄糖、15份甘露糖、1份烟酰胺以及15份葡糖荃酸，并加入100mlph为7.4的磷酸盐缓冲溶液进行分散，于20℃～40℃下搅拌2～5h，制得混悬液d，低温下采用高压均质机均质3～5次，-45℃～-55℃下冻干4h，制得负载微肽纳米脂质体冻干粉。负载微肽纳米脂质体透射电镜照片如图3所示，其脂质体粒径为50～100nm。

本发明负载微肽纳米脂质体应用时，向负载微肽纳米脂质体中加入重蒸去离子水，水化后压入涂布机的料槽中，开启涂布装置，冷冻干燥后经涂布冲切，制得负载微肽纳米脂质体面膜。负载微肽纳米脂质体面膜透射电镜照片如图5所示，整体呈絮状。

本发明负载微肽纳米脂质体使用时，向负载微肽纳米脂质体中加入重蒸去离子水，震荡完全溶解后涂覆于皮肤表面或向负载微肽纳米脂质体面膜的表面均匀喷入重蒸去离子水，充分溶解后将面膜涂覆于面部。负载微肽纳米脂质体面膜加重蒸去离子水溶解后的透射电镜照片如图7所示。

实施例2

(1)将200份卵磷脂和60份胆固醇加入旋转蒸发瓶内，再向旋转蒸发瓶内加入3倍原料总量的氯仿搅拌溶解，搅拌1～2小时后减压旋转蒸发，直至氯仿完全回收，制得脂质体膜；

(2)将脂质体膜溶于乙醚中，利用微波制成平均粒径为40～400nm的单室脂质体溶液a；

(3)向50份寡肽中加入重蒸去离子水，再加入50份绞股蓝提取物和10份透明质酸钠，搅拌混合均匀后制成复合寡肽溶液b，将复合寡肽溶液b缓慢加入单室脂质体溶液a中，同时加入丁二醇、丙二醇，混合均匀后在40～50℃下水合1～2h，降温至-20℃～-10℃进行冷冻，再于3500转/min～7000转/min下离心分离20～40min，取上层清液冷冻干燥，制得包裹复合寡肽的脂质体；

(4)向包裹复合寡肽的脂质体中加入磷酸缓冲液，搅拌均匀后，以10000～20000转/min的速度剪切处理3次，每次2～4min，获得纳米级脂质体溶液c；

(5)在纳米脂质体溶液c中加入55份甘油、25份可溶性蛋白多糖、25份葡萄糖、25份甘露糖、50份烟酰胺以及25份葡糖荃酸，并加入100mlph为7.4的磷酸盐缓冲溶液进行分散，于20℃～40℃下搅拌2～5h，制得混悬液d，低温下采用高压均质机均质3～5次，-45℃～-55℃下冻干4h，制得负载寡肽纳米脂质体冻干粉。负载寡肽纳米脂质体透射电镜照片如图4所示，其脂质体粒径为50～100nm。

本发明负载寡肽纳米脂质体应用时，向负载寡肽纳米脂质体中加入重蒸去离子水，水化后压入涂布机的料槽中，开启涂布装置，冷冻干燥后经涂布冲切，制得负载寡肽纳米脂质体面膜。负载寡肽纳米脂质体面膜透射电镜照片如图6所示，整体呈絮状。

本发明负载寡肽纳米脂质体使用时，向负载寡肽纳米脂质体中加入重蒸去离子水，震荡完全溶解后涂覆于皮肤表面或向负载寡肽纳米脂质体面膜的表面均匀喷入重蒸去离子水，充分溶解后将面膜涂覆于面部。负载寡肽纳米脂质体面膜加重蒸去离子水溶解后的透射电镜照片如图8所示。

实施例3

(1)将175份卵磷脂和45份胆固醇加入旋转蒸发瓶内，再向旋转蒸发瓶内加入5倍的卵磷脂和胆固醇总量的氯仿搅拌溶解，搅拌1～2小时后减压旋转蒸发，直至氯仿完全回收，制得脂质体膜；

(2)将脂质体膜溶于乙醚中，利用微波制成平均粒径为40～400nm的单室脂质体溶液a；

(3)向40份微肽中加入重蒸去离子水，再加入40份绞股蓝提取物和20份透明质酸钠，搅拌混合均匀后制成复合微肽溶液b，将复合微肽溶液b缓慢加入单室脂质体溶液a中，同时加入丁二醇、丙二醇，混合均匀后在40～50℃下水合1～2h，降温至-20℃～-10℃进行冷冻，再于3500转/min～7000转/min下离心分离20～40min，取上层清液冷冻干燥，制得包裹复合微肽的脂质体；

(4)向包裹复合微肽的脂质体中加入磷酸缓冲液，搅拌均匀后，以10000～20000转/min的速度剪切处理3次，每次2～4min，获得纳米级脂质体溶液c；

(5)在纳米脂质体溶液c中加入50份甘油、20份可溶性蛋白多糖、20份葡萄糖、20份甘露糖、25.5份烟酰胺以及20份葡糖荃酸，并加入100mlph为7.4的磷酸盐缓冲溶液进行分散，于20℃～40℃下搅拌2～5h，制得混悬液d，低温下采用高压均质机均质3～5次，-45℃～-55℃下冻干4h，制得负载微肽纳米脂质体冻干粉。负载微肽纳米脂质体透射电镜照片如图3所示，其脂质体粒径为50～100nm。