本发明涉及一种清除体内油脂裸藻提取物及其制备方法，属于微生物领域。
背景技术
血脂指的是人体血浆中的游离脂肪酸、磷脂、固醇和甘油三脂等脂肪素的含量。血浆中血脂的含量健康值一般在130mg/dl(毫克每分升)以下；凡大于160mg/dl的医学上称之为血液脂肪素超标，即为高血脂。高血脂症血浆胆固醇、甘油三酯、总脂等血脂成分的浓度超过正常标准。
高血脂对身体的损害是隐匿、逐渐、进行性和全身性的，它的直接损害是加速全身动脉粥样硬化，进而导致众多的相关疾病，因为全身的重要器官都要依靠动脉供血、供氧，一旦动脉被粥样斑块堵塞，就会导致严重后果。大量研究资料表明，高血脂症是脑卒中、冠心病、心肌梗死、心脏猝死独立而重要的危险因素。此外，高血脂症也是促进高血压、糖耐量异常、糖尿病的一个重要危险因素。高血脂症还可导致脂肪肝、肝硬化、胆石症、胰腺炎、眼底出血、失明、周围血管疾病、跛行、高尿酸血症。有些原发性和家族性高血脂症患者还可出现腱状、结节状、掌平面及眼眶周围黄色瘤、青年角膜弓等。
裸藻是一种介于动、植物两者之间的中间型生物，具有动、植物的蛋白质组成，是良好的饵料生物。裸藻同时具备了植物与动物两种特征的微细胞藻类，无细胞壁且均衡地含有59种人体必需的营养元素，能够全面地补充人体所需的营养，缓解隐性饥饿，是比较高效的天然膳食营养补充剂。其含有的裸藻多糖成分，能清除有害胆固醇、中性脂肪、重金属等多余物质的同时促进体内有益酶的活性，调整肠胃、保护肝脏、净化血液，对过敏性皮炎亦有缓和作用，配合用于增加人体饱胀感的秸秆纤维素粉能够增进人体的免疫能力。
裸藻中中最重要的裸藻多糖成分是裸藻属的特有成分。是由线性β-1，3-葡聚糖构成的多糖体。为高效储存裸藻属在光合作用中产生的糖分，裸藻多糖以固有的方法将葡聚糖的多糖聚合。它与食物纤维一样不易消化，将其内部降解后会发现螺旋状缠绕的复杂结构中有无数的小孔。裸藻多糖不能被人体吸收，由于内部多孔结构，可以吸附人体中的多余物质如胆固醇、中性脂肪、重金属、酒精等排出体外，因此具有强效抗氧化、抗病毒、清除自由基的作用。其抗癌、抗细菌活性，抗病毒(hiv)活性的能力极为强悍。在保护肝脏、缓和过敏性皮炎、抑制嘌呤吸收和预防改善痛风方面有独特作用。2013年10月30日，国家卫生计生委发布公告，批准包括裸藻在内的8种物质为新食品原料，这使得裸藻具有很好的市场前景。
近些年来，日本等国相继开发了裸藻作为鱼类饵料的专利产品，我国在此领域起步较晚，相关技术还并不成熟，探索裸藻的培养及裸藻提取物的研究，有利于实现我国裸藻生产产业化，推动我国在该领域的快速发展。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种清除体内油脂裸藻提取物的制备方法，通过制备无菌培养基，通气并添加生长促进剂及抑菌剂，给予一定时间的光照摇床培养，提高裸藻繁殖速度，提升单位体积内裸藻的密度，并通过水提、醇沉得到清除体内油脂裸藻提取物。
其技术解决方案包括：
一种清除体内油脂裸藻提取物的制备方法，包括下述步骤：
s1配置培养基；
s2将裸藻接种至培养基中，通空气，加入培养基质量0.5～1.5％的生长促进剂和培养基质量0.025～0.2‰的抑菌剂，在温度为25～28℃、光照下摇床培养5～10天，离心，喷雾干燥得到的裸藻粉；
s3将裸藻粉加入到温度为30～40℃、ph值为6.0～6.8的醋酸水溶液中，并在30～40℃下搅拌混合4～7h，接着加入到温度为30～40℃、ph值为7.5～8.0的氢氧化钠水溶液中并在30～40℃下搅拌混合1～3小时，静置8～10小时，过滤除去脂类皂化沉淀物，得到滤液；所述裸藻粉、醋酸水溶液、氢氧化钠水溶液的质量体积比为1:(4～8)：(2～5)g/ml/ml；
s4向滤液中加入无水乙醇，使无水乙醇在溶液中的质量分数为55～90％，搅拌均匀，静置6～8小时，过滤并收集沉淀物，沉淀物干燥后即得清除体内油脂裸藻提取物。
优选的，所述培养基由下述组分制备而成：氮源、磷源、无机盐、微量元素、维生素、水。
进一步优选的，所述培养基由下述质量千分比的组分制备而成：氮源0.6～1.2‰、磷源0.6～1.2‰、无机盐0.01～0.06‰、微量元素0.005～0.008‰、维生素0.0002～0.0021‰、余量为水。
可选的，所述氮源为硝酸铵、氯化铵、硫酸铵中的一种或者多种的组合。
进一步优选的，所述氮源为硝酸铵、氯化铵、硫酸铵按质量比(0.15～0.21)：(0.20～0.25)：(0.25～0.3)混合而成。
可选的，所述磷源为磷酸二氢钾和/或磷酸氢二钾。
可选的，所述无机盐为硫酸镁、氯化钙、乙二胺四乙酸铁钠中的一种或者多种的组合。
可选的，所述微量元素为氯化锰、硫酸锌、钼酸钠、硫酸铜、硝酸钴中的一种或者多种的组合。
可选的，所述维生素为维生素b1。
可选的，所述通空气的通气量为0.8～1.2l/min。
优选的，所述生长促进剂为草鱼皮酶解物和/或阿魏酸。
进一步优选的，所述生长促进剂为草鱼皮酶解物和阿魏酸按质量比(2.5～6):1混合而成。
本发明添加的生成促进剂能够为裸藻提供更易吸收的氮源，显著的促进裸藻的繁殖、生长。本发明添加的草鱼皮酶解物不仅能够为裸藻的繁殖提供氮源，还能够起到抑菌效果，确保裸藻的繁殖优势。
优选的，所述草鱼皮酶解物的制备方法如下：
将草鱼皮粉碎后5～10目的网筛，得到的草鱼皮粒，按质量比1:(2～4)将草鱼皮粒投入蒸馏水中，用摩尔浓度为0.7～1.2mol/l的naoh水溶液或者用摩尔浓度为0.7～1.2mol/lh3po4水溶液调ph至9.3～10.2，在100～300转/分、100～105℃下保温8～15min，冷却至40～55℃，加入0.5～1.5wt％的碱性蛋白酶，在100～300转/分、40～55℃的条件下酶解50～100min，酶解完成后在100～105℃下保温5～15min灭酶，然后在6000～8000转/分的条件下离心10～20min，取上清液，真空冷冻干燥得到草鱼皮酶解物；所述真空冷冻干燥的条件是控制物料厚度6～8mm，设定预冻温度为-23～-18℃，当样品温度降到-23～-18℃后保持1～3h，设定升华温度为10～13℃，解析温度为30～35℃，绝对压强为15～80pa，干燥20～30h。
可选的，所述抑菌剂为氯霉素和/或青霉素。
优选的，所述光照强度为1000～3000lx，光暗比为12l：12d(即12小时光照和12小时黑暗间隔处理)。
优选的，所述裸藻接种体积百分比为5～30％。
优选的，所述离心的转速为5000～8000转/分，离心时间为15～30min。
一种清除体内油脂裸藻提取物，采用上述的清除体内油脂裸藻提取物的制备方法制备而得。
本发明带来的技术效果有：
(1)本发明提供了的清除体内油脂裸藻提取物具备良好的降血糖效果。
(2)本发明提供了的清除体内油脂裸藻提取物还具备显著的将血脂功效。
具体实施方式
实施例中各原料来源：
若非特指，本发明培养基配方中所述的化学成分，均为分析纯的市售商品。
裸藻：本发明的裸藻为纤细裸藻，由中国淡水藻种库提供，5×105个/ml。
碱性蛋白酶：酶活力10万/g，河南华悦化工产品有限公司。
实施例1
一种清除体内油脂裸藻提取物的制备方法，包括下述步骤：
s1按培养基配方称取各组分，搅拌混合均匀后在1.05kg/cm2压力下，121.3℃灭菌20min，得到培养基；
s2将裸藻接种至培养基中，通空气保持通气量为1l/min，加入培养基质量0.8％的生长促进剂和培养基质量0.15‰的抑菌剂，在温度为25℃、100转/分、光照下在摇床培养8天，在8000转/分的条件下离心20min，得到的沉淀在50℃、绝对压力为0.085mpa的条件下减压干燥12h后研磨得到裸藻粉；所述裸藻接种体积百分比为5％；所述光照强度为2000lx，光暗比为12l：12d(即12小时光照和12小时黑暗间隔处理)；
s3将裸藻粉加入到温度为40℃、ph值为6.6的醋酸水溶液中，并在40℃下搅拌混合5h，接着加入到温度为40℃、ph值为7.8的氢氧化钠水溶液中并在40℃下搅拌混合3小时，静置10小时，500目网纱过滤除去脂类皂化沉淀物，得到滤液；所述裸藻粉、醋酸水溶液、氢氧化钠水溶液的质量体积比为1:4:2.5g/ml/ml；
s4向滤液中加入无水乙醇，使无水乙醇在溶液中的质量分数为85％，搅拌均匀，静置8小时，500目网纱过滤并收集沉淀物，沉淀物在50℃、绝对压力为0.085mpa的条件下减压干燥12h后即得清除体内油脂裸藻提取物。
所述培养基由下述质量千分比的组分制备而成：氯化铵0.335‰、硫酸铵0.335‰、磷酸二氢钾0.8‰、硫酸镁0.01‰、氯化钙0.02‰、乙二胺四乙酸铁钠0.008‰、硫酸锌0.001‰、钼酸钠0.004‰、硝酸钴0.003‰、维生素b10.0008‰、余量为水。
所述生长促进剂为阿魏酸。
所述抑菌剂为氯霉素和青霉素按质量比1:3混合而成。
实施例2
一种清除体内油脂裸藻提取物的制备方法，包括下述步骤：
s1按培养基配方称取各组分，搅拌混合均匀后在1.05kg/cm2压力下，121.3℃灭菌20min，得到培养基；
s2将裸藻接种至培养基中，通空气保持通气量为1l/min，加入培养基质量0.8％的生长促进剂和培养基质量0.15‰的抑菌剂，在温度为25℃、100转/分、光照下在摇床培养8天，在8000转/分的条件下离心20min，得到的沉淀在50℃、绝对压力为0.085mpa的条件下减压干燥12h后研磨得到裸藻粉；所述裸藻接种体积百分比为5％；所述光照强度为2000lx，光暗比为12l：12d(即12小时光照和12小时黑暗间隔处理)；
s3将裸藻粉加入到温度为40℃、ph值为6.6的醋酸水溶液中，并在40℃下搅拌混合5h，接着加入到温度为40℃、ph值为7.8的氢氧化钠水溶液中并在40℃下搅拌混合3小时，静置10小时，常规滤纸过滤除去脂类皂化沉淀物，得到滤液；所述裸藻粉、醋酸水溶液、氢氧化钠水溶液的质量体积比为1:4:2.5g/ml/ml；
s4向滤液中加入无水乙醇，使无水乙醇在溶液中的质量分数为85％，搅拌均匀，静置8小时，常规滤纸过滤并收集沉淀物，沉淀物在50℃、绝对压力为0.085mpa的条件下减压干燥12h后即得清除体内油脂裸藻提取物。
所述培养基由下述质量千分比的组分制备而成：硝酸铵0.335‰、硫酸铵0.335‰、磷酸二氢钾0.8‰、硫酸镁0.01‰、氯化钙0.02‰、乙二胺四乙酸铁钠0.008‰、硫酸锌0.001‰、钼酸钠0.004‰、硝酸钴0.003‰、维生素b10.0008‰、余量为水。
所述生长促进剂为阿魏酸。
所述抑菌剂为氯霉素和青霉素按质量比1:3混合而成。
实施例3
一种清除体内油脂裸藻提取物的制备方法，包括下述步骤：
s1按培养基配方称取各组分，搅拌混合均匀后在1.05kg/cm2压力下，121.3℃灭菌20min，得到培养基；
s2将裸藻接种至培养基中，通空气保持通气量为1l/min，加入培养基质量0.8％的生长促进剂和培养基质量0.15‰的抑菌剂，在温度为25℃、100转/分、光照下在摇床培养8天，在8000转/分的条件下离心20min，得到的沉淀在50℃、绝对压力为0.085mpa的条件下减压干燥12h后研磨得到裸藻粉；所述裸藻接种体积百分比为5％；所述光照强度为2000lx，光暗比为12l：12d(即12小时光照和12小时黑暗间隔处理)；
s3将裸藻粉加入到温度为40℃、ph值为6.6的醋酸水溶液中，并在40℃下搅拌混合5h，接着加入到温度为40℃、ph值为7.8的氢氧化钠水溶液中并在40℃下搅拌混合3小时，静置10小时，常规滤纸过滤除去脂类皂化沉淀物，得到滤液；所述裸藻粉、醋酸水溶液、氢氧化钠水溶液的质量体积比为1:4:2.5g/ml/ml；
s4向滤液中加入无水乙醇，使无水乙醇在溶液中的质量分数为85％，搅拌均匀，静置8小时，常规滤纸过滤并收集沉淀物，沉淀物在50℃、绝对压力为0.085mpa的条件下减压干燥12h后即得清除体内油脂裸藻提取物。
所述培养基由下述质量千分比的组分制备而成：硝酸铵0.335‰、氯化铵0.335‰、磷酸二氢钾0.8‰、硫酸镁0.01‰、氯化钙0.02‰、乙二胺四乙酸铁钠0.008‰、硫酸锌0.001‰、钼酸钠0.004‰、硝酸钴0.003‰、维生素b10.0008‰、余量为水。
所述生长促进剂为阿魏酸。
所述抑菌剂为氯霉素和青霉素按质量比1:3混合而成。
实施例4
一种清除体内油脂裸藻提取物的制备方法，包括下述步骤：
s1按培养基配方称取各组分，搅拌混合均匀后在1.05kg/cm2压力下，121.3℃灭菌20min，得到培养基；
s2将裸藻接种至培养基中，通空气保持通气量为1l/min，加入培养基质量0.8％的生长促进剂和培养基质量0.15‰的抑菌剂，在温度为25℃、100转/分、光照下在摇床培养8天，在8000转/分的条件下离心20min，得到的沉淀在50℃、绝对压力为0.085mpa的条件下减压干燥12h后研磨得到裸藻粉；所述裸藻接种体积百分比为5％；所述光照强度为2000lx，光暗比为12l：12d(即12小时光照和12小时黑暗间隔处理)；
s3将裸藻粉加入到温度为40℃、ph值为6.6的醋酸水溶液中，并在40℃下搅拌混合5h，接着加入到温度为40℃、ph值为7.8的氢氧化钠水溶液中并在40℃下搅拌混合3小时，静置10小时，常规滤纸过滤除去脂类皂化沉淀物，得到滤液；所述裸藻粉、醋酸水溶液、氢氧化钠水溶液的质量体积比为1:4:2.5g/ml/ml；
s4向滤液中加入无水乙醇，使无水乙醇在溶液中的质量分数为85％，搅拌均匀，静置8小时，常规滤纸过滤并收集沉淀物，沉淀物在50℃、绝对压力为0.085mpa的条件下减压干燥12h后即得清除体内油脂裸藻提取物。
所述培养基由下述质量千分比的组分制备而成：硝酸铵0.18‰、氯化铵0.22‰、硫酸铵0.27‰、磷酸二氢钾0.8‰、硫酸镁0.01‰、氯化钙0.02‰、乙二胺四乙酸铁钠0.008‰、硫酸锌0.001‰、钼酸钠0.004‰、硝酸钴0.003‰、维生素b10.0008‰、余量为水。
所述生长促进剂为阿魏酸。
所述抑菌剂为氯霉素和青霉素按质量比1:3混合而成。
实施例5
一种清除体内油脂裸藻提取物的制备方法，包括下述步骤：
s1按培养基配方称取各组分，搅拌混合均匀后在1.05kg/cm2压力下，121.3℃灭菌20min，得到培养基；
s2将裸藻接种至培养基中，通空气保持通气量为1l/min，加入培养基质量0.8％的生长促进剂和培养基质量0.15‰的抑菌剂，在温度为25℃、100转/分、光照下在摇床培养8天，在8000转/分的条件下离心20min，得到的沉淀在50℃、绝对压力为0.085mpa的条件下减压干燥12h后研磨得到裸藻粉；所述裸藻接种体积百分比为5％；所述光照强度为2000lx，光暗比为12l：12d(即12小时光照和12小时黑暗间隔处理)；
s3将裸藻粉加入到温度为40℃、ph值为6.6的醋酸水溶液中，并在40℃下搅拌混合5h，接着加入到温度为40℃、ph值为7.8的氢氧化钠水溶液中并在40℃下搅拌混合3小时，静置10小时，常规滤纸过滤除去脂类皂化沉淀物，得到滤液；所述裸藻粉、醋酸水溶液、氢氧化钠水溶液的质量体积比为1:4:2.5g/ml/ml；
s4向滤液中加入无水乙醇，使无水乙醇在溶液中的质量分数为85％，搅拌均匀，静置8小时，常规滤纸过滤并收集沉淀物，沉淀物在50℃、绝对压力为0.085mpa的条件下减压干燥12h后即得清除体内油脂裸藻提取物。
所述培养基由下述质量千分比的组分制备而成：硝酸铵0.18‰、氯化铵0.22‰、硫酸铵0.27‰、磷酸二氢钾0.8‰、硫酸镁0.01‰、氯化钙0.02‰、乙二胺四乙酸铁钠0.008‰、硫酸锌0.001‰、钼酸钠0.004‰、硝酸钴0.003‰、维生素b10.0008‰、余量为水。
所述生长促进剂为草鱼皮酶解物。
所述草鱼皮酶解物的制备方法如下：
将草鱼皮粉碎后过5目的网筛，得到的草鱼皮粒，按质量比1:3将草鱼皮粒投入蒸馏水中，用摩尔浓度为1mol/l的naoh水溶液调ph至9.5，在200转/分、100℃下保温10min，冷却至45℃，加入1.0wt％的碱性蛋白酶，在200转/分、45℃的条件下酶解80min，酶解完成后在100℃下保温10min灭酶，然后在8000转/分的条件下离心10min，取上清液，真空冷冻干燥得到草鱼皮酶解物；所述真空冷冻干燥的条件是控制物料厚度8mm，设定预冻温度为-20℃，当样品温度降到-20℃后保持2h，设定升华温度为11℃，解析温度为35℃，绝对压强为40pa，干燥24h。
所述抑菌剂为氯霉素和青霉素按质量比1:3混合而成。
实施例6
一种清除体内油脂裸藻提取物的制备方法，包括下述步骤：
s1按培养基配方称取各组分，搅拌混合均匀后在1.05kg/cm2压力下，121.3℃灭菌20min，得到培养基；
s2将裸藻接种至培养基中，通空气保持通气量为1l/min，加入培养基质量0.8％的生长促进剂和培养基质量0.15‰的抑菌剂，在温度为25℃、100转/分、光照下在摇床培养8天，在8000转/分的条件下离心20min，得到的沉淀在50℃、绝对压力为0.085mpa的条件下减压干燥12h后研磨得到裸藻粉；所述裸藻接种体积百分比为5％；所述光照强度为2000lx，光暗比为12l：12d(即12小时光照和12小时黑暗间隔处理)；
s3将裸藻粉加入到温度为40℃、ph值为6.6的醋酸水溶液中，并在40℃下搅拌混合5h，接着加入到温度为40℃、ph值为7.8的氢氧化钠水溶液中并在40℃下搅拌混合3小时，静置10小时，常规滤纸过滤除去脂类皂化沉淀物，得到滤液；所述裸藻粉、醋酸水溶液、氢氧化钠水溶液的质量体积比为1:4:2.5g/ml/ml；
s4向滤液中加入无水乙醇，使无水乙醇在溶液中的质量分数为85％，搅拌均匀，静置8小时，常规滤纸过滤并收集沉淀物，沉淀物在50℃、绝对压力为0.085mpa的条件下减压干燥12h后即得清除体内油脂裸藻提取物。
所述培养基由下述质量千分比的组分制备而成：硝酸铵0.18‰、氯化铵0.22‰、硫酸铵0.27‰、磷酸二氢钾0.8‰、硫酸镁0.01‰、氯化钙0.02‰、乙二胺四乙酸铁钠0.008‰、硫酸锌0.001‰、钼酸钠0.004‰、硝酸钴0.003‰、维生素b10.0008‰、余量为水。
所述生长促进剂为草鱼皮酶解物和阿魏酸按质量比3.5:1混合而成。
所述草鱼皮酶解物的制备方法如下：
将草鱼皮粉碎后过5目的网筛，得到的草鱼皮粒，按质量比1:3将草鱼皮粒投入蒸馏水中，用摩尔浓度为1mol/l的naoh水溶液调ph至9.5，在200转/分、100℃下保温10min，冷却至45℃，加入1.0wt％的碱性蛋白酶，在200转/分、45℃的条件下酶解80min，酶解完成后在100℃下保温10min灭酶，然后在8000转/分的条件下离心10min，取上清液，真空冷冻干燥得到草鱼皮酶解物；所述真空冷冻干燥的条件是控制物料厚度8mm，设定预冻温度为-20℃，当样品温度降到-20℃后保持2h，设定升华温度为11℃，解析温度为35℃，绝对压强为40pa，干燥24h。
所述抑菌剂为氯霉素和青霉素按质量比1:3混合而成。
对照例1
一种清除体内油脂裸藻提取物的制备方法，包括下述步骤：
s1按培养基配方称取各组分，搅拌混合均匀后在1.05kg/cm2压力下，121.3℃灭菌20min，得到培养基；
s2将裸藻接种至培养基中，通空气保持通气量为1l/min，加入培养基质量0.15‰的抑菌剂，在温度为25℃、100转/分、光照下在摇床培养8天，在8000转/分的条件下离心20min，得到的沉淀在50℃、绝对压力为0.085mpa的条件下减压干燥12h后研磨得到裸藻粉；所述裸藻接种体积百分比为5％；所述光照强度为2000lx，光暗比为12l：12d(即12小时光照和12小时黑暗间隔处理)；
s3将裸藻粉加入到温度为40℃、ph值为6.6的醋酸水溶液中，并在40℃下搅拌混合5h，接着加入到温度为40℃、ph值为7.8的氢氧化钠水溶液中并在40℃下搅拌混合3小时，静置10小时，常规滤纸过滤除去脂类皂化沉淀物，得到滤液；所述裸藻粉、醋酸水溶液、氢氧化钠水溶液的质量体积比为1:4:2.5g/ml/ml；
s4向滤液中加入无水乙醇，使无水乙醇在溶液中的质量分数为85％，搅拌均匀，静置8小时，常规滤纸过滤并收集沉淀物，沉淀物在50℃、绝对压力为0.085mpa的条件下减压干燥12h后即得清除体内油脂裸藻提取物。
所述培养基由下述质量千分比的组分制备而成：硝酸铵0.18‰、氯化铵0.22‰、硫酸铵0.27‰、磷酸二氢钾0.8‰、硫酸镁0.01‰、氯化钙0.02‰、乙二胺四乙酸铁钠0.008‰、硫酸锌0.001‰、钼酸钠0.004‰、硝酸钴0.003‰、维生素b10.0008‰、余量为水。
所述抑菌剂为氯霉素和青霉素按质量比1:3混合而成。
测试例1
动物模型治疗效果
1、试验动物
健康小白鼠共180只，雌雄各半，体重范围是20～28g。随机分成九组，其中正常组1组，模型组1组，治疗组7组，每组20只小白鼠。
2、动物试验方法
对小鼠称体重，模型组和治疗组用四氧嘧啶腹腔注射，剂量为220mg/kg体重，48小时后，测定空腹6小时血糖，空腹血糖≥8.0mmol/l为建模成功。治疗组1～7分别用本发明实施例1～6及对照例1中清除体内油脂裸藻提取物的水溶液(浓度为0.8mg/ml)治疗，每只灌胃0.4ml，每天一次，连续7天，模型组用等量蒸馏水灌胃，测定造模前后，实验结束的空腹血糖，每组取平均值。
3、试验结果
(1)血糖变化
由表1可以看出，造模后的模型组和治疗组小鼠的血糖明显升高，在使用本发明的裸藻提取物后，治疗组的小鼠血糖明显下降。
测试例2
1、实验材料
1.1实验动物
sd大鼠，体重200±20g，雄性，军事医学科学院医学实验动物中心繁殖提供。
1.2实验试剂和药品
实施例1～6、对比例1制得的清除体内油脂裸藻提取物的水溶液(浓度为0.8mg/ml)，辛伐他汀片(批准文号：国药准字h20083593生产厂家：山西云鹏制药有限公司)，血清总胆固醇(tc)、甘油三酯(tg)、测定试剂盒。
2、实验方法
2.1饲养条件
动物实验室空气定时排风、光照良好，常温。每笼饲养10只动物，饲以常规膨化饲料，自由饮水。试验开始前，观察动物进食、活动及粪便等1周，选择健康动物进入试验。
2.2实验动物的分组
健康雄性sd大鼠200只，随机分成10组，每组20只：空白对照组、模型对照组、辛伐他汀组、实施例1组、实施例2组、实施例3组、实施例4组、实施例5组、实施例6组以及对照例1组。空白对照组大鼠正常饮食，其他组均采用高脂血症大鼠模型。
2.3大鼠高脂血症模型制备及给药
大鼠高脂血症模型采用高脂饲料致高脂血症法。高脂饲料配方如下(质量百分比)：基础饲料86.3％、胆固醇3％、猪油10％、甲基硫氧嘧啶0.2％、猪胆盐0.5％，保证各成分混合均匀。连续喂食14天高脂饲料。给药期间隔天给予高脂饲料。
临床拟用的给药途径为口服，故本试验采用灌胃法给药。连续喂食14天高脂饲料后，第15天开始灌胃给药，连续灌胃给药20天，灌胃均在动物进食后进行。各组分别给予下述受试药物：
空白对照组：正常饮食，不给药；
模型对照组：灌胃给予生理盐水40.0mg/(kg·d)；
辛伐他汀组：灌胃给予辛伐他汀0.18mg/(kg·d)；
实施例1组：灌胃给予本发明实施例1的清除体内油脂裸藻提取物的水溶液40.0ml/(kg·d)；
实施例2组：灌胃给予本发明实施例2的清除体内油脂裸藻提取物的水溶液40.0ml/(kg·d)；
实施例3组：灌胃给予本发明实施例3的清除体内油脂裸藻提取物的水溶液40.0ml/(kg·d)；
实施例4组：灌胃给予本发明实施例4的清除体内油脂裸藻提取物的水溶液40.0ml/(kg·d)；
实施例5组：灌胃给予本发明实施例5的清除体内油脂裸藻提取物的水溶液40.0ml/(kg·d)；
实施例6组：灌胃给予本发明实施例6的清除体内油脂裸藻提取物的水溶液40.0ml/(kg·d)；
对比例1组：灌胃给予本发明对比例1的清除体内油脂裸藻提取物的水溶液40.0ml/(kg·d)；
3、检测指标
大鼠灌胃给药20天后，从第21天起，禁食24小时，实验前用水合氯醛400mg/kg体重标准剂量经大鼠腹腔麻醉，剃毛，打开胸腔，暴露心脏，于心尖处偏右心室采血7ml，在常温下3000rpm离心15分钟，分离血清测定血清中的tc、tg的指标。
血脂测定：测定血清tg、tc。
表2本发明裸藻提取物对高脂血症大鼠模型血清总胆固醇、甘油三酯的影响(p＜0.01)
由表2可知：模型对照组大鼠tg和tc含量明显高于空白对照组(p<0.01)，证明高血脂大鼠模型造模成功；辛伐他汀组和实施例1～6组及对比例1组的tg和tc含量明显低于模型组(p<0.01)，证明治疗有效，且实施例1组的tg和tc含量更低，接近正常小鼠。
以上对本发明进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。