一种提高灯盏花药效成分的方法及成分检测方法与流程

本发明涉及中草药种植技术领域，具体为一种提高灯盏花药效成分的方法及成分检测方法。

背景技术

灯盏花又名灯盏细辛或短葶飞蓬，为菊科飞蓬属多年生草本植物，干燥全草入药，主要有效成分为灯盏乙素和咖啡酸酯。灯盏花素是从天然植物灯盏花中提取的黄酮类活性成分，具有扩张血管、增加脑血流量和心脏冠脉流量、降低血液黏度、改善微循环等作用，是治疗缺血性心脑血管疾病的有效药物。其主要有效成分为灯盏乙素，此外还含有少量灯盏甲素。灯盏乙素为黄酮苷元，难溶于水且不稳定，口服生物利用度很低，研究结果表明灯盏花素在大鼠小肠主要以被动扩散方式吸收，提高药物溶解度将能有效地促进灯盏花素的吸收，达到提高生物利用度的目的。

生产上，提高灯盏花有效活性成分含量是我们一直所关注的问题之一，外源物质提高植物次生代谢产物已有大量报道。外源物质是营养元素、植物生长调节剂、诱导子等许多外界存在而非机体内部所产生化学物质的总称，普遍具有促进植物生长，提高植物抗性，增加自身次生代谢物等作用，因其用量小、见效快、效益高，深受人们关注。许多植物的药用活性成分是植物自身所含的次生代谢物质，这些次生代谢物包括黄酮类、生物碱类、皂苷类、萜类、酯类、酚酸类、苯丙素类、香豆素类、醌类等，其中大多数具有药理活性。近年来，随着中药材行业的发展，外源物质对药用植物次生代谢物积累的研究成为热点。

外源施加水杨酸(salicylicacid,sa)可以促进丹参酮类物质的积累，还能明显促进人参中rb、re、rg和rd四种单体皂苷的积累。rodriguez等研究发现，外源施加赤霉素(gibberellins或gibberellicacid,ga)可以增加水稻(oryzasativa)幼芽的长度和干重、提高类胡萝卜素的含量。脱落酸(abscisicacid,aba)可以促进丹参酮物质的积累。此外，研究发现aba增加长春质碱和文多灵的积累。茉莉酸甲酯(methyljasmonate,meja)促进颠茄(atropabelladonnal)东莨菪碱和莨菪碱积累；还能提高甜叶菊(steviarebaudiana)毛状根中绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸和4,5-二咖啡酰奎宁酸三种绿原酸类物质的含量。萘乙酸(naphthylaceticacid,naa)可促进何首乌毛状根的生长以及蒽醌类物质的生物合成。过氧化氢(hydrogenperoxide,h2o2)有利于药用植物中黄酮类、生物碱类物质的合成。

技术实现要素：

为了克服上述技术问题，本发明的目的在于提供一种提高灯盏花药效成分的方法及成分检测方法。

根据本发明的一个目的，本发明提供如下技术方案：

一种提高灯盏花药效成分的方法，包括如下步骤：

步骤一，溶液配制：分别配制20mmol/l的水杨酸溶液、赤霉素溶液、萘乙酸溶液、脱落酸溶液、茉莉酸甲酯溶液或过氧化氢溶液；

步骤二，花苗选择:选择2～3个月龄灯盏花穴盘苗；

步骤三，溶液喷洒:分别取配制好的水杨酸溶液、赤霉素溶液、萘乙酸溶液、脱落酸溶液、茉莉酸甲酯溶液或过氧化氢溶液，稀释100倍配制成200umol/l溶液，装入喷壶喷洒灯盏花穴盘苗；喷洒量为200ml，每12小时喷洒一次，连续均匀喷洒7天；

步骤四，成分检测：采集灯盏花叶片，微波杀青5min，hplc检测灯盏乙素、绿原酸、3，5-二咖啡酰喹啉酸、飞蓬酯乙含量。

根据本发明的另一个目的，提供一种检测上述灯盏花有效成分的检测方法，包括如下步骤：

(1)研钵磨样：将杀青干燥后的灯盏花叶片用磨成粉末；

(2)上机检测：称取0.3～0.4g灯盏花样品，50ml甲醇溶解30min，超声提取30min，静置冷却到室温后过滤，上样；色谱条件为a、b两相流动相，a相为乙腈，b相为0.3％磷酸水溶液；进样量10μl，流速1ml/min，检测波长335nm，柱温30℃；梯度洗脱(0～10min，12％～15％a，10～32min，15％a，32～33min，15％～20％a，33～50min，20％～22％a)；

(3)数据处理：用外标法计算se、cga、3,5-dicqa、eb的百分含量，以spss20.0做方差显著性分析。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

本发明示例的一种提高灯盏花药效成分的方法，通过对灯盏花喷洒有机溶液，可以有效提高灯盏花内的灯盏乙素、绿原酸、3，5-二咖啡酰喹啉酸、飞蓬酯乙含量，提高灯盏花的药用价值。

附图说明

图1是本发明实施例中灯盏花各有效成分部分高效液相图谱。

图中，se(scutellarin)表示灯盏乙素；cga(chlorogenicacids)表示绿原酸3,5-dicqa(3,5-dicaffeoylquinicacid)表示3,5-二咖啡酰奎宁酸，eb(erigosterb)表示飞蓬酯乙。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

一种提高灯盏花药效成分的方法，包括如下步骤：

步骤1，溶液配制：

分别用分析天平精密称取0.2762g水杨酸、0.6927g赤霉素、0.3724g萘乙酸和0.528g脱落酸分别倒入烧杯中配制成20mmol/l的溶液，

其中，水杨酸和赤霉素分别加1ml无水乙醇助溶，萘乙酸加30ml无水乙醇助溶，脱落酸用1mol/l的naoh溶解后再用蒸馏水定容至100ml容量瓶中，再倒入100ml蓝盖瓶，用锡箔纸包裹瓶身，瓶身锡箔纸作好标记，4℃冰箱保存。

茉莉酸甲酯和30％过氧化氢为液体，储存于4℃冰箱中，现配现用。

步骤二，花苗选择；选择2～3个月龄灯盏花穴盘苗；按常规进行相应的浇水和管理工作；规格25×13孔，采自宣威市龙津生物科技有限责任公司的在宣威市热水镇的种植基地。

步骤三，溶液喷洒:分别取水杨酸溶液、赤霉素溶液、萘乙酸溶液、脱落酸溶液2ml，加水定容至200ml。30％过氧化氢的摩尔浓度为10mmol/l，取200μl过氧化氢，加水定容到200ml，茉莉酸甲酯的摩尔浓度为200μmol/l，配制200ml茉莉酸甲酯溶液，95％茉莉酸甲酯用量为9.17μl，加入500μl0.25％的乙醇做助溶剂，再加水定容至200ml。

以上稀释溶液分别装入喷壶喷洒灯盏花穴盘苗；每12小时喷洒一次，连续均匀喷洒7天。

步骤四，成分检测：采集灯盏花叶片，微波杀青5min，hplc检测灯盏乙素、绿原酸、3，5-二咖啡酰喹啉酸、飞蓬酯乙含量。

一种检测上述灯盏花有效成分的检测方法，包括如下步骤：

(1)选取2个月龄灯盏花穴盘苗，分别喷洒上述浓度的水杨酸溶液、赤霉素溶液、萘乙酸溶液、脱落酸溶液、茉莉酸甲酯溶液或过氧化氢溶液，并设置一个不喷洒溶液的空白对照组；

(2)研钵磨样：摘取各组的灯盏花叶片，将杀青干燥后的灯盏花叶片用磨成粉末；

(3)上机检测：称取0.3～0.4g灯盏花样品，50ml甲醇溶解30min，超声提取30min，静置冷却到室温后过滤，上样；色谱条件为a、b两相流动相，a相为乙腈，b相为0.3％磷酸水溶液；进样量10μl，流速1ml/min，检测波长335nm，柱温30℃；梯度洗脱(0～10min，12％～15％a，10～32min，15％a，32～33min，15％～20％a，33～50min，20％～22％a)；

(4)数据处理：用外标法计算se、cga、3,5-dicqa、eb的百分含量，以spss20.0做方差显著性分析。部分高效液相图谱如图1所示；

数据分析如下表，

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。