本发明涉及生物制品
技术领域：
，特别是涉及一种抗老化黑姜提取物及其制备方法。
背景技术：
：黑姜，学名kaempferiaparviflorawall.exbraker，属于姜科植物，在日本也被称为黑郁金。黑姜以东南亚为中心自生或者栽培，因为可以很容易地获得。在泰国黑姜被视为传统草药的一种，是当地自古以来就日常食用的传统食材。在当地民间，黑姜就被用来滋养强壮、增强精力、降低血糖、恢复体力、改善循环、改善消化不良等。姜科植物主要分为姜属、姜黄属和黑姜属三种。姜属植物的主要特殊成分为姜油，其功效是改善血流，具有发汗作用，常被用于熏香、精油等产品中。姜黄属植物的主要特殊成分为姜黄，其功效是改善肝功能，预防老年性痴呆。黑姜属植物的主要特殊成分为多甲氧基类黄酮，其功效是抗氧化，扩张血管，抗过敏，抗肥胖，预防老化。据报道称多甲氧基类黄酮可以活化长寿基因，抗老化功效是白芦藜醇的15倍。但是由于多甲氧基类黄酮为脂溶性物质，而且黑姜中除了含有多甲基氧黄酮以外，还含有果胶、蛋白质、黄酮苷等大极性物质，以及香精油、脂溶性色素等小极性物质，这无疑加大了黑姜提取物在提取和后期分离纯化的难度。申请号为201580026991.3的发明专利公开了一种黑姜油脂提取物及其制造方法，其首先使水、亲水性溶剂或者它们的混合物接触黑姜，提取甲氧基黄酮，获得中间提取物，然后使得大豆油等油脂接触中间提取物，从而达到提取甲氧基黄酮的目的。但是该方法的缺点是油脂的成分复杂，这导致提取甲氧基黄酮的同时，引入了其他难以除去的杂质。技术实现要素：本发明的第一目的在于提供一种抗老化提取物的制备方法，以黑姜有效部位作为原料，将黑姜有效部位液氮冷冻后，破碎成粉，获得黑姜粉；然后利用黑姜粉进行提取，获得抗老化黑姜提取物。本发明公开一种抗老化黑姜提取物的制备方法，包括以下步骤：步骤1：以黑姜有效部位作为原料，将黑姜有效部位放入液氮中，保持冷冻3～10分钟；将冻实的黑姜有效部位取出，破碎成粉，过筛，获得黑姜粉；步骤2：称取黑姜粉，按照料液比1：(10～20)(g/ml)加入乙酸乙酯，于80～90℃回流提取4～8小时，收集提取液；向提取液中加入等体积的水萃取0.5～1.5小时，分离上层的乙酸乙酯相和下层的水相；将上层的乙酸乙酯相减压干燥除去乙酸乙酯，然后真空冷冻干燥，得到所述抗老化黑姜提取物。本发明公开一种抗老化黑姜提取物的制备方法，包括以下步骤：步骤1：以黑姜有效部位作为原料，将黑姜有效部位放入液氮中，保持冷冻3～10分钟；将冻实的黑姜有效部位取出，破碎成粉，过筛，获得黑姜粉；步骤2：称取黑姜粉，按照料液比1：(100～150)(g/ml)加入摩尔浓度0.5～1.5mol/l溴化吡啶盐水溶液，在微波功率300～400w、温度40～60℃的条件下微波萃取5～10分钟，而后自然降温至20～30℃，收集微波萃取液；步骤3：将微波萃取液真空冷冻干燥，得到微波萃取浓缩物；将微波萃取浓缩物柱层析分离，以硅胶为柱填料，以乙酸乙酯为洗脱剂，收集乙酸乙酯洗脱液；将乙酸乙酯洗脱液减压干燥除去乙酸乙酯，然后真空冷冻干燥，得到所述抗老化黑姜提取物。本发明公开一种抗老化黑姜提取物的制备方法，包括以下步骤：步骤1：以黑姜有效部位作为原料，将黑姜有效部位放入液氮中，保持冷冻3～10分钟；将冻实的黑姜有效部位取出，破碎成粉，过筛，获得黑姜粉；步骤2：称取黑姜粉，按照料液比1：(100～150)(g/ml)加入摩尔浓度0.5～1.5mol/l溴化吡啶盐水溶液，在微波功率300～400w、温度40～60℃的条件下微波萃取5～10分钟，而后自然降温至20～30℃，收集微波萃取液；步骤3：将微波萃取液真空冷冻干燥，得到微波萃取浓缩物；将微波萃取浓缩物柱层析分离，以硅胶为柱填料，以乙酸乙酯为洗脱剂，收集乙酸乙酯洗脱液；将乙酸乙酯洗脱液减压干燥除去乙酸乙酯，然后真空冷冻干燥，得到乙酸乙酯提取物；步骤4：将乙酸乙酯提取物用正己烷和体积分数40～90％的乙醇以体积比1：(0.5～1.5)萃取2～4小时，分离上层的正己烷相和下层的乙醇相，将下层的乙醇相减压干燥去除乙醇后，真空冷冻干燥，得到所述抗老化黑姜提取物。本发明公开一种抗老化黑姜提取物的制备方法，包括以下步骤：步骤1：以黑姜有效部位作为原料，将黑姜有效部位放入液氮中，保持冷冻3～10分钟；将冻实的黑姜有效部位取出，破碎成粉，过筛，获得黑姜粉；步骤2：称取黑姜粉，按照料液比1：(100～150)(g/ml)加入摩尔浓度0.5～1.5mol/l溴化吡啶盐水溶液，在微波功率300～400w、温度40～60℃的条件下微波萃取5～10分钟，而后自然降温至20～30℃，收集微波萃取液；步骤3：将微波萃取液真空冷冻干燥，得到微波萃取浓缩物；将微波萃取浓缩物柱层析分离，以硅胶为柱填料，以乙酸乙酯为洗脱剂，收集乙酸乙酯洗脱液；将乙酸乙酯洗脱液减压干燥除去乙酸乙酯，然后真空冷冻干燥，得到乙酸乙酯提取物；步骤4：将乙酸乙酯提取物按重量分为三等份；将第一份乙酸乙酯提取物用正己烷和ph2.0的体积分数40～90％的乙醇以固液比1：(20～40)：(20～40)(g/ml/ml)萃取2～4小时，分离上层的正己烷相和下层的乙醇相，将下层的乙醇相标记为乙醇提取液ⅰ；将第二份乙酸乙酯提取物用正己烷和ph7.5的体积分数40～90％的乙醇以固液比1：(20～40)：(20～40)(g/ml/ml)萃取2～4小时，分离上层的正己烷相和下层的乙醇相，将下层的乙醇相标记为乙醇提取液ⅱ；将第三份乙酸乙酯提取物用正己烷和ph8.3的体积分数40～90％的乙醇以固液比1：(20～40)：(20～40)(g/ml/ml)萃取2～4小时，分离上层的正己烷相和下层的乙醇相，将下层的乙醇相标记为乙醇提取液ⅲ；合并乙醇提取液ⅰ、乙醇提取液ⅱ和乙醇提取液ⅲ，减压干燥去除乙醇后，真空冷冻干燥，得到所述抗老化黑姜提取物。本发明中ph2.0的体积分数70％的乙醇，ph7.5的体积分数70％的乙醇，以及ph8.3的体积分数70％的乙醇，使用1mol/l的盐酸或者1mol/l的氢氧化钠水溶液调节得到。所述黑姜有效部位为黑姜叶部、花部、根茎部中的一种或多种的混合物。所述溴化吡啶盐为溴化1-乙基吡啶、溴化1-正丁基吡啶、溴化1-正己基吡啶、溴化1-正辛基吡啶、溴化1-正癸基吡啶、溴化1-正十二烷基吡啶中的一种或多种的混合物。分别采用溴化1-乙基吡啶、溴化1-正丁基吡啶、溴化1-正己基吡啶、溴化1-正辛基吡啶、溴化1-正癸基吡啶、溴化1-正十二烷基吡啶作为溴化吡啶盐，按照以下步骤进行提取：称取黑姜粉，按照料液比1：130(g/ml)加入摩尔浓度1mol/l的溴化吡啶盐水溶液，在微波功率400w、温度50℃的条件下微波萃取5分钟，而后自然降温至26℃，收集微波萃取液；将微波萃取液真空冷冻干燥，得到微波萃取浓缩物。按照以下公式计算提取率：提取率(％)＝微波萃取浓缩物重量/黑姜有效部位重量×100％。经计算，提取率依次为10.3％、13.1％、16.6％、16.9％、19.8％、14.9％。因此得出结论：所述溴化吡啶盐优选为溴化1-正癸基吡啶。这可能是因为溴化吡啶盐烷基链的长短，一方面影响了溴化吡啶盐水溶液的极性，进一步影响了多甲基类黄酮有效成分的溶出；另一方面烷基链长短的变化，导致溴化吡啶盐水溶液的破壁能力也发生变化；综合两者的共同作用，选择溴化1-正癸基吡啶作为溴化吡啶盐进行提取。本发明的第二目的在于提供一种抗老化黑姜提取物，采用上述任一种抗老化黑姜提取物的制备方法加工得到。所述黑姜提取物可加工成黑姜提取物软胶囊、黑姜提取物硬胶囊、黑姜提取物颗粒剂、黑姜提取物片剂的形式。在本发明的具体应用例中，公开了一种黑姜提取物颗粒剂的制备方法。所述黑姜提取物颗粒剂的制备方法为：称取淀粉2～3g、填充剂20～40g、枸橼酸0.5～1.5g、薄荷脑0.1～0.3g，粉碎过筛后，混合均匀，得到辅料；取抗老化黑姜提取物70～100g，加入到辅料中，混合均匀后，再加入1.5～4g的聚乙烯吡咯烷酮作为粘合剂，充分混合，采用湿法制粒，过筛，干燥后进行整粒，得到所述抗老化黑姜提取物颗粒剂。所述填充剂为赤藓糖醇和/或甘露醇。优选地，所述填充剂为赤藓糖醇和甘露醇以重量比(1～3)：1组成的混合物。本发明相对于现有技术具有以下优点：1、本发明中采用液氮冷冻打粉对黑姜进行处理，与烘干打粉、破碎匀浆等其他方式相比，液氮冷冻打粉可以保持黑姜中化学成分的稳定性，避免多甲氧基黄酮等活性物质在干燥的过程中发生去甲基反应，从而影响其使用功效。2、区别于传统采用乙酸乙酯或者乙醇直接进行提取的方式，本发明使用溴化吡啶盐水溶液作为提取溶剂，提取时间明显缩短，这可能是由于溴化吡啶盐水溶液不仅可以促进黑姜中多甲氧基类黄酮的溶出，还可以加快黑姜的破壁。3、黑姜中的特殊成分为多甲氧基类黄酮，其为脂溶性的物质，使用离子液体进行提取虽然能促使多甲氧基类黄酮的溶出，但是同时会把水溶性的多糖和胶质等杂质同时溶入提取液中。本发明中采用中等极性的有机溶剂乙酸乙酯作为洗脱剂，除去水溶性的多糖和胶质，然后采用正己烷-乙醇进行二次萃取，正己烷将小极性的香精油和脂溶性色素萃出，而具有相对中等极性的多甲氧基类黄酮物质则富集在醇相中。本发明选择乙醇作为二次萃取溶剂的另一原因在于，多甲基类黄酮和乙醇接触可以发生羟基化，羟基化的多甲基类黄酮具有更好的溶解性和渗透性。4、ph2.0、ph7.5、ph8.3分别是人体胃液、小肠液、大肠液的体液酸度。本发明中将黑姜的乙酸乙酯提取物与用不同酸碱度的乙醇进行萃取，然后混合，模仿黑姜提取物在人体胃肠道中的口服给药环境，选用特定ph的乙醇进进行萃取，混合得到活性黑姜提取物混合体，使生物体可以最大限度地实现对黑姜提取物活性成分的吸收。本发明得到的抗老化黑姜提取物是深受喜爱的的长寿食材，可通过抑制蛋白质非酶糖化反应阻止糖基化产物的产生，从而降低与年龄相关的慢性疾病及蛋白质老化的发生率；此外，还对学习记忆障碍具有显著的改善作用，增强脑自由基清除能力，改善海马神经元的变性脱落。具体实施方式实施例中原料介绍如下：黑姜，学名kaempferiaparviflorawall.exbraker，原产地泰国。溴化1-正癸基吡啶，购于成都嘉叶生物科技有限公司，并使用核磁进行结构确认：1hnmr(600mhz,dmso)δ9.24(s,2h,n＝ch-)，8.65(d,j＝1.0hz,1h,＝ch-)，8.19(d,j＝13.4hz,2h,＝ch-)，4.67(t,j＝10.4hz,2h,＝nch2-)，1.94-1.85(m,2h,-ch2-)，1.24(m,14h,-(ch2)7-)，0.83(t,j＝5.3hz,-ch3)。在实施例中未作具体说明的情况下，实施例中真空冷冻干燥的具体工艺为：预冻温度-80℃，预冻时间1.5小时，冷冻温度-70℃，绝对压强100pa，冷冻时间48小时。实施例1抗老化黑姜提取物的制备方法，包括以下步骤：步骤1：以黑姜根茎作为原料，将黑姜根茎放入液氮中，保持冷冻10分钟；将冻实的黑姜根茎取出，用打粉机破碎成粉，过80目筛，获得黑姜粉；步骤2：称取黑姜粉，按照料液比1：10(g/ml)加入乙酸乙酯，于90℃回流提取8小时，收集提取液；向提取液中加入等体积的水萃取1小时，分离上层的乙酸乙酯相和下层的水相；将上层的乙酸乙酯相于50℃、绝对压强0.03mpa的条件下减压干燥除去乙酸乙酯，然后真空冷冻干燥，得到所述抗老化黑姜提取物。实施例2抗老化黑姜提取物的制备方法，包括以下步骤：步骤1：以黑姜根茎作为原料，将黑姜根茎放入液氮中，保持冷冻10分钟；将冻实的黑姜根茎取出，用打粉机破碎成粉，过80目筛，获得黑姜粉；步骤2：称取黑姜粉，按照料液比1：130(g/ml)加入摩尔浓度1mol/l的溴化1-正癸基吡啶水溶液，在微波功率400w、温度50℃的条件下微波萃取5分钟，而后自然降温至26℃，收集微波萃取液；步骤3：将微波萃取液真空冷冻干燥，得到微波萃取浓缩物；将微波萃取浓缩物柱层析分离，以硅胶为柱填料，微波萃取浓缩物和硅胶的重量比为1：1，以乙酸乙酯为洗脱剂，微波萃取浓缩物和乙酸乙酯的固液比为1：5(g/ml)，洗脱流速为1ml/min，收集乙酸乙酯洗脱液；将乙酸乙酯洗脱液于50℃、绝对压强0.03mpa的条件下减压干燥除去乙酸乙酯，然后真空冷冻干燥，得到所述抗老化黑姜提取物。实施例3抗老化黑姜提取物的制备方法，包括以下步骤：步骤1：以黑姜根茎作为原料，将黑姜根茎放入液氮中，保持冷冻10分钟；将冻实的黑姜根茎取出，用打粉机破碎成粉，过80目筛，获得黑姜粉；步骤2：称取黑姜粉，按照料液比1：130(g/ml)加入摩尔浓度1mol/l的溴化1-正癸基吡啶水溶液，在微波功率400w、温度50℃的条件下微波萃取5分钟，而后自然降温至26℃，收集微波萃取液；步骤3：将微波萃取液真空冷冻干燥，得到微波萃取浓缩物；将微波萃取浓缩物柱层析分离，以硅胶为柱填料，微波萃取浓缩物和硅胶的重量比为1：1，以乙酸乙酯为洗脱剂，微波萃取浓缩物和乙酸乙酯的固液比为1：5(g/ml)，洗脱流速为1ml/min，收集乙酸乙酯洗脱液；将乙酸乙酯洗脱液于50℃、绝对压强0.03mpa的条件下减压干燥除去乙酸乙酯，然后真空冷冻干燥，得到乙酸乙酯提取物；步骤4：将乙酸乙酯提取物用正己烷和体积分数70％的乙醇以体积比1：1萃取2小时，乙酸乙酯提取物和正己烷的固液比为1：30(g/ml)，分离上层的正己烷相和下层的乙醇相，将下层的乙醇相于50℃、绝对压强0.03mpa的条件下减压干燥去除乙醇后，真空冷冻干燥，得到所述抗老化黑姜提取物。实施例4抗老化黑姜提取物的制备方法，包括以下步骤：步骤1：以黑姜根茎作为原料，将黑姜根茎放入液氮中，保持冷冻10分钟；将冻实的黑姜根茎取出，用打粉机破碎成粉，过80目筛，获得黑姜粉；步骤2：称取黑姜粉，按照料液比1：130(g/ml)加入摩尔浓度1mol/l的溴化1-正癸基吡啶水溶液，在微波功率400w、温度50℃的条件下微波萃取5分钟，而后自然降温至26℃，收集微波萃取液；步骤3：将微波萃取液真空冷冻干燥，得到微波萃取浓缩物；将微波萃取浓缩物柱层析分离，以硅胶为柱填料，微波萃取浓缩物和硅胶的重量比为1：1，以乙酸乙酯为洗脱剂，微波萃取浓缩物和乙酸乙酯的固液比为1：5(g/ml)，洗脱流速为1ml/min，收集乙酸乙酯洗脱液；将乙酸乙酯洗脱液于50℃、绝对压强0.03mpa的条件下减压干燥除去乙酸乙酯，然后真空冷冻干燥，得到乙酸乙酯提取物；步骤4：将乙酸乙酯提取物按重量分为三等份；将第一份乙酸乙酯提取物用正己烷和ph2.0的体积分数70％的乙醇以固液比1：30：30(g/ml/ml)萃取2小时，分离上层的正己烷相和下层的乙醇相，将下层的乙醇相标记为乙醇提取液ⅰ；将第二份乙酸乙酯提取物用正己烷和ph7.5的体积分数70％的乙醇以固液比1：30：30(g/ml/ml)萃取2小时，分离上层的正己烷相和下层的乙醇相，将下层的乙醇相标记为乙醇提取液ⅱ；将第三份乙酸乙酯提取物用正己烷和ph8.3的体积分数70％的乙醇以固液比1：30：30(g/ml/ml)萃取2小时，分离上层的正己烷相和下层的乙醇水相，将下层的乙醇相标记为乙醇提取液ⅲ；合并乙醇提取液ⅰ、乙醇提取液ⅱ和乙醇提取液ⅲ，于50℃、绝对压强0.03mpa的条件下减压干燥去除乙醇后，真空冷冻干燥，得到所述抗老化黑姜提取物。测试例1对实施例1～4抗老化黑姜提取物对蛋白质非酶糖化产物生成的抑制率进行检测。蛋白质非酶糖化是指在非酶促条件下，还原性糖的醛基和蛋白质氨基发生的一系列反应，最终形成非酶糖化终末产物。非酶糖化终末产物能够进一步直接交联体内生物大分子，造成其功能损坏。当积累的非酶糖化终末产物结合人体的胶原蛋白或者弹力蛋白时，又会导致皮肤松弛、肤色黯淡以及出现皱纹等衰老现象。蛋白质非酶糖化反应体系的建立在无菌条件下，用含有8mmol/ledta、100u/ml青霉素和100u/ml链霉素的0.1mol/l、ph7.4的pbs缓冲液溶解牛血清白蛋白和葡萄糖，使得牛血清白蛋白浓度为20g/l，葡萄糖浓度为400mmol/l。同时设置对照组：(1)不加抗老化黑姜提取物完整的糖化反应体系；(2)牛血清白蛋白对照；(3)加抗老化黑姜提取物不加牛血清白蛋白的糖化体系；(4)加抗老化黑姜提取物不加葡萄糖的糖化体系；(5)加抗老化黑姜提取物完整的糖化反应体系。在上述蛋白质非酶糖化反应体系中加入抗老化黑姜提取物或氨基胍硫酸盐(阳性对照组)，使其终浓度为0.1mg/ml，置于37℃恒温干燥箱中避光孵育。20天后测定各管530nm处吸光度a，40天后测定各管荧光强度f，根据下列公式分别计算出对糖化早期产物、高级糖化终末产物的抑制率。糖化早期产物的测定取各组反应液200μl于具塞试管中，加8ml0.1g/lnbt溶液(用0.1mol/l，ph＝10.8的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液配置)混合均匀后置于37℃恒温干燥箱中反应15分钟，然后加入0.4ml15％乙酸并用冷水浴终止反应，冷却后用紫外/可见分光光度计记录其在530nm处的吸光度值a。糖化早期产物抑制率的计算公式如下：ir＝{1-[药物组(5)a-对照组(3)a-对照组(4)a]/[对照组(1)a-对照组(2)a]}×100％。具体测试结果见表1。表1抗老化黑姜提取物对糖化早期产物生成的抑制率糖化终末产物的测定用荧光分光光度计在激发波长370nm、发射波长440nm、狭缝5nm条件下测定各组反应液的荧光强度f。糖化终末产物抑制率的计算公式如下：ir＝{1-[药物组(5)f-对照组(3)f-对照组(4)f]/[对照组(1)f-对照组(2)f]}×100％。具体测试结果见表2。表2抗老化黑姜提取物对糖化终末产物生成的抑制率组别抑制率(％)阳性对照组47.65实施例138.01实施例251.70实施例356.95实施例462.33从上述实验数据可以看出，本发明所述抗老化黑姜提取物对糖化早期产物和糖化终末产物的产生具有一定的抑制作用，这证明抗老化黑姜提取物可以抑制体外非酶糖化，具有作为天然抗氧化剂和免疫调节剂使用，以及抗糖化护肤品、保健品、药物中的潜力。测试例2对实施例1～4抗老化黑姜提取物对小鼠学习记忆能力、超氧化物歧化酶活力及丙二醛含量进行检测。试验动物：昆明种小鼠，体重18～22g，雌雄各半，购于北京维通利华试验动物技术有限公司。记忆巩固障碍小鼠模型的建立及小鼠水迷宫实验：将昆明种小鼠随机分为空白对照组、模型对照组和实施例1-4的试验组，共6组，每组10只，每组雌雄各半。试验组灌胃给予6.66mg/kg剂量的抗老化黑姜提取物，空白对照、模型对照组分别给予等量的蒸馏水，每天1次，连续13天。喂药第10天开始进行水迷宫实验：水迷宫实验持续4天，每天测试1次，每次包括2个入水点；测试时，随机选择无平台象限的入水点，将小鼠面向池壁放入水中，让其自由寻找平台，并在平台上停留20秒，记录其逃避潜伏期；如果小鼠在90秒内未找到平台，则将其引至平台，逃避潜伏期记为90秒。每天取每只小鼠2次逃避潜伏期的平均值作为其一天的学习成绩；每天训练结束后，除空白对照组给予生理盐水外，其余各组小鼠均立即腹腔注射亚硝酸钠120mg/kg。具体测试结果见表3。表3抗老化黑姜提取物对记忆巩固障碍小鼠水迷宫试验逃避潜伏期的影响从上述试验数据可以看出，抗老化黑姜提取物能够显著缩短记忆巩固障碍小鼠水迷宫定向游泳实验的逃避潜伏期，提高亚硝酸钠致记忆巩固障碍小鼠的学习记忆能力。小鼠脑组织中超氧化物歧化酶活力及丙二醛含量的测定水迷宫测试结束后，断头取大脑，用预冷生理盐水冲洗表面血液，滤纸拭干，取一半脑组织，以重量比1：9加入4℃的生理盐水，制成质量分数10％的匀浆，以4000转/分钟于4℃离心15分钟，取上清液，测定超氧化物歧化酶活力及丙二醛含量。超氧化物歧化酶(sod)试剂盒，购于南京建成生物工程研究所。丙二醛(mda)试剂盒，购于南京建成生物工程研究所。具体测试结果见表4。表4抗老化黑姜提取物对记忆巩固障碍小鼠脑组织超氧化物歧化酶活力及丙二醛含量的影响从上述试验数据可以看出，抗老化黑姜提取物能显著降低记忆巩固障碍小鼠丙二醛含量，提高超氧化物歧化酶活力，达到增强小鼠清除自由基的能力。综上所述，抗老化黑姜提取物能提高亚硝酸钠致记忆巩固障碍小鼠的学习记忆能力，其作用机制可能与提高机体自由基清除力，降低自由基水平有关。本发明区别于现有技术，具有以下特点：1、采用液氮冷冻打粉对黑姜进行处理，与烘干打粉、破碎匀浆等其他方式相比，液氮冷冻打粉可以保持黑姜中化学成分的稳定性，避免多甲氧基黄酮等活性物质在干燥的过程中发生去甲基反应，从而影响其使用功效。2、区别于传统采用乙酸乙酯或者乙醇直接进行提取的方式，本发明使用吡啶离子盐水溶液作为提取溶剂，提取时间明显缩短，这可能是由于吡啶离子盐水溶液不仅可以促进黑姜中多甲氧基类黄酮的溶出，还可以加快黑姜的破壁。3、黑姜中的特殊成分为多甲氧基类黄酮，其为脂溶性的物质，使用离子液体进行提取虽然能促使多甲氧基类黄酮的溶出，但是同时会把水溶性的多糖和胶质等杂质同时溶入提取液中。本发明中采用中等极性的有机溶剂乙酸乙酯作为洗脱剂，除去水溶性的多糖和胶质，然后采用正己烷-乙醇进行二次萃取，正己烷将小极性的香精油和脂溶性色素萃出，而具有相对中等极性的多甲氧基类黄酮物质则富集在醇相中。本发明选择乙醇作为二次萃取溶剂的另一原因在于，多甲基类黄酮和乙醇接触可以发生羟基化，羟基化的多甲基类黄酮具有更好的溶解性和渗透性。4、ph2.0、ph7.5、ph8.3是人体胃液、小肠液、大肠液的体液酸度。本发明中将黑姜的乙酸乙酯提取物与用不同酸碱度的乙醇进行萃取，然后混合，模仿黑姜提取物在生物体胃肠道中的口服给药环境，选用特定ph的乙醇进进行萃取，混合得到活性黑姜提取物混合体，符合生物体对药物的吸收特性，能使药效物质最大程度地提取出来，使生物体可以最大限度地实现对黑姜提取物活性成分的吸收。应用例1抗老化黑姜提取物颗粒剂的制备称取淀粉2g、赤藓糖醇30g、甘露醇10g、枸橼酸1.5g、薄荷脑0.3g，粉碎过60目筛后，混合均匀，得到辅料；取实施例4的抗老化黑姜提取物80g，加入到辅料中，混合均匀后，再加入1.5g的聚乙烯吡咯烷酮作为粘合剂，充分混合，采用湿法制粒，过60目筛，40℃干燥5小时后进行整粒，得到所述抗老化黑姜提取物颗粒剂。应用例2抗老化黑姜提取物颗粒剂的制备称取淀粉2g、甘露醇40g、枸橼酸1.5g、薄荷脑0.3g，粉碎过60目筛后，混合均匀，得到辅料；取实施例4的抗老化黑姜提取物80g，加入到辅料中，混合均匀后，再加入1.5g的聚乙烯吡咯烷酮作为粘合剂，充分混合，采用湿法制粒，过60目筛，40℃干燥5小时后进行整粒，得到所述抗老化黑姜提取物颗粒剂。应用例3抗老化黑姜提取物颗粒剂的制备称取淀粉2g、赤藓糖醇40g、枸橼酸1.5g、薄荷脑0.3g，粉碎过60目筛后，混合均匀，得到辅料；取实施例4的抗老化黑姜提取物80g，加入到辅料中，混合均匀后，再加入1.5g的聚乙烯吡咯烷酮作为粘合剂，充分混合，采用湿法制粒，过60目筛，40℃干燥5小时后进行整粒，得到所述抗老化黑姜提取物颗粒剂。淀粉，食品级，cas号：9005-25-8。赤藓糖醇，食品级，cas号：149-32-6。甘露醇，食品级，cas号：87-78-5。枸橼酸，食品级，cas号：5949-29-1。薄荷脑，食品级，cas号：89-78-1。聚乙烯吡咯烷酮，食品级，cas号：9003-39-8。取雄性sd大鼠(体重200～220g，购于上海斯莱克实验动物有限责任公司)，随机分组，分别标记为空白组、模型组、抗老化黑姜提取物颗粒剂组，对除了空白组的其它组大鼠进行灌胃次黄嘌呤混悬液及腹腔注射氧嗪酸钾乳剂，建立高尿酸血症模型；在造模后1小时再灌胃抗老化黑姜提取物颗粒剂水溶液，再分别在造模后3小时(即给药后2小时)开始取血，将大鼠血浆样后稀释3倍在以下hplc色谱条件下进样20μl。分别记录空白组、模型组、抗老化黑姜提取物颗粒剂组峰面积与内标物α-萘酚的峰面积，根据标准曲线分别计算模型组及高良姜醇提组血尿酸的含量。抗老化黑姜提取物颗粒剂水溶液的制备：取抗老化黑姜提取物颗粒剂25g，加入水5ml，以80转/分钟搅拌1分钟，过滤，得到抗老化黑姜提取物颗粒剂水溶液。大鼠血浆的处理：取大鼠空白血0.5ml于1.5mleppendorf管中水浴20分钟后，3700转/分钟离心10分钟，得到大鼠空白血浆；之后量取100μl大鼠空白血浆于1.5ml的eppendorf管中，再分别依次加入20μl的内标溶液(即0.2mg/ml，α-萘酚溶液)、50μl尿酸标准品溶液后加入900μl色谱甲醇，涡旋混匀，10000转/分钟高速离心10分钟后取400μl的上清液，最后再加400μl0.2％乙酸水溶液涡旋混匀，过0.22μm一次性针筒式有机滤膜，得到处理后的大鼠血浆。色谱条件如下：色谱柱：岛津shim-packclc-c8(m)(150×4.6mml.d)；流动相：甲醇：0.2％乙酸水溶液＝6：94(v/v)；流速：1.0ml/min；柱温：37℃；检测波长：288nm；进样量：20μl；内标：α-萘酚。具体测试结果见表5。表5抗老化黑姜提取物颗粒剂对血清尿酸水平含量的影响上述实验数据显示，抗老化黑姜提取物颗粒剂可以显著降低尿酸，其中应用例1降低效果最为显著。由于抗老化黑姜提取物的活性成分多数为脂溶性，所以本发明选择水溶性较好的填充剂。甘露醇具有易于结晶有甜味，不易吸湿且不参与人体的糖代谢，赤藓糖醇热量较低且耐高温，无毒副作用。本发明中甘露醇与赤藓糖醇以一定比例混合作为填充剂，意外发现可以促进抗老化黑姜提取物的溶出，提高抗老化黑姜提取物的生物利用度。应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为了清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。当前第1页12