本发明涉及生物制品技术领域，特别是涉及一种增强免疫力的灵芝提取物及在制备食品、药物中的应用。
背景技术
灵芝(ganodermalucidum)为担子菌纲灵芝属真菌，是著名的药用真菌之一。传统中医认为灵芝具有益气安神、扶正固本之功效，被视为珍贵的中药药材，是华夏中草药宝库的一支奇葩，千百年来一直被民间视为仙草。中国古代对灵芝的认识起源于《山海经》中的神话故事。曾有记载，认为服用灵芝可“延年不终，与真人同”。我国自古就有许多关于灵芝药用价值的著作，东汉时期的《神农本草经》，隋朝的《灵秀本草图》，唐朝的《新修本草》以及明朝的《本草纲目》等药学著作都对其有详细的记载。灵芝对于高血压、高血脂、冠心病、哮喘、失眠等慢性病有较好的治疗效果。灵芝还具有延缓衰老，缓解缺氧症状，抑制肿瘤，减少辐射损伤，增加免疫力等作用。灵芝的应用范围非常广泛，具有药食兼用的特点。
灵芝的有效成分有灵芝多糖类、三萜类、核苷类、甾醇类、生物碱类、呋喃衍生物、氨基酸多肽类、矿物元素、脂肪酸等。灵芝具有多方面的药理作用，且毒性很低。其药理作用有：抗肿瘤、免疫调节、抗放射、镇静、安定、强心、降压、镇咳、平喘、降血糖等。
技术实现要素：
本发明的第一目的在于提供一种增强免疫力的灵芝提取物，除了含有多糖和三萜外，还富含蛋白质、氨基酸、生物碱、核苷酸，适合于口服，对自身的免疫性疾病可以起到很好的治疗效果。
本发明公开一种增强免疫力的灵芝提取物，其包括：灵芝脂溶性提取物、灵芝醇提后水提提取物和灵芝蛋白提取物。
所述增强免疫力的灵芝提取物，由以下工艺步骤加工得到：
步骤a制备灵芝脂溶性提取物：将灵芝子实体烘干，粉碎过筛，得到灵芝子实体粉末；将灵芝子实体粉末和灵芝孢子油以固液比1：(0.5～1.5)(g/ml)混匀，于100～150℃提取30～50分钟，获得灵芝脂溶性提取物；
步骤b制备灵芝醇提后水提提取物：将灵芝子实体烘干，粉碎过筛，得到灵芝子实体粉末；将灵芝子实体粉末和无水乙醇以固液比1：(15～20)(g/ml)混匀，加热至沸腾后煮沸2～4小时，得到煎煮液a；煎煮液a经过过滤后获得滤液a和滤渣a；将滤渣a和水继续以固液比1：(15～20)(g/ml)混匀，加热至沸腾后煮沸2～4小时，得到煎煮液b；煎煮液b经过过滤后获得滤液b和滤渣b；合并滤液a和滤液b，得到提取液；将提取液减压除去乙醇后，真空冷冻干燥，得到所述灵芝醇提后水提提取物；
步骤c制备灵芝蛋白提取物；所述灵芝蛋白提取物为灵芝水溶性蛋白提取物、灵芝醇溶性蛋白提取物、灵芝碱溶性蛋白提取物中的一种或多种的混合物；
步骤d制备增强免疫力的灵芝提取物：向阿拉伯胶中加入其重量1～1.3倍的水，搅拌1～2分钟，加热至60～80℃，继续搅拌10～20分钟；然后加入阿拉伯胶重量0.6～1.7倍的灵芝脂溶性提取物和阿拉伯胶重量0.1～0.3倍的乳化剂，于均质压力20～40mpa的条件下均质5～15分钟，而后真空冷冻干燥，得到灵芝脂溶性提取物固状物；分别称取灵芝脂溶性提取物固状物30～80重量份、灵芝醇提后水提提取物50～100重量份、灵芝蛋白提取物50～100重量份，混合均匀，得到所述增强免疫力的灵芝提取物。
所述灵芝子实体既可以通过市售的方法得到，也可以自制。
所述灵芝子实体通过下列方式得到：将灵芝菌以2～4％(体积/体积)的接种量接种于pda固体培养基中，于22～28℃、暗室培养5～7天，获得pda菌种；将pda菌种以2～4％(体积/体积)的接种量接种于液体发酵培养基中，于22～28℃、170～220转/分钟振荡培养5～7天，获得液体发酵液；将液体发酵液加入装有固体发酵培养基的栽培袋中，每栽培袋中固体发酵培养基为100～400ml以及液体发酵液为10～20ml，于22～28℃、暗室培养5～7天；随后在栽培袋侧面开口，继续于22～28℃、湿度85～90％的条件下培养40～60天，采收灵芝子实体。
所述液体发酵培养基的组成为：玉米粉2～3g/l、豆饼粉1～2g/l、麸皮0.5～3g/l，葡萄糖2～4g/l，七水硫酸镁0.02～0.1g/l，磷酸二氢钾0.1～0.2g/l，酵母粉0.5～3g/l，余量为水。
所述固体发酵培养基中含有桑枝粉；优选地，所述固体发酵培养基通过以下方法得到：按照以下配比称量下述原料：玉米粉10～20wt％，麸皮5～10wt％，石膏粉1～3wt％，蔗糖1～3wt％，余量为桑枝粉；接着加入原料总重量1～3倍的水，混合均匀，获得混合液；随后按照加入0.02～0.1g/l的添加量加入七水硫酸镁以及0.02～0.1g/l的添加量加入磷酸二氢钾，混合均匀，于110～120℃灭菌0.5～1小时。
所述灵芝水溶性蛋白提取物、灵芝醇溶性蛋白提取物、灵芝碱溶性蛋白提取物通过以下工序得到：
ⅰ将灵芝子实体烘干，粉碎过筛，得到灵芝子实体粉末；将灵芝子实体粉末和水以固液比1：(1～2)(g/ml)混匀，搅拌40～60分钟，得到提取液；提取液经过过滤获得滤液ⅰ和滤渣ⅰ，其中滤渣ⅰ保留备用；滤液ⅰ使用摩尔浓度0.1～1mol/l的盐酸调节至ph为4～5，添加硫酸铵至硫酸铵质量分数达到70～80％，于2～4℃静置16～24小时，离心10～30分钟，弃上清液，收集沉淀；将沉淀以ph8.0、1mol/l的tris-hcl缓冲液溶解后，使用透析袋透析48～72小时，收集透析液；将透析液真空冷冻干燥，获得灵芝水溶性蛋白提取物；
ⅱ将滤渣ⅰ和体积分数70～75％的乙醇水溶液以固液比1：(1～2)(g/ml)混匀，搅拌40～60分钟，得到提取液；提取液经过过滤获得滤液ⅱ和滤渣ⅱ，其中滤渣ⅱ保留备用；向滤液ⅱ中加入等体积的水，于2～4℃静置16～24小时，离心10～30分钟，弃上清液，收集沉淀；将沉淀以体积分数70～75％的乙醇水溶液溶解后，使用透析袋透析48～72小时，收集透析液；将透析液真空冷冻干燥，获得灵芝醇溶性蛋白提取物；
ⅲ将滤渣ⅱ和摩尔浓度0.1～1mol/l的氢氧化钠水溶液以固液比1：(1～2)(g/ml)混匀，搅拌40～60分钟，得到提取液；提取液经过过滤获得滤液ⅲ和滤渣ⅲ；滤液ⅲ使用摩尔浓度0.1～1mol/l的盐酸调节至ph为4～5，添加硫酸铵至硫酸铵质量分数达到40～60％，于2～4℃静置16～24小时，离心10～30分钟，弃上清液，收集沉淀；将沉淀以摩尔浓度0.1～1mol/l的氢氧化钠水溶液溶解，然后使用透析袋透析48～72小时，收集透析液；将透析液真空冷冻干燥，获得灵芝碱溶性蛋白提取物。
优选地，所述灵芝子实体在烘干后进行蒸汽爆破处理，蒸汽压为1～1.5mpa，维持压力120～150秒，然后粉碎过筛。
优选地，所述灵芝孢子油在使用前分子蒸馏纯化，蒸馏温度180～200℃，进样速率1～3ml/min，刮板转速160～190转/分钟，冷凝温度40～50℃。
本发明的第二目的在于公开上述增强免疫力的灵芝提取物在制备食品、药物中的应用。
本发明相对于现有技术，具有以下优点：
1、现有技术中灵芝提取物通常采用水提或者醇提的方式，达到提取灵芝多糖和灵芝三萜的目的，但是灵芝中其他成分，如灵芝蛋白等同样可以达到清除自由基、抗脂质氧化的能力，却没有得到有效利用。本发明公开了一种包含灵芝脂溶性提取物、灵芝醇提后水提提取物和灵芝蛋白提取物的灵芝提取物，不仅富含灵芝多糖、灵芝蛋白和灵芝三萜，还利用灵芝孢子油将灵芝中脂溶性成分如维生素等提取出来，在提高灵芝提取物生物利用度的同时，降低灵芝提取物中苦味物质的占比，改善其适口性。
2、本发明还提供一种通过发酵制备得到的灵芝子实体。发明人在研究的过程中发现，当发酵培养基中含有石膏粉和桑枝木屑时，灵芝子实体中灵芝多糖含量会明显增加。
3、为了进一步提高灵芝提取物的生物利用率，将灵芝子实体汽爆后再进行粉碎处理，在对灵芝子实体进行破壁的同时，将灵芝多糖等大分子成分降解成生物体易吸收的小分子，同时保证不破坏生物分子的实用性能。另外，灵芝孢子油中抗氧化物质比较少，通过将灵芝孢子油分子蒸馏，降低灵芝孢子油过氧化值和酸值，更有利于灵芝脂溶性提取物的提取。
4、发明人意外发现，当灵芝水溶性蛋白、灵芝脂溶性蛋白和灵芝醇溶性蛋白三种蛋白组合使用时，灵芝提取物的免疫调节能力和改善睡眠能力都得到明显提高，这可能是由于三种蛋白的作用机理、作用靶位和产生自由基不同所导致。
本发明的第三目的在于提供一种灵芝袋泡茶。
将灵芝提取物制备成茶饮料的特点在于配料灵活，使用方便，引用随意，像喝茶一样频频饮服，边饮用边加沸水，直至味道变淡为止。茶饮料分为袋泡茶和茶块。袋泡茶体积小，便于贮存和携带，使用方便，适用于质地较轻、疏松、有效成分容易浸出的原材料。
灵芝泡袋茶的制备方法：将950g白糖加热至180℃，不断搅拌至使其呈现黄白色；而后自然冷却至120℃，加入0.5g碳酸铵，继续搅拌2分钟；继续加入50g白糖和3g柠檬酸，搅拌5分钟，得到混合物；然后将混合物倒入器具内，于120℃加热10分钟，投入本发明制备的灵芝提取物500g，继续于60℃加热10分钟，自然冷却至室温，得到含有灵芝提取物的粉状焦糖；(2)称取含有灵芝提取物的粉状焦糖30g、白砂糖70g、阿拉伯胶0.1g、桂皮油0.1μl、柠檬油100μl，混合均匀，装袋，得到灵芝泡袋茶。
灵芝泡袋茶也可以由下述方法制备：将本发明制备的灵芝提取物、枸杞子、菊花、甘草按质量比为(1-10)：(1-10)：(1-10)：(1-10)混合即可得到。
本发明所述增强免疫力的灵芝提取物除了含有多糖和三萜外，还富含蛋白质，适合于口服，对自身的免疫性疾病可以起到很好的治疗效果，可以作为扶正固本的免疫调节剂，同时还可以显著清除机体产生的自由基，阻止自由基对机体的损伤，减少机体疲劳，起到改善睡眠的作用。
具体实施方式
灵芝孢子油，参考专利申请号201410164720.1的实施例一制备得到。
阿拉伯胶，cas号：9000-01-5，食品级。
蔗糖脂肪酸酯，cas号：37318-31-3，食品级。
ph8.0、1mol/l的tris-hcl缓冲液，北京百奥莱博科技有限公司提供。
玉米粉，江北区五谷香粮油经营部提供。
豆饼粉，翼源有机良油食品有限公司提供。
麸皮，具体采用小麦麸皮，宁津县德福面粉厂提供。
葡萄糖，cas号：50-99-7。
七水硫酸镁，cas号：10034-99-8。
磷酸二氢钾，cas号：7778-77-0。
酵母粉，cas号：119-44-8。
石膏粉，cas号：10101-41-4。
蔗糖，cas号：57-50-1。
桑枝粉，原产地安徽，亳州市九康药业销售有限公司。
在本发明未作具体说明的情况下，真空冷冻干燥的具体工艺条件为：预冻温度-80℃，预冻时间2小时，冷冻温度-70℃，绝对压强100pa，冷冻时间48小时。
实施例1
增强免疫力的灵芝提取物，其包括：灵芝脂溶性提取物、灵芝醇提后水提提取物和灵芝蛋白提取物，由以下工艺步骤加工得到：
步骤a制备灵芝脂溶性提取物：将灵芝子实体于40℃烘干至水分含量小于3％，粉碎过60目筛，得到灵芝子实体粉末；将灵芝子实体粉末和灵芝孢子油以固液比1：1(g/ml)混匀，于130℃提取50分钟，获得灵芝脂溶性提取物；
步骤b制备灵芝醇提后水提提取物：将灵芝子实体于40℃烘干至水分含量小于3％，粉碎过60目筛，得到灵芝子实体粉末；将灵芝子实体粉末和无水乙醇以固液比1：15(g/ml)混匀，加热至沸腾后煮沸4小时，得到煎煮液a；煎煮液a经过100目滤网过滤后获得滤液a和滤渣a；将滤渣a和水继续以固液比1：15(g/ml)混匀，加热至沸腾后煮沸4小时，得到煎煮液b；煎煮液b经过100目滤网过滤后获得滤液b和滤渣b；合并滤液a和滤液b，得到提取液；将提取液于60℃、绝对压强0.03mpa的条件下减压除去乙醇后，真空冷冻干燥，得到所述灵芝醇提后水提提取物；
步骤c制备灵芝蛋白提取物；所述灵芝蛋白提取物为灵芝水溶性蛋白提取物和灵芝醇溶性蛋白提取物以质量比1：1组成的混合物；所述灵芝蛋白提取物通过以下方法得到：
ⅰ将灵芝子实体于40℃烘干至水分含量小于3％，粉碎过60筛，得到灵芝子实体粉末；将灵芝子实体粉末和水以固液比1：1.5(g/ml)混匀，以100转/分钟搅拌60分钟，得到提取液；提取液经过100目滤网过滤后获得滤液ⅰ和滤渣ⅰ，其中滤渣ⅰ保留备用；滤液ⅰ使用摩尔浓度1mol/l的盐酸调节至ph为4.2，添加硫酸铵至硫酸铵质量分数达到80％，于4℃静置24小时，以4000转/分钟离心30分钟，弃上清液，收集沉淀；将沉淀以ph8.0、1mol/l的tris-hcl缓冲液溶解后，沉淀和tris-hcl缓冲液的固液比为1：50(g/ml)，使用透析袋透析72小时，收集透析液；将透析液真空冷冻干燥，获得灵芝水溶性蛋白提取物；
ⅱ将滤渣ⅰ和体积分数70％的乙醇水溶液以固液比1：1(g/ml)混匀，以100转/分钟搅拌40分钟，得到提取液；提取液经过100目滤网过滤后获得滤液ⅱ和滤渣ⅱ，其中滤渣ⅱ保留备用；向滤液ⅱ中加入等体积的水，于4℃静置24小时，以4000转/分钟离心30分钟，弃上清液，收集沉淀；将沉淀以70％的乙醇溶解后，沉淀和体积分数70％的乙醇水溶液的固液比为1：50(g/ml)，使用透析袋透析72小时，收集透析液；将透析液真空冷冻干燥，获得灵芝醇溶性蛋白提取物；
ⅲ将滤渣ⅱ和摩尔浓度0.1mol/l的氢氧化钠水溶液以固液比1：1(g/ml)混匀，以100转/分钟搅拌40分钟，得到提取液；提取液经过100目滤网过滤后获得滤液ⅲ和滤渣ⅲ；滤液ⅲ使用摩尔浓度1mol/l的盐酸调节至ph为4.2，添加硫酸铵至硫酸铵质量分数达到50％，于4℃静置24小时，以4000转/分钟离心30分钟，弃上清液，收集沉淀；将沉淀以摩尔浓度0.1mol/l的氢氧化钠水溶液溶解，沉淀和氢氧化钠水溶液的固液比为1：50(g/ml)，然后使用透析袋透析72小时，收集透析液；将透析液真空冷冻干燥，获得灵芝碱溶性蛋白提取物；
步骤d制备增强免疫力的灵芝提取物：向阿拉伯胶中加入其重量1.3倍的水，以100转/分钟搅拌2分钟，以5℃/分钟加热至70℃，继续以100转/分钟搅拌15分钟；然后加入阿拉伯胶重量0.9倍的灵芝脂溶性提取物和阿拉伯胶重量0.1倍的蔗糖脂肪酸酯，于均质压力30mpa、均质转速3000转/分钟的条件下均质10分钟，而后真空冷冻干燥，得到灵芝脂溶性提取物固状物；分别称取灵芝脂溶性提取物固状物60重量份、灵芝醇提后水提提取物80重量份、灵芝蛋白提取物80重量份，混合均匀，得到所述增强免疫力的灵芝提取物。
灵芝子实体，参考专利申请号201410372805.9的实施例一制备得到。
实施例2
增强免疫力的灵芝提取物，其包括：灵芝脂溶性提取物、灵芝醇提后水提提取物和灵芝蛋白提取物，由以下工艺步骤加工得到：
步骤a制备灵芝脂溶性提取物：将灵芝子实体于40℃烘干至水分含量小于3％，粉碎过60目筛，得到灵芝子实体粉末；将灵芝子实体粉末和灵芝孢子油以固液比1：1(g/ml)混匀，于130℃提取50分钟，获得灵芝脂溶性提取物；
步骤b制备灵芝醇提后水提提取物：将灵芝子实体于40℃烘干至水分含量小于3％，粉碎过60目筛，得到灵芝子实体粉末；将灵芝子实体粉末和无水乙醇以固液比1：15(g/ml)混匀，加热至沸腾后煮沸4小时，得到煎煮液a；煎煮液a经过100目滤网过滤后获得滤液a和滤渣a；将滤渣a和水继续以固液比1：15(g/ml)混匀，加热至沸腾后煮沸4小时，得到煎煮液b；煎煮液b经过100目滤网过滤后获得滤液b和滤渣b；合并滤液a和滤液b，得到提取液；将提取液于60℃、绝对压强0.03mpa的条件下减压除去乙醇后，真空冷冻干燥，得到所述灵芝醇提后水提提取物；
步骤c制备灵芝蛋白提取物；所述灵芝蛋白提取物为灵芝水溶性蛋白提取物和灵芝醇溶性蛋白提取物以质量比1：1组成的混合物；所述灵芝蛋白提取物通过以下方法得到：
ⅰ将灵芝子实体于40℃烘干至水分含量小于3％，粉碎过60筛，得到灵芝子实体粉末；将灵芝子实体粉末和水以固液比1：1.5(g/ml)混匀，以100转/分钟搅拌60分钟，得到提取液；提取液经过100目滤网过滤后获得滤液ⅰ和滤渣ⅰ，其中滤渣ⅰ保留备用；滤液ⅰ使用摩尔浓度1mol/l的盐酸调节至ph为4.2，添加硫酸铵至硫酸铵质量分数达到80％，于4℃静置24小时，以4000转/分钟离心30分钟，弃上清液，收集沉淀；将沉淀以ph8.0、1mol/l的tris-hcl缓冲液溶解后，沉淀和tris-hcl缓冲液的固液比为1：50(g/ml)，使用透析袋透析72小时，收集透析液；将透析液真空冷冻干燥，获得灵芝水溶性蛋白提取物；
ⅱ将滤渣ⅰ和体积分数70％的乙醇水溶液以固液比1：1(g/ml)混匀，以100转/分钟搅拌40分钟，得到提取液；提取液经过100目滤网过滤后获得滤液ⅱ和滤渣ⅱ，其中滤渣ⅱ保留备用；向滤液ⅱ中加入等体积的水，于4℃静置24小时，以4000转/分钟离心30分钟，弃上清液，收集沉淀；将沉淀以70％的乙醇溶解后，沉淀和体积分数70％的乙醇水溶液的固液比为1：50(g/ml)，使用透析袋透析72小时，收集透析液；将透析液真空冷冻干燥，获得灵芝醇溶性蛋白提取物；
ⅲ将滤渣ⅱ和摩尔浓度0.1mol/l的氢氧化钠水溶液以固液比1：1(g/ml)混匀，以100转/分钟搅拌40分钟，得到提取液；提取液经过100目滤网过滤后获得滤液ⅲ和滤渣ⅲ；滤液ⅲ使用摩尔浓度1mol/l的盐酸调节至ph为4.2，添加硫酸铵至硫酸铵质量分数达到50％，于4℃静置24小时，以4000转/分钟离心30分钟，弃上清液，收集沉淀；将沉淀以摩尔浓度0.1mol/l的氢氧化钠水溶液溶解，沉淀和氢氧化钠水溶液的固液比为1：50(g/ml)，然后使用透析袋透析72小时，收集透析液；将透析液真空冷冻干燥，获得灵芝碱溶性蛋白提取物；
步骤d制备增强免疫力的灵芝提取物：向阿拉伯胶中加入其重量1.3倍的水，以100转/分钟搅拌2分钟，以5℃/分钟加热至70℃，继续以100转/分钟搅拌15分钟；然后加入阿拉伯胶重量0.9倍的灵芝脂溶性提取物和阿拉伯胶重量0.1倍的蔗糖脂肪酸酯，于均质压力30mpa、均质转速3000转/分钟的条件下均质10分钟，而后真空冷冻干燥，得到灵芝脂溶性提取物固状物；分别称取灵芝脂溶性提取物固状物60重量份、灵芝醇提后水提提取物80重量份、灵芝蛋白提取物80重量份，混合均匀，得到所述增强免疫力的灵芝提取物。
所述灵芝子实体通过下列方式得到：将灵芝菌(具体采用山东冠县食用菌研究所提供的鹿角灵芝菌，菌种浓度107cfu/ml)以2％(体积/体积)的接种量接种于pda固体培养基(购于上海哈灵生物科技有限公司)中，于28℃、暗室培养7天，获得pda菌种；将pda菌种以2％(体积/体积)的接种量接种于液体发酵培养基中，于28℃、220转/分钟振荡培养5天，获得液体发酵液；将液体发酵液加入装有固体发酵培养基的栽培袋中，每栽培袋中固体发酵培养基为100ml以及液体发酵液为20ml，于28℃、暗室培养7天；随后在栽培袋侧面开直径约2cm的口，继续于28℃、湿度90％的条件下培养60天，采收灵芝子实体。
所述液体发酵培养基的组成为：玉米粉3g/l、豆饼粉1.5g/l、麸皮2g/l，葡萄糖3g/l，七水硫酸镁0.02g/l，磷酸二氢钾0.1g/l，酵母粉0.5g/l，余量为水。称量玉米粉、豆饼粉、麸皮、葡萄糖、七水硫酸镁、磷酸二氢钾和酵母粉，混合均匀，加水定容至1l，得到所述液体发酵培养基。
所述固体发酵培养基中含有桑枝粉，通过以下方法得到：按照以下配比称量原料：玉米粉15wt％，麸皮5wt％，石膏粉1wt％，蔗糖2wt％，余量为桑枝粉；接着加入原料总重量2倍的水，混合均匀，获得混合液；随后按照加入0.02g/l的添加量加入七水硫酸镁以及0.1g/l的添加量加入磷酸二氢钾，混合均匀，于115℃灭菌1小时。
实施例3
增强免疫力的灵芝提取物，其包括：灵芝脂溶性提取物、灵芝醇提后水提提取物和灵芝蛋白提取物，由以下工艺步骤加工得到：
步骤a制备灵芝脂溶性提取物：将灵芝子实体于40℃烘干至水分含量小于3％，接着进行蒸汽爆破处理，所述蒸汽为水蒸气，蒸汽压为1.5mpa，维持压力120秒，然后粉碎过60筛，得到灵芝子实体粉末；将灵芝子实体粉末和灵芝孢子油以固液比1：1(g/ml)混匀，于130℃提取50分钟，获得灵芝脂溶性提取物；
步骤b制备灵芝醇提后水提提取物：将灵芝子实体于40℃烘干至水分含量小于3％，接着进行蒸汽爆破处理，所述蒸汽为水蒸气，蒸汽压为1.5mpa，维持压力120秒，然后粉碎过60筛，得到灵芝子实体粉末；将灵芝子实体粉末和无水乙醇以固液比1：15(g/ml)混匀，加热至沸腾后煮沸4小时，得到煎煮液a；煎煮液a经过100目滤网过滤后获得滤液a和滤渣a；将滤渣a和水继续以固液比1：15(g/ml)混匀，加热至沸腾后煮沸4小时，得到煎煮液b；煎煮液b经过100目滤网过滤后获得滤液b和滤渣b；合并滤液a和滤液b，得到提取液；将提取液于60℃、绝对压强0.03mpa的条件下减压除去乙醇后，真空冷冻干燥，得到所述灵芝醇提后水提提取物；
步骤c制备灵芝蛋白提取物；所述灵芝蛋白提取物为灵芝水溶性蛋白提取物和灵芝醇溶性蛋白提取物以质量比1：1组成的混合物；所述灵芝蛋白提取物通过以下方法得到：
ⅰ将灵芝子实体于40℃烘干至水分含量小于3％，接着进行蒸汽爆破处理，所述蒸汽为水蒸气，蒸汽压为1.5mpa，维持压力120秒，然后粉碎过60筛，得到灵芝子实体粉末；将灵芝子实体粉末和水以固液比1：1.5(g/ml)混匀，以100转/分钟搅拌60分钟，得到提取液；提取液经过100目滤网过滤后获得滤液ⅰ和滤渣ⅰ，其中滤渣ⅰ保留备用；滤液ⅰ使用摩尔浓度1mol/l的盐酸调节至ph为4.2，添加硫酸铵至硫酸铵质量分数达到80％，于4℃静置24小时，以4000转/分钟离心30分钟，弃上清液，收集沉淀；将沉淀以ph8.0、1mol/l的tris-hcl缓冲液溶解后，沉淀和tris-hcl缓冲液的固液比为1：50(g/ml)，使用透析袋透析72小时，收集透析液；将透析液真空冷冻干燥，获得灵芝水溶性蛋白提取物；
ⅱ将滤渣ⅰ和体积分数70％的乙醇水溶液以固液比1：1(g/ml)混匀，以100转/分钟搅拌40分钟，得到提取液；提取液经过100目滤网过滤后获得滤液ⅱ和滤渣ⅱ，其中滤渣ⅱ保留备用；向滤液ⅱ中加入等体积的水，于4℃静置24小时，以4000转/分钟离心30分钟，弃上清液，收集沉淀；将沉淀以70％的乙醇溶解后，沉淀和体积分数70％的乙醇水溶液的固液比为1：50(g/ml)，使用透析袋透析72小时，收集透析液；将透析液真空冷冻干燥，获得灵芝醇溶性蛋白提取物；
ⅲ将滤渣ⅱ和摩尔浓度0.1mol/l的氢氧化钠水溶液以固液比1：1(g/ml)混匀，以100转/分钟搅拌40分钟，得到提取液；提取液经过100目滤网过滤后获得滤液ⅲ和滤渣ⅲ；滤液ⅲ使用摩尔浓度1mol/l的盐酸调节至ph为4.2，添加硫酸铵至硫酸铵质量分数达到50％，于4℃静置24小时，以4000转/分钟离心30分钟，弃上清液，收集沉淀；将沉淀以摩尔浓度0.1mol/l的氢氧化钠水溶液溶解，沉淀和氢氧化钠水溶液的固液比为1：50(g/ml)，然后使用透析袋透析72小时，收集透析液；将透析液真空冷冻干燥，获得灵芝碱溶性蛋白提取物；
步骤d制备增强免疫力的灵芝提取物：向阿拉伯胶中加入其重量1.3倍的水，以100转/分钟搅拌2分钟，以5℃/分钟加热至70℃，继续以100转/分钟搅拌15分钟；然后加入阿拉伯胶重量0.9倍的灵芝脂溶性提取物和阿拉伯胶重量0.1倍的蔗糖脂肪酸酯，于均质压力30mpa、均质转速3000转/分钟的条件下均质10分钟，而后真空冷冻干燥，得到灵芝脂溶性提取物固状物；分别称取灵芝脂溶性提取物固状物60重量份、灵芝醇提后水提提取物80重量份、灵芝蛋白提取物80重量份，混合均匀，得到所述增强免疫力的灵芝提取物。
所述灵芝子实体通过下列方式得到：将灵芝菌(具体采用山东冠县食用菌研究所提供的鹿角灵芝菌，菌种浓度107cfu/ml)以2％(体积/体积)的接种量接种于pda固体培养基(购于上海哈灵生物科技有限公司)中，于28℃、暗室培养7天，获得pda菌种；将pda菌种以2％(体积/体积)的接种量接种于液体发酵培养基中，于28℃、220转/分钟振荡培养5天，获得液体发酵液；将液体发酵液加入装有固体发酵培养基的栽培袋中，每栽培袋中固体发酵培养基为100ml以及液体发酵液为20ml，于28℃、暗室培养7天；随后在栽培袋侧面开直径约2cm的口，继续于28℃、湿度90％的条件下培养60天，采收灵芝子实体。
所述液体发酵培养基的组成为：玉米粉3g/l、豆饼粉1.5g/l、麸皮2g/l，葡萄糖3g/l，七水硫酸镁0.02g/l，磷酸二氢钾0.1g/l，酵母粉0.5g/l，余量为水。称量玉米粉、豆饼粉、麸皮、葡萄糖、七水硫酸镁、磷酸二氢钾和酵母粉，混合均匀，加水定容至1l，得到所述液体发酵培养基。
所述固体发酵培养基中含有桑枝粉，通过以下方法得到：按照以下配比称量原料：玉米粉15wt％，麸皮5wt％，石膏粉1wt％，蔗糖2wt％，余量为桑枝粉；接着加入原料总重量2倍的水，混合均匀，获得混合液；随后按照加入0.02g/l的添加量加入七水硫酸镁以及0.1g/l的添加量加入磷酸二氢钾，混合均匀，于115℃灭菌1小时。
实施例4
增强免疫力的灵芝提取物，其包括：灵芝脂溶性提取物、灵芝醇提后水提提取物和灵芝蛋白提取物，由以下工艺步骤加工得到：
步骤a制备灵芝脂溶性提取物：将灵芝子实体于40℃烘干至水分含量小于3％，接着进行蒸汽爆破处理，所述蒸汽为水蒸汽，蒸汽压为1.5mpa，维持压力120秒，然后粉碎过60筛，得到灵芝子实体粉末；将灵芝子实体粉末和灵芝孢子油以固液比1：1(g/ml)混匀，于130℃提取50分钟，获得灵芝脂溶性提取物；
步骤b制备灵芝醇提后水提提取物：将灵芝子实体于40℃烘干至水分含量小于3％，接着进行蒸汽爆破处理，所述蒸汽为水蒸气，蒸汽压为1.5mpa，维持压力120秒，然后粉碎过60筛，得到灵芝子实体粉末；将灵芝子实体粉末和无水乙醇以固液比1：15(g/ml)混匀，加热至沸腾后煮沸4小时，得到煎煮液a；煎煮液a经过100目滤网过滤后获得滤液a和滤渣a；将滤渣a和水继续以固液比1：15(g/ml)混匀，加热至沸腾后煮沸4小时，得到煎煮液b；煎煮液b经过100目滤网过滤后获得滤液b和滤渣b；合并滤液a和滤液b，得到提取液；将提取液于60℃、绝对压强0.03mpa的条件下减压除去乙醇后，真空冷冻干燥，得到所述灵芝醇提后水提提取物；
步骤c制备灵芝蛋白提取物；所述灵芝蛋白提取物为灵芝水溶性蛋白提取物和灵芝醇溶性蛋白提取物以质量比1：1组成的混合物；所述灵芝蛋白提取物通过以下方法得到：
ⅰ将灵芝子实体于40℃烘干至水分含量小于3％，接着进行蒸汽爆破处理，所述蒸汽为水蒸气，蒸汽压为1.5mpa，维持压力120秒，然后粉碎过60筛，得到灵芝子实体粉末；将灵芝子实体粉末和水以固液比1：1.5(g/ml)混匀，以100转/分钟搅拌60分钟，得到提取液；提取液经过100目滤网过滤后获得滤液ⅰ和滤渣ⅰ，其中滤渣ⅰ保留备用；滤液ⅰ使用摩尔浓度1mol/l的盐酸调节至ph为4.2，添加硫酸铵至硫酸铵质量分数达到80％，于4℃静置24小时，以4000转/分钟离心30分钟，弃上清液，收集沉淀；将沉淀以ph8.0、1mol/l的tris-hcl缓冲液溶解后，沉淀和tris-hcl缓冲液的固液比为1：50(g/ml)，使用透析袋透析72小时，收集透析液；将透析液真空冷冻干燥，获得灵芝水溶性蛋白提取物；
ⅱ将滤渣ⅰ和体积分数70％的乙醇水溶液以固液比1：1(g/ml)混匀，以100转/分钟搅拌40分钟，得到提取液；提取液经过100目滤网过滤后获得滤液ⅱ和滤渣ⅱ，其中滤渣ⅱ保留备用；向滤液ⅱ中加入等体积的水，于4℃静置24小时，以4000转/分钟离心30分钟，弃上清液，收集沉淀；将沉淀以70％的乙醇溶解后，沉淀和体积分数70％的乙醇水溶液的固液比为1：50(g/ml)，使用透析袋透析72小时，收集透析液；将透析液真空冷冻干燥，获得灵芝醇溶性蛋白提取物；
ⅲ将滤渣ⅱ和摩尔浓度0.1mol/l的氢氧化钠水溶液以固液比1：1(g/ml)混匀，以100转/分钟搅拌40分钟，得到提取液；提取液经过100目滤网过滤后获得滤液ⅲ和滤渣ⅲ；滤液ⅲ使用摩尔浓度1mol/l的盐酸调节至ph为4.2，添加硫酸铵至硫酸铵质量分数达到50％，于4℃静置24小时，以4000转/分钟离心30分钟，弃上清液，收集沉淀；将沉淀以摩尔浓度0.1mol/l的氢氧化钠水溶液溶解，沉淀和氢氧化钠水溶液的固液比为1：50(g/ml)，然后使用透析袋透析72小时，收集透析液；将透析液真空冷冻干燥，获得灵芝碱溶性蛋白提取物；
步骤d制备增强免疫力的灵芝提取物：向阿拉伯胶中加入其重量1.3倍的水，以100转/分钟搅拌2分钟，以5℃/分钟加热至70℃，继续以100转/分钟搅拌15分钟；然后加入阿拉伯胶重量0.9倍的灵芝脂溶性提取物和阿拉伯胶重量0.1倍的蔗糖脂肪酸酯，于均质压力30mpa、均质转速3000转/分钟的条件下均质10分钟，而后真空冷冻干燥，得到灵芝脂溶性提取物固状物；分别称取灵芝脂溶性提取物固状物60重量份、灵芝醇提后水提提取物80重量份、灵芝蛋白提取物80重量份，混合均匀，得到所述增强免疫力的灵芝提取物。
所述灵芝子实体通过下列方式得到：将灵芝菌(体采用山东冠县食用菌研究所提供的鹿角灵芝菌，菌种浓度107cfu/ml)以2％(体积/体积)的接种量接种于pda固体培养基(购于上海哈灵生物科技有限公司)中，于28℃、暗室培养7天，获得pda菌种；将pda菌种以2％(体积/体积)的接种量接种于液体发酵培养基中，于28℃、220转/分钟振荡培养5天，获得液体发酵液；将液体发酵液加入装有固体发酵培养基的栽培袋中，每栽培袋中固体发酵培养基为100ml以及液体发酵液为20ml，于28℃、暗室培养7天；随后在栽培袋侧面开直径约2cm的口，继续于28℃、湿度90％的条件下培养60天，采收灵芝子实体。
所述液体发酵培养基的组成为：玉米粉3g/l、豆饼粉1.5g/l、麸皮2g/l，葡萄糖3g/l，七水硫酸镁0.02g/l，磷酸二氢钾0.1g/l，酵母粉0.5g/l，余量为水。称量玉米粉、豆饼粉、麸皮、葡萄糖、七水硫酸镁、磷酸二氢钾和酵母粉，混合均匀，加水定容至1l，得到所述液体发酵培养基。
所述固体发酵培养基中含有桑枝粉，通过以下方法得到：按照以下配比称量原料：玉米粉15wt％，麸皮5wt％，石膏粉1wt％，蔗糖2wt％，余量为桑枝粉；接着加入原料总重量2倍的水，混合均匀，获得混合液；随后按照加入0.02g/l的添加量加入七水硫酸镁以及0.1g/l的添加量加入磷酸二氢钾，混合均匀，于115℃灭菌1小时。
所述灵芝孢子油在使用前分子蒸馏纯化，蒸馏温度200℃，进样速率3ml/min，刮板转速170转/分钟，冷凝温度50℃。
实施例5
实施例5与实施例4基本相同，区别仅在于：所述灵芝蛋白提取物为灵芝水溶性蛋白提取物和灵芝碱溶性蛋白提取物以质量比1：1组成的混合物。所述灵芝水溶性蛋白提取物和灵芝碱溶性蛋白提取物的制备方法同实施例4中的一致，此处不再赘述。
实施例6
实施例6与实施例4基本相同，区别仅在于：所述灵芝蛋白提取物为灵芝醇溶性蛋白提取物和灵芝碱溶性蛋白提取物以质量比1：1组成的混合物。所述灵芝醇溶性蛋白提取物和灵芝碱溶性蛋白提取物的制备方法同实施例4中的一致，此处不再赘述。
实施例7
实施例7与实施例4基本相同，区别仅在于：所述灵芝蛋白提取物为灵芝水溶性蛋白提取物、灵芝醇溶性蛋白提取物、灵芝碱溶性蛋白提取物以重量比1：1：1组成的混合物。灵芝水溶性蛋白提取物、灵芝醇溶性蛋白提取物、灵芝碱溶性蛋白提取物的制备方法同实施例4中的一致，此处不再赘述。
测试例1
实施例1～7增强免疫力的灵芝提取物的免疫调节能力测试
实验动物：昆明种小鼠，雄性，体重18～22g，北京维通利华试验动物技术有限公司提供。
将昆明种小鼠随机分为正常对照组和实验组，实验组每天按照260mg/kg的剂量灌胃增强免疫力的灵芝提取物，正常对照组每天灌胃等量的生理盐水，连续灌胃15天。
小鼠脾淋巴细胞转化实验：末次灌胃增强免疫力的灵芝提取物1小时后，在无菌条件下取小鼠脾于盛有无菌hanks液(北京索莱宝科技有限公司提供，货号h1045)的培养皿内，研碎，过滤，取细胞悬液；用生理盐水洗涤一遍，以1000转/分钟离心5分钟，用rpmi1640培养液(上海博升生物科技有限公司提供)2ml悬浮细胞；取10μl细胞悬液，调节细胞浓度至2×106/ml，加入24孔培养板，每孔1ml/孔。实验孔加入刀豆蛋白液(购于美国sigma公司，货号c2010)20μl，终浓度5μg/ml。于37℃、5％co2的培养箱内培养68小时。每孔吸去培养上清液0.7ml，再加不含血清的rpmi1640培养液，加入浓度5mg/ml的mtt溶液50μl/孔，继续孵育4小时；接着加入酸性异丙醇溶液1ml/孔，吹打混合均匀，得到混合液；将混合液分加到96孔板中，200μl/孔，每个样本作3复孔，酶标仪上读出波长570nm处的od值。
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力测定：末次灌胃增强免疫力的灵芝提取物30分钟后，每只小鼠注射20％鸡红细胞溶液(天津佰伦斯生物技术有限公司提供)1ml/只；注射30分钟后，脱颈椎处死小鼠，经腹腔注入生理盐水2ml，揉动小鼠腹部1分钟，然后用吸管吸取腹腔液体lml，均匀涂于2片载玻片上；于37℃保温30分钟后，用生理盐水洗涤一遍，1：1丙酮甲醛液固定4％giemsa-磷酸缓冲液(北京雷根生物科技有限公司提供)染色3分钟，计数吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数和计算吞噬百分率及吞噬指数。吞噬指数＝(被吞噬鸡红细胞数/200个巨噬细胞)/2，吞噬百分率＝(吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/200个巨噬细胞)×100。
半数溶血值测定：灌胃增强免疫力的灵芝提取物11天后，对小鼠进行腹腔注2％绵羊红细胞(北京博尔西科技有限公司提供)0.2ml/只进行免疫；免疫4天后处死小鼠，取血；以2000转/分钟离心10分钟，收集血清，并用sa缓冲液(武汉百浩天生物科技有限公司提供，货号c0840)稀释500倍，得到稀释血清；取1ml稀释血清加入10％绵羊红细胞0.5ml，补体10ml，进行血清溶血素测定，记录羊红血球的半数溶血值(hc50)。
具体测试结果见表1。
表1增强免疫力的灵芝提取物免疫调节能力测试结果表
从上述实验数据可以看出，与正常对照组相比，实施例1～7的灵芝提取物可以明显增强刀豆蛋白诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力和体液免疫能力，表现为增强小鼠腹腔吞噬鸡红细胞的能力，增加抗体形成，明显提高半数溶血值。
测试例2
实施例1～7增强免疫力的灵芝提取物的改善睡眠能力测试
实验动物：昆明种小鼠，雄性，体重18～22g，北京维通利华试验动物技术有限公司提供。
将昆明种小鼠随机分为正常对照组和实验组，实验组每天按照260mg/kg的剂量灌胃增强免疫力的灵芝提取物，正常对照组每天灌胃等量的生理盐水，连续灌胃30天后。每组小鼠20只。
睡眠以翻正反射消失为指标。当小鼠置于背卧位时，能立即翻正身位，如超过30～60秒不能翻正者，即认为翻正反射消失，进入睡眠。翻正反射恢复即为动物觉醒，翻正反射消失至恢复这段时间为动物睡眠时间。
延长戊巴比妥钠睡眠时间实验：动物末次给予相同剂量的增强免疫力的灵芝提取物或者生理盐水后，各组动物按照60mg/kg的剂量腹腔注射戊巴比妥钠，注射量为10ml/kgbw，以翻正反射消失为指标，观察睡眠时间。
戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验：动物末次给予相同剂量的增强免疫力的灵芝提取物或者生理盐水后，各组动物按照45mg/kg的剂量腹腔注射戊巴比妥钠，注射量为10ml/kgbw。记录30分钟内入睡动物数，并计算睡眠发生率(翻正反射消失达1分钟以上者)。睡眠发生率＝入睡动物数/总动物数×100％。
具体测试结果见表2。
表2增强免疫力的灵芝提取物改善睡眠能力测试
从上述实验数据可以看出，与正常对照组相比，小鼠服用实施例1～7的灵芝提取物后，小鼠睡眠时间明显延长，睡眠发生率明显提高，差异具有显著性(p＜0.01)。
测试例3
实施例1～2灵芝子实体的灵芝多糖含量测试
灵芝多糖的测定：将灵芝子实体于40℃烘干至水分含量小于3％，粉碎过60筛，得到灵芝子实体粉末。称取灵芝子实体粉末0.2g，放50ml离心管中，加入3ml体积分数85％的乙醇水溶液，于60℃水浴1小时；水浴后以8000转/分钟离心15分钟，弃去上清，残渣用150ml水煮沸浸提1小时，加水定容至200ml，过滤取续滤液5ml备用。标准曲线的制备：将葡萄糖放于烘箱中105℃烘干至恒重，称取20mg，加水定容至200ml，分别吸取0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.20、1.40ml加入到25ml比色管中，分别加蒸馏水补至2ml，另取一比色管加入2ml蒸馏水作为空白对照。在各比色管中加1ml5％苯酚溶液。然后缓缓加入5ml浓硫酸，混匀后静置5分钟，然后沸水浴15分钟，自来水冷却后于波长489nm处测吸光度值。样品测定：吸取样品溶液1ml，加水至2ml，经硫酸-苯酚显色后测定吸光度值。
经测试，实施例1和实施例2的的灵芝子实体中灵芝多糖含量分别为3.15％和8.89％。
对实施例2中所述固体发酵培养基的组分含量进行调整，然后测定得到的灵芝子实体中灵芝多糖的含量。
具体测试结果见表3。
表3灵芝多糖含量测试结果表
本发明相对于现有技术，具有以下优点：
1、现有技术中灵芝提取物通常采用水提或者醇提的方式，达到提取灵芝多糖和灵芝三萜的目的，但是灵芝中其他成分，如灵芝蛋白等同样可以达到清除自由基、抗脂质氧化的能力，却没有得到有效利用。本发明公开了一种包含灵芝脂溶性提取物、灵芝醇提后水提提取物和灵芝蛋白提取物的灵芝提取物，不仅富含灵芝多糖、灵芝蛋白和灵芝三萜，还利用灵芝孢子油将灵芝中脂溶性成分如维生素等提取出来，在提高灵芝提取物生物利用度的同时，降低灵芝提取物中苦味物质的占比，改善其适口性。
2、本发明还提供一种通过发酵制备得到的灵芝子实体。发明人在研究的过程中发现，当发酵培养基中含有石膏粉和桑枝木屑时，灵芝子实体中灵芝多糖含量会明显增加。
3、为了进一步提高灵芝提取物的生物利用率，将灵芝子实体汽爆后再进行粉碎处理，在对灵芝子实体进行破壁的同时，将灵芝多糖等大分子成分降解成生物体易吸收的小分子，同时保证不破坏生物分子的实用性能。另外，灵芝孢子油中抗氧化物质比较少，通过将灵芝孢子油分子蒸馏，降低灵芝孢子油过氧化值和酸值，更有利于灵芝脂溶性提取物的提取。
4、发明人意外发现，当灵芝水溶性蛋白、灵芝脂溶性蛋白和灵芝醇溶性蛋白三种蛋白组合使用时，灵芝提取物的免疫调节能力和改善睡眠能力都得到明显提高，这可能是由于三种蛋白的作用机理、作用靶位和产生自由基不同所导致。
应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为了清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。